CN116626199B - 安宫牛黄丸中10种成分的含量测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种安宫牛黄丸中10种成分的含量测定方法，属于中药成分检测技术领域，其包括以下步骤：(1)黄芩苷对照品溶液和供试品溶液的制备；(2)确定色谱条件：柱温为35℃；检测波长为0～20分钟254nm，20～80分钟280nm；流速为1ml/min；以乙腈‑甲醇为流动相A，0.1％三氟乙酸溶液为流动相B进行梯度洗脱；(3)确定相对校正因子；(4)供试品溶液成分含量的测定。本发明提供的安宫牛黄丸中10种成分的含量测定方法，采用一测多评方法以黄岑苷为内参物快速便捷的实现了10种成分的含量测定，提高了检测效率，准确性高，为安宫牛黄丸的质量控制提供了依据。
Description
技术领域
本发明涉及一种安宫牛黄丸中10种成分的含量测定方法，属于中药成分检测技术领域。
背景技术
安宫牛黄丸是由牛黄、水牛角浓缩粉、人工麝香、珍珠、朱砂、雄黄、黄连、黄芩、栀子、郁金、冰片共11味药材制成的复方制剂，具有清热解毒，镇惊开窍的功效，主要用于热病邪入心包，高热惊厥，神昏谵语，中风昏迷及脑炎，脑膜炎，中毒性脑病，脑出血，败血症见上述症候者。安宫牛黄丸生产时经过制粉、混合、制丸三个步骤制成大蜜丸。现有技术中，对安宫牛黄丸的质量控制研究主要关注了安宫牛黄丸中的某几个成分，难以充分反应制剂的整体质量。而且，安宫牛黄丸中待测定的成分中包括环烯醚萜苷(京尼平龙胆双糖苷、栀子苷)、酚酸(对羟基苯甲酸)、生物碱(盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱)、黄酮苷(黄芩苷、汉黄芩苷)、黄酮苷元(黄芩素、汉黄芩素)等多种结构类型不同的化合物，这些化合物的理化性质如溶解度、酸碱度、紫外吸收等性质均差异较大，实现如此多不同类型化合物含量检测难度很大。
需要说明的是，上述内容属于发明人的技术认知范畴，并不必然构成现有技术。
发明内容
本发明为了解决现有技术所存在的问题，提供了一种安宫牛黄丸中10种成分的含量测定方法，采用一测多评方法以黄岑苷为内参物快速便捷的实现了10种成分的含量测定，提高了检测效率，准确性高，为安宫牛黄丸的质量控制提供了依据。
本发明通过采取以下技术方案实现上述目的：
安宫牛黄丸中10种成分的含量测定方法，包括以下步骤：
(1)黄芩苷对照品溶液和供试品溶液的制备：
以甲醇为溶剂，制备黄芩苷对照品溶液；
取安宫牛黄丸适量，剪碎，加水之后进行超声处理，使蜜丸溶散，然后加入甲醇进行超声处理，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，制得供试品溶液；
(2)确定色谱条件：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；柱温为35℃；检测波长为0～20分钟254nm，20～80分钟280nm；流速为1ml/min；以乙腈-甲醇为流动相A，0.1％三氟乙酸溶液为流动相B进行梯度洗脱，其中乙腈和甲醇的体积比为90：10；
(3)确定相对校正因子：
取黄芩苷对照品溶液，注入液相色谱仪，测定，以黄芩苷为内参物，分别计算京尼平龙胆双糖苷、对羟基苯甲酸、栀子苷、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的相对校正因子；
(4)供试品溶液成分含量的测定：
取黄芩苷对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，以黄芩苷对照品的浓度和色谱峰峰面积为参照，根据相对校正因子计算京尼平龙胆双糖苷、对羟基苯甲酸、栀子苷、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的含量。
优选的，梯度洗脱条件为：
0～2分钟：10％A，90％B；
2～20分钟：10→20％A，90→80％B；
20～30分钟：20→23％A，80→77％B；
30～55分钟：23→35％％A，77→65％B；
55～80分钟：35→90％A，65→10％B。
其中，所述相对校正因子的计算公式为：
其中，s为黄芩苷，k为待测组分，依次取京尼平龙胆双糖苷、对羟基苯甲酸、栀子苷、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素九种成分中的一种；Ws为黄芩苷的浓度，Wk为待测组分k的浓度，As为黄芩苷的峰面积，Ak为待测组分的峰面积；fs为黄芩苷的校正因子，fk为待测组分的校正因子。
京尼平龙胆双糖苷、对羟基苯甲酸、栀子苷、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、黄芩苷的色谱峰相对保留时间分别为0.31、0.37、0.40、0.82、1.04、1.08、1.26、1.44、1.63、1.00。
京尼平龙胆双糖苷、对羟基苯甲酸、栀子苷、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、黄芩苷的相对校正因子分别为3.18、0.98、1.38、0.53、0.44、0.35、1.11、0.73、0.71、1.00。
可选的，色谱柱的柱长为250mm，内径为4.6mm，粒径为5μm。
可选的，色谱条件中，按黄芩苷峰计算，理论板数不低于2000。
可选的，超声处理的功率为250W，频率为40kHz。
可选的，黄芩苷对照品溶液的浓度为每1ml含0.1mg的黄芩苷对照品。
优选的，供试品溶液的制备方法具体为：取安宫牛黄丸适量，剪碎，取约0.5g，置具塞锥形瓶中，加入水5ml，超声处理5min，使蜜丸溶散，然后加入甲醇25ml，超声处理30分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，制得供试品溶液。
本申请的有益效果包括但不限于：
本发明提供的安宫牛黄丸中10种成分的含量测定方法，采用一测多评方法以黄岑苷为内参物快速便捷的实现了10种成分的含量测定，提高了检测效率，准确性高，为安宫牛黄丸的质量控制提供了依据。
本发明采用水溶液超声再用甲醇提取的方式对安宫牛黄丸进行供试品溶液制备，待测成分溶出完全；本发明以A(乙腈:甲醇90：10)-B(0.1％三氟乙酸)]为流动相，确定了包含洗脱梯度、柱温、检测波长等在内的稳定色谱条件，使待测成分所有待测成分在不同的仪器、色谱柱上的检测结果稳定，色谱峰相对保留时间稳定，色谱峰峰形好、分离度好。
附图说明
此处所说明的附图用来提供对本申请的进一步理解，构成本申请的一部分，本申请的示意性实施例及其说明用于解释本申请，并不构成对本申请的不当限定。在附图中：
图1为专属性考察色谱图，1-10分别为1:京尼平龙胆双糖苷、2:对羟基苯甲酸、3:栀子苷、4:盐酸黄连碱、5:黄芩苷、6:盐酸巴马汀、7:盐酸小檗碱、8:汉黄芩苷、9:黄芩素、10:汉黄芩素；
图2为柱温为30℃时供试品溶液的色谱图；
图3为不同采集波长下的供试品溶液色谱图。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步阐述本发明，但本申请的保护范围并不局限于这些实施例。
本实施例提供的安宫牛黄丸中10种成分的含量测定方法具体如下：
一、仪器、试药与试剂：
1.1、仪器
Agilent1260高效液相色谱仪，Waters e2695高效液相色谱仪，BSA224S-CW电子天平(赛多利斯科技仪器(北京)有限公司)，XS105电子天平(METTLER TOLEDO)，KDM型可调控温电热套(山东鄄城华鲁电热仪器有限公司)。
色谱柱：Agilent 5TC-C18 SN：605016(4.6*250mm，5μm)、Agilent 5TC-C18 SN：590823(4.6*250mm，5μm)、Agilent 5TC-C18 SN：587769(4.6*250mm，5μm)。
1.2、试药：
京尼平龙胆双糖苷对照品(批号：100025-202112，上海鸿永生物科技有限公司，纯度，98.0％)；
对羟基苯甲酸对照品(批号：D13O8S45560，上海诗丹德标准技术服务有限公司，纯度，99.0％)；
栀子苷对照品(批号：110749-201919，中国食品药品检定研究院，纯度97.1％)；
盐酸黄连碱对照品(批号：112026-201802，中国食品药品检定研究院，纯度94.0％)；
盐酸巴马汀对照品(批号：110732-201913，中国食品药品检定研究院，纯度85.7％)；
盐酸小檗碱对照品(批号：110713-202015，中国食品药品检定研究院，纯度85.9％)；
汉黄芩苷对照品(批号：112002-201702，中国食品药品检定研究院，纯度98.5％)；
黄芩素对照品(批号：111595-201808，中国食品药品检定研究院，纯度97.9％)；
汉黄芩素对照品(批号：150803，北京科量技术有限公司，纯度≥98％)；
黄芩苷对照品(批号：110715-202223，中国食品药品检定研究院，纯度97.2％)；
安宫牛黄丸(批号：2209004、2209006、2209009、2205020、2207012，山东宏济堂制药集团股份有限公司)；
1.3、试剂：
乙腈(Fisher Chemical)、磷酸(Fisher Scientific)为色谱纯，甲醇为分析纯，水为屈臣氏纯化水。
二、测定方法：
2.1、对照品溶液和供试品溶液的制备：
本实施例中，对照品溶液的制备方法为：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得黄芩苷对照品溶液；
供试品溶液的制备方法为：取安宫牛黄丸适量，剪碎，取约0.5g，置具塞锥形瓶中，加入水5ml，超声5min，使蜜丸溶散，之后加入甲醇20ml，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
2.2、HPLC(高效液相色谱)检测条件：
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为250mm，内径为4.6mm，粒径为5μm)；柱温为35℃；检测波长：0～20分钟为254nm，20～80分钟为325nm；流速为1ml/min；以乙腈-甲醇(90：10)为流动相A，以0.1％三氟乙酸溶液为流动相B进行梯度洗脱；理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2000。其中，梯度洗脱条件见表1。
表1梯度洗脱条件
2.3、确定相对校正因子：
取黄芩苷对照品溶液，注入液相色谱仪，测定，以黄芩苷为内参物，分别计算京尼平龙胆双糖苷、对羟基苯甲酸、栀子苷、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的相对校正因子。
2.4、供试品溶液成分含量的测定：
取黄芩苷对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，以黄芩苷对照品的浓度和峰面积为参照，根据相对校正因子计算京尼平龙胆双糖苷、对羟基苯甲酸、栀子苷、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的含量。
三、蜜丸前处理方式考察
取安宫牛黄丸(2209004)适量，剪碎，取约0.5g，平行制备7份样品，处理方式见表2；按第二项中【测定方法】对各样品中的待测成分含量进行测定，结果见表3。
表2供试品的不同前处理方式
表3供试品不同前处理方式待测成分含量比较(含量单位为mg/g)
安宫牛黄丸为大蜜丸，样品4-样品7直接用醇溶液或醇水溶液提取时蜜丸无法在溶液体系内溶散，造成待测成分溶出不完全；样品1采用硅藻土研磨后再提取的方法测定待测物含量偏低。样品2和样品3所采用的加入水超声溶散后再加入甲醇提取所测的待测成分含量更高。综合考虑，选择取安宫牛黄丸适量，剪碎，取约0.5g，置具塞锥形瓶中，加入水5ml，超声处理5min使蜜丸溶散，之后加入甲醇25ml超声提取。
四、HPLC检测条件的方法学验证：
4.1、线性关系考察
分别精密称定京尼平龙胆双糖苷、对羟基苯甲酸、栀子苷、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、黄芩苷对照品适量，分别加甲醇制成浓度为1.2700、1.0040、1.2000、1.1390、1.2132、0.9882、0.9629、1.0344、1.1900、1.0305mg/ml的对照品储备液。
精密吸取京尼平龙胆双糖苷、对羟基苯甲酸、栀子苷、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、黄芩苷的对照品储备液适量至同一容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成浓度分别为63.50、20.08、240.00、113.90、60.66、296.45、80.24、34.48、11.90、412.20μg/ml的混合对照品溶液。精密量取混合对照品溶液，采用倍数稀释法，分别稀释2、4、8、16倍，注入高效液相色谱仪，测定各待测组分色谱峰峰面积，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，进行线性回归分析，结果见表4。
表4 10种成分线性关系及线性范围
4.2、专属性考察
取安宫牛黄丸供试品溶液、4.1项制备的混合对照品溶液、空白溶剂，注入高效液相色谱仪，获得其色谱图，结果见图1。可见，空白溶剂在京尼平龙胆双糖苷、对羟基苯甲酸、栀子苷、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、黄芩苷保留时间处无色谱峰，验证本实施例HPLC检测条件的专属性良好。
4.3、重复性试验
取安宫牛黄丸适量，剪碎，取约0.5g，精密称定，平行制备6份制备供试品溶液，按第二项中【测定方法】测定各成分的含量，结果见表5，证明本实施例的HPLC检测条件的重复性较好，符合分析要求。
表5重复性试验(含量单位为mg/g)
4.4、中间精密度
平行制备6份制备供试品溶液，不同分析人员在不同时间利用另一台高效液相色谱仪，进行重复性试验，结果见表6。可见，各成分含量的RSD符合分析要求。
表6中间精密度结果(含量单位为mg/g)
4.5、回收率试验
取安宫牛黄丸剪碎，取约0.25g，精密称定，分别加入京尼平龙胆双糖苷、对羟基苯甲酸、栀子苷、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、黄芩苷对照品溶液适量，余下操作同第二项中【测定方法】，测定10种成分的含量，并计算回收率见
表7-16。
结果表明，京尼平龙胆双糖苷回收率在95.80％～101.48％之间，对羟基苯甲酸回收率在99.55％～103.59％之间，栀子苷回收率在95.57％～96.68％之间，盐酸黄连碱回收率在103.01％～104.84％之间，盐酸巴马汀回收率在102.56％～104.97％之间，盐酸小檗碱回收率在103.15％～104.42％之间，汉黄芩苷回收率在99.30％～102.89％之间，黄芩素回收率在94.35％～101.16％之间，汉黄芩素回收率在99.46％～104.11％之间，黄芩苷回收率在101.05％～101.52％之间，符合分析要求。
表7京尼平龙胆双糖苷回收率试验
表8对羟基苯甲酸回收率试验
表9栀子苷回收率试验
表10盐酸黄连碱回收率试验
表11盐酸巴马汀回收率试验
表12盐酸小檗碱回收率试验
表13汉黄芩苷回收率试验
表14黄芩素回收率试验
表15汉黄芩素回收率试验
表16黄芩苷回收率试验
4.6、稳定性考察
取供试品溶液，分别在第0h、2h、4h、8h、12h、24h各进样一次，测定样品中待测组分含量，计算RSD见表17。结果表明，供试品溶液稳定性良好的稳定性良好，符合分析要求。
表17供试品稳定性试验(含量单位mg/g)
4.7、柱温考察：
在色谱柱柱温为30℃时，获得供试品溶液的色谱图，其中峰6与峰7的分离度为1.02，达不到定量分析要求，且峰型较差，如图2所示。
本实施例采用柱温为35℃，能够获得良好的色谱峰分离度和峰型。
4.8、波长考察：
在0～80分钟设定检测波长为210nm、230nm、254nm、280nm、325nm进行检测，虽然色谱峰分离度可达到要求，但一测多评方法学考察无法达到定量要求。因此，本实施例引入双波长测定，最终确定0～20分钟为254nm，20～80分钟为280nm，使色谱峰分离度、一测多评方法学考察均达到要求，更节省分析时间和成本。
五、相对校正因子的计算及耐用性考察
5.1、确定相对校正因子：
取4.1项下制备的混合对照品溶液①～⑤，注入液相色谱仪，测定，以黄芩苷为内参物，计算京尼平龙胆双糖苷、对羟基苯甲酸、栀子苷、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的相对校正因子，结果见表18。
相对校正因子的计算公式为：
其中，s为黄芩苷，k为待测组分，依次取京尼平龙胆双糖苷、对羟基苯甲酸、栀子苷、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素九种成分中的一种；As为内参物黄岑苷的峰面积，Ws为内参物黄岑苷的浓度(或质量)，Ak为待测组分的峰面积，Wk为待测组分k的浓度(或质量)。
表18待测组分的相对校正因子
5.2、相对校正因子重现性考察
5.2.1、不同仪器和不同色谱柱考察
分别采用不同的仪器和不同色谱柱对相对校正因子进行测定，结果见表19，测得的相对校正因子RSD值在0.34％～2.94％之间，表明各待测组分相对校正因子在不同仪器和不同色谱柱之间重现性良好。
表19不同仪器和不同色谱柱对待测成分相对校正因子的影响
5.2.2、不同流速考察
分别采用不同流速对相对校正因子进行测定，结果见表20，测得的相对校正因子RSD值在0.31％～2.81％之间，表明各待测组分相对校正因子在不同流速之间重现性良好。
表20不同流速对待测成分相对校正因子的影响
5.2.3、不同柱温考察
分别采用不同柱温对相对校正因子进行测定，结果见表21，测得的相对校正因子RSD值在0.47％～2.94％之间，表明各待测组分相对校正因子在不同柱温之间重现性良好。
表21不同柱温对待测成分相对校正因子的影响
5.3、待测组分色谱峰定位
分别计算各待测组分与内参物黄岑苷的相对保留值(r)与保留时间差(ΔtR)，并考察其在不同仪器和不同色谱柱之间的重现性见表22-23。结果表明，相对保留时间波动较小，最终选择不同仪器和不同色谱柱中各待测成分的相对保留时间值的平均值作为峰定位依据。
表22不同仪器和不同色谱柱中各待测成分的相对保留时间
表23不同仪器和不同色谱柱中各待测成分的保留时间差
六、内参物的考察：
分别以10种化合物为内参物，计算相对保留时间，计算不同仪器与不同色谱柱之间的RSD值见表24。结果表明，以黄芩苷作为内参物时，各组分相对保留时间的RSD值在3％以内，耐用性较好。
表24不同内参物的相对保留时间的RSD比较
七、一测多评法与外标法测定结果的比较
取5批安宫牛黄丸样品，制备5种供试品溶液，精密吸取对照品溶液及5种供试品溶液，注入液相色谱仪，测定。分别采用一测多评法和外标法计算京尼平龙胆双糖苷、对羟基苯甲酸、栀子苷、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、黄芩苷的含量，结果见表25-1及25-2。
外标法与一测多评法计算的含量经t检验比较，P远大于0.05，表明两种方法测得的含量无明显差异，且两组含量之间相对误差<3％，表明本实施例所建立的一测多评方法准确性良好，可用于安宫牛黄丸的含量测定。
表25-1一测多评法与外标法测定10种成分含量
表25-2一测多评法与外标法测定10种成分含量
上述具体实施方式不能作为对本发明保护范围的限制，对于本技术领域的技术人员来说，对本发明实施方式所做出的任何替代改进或变换均落在本发明的保护范围内。
本发明未详述之处，均为本技术领域技术人员的公知技术。
Claims (7)
1.安宫牛黄丸中10种成分的含量测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)黄芩苷对照品溶液和供试品溶液的制备：
以甲醇为溶剂，制备黄芩苷对照品溶液；
取安宫牛黄丸适量，剪碎，加水之后进行超声处理，使蜜丸溶散，然后加入甲醇进行超声处理，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，制得供试品溶液；
(2)确定色谱条件：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；柱温为35℃；检测波长为0～20分钟254nm，20～80分钟280nm；流速为1ml/min；以乙腈-甲醇为流动相A，0.1％三氟乙酸溶液为流动相B进行梯度洗脱，其中乙腈和甲醇的体积比为90：10；
梯度洗脱条件为：
0～2分钟：10％A，90％B；
2～20分钟：10→20％A，90→80％B；
20～30分钟：20→23％A，80→77％B；
30～55分钟：23→35％％A，77→65％B；
55～80分钟：35→90％A，65→10％B；
(3)确定相对校正因子：
取黄芩苷对照品溶液，注入液相色谱仪，测定，以黄芩苷为内参物，分别计算京尼平龙胆双糖苷、对羟基苯甲酸、栀子苷、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的相对校正因子；
京尼平龙胆双糖苷、对羟基苯甲酸、栀子苷、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、黄芩苷的色谱峰相对保留时间分别为0.31、0.37、0.40、0.82、1.04、1.08、1.26、1.44、1.63、1.00；
京尼平龙胆双糖苷、对羟基苯甲酸、栀子苷、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、黄芩苷的相对校正因子分别为3.18、0.98、1.38、0.53、0.44、0.35、1.11、0.73、0.71、1.00；
(4)供试品溶液成分含量的测定：
取黄芩苷对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，以黄芩苷对照品的浓度和色谱峰峰面积为参照，根据相对校正因子计算京尼平龙胆双糖苷、对羟基苯甲酸、栀子苷、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的含量。
2.根据权利要求1所述的安宫牛黄丸中10种成分的含量测定方法，其特征在于，所述相对校正因子的计算公式为：
其中，s为黄芩苷，k为待测组分，依次取京尼平龙胆双糖苷、对羟基苯甲酸、栀子苷、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素九种成分中的一种；Ws为黄芩苷的浓度，Wk为待测组分k的浓度，As为黄芩苷的峰面积，Ak为待测组分的峰面积；fs为黄芩苷的校正因子，fk为待测组分的校正因子。
3.根据权利要求1所述的安宫牛黄丸中10种成分的含量测定方法，其特征在于，色谱柱的柱长为250mm，内径为4.6mm，粒径为5μm。
4.根据权利要求1所述的安宫牛黄丸中10种成分的含量测定方法，其特征在于，色谱条件中，按黄芩苷峰计算，理论板数不低于2000。
5.根据权利要求1所述的安宫牛黄丸中10种成分的含量测定方法，其特征在于，超声处理的功率为250W，频率为40kHz。
6.根据权利要求1所述的安宫牛黄丸中10种成分的含量测定方法，其特征在于，黄芩苷对照品溶液的浓度为每1ml含0.1mg的黄芩苷对照品。
7.根据权利要求1所述的安宫牛黄丸中10种成分的含量测定方法，其特征在于，供试品溶液的制备方法具体为：取安宫牛黄丸适量，剪碎，取约0.5g，置具塞锥形瓶中，加入水5ml，超声处理5min，使蜜丸溶散，然后加入甲醇25ml，超声处理30分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，制得供试品溶液。
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