CN116406377A - 抗notch2抗体及其使用方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供抗Notch2抗体及其使用方法。

Description

抗NOTCH2抗体及其使用方法

相关专利申请的交叉引用

本申请要求2020年7月17日提交的美国临时申请号63/053,034的优先权权益，该美国临时申请出于任何目的以引用方式整体并入本文。

技术领域

本发明涉及抗Notch2抗体及其使用方法。

背景技术

Notch受体家族是一类进化上保守的跨膜受体，所述跨膜受体传递影响与海胆和人类一样形形色色的生物体的发育的信号。Notch受体及其配体Delta和Serrate(在哺乳动物中被称为Jagged)是具有包含表皮生长因子(EGF)样重复序列的大细胞外结构域的跨膜蛋白。不同物种间的Notch旁系同源物的数量不同。例如，在哺乳动物中有四种Notch受体(Notch1至Notch4)，两种在秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)中(LIN-12和GLP-1)并且一种在果蝇(Drosophila melanogaster)中(Notch)。Notch受体在转运到细胞表面期间被弗林蛋白酶样蛋白酶在跨膜结构域的N末端侧上的位点S1处进行蛋白水解加工，从而产生细胞外Notch(ECN)亚基和Notch跨膜亚基(NTM)。这两个亚基保持非共价缔合，并且构成成熟的异二聚体细胞表面受体。Notch受体和Notch信号传导途径例如在Aster等人，Annu.Rev.Pathol.Mech.Dis.3:587-613,2008,和Bolos等人，Endocrine Reviews 28:339-363,2007中综述。

Notch2 ECN亚基包含36个N末端EGF样重复序列，之后是位于S1位点之前的三个串联重复的Lin 12/Notch重复序列(LNR)模块。每个LNR模块包含三个二硫键和预期可与钙离子配位的一组保守的酸性和极性残基。在EGF重复序列区域内存在用于活化配体的结合位点。

Notch配体与ECN亚基的结合启动了通过经调节的膜内蛋白水解发生的两次连续的蛋白水解切割。由金属蛋白酶(ADAM10或ADAM17)在S2位点处进行的第一切割使Notch跨膜亚基易于在靠近质膜的内小叶的S3位点处经受第二切割。由包含早老素和呆蛋白并且促进γ-分泌酶活性的多蛋白复合物催化的位点S3切割，释放Notch跨膜亚基的细胞内部分，从而允许该细胞内部分易位至细胞核并活化靶基因的转录。(关于Notch的蛋白水解切割的综述，参见例如Sisodia等人，Nat.Rev.Neurosci.3:281-290,2002。)

已经在人类中鉴定出了五种Jagged和Delta样类别的Notch配体(Jagged1(也被称为Serrate1)、Jagged2(也被称为Serrate2)、Delta样1(也被称为DLL1)、Delta样3(也被称为DLL3)和Delta样4(也被称为DLL4))。所述配体中的每种配体是单程跨膜蛋白，所述单程跨膜蛋白具有结合Notch所必需的保守N末端Delta、Serrate、LAG-2(DSL)基序。DSL基序的C末端的一系列EGF样模块位于跨膜区段之前。与Notch受体不同，所述配体在C末端处具有70-215个氨基酸的短胞质尾。此外，已经报道了其他类型的配体(例如，DNER、NB3和F3/接触蛋白)。(关于Notch配体和配体介导的Notch活化的综述，参见例如D’Souza等人，Oncogene27:5148-5167,2008。)

Notch途径在不同的发育和生理过程，包括影响苍蝇和脊椎动物神经发生的过程期间发挥作用。一般而言，Notch信号传导参与侧向抑制、谱系决定和细胞群之间边界的建立(参见，例如，Bray,Molecular Cell Biology 7:678-679,2006)。Jagged-Notch信号传导的抑制已被证明诱导哺乳动物呼吸气道中分泌俱乐部细胞的快速丧失和纤毛细胞的增加。在临床前哮喘模型中，Jagged阻断也被证明逆转杯状细胞化生。参见Lafkas等人，Nature528:127-131(2015)。

粘液阻塞性肺疾病的特征是咳嗽、产生痰、弥漫性粘液阻塞、慢性炎症、气道壁扩张和频繁的细菌感染。在健康个体中，肺中的粘液层是被从远端气道向气管快速运输的。在患有粘液阻塞性疾病的个体中，离子流体转运或粘蛋白分泌或两者中的上皮缺陷导致粘液浓度过高和粘液转运失败，以及粘液粘附到气道表面。这导致粘液积聚在小气道中，无法通过咳嗽清除，从而导致气道阻塞、感染和炎症。

仍然需要治疗粘液阻塞性肺病。本文所述的发明满足了这一需求，并提供了其他益处。

发明内容

本发明提供抗Notch2抗体及其使用方法。

在一些实施方案中，提供了一种与人Notch2结合的分离的抗体，其中所述抗体抑制Jagged1介导的信号传导，但不抑制DLL1介导的信号传导。在一些实施方案中，提供了一种与人Notch2结合的分离的抗体，其中所述抗体抑制Jagged1介导的信号传导的程度大于抑制DLL1介导的信号传导的程度。在一些实施方案中，抗体能够实现100％的对Jagged1介导的信号传导的最大抑制，以及小于80％、或小于70％、或小于60％的对DLL1介导的信号传导的最大抑制。在一些实施方案中，所述抗体不抑制Jagged1与Notch2的结合。在一些实施方案中，所述抗体不抑制DLL1与Notch2的结合。在一些实施方案中，提供了一种分离的抗体，其中所述抗体当为包含两条重链和两条轻链的二价IgG抗体的形式时，抑制Jagged1介导的信号传导，但不抑制DLL1介导的信号传导。

在一些实施方案中，抗体结合Notch2的EGF7重复序列内的表位。在一些实施方案中，抗体结合Notch2的氨基酸260至296内的表位。在一些实施方案中，抗体结合Notch2的氨基酸260至296内的不连续表位。

在一些实施方案中，提供了一种与Notch2结合的分离的抗体，其中所述抗体结合Notch2的EGF7重复序列内的表位。在一些实施方案中，抗体结合Notch2的氨基酸260至296内的表位。在一些实施方案中，抗体结合Notch2的氨基酸260至296内的不连续表位。

在一些实施方案中，所述与Notch2结合的抗体接触人Notch2的精氨酸268(R268)。在一些实施方案中，所述抗体不结合包含赖氨酸268(K268)的Notch2。在一些实施方案中，所述抗体结合包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列的多肽，并且不结合包含SEQ ID NO:77的氨基酸序列的多肽。在一些实施方案中，所述抗体与人Notch2和食蟹猴Notch2结合。在一些实施方案中，所述抗体不与小鼠Notch2结合。在一些实施方案中，所述抗体与豚鼠Notch2结合。在一些实施方案中，所述抗体不与人Notch1或人Notch3结合。

在一些实施方案中，如通过表面等离子体共振所确定的，所述抗体以小于20nM、小于15nM、小于10nM或小于5nM的亲和力(K_D)结合人Notch2。

在一些实施方案中，所述抗体以小于20nM、小于15nM、小于10nM或小于5nM的IC50抑制Jagged1介导的信号传导。在一些实施方案中，对Jagged1介导的信号传导的抑制是使用高含量筛选(HCS)测定确定的。

在一些实施方案中，一种与Notch2结合的抗体包含：

a)重链可变结构域(VH)，其包含(a)含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的CDR-H1，(b)含有SEQ ID NO:6或7的氨基酸序列的CDR-H2和(c)含有SEQ ID NO:8、9、10、11或12的氨基酸序列的CDR-H3；以及轻链可变结构域(VL)，其包含(d)含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的CDR-L1，(e)含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的CDR-L2和(f)含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的CDR-L3；

b)重链可变结构域(VH)，其包含(a)含有SEQ ID NO:36的氨基酸序列的CDR-H1，(b)含有SEQ ID NO:37的氨基酸序列的CDR-H2和(c)含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR-H3；以及轻链可变结构域(VL)，其包含(d)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的CDR-L1，(e)含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的CDR-L2和(f)含有SEQ ID NO:35的氨基酸序列的CDR-L3；

c)重链可变结构域(VH)，其包含(a)含有SEQ ID NO:44的氨基酸序列的CDR-H1，(b)含有SEQ ID NO:45的氨基酸序列的CDR-H2和(c)含有SEQ ID NO:46的氨基酸序列的CDR-H3；以及轻链可变结构域(VL)，其包含(d)含有SEQ ID NO:41的氨基酸序列的CDR-L1，(e)含有SEQ ID NO:42的氨基酸序列的CDR-L2和(f)含有SEQ ID NO:43的氨基酸序列的CDR-L3；

d)重链可变结构域(VH)，其包含(a)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的CDR-H1，(b)含有SEQ ID NO:54的氨基酸序列的CDR-H2和(c)含有SEQ ID NO:55的氨基酸序列的CDR-H3；以及轻链可变结构域(VL)，其包含(d)含有SEQ ID NO:49的氨基酸序列的CDR-L1，(e)含有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的CDR-L2和(f)含有SEQ ID NO:51或52的氨基酸序列的CDR-L3；或

e)重链可变结构域(VH)，其包含(a)含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的CDR-H1，(b)含有SEQ ID NO:63的氨基酸序列的CDR-H2和(c)含有SEQ ID NO:64的氨基酸序列的CDR-H3；以及轻链可变结构域(VL)，其包含(d)含有SEQ ID NO:59的氨基酸序列的CDR-L1，(e)含有SEQ ID NO:60的氨基酸序列的CDR-L2和(f)含有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的CDR-L3。

在一些实施方案中，抗体包含：

a)VH序列，其与SEQ ID NO:14的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；

b)VL序列，其与SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；

c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列；

d)VH序列，其与选自SEQ ID NO:17至24、26、28、30和32的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；

e)VL序列，其与选自SEQ ID NO:15、16、25、27、29和31的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；

f)如(d)中定义的VH序列和如(e)中定义的VL序列；

g)VH序列，其与SEQ ID NO:40的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；

h)VL序列，其与SEQ ID NO:39的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；

i)如(g)中定义的VH序列和如(h)中定义的VL序列；

j)VH序列，其与选自SEQ ID NO:102至106的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；

k)VL序列，其与选自SEQ ID NO:98至100的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；

l)如(j)中定义的VH序列和如(k)中定义的VL序列；

m)VH序列，其与SEQ ID NO:48的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；

n)VL序列，其与SEQ ID NO:47的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；

o)如(m)中定义的VH序列和如(n)中定义的VL序列；

p)VH序列，其与SEQ ID NO:58的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；

q)VL序列，其与SEQ ID NO:56或57的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；

r)如(p)中定义的VH序列和如(q)中定义的VL序列；

s)VH序列，其与SEQ ID NO:66的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；

t)VL序列，其与SEQ ID NO:65的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；或

u)如(s)中定义的VH序列和如(t)中定义的VL序列。

在一些实施方案中，抗体包含：

a)VH序列，其包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；

b)VL序列，其包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列；

c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列；

d)VH序列，其包含选自SEQ ID NO:17至24、26、28、30和32的氨基酸序列；

e)VL序列，其包含选自SEQ ID NO:15、16、25、27、29和31的氨基酸序列；

f)如(d)中定义的VH序列和如(e)中定义的VL序列；

g)VH序列，其包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列；

h)VL序列，其包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列；

i)如(g)中定义的VH序列和如(h)中定义的VL序列；

j)VH序列，其包含选自SEQ ID NO:101至106的氨基酸序列；

k)VL序列，其包含选自SEQ ID NO:98至100的氨基酸序列；

l)如(j)中定义的VH序列和如(k)中定义的VL序列；

m)VH序列，其包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列；

n)VL序列，其包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列；

o)如(m)中定义的VH序列和如(n)中定义的VL序列；

p)VH序列，其包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列；

q)VL序列，其包含SEQ ID NO:56或57的氨基酸序列；

r)如(p)中定义的VH序列和如(q)中定义的VL序列；

s)VH序列，其包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列；

t)VL序列，其包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列；或

u)如(s)中定义的VH序列和如(t)中定义的VL序列。

在一些实施方案中，抗体包含：

a)VH序列，其包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；

b)VL序列，其包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列；

c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列；

d)VH序列，其包含选自SEQ ID NO:17至24、26、28、30和32的氨基酸序列；

e)VL序列，其包含选自SEQ ID NO:15、16、25、27、29和31的氨基酸序列；

f)如(d)中定义的VH序列和如(e)中定义的VL序列；

g)VH序列，其包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列；

h)VL序列，其包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列；

i)如(g)中定义的VH序列和如(h)中定义的VL序列；

j)VH序列，其包含选自SEQ ID NO:101至106的氨基酸序列；

k)VL序列，其包含选自SEQ ID NO:98至100的氨基酸序列；

l)如(j)中定义的VH序列和如(k)中定义的VL序列；

m)VH序列，其包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列；

n)VL序列，其包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列；

o)如(m)中定义的VH序列和如(n)中定义的VL序列；

p)VH序列，其包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列；

q)VL序列，其包含SEQ ID NO:56或57的氨基酸序列；

r)如(p)中定义的VH序列和如(q)中定义的VL序列；

s)VH序列，其包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列；

t)VL序列，其包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列；或

u)如(s)中定义的VH序列和如(t)中定义的VL序列。

在一些实施方案中，抗体包含：

a)VH序列，其与选自SEQ ID NO:17至24、26、28、30和32的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；

b)VL序列，其与选自SEQ ID NO:15、16、25、27、29和31的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；或者

c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列。

在一些实施方案中，抗体包含：

a)VH序列，其包含选自SEQ ID NO:17至24、26、28、30和32的氨基酸序列；

b)VL序列，其包含选自SEQ ID NO:15、16、25、27、29和31的氨基酸序列；或

c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列。

在一些实施方案中，抗体：

a)包含SEQ ID NO:26的VH序列和SEQ ID NO:25的VL序列；

b)包含SEQ ID NO:28的VH序列和SEQ ID NO:27的VL序列；

c)包含SEQ ID NO:30的VH序列和SEQ ID NO:29的VL序列；或

d)包含SEQ ID NO:32的VH序列和SEQ ID NO:31的VL序列。

在一些实施方案中，结合Notch2的抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，抗体是人源化或嵌合抗体。在一些实施方案中，结合Notch2的抗体是结合Notch2的抗体片段。在一些实施方案中，抗体片段选自Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH和F(ab')₂。在一些实施方案中，抗体片段是Fab、Fab'或Fab'-SH。在一些实施例中，抗体为全长抗体。

在一些实施方案中，提供了一种抗体，所述抗体与本文所提供的抗体竞争结合人Notch2。

在一些实施方案中，提供了一种分离的核酸，所述分离的核酸编码本文所提供的与Notch2结合的抗体。在一些实施方案中，提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞包含所述核酸。在一些实施方案中，提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞表达本文所提供的抗体。在一些实施方案中，提供了一种产生与人Notch2结合的抗体的方法，所述方法包括在适合于表达所述抗体的条件下培养所述宿主细胞。在一些实施方案中，所述方法进一步包括从宿主细胞中回收抗体。在一些实施方案中，提供了一种由所述宿主细胞产生的抗体。

在一些实施方案中，提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含本文所提供的结合Notch2的抗体和药学上可接受的载体。在一些实施方案中，该药物组合物还包含附加的治疗剂。在一些实施方案中，所述附加的治疗剂选自高渗盐水、甘露醇、阿法脱氧核糖核酸酶、N-乙酰半胱氨酸、半胱胺和支气管扩张剂。

在一些实施方案中，本文提供了结合Notch2的抗体或药物组合物以用作药物。在一些实施方案中，本文提供了结合Notch2的抗体或药物组合物以用于治疗粘液阻塞性肺病。在一些实施方案中，粘液阻塞性肺病选自慢性阻塞性肺病(COPD)、囊性纤维化、原发性纤毛运动障碍、非囊性纤维化支气管扩张和细支气管炎。

在一些实施方案中，提供了结合Notch2的抗体或药物组合物在制备药物中的用途，该药物用于治疗黏液阻塞性肺疾病。在一些实施方案中，粘液阻塞性肺病选自慢性阻塞性肺病(COPD)、囊性纤维化、原发性纤毛运动障碍、非囊性纤维化支气管扩张和细支气管炎。在一些实施方案中，提供了结合Notch2的抗体或药物组合物在制备药物中的用途，该药物用于减少受试者的分泌细胞的数量。在一些实施方案中，所述药物将分泌细胞转化为纤毛细胞。在一些实施方案中，分泌细胞位于受试者的肺中。在一些实施方案中，分泌细胞是杯状细胞。

在一些实施方案中，提供了一种治疗患有粘液阻塞性肺病的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的本文所提供的结合Notch2的抗体或本文提供的药物组合物。在一些实施方案中，粘液阻塞性肺病选自慢性阻塞性肺病(COPD)、囊性纤维化、原发性纤毛运动障碍、非囊性纤维化支气管扩张和细支气管炎。在一些实施方案中，提供了一种减少受试者中的分泌细胞数量的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的本文所提供的结合Notch2的抗体或本文所提供的药物组合物，以耗竭受试者中的分泌细胞。在一些实施方案中，所述方法包括将分泌细胞转化为纤毛细胞。在一些实施方案中，分泌细胞位于受试者的肺中。在一些实施方案中，分泌细胞是杯状细胞。在一些实施方案中，所述方法进一步包括向所述受试者施用附加的治疗剂。在一些实施方案中，所述附加的治疗剂选自高渗盐水、甘露醇、阿法脱氧核糖核酸酶、N-乙酰半胱氨酸、半胱胺和支气管扩张剂。

附图说明

图1A至图1B示出了大鼠抗Notch2抗体1B2及其某些人源化版本的轻链可变区(1A)和重链可变区(1B)的比对。

图2A至图2B示出了大鼠抗Notch2抗体3107的轻链可变区(2A)和重链可变区(2B)。

图3A至图3B示出了兔抗Notch 2抗体2338、2430、在轻链中具有C95dS取代的2430、和2621的轻链可变区(3A)和重链可变区(3B)的比对。

图4示出了大鼠1B2、大鼠3107、rb.2338、rb.2430、rb.2621和抗Notch2/3抗体OMP-59R5的表位分箱(他瑞妥单抗，参见美国专利号8,226,943B2)。

图5A至图5F示出了在包含表达Notch2受体的细胞和表达Jagged1配体(5A、5C、5E)或DLL1配体(5B、5D、5F)的细胞的共培养测定中阻断Jagged1介导的Notch2活性(5A、5C、5E)和保持DLL1介导的Notch2活性(5B、5D、5F)。图5A和图5B分别示出了随着抗Notch2抗体嵌合1B2和人源化版本hu1B2.v1.DFS、hu1B2.v101、hu1B2.v102、hu1B2.v103和hu1B2.v104的抗体浓度的增加，Jagged1介导的信号传导和DLL1介导的信号传导的活性百分比的变化。图5C和图5D分别示出了随着大鼠抗Notch2抗体3107的抗体浓度的增加，Jagged1介导的信号传导和DLL1介导的信号传导的活性百分比的变化。图5E和图5F分别示出了随着兔抗Notch2抗体2338、2621和2430的抗体浓度的增加，Jagged1介导的信号传导和DLL1介导的信号传导的活性百分比的变化。

图6A至图6D示出了在与抗gD对照抗体或大鼠/人嵌合抗Notch2抗体1B2接触的原代人支气管上皮细胞的气-液界面(ALI)培养物中，(6A)Muc5b、(6B)Muc5ac和(6C)Scgb1a1的mRNA表达；和(6D)经抗gD对照抗体处理的ALI培养物(左)和经抗Notch2抗体1B2处理的ALI培养物(右)的免疫荧光分析。将切片用抗Muc5b(绿色)进行杯状细胞染色，用抗乙酰化α-微管蛋白(红色)进行纤毛细胞染色，并用DAPI(蓝色)进行核染色。在经抗Notch2抗体1B2处理的ALI培养物中观察到杯状细胞显著减少。

图7A至图7B示出了大鼠抗Notch2抗体3107及其某些人源化版本的轻链可变区(7A)和重链可变区(7B)的比对。

具体实施方式

I.定义

出于本文目的的“受体人框架”是这样的框架，其包含来源于如下所定义的人免疫球蛋白框架或人共有框架的轻链可变结构域(VL)框架或重链可变结构域(VH)框架的氨基酸序列。“来源于”人免疫球蛋白框架或人共有框架的受体人框架可包含与所述人免疫球蛋白框架或人共有框架相同的氨基酸序列，或者其可以包含氨基酸序列变化。在一些方面，氨基酸变化的数量为10个或更少、9个或更少、8个或更少、7个或更少、6个或更少、5个或更少、4个或更少、3个或更少或2个或更少。在一些方面，VL受体人框架在序列上与VL人免疫球蛋白框架序列或人共有框架序列相同。

“亲和力”是指分子(例如，抗体)的单个结合位点与其结合配偶体(例如，抗原)之间的非共价相互作用的总和的强度。除非另有说明，否则如本文所用，“结合亲和力”是指内在结合亲和力，其反映了结合对的成员(例如，抗体和抗原)之间的1:1相互作用。分子X对其配偶体Y的亲和力一般可由解离常数(K_D)表示。亲和力可以通过本领域已知的常规方法测量，包括本文所述的那些方法。下文描述用于测量结合亲和力的具体的说明性和示例性方法。

“亲和力成熟的”抗体是指在一个或多个互补决定区(CDR)中具有一个或多个改变的抗体，与不具有此类改变的亲本抗体相比，此类改变导致了抗体对抗原的亲和力的改善。

术语“抗Notch2抗体”和“结合Notch2的抗体”是指这样的抗体，其能够以足够的亲和力结合Notch2，使得所述抗体可用作靶向Notch2的诊断和/或治疗剂。在一些方面中，如例如通过表面等离子体共振(SPR)测量的，抗Notch2抗体与不相关的、非Notch2蛋白的结合程度是抗体与Notch2结合的小于约10％。在某些方面中，与Notch2结合的抗体的解离常数(K_D)为≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤1nM、≤0.1nM、≤0.01nM或≤0.001nM(例如，10^-8M或更小，例如10^-8M至10^-13M，例如10^-9M至10^-13M)。当抗体的K_D为1μM或更小时，则称该抗体“特异性结合”Notch2。在某些方面，抗Notch2抗体与Notch2的表位结合，所述表位在来自不同物种的Notch2中是保守的。

本文的术语“抗体”以最广泛的含义使用，并且包括各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)和抗体片段，只要它们表现出所需的抗原结合活性即可。

“抗体片段”是指除了完整抗体以外的分子，其包含完整抗体的一部分且结合完整抗体结合的抗原。抗体片段的实例包括但不限于Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')₂；双体抗体；线性抗体；单链抗体分子(例如，scFv和scFab)；单结构域抗体(dAb)；以及由抗体片段形成的多特异性抗体。关于某些抗体片段的综述，请参见Holliger和Hudson,NatureBiotechnology 23:1126-1136(2005)。

术语“表位”表示与抗Notch2抗体所结合的蛋白质或非蛋白质的抗原上的位点。表位既可以由连续的氨基酸伸长段(线性表位)形成，也可以通过包含非连续的氨基酸(即，不连续的表位或构象表位)形成，例如由于抗原折叠，即由于蛋白质抗原的三级折叠而在空间上接近。在蛋白质抗原暴露于变性剂后，线性表位通常仍被抗Notch2抗体结合，而构象表位通常在用变性剂处理后被破坏。表位包含独特的立体构象中的至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个或8至10个氨基酸。

抗体结合的筛选可以使用本领域常规的方法进行，例如但不限于丙氨酸扫描、肽印迹(参见Meth.Mol.Biol.248(2004)443-463)、肽切割分析、表位切除，表位提取、抗原的化学修饰(参见Prot.Sci.9(2000)487-496)和交叉阻断(参见“Antibodies”,Harlow andLane(Cold Spring Harbor Press,Cold Spring Harb.,NY)。

基于抗原结构的抗体谱分析(ASAP)(也称为修饰辅助谱分析(MAP))允许基于来自与Notch2特异性结合的大量单克隆抗体的每一种抗体与经化学修饰或酶修饰的抗原表面的结合谱来对该大量单克隆抗体进行分箱(参见例如US 2004/0101920)。每个组中的抗体结合相同的表位，该表位可以是独特的表位，该独特的表位与另一个组所代表的表位明显不同或部分重叠。

竞争性结合也可用于容易地确定抗体是与Notch2的相同表位结合还是与参考抗Notch2抗体竞争结合。例如，与参考抗Notch2抗体“与相同表位结合的抗体”是指在竞争测定中阻断参考抗Notch2抗体与其抗原的结合达50％或更高的抗体，反之，参考抗体在竞争测定中阻断该抗体与其抗原的结合达50％或更高。同样例如，为了确定抗体是否与参考抗Notch2抗体结合相同表位，使参考抗体在饱和条件下与Notch2结合。在去除过量的参考抗Notch2抗体后，评定所讨论的抗Notch2抗体与Notch2结合的能力。如果在参考抗Notch2抗体饱和结合后抗Notch2抗体能够与Notch2结合，则可以得出结论，所讨论的抗Notch2抗体与和参考抗Notch2抗体不同的表位结合。但是，如果所讨论的抗Notch2抗体在参考抗Notch2抗体饱和结合后不能与Notch2结合，则所讨论的抗Notch2抗体可能与和参考抗Notch2抗体所结合的表位相同的表位结合。为了确认所讨论的抗体是结合于同一表位还是由于空间原因而使其受阻，可以使用常规实验(例如，使用ELISA、RIA、表面等离子体共振、流式细胞术或任何其他本领域可获得的定量或定性的抗体结合测定法进行的肽突变和结合分析)。该测定应以两种设置进行，即，两种抗体均为饱和抗体。如果在这两种设置中，只有第一(饱和)抗体能够与Notch2结合，则可以得出结论，所讨论的抗Notch2抗体和参考抗Notch2抗体竞争结合Notch2。

在一些方面，如在竞争性结合测定中测量的，如果一种抗体1、5、10、20或100倍过量抑制另一种抗体的结合至少50％、至少75％、至少90％或甚至99％或更高，则认为两种抗体结合相同或重叠的表位(参见例如Junghans等人，Cancer Res.50(1990)1495-1502)。

在一些方面，如果抗原中减少或消除一种抗体的结合的基本上所有氨基酸突变也减少或消除另一种抗体的结合，则认为两种抗体结合相同的表位。如果只有一种减少或消除一种抗体结合的氨基酸突变的子集减少或消除另一种抗体的结合，则两种抗体被认为具有“重叠表位”。

术语“嵌合”抗体是指这样的抗体，在该抗体中重链和/或轻链的一部分来源于特定来源或物种，而重链和/或轻链的其余部分来源于不同的来源或物种。

抗体的“类别”是指抗体的重链所具有的恒定结构域或恒定区的类型。存在五大类抗体：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且这些抗体中的一些可以进一步分为亚类(同种型)，例如IgG₁、IgG₂、IgG₃、IgG₄、IgA₁和IgA₂。在某些方面，抗体是IgG₁同种型。在某些方面，抗体是具有P329G、L234A和L235A突变以降低Fc区效应子功能的IgG₁同种型。在其他方面，抗体是IgG₂同种型。在某些方面，抗体是在铰链区具有S228P突变的IgG₄同种型，以改善IgG₄抗体的稳定性。对应于不同类别的免疫球蛋白的重链恒定结构域分别称为α、δ、ε、γ和μ。抗体的轻链基于其恒定结构域的氨基酸序列，可以归属于两种类型中的一种，这两种类型称为卡帕(κ)和兰姆达(λ)。

“效应子功能”是指可归因于抗体的Fc区、随着抗体同种型的变化而变化的那些生物学活性。抗体效应子功能的实例包括：C1q结合和补体依赖性细胞毒性(CDC)；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)；吞噬作用；细胞表面受体(例如，B细胞受体)的下调；以及B细胞活化。

药剂(例如药物组合物)的“有效量”是指能够以必需的剂量在必需的时段内有效地实现期望的治疗或预防结果的量。

本文的术语“Fc区”用于定义免疫球蛋白重链的C末端区，该C末端区包含恒定区的至少一部分。该术语包括天然序列Fc区和变体Fc区。在一些方面中，人IgG重链Fc区从Cys226或从Pro230延伸至重链的羧基末端。然而，由宿主细胞产生的抗体可以经历对来自重链C端的一个或更多个(特别是一个或两个)氨基酸的翻译后切割。因此，由宿主细胞通过表达编码全长重链的特定核酸分子所产生的抗体可以包括全长重链，或者该抗体可以包括全长重链的经切割变体。这可能是重链的最后两个C末端氨基酸为甘氨酸(G446)和赖氨酸(K447，根据EU索引)的情况。因此，Fc区的C末端赖氨酸(Lys447)或C末端甘氨酸(Gly446)和赖氨酸(Lys447)可以存在或可以不存在。在一些方面中，包含如本文所指定的Fc区的重链包含在根据本发明的抗体中，该重链包含另外的C末端甘氨酸-赖氨酸二肽(G446和K447，根据EU索引编号)。在一些方面中，包含如本文所指定的Fc区的重链包含在根据本发明的抗体中，所述重链包含另外的C末端甘氨酸残基(G446，根据EU索引编号)。除非本文另外规定，否则Fc区或恒定区中氨基酸残基的编号是根据EU编号***，EU编号***也称为EU索引，如在Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Public HealthService,National Institutes of Health,Bethesda,MD,1991中所述。

“框架”或“FR”是指除互补决定区(CDR)之外的可变结构域残基。可变结构域的FR通常由以下四个FR结构域组成：FR1、FR2、FR3和FR4。因此，CDR和FR序列通常在VH(或VL)中以如下序列出现：FR1-CDR-H1(CDR-L1)-FR2-CDR-H2(CDR-L2)-FR3-CDR-H3(CDR-L3)-FR4。

术语“全长抗体”、“完整抗体”及“全抗体”在本文中可互换地用于指代具有基本上类似于天然抗体结构的结构或具有含有如本文所定义的Fc区的重链的抗体。

术语“宿主细胞”、“宿主细胞系”和“宿主细胞培养物”可互换使用，并且是指外源核酸已被引入其中的细胞，包括此类细胞的子代。宿主细胞包括“转化体”和“转化细胞”，其包括原代转化细胞和来源于所述原代转化细胞的子代，不考虑传代次数。子代可能不与亲本细胞的核酸内容物完全一致，而是可能含有突变。本文包括如在原始转化细胞中筛选或选择的具有相同功能或生物活性的突变子代。

“人抗体”是这样的抗体，该抗体具有的氨基酸序列对应于由人或人细胞产生的抗体的氨基酸序列，或来源于利用人抗体全套库或其他人抗体编码序列的非人源的抗体的氨基酸序列。人抗体的该定义特别地排除了包含非人抗原结合残基的人源化抗体。

“人共有框架”是这样的框架，其表示在人免疫球蛋白VL或VH框架序列的选择中最常存在的氨基酸残基。一般而言，人免疫球蛋白VL或VH序列的选择来自于可变结构域序列的亚组。一般而言，序列的亚组是如Kabat等人，Sequences of Proteins ofImmunological Interest，第5版，NIH Publication 91-3242,Bethesda MD(1991)，第1-3卷中所述的亚组。在一些方面中，对于VL，该亚组是如Kabat等人，出处同上中的亚组κI或II。在一些方面中，对于VH，该亚组是如Kabat等人，出处同上中的亚组I或III。

“人源化”抗体是指这样的嵌合抗体，其包含来自非人CDR的氨基酸残基和来自人FR的氨基酸残基。在某些方面，人源化抗体将基本上包含所有的至少一个、通常两个可变结构域，其中所有或基本上所有CDR对应于非人抗体的CDR，并且所有或基本上所有的FR对应于人抗体的FR。人源化抗体任选地可以包含来源于人抗体的抗体恒定区的至少一部分。“人源化形式”的抗体，例如，非人抗体，是指已经进行过人源化的抗体。

如本文所用的术语“高变区”或“HVR”是指抗体可变结构域中在序列上高变并确定抗原结合特异性的各个区域，例如“互补决定区”(“CDR”)。

通常，抗体包含六个CDR；三个在VH中(CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3)，并且三个在VL中的(CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3)。本文中的示例性CDR包括：

(a)出现在以下氨基酸残基处的高可变环：26至32(L1)、50至52(L2)、91至96(L3)、26至32(H1)、53至55(H2)和96至101(H3)(Chothia和Lesk，J.Mol.Biol.196:901-917(1987))；

(b)存在于氨基酸残基24-34(L1)、50-56(L2)、89-97(L3)、31-35b(H1)、50-65(H2)和95-102(H3)处的CDR(Kabat等人，Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest，第5版，Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD(1991))；以及

(c)在氨基酸残基27c-36(L1)、46-55(L2)、89-96(L3)、30-35b(H1)、47-58(H2)和93-101(H3)处发生的抗原接触点(MacCallum等人，J.Mol.Biol.262:732-745(1996))；以及

(d)通过以下Chothia和Kabat的组合定义的CDR：VL结构域中的位置24-34(L1)、50-56(L2)和89-97(L3)，以及VH结构域中的位置26-35(H1)、50-65(H2)和95-102(H3)。

除非另外指明，否则CDR根据出处同上的Kabat等人所述的方法确定。本领域的技术人员将理解，CDR名称也可以根据出处同上的Chothia所述的方法、出处同上的McCallum所述的方法或者任何其他在科学上接受的命名***来确定。在一些方面中，CDR残基包含图1至图3和/或本文的某些序列的表格中标识的那些残基。

“免疫缀合物”是与一种或多种异源分子(包括但不限于细胞毒性剂)缀合的抗体。

“个体”或“受试者”是哺乳动物。哺乳动物包括但不限于驯养的动物(例如牛、绵羊、猫、犬和马)、灵长类动物(例如人和非人灵长类动物，诸如猴)、兔以及啮齿类动物(例如小鼠和大鼠)。在某些方面，个体或受试者是人。

“分离的”抗体为已从其自然环境的组分中分离的抗体。在一些方面，通过例如电泳(例如，SDS-PAGE、等电聚焦(IEF)、毛细管电泳)或色谱(例如，离子交换或反相HPLC)方法测定，将抗体纯化至大于95％或99％的纯度。关于评定抗体纯度的方法的综述，请参见例如Flatman等人，J.Chromatogr.B848:79-87(2007)。

术语“核酸分子”或“多核苷酸”包括包含核苷酸聚合物的任何化合物和/或物质。每个核苷酸包含碱基，特别是嘌呤或嘧啶碱基(即胞嘧啶(C)、鸟嘌呤(G)、腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)或尿嘧啶(U))、糖(即脱氧核糖或核糖)和磷酸酯基团。通常，核酸分子通过碱基序列进行描述，其中所述碱基代表核酸分子的一级结构(线性结构)。碱基序列通常表示为从5'至3'。在本文中，术语核酸分子涵盖脱氧核糖核酸(DNA)(包括例如互补DNA(cDNA)和基因组DNA)、核糖核酸(RNA)(特别是信使RNA(mRNA))、DNA或RNA的合成形式，以及包含这些分子中的两种或更多种的混合聚合物。核酸分子可以是线性的或环状的。此外，术语核酸分子包括有义链和反义链，以及单链和双链形式。此外，本文所描述的核酸分子可含有天然存在的或非天然存在的核苷酸。非天然存在的核苷酸的示例包括具有衍生化的糖或磷酸主链键或经化学修饰的残基的经修饰的核苷酸碱基。核酸分子还涵盖适合作为用于本发明的抗体的体外和/或体内(例如，在宿主或患者体内)直接表达的载体的DNA和RNA分子。此类DNA(例如cDNA)或RNA(例如mRNA)载体可以是未修饰的或经修饰的。例如，可以对mRNA进行化学修饰以增强RNA载体的稳定性和/或编码分子的表达，使得可以将mRNA注射到受试者体内以产生体内抗体(参见例如Stadler等人，Nature Medicine 2017，2017年6月12日在线发表，doi:10.1038/nm.4356或EP 2 101 823 B1)。

“分离的”核酸是指已从其自然环境的组分中分离的核酸分子。分离的核酸包括这样的核酸分子，其包含在通常含有核酸分子的细胞中，但该核酸分子存在于染色体外或与其天然染色***置不同的染色***置处。

“编码抗Notch2抗体的分离的核酸”是指编码抗Notch2抗体重链和轻链(或其片段)的一个或多个核酸分子，包括在单一载体或单独的载体中的此类核酸分子，以及存在于宿主细胞中一个或多个位置的此类核酸分子。

如本文所用的术语“单克隆抗体”是指从基本上同质的抗体群体获得的抗体，即，除了可能的变体抗体(例如，含有天然存在的突变或在单克隆抗体制剂的生产过程中产生，此类变体通常以少量形式存在)之外，包括该群体的单个抗体具有同一性和/或结合相同表位。与通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂相反，单克隆抗体制剂中的每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。因此，修饰语“单克隆”表示抗体的特征是从基本上同质的抗体群体获得的，并且不应解释为需要通过任何特定方法产生抗体。例如，根据本发明的单克隆抗体可以通过多种技术制备，包括但不限于杂交瘤方法、重组DNA方法、噬菌体展示方法，以及利用含有全部或部分人免疫球蛋白基因座的转基因动物的方法，在本文中描述了用于制备单克隆抗体的此类方法和其他示例性方法。

术语“粘液阻塞性肺疾病”是指一组以弥漫性粘液阻塞、慢性炎症、气道壁扩张和频繁的细菌感染为特征的疾病。在粘液阻塞性肺疾病中，高浓度的粘液不能有效地从远端气道向气管运输，并且粘液粘附至气道表面，从而导致气流阻塞、感染和炎症。非限制性示例性粘液阻塞性肺病包括慢性阻塞性肺病(COPD)、囊性纤维化、原发性纤毛运动障碍、非囊性纤维化支气管扩张症和细支气管炎。

“裸抗体”是指不缀合至异源部分(例如，细胞毒性部分)或放射性标记的抗体。裸抗体可存在于药物组合物中。

“天然抗体”是指具有不同结构的天然存在的免疫球蛋白分子。例如，天然IgG抗体是约150,000道尔顿的异四聚体糖蛋白，由经二硫键合的两条相同轻链和两条相同重链构成。从N端至C端，每条重链均具有可变结构域(VH)，亦称为可变重链结构域或重链可变区，随后为三个恒定重链结构域(CH1、CH2和CH3)。类似地，从N端至C端，每条轻链均具有可变结构域(VL)，亦称为可变轻链结构域或轻链可变区，随后为恒定轻链(CL)结构域。

除非另外指明，否则如本文所用的术语“Notch2”是指来自任何脊椎动物来源的任何天然Notch2，该脊椎动物来源包括哺乳动物诸如灵长类动物(例如，人)和啮齿动物(例如，小鼠和大鼠)。该术语包括“全长”的未加工Notch2，以及通过细胞中加工产生的任何形式的Notch2。该术语还涵盖Notch2的天然存在变体，例如剪接变体或等位基因变体。示例性人Notch2的氨基酸序列示出于UniProtKB/Swiss-Prot：Q04721.3处或本文的SEQ ID NO:70中。示例性食蟹猴Notch2的氨基酸序列示出于UniProt：A0A2K5U7N0_MACFA中。另一示例性食蟹猴Notch2示出于本文的SEQ ID NO:71中。示例性豚鼠Notch2的氨基酸序列示出于UniProt：H0VU21处或本文的SEQ ID NO:72中。示例性豚鼠Notch2的氨基酸序列示出于UniProt：O35516处或本文的SEQ ID NO:73中。示例性大鼠Notch2的氨基酸示出于UniProt：Q9QW30处或本文的SEQ ID NO:81中。

术语“包装插页”用于指治疗产品的商业包装中通常包括的说明书，其含有涉及此类治疗产品的使用的有关适应症、用法、剂量、施用、联合疗法、禁忌症和/或警告的信息。

相对于参照多肽序列的“氨基酸序列同一性百分比(％)”被定义为在比对候选序列与参考多肽序列并引入空位(如果必要的话)以实现最大的序列同一性百分比之后，并且出于比对的目的在不考虑将任何保守取代作为序列同一性的组成部分的情况下，候选序列中的氨基酸残基与参考多肽序列中的氨基酸残基相同的百分比。用于确定氨基酸序列同一性百分比的比对可以通过本领域技术范围内的各种方式实现，例如使用公众可获得的计算机软件，诸如BLAST、BLAST-2、Clustal W、Megalign(DNASTAR)软件或FASTA程序包。本领域技术人员可确定用于比对序列的适当参数，包括在所比较的序列的全长上实现最大比对所需的任何算法。可替代地，可以使用序列比较计算机程序ALIGN-2来生成同一性百分比值。ALIGN-2序列比较计算机程序由基因泰克公司编写，并且源代码已经与用户文档一起提交到U.S.Copyright Office,Washington D.C.,20559，在那里以美国版权登记号TXU510087注册，并且在WO 2001/007611中有所描述。

除非另外指明，否则出于本文的目的，使用FASTA包第36.3.8c版或更高版本的ggsearch程序，利用BLOSUM50比较矩阵生成氨基酸序列同一性百分比的值。FASTA程序包由W.R.Pearson和D.J.Lipman(1988),“Improved Tools for Biological SequenceAnalysis”,PNAS 85:2444-2448；W.R.Pearson(1996)“Effective protein sequencecomparison”Meth.Enzymol.266:227-258；以及Pearson等人，(1997)Genomics 46:24-36创作并且可从www.fasta.bioch.virginia.edu/fasta_www2/fasta_down.shtml或www.ebi.ac.uk/Tools/sss/fasta公开获得。可替代地，可以使用可在fasta.bioch.virginia.edu/fasta_www2/index.cgi处访问的公共服务器来比较序列，使用ggsearch(全局蛋白质：蛋白质)程序和默认选项(BLOSUM50；开放：-10；ext：-2；Ktup＝2)来确保执行全局而非局部比对。在输出比对标头中给出氨基酸同一性百分比。

术语“药物组合物”或“药物配制物”是指处于允许包含在其中的活性成分的生物活性有效的形式，并且不含对于将被施用该药物组合物的受试者具有不可接受的毒性的附加组分的制剂。

“药用载体”是指药物组合物或配制物中除有效成分之外的成分，其对受试者是无毒的。药用载体包括但不限于缓冲剂、赋形剂、稳定剂，或防腐剂。

如本文所用，“治疗”(及其语法变体)是指试图改变所治疗个体的疾病的自然病程，并且可以执行以用于预防或可以在临床病理学过程中执行的临床干预措施。治疗的期望效果包括但不限于预防疾病的发生或复发、减轻症状、削弱疾病的任何直接或间接病理学后果、预防转移、降低疾病进展的速率、改善或减轻疾病状态，以及缓解或改善预后。在一些方面，本发明的抗体用于延迟疾病的发展或减缓疾病的进展。

术语“可变区”或“可变结构域”是指抗体重链或轻链的参与抗体与抗原结合的结构域。天然抗体的重链和轻链的可变结构域(分别为VH和VL)通常具有相似的结构，其中每个结构域包含四个保守框架区(FR)和三个互补决定区(CDR)。(参见，例如，Kindt等人，KubyImmunology，第6版，W.H.Freeman and Co.，第91页(2007)。)单个VH或VL结构域可足以赋予抗原结合特异性。此外，结合特定抗原的抗体可分别使用来自结合该抗原的抗体的VH或VL结构域来进行分离，以筛选互补VL或VH结构域的文库。参见，例如，Portolano等人，J.Immunol.150:880-887(1993)；Clarkson等人，Nature 352:624-628(1991)。

如本文所用的术语“载体”是指能够载运与其相连的另一核酸的核酸分子。该术语包括作为自我复制核酸结构的载体，以及并入其已被引入的宿主细胞的基因组中的载体。某些载体能够指导与其可操作地连接的核酸的表达。此类载体在本文中称为“表达载体”。

II.组合物和方法

在一些方面，本发明部分地基于结合Notch2并且抑制Jagged1介导的信号传导但不抑制DLL1介导的信号传导的抗体。本发明的抗体可用于例如诊断或治疗粘液阻塞性肺疾病。

A.示例性抗Notch2抗体

在一些方面，本发明提供了与Notch2结合的抗体。在一些方面，提供了与Notch2结合的分离的抗体。在一些方面，本发明提供了与Notch2特异性结合的抗体。在某些方面，抗Notch2抗体：

·抑制Jagged1介导的信号传导；

·不抑制DLL1介导的信号传导；

·不抑制Jagged1与Notch2的结合；

·不抑制DLL1与Notch2的结合；

·结合Notch2的EGF7重复序列内的表位；

·结合Notch2的氨基酸260至296内的表位；

·结合Notch2的氨基酸260至296内的不连续表位；

·接触人Notch2的精氨酸268(R268)；

·不结合包含赖氨酸268(268K)的Notch2；

·结合包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列的多肽并且不结合包含SEQ ID NO:77的氨基酸序列的多肽；和/或

·如通过表面等离子体共振所确定的，以小于20nM、小于15nM、小于10nM或小于5nM的亲和力(K_D)结合人Notch2，。

包含抗体1B2或其人源化形式的一个或多个CDR的抗体

在一些方面，本发明提供了一种抗Notch2抗体，该抗体包含选自以下的至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个CDR：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:6或7的氨基酸序列；(c)CDR-H3，其包含SEQID NO:8、9、10、11或12的氨基酸序列；(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列；(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列；以及(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列。

在一些方面，本发明提供了一种抗体，该抗体包含选自以下各项的至少一个、至少两个或所有三个VH CDR序列：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:6或7的氨基酸序列；和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:8、9、10、11或12的氨基酸序列。在一些方面，该抗体包含含有SEQ ID NO:8、9、10、11或12的氨基酸序列的CDR-H3。在一些方面，该抗体包含：CDR-H3，其包含SEQ ID NO:8、9、10、11或12的氨基酸序列；以及CDR-L3，其包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列。在又一方面，该抗体包含：CDR-H3，其包含SEQID NO:8、9、10、11或12的氨基酸序列；CDR-L3，其包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列；以及CDR-H2，其包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。在又一方面，该抗体包含(a)包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的CDR-H1、(b)包含SEQ ID NO:6或7的氨基酸序列的CDR-H2、以及(c)包含SEQ IDNO:8、9、10、11或12的氨基酸序列的CDR-H3。

在一些方面，本发明提供了一种抗体，该抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VL CDR序列：(a)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列；(b)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列；和(c)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列。在一些方面，该抗体包含(a)包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的CDR-L1、(b)包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的CDR-L2以及(c)包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的CDR-L3。

在一些方面，本发明的抗体包含：(a)VH结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH CDR序列：(i)含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的CDR-H1，(ii)含有SEQID NO:6或7的氨基酸序列的CDR-H2和(iii)含有SEQ ID NO:8、9、10、11或12的氨基酸序列的CDR-H3；(b)VL结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或全部三个VL CDR序列：(i)含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的CDR-L1，(ii)含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的CDR-L2和(c)含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的CDR-L3。

在一些方面，本发明提供了一种抗体，该抗体包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:6或7的氨基酸序列；(c)CDR-H3，其包含SEQID NO:8、9、10、11或12的氨基酸序列；(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列；(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列；和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列。

在某些方面，如本文提供的抗Notch2抗体的任何一种或多种氨基酸在以下CDR位置被取代：

-在CDR-H2(SEQ ID NO:6)中：位置2

-在CDR-H3(SEQ ID NO:8)中：位置2、4、5和/或6。

在某些方面，替换是如本文所提供的保守取代。在某些方面，可按任何组合来作出下列取代中的任何一种或多种：

-在CDR-H2(SEQ ID NO:6)中：S2Q(按Kabat编号的S51Q)

-在CDR-H3(SEQ ID NO:8)中：S2G(按Kabat编号的S96G)；R4K(按Kabat编号的R98K)；W5L(按Kabat编号的W99L)；和/或G6A(按Kabat编号的G100A)。

在本文提供的任何方面，抗Notch2抗体是人源化的。在一些方面，抗Notch2抗体进一步包含受体人框架，例如人免疫球蛋白框架或人共有框架。在一些方面，抗Notch2抗体包含VH，其包含：SEQ ID NO:92的FR1序列；SEQ ID NO:93或94的FR2序列；SEQ ID NO:95、96或107的FR3序列；和/或SEQ ID NO:97的FR4序列。在一些方面，抗Notch2抗体包含VL，其包含：SEQ ID NO:87的FR1序列；SEQ ID NO:88的FR2序列；SEQ ID NO:89或90的FR3序列；和/或SEQ ID NO:91的FR4序列。

在一些方面，抗Notch2抗体包含VH结构域，该结构域包含选自以下各项的一个或多个重链框架序列：(a)SEQ ID NO:92的重链框架区1(HC-FR1)；(b)SEQ ID NO:93或94的重链框架区2(HC-FR2)；(c)SEQ ID NO:95、96或107的重链框架区3(HC-FR3)；和(d)SEQ IDNO:97的重链框架区4(HC-FR4)。

在一些方面，抗Notch2抗体包含VH结构域，该结构域包含SEQ ID NO:92的HC-FR1。在一些方面，抗Notch2抗体包含VH结构域，该结构域包含SEQ ID NO:93或94的HC-FR2。在一些方面，抗Notch2抗体包含VH结构域，该结构域包含SEQ ID NO:95、96或107的HC-FR3。在一些方面，抗Notch2抗体包含VH结构域，该结构域包含SEQ ID NO:97的HC-FR4。

在一些方面，抗Notch2抗体包含VH结构域，该结构域包含与SEQ ID NO:92的序列同一性至少为85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的HC-FR1。在一些方面，VH结构域包含与SEQ ID NO:92的序列同一性至少为95％的HC-FR1。在一些方面，VH结构域包含与SEQ ID NO:92的序列同一性至少为98％的HC-FR1。

在一些方面，抗Notch2抗体包含VH结构域，该结构域包含与SEQ ID NO:93或94的序列同一性至少为85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的HC-FR2。在一些方面，VH结构域包含与SEQ ID NO:93或94的序列同一性至少为95％的HC-FR2。在一些方面，VH结构域包含与SEQ ID NO:93或94的序列同一性至少为98％的HC-FR2。

在一些方面，抗Notch2抗体包含VH结构域，该结构域包含与SEQ ID NO:95、96或107的序列同一性至少为85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的HC-FR3。在一些方面，VH结构域包含与SEQ ID NO:95、96或107的序列同一性至少为95％的HC-FR3。在一些方面，VH结构域包含与SEQ ID NO:95、96或107的序列同一性至少为98％的HC-FR3。

在一些方面，抗Notch2抗体包含VH结构域，该结构域包含与SEQ ID NO:97的序列同一性至少为85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的HC-FR4。在一些方面，VH结构域包含与SEQ ID NO:97的序列同一性至少为95％的HC-FR4。在一些方面，VH结构域包含与SEQ ID NO:97的序列同一性至少为98％的HC-FR4。

在一些方面，抗Notch2抗体包含VL结构域，该结构域包含选自以下各项的一个或多个轻链框架序列：(a)SEQ ID NO:87的轻链框架区1(LC-FR1)；(b)SEQ ID NO:88的轻链框架区2(LC-FR2)；(c)SEQ ID NO:89或90的轻链框架区3(LC-FR3)；和(d)SEQ ID NO:91的轻链框架区4(LC-FR4)。

在一些方面，抗Notch2抗体包含VL结构域，该结构域包含SEQ ID NO:87的LC-FR1。在一些方面，抗Notch2抗体包含VL结构域，该结构域包含SEQ ID NO:88的LC-FR2。在一些方面，抗Notch2抗体包含VL结构域，该结构域包含SEQ ID NO:89或90的LC-FR3。在一些方面，抗Notch2抗体包含VL结构域，该结构域包含SEQ ID NO:91的LC-FR4。

在一些方面，抗Notch2抗体包含VL结构域，该结构域包含与SEQ ID NO:87的序列同一性至少为85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的LC-FR1。在一些方面，VL结构域包含与SEQ ID NO:87的序列同一性至少为95％的LC-FR1。在一些方面，VL结构域包含与SEQ ID NO:87的序列同一性至少为98％的LC-FR1。

在一些方面，抗Notch2抗体包含VL结构域，该结构域包含与SEQ ID NO:88的序列同一性至少为85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的LC-FR2。在一些方面，VL结构域包含与SEQ ID NO:88的序列同一性至少为95％的LC-FR2。在一些方面，VL结构域包含与SEQ ID NO:88的序列同一性至少为98％的LC-FR2。

在一些方面，抗Notch2抗体包含VL结构域，该结构域包含与SEQ ID NO:89或90的序列同一性至少为85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的LC-FR3。在一些方面，VL结构域包含与SEQ ID NO:89或90的序列同一性至少为95％的LC-FR3。在一些方面，VL结构域包含与SEQ ID NO:89或90的序列同一性至少为98％的LC-FR3。

在一些方面，抗Notch2抗体包含VL结构域，该结构域包含与SEQ ID NO:91的序列同一性至少为85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的LC-FR4。在一些方面，VL结构域包含与SEQ ID NO:91的序列同一性至少为95％的LC-FR1。在一些方面，VL结构域包含与SEQ ID NO:91的序列同一性至少为98％的LC-FR1。

在一些方面，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:14、17、18、19、20、21、22、23、24、26、28、30、或32的VH的一个或多个CDR序列。在另一个实施例中，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:13、15、16、25、27、29或31的VL的一个或多个CDR序列。在另一个实施例中，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:14、17、18、19、20、21、22、23、24、26、28、30或32的VH的CDR序列以及SEQ IDNO:13、15、16、25、27、29或31的VL的CDR序列。

在另一个方面，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:14、17、18、19、20、21、22、23、24、26、28、30或32的VH结构域的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3氨基酸序列以及SEQ ID NO:13、15、16、25、27、29或31的VL结构域的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3氨基酸序列。

在一些方面，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:14、17、18、19、20、21、22、23、24、26、28、30或32的VH结构域的一个或多个重链CDR氨基酸序列以及与SEQ ID NO:14、17、18、19、20、21、22、23、24、26、28、30或32的VH结构域的序列同一性至少为85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的框架。在一些方面，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:14、17、18、19、20、21、22、23、24、26、28、30或32的VH结构域的三个重链CDR氨基酸序列以及与SEQ ID NO:14、17、18、19、20、21、22、23、24、26、28、30或32的VH结构域的序列同一性至少为85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的框架。在一些方面，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:14、17、18、19、20、21、22、23、24、26、28、30或32的VH结构域的三个重链CDR氨基酸序列以及与SEQ IDNO:14、17、18、19、20、21、22、23、24、26、28、30或32的VH结构域的序列同一性至少为95％的框架。在一些方面，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:14、17、18、19、20、21、22、23、24、26、28、30或32的VH结构域的三个重链CDR氨基酸序列以及与SEQ ID NO:14、17、18、19、20、21、22、23、24、26、28、30或32的VH结构域的序列同一性至少为98％的框架。

在一些方面，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:13、15、16、25、27、29或31的VL结构域的一个或多个轻链CDR氨基酸序列以及与SEQ ID NO:13、15、16、25、27、29或31的VL结构域的序列同一性至少为85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的框架。在一些方面，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:13、15、16、25、27、29或31的VL结构域的三个轻链CDR氨基酸序列以及与SEQ ID NO:13、15、16、25、27、29或31的VL结构域的序列同一性至少为85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的框架。在一些方面，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:13、15、16、25、27、29或31的VL结构域的三个轻链CDR氨基酸序列以及与SEQ ID NO:13、15、16、25、27、29或31的VL结构域的序列同一性至少为95％的框架。在一些方面，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:13、15、16、25、27、29或31的VL结构域的三个轻链CDR氨基酸序列以及与SEQID NO:13、15、16、25、27、29或31的VL结构域的序列同一性至少为98％的框架。

在一些方面，抗Notch2抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:6或7的氨基酸序列的CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:8、9、10、11或12的氨基酸序列的CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的CDR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的CDR-L3，和VH结构域，其与SEQ ID NO:14、17、18、19、20、21、22、23、24、26、28、30或32的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性；和VL结构域，其与SEQ ID NO:13、15、16、25、27、29或31的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。在一些方面，VH结构域与SEQ IDNO:14、17、18、19、20、21、22、23、24、26、28、30或32的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性。在一些方面，VL结构域与SEQ ID NO:13、15、16、25、27、29或31的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性。

在一些方面，抗Notch2抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:6或7的氨基酸序列的CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:8、9、10、11或12的氨基酸序列的CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的CDR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的CDR-L3，和VH结构域，其与SEQ ID NO:14、17、18、19、20、21、22、23、24、26、28、30或32的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性；和VL结构域，其与SEQ ID NO:13、15、16、25、27、29或31的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性；其中该抗体与Notch2特异性结合。在一些方面，VH结构域与SEQ ID NO:14、17、18、19、20、21、22、23、24、26、28、30或32的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性。在一些方面，VL结构域与SEQ ID NO:13、15、16、25、27、29或31的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性。在一些方面，抗体与Notch2结合，其解离常数(K_D)与包含SEQ ID NO:14、17、18、19、20、21、22、23、24、26、28、30或32的VH序列和SEQ ID NO:13、15、16、25、27、29或31的VL序列的抗体的解离常数(K_D)相比降低多达10倍或提高多达10倍。

在一些方面，抗Notch2抗体包含与SEQ ID NO:14、17、18、19、20、21、22、23、24、26、28、30或32的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在一些方面，抗Notch2抗体包含与SEQ ID NO:14、17、18、19、20、21、22、23、24、26、28、30或32的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些方面，至少具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的VH序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但是包含该序列的抗Notch2抗体保留了与Notch2结合的能力。在某些方面，在SEQ ID NO:14、17、18、19、20、21、22、23、24、26、28、30或32中，总共有1至10个氨基酸被取代、***和/或缺失。在某些方面，取代、***或缺失发生在CDR之外的区域(即，在FR中)。任选地，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:14、17、18、19、20、21、22、23、24、26、28、30或32所示的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体方面，VH包含一、二或三个选自以下各项的CDR：(a)包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列的CDR-H1，(b)包含SEQ ID NO:6或7所示的氨基酸序列的CDR-H2，以及(c)包含SEQ ID NO:8、9、10、11或12所示的氨基酸序列的CDR-H3。在一些方面，提供了一种抗Notch2抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:13、15、16、25、27、29或31的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的轻链可变结构域(VL)序列。在一些方面，一种抗Notch2抗体包含与SEQ ID NO:13、15、16、25、27、29或31的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性的轻链可变结构域(VL)序列。在某些方面，至少具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的VL序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但是包含该序列的抗Notch2抗体保留了与Notch2结合的能力。在某些方面，在SEQ ID NO:13、15、16、25、27、29或31中，总共有1至10个氨基酸被取代、***和/或缺失。在某些方面，取代、***或缺失发生在CDR之外的区域(即，在FR中)。任选地，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:13、15、16、25、27、29或31所示的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体方面，VL包含一、二或三个选自以下各项的CDR：(a)包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的CDR-L1，(b)包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的CDR-L2和(c)包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的CDR-L3。

在一些方面，提供了一种抗Notch2抗体，其中该抗体包含如在上文提供的任一方面中的VH序列以及如在上文提供的任一方面中的VL序列。在一些方面，该抗体包含SEQ IDNO:14、17、18、19、20、21、22、23、24、26、28、30或32和SEQ ID NO:13、15、16、25、27、29或31分别所示的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。

包含抗体3107的一个或多个CDR的抗体

在一些方面，本发明提供了一种抗Notch2抗体，该抗体包含选自以下的至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个CDR：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列；(c)CDR-H3，其包含SEQ IDNO:38的氨基酸序列；(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列；(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列；以及(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列。

在一些方面，本发明提供了一种抗体，该抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH CDR序列：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列；和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列。在一些方面，该抗体包含CDR-H3，其包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列。在一些方面，该抗体包含：CDR-H3，其包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列；以及CDR-L3，其包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列。在又一方面，该抗体包含：CDR-H3，其包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列；CDR-L3，其包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列；以及CDR-H2，其包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列。在又一方面，该抗体包含(a)包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的CDR-H1、(b)包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列的CDR-H2、以及(c)包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR-H3。

在一些方面，本发明提供了一种抗体，该抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VL CDR序列：(a)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列；(b)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列；和(c)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列。在一些方面，该抗体包含(a)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的CDR-L1、(b)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的CDR-L2以及(c)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的CDR-L3。

在一些方面，本发明的抗体包含：(a)VH结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH CDR序列：(i)含有SEQ ID NO:36的氨基酸序列的CDR-H1，(ii)含有SEQ ID NO:37的氨基酸序列的CDR-H2和(iii)含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR-H3；(b)VL结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或全部三个VL CDR序列：(i)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的CDR-L1，(ii)含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的CDR-L2和(c)含有SEQ ID NO:35的氨基酸序列的CDR-L3。

在一些方面，本发明提供了一种抗体，该抗体包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列；(c)CDR-H3，其包含SEQID NO:38的氨基酸序列；(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列；(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列；和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列。

在一些方面，一种抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:40的VH的一个或多个CDR序列。在另一个实施例中，一种抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:39的VL的一个或多个CDR序列。在另一个实施例中，一种抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:40的VH的CDR序列和SEQ ID NO:39的VL的CDR序列。

在另一方面，一种抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:40的VH结构域的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3氨基酸序列和SEQ ID NO:39的VL结构域的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3氨基酸序列。

在一些方面，一种抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:40的VH结构域的一个或多个重链CDR氨基酸序列以及与选自SEQ ID NO:40和101至106的VH结构域的框架氨基酸序列的序列同一性至少为85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的框架。在一些方面，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:40的VH结构域的三个重链CDR氨基酸序列以及与选自SEQ ID NO:40和101至106的VH结构域的框架氨基酸序列的序列同一性至少为85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的框架。在一些方面，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:40的VH结构域的三个重链CDR氨基酸序列以及与选自SEQ ID NO:40和101至106的VH结构域的框架氨基酸序列的序列同一性至少为95％的框架。在一些方面，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:40的VH结构域的三个重链CDR氨基酸序列以及与选自SEQ ID NO:40和101至106的VH结构域的框架氨基酸序列的序列同一性至少为98％的框架。

在一些方面，一种抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:39的VL结构域的一个或多个轻链CDR氨基酸序列以及与选自SEQ ID NO:39和98至100的VL结构域的框架氨基酸序列的序列同一性至少为85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的框架。在一些方面，一种抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:39的VL结构域的三个轻链CDR氨基酸序列以及与选自SEQ ID NO:39和98至100的VL结构域的框架氨基酸序列的序列同一性至少为85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的框架。在一些方面，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:39的VL结构域的三个轻链CDR氨基酸序列以及与选自SEQ ID NO:39和98至100的VL结构域的框架氨基酸序列的序列同一性至少为95％的框架。在一些方面，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:39的VL结构域的三个轻链CDR氨基酸序列以及与选自SEQ ID NO:39和98至100的VL结构域的框架氨基酸序列的序列同一性至少为98％的框架。

在一些方面，抗Notch2抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列的CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的CDR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的CDR-L3，和VH结构域，其与选自SEQ IDNO:40和101至106的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性；和VL结构域，其与选自SEQ ID NO:39和98至100的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。在一些方面，VH结构域与选自SEQ ID NO:40和101至106的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性。在一些方面，VL结构域与选自SEQ ID NO:39和98至106的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性。

在一些方面，抗Notch2抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列的CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的CDR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的CDR-L3，和VH结构域，其与选自SEQ IDNO:40和101至106的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性；和VL结构域，其与选自SEQ ID NO:39和98至100的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性；其中该抗体与Notch2特异性结合。在一些方面，VH结构域与选自SEQ ID NO:40和101至106的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性。在一些方面，VL结构域与选自SEQ ID NO:39和98至106的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性。在一些方面，该抗体与Notch2结合，其解离常数(K_D)与包含SEQ ID NO:40的VH序列和SEQ ID NO:39的VL序列的抗体的解离常数(K_D)相比降低多达10倍或提高多达10倍。

在一些方面，一种抗Notch2抗体包含与选自SEQ ID NO:40和101至106的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在一些方面，一种抗Notch2抗体包含与选自SEQ ID NO:40和101至106的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些方面，至少具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的VH序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但是包含该序列的抗Notch2抗体保留了与Notch2结合的能力。在某些方面，在SEQ ID NO:40和101至106中的任一者中，总共有1至10个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些方面，取代、***或缺失发生在CDR之外的区域(即，在FR中)。任选地，抗Notch2抗体包含选自SEQ ID NO:40和101至106的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体方面，VH包含一、二或三个选自以下各项的CDR：(a)包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的CDR-H1，(b)包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列的CDR-H2和(c)包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR-H3。

在一些方面，提供了一种抗Notch2抗体，其中该抗体包含与选自SEQ ID NO:39和98至100的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的重链可变结构域(VL)序列。在一些方面，一种抗Notch2抗体包含与选自SEQ ID NO:39和98至100的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性的轻链可变结构域(VL)序列。在某些方面，至少具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的VL序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但是包含该序列的抗Notch2抗体保留了与Notch2结合的能力。在某些方面，在SEQ ID NO:39和98至100中的任一者中，总共有1至10个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些方面，取代、***或缺失发生在CDR之外的区域(即，在FR中)。任选地，抗Notch2抗体包含选自SEQ ID NO:39和98至100的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体方面，VL包含一、二或三个选自以下各项的CDR：(a)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的CDR-L1，(b)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的CDR-L2和(c)包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的CDR-L3。

在一些方面，提供了一种抗Notch2抗体，其中该抗体包含如在上文提供的任一方面中的VH序列以及如在上文提供的任一方面中的VL序列。在一些方面，该抗体分别包含SEQID NO:40和SEQ ID NO:39中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。在一些方面，该抗体包含选自SEQ ID NO:101至106的VH序列和选自SEQ ID NO:98至100的VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。

包含抗体2338的一个或多个CDR的抗体

在一些方面，本发明提供了一种抗Notch2抗体，该抗体包含选自以下的至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个CDR：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列；(c)CDR-H3，其包含SEQ IDNO:46的氨基酸序列；(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列；(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列；以及(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列。

在一些方面，本发明提供了一种抗体，该抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH CDR序列：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列；和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列。在一些方面，该抗体包含CDR-H3，其包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列。在一些方面，该抗体包含：CDR-H3，其包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列；以及CDR-L3，其包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列。在又一方面，该抗体包含：CDR-H3，其包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列；CDR-L3，其包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列；以及CDR-H2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列。在又一方面，该抗体包含(a)包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的CDR-H1、(b)包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的CDR-H2、以及(c)包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的CDR-H3。

在一些方面，本发明提供了一种抗体，该抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VL CDR序列：(a)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列；(b)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列；和(c)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列。在一些方面，该抗体包含(a)包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的CDR-L1、(b)包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的CDR-L2以及(c)包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的CDR-L3。

在一些方面，本发明的抗体包含：(a)VH结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH CDR序列：(i)含有SEQ ID NO:44的氨基酸序列的CDR-H1，(ii)含有SEQ ID NO:45的氨基酸序列的CDR-H2和(iii)含有SEQ ID NO:46的氨基酸序列的CDR-H3；(b)VL结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或全部三个VL CDR序列：(i)含有SEQ ID NO:41的氨基酸序列的CDR-L1，(ii)含有SEQ ID NO:42的氨基酸序列的CDR-L2和(c)含有SEQ ID NO:43的氨基酸序列的CDR-L3。

在一些方面，本发明提供了一种抗体，该抗体包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列；(c)CDR-H3，其包含SEQID NO:46的氨基酸序列；(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列；(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列；和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列。

在一些方面，一种抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:48的VH的一个或多个CDR序列。在另一个实施例中，一种抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:47的VL的一个或多个CDR序列。在另一个实施例中，一种抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:48的VH的CDR序列和SEQ ID NO:47的VL的CDR序列。

在另一方面，一种抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:48的VH结构域的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3氨基酸序列和SEQ ID NO:47的VL结构域的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3氨基酸序列。

在一些方面，一种抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:48的VH结构域的一个或多个重链CDR氨基酸序列以及与SEQ ID NO:48的VH结构域的框架氨基酸序列的序列同一性至少为85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的框架。在一些方面，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:48的VH结构域的三个重链CDR氨基酸序列以及与SEQ ID NO:48的VH结构域的框架氨基酸序列的序列同一性至少为85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的框架。在一些方面，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:48的VH结构域的三个重链CDR氨基酸序列以及与SEQ ID NO:48的VH结构域的框架氨基酸序列的序列同一性至少为95％的框架。在一些方面，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:48的VH结构域的三个重链CDR氨基酸序列以及与SEQ ID NO:48的VH结构域的框架氨基酸序列的序列同一性至少为98％的框架。

在一些方面，一种抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:47的VL结构域的一个或多个轻链CDR氨基酸序列以及与SEQ ID NO:47的VL结构域的框架氨基酸序列的序列同一性至少为85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的框架。在一些方面，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:47的VL结构域的三个轻链CDR氨基酸序列以及与SEQ ID NO:47的VL结构域的框架氨基酸序列的序列同一性至少为85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的框架。在一些方面，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:47的VL结构域的三个轻链CDR氨基酸序列以及与SEQ ID NO:47的VL结构域的框架氨基酸序列的序列同一性至少为95％的框架。在一些方面，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:47的VL结构域的三个轻链CDR氨基酸序列以及与SEQ ID NO:47的VL结构域的框架氨基酸序列的序列同一性至少为98％的框架。

在一些方面，抗Notch2抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的CDR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的CDR-L3，和VH结构域，其与SEQ ID NO:48的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性；和VL结构域，其与SEQ ID NO:47的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。在一些方面，VH结构域与SEQ ID NO:48的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性。在一些方面，VL结构域与SEQ IDNO:47的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性。

在一些方面，抗Notch2抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的CDR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的CDR-L3，和VH结构域，其与SEQ ID NO:48的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性；和VL结构域，其与SEQ ID NO:47的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性；其中该抗体与Notch2特异性结合。在一些方面，VH结构域与SEQ ID NO:48的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性。在一些方面，VL结构域与SEQ ID NO:47的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性。在一些方面，该抗体与Notch2结合，其解离常数(K_D)与包含SEQ ID NO:48的VH序列和SEQ ID NO:47的VL序列的抗体的解离常数(K_D)相比降低多达10倍或提高多达10倍。

在一些方面，一种抗Notch2抗体包含与SEQ ID NO:48的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在一些方面，一种抗Notch2抗体包含与SEQ ID NO:48的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些方面，至少具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的VH序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但是包含该序列的抗Notch2抗体保留了与Notch2结合的能力。在某些方面，在SEQ ID NO:48中，总共有1至10个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些方面，取代、***或缺失发生在CDR之外的区域(即，在FR中)。任选地，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:48所示的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体方面，VH包含一、二或三个选自以下各项的CDR：(a)包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的CDR-H1，(b)包含SEQ IDNO:45的氨基酸序列的CDR-H2和(c)包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的CDR-H3。在一些方面，提供了一种抗Notch2抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:47的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的轻链可变结构域(VL)序列。在一些方面，一种抗Notch2抗体包含与SEQ ID NO:47的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性的轻链可变结构域(VL)序列。在某些方面，至少具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的VL序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但是包含该序列的抗Notch2抗体保留了与Notch2结合的能力。在某些方面，在SEQ ID NO:47中，总共有1至10个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些方面，取代、***或缺失发生在CDR之外的区域(即，在FR中)。任选地，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:47所示的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体方面，VL包含一、二或三个选自以下各项的CDR：(a)包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的CDR-L1，(b)包含SEQ IDNO:42的氨基酸序列的CDR-L2和(c)包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的CDR-L3。

在一些方面，提供了一种抗Notch2抗体，其中该抗体包含如在上文提供的任一方面中的VH序列以及如在上文提供的任一方面中的VL序列。在一些方面，该抗体分别包含SEQID NO:48和SEQ ID NO:47所示的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。

包含抗体2430的一个或多个CDR的抗体

在一些方面，本发明提供了一种抗Notch2抗体，该抗体包含选自以下的至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个CDR：(a)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列CDR-H1；(b)含有SEQ ID NO:54的氨基酸序列CDR-H2；(c)含有SEQ ID NO:55的氨基酸序列CDR-H3；(d)含有SEQ ID NO:49的氨基酸序列CDR-L1；(e)含有SEQ ID NO:50的氨基酸序列CDR-L2；以及(f)含有SEQ ID NO:51或52的氨基酸序列CDR-L3。

在一些方面，本发明提供了一种抗体，该抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH CDR序列：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列；和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列。在一些方面，该抗体包含CDR-H3，其包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列。在一些方面，该抗体包含：CDR-H3，其包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列；以及CDR-L3，其包含SEQ ID NO:51或52的氨基酸序列。在又一方面，该抗体包含：CDR-H3，其包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列；CDR-L3，其包含SEQ ID NO:51或52的氨基酸序列；以及CDR-H2，其包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列。在又一方面，该抗体包含(a)包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的CDR-H1、(b)包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的CDR-H2、以及(c)包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的CDR-H3。

在一些方面，本发明提供了一种抗体，该抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VL CDR序列：(a)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列；(b)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列；和(c)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:51或52的氨基酸序列。在一些方面，该抗体包含(a)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的CDR-L1、(b)包含SEQ IDNO:50的氨基酸序列的CDR-L2以及(c)包含SEQ ID NO:51或52的氨基酸序列的CDR-L3。

在一些方面，本发明的抗体包含：(a)VH结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH CDR序列：(i)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的CDR-H1，(ii)含有SEQ ID NO:54的氨基酸序列的CDR-H2和(iii)含有SEQ ID NO:55的氨基酸序列的CDR-H3；(b)VL结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或全部三个VL CDR序列：(i)含有SEQ ID NO:49的氨基酸序列的CDR-L1，(ii)含有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的CDR-L2和(c)含有SEQ ID NO:51或52的氨基酸序列的CDR-L3。

在一些方面，本发明提供了一种抗体，该抗体包含(a)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列CDR-H1；(b)含有SEQ ID NO:54的氨基酸序列CDR-H2；(c)含有SEQ ID NO:55的氨基酸序列CDR-H3；(d)含有SEQ ID NO:49的氨基酸序列CDR-L1；(e)含有SEQ ID NO:50的氨基酸序列CDR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:51或52的氨基酸序列CDR-L3。

在一些方面，一种抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:58的VH的一个或多个CDR序列。在另一个实施例中，一种抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:56或57的VL的一个或多个CDR序列。在另一个实施例中，一种抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:58的VH的CDR序列和SEQ ID NO:56或57的VL的CDR序列。

在另一方面，一种抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:58的VH结构域的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3氨基酸序列和SEQ ID NO:56或57的VL结构域的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3氨基酸序列。

在一些方面，一种抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:58的VH结构域的一个或多个重链CDR氨基酸序列以及与SEQ ID NO:58的VH结构域的框架氨基酸序列的序列同一性至少为85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的框架。在一些方面，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:58的VH结构域的三个重链CDR氨基酸序列以及与SEQ ID NO:58的VH结构域的框架氨基酸序列的序列同一性至少为85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的框架。在一些方面，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:58的VH结构域的三个重链CDR氨基酸序列以及与SEQ ID NO:58的VH结构域的框架氨基酸序列的序列同一性至少为95％的框架。在一些方面，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:58的VH结构域的三个重链CDR氨基酸序列以及与SEQ ID NO:58的VH结构域的框架氨基酸序列的序列同一性至少为98％的框架。

在一些方面，一种抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:56或57的VL结构域的一个或多个轻链CDR氨基酸序列以及与SEQ ID NO:56或57的VL结构域的框架氨基酸序列的序列同一性至少为85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的框架。在一些方面，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:56或57的VL结构域的三个轻链CDR氨基酸序列以及与SEQ ID NO:56或57的VL结构域的框架氨基酸序列的序列同一性至少为85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的框架。在一些方面，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:56或57的VL结构域的三个轻链CDR氨基酸序列以及与SEQ ID NO:56或57的VL结构域的框架氨基酸序列的序列同一性至少为95％的框架。在一些方面，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:56或57的VL结构域的三个轻链CDR氨基酸序列以及与SEQ ID NO:56或57的VL结构域的框架氨基酸序列的序列同一性至少为98％的框架。

在一些方面，抗Notch2抗体包含(a)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的CDR-H1；(b)含有SEQ ID NO:54的氨基酸序列的CDR-H2；(c)含有SEQ ID NO:55的氨基酸序列的CDR-H3；(d)含有SEQ ID NO:49的氨基酸序列的CDR-L1；(e)含有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的CDR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:51或52的氨基酸序列的CDR-L3，和VH结构域，其与SEQ IDNO:58的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性；和VL结构域，其与SEQ ID NO:56或57的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。在一些方面，VH结构域与SEQ ID NO:58的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性。在一些方面，VL结构域与SEQ ID NO:56或57的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性。

在一些方面，抗Notch2抗体包含(a)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的CDR-H1；(b)含有SEQ ID NO:54的氨基酸序列的CDR-H2；(c)含有SEQ ID NO:55的氨基酸序列的CDR-H3；(d)含有SEQ ID NO:49的氨基酸序列的CDR-L1；(e)含有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的CDR-L2；和(f)含有SEQ ID NO:51或52的氨基酸序列的CDR-L3，和VH结构域，其与SEQ IDNO:58的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性；和VL结构域，其与SEQ ID NO:56或57的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性；其中该抗体与Notch2特异性结合。在一些方面，VH结构域与SEQ ID NO:58的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性。在一些方面，VL结构域与SEQ ID NO:56或57的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性。在一些方面，该抗体与Notch2结合，其解离常数(K_D)与包含SEQ ID NO:58的VH序列和SEQ ID NO:56或57的VL序列的抗体的解离常数(K_D)相比降低多达10倍或提高多达10倍。

在一些方面，一种抗Notch2抗体包含与SEQ ID NO:58的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在一些方面，一种抗Notch2抗体包含与SEQ ID NO:58的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些方面，至少具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的VH序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但是包含该序列的抗Notch2抗体保留了与Notch2结合的能力。在某些方面，在SEQ ID NO:58中，总共有1至10个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些方面，取代、***或缺失发生在CDR之外的区域(即，在FR中)。任选地，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:58所示的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体方面，VH包含一、二或三个选自以下各项的CDR：(a)包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的CDR-H1，(b)包含SEQ IDNO:54的氨基酸序列的CDR-H2和(c)包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的CDR-H3。在一些方面，提供了一种抗Notch2抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:56或57的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的轻链可变结构域(VL)序列。在一些方面，一种抗Notch2抗体包含与SEQ ID NO:56或57的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性的轻链可变结构域(VL)序列。在某些方面，至少具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的VL序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但是包含该序列的抗Notch2抗体保留了与Notch2结合的能力。在某些方面，在SEQ ID NO:56或57中，总共有1至10个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些方面，取代、***或缺失发生在CDR之外的区域(即，在FR中)。任选地，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:56或57所示的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体方面，VL包含一、二或三个选自以下各项的CDR：(a)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的CDR-L1，(b)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的CDR-L2和(c)包含SEQ ID NO:51或52的氨基酸序列的CDR-L3。

在一些方面，提供了一种抗Notch2抗体，其中该抗体包含如在上文提供的任一方面中的VH序列以及如在上文提供的任一方面中的VL序列。在一些方面，该抗体分别包含SEQID NO:58和SEQ ID NO:56或57所示的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。

包含抗体2621的一个或多个CDR的抗体

在一些方面，本发明提供了一种抗Notch2抗体，该抗体包含选自以下的至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个CDR：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列；(c)CDR-H3，其包含SEQ IDNO:64的氨基酸序列；(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列；(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列；以及(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列。

在一些方面，本发明提供了一种抗体，该抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH CDR序列：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列；和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列。在一些方面，该抗体包含CDR-H3，其包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列。在一些方面，该抗体包含：CDR-H3，其包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列；以及CDR-L3，其包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列。在又一方面，该抗体包含：CDR-H3，其包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；CDR-L3，其包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列；以及CDR-H2，其包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列。在又一方面，该抗体包含(a)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的CDR-H1、(b)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的CDR-H2、以及(c)包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的CDR-H3。

在一些方面，本发明提供了一种抗体，该抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VL CDR序列：(a)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列；(b)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列；和(c)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列。在一些方面，该抗体包含(a)包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列的CDR-L1、(b)包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的CDR-L2以及(c)包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的CDR-L3。

在一些方面，本发明的抗体包含：(a)VH结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或所有三个VH CDR序列：(i)含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的CDR-H1，(ii)含有SEQ ID NO:63的氨基酸序列的CDR-H2和(iii)含有SEQ ID NO:64的氨基酸序列的CDR-H3；(b)VL结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或全部三个VL CDR序列：(i)含有SEQ ID NO:59的氨基酸序列的CDR-L1，(ii)含有SEQ ID NO:60的氨基酸序列的CDR-L2和(c)含有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的CDR-L3。

在一些方面，本发明提供了一种抗体，该抗体包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列；(c)CDR-H3，其包含SEQID NO:64的氨基酸序列；(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列；(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列；和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列。

在一些方面，一种抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:66的VH的一个或多个CDR序列。在另一个实施例中，一种抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:65的VL的一个或多个CDR序列。在另一个实施例中，一种抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:66的VH的CDR序列和SEQ ID NO:65的VL的CDR序列。

在另一方面，一种抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:66的VH结构域的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3氨基酸序列和SEQ ID NO:65的VL结构域的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3氨基酸序列。

在一些方面，一种抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:66的VH结构域的一个或多个重链CDR氨基酸序列以及与SEQ ID NO:66的VH结构域的框架氨基酸序列的序列同一性至少为85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的框架。在一些方面，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:66的VH结构域的三个重链CDR氨基酸序列以及与SEQ ID NO:66的VH结构域的框架氨基酸序列的序列同一性至少为85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的框架。在一些方面，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:66的VH结构域的三个重链CDR氨基酸序列以及与SEQ ID NO:66的VH结构域的框架氨基酸序列的序列同一性至少为95％的框架。在一些方面，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:66的VH结构域的三个重链CDR氨基酸序列以及与SEQ ID NO:66的VH结构域的框架氨基酸序列的序列同一性至少为98％的框架。

在一些方面，一种抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:65的VL结构域的一个或多个轻链CDR氨基酸序列以及与SEQ ID NO:65的VL结构域的框架氨基酸序列的序列同一性至少为85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的框架。在一些方面，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:65的VL结构域的三个轻链CDR氨基酸序列以及与SEQ ID NO:65的VL结构域的框架氨基酸序列的序列同一性至少为85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的框架。在一些方面，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:65的VL结构域的三个轻链CDR氨基酸序列以及与SEQ ID NO:65的VL结构域的框架氨基酸序列的序列同一性至少为95％的框架。在一些方面，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:65的VL结构域的三个轻链CDR氨基酸序列以及与SEQ ID NO:65的VL结构域的框架氨基酸序列的序列同一性至少为98％的框架。

在一些方面，抗Notch2抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的CDR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的CDR-L3，和VH结构域，其与SEQ ID NO:66的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性；和VL结构域，其与SEQ ID NO:65的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。在一些方面，VH结构域与SEQ ID NO:66的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性。在一些方面，VL结构域与SEQ IDNO:65的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性。

在一些方面，抗Notch2抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的CDR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的CDR-L3，和VH结构域，其与SEQ ID NO:66的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性；和VL结构域，其与SEQ ID NO:65的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性；其中该抗体与Notch2特异性结合。在一些方面，VH结构域与SEQ ID NO:66的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性。在一些方面，VL结构域与SEQ ID NO:65的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性。在一些方面，该抗体与Notch2结合，其解离常数(K_D)与包含SEQ ID NO:66的VH序列和SEQ ID NO:65的VL序列的抗体的解离常数(K_D)相比降低多达10倍或提高多达10倍。

在一些方面，一种抗Notch2抗体包含与SEQ ID NO:66的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在一些方面，一种抗Notch2抗体包含与SEQ ID NO:66的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性的重链可变结构域(VH)序列。在某些方面，至少具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的VH序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但是包含该序列的抗Notch2抗体保留了与Notch2结合的能力。在某些方面，在SEQ ID NO:66中，总共有1至10个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些方面，取代、***或缺失发生在CDR之外的区域(即，在FR中)。任选地，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:66所示的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体方面，VH包含一、二或三个选自以下各项的CDR：(a)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的CDR-H1，(b)包含SEQ IDNO:63的氨基酸序列的CDR-H2和(c)包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的CDR-H3。在一些方面，提供了一种抗Notch2抗体，其中该抗体包含与SEQ ID NO:65的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的轻链可变结构域(VL)序列。在一些方面，一种抗Notch2抗体包含与SEQ ID NO:65的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性的轻链可变结构域(VL)序列。在某些方面，至少具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的VL序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、***或缺失，但是包含该序列的抗Notch2抗体保留了与Notch2结合的能力。在某些方面，在SEQ ID NO:65中，总共有1至10个氨基酸已被取代、***和/或缺失。在某些方面，取代、***或缺失发生在CDR之外的区域(即，在FR中)。任选地，抗Notch2抗体包含SEQ ID NO:65所示的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体方面，VL包含一、二或三个选自以下各项的CDR：(a)包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列的CDR-L1，(b)包含SEQ IDNO:60的氨基酸序列的CDR-L2和(c)包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的CDR-L3。

在一些方面，提供了一种抗Notch2抗体，其中该抗体包含如在上文提供的任一方面中的VH序列以及如在上文提供的任一方面中的VL序列。在一些方面，该抗体分别包含SEQID NO:66和SEQ ID NO:65所示的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。

在又一方面，本发明提供一种抗体，其与本文所提供的抗Notch2抗体所结合的相同表位结合。例如，在某些方面，提供了一种与抗Notch2抗体所结合的相同表位结合的抗体，该抗体包含SEQ ID NO:32的VH序列以及SEQ ID NO:31的VL序列。在某些方面，提供了一种抗Notch2抗体，其与Notch2的EGF7重复序列内的表位结合。在一些实施例中，提供了一种抗Notch2抗体，其与Notch 2的氨基酸260至296(SEQ ID NO:70)内的表位结合。在一些实施例中，提供了一种抗Notch2抗体，其与Notch 2的氨基酸260至296(SEQ ID NO:70)内的表位结合。

在另一方面，本发明提供一种抗体，其与本文所提供的抗Notch2抗体竞争结合Notch2。例如，在某些方面中，提供了与抗Notch2抗体竞争结合Notch2的抗体，该抗体包含SEQ ID NO:32的VH序列以及SEQ ID NO:31的VL序列。

在本发明另一方面，根据以上方面中的任一方面的抗Notch2抗体为单克隆抗体，包括嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。在一些方面，一种抗Notch2抗体为抗体片段，例如，Fv、Fab、Fab'、scFv、双体抗体或F(ab')₂片段。在一些方面，该抗体为全长抗体，例如，本文所定义的完整IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体或其他抗体类别或同种型。

在另一方面，根据上述方面中的任一方面所述的抗Notch2抗体可单独或组合地纳入如以下1至8节所述的任一特征。

1.抗体亲和力

在某些方面，本文提供了一种抗体，其解离常数(K_D)为≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤1nM、≤0.1nM、≤0.01nM或≤0.001nM(例如，10^-8M或更小，例如10^-8M至10^-13M，例如10^-9M至10^-13M)。

在一些方面，使用

表面等离子体共振测定来测量K_D。例如，使用

或/>

(BIAcore,Inc.,Piscataway,NJ)在25℃下用固定的抗原CM5芯片以～10个响应单位(RU)进行测定。在一些方面，根据供应商说明书，用N-乙基-N'-(3-二甲基氨基丙基)-碳化二亚胺盐酸盐(EDC)及N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化羧甲基化的葡聚糖生物感测器芯片(CM5,BIACORE,Inc.)。将抗原用10mM醋酸钠pH 4.8稀释至5μg/ml(约0.2μM)，之后以5μl/分钟的流量进行注射以获得大约10响应单位(RU)的偶联蛋白。注射抗原之后，注射1M乙醇胺以阻断未反应的基团。关于动力学测量，在25℃，以约25μl/min的流速注射在含有0.05％聚山梨酯20(TWEEN 20^TM)表面活性剂(PBST)的PBS中的Fab的两倍连续稀释液(0.78nM至500nM)。使用简单的一对一(1:1)Langmuir结合模型(

Evaluation Software 3.2版)，通过同时拟合缔合与解离感测器图来计算缔合速率(k_on)与解离速率(k_off)。平衡解离常数(K_D)计算为比率k_off/k_on。参加例如Chen等人，J.Mol.Biol.293:865-881(1999)。

在使用BIAcore^TMT200机的另一示例性测定中，例如，具有人IgG1恒定区的抗体被捕获在蛋白A芯片上以达到大约300RU。在一些此类实施例中，纯化抗原的系列稀释物在37℃下以100μL/min的流速注射到具有额外的3mM CaCl₂的HBS-P缓冲液中。使用1:1Langmuir结合模型(例如，BIAcore^TMT200评价软件2.0版)计算缔合速率(ka)和解离速率(kd)。可以将平衡解离常数(K_D)计算为比率kd/ka。

若通过上述表面等离子体共振测定得出缔合速率超过10⁶M^-1s^-1，则可通过使用荧光淬灭技术测定缔合速率，即如在分光计诸如配备止流装置的分光光度计(AvivInstruments)或8000系列SLM-AMINCO^TM分光光度计(ThermoSpectronic)中用搅拌比色杯所测得的，在浓度渐增的抗原存在下，测量在25℃下PBS pH 7.2中的20nM抗抗原抗体(Fab形式)的荧光发射强度(激发＝295nm；发射＝340nm，16nm带通)的增加或减少。

在一种替代方法中，通过放射性标记的抗原结合测定法(RIA)测量K_D。在一些方面，采用目的抗体的Fab形式及其抗原进行RIA。例如，通过在一系列未标记的抗原滴定存在下用最小浓度(¹²⁵I)标记的抗原平衡Fab，然后用抗Fab抗体包被的板捕获结合的抗原，来测量Fab对抗原的溶液结合亲和力(参见，例如，Chen等人，J.Mol.Biol.293:865-881(1999))。为了确定用于测定法的条件，用在50mM碳酸钠(pH 9.6)中的5μg/ml捕获抗Fab抗体(CappelLabs)包被

多孔板(Thermo Scientific)过夜，并且随后在室温(大约23℃)，用在PBS中的2％(w/v)牛血清白蛋白阻断二至五小时。在非吸附板(Nunc#269620)中，将100pM或26pM[¹²⁵I]-抗原与目的Fab的连续稀释液(例如，遵循在Presta等人，CancerRes.57:4593-4599(1997)中抗VEGF抗体(Fab-12)的评定)混合。然后将目的Fab孵育过夜；然而，孵育可以持续更长时间(例如，约65小时)以确保达到平衡。此后，将混合物转移至捕获板以在室温下孵育(例如，一小时)。然后去除溶液并用在PBS中的0.1％聚山梨酯20

洗涤所述板八次。当板已干燥时，添加150μl/孔的闪烁体(MICROSCINT-20^TM；Packard)，并且在TOPCOUNT^TMγ计数器(Packard)上对板计数十分钟。选择给出小于或等于20％最大结合的各Fab的浓度以用于竞争性结合测定中。

2.抗体片段

在某些方面，本文提供的抗体是抗体片段。

在一些方面，抗体片段为Fab’、Fab’-SH或F(ab')₂片段，特别是Fab片段。木瓜蛋白酶消化完整抗体产生两个相同的抗原结合片段，称为“Fab”片段，其各自包含重链可变结构域和轻链可变结构域(分别为VH和VL)以及轻链的恒定结构域(CL)和重链的第一恒定结构域(CH1)。因此，术语“Fab片段”是指包括VL结构域和CL结构域的轻链以及包括VH结构域和CH1结构域的重链片段的抗体片段。“Fab'片段”与Fab片段的不同之处在于Fab'片段在CH1结构域的羧基端添加残基，这些残基包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab'-SH是Fab'片段，其中恒定结构域的半胱氨酸残基带有游离巯基。胃蛋白酶处理产生F(ab')₂片段，该片段具有两个抗原结合位点(两个Fab片段)和Fc区的一部分。关于对包含补救受体结合表位残基并具有增加的体内半衰期的Fab和F(ab')₂片段的讨论，请参见美国专利号5,869,046。

在一些方面，抗体片段为双体抗体、三体抗体或四体抗体。“双体抗体”是具有两个抗原结合位点的抗体片段，其可以是二价或双特异性的。参见，例如，EP 404,097；WO 1993/01161；Hudson等人，Nat.Med.9:129-134(2003)；和Hollinger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448(1993)。三体抗体和四体抗体也在Hudson等人，Nat.Med.9:129-134(2003)中进行了描述。

在另一个方面，抗体片段为单链Fab片段。“单链Fab片段”或“scFab”是由抗体重链可变结构域(VH)、抗体重链恒定结构域1(CH1)、抗体轻链可变结构域(VL)、抗体轻链恒定结构域(CL)和接头组成的多肽，其中抗体结构域和接头在N末端至C末端方向上具有以下顺序中的一种：a)VH-CH1-接头-VL-CL、b)VL-CL-接头-VH-CH1、c)VH-CL-接头-VL-CH1，或d)VL-CH1-接头-VH-CL。特别地，所述接头是至少30个氨基酸，优选地在32个与50个氨基酸之间的多肽。所述单链Fab片段经由CL结构域与CH1结构域之间的天然二硫键而稳定化。此外，这些单链Fab片段可以通过经由***半胱氨酸残基(例如，根据Kabat编号的可变重链中的44位和可变轻链中的100位)生成链间二硫键，而进一步稳定化。

在一些方面，抗体片段为单链可变片段(scFv)。“单链可变片段”或“scFv”是抗体的重链可变结构域(VH)和轻链可变结构域(VL)的融合蛋白，是通过接头连接的。特别地，接头是10个至约25个氨基酸的短多肽，并且通常富含甘氨酸以获得柔性，以及富含丝氨酸或苏氨酸以获得溶解性，并且可以将VH的N-末端与VL的C-末端连接，或反之亦然。尽管去除了恒定区并且引入了接头，但该蛋白质仍保留了原始抗体的特异性。关于scFv片段的综述，参见例如Plückthun，载于The Pharmacology of Monoclonal Antibodies，第113卷，Rosenburg和Moore编辑(Springer-Verlag,New York)，第269至第315页(1994)；还可参见WO 93/16185；以及美国专利号5,571,894和5,587,458。

在一些方面，抗体片段为单结构域抗体。“单结构域抗体”是包含抗体的全部或部分重链可变结构域或者抗体的全部或部分轻链可变结构域的抗体片段。在某些方面，单结构域抗体是人单结构域抗体(Domantis,Inc.,Waltham,MA；参见例如美国专利号6,248,516B1)。

抗体片段可以通过各种技术制备，包括但不限于完整抗体的蛋白水解消化以及由重组宿主细胞(例如大肠杆菌)重组产生，如本文所述。

3.嵌合抗体和人源化抗体

在某些方面，本文提供的抗体是嵌合抗体。某些嵌合抗体描述于，例如，美国专利号4,816,567和Morrison等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851-6855(1984)中。在一个实例中，嵌合抗体包含非人可变区(例如，源自小鼠、大鼠、仓鼠、兔或非人灵长类动物(诸如猴)的可变区)和人恒定区。在另一个实例中，嵌合抗体为其中类别或亚类已经与亲本抗体的类别或亚类改变的“类别转换”抗体。嵌合抗体包括其抗原结合片段。

在某些方面，嵌合抗体是人源化抗体。通常，将非人抗体人源化以减少对人的免疫原性，同时保留亲本非人抗体的特异性和亲和力。通常，人源化抗体包含一个或多个可变结构域，其中CDR(或其部分)源自非人抗体，并且FR(或其部分)源自人抗体序列。人源化抗体任选地还将包含人恒定区的至少一部分。在一些方面，人源化抗体中的一些FR残基被来自非人抗体(例如，CDR残基所来源于的抗体)的相应残基取代，例如以恢复或改善抗体特异性或亲和力。

人源化抗体及其制备方法在例如Almagro和Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008)中综述，并且进一步描述于例如Riechmann等人，Nature332:323-329(1988)；Queen等人，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 86:10029-10033(1989)；美国专利号5,821,337、7,527,791、6,982,321和7,087,409；Kashmiri等人，Methods 36:25-34(2005)(描述了特异性决定区(SDR)移植)；Padlan,Mol.Immunol.28:489-498(1991)(描述了“表面再塑”)；Dall’Acqua等人，Methods36:43-60(2005)(描述了“FR改组”)；以及Osbourn等人，Methods 36:61-68(2005)和Klimka等人，Br.J.Cancer,83:252-260(2000)(描述了用于FR改组的“指导选择”方法)中。

可用于人源化的人框架区包括但不限于：使用“最佳拟合”方法选择的框架区(参见，例如，Sims等人J.Immunol.151:2296(1993))；来源于轻链或重链可变区的特定亚组的人抗体的共有序列的框架区(参见，例如，Carter等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:4285(1992)；以及Presta等人J.Immunol.,151:2623(1993))；人成熟(体细胞突变)框架区或人种系框架区(参见，例如，Almagro和Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008))；以及来源于筛选FR文库的框架区(参见，例如，Baca等人,J.Biol.Chem.272:10678-10684(1997)和Rosok等人,J.Biol.Chem.271:22611-22618(1996))。

4.人抗体

在某些方面，本文提供的抗体是人抗体。可以使用本领域已知的各种技术来产生人抗体。人抗体一般描述于van Dijk和van de Winkel,Curr Opin Pharmacol.5:368-74(2001)和Lonberg,Curr Opin Immunol.20:450-459(2008)中。

可以通过以下方式来制备人抗体：将免疫原施用于转基因动物，所述转基因动物已被修饰以响应于抗原激发而产生具有人可变区的完整人抗体或完整抗体。此类动物通常含有全部或部分人免疫球蛋白基因座，所述全部或部分人免疫球蛋白基因座替代内源性免疫球蛋白基因座，或者在动物的染色体外存在或随机整合至动物的染色体中。在此类转基因小鼠中，内源性免疫球蛋白基因座通常已被灭活。关于从转基因动物获得人抗体的方法的综述，参见Lonberg,Nat.Biotech.23:1117-1125(2005)。还参见例如描述XENOMOUSE^TM技术的美国专利号6,075,181和6,150,584；描述

技术的美国专利号5,770,429；描述K-M/>

技术的美国专利号7,041,870，以及描述/>

技术的美国专利申请公开号US 2007/0061900)。可以进一步修饰来自由此类动物产生的完整抗体的人可变区，例如通过与不同的人恒定区组合。

人抗体也可以通过基于杂交瘤的方法制备。已经描述了用于产生人单克隆抗体的人骨髓瘤和小鼠-人杂交骨髓瘤细胞系。(参见例如Kozbor J.Immunol.,133:3001(1984)；Brodeur等人，Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications，第51-63页(Marcel Dekker,Inc.,New York,1987)；以及Boerner等人，J.Immunol.,147:86(1991)。)经由人B细胞杂交瘤技术产生的人抗体也如Li等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,103:3557-3562(2006)所述。另外的方法包括例如在美国专利号7,189,826(描述了从杂交瘤细胞系产生单克隆人IgM抗体)和Ni,Xiandai Mianyixue,26(4):265-268(2006)(描述了人-人杂交瘤)中描述的那些方法。人类杂交瘤技术(Trioma技术)也描述于Vollmers和Brandlein,Histology and Histopathology,20(3):927-937(2005)和Vollmers和Brandlein,Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology,27(3):185-91(2005)中。

人抗体还可以通过分离选自人源噬菌体展示文库的可变结构域序列产生。然后可以将此类可变结构域序列与预期的人恒定结构域结合。从抗体文库中选择人抗体的技术描述如下。

5.源自文库的抗体

在某些方面，本文提供的抗体衍生自文库。可以通过筛选组合文库中具有一个或多个所需活性的抗体来分离本发明的抗体。用于筛选组合文库的方法综述于例如Lerner等人，Nature Reviews 16:498-508(2016)中。例如，本领域已知多种方法用于产生噬菌体展示文库并筛选此类文库以获得具有所需结合特征的抗体。此类方法综述于例如Frenzel等人，mAbs 8:1177-1194(2016)；Bazan等人，Human Vaccines and Immunotherapeutics 8:1817-1828(2012)和Zhao等人，Critical Reviews in Biotechnology 36:276-289(2016)中，以及Hoogenboom等人，Methods in Molecular Biology 178:1-37(O’Brien等人编辑，Human Press,Totowa,NJ,2001)中和Marks和Bradbury,Methods in Molecular Biology248:161-175(Lo编辑，Human Press,Totowa,NJ,2003)中。

在某些噬菌体展示方法中，将VH和VL基因的所有组成成分通过聚合酶链式反应(PCR)单独克隆，并在噬菌体文库中随机重组，然后可以从所述噬菌体文库中筛选抗原结合噬菌体，如在Winter等人，Annual Review of Immunology12:433-455(1994)中所描述的。噬菌体通常将抗体片段展示为单链Fv(scFv)片段或Fab片段。来自经免疫的来源的文库提供针对免疫原的高亲和力抗体，而无需构建杂交瘤。可替代地，可以克隆所有天然组成成分(例如，来自人的所有天然组成成分)以提供针对广泛的非自身抗原和自身抗原的抗体的单一来源，而无需任何免疫，如由Griffiths等人在EMBO Journal 12:725-734(1993)中所描述的。此外，还通过以下方式来合成天然文库：克隆来自干细胞的未重排的V基因区段；以及使用含有随机序列的PCR引物来编码高度可变的CDR3区并完成体外重排，如由Hoogenboom和Winter在Journal of Molecular Biology227:381-388(1992)中所描述的。描述人抗体噬菌体文库的专利出版物包括，例如：美国专利号5,750,373；7,985,840；7,785,903和8,679,490以及美国专利公开号2005/0079574、2007/0117126、2007/0237764和2007/0292936。

本领域已知用于筛选具有一种或多种所需活性的抗体的组合文库的方法的其他实例包括核糖体和mRNA展示，以及对细菌、哺乳动物细胞、昆虫细胞或酵母细胞进行抗体展示和选择的方法。用于酵母表面展示的方法综述于例如Scholler等人，Methods inMolecular Biology 503:135-56(2012)和Cherf等人，Methods in Molecular biology1319:155-175(2015)以及Zhao等人，Methods in Molecular Biology 889:73-84(2012)中。用于核糖体展示的方法描述于例如He等人，Nucleic Acids Research 25:5132-5134(1997)和Hanes等人，PNAS 94:4937-4942(1997)中。

在本文中从人抗体文库分离出的抗体或抗体片段被认为是人抗体或人抗体片段。

6.多特异性抗体

在某些方面，本文提供的抗体是多特异性抗体，特别是双特异性抗体。“多特异性抗体”是对至少两个不同位点(即，不同抗原上的不同表位或相同抗原上的不同表位)具有结合特异性的单克隆抗体。在某些方面，多特异性抗体具有三种或更多种结合特异性。在某些方面，结合特异性中的一种是针对Notch2的，并且另一种特异性是针对任何其他抗原的。在某些方面，双特异性抗体可与Notch2的两个(或更多个)不同的表位结合。多特异性(例如双特异性)抗体也可用于将细胞毒剂或细胞定位于表达Notch2的细胞。可以将多特异性抗体制备为全长抗体或抗体片段。

用于制备多特异性抗体的技术包括但不限于具有不同特异性的两种免疫球蛋白重链-轻链对的重组共表达(参见Milstein和Cuello，Nature 305:537(1983))及“杵臼结构”工程化(参见例如，美国专利5,731,168，以及Atwell等人，J.Mol.Biol.270:26(1997))。多特异性抗体还可以通过以下方式来制备：工程化用于制备抗体Fc-异二聚体分子的静电操纵效应(参见例如，WO 2009/089004)；使两个或更多个抗体或片段交联(参见例如，美国专利号4,676,980，以及Brennan等人，Science,229:81(1985))；使用亮氨酸拉链来产生双特异性抗体(参见例如，Kostelny等人，J.Immunol.,148(5):1547-1553(1992)和WO 2011/034605)；使用用于避免轻链错配问题的常用轻链技术(参见例如，WO 98/50431)；使用用于制备双特异性抗体片段的“双体抗体”技术(参见例如Hollinger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-6448(1993))；以及使用单链Fv(sFv)二聚体(参见例如Gruber等人，J.Immunol.,152:5368(1994))；以及如Tutt等人J.Immunol.147:60(1991)中所述制备三特异性抗体。

本文还包括具有三个或更多个抗原结合位点的工程化抗体，包括例如“章鱼抗体”或者DVD-Ig(参见例如，WO 2001/77342和WO 2008/024715)。具有三个或更多个抗原结合位点的多特异性抗体的其他示例可以在WO 2010/115589、WO 2010/112193、WO 2010/136172、WO 2010/145792和WO 2013/026831中找到。双特异性抗体或其抗原结合片段还包括“双重作用FAb”或“DAF”，其包含与Notch2以及另一种不同抗原结合或与Notch2的两个不同表位结合的抗原结合位点(参见例如，US 2008/0069820和WO 2015/095539)。

多特异性抗体也可以以不对称形式提供，其中在具有相同抗原特异性的一个或多个结合臂中有结构域互换，即通过交换VH/VL结构域(参见例如，WO 2009/080252和WO2015/150447)、CH1/CL结构域(参见例如，WO 2009/080253)或完整的Fab臂(参见例如，WO2009/080251、WO 2016/016299，还参见Schaefer等人，PNAS,108(2011)1187-1191，以及Klein等人，MAbs8(2016)1010-20)。在一些方面，多特异性抗体包含交叉Fab片段。术语“交叉Fab片段”或“xFab片段”或“交换型Fab片段”是指这样的Fab片段，其中重链和轻链的可变区或恒定区被交换。交叉Fab片段包含由轻链可变区(VL)和重链恒定区1(CH1)组成的多肽链，以及由重链可变区(VH)和轻链恒定区(CL)组成的多肽链。还可以通过将荷电或非荷电的氨基酸突变引入结构域界面以指导正确的Fab配对，以对不对称Fab臂进行工程化。参见例如WO 2016/172485。

多特异性抗体的各种其他分子形式是在本领域中已知的并且包括在本文中(参见例如Spiess等人，Mol Immunol 67(2015)95-106)。

本文还包括的一种特定类型的多特异性抗体是这样的双特异性抗体，该双特异性抗体设计用于同时结合靶细胞(例如，肿瘤细胞)上的表面抗原和T细胞受体(TCR)复合物的活化不变组分(诸如CD3)，以用于再靶向T细胞以杀伤靶细胞。因此，在某些方面，本文提供的抗体为多特异性抗体，特别是双特异性抗体，其中结合特异性之一针对Notch2而另一个针对CD3。

可用于此目的双特异性抗体形式的实例包括但不限于：所谓“BiTE”(双特异性T细胞募召剂)分子，其中两个scFv分子通过柔性接头融合(参见例如WO 2004/106381；WO2005/061547；WO 2007/042261；WO 2008/119567；Nagorsen和

Exp Cell Res317，1255-1260(2011))；双体抗体(Holliger等人，Prot Eng 9，299-305(1996))及其衍生物，诸如串联双体抗体(“TandAb”；Kipriyanov等人，J Mol Biol 293，41-56(1999))；“DART”(双亲和性重新靶向)分子，其基于双体抗体形式，但具有C末端二硫键以实现额外的稳定化(Johnson等人，J Mol Biol 399，436-449(2010))；以及所谓的三功能抗体，其为完整的杂交小鼠/大鼠IgG分子(如Seimetz等人所综述：Cancer Treat Rev 36，458-467(2010))。本文所包含的特定的T细胞双特异性抗体形式描述于以下文献中：WO 2013/026833；WO 2013/026839；WO 2016/020309；Bacac等人，Oncoimmunology 5(8)(2016)e1203498。/>

7.抗体变体

在某些方面中，设想了本文提供的抗体的氨基酸序列变体。例如，可能期望改变抗体的结合亲和力和/或其他生物学特性。抗体的氨基酸序列变体可以通过向编码抗体的核苷酸序列中引入适当的修饰或通过肽合成来制备。此类修饰包括例如抗体氨基酸序列内残基的缺失、和/或***和/或取代。可以进行缺失、***和取代的任何组合以实现最终构建体，前提条件是最终构建体具有所需特征，例如抗原结合。

a)取代、***和删除性变体

在某些方面，提供了具有一个或多个氨基酸取代的抗体变体。用于取代诱变的感兴趣的位点包括CDR和FR。保守取代在表1中的“优选取代”标题下示出。更多实质性改变提供于表1的“示例性取代”标题下，并且在下文参考氨基酸侧链类别进行了进一步描述。可以将氨基酸取代引入目标抗体中，并对产物进行所需活性(例如保留/改善的抗原结合、降低的免疫原性，或改善的ADCC或CDC)筛选。

表1

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可根据共同的侧链特性将氨基酸分组：

(1)疏水性：正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；

(2)中性亲水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；

(3)酸性：Asp、Glu；

(4)碱性：His、Lys、Arg；

(5)影响链取向的残基：Gly，Pro；

(6)芳族：Trp、Tyr、Phe。

非保守性取代将需要用这些类别中的一个的成员交换另一类别的成员。

一种类型的取代变体涉及取代亲本抗体(例如，人源化抗体或人抗体)的一个或多个高可变区残基。通常，相对于亲本抗体，选为用于进一步研究的一个或多个所得变体将在某些生物学特性方面(例如，亲和力增加、免疫原性降低)有改变(例如，改善)和/或将基本上保留亲本抗体的某些生物学特性。示例性取代变体是亲和力成熟抗体，其可例如使用诸如本文所述的那些基于噬菌体展示的亲和力成熟技术方便地生成。简要地说，对一个或多个CDR残基进行突变并且将变体抗体展示在噬菌体上并针对特定生物学活性(例如结合亲和力)进行筛选。

例如，可在CDR中作出改变(例如，取代)，以改善抗体亲和力。此类改变可发生于CDR“热点”中，即由体细胞成熟过程中发生高频突变的密码子编码的残基(参见例如，Chowdhury，Methods Mol.Biol.207:179-196(2008))和/或与抗原接触的残基(检测所得变体VH或VL的结合亲和力。通过构建并自二级文库重新选择而实现的亲和力成熟已被例如Hoogenboom等人在Methods in Molecular Biology 178:1-37(O'Brien等人编，HumanPress,Totowa,NJ,(2001))中进行描述。在亲和力成熟的某些方面，通过多种方法(例如，易错PCR、链改组或寡核苷酸定向诱变)的任何一种将多样性引入选择用于成熟的可变基因中。然后创建一个二级文库。随后对该文库进行筛选以鉴别具有所需亲和力的任何抗体变体。引入多样性的另一种方法涉及CDR定向方法，其中将若干CDR残基(例如，每次4至6个残基)随机化。参与抗原结合的CDR残基可例如使用丙氨酸扫描突变或建模来特异性地鉴别。具体而言，常常靶向CDR-H3和CDR-L3。

在某些方面，取代、***或缺失可发生在一个或多个CDR内，只要此类改变基本上不降低抗原结合分子的抗原结合能力即可。例如，可在CDR中进行基本上不降低结合亲和力的保守性改变(例如，如本文提供的保守性取代)。这样的改变可以例如在CDR中的抗原接触残基的外部。在上文提供的某些变体VH和VL序列中，每个CDR要么保持不变，要么包含不超过一个、两个或三个氨基酸取代。

可用于鉴别可被靶向诱变的抗体残基或区域的方法称作“丙氨酸扫描诱变”，如Cunningham和Wells(1989)Science，244:1081-1085所述。在此方法中，鉴别残基或一组靶残基(例如，带电残基，诸如arg、asp、his、lys和glu)并用中性或带负电的氨基酸(例如，丙氨酸或多丙氨酸)替换以确定抗体与抗原的相互作用是否受到影响。可在对初始取代展示功能敏感性的氨基酸位置引入其他取代。可替代地或另外地，可以使用抗原-抗体复合物的晶体结构鉴别抗体与抗原之间的接触点。可靶向或消除作为取代的候选的此类接触残基和相邻残基。可筛选变体以确定它们是否具备期望的特性。

氨基酸序列***包括长度范围为一个残基至含有一百个或更多个残基的多肽的氨基和/或羧基末端融合，以及一个或多个氨基酸残基的序列内***。末端***的实例包括具有N末端甲硫氨酰残基的抗体。抗体分子的其他***变体包括将抗体的N末端或C末端与增加抗体的血清半衰期的酶(例如，对于ADEPT(抗体定向酶前药治疗))或多肽融合。

b)糖基化变体

在某些方面，改变本文提供的抗体以增加或降低抗体糖基化的程度。糖基化位点向抗体的添加或缺失可通过改变氨基酸序列以产生或去除一个或多个糖基化位点而方便地实现。

当抗体包含Fc区时，与其相连的寡糖可以被改变。由哺乳动物细胞产生的天然抗体通常包含支链的、双触角寡糖，该双触角寡糖通常通过N-键结连接至Fc区的CH2结构域的Asn297。参见，例如，Wright等人TIBTECH 15:26-32(1997)。寡糖可包括各种碳水化合物，例如，甘露糖、N-乙酰基葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖和唾液酸，以及附接于双触角寡糖结构的“主干”中的GlcNAc的岩藻糖。在一些方面中，可对本发明的抗体中的寡糖进行修饰，以产生具有某些改善的特性的抗体变体。

在一些方面，提供了具有非岩藻糖基化的寡糖的抗体变体，即缺少(直接或间接地)连接在Fc区的岩藻糖的寡糖结构。这样的非岩藻糖基化的寡糖(也称为“去岩藻糖基化”的寡糖)特别是N-连接的寡糖，其缺少在双触角寡糖结构的茎中连接第一GlcNAc的岩藻糖残基。在一些方面，提供了与天然或亲本抗体相比在Fc区中具有增加比例的非岩藻糖基化寡糖的抗体变体。例如，非岩藻糖基化寡糖的比例可以为至少约20％、至少约40％、至少约60％、至少约80％或甚至约100％(即不存在岩藻糖基化寡糖)。非岩藻糖基化寡糖的百分比，如例如WO 2006/082515中所述，如通过MALDI-TOF质谱法测量的，是缺少岩藻糖残基的寡糖的(平均)量相对于与Asn 297连接的所有寡糖(例如复杂、杂合和高甘露糖结构)之和。Asn297是指位于Fc区中约297位的天冬酰胺残基(Fc区残基的EU编号)；然而，由于抗体中的微小序列变化，Asn297也可以位于297位上游或下游大约±3个氨基酸，即在294位和300位之间。在Fc区中具有非岩藻糖基化寡糖比例增加的此类抗体可具有改善的FcγRIIIa受体结合和/或改善的效应子功能，特别是改善的ADCC功能。参见例如US 2003/0157108和US2004/0093621。

能够产生岩藻糖基化减少的抗体的细胞系的实例包括缺乏蛋白质岩藻糖基化的Lec13 CHO细胞(Ripka等人.Arch.Biochem.Biophys.249:533-545(1986)；US 2003/0157108；和WO 2004/056312，尤其是在实例11中)，以及敲除细胞系，例如α-1,6-岩藻糖基转移酶基因，FUT8，敲除CHO细胞(参见，例如，Yamane-Ohnuki等人.Biotech.Bioeng.87:614-622(2004)；Kanda,Y.等人,Biotechnol.Bioeng.,94(4):680-688(2006)；和WO 2003/085107)，或具有降低或取消的GDP-岩藻糖合成或转运蛋白活性的细胞(参见，例如，US2004259150、US2005031613、US2004132140、US2004110282)。

在另一方面，抗体变体提供了二等分的寡糖，例如，其中连接至抗体的Fc区的双触角寡糖被GlcNAc二等分。如上所述，这样的抗体变体可以具有减少的岩藻糖基化和/或改善的ADCC功能。此类抗体变体的实例描述于例如Umana等人,Nat Biotechnol 17,176-180(1999)；Ferrara等人,Biotechn Bioeng 93,851-861(2006)；WO 99/54342；WO 2004/065540,WO 2003/011878。

还提供了在连接于Fc区的寡糖中具有至少一个半乳糖残基的抗体变体。这样的抗体变体可以具有改善的CDC功能。此类抗体变体描述于例如WO 1997/30087、WO 1998/58964和WO 1999/22764中。

c)Fc区变体

在某些方面，一个或多个氨基酸修饰可引入本文提供的抗体的Fc区中，从而生成Fc区变体。Fc区变体可包含人Fc区序列(例如人IgG₁、IgG₂、IgG₃或IgG₄ Fc区)，其在一个或多个氨基酸位置上包含氨基酸修饰(例如取代)。

在某些方面，本发明考虑具有一些但不是全部效应子功能的抗体变体，这使其成为其中抗体的体内半衰期很重要而某些效应子功能(例如补体依赖性细胞毒性(CDC)和抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC))不必要或有害的应用的理想候选者。可以进行体外和/或体内细胞毒性测定，以确认CDC和/或ADCC活性的降低/耗尽。例如，可以进行Fc受体(FcR)结合测定以确保抗体缺乏FcγR结合(因此可能缺乏ADCC活性)，但是保留FcRn结合能力。介导ADCC的主要细胞NK细胞仅表达FcγRIII，而单核细胞表达FcγRI、FcγRII和FcγRIII。造血细胞上的FcR表达总结在Ravetch和Kinet,Annu.Rev.Immunol.9:457-492(1991)的第464页的表3中。用于评估目标分子的ADCC活性的体外测定的非限制性实例描述于美国专利号5,500,362(参见例如Hellstrom,I.等人Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 83:7059-7063(1986))和Hellstrom,I等人，Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 82:1499-1502(1985)；5,821,337(参见Bruggemann,M.等人，J.Exp.Med.166:1351-1361(1987))。可替代地，可使用非放射性测定方法(参见例如，用于流式细胞术的ACTI^TM非放射性细胞毒性测定(CellTechnology,Inc.Mountain View,CA)；以及CytoTox

非放射性细胞毒性测定(Promega,Madison,WI)。用于此类测定的有用效应物细胞包括外周血单核细胞(PBMC)和自然杀伤(NK)细胞。可替代地或另外地，可例如在诸如在Clynes等人，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 95:652-656(1998)中公开的动物模型中体内评定感兴趣的分子的ADCC活性。也可以进行C1q结合测定以确认抗体不能结合C1q，因此缺乏CDC活性。参见例如WO 2006/029879和WO 2005/100402中的C1q和C3c结合ELISA。为了评估补体活化，可以执行CDC测定(参见例如Gazzano-Santoro等人，J.Immunol.Methods 202:163(1996)；Cragg,M.S.等人，Blood 101:1045-1052(2003)；以及Cragg,M.S.和M.J.Glennie，Blood 103:2738-2743(2004))。FcRn结合和体内清除率/半衰期测定也可以使用本领域已知的方法执行(参见例如Petkova,S.B.等人，Int’l.Immunol.18(12):1759-1769(2006)；WO 2013/120929 Al)。

具有降低的效应子功能的抗体包括具有Fc区残基238、265、269、270、297、327和329中一个或多个的取代的那些(美国专利号6,737,056)。此类Fc突变体包括在第265、269、270、297和327位氨基酸位置中的两个或多个处具有取代的Fc突变体，包括所谓的“DANA”Fc突变体，其残基265和297被取代为丙氨酸(美国专利号7,332,581)。

描述了具有改善的或降低的与FcR的结合的某些抗体变体。(参见例如美国专利号6,737,056；WO 2004/056312；以及Shields等人，J.Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001)。)

在某些方面，抗体变体包含具有一个或多个改善ADCC的氨基酸取代的Fc区，例如，在Fc区的298、333和/或334位的取代(残基的EU编号)。

在某些方面，抗体变体包含具有一个或多个减少FcγR结合的氨基酸取代的Fc区，例如Fc区的234位和235位的取代(残基的EU编号)。在一些方面，取代为L234A和L235A(LALA)。在某些方面，抗体变体进一步包含在衍生自人IgG₁ Fc区的Fc区中的D265A和/或P329G。在一些方面，在衍生自人IgG₁ Fc区的Fc区中，取代为L234A、L235A和P329G(LALA-PG)。(参见例如WO 2012/130831)。在一些方面，在衍生自人IgG₁ Fc区的Fc区中，取代为L234A、L235A和D265A(LALA-DA)。

在一些方面，在Fc区中进行导致改变(即，改善或减少)C1q结合和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)的改变，例如，如美国专利号6,194,551、WO 99/51642以及Idusogie等人.J.Immunol.164:4178-4184(2000)中所描述。

具有延长的半衰期和改善的新生儿Fc受体(FcRn)结合、负责将母体IgG转移至胎儿(Guyer,R.L.等人，J.Immunol.117:587(1976)，以及Kim,J.K.等人,J.Immunol.24:249(1994))的抗体描述于US 2005/0014934(Hinton等人)中。那些抗体包含这样的Fc区，所述Fc区中具有改善Fc区与FcRn的结合的一个或多个取代。此类Fc变体包括在以下Fc区残基中的一处或多处具有取代的Fc变体：238、252、254、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424或434，例如对Fc区残基434的取代(参见，例如美国专利号7,371,826；Dall'Acqua,W.F.等人.J.Biol.Chem.281(2006)23514-23524)。

通过定点诱变已经鉴定了对小鼠Fc-小鼠FcRn相互作用至关重要的Fc区残基(参见例如Dall’Acqua,W.F.等人.J.Immunol 169(2002)5171-5180)。相互作用涉及残基I253、H310、H433、N434和H435(EU索引编号)(Medesan,C.等人,Eur.J.Immunol.26(1996)2533；Firan,M.等人,Int.Immunol.13(2001)993；Kim,J.K.等人,Eur.J.Immunol.24(1994)542)。发现残基I253、H310和H435对于人Fc与鼠FcRn的相互作用至关重要(Kim,J.K.等人，Eur.J.Immunol.29(1999)2819)。对人Fc-人FcRn复合物的研究已表明，残基I253、S254、H435和Y436对于该相互作用至关重要(Firan,M.等人，Int.Immunol.13(2001)993；Shields,R.L.等人，J.Biol.Chem.276(2001)6591-6604)。在Yeung,Y.A.等人(J.Immunol.182(2009)7667-7671)中已经报道并且检查了残基248至259和301至317和376至382和424至437的各种突变体。

在某些方面，抗体变体包含具有一个或多个减少FcRn结合的氨基酸取代的Fc区，例如，在Fc区的253、和/或310和/或435位的取代(残基的EU编号)。在某些方面，抗体变体包含在位置253、310和435位具有氨基酸取代的Fc区。在一些方面，在衍生自人IgG1 Fc区的Fc区中，取代为I253A、H310A和H435A。参见，例如Grevys,A.等人,J.Immunol.194(2015)5497-5508。

在某些方面，抗体变体包含具有一个或多个减少FcRn结合的氨基酸取代的Fc区，例如，在Fc区的310、和/或433和/或436位的取代(残基的EU编号)。在某些方面，抗体变体包含在位置310、433和436位具有氨基酸取代的Fc区。在一些方面，在衍生自人IgG1 Fc区的Fc区中，取代为H310A、H433A和Y436A。(参见，例如，WO 2014/177460 Al)。

在某些方面，抗体变体包含具有一个或多个增加FcRn结合的氨基酸取代的Fc区，例如，在Fc区的252、和/或254和/或256位的取代(残基的EU编号)。在某些方面，抗体变体包含在位置252、254和256位具有氨基酸取代的Fc区。在一些方面，在衍生自人IgG₁ Fc区的Fc区中，取代为M252Y、S254T和T256E。有关Fc区变体的其他实例，另外参见：Duncan和Winter，Nature 322:738-40(1988)；美国专利号5,648,260；美国专利号5,624,821；以及WO 94/29351。

如本文报道的抗体的重链的C末端可以是以氨基酸残基PGK结束的完整C末端。重链的C末端可以是缩短的C末端，在所述缩短的C末端中已经去除了一个或两个C末端氨基酸残基。在一个优选的方面，重链的C末端是以PG结束的缩短的C末端。在本文报道的所有方面中的一些方面，如本文所指定的包含包括C末端CH3结构域的重链的抗体，包含C末端甘氨酸-赖氨酸二肽(G446和K447，氨基酸位置的EU索引编号)。在本文报道的所有方面中的一些方面，如本文所指定的包含包括C末端CH3结构域的重链的抗体，包含C末端甘氨酸残基(G446，氨基酸位置的EU索引编号)。

d)半胱氨酸工程化改造的抗体变体

在某些方面，可能需要产生半胱氨酸工程化改造的抗体，例如THIOMAB^TM抗体，其中抗体的一个或多个残基被半胱氨酸残基取代。在特定实施例中，取代的残基存在于抗体的可接近位点。如本文进一步描述的，通过用半胱氨酸取代那些残基，从而将反应性硫醇基团定位于抗体的可接近位点，并且可用于将抗体与其他部分(诸如药物部分或接头-药物部分)缀合，以产生免疫缀合物。半胱氨酸工程化改造的抗体可以如例如在美国专利号7,521,541、8,30,930、7,855,275、9,000,130或WO 2016040856中所述产生。

8.免疫缀合物

本发明还提供了免疫缀合物，其包含本文的抗Notch2抗体，该抗体缀合(化学键合)至一种或多种治疗剂，诸如细胞毒性剂、化学治疗剂、药物、生长抑制剂、毒素(例如，蛋白毒素，细菌、真菌、植物或动物来源的酶活性毒素或其片段)或放射性同位素。

在一些方面，免疫缀合物为抗体-药物缀合物(ADC)，其中抗体缀合至上述一种或多种治疗剂。通常使用接头将抗体连接至一种或多种治疗剂。Pharmacol Review 68:3-19(2016)中列出了ADC技术的概述，其包括治疗剂、药物和接头的实例。

在一些方面，免疫缀合物包括与酶活性毒素或其片段缀合的本文所述的抗体，所述酶活性毒素或其片段包括但不限于白喉A链、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素A链(来自铜绿假单胞菌)、蓖麻毒蛋白A链、相思豆毒蛋白A链、蒴莲根毒素A链、α-次黄嘌呤、油桐蛋白、石竹蛋白(dianthin protein)、美洲商陆蛋白(Phytolaca americana protein)(PAPI、PAPII和PAP-S)、苦瓜抑制剂、姜黄素、巴豆毒素、肥皂草抑制剂、明胶、丝林霉素(mitogellin)、局限曲霉素、酚霉素、依诺霉素和单端孢菌素。

在一些方面，免疫缀合物包括与放射性原子缀合以形成放射性缀合物的本文所述的抗体。多种放射性同位素可用于生产放射性缀合物。实例包括At²¹¹、I¹³¹、I¹²⁵、Y⁹⁰、Re¹⁸⁶、Re¹⁸⁸、Sm¹⁵³、Bi²¹²、P³²、Pb²¹²和Lu的放射性同位素。当放射性缀合物用于检测时，它可能包含用于闪烁显像研究的放射性原子，例如，tc99m或I123，或用于核磁共振(NMR)成像(也称为磁共振成像，mri)的自旋标记物，诸如碘-123、碘-131、铟-111、氟-19、碳-13、氮-15、氧-17、钆、锰或铁。

可以使用多种双功能蛋白偶联剂，诸如N-琥珀酰亚氨基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)、琥珀酰亚氨基-4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯(SMCC)、亚氨基硫杂环戊烷(IT)、亚氨基酯的双官能衍生物(诸如己二酸二甲酯盐酸盐)、活性酯(诸如辛二酸二琥珀酰亚胺基酯)、醛(诸如戊二醛)、双叠氮基化合物(诸如双(对叠氮基苯甲酰基)己二胺)、双重氮衍生物(诸如双-(对重氮苯甲酰基)-乙二胺)、二异氰酸酯(诸如甲苯2,6-二异氰酸酯)和双活性氟化合物(诸如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)制备抗体和细胞毒剂的缀合物。例如，可以如Vitetta等人，Science 238:1098(1987)中所述制备蓖麻毒蛋白免疫毒素。碳-14标记的1-异硫氰基苄基-3-甲基二亚乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)为一种示例性螯合剂，用于将放射性核苷酸缀合至抗体。参见WO 94/11026。接头可以为促进细胞中细胞毒性药物释放的“可切割接头”。例如，可以使用对酸不稳定的接头、肽酶敏感的接头、对光不稳定的接头、二甲基接头或含二硫键的接头(Chari等人，Cancer Res.52:127-131(1992)；美国专利号5,208,020)。

本文的免疫缀合物或ADC明确考虑但不限于用交联剂制备的此类缀合物，包括但不限于市售的(例如，来自Pierce Biotechnology,Inc.,Rockford,IL.,U.S.A)BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、磺基-EMCS、磺基-GMBS、磺基-KMUS、磺基-MBS、磺基-SIAB、磺基-SMCC、磺基-SMPB和SVSB(琥珀酰亚氨基-(4-乙烯基砜)苯甲酸酯)。

B.重组方法和组合物

可以使用重组方法和组合物来产生抗体，例如，如在US 4,816,567中所述。对于这些方法，提供了编码抗体的一种或多种分离的核酸。

在天然抗体或天然抗体片段的情况下，需要两种核酸，一种用于轻链或其片段，一种用于重链或其片段。此类核酸编码构成抗体的VL的氨基酸序列和/或构成抗体的VH的氨基酸序列(例如抗体的轻链和/或重链)。这些核酸可以在相同的表达载体上或不同的表达载体上。

在具有异源二聚重链的某些双特异性抗体的情况下，需要四种核酸，一种用于第一轻链，一种用于包含第一异单体(heteromonomeric)Fc区多肽的第一重链，一种用于第二轻链，并且一种用于包含第二异单体Fc区多肽的第二重链。四种核酸可包含在一种或多种核酸分子或表达载体中。此类核酸编码构成抗体的第一VL的氨基酸序列和/或构成抗体的包含第一异单体Fc区的第一VH的氨基酸序列和/或构成抗体的第二VL的氨基酸序列和/或构成抗体的包含第二异单体Fc区的第二VH的氨基酸序列(例如抗体的第一轻链和/或第二轻链和/或第一重链和/或第二重链)。这些核酸可以在相同的表达载体上或在不同的表达载体上，通常这些核酸位于两个或三个表达载体上，即一个载体可以包含这些核酸中的多于一种。这些双特异性抗体的示例是CrossMab(参见例如Schaefer,W.等人，PNAS,108(2011)11187-1191)。例如，该异单体重链中的一条包含所谓的“杵突变(knob mutation)”(T366W，以及任选地S354C或Y349C中的一者)，并且该异单体重链中的另一条包含所谓的“臼突变(hole mutation)”(T366S、L368A和Y407V，以及任选地Y349C或S354C)(参见例如Carter，P.等人，Immunotechnol。2(1996)73)，根据EU索引编号。

在一些方面，提供了编码如在本文所报道的方法中使用的抗体的分离的核酸。

在一些方面，提供了一种制备抗Notch2抗体的方法，其中该方法包括在适于表达抗体的条件下培养包括如上提供的编码抗体的核酸的宿主细胞，以及任选地从宿主细胞(或宿主细胞培养基)中回收抗体。

对于抗Notch2抗体的重组生产，将编码抗体的核酸(例如，如上所述)分离并***至一个或多个载体中以用于在宿主细胞中进一步克隆和/或表达。可以使用常规程序来容易地对此类核酸进行分离和测序(例如，通过使用能够与编码抗体的重链和轻链的基因特异性结合的寡核苷酸探针)，或通过重组方法产生或通过化学合成获得此类核酸。

用于克隆或表达编码抗体的载体的合适宿主细胞包括本文所述的原核或真核细胞。例如，可以在细菌中产生抗体，特别是当不需要糖基化和Fc效应子功能时。关于在细菌中表达抗体片段和多肽，参见例如US 5,648,237、US 5,789,199和US 5,840,523(还参见Charlton,K.A.,在：Methods in Molecular Biology，第248卷，Lo,B.K.C.主编，HumanaPress，Totowa，NJ(2003)，第245-254页中，描述抗体片段在大肠杆菌中的表达。)抗体可在表达后在可溶性级分中从细菌细胞糊中分离，并且可以进一步纯化。

除了原核生物外，诸如丝状真菌或酵母等真核微生物也是用于编码抗体的载体的合适克隆或表达宿主，该真核微生物包括真菌和酵母菌株，其糖基化途径已经“人源化”，从而导致产生具有部分或完全人糖基化模式的抗体。参见Gerngross,T.U.,Nat.Biotech.22(2004)1409-1414；以及Li,H.等人，Nat.Biotech.24(2006)210-215。

用于表达糖基化抗体的合适宿主细胞也来源于多细胞生物体(无脊椎动物和脊椎动物)。无脊椎动物细胞的实例包括植物细胞和昆虫细胞。已经鉴定出了可以与昆虫细胞结合使用，特别是用于转染草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞的许多杆状病毒株。

植物细胞培养物也可用作宿主。参见例如US 5,959,177、US 6,040,498、US 6,420,548、US 7,125,978和US 6,417,429(描述了用于在转基因植物中产生抗体的PLANTIBODIESTM技术)。

脊椎动物细胞也可用作宿主。例如，适于在悬浮液中生长的哺乳动物细胞系可能是有用的。有用的哺乳动物宿主细胞系的其他实例是由SV40转化的猴肾CV1系(COS-7)；人胚肾细胞系(如在例如Graham,F.L.等人，J.Gen Virol.36(1977)59-74中所述的293或293T细胞)；小仓鼠肾细胞(BHK)；小鼠塞尔托利氏细胞(例如在Mather,J.P.,Biol.Reprod.23(1980)243-252中描述的TM4细胞)；猴肾细胞(CV1)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76)；人***细胞(HELA)；犬肾细胞(MDCK)；布法罗大鼠肝细胞(BRL 3A)；人肺细胞(W138)；人肝细胞(Hep G2)；小鼠乳腺肿瘤(MMT 060562)；TRI细胞(如例如在Mather,J.P.等人，AnnalsN.Y.Acad.Sci.383(1982)44-68中所述)；MRC 5细胞；以及FS4细胞。其他有用的哺乳动物宿主细胞系包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，包括DHFR-CHO细胞(Urlaub,G.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77(1980)4216-4220)；以及骨髓瘤细胞系，诸如Y0、NS0和Sp2/0。关于适用于抗体产生的某些哺乳动物宿主细胞系的综述，参见例如Yazaki,P.和Wu,A.M.,Methods in Molecular Biology，第248卷，Lo,B.K.C.(编辑)，Humana Press,Totowa,NJ(2004)，第255-268页。

在一些方面，宿主细胞为真核细胞，例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或淋巴细胞(例如Y0、NS0、Sp20细胞)。

C.测定

可通过本技术领域中已知的各种测定，对本文所提供的抗Notch2抗体的物理/化学特性和/或生物活性来进行鉴别、筛选或表征。

1.结合测定和其他测定

在一些方面，本发明的抗体的抗原结合活性通过例如ELISA、流式细胞术、蛋白质印迹等已知方法进行测试。

在一些方面，竞争测定可用于识别与本文提供的抗体rat.1B2或其人源化形式、rat.3107、rb.2338、rb.2430和/或rb.2621中的一种或多种竞争结合Notch2的抗体。在某些方面，此类竞争抗体结合至由rat.1B2或其人源化形式、rat.3107、rb.2338、rb.2430和/或rb.2621结合的相同表位(例如，线性或构象表位)。用于定位抗体与之结合的表位的详细示例性方法提供于：Morris(1996)，“Epitope Mapping Protocols”，收录于Methods inMolecular Biology第66卷(Humana Press,Totowa,NJ)。

在示例性竞争测定中，将固定的Notch2在包含与Notch2(例如，rat.1B2或其人源化形式、rat.3107、rb.2338、rb.2430和/或rb.2621)结合的第一标记的抗体和正就其与第一抗原竞争与Notch2结合的能力进行测试的第二未标记的抗体的溶液中温育。该第二抗体可存在于杂交瘤上清液中。作为对照，将固定化Notch2在包含第一标记抗体而非包含第二未标记抗体的溶液中温育。在容许第一抗体与Notch2结合的条件下温育之后，去除过量未结合的抗体，并且测量与固定化Notch2缔合的标记的量。若与固定化Notch2缔合的标记的量相对于对照样品在测试样品中基本上减少，则表明第二抗体与第一抗体竞争结合Notch2。参见Harlow和Lane(1988)Antibodies:A Laboratory Manual第14章(Cold SpringHarbor Laboratory,Cold Spring Harbor,NY)。

在示例性表位分箱测定中，表面等离子共振用于确定抗体之间的竞争。例如，使用氨基偶联将第一抗体(例如，rat.1B2或其人源化形式、rat.3107、rb.2338、rb.2430或rb.2621)固定在SPR sensorprism CMD 200M芯片上。注射分析物(例如以50nM)达4分钟，并且随后注射第二抗体达4分钟，例如以10μg/ml。该测定可以在25℃在HBS-T缓冲液(0.01MHEPES pH 7.4、0.15M NaCl、0.05％表面活性剂P20、5mM CaCl₂)的运行缓冲液中进行。分箱数据可以使用Wasatch分箱软件工具Epitope(Carterra USA)进行处理。

2.活性测定

在一些方面，提供了用于识别具有特定生物学活性的抗Notch2抗体的测定。例如，提供了用于识别抑制Jagged1介导的信号传导但使DLL1介导的信号传导基本完好无损的抗Notch2抗体的测定。还提供了用于识别减少在体外和/或体内的分泌细胞的数量的抗Notch2抗体的测定。

用于识别抑制Jagged1介导的信号传导但使DLL1介导的信号传导基本上完好无损的抗Notch2抗体的非限制性示例性测定在实例5中进行描述。一般而言，在一些实施例中，测试抗体被添加至表达人Notch2的人细胞培养物，诸如细胞系U87-MG。随后将培养物与表达Jagged1或DLL1的细胞接触。配体依赖性Notch2活化引起Notch2表达细胞中产生Notch2-ICD易位。温育后，将共培养的细胞固定并透性化，并且随后与抗Notch2 ICD抗体接触。在去除未结合的抗Notch2 ICD抗体后，检测结合的抗体，例如，使用经标记的抗Ig抗体。如果抗Notch2测试抗体抑制Jagged1介导的信号传导但不抑制DLL1介导的信号传导，则与表达DLL1的细胞的共培养物将产生比与表达Jagged1的细胞的共培养物所不会产生的更大的信号。

在一些实施例中，测定抗Notch2抗体以确定其是否减少分泌细胞的数量。选择具有该活性的抗体的非限制性示例性测定在实例8中进行描述。一般而言，在一些实施例中，建立原代人支气管上皮细胞(HBEC)的气液界面(ALI)培养物并培养数周，直到它们完全分化，如当例如纤毛明显跳动时所指示。测试抗Notch2抗体被添加到ALI培养物的下室的培养基中。在约7天后，分析ALI培养物。从培养物的样品提取RNA并针对指示分泌细胞(诸如Muc5b、Muc5ac和Scgb1a1)的基因的表达的进行测定。培养物也可以通过固定培养物并包埋在石蜡中进行组织学分析。切片用针对分泌细胞(诸如Muc5b)和纤毛细胞(诸如微管蛋白)的标记物的抗体进行染色。比较用和不用测试抗Notch2抗体温育的培养物，以识别减少分泌细胞(诸如杯状细胞)的数量的抗Notch2抗体。D.用于诊断和检测的方法和组合物

在某些方面，本文提供的抗Notch2抗体中的任一种可用于检测生物学样品中Notch2的存在。如本文所用的术语“检测”涵盖定量或定性检测。在某些方面，生物学样品包括生物学流体、细胞或组织，诸如痰、分泌细胞、气道上皮细胞、免疫细胞、肺细胞或组织、或支气管细胞或组织。

在一些方面，提供了一种用于诊断或检测方法中的抗Notch2抗体。在另一方面，提供了检测生物样品中的Notch2的存在的方法。在某些方面，该方法包括在允许抗Notch2抗体与Notch2两者结合的条件下使生物学样品与如本文所述的抗Notch2抗体接触，以及检测是否在抗Notch2抗体与Notch2之间形成了复合物。此类方法可以是体外或体内方法。在一些方面，抗Notch2抗体用于选择符合条件用抗Notch2抗体进行治疗的受试者，例如其中Notch2是用于选择患者的生物标志物。

在某些方面，提供了经标记的抗Notch2抗体。标记包括但不限于直接检测的标记或部分(诸如荧光标记、发色标记、电子致密标记、化学发光标记，以及放射性标记)，以及间接(例如通过酶促反应或分子相互作用)检测的部分(诸如酶或配体)。示例性标记包括但不限于放射性同位素³²P、¹⁴C、¹²⁵I、³H和¹³¹I；荧光团，诸如稀土螯合物或荧光素及其衍生物、罗丹明及其衍生物、丹酰、伞形酮；荧光素酶(luceriferase)，例如萤火虫荧光素酶和细菌荧光素酶(美国专利号4,737,456)；虫荧光素、2,3-二氢二氮杂萘二酮、辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、溶菌酶；糖氧化酶，例如葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶；杂环氧化酶，诸如尿酸氧化酶和黄嘌呤氧化酶；与采用过氧化氢来氧化染料前体的酶(诸如HRP、乳过氧化物酶，或微过氧化物酶)偶联；生物素/抗生物素蛋白、纺丝标记、噬菌体标记、稳定自由基，等等。

E.药物组合物

在其他方面，提供了包含本文提供的任一种抗体的药物组合物，其例如用于以下任一种治疗方法中。在一些方面，药物组合物包含本文所提供的抗体中的任一者，以及药用载体。在一些方面，药物组合物包含任一种本文提供的抗体和例如如下所述的至少一种另外的治疗剂。

本文所述的抗Notch2抗体的药物组合物通过将此类具有所需纯度的抗体与一种或多种任选的药用载体混合(Remington's Pharmaceutical Sciences第16版，Osol,A.Ed.(1980))，制成冻干组合物或水溶液的形式。药用载体在所用的剂量和浓度下对受治疗者一般无毒，并且包括但不限于：缓冲剂，诸如组氨酸、磷酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和蛋氨酸；防腐剂(诸如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六甲双铵；苯扎氯铵；苄索氯铵；苯酚、丁醇或苄醇；对羟基苯甲酸烷基酯，诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖，诸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐抗衡离子，诸如钠；金属络合物(例如锌蛋白络合物)；和/或非离子表面活性剂，诸如聚乙二醇(PEG)。本文的示例性药用载体还包括间质药物分散剂，诸如可溶中性活性透明质酸酶糖蛋白(sHASEGP)，例如人可溶性PH-20透明质酸酶糖蛋白，诸如rHuPH20(

Halozyme,Inc.)。某些示例性sHASEGP和使用方法(包括rHuPH20)描述于美国专利公布号2005/0260186和2006/0104968中。在一些方面，将sHASEGP与一种或多种另外的糖胺聚糖酶(诸如软骨素酶)组合。

示例性的冻干抗体组合物描述于美国专利号6,267,958中。水性抗体组合物包括在美国专利号6,171,586和WO 2006/044908中描述的那些，后者中的组合物包含组氨酸-乙酸盐缓冲剂。

本文的药物组合物还可以含有多于一种对于所治疗的特定适应症必需的活性成分，优选地是具有不会对彼此造成不利影响的互补活性的那些活性成分。例如，可期望进一步提供一种可以降低粘液粘弹性的药剂。在一些实施例中，另外的治疗剂选自高渗盐水、甘露醇、阿法链道酶、N-乙酰半胱氨酸、半胱胺和支气管扩张剂。此类活性成分适当地以对预期目的有效的量组合存在。

活性成分可以包埋在例如通过凝聚技术或通过界面聚合而制备的微胶囊(例如分别为羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊)中；包埋在胶体药物递送***(例如，脂质体、白蛋白微球、微乳液、纳米粒子和纳米胶囊)中；或包埋在粗乳液中。此类技术公开于Remington's Pharmaceutical Sciences第16版，Osol,A.编(1980)中。

可以制备用于缓释的药物组合物。缓释制剂的合适实例包括含有抗体的固态疏水聚合物的半透性基质，这些基质是例如膜或微胶囊等成型制品的形式。

用于体内施用的药物组合物通常是无菌的。例如，无菌可以通过无菌过滤膜过滤而容易地实现。

F.治疗方法和施用途径

本文所提供的抗Notch2抗体中的任一种可用于治疗方法中。

在一些方面，提供一种用作药物的抗Notch2抗体。在另外的方面，提供了一种用于治疗粘液阻塞性肺疾病的抗Notch2抗体。在某些方面，提供一种用于治疗方法中的抗Notch2抗体。在某些方面，本发明提供了一种用于治疗患有粘液阻塞性肺疾病的个体的方法中的抗Notch2抗体，该方法包括向该个体施用有效量的抗Notch2抗体。在一个这样的方面，例如如下所描述的，该方法进一步包括向个体施用有效量的至少一种另外的治疗剂(例如，一种、两种、三种、四种、五种或六种另外的治疗剂)。在另外的方面，本发明提供了一种抗Notch2抗体，用于减少个体(诸如个体的肺)中分泌细胞(诸如杯状细胞)的数量。在某些方面，本发明提供了一种抗Notch2抗体，用于减少个体(诸如个体的肺)中分泌细胞(诸如杯状细胞)的数量的方法，该方法包括向该个体施用有效量的抗Notch2抗体以减少个体(诸如个体的肺)中分泌细胞(诸如杯状细胞)的数量。通过减少肺中分泌细胞(诸如杯状细胞)的数量，肺中粘液的产生减少和/或清除率或粘液增加，从而减轻例如粘液阻塞性肺疾病的一种或多种症状。在一些实施例中，利用本文提供的抗Notch2抗体的治疗可改善患有粘液阻塞性肺疾病的受试者的FEV1(一秒用力呼气量)、减少呼吸困难和/或减少咳嗽。

在又一方面，本发明提供抗Notch2抗体在制备或制造药物中的用途。在一些方面，药物用于治疗粘液阻塞性肺疾病。在另一方面，药物用于治疗粘液阻塞性肺疾病的方法，该方法包括向患有粘液阻塞性肺疾病的个体施用有效量的药物。在一个这样的方面，例如如下所描述的，该方法进一步包括向个体施用有效量的至少一种另外的治疗剂。在另一方面，药物用于减少个体(诸如个体的肺)中分泌细胞(诸如杯状细胞)的数量。在某些方面，药物用于减少个体(诸如个体的肺)中分泌细胞(诸如杯状细胞)的数量的方法，该方法包括向该个体施用有效量的药物以减少个体(诸如个体的肺)中分泌细胞(诸如杯状细胞)的数量。

在另一方面，本发明提供了一种用于治疗粘液阻塞性肺疾病的方法。在一些方面，该方法包括向患有这种粘膜阻塞性肺疾病的个体施用有效量的抗Notch2抗体。在一个这样的方面，如下所描述的，该方法进一步包括向个体施用有效量的至少一种另外的治疗剂。

在另一方面，本发明提供了一种用于减少个体(诸如个体的肺)中分泌细胞(诸如杯状细胞)的数量的方法。在一些方面，该方法包括向个体施用有效量的抗Notch2抗体以减少个体(诸如个体的肺)中分泌细胞(诸如杯状细胞)的数量。在一些方面，“个体”为人。

可用本文提供的抗Notch2抗体治疗的非限制性示例性粘液阻塞性肺疾病包括慢性阻塞性肺疾病(COPD)、囊性纤维化、原发性纤毛运动障碍、非囊性纤维化支气管扩张和细支气管炎。

根据上述方面中的任一方面的“个体”或“受试者”可以为人。

在另一方面，本发明提供了包含本文提供的抗Notch2抗体中的任一种的药物组合物，其例如用于以上治疗方法中的任一者中。在一些方面，一种药物组合物包含本文所提供的抗Notch2抗体中的任一者，以及药用载体。在一些方面，一种药物组合物包含本文提供的任一种抗Notch2抗体和例如如下所述的至少一种另外的治疗剂。

本发明的抗体可以单独施用或用于组合疗法。例如，该组合疗法包括施用本发明的抗体并且施用至少一种另外的治疗剂(例如，一种、两种、三种、四种、五种或六种另外的治疗剂)。在某些方面，组合疗法包括施用本发明的抗体以及施用至少一种另外的治疗剂，诸如降低粘液粘弹性的药剂。在一些实施例中，另外的治疗剂选自高渗盐水、甘露醇、阿法链道酶、N-乙酰半胱氨酸、半胱胺和支气管扩张剂。

上述此类组合疗法涵盖组合施用(其中两种或更多种治疗剂包括在相同或单独的药物组合物中)和单独施用，在单独施用的情况下，本发明的抗体的施用可以在施用另外的治疗剂或药剂之前、同时和/或之后进行。在一些方面，抗Notch2抗体的施用和另外的治疗剂的施用在彼此相距约一个月内，或在约一周、两周或三周内，或在约一天、二天、三天、四天、五天或六天之内进行。在一些方面，在治疗的第1天将抗体和另外的治疗剂施用于患者。

本发明的抗体(和任何另外的治疗剂)可以通过任何合适的方式施用，包括肠胃外、肺内和鼻内，并且如果需要的话用于局部治疗、病灶内施用。肠胃外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。给药可以通过任何合适的途径进行，例如，通过注射(诸如静脉内或皮下注射)或通过肺内(例如，吸入)或鼻内递送，部分取决于施用是短暂的还是长期的。本文考虑了各种给药计划，包括但不限于在各个时间点处的单次或多次施用、推注施用以及脉冲输注。

本发明的抗体将以符合良好医学实践的方式配制、给药和施用。在这种情况下需要考虑的因素包括所治疗的特定疾患、所治疗的特定哺乳动物、个体患者的临床病症、疾患的原因、药剂的递送部位、施用方法、施用的时间安排，以及执业医师已知的其他因素。该抗体不是必须的，而是任选地与一种或多种目前用于预防或治疗所讨论的疾患的制剂共同配制。这些其他制剂的有效量取决于药物组合物中存在的抗体的量、疾患或治疗的类型以及上面讨论的其他因素。这些通常以与本文所述相同的剂量和施用途径使用，或以本文所述剂量的约1％至99％使用，或以任何剂量且通过经验/临床上确定为合适的任何途径使用。

为了预防或治疗疾病，本发明的抗体的适当剂量(当单独使用或与一种或多种其他另外治疗剂组合使用时)将取决于待治疗的疾病类型、抗体的类型、疾病的严重程度和病程、施用分子用于预防还是治疗目的、患者的病史和对抗体的应答以及主治医师的酌处权。抗体适当地一次或在一系列治疗中施用于患者。此类剂量可以间歇施用，例如每周或每三周施用(例如，使得患者接受约两次至约二十次，或例如约六次剂量的抗体)。可以施用初始较高的负荷剂量，之后施用一次或多次较低剂量。然而，其他剂量方案可能有用。这种疗法的进展易于通过常规的技术和测定法来监测。

G.制品

在本发明的一些方面，提供了一种制品，其含有可用于治疗、预防和/或诊断上述疾患的物质。该制品包括容器和在该容器上或与该容器相关的标签或包装说明书。合适的容器包括例如瓶子、小瓶、注射器、IV溶液袋等。该容器可以由诸如玻璃或塑料等多种材料形成。该容器容纳组合物，该组合物本身或与另一种组合物组合能够有效地治疗、预防和/或诊断病症，并且该容器可以具有无菌进入口(例如，该容器可以是静脉内溶液袋或具有可由皮下注射针刺穿的塞子的小瓶)。组合物中的至少一种活性剂是本发明的抗体。标签或包装插页指示该组合物用于治疗所选择的病症。此外，所述制品可包括(a)第一容器，所述第一容器中含有包含本发明的抗体的组合物；以及(b)第二容器，所述第二容器中含有包含另外的细胞毒性剂或其他治疗剂组合物。本发明该方面中的制品还可包含包装插页，所述包装插页指示所述组合物可用于治疗特定病症。可替代地或另外地，所述制品还可包括第二(或第三)容器，所述第二(或第三)容器包括药用缓冲液，诸如抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液和葡萄糖溶液。该制品可以还包括从商业和用户角度来看所需的其他物质，包括其他缓冲剂、稀释剂、过滤器、针头和注射器。

III.实例

以下是本发明的方法和组合物的实例。应当理解，在给出以上提供的一般描述的情况下，可以实践各种其他实施例。

实例1：兔和大鼠抗Notch2抗体的生成

使新西兰白兔与包含Notch2的EGF重复序列6至10(huNotch2-EGF6-10和muNotch2-EGF6-10)的人和鼠细胞外结构域(ECD)构建体共同免疫，并使用基于Offner等人的PLoS ONE 9(2),2014改进方案来分离单个B细胞。改进的工作流程包括将IgG+huNotch2+B细胞直接FACS分选到单个孔中。通过ELISA测定B细胞培养上清液与人Notch2和不相关的对照蛋白的结合。将Notch2特异性B细胞裂解并立即在-80℃冷冻保存直至进行分子克隆。利用人恒定区将来自兔B细胞的每种单克隆抗体的可变区(VH和VL)克隆到表达载体中，该人恒定区具有如前所述(Offner等人，PLoS ONE 9(2),2014)的来自提取的mRNA的N297G突变。使个体重组嵌合兔/人抗体在Expi293细胞中表达，随后用蛋白A纯化。然后对纯化的抗Notch2抗体进行功能活性测定和动力学筛选，如本文所述。

大鼠用MBP-huNotch2 EGF6-10+MBP-huNotch2 EGF7-9的组合进行免疫或用MBP-huNotch2 EGF6-10致敏并用huNotch2-EGF6-10加强，并且使用经修饰的融合伴侣(Price等等人J Immunol Methods 2009)生成杂交瘤。对各种条件进行优化，以便能够将单个IgG+huNotch2+杂交瘤分选到单个孔中，然后在分选后进行另外的培养。通过ELISA测定所得杂交瘤上清液，并且使用蛋白A纯化阳性样品用于后续功能和动力学表征。对某些大鼠单克隆抗体进行测序，并将其克隆到具有N297G突变的恒定区。使个体重组嵌合大鼠/人抗体在Expi293细胞中表达，随后用蛋白A纯化。然后对纯化的抗Notch2抗体进行功能活性测定和动力学筛选，如本文所述。

实例2：使用基于阵列的表面等离子体共振进行动力学分析和表位分箱

使用基于阵列的SPR成像***(Carterra USA)对实例1中生成的一组五种单克隆抗体(rat.1B2、rat.3107、rb.2338、rb.2430和rb.2621)以及抗Notch2/3抗体OMP-59R5(他瑞妥单抗(tarextumab)，参见美国专利号8,226,943B2)进行表位分箱。纯化的抗体在10mM醋酸钠缓冲液pH 4.5中以10μg/ml的浓度稀释。使用胺偶联，使用Continuous FlowMicrospotterr(Carterra,USA)将抗体直接固定在SPR sensorprism CMD 200M芯片(XanTec Bioanalytics,Germany)上以产生六抗体阵列。对于分析，使用IBIS MX96 SPRi(Carterra USA)评价分析物与固定的配体的结合。对于动力学分析，将人Notch2从0到300nM以3倍稀释注射3分钟，然后进行10分钟的解离期。对于表位分箱，首先将人Notch2以50nM注射4分钟，然后将个体单克隆抗体以10μg/ml进行第二个4分钟注射。在循环之间，用10mM甘氨酸，pH 1.5进行表面再生。该实验在25℃在HBS-T缓冲液(0.01M HEPES pH 7.4、0.15M NaCl、0.05％表面活性剂P20、5mM CaCl₂)的运行缓冲液中进行。分箱数据使用Wasatch分箱软件工具Epitope(Carterra USA)进行处理。

结果如图4所示。抗体rat.1B2、rat.3107、rb.2338、rb.2430和rb.2621被确定为与抗Notch 2/3抗体OMP-59R5处于不同的表位箱中。

实例3：大鼠抗Notch2抗体的人源化

如下所述，将大鼠单克隆抗体1B2和3107人源化。残基编号是根据Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991)。

在1B2和3107人源化期间构建的变体以人IgG的形式进行评定。将来自每种抗体的高变区(VL结构域中的位置24至34(L1)、50至56(L2)和89至97(L3)以及VH结构域中的位置26至35(H1)、50至65(H2)和95至102(H3))移植到各个受体框架中。对于大鼠1B2，将VL CDR移植到KV1-12*01中，并且将VH CDR移植到HV3-73*01中。此外，使CDR-H2 Asn54-Phe55-Ser56中的糖基化位点突变为Asp54-Phe55-Ser56。对于大鼠3107，将VL CDR移植到KV2-30*02中，并且将VH CDR移植到HV1-2*01中。也将来自亲本抗体的所有VL和VH游标位置移植到它们各自的人种系框架中。在游标位置具有所有大鼠氨基酸的移植物称为L1H1(hu.1B2.L1H1和hu.3107.L1H1)。

将hu.1B2.L1H1抗体的结合亲和力与其嵌合亲本克隆进行比较。L1H1型抗体的大鼠游标位置被转化回为人残基，以评估每个大鼠游标位置对huNOTCH2结合亲和力的贡献。制备了四种另外的轻链游标变体L2至L5和八种另外的重链游标变体H2至H9。基于上述变体抗体的结合亲和力评估(数据未显示)，将轻链上的Ser43和Tyr71(L7)以及重链上的Val24、Ala49、Ser76和Leu78(H14)Ala49、Ser76和Leu78确定为关键的大鼠游标残基。如以下实例6中所讨论，确定结合亲和力。嵌合1B2以5.21E-9M的K_D结合，而hu1B2.L7H14以6.13E-9M的K_D结合。

将hu.3107.L1H1抗体的结合亲和力与其嵌合亲本克隆进行比较。L1H1型抗体的大鼠游标位置被转化回为人残基，以评估每个大鼠游标位置对huNOTCH2结合亲和力的贡献。制备了一种另外的轻链变体(L2)和八种另外的重链变体H2至H11。

为了增加基于3107的抗Notch2人源化抗体的亲和力，基于人源化抗体的结合亲和力评估和HCS效力(数据未生成)制备4种重链序列变体：HV1-2*01中的H12，其具有P45、T48、A67、V71、S75和T76；HV1-2*01中的H13，其具有P45、T48、A67、V71、T76；H14和H15在HV5-51*01中，其分别具有与H12和H13相同的游标残基。对于轻链，将种系KV4-1*1用于CDR移植物(L7)。此外，轻链上的V2和F36被确定为在HCS测定中保持效力的大鼠游标残基，并将两者移植到种系KV4-1*01(L6)上。HCS测定基本上如实例5中所述进行。

实例4：人源化1B2抗体的亲和力改善

为了增加基于1B2的抗Notch2人源化抗体的效力，使用L7H10作为模板生成560个单点突变变体。所得抗体通过表面等离子体共振进行筛选，并根据解离率进行排名。重链中存在五个突变(A50G、S51Q、I57R、S96H和R98F)，轻链中存在三个突变(S31V、Q55H和L96I)，这些突变导致解离率减慢。为了识别良好的突变组合，利用单独和组合的突变集生成80个变体，并通过表面等离子共振表征进行评估。S51Q被识别为提高解离率的突变。

为了进一步提高1B2的亲和力，以具有S51Q和N54D突变的L1H1为模板进行噬菌体展示亲和力成熟。简而言之，总共构建四个噬菌体基因库，并在M13噬菌体表面将其展示为单价Fab。第一组基因库由两个CDR NNK walk(一个用于CDR-H1、H2和H3，一个用于CDR-L1、L2和L3)构成，其中三个CDR中的每一个中的一个位置被同时随机化。第二组由两个硬随机化基因库组成，其中整个CDR-L3或CDR-H3都发生突变。

对于亲和力改善选择，噬菌体基因库进行四轮溶液分选，其中严格程度递增并且将冷人Notch2 EGF6-10作为竞争剂。观察到CDR-H3硬随机基因库的富集。将亲本序列与富集克隆进行比较之后，识别若干个CDR-H3突变。总共54个组合变体被重新格式化为人IgG1，用于抗体生产和进一步的BIAcore结合动力学分析及HCS测定。HCS测定基本上如实例5中所述进行。hu1B2.v2、hu1B2.v4、hu1B2.v9和hu1B2.v8被识别为在HCS测定中亲和力和效力均得到最大改善。将这四个变体的CDR-H3移植到游标修饰的人源化变体L7H14中，以分别生成hu1B2.v101、hu1B2.v102、hu1B2.v103和hu1B2.v104。如以下实例6中所讨论，确定结合亲和力。对于hu.Notch2，hu1B2.L7H14的亲和力为6.13E-9M，而hu1B2.v101、hu1B2.v102、hu1B2.v103和hu1B2.v014的亲和力分别为2.84E-09、3.37E-09、3.08E-09、和3.09E-09。没有变体通过表面等离子共振显示出与人Notch1、人Notch3或人Notch4结合。每个抗Notch2变体的非特异性结合在ELISA中用杆状病毒颗粒进行测量(Hotzel等人，MAbs 2012)。针对分子评定责任，使用热应力和AAPH氧化应力测试来分析Hu1B2.v102和hu1B2.v104(参见Dion等人，J.Pharm.Sci 2018,107(2),550)。没有识别出责任。

实例5：用于识别阻断Jagged1信号传导但不阻断DLL1信号传导的抗体的高内涵筛选(HCS)测定

获取内源性表达高水平huNotch2(N2)的人细胞系U87-MG，并将每孔4,000个细胞接种到Cell Carrier ultra 384孔板(Perkin Elmer,Waltham,MA)上。将各板在37℃的CO₂温育箱中培养2至5小时，并且在此温育期间，手动用初始稀释物制备抗体(Ab)测试样品，然后通过Bravo自动化液体处理器(Agilent,Santa Clara,CA)进行一组10个点的3或3.5倍连续稀释。将稀释的Ab样品转移到相同的含有U-87-MG细胞的一组板上。添加稀释的Abs之后，获取3T3-Jag1或OP9-DLL1细胞，并将每个配体细胞系以每孔4,000个细胞接种在用Ab处理的U-87-MG细胞之上，并对其进行温育以允许配体依赖性Notch-2活化和N2-ICD易位发生在U-87-MG细胞中。

温育16至22小时之后，将受体和配体表达细胞的每种共培养物用4％多聚甲醛固定10分钟，用PBS洗涤各板，并且然后用0.05％皂苷(Sigma-Aldrich,San Louis,MO)在PBS+0.05％ BSA缓冲液中使细胞透性化1小时。在透性化之后，洗涤各板并用含有0.05％皂苷的PBS/BSA缓冲液稀释兔抗N2-ICD mAb D76A6(Cell Signaling Technology,Danvers,MA)并将其添加到各板上，并在4℃下温育过夜。

第二天，洗涤各板并用含有检测AF-647偶联抗兔检测Ab(Jackson-Immunoresearch,West Grove,PA)和Hoechst-33342染料(Thermo Fisher Scientific,Waltham,MA)的缓冲液对其染色，然后伴随轻轻摇动在室温下温育2小时。细胞染色之后，用洗涤缓冲液洗涤各板，然后将PBS添加到每个孔中，然后对各板进行成像。

在Opera Phenix高内涵成像***(Perkin Elmer,Waltham,MA)上使用20X水浸物镜从每个孔拍摄六个图像。使用Columbus软件成像分析工具(Perkin Elmer,Waltham,MA)进行分析，其中识别了核区域和核周围的环区域并计算了信号强度。获得阈值以计算来自最大抑制对照样品的N2-ICD核易位阳性群体。将Columbus软件分析的结果上传到GenedataScreener应用程序(Lexington,MA)，其中使用从中性对照减去最大抑制对照导出的易位百分比以及计算的IC50值来建立归一化过程。

比较来自3T3-Jag1和OP9-DLL1共培养集的数据分析结果，并将其用于阻断Jagged1介导的活化但保留DLL1介导的活化的Notch2抗体的发现以及人源化形式的抗体的优化。示例性结果在图5A至5F中示出。所有经测试的抗体都阻断Jagged1介导的活化，但保留DLL1介导的活化。表2总结了每种抗体阻断Jagged1介导的信号传导的IC50。

表2：抗Notch2抗体的Jagged1 IC50

化合物ID	Jagged1 IC50[M]
		1B2嵌合	1.253E-8
hu1B2.L1H1.DFS	7.896E-9
		hu1B2.v101	3.017E-9
hu1B2.v102	1.591E-9
		hu1B2.v103	1.801E-9
hu1B2.v104	2.485E-9
		大鼠3107	2.101E-9
兔2621	6.671E-10
		兔2338	3.530E-9
兔2430	1.027E-9

在单独的实验中，大鼠抗体3107和人源化形式的3107基本上如上所述在HCS测定中进行测试。该实验中测试的所有抗体均包含具有N297G突变的人IgG1。3107和人源化变体均阻断Jagged1介导的活化，但保留DLL1介导的活化(数据未示出)。表3总结了每种抗体阻断Jagged1介导的信号传导的IC50。

表3：抗Notch2 3107抗体和人源化变体的Jagged1 IC50

实例6：使用BIAcore^TM进行的动力学分析

抗体的结合亲和力通过BIAcore^TMT200机测定。将兔抗体表达为具有兔可变结构域和人恒定结构域的嵌合抗体。将大鼠抗体表达为具有大鼠可变结构域和人恒定区的嵌合抗体。在人IgG1骨架中表达人源化抗体。对于动力学测量，在研究级蛋白A芯片(GEHealthcare)上捕获抗体以达到大约300RU。huNotch2-EGF6-10的十倍系列稀释物在37℃下以100μL/min的流速注射到具有另外的3mM CaCl₂的HBS-P缓冲液中。使用1:1Langmuir结合模型(BIAcore^TMT200评价软件2.0版)计算结合率(ka)和解离率(kd)。平衡解离常数(KD)计算为比率kd/ka。结果如表4所示。

表4.rat.3107、rat.1B2和某些人源化变体以及rb.2338、rb.2430和rb.2621与huNotch2-EGF6-10(n＝3)的结合属性

样品	ka(1/Ms)	kd(1/s)	KD(M)
				大鼠1B2	1.81E+05	9.43E-04	5.21E-09
hu1B2.L1H1.DFS	2.26E+05	1.16E-03	5.15E-09
				hu1B2.L7H10	4.18E+05	4.15E-03	9.94E-09
hu1B2.L7H14	2.19E+05	1.34E-03	6.13E-09
				hu1B2.v101	2.86E+05	8.13E-04	2.84E-09
hu1B2.v102	3.87E+05	1.31E-03	3.37E-09
				hu1B2.v103	2.65E+05	8.17E-04	3.08E-09
hu1B2.v104	3.57E+05	1.10E-03	3.09E-09
				大鼠3107	3.63E+05	1.82E-03	5.00E-09
兔2338	5.33E+05	6.01E-03	11.3E-09
				兔2430	2.19E+06	3.07E-02	14.0E-09
兔2621	2.48E+06	3.05E-02	12.3E-09

在一个单独的实验中，基本上如上所述，测定人源化形式的大鼠3107抗体的结合亲和力。结果如表5所示。

表5.rat.3107和某些人源化变体的结合属性

抗Notch2抗体与来自另外的物种的Notch2以及与包含不同EGF重复区的构建体的结合通过BIAcore^TM进行评估。对于这个实验，将具有人恒定区的抗体捕获在蛋白A芯片上以达到大约200RU。各种抗原的十倍系列稀释物在37℃下以100μL/min的流速注射到具有另外的3mM CaCl₂的HBS-P缓冲液中。表6中总结了实验的结果。

表6：rat.3107、某些rat.1B2人源化形式以及rb.2338、rb.2430和rb.2621与各种Notch2构建体、人Notch1和人Notch3的结合

nt为未经测试。

其他人源化形式的1B2(hu1B2.L1H1.DFS、hu1B2.v4L7、hu1B2.v8L7、hu1B2.v9L7、hu.1B2.DFS.H14L7)显示与上表4中的hu.1B2.v102和hu.1B2.v104相似的结合概况。基于表4中所示的抗Notch2抗体的结合特征，rat.3107、人源化形式的rat.1B2、rb.2338、rb.2430和rb.2621的结合人Notch2EGF7内的表位。此外，所有测试的抗体显示与huNotch2-EGF6-12.R268K或与muNotch2-EGF6-10的结合很少或没有结合，但与huNotch2-EGF6-10和muNotch2-EGF6-12.K268R结合，表明抗体接触人Notch2的第268位精氨酸。

实例7：抗Notch2 Fab对Jagged1和DLL1信号传导的抑制率

将某些抗Notch2抗体重新为单价Fab的形式，并使用实例5中描述的HCS测定针对Jagged1和DLL1信号传导抑制率进行测定。

使用来自3T3-Jag1和OP9-DLL1共培养集的数据分析结果来计算Jagged1 IC50，并确定Fab对Jagged1和DLL1信号传导的最大抑制百分比。表7示出了针对每个Fab观察到的最大Jagged1和DLL1信号传导抑制率。

表7：抗Notch2 Fab的最大抑制率

Fab	Jagged1最大抑制率	DLL1最大抑制率
			hu1B2.v8	100％	50％
hu1B2.v104	100％	60％

令人惊讶的是，虽然hu1B2.v8和hu1B2.v104两者均选择性地抑制二价抗体格式的Jagged1信号传导，但当重新为单价Fab的形式时，hu1B2.v8和hu1B2.v104两者均抑制DLL1信号传导，尽管与对Jagged1信号传导的抑制率相比，抑制率达到降低的最大抑制率。相反，单价Fab格式的hu1B2.v1.DFS、hu1B2.v101和hu1B2.v103保留Jagged1特异性信号传导抑制活性，并且不抑制DLL1(数据未示出)。在不希望受任何特定理论的束缚下，Fab格式的hu1B2.v8和hu1B2.v104与Fab格式的hu1B2.v1.DFS、hu1B2.v101和hu1B2.v103之间的选择性差异可能归因于CDR-H3序列的差异。Hu1B2.v8和hu1B2.v104共享CDR-H3序列DGGKLALDA(SEQ ID NO:11)，而hu1B2.v1.DFS、hu1B2.v101和hu1B2.v103具有CDR-H3序列DSGRWGLDA(SEQ ID NO:8))、DGGRWGLDA(SEQ ID NO:9)和DGGKWGLDA(SEQ ID NO:12)。

实例8：通过抗Notch2抗体减少分泌细胞

气液界面(ALI)培养物：将原代人支气管上皮细胞(HBEC)接种在0.4μm孔PETtranswells(Corning#7369)中，并在淹没条件下培养，直至在Pneumacult Ex-Plus培养基(StemCell Technologies#05040)中汇合。一旦汇合，就移除上室的培养基，将HBEC暴露于空气，并将下室中的培养基替换为Pneumacult ALI基础培养基(StemCell Technologies#05001)。培养细胞3至4周，并且当纤毛明显跳动时细胞完全分化。

抗体处理和样品分析：将抗体以50mg/ml的浓度添加到基础培养基中。随着在下室中更换培养基(每周3次)，抗体得到补充。在第7天，收集ALI培养物用于RNA分析和组织学分析。对于RNA分析，使用Qiagen RNA提取试剂盒(#74106)来提取RNA。在使用iScript cDNA合成(Biorad#1708891)合成cDNA后，对基因Muc5b、Muc5ac和Scgb1a1(Taqman Assays)进行基因表达分析。对于组织学分析，transwells是经***固定和石蜡包埋的。将样品切片并针对抗Muc5b(杯状细胞)、抗乙酰化α微管蛋白(纤毛细胞)和DAPI(核染色)进行染色。

如图6A至6D中所示，用抗Notch2抗体1B2进行处理降低了HBEC的ALI培养物中的Muc5b、Muc5ac和Scgb1a1 mRNA表达。用抗Notch2抗体1B2进行处理也减少了杯状细胞的出现，如使用抗Muc5b抗体通过免疫荧光所检测。这些结果表明，对Jagged-Notch2信号传导的抑制足以显著减少培养物中的分泌性杯状细胞。

尽管为了清楚理解的目的先前已通过举例说明和实施方案相当详细地描述了本发明，但是这些描述和实施方案不应解释为限制本发明的范围。本文引用的所有专利和科学文献的公开内容均全文以引用方式明确地并入。

IV.特定序列表

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序列表

<110> 基因泰克公司 (GENENTECH, INC.)

<120> 抗 NOTCH2 抗体及其使用方法

<130> 01146-0094-00PCT

<150> US 63/053,034

<151> 2020-07-17

<160> 107

<170> PatentIn 版本 3.5

<210> 1

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rat1B2、hu1B2.L1、hu1B2.L7、hu1B2.v101、hu1B2.v102、

hu1B2.v103、hu1B2.v104 的 CDR-L1

<400> 1

Gln Thr Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly Leu Ala

1 5 10

<210> 2

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rat1B2、hu1B2.L1、hu1B2.L7、hu1B2.v101、hu1B2.v102、

hu1B2.v103、hu1B2.v104 的 CDR-L2

<400> 2

Gly Ala Ser Arg Leu Gln Asp

1 5

<210> 3

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rat1B2、hu1B2.L1、hu1B2.L7、hu1B2.v101、hu1B2.v102、

hu1B2.v103、hu1B2.v104 的 CDR-L3

<400> 3

Gln Gln Gly Phe Lys Tyr Pro Leu Thr

1 5

<210> 4

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rat1B2、hu.1B2.v1.DFS.H1、hu.1B2.H10、

hu.1B2.DFS.H14、hu.1B2.H1.N54D.S51Q、hu.1B2.v2、hu.1B2.v4、

hu.1B2.v8、hu.1B2.v9、hu1B2.v101、hu1B2.v102、hu1B2.v103、

hu1B2.v104 的 CDR-H1

<400> 4

Asp Phe Tyr Met Glu

1 5

<210> 5

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rat1B2 的 CDR-H2

<400> 5

Ala Ser Arg Asn Lys Ala Asn Asn Phe Ser Ile Val Tyr Ser Ala Ser

1 5 10 15

Val Lys Asp

<210> 6

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu.1B2.v1.DFS.H1、hu.1B2.H10、hu.1B2.DFS.H14 的 CDR-H2

<400> 6

Ala Ser Arg Asn Lys Ala Asn Asp Phe Ser Ile Val Tyr Ser Ala Ser

1 5 10 15

Val Lys Asp

<210> 7

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu.1B2.H1.N54D.S51Q、hu.1B2.v2、hu.1B2.v4、hu.1B2.v8、

hu.1B2.v9、hu1B2.v101、hu1B2.v102、hu1B2.v103、

hu1B2.v104 的 CDR-H2

<400> 7

Ala Gln Arg Asn Lys Ala Asn Asp Phe Ser Ile Val Tyr Ser Ala Ser

1 5 10 15

Val Lys Asp

<210> 8

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rat1B2、hu.1B2.v1.DFS.H1、hu.1B2.H10、hu.1B2.DFS.H14、

hu.1B2.H1.N54D.S51Q 的 CDR-H3

<400> 8

Asp Ser Gly Arg Trp Gly Leu Asp Ala

1 5

<210> 9

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu.1B2.v2、hu1B2.v101 的 CDR-H3

<400> 9

Asp Gly Gly Arg Trp Gly Leu Asp Ala

1 5

<210> 10

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu.1B2.v4、hu1B2.v102 的 CDR-H3

<400> 10

Asp Gly Gly Arg Leu Ala Leu Asp Ala

1 5

<210> 11

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu.1B2.v8、hu1B2.v104 的 CDR-H3

<400> 11

Asp Gly Gly Lys Leu Ala Leu Asp Ala

1 5

<210> 12

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu.1B2.v9、hu1B2.v103 的 CDR-H3

<400> 12

Asp Gly Gly Lys Trp Gly Leu Asp Ala

1 5

<210> 13

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rat.1B2 轻链可变区 (VL)

<400> 13

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Thr Val Thr Ile Gln Cys Gln Thr Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr His Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Arg Leu Gln Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Thr Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Ser Ser Met Gln Thr

65 70 75 80

Glu Asp Glu Gly Val Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Phe Lys Tyr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 14

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rat.1B2 重链可变区 (VH)

<400> 14

Glu Val Lys Leu Val Asp Tyr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Phe

20 25 30

Tyr Met Glu Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Ala Ala Ser Arg Asn Lys Ala Asn Asn Phe Ser Ile Val Tyr Ser Ala

50 55 60

Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Thr Tyr Lys Ser Ile

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Ser Thr Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Ser Arg Asp Ser Gly Arg Trp Gly Leu Asp Ala Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Ser Val Ile Val Ser Ser

115 120

<210> 15

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu.1B2.L1 VL

<400> 15

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Thr Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Arg Leu Gln Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Phe Lys Tyr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 16

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu.1B2.L7 VL

<400> 16

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Thr Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Arg Leu Gln Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Phe Lys Tyr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 17

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu.1B2.v1.DFS.H1 VH

<400> 17

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Phe

20 25 30

Tyr Met Glu Trp Ile Arg Gln Ala Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Ala Ala Ser Arg Asn Lys Ala Asn Asp Phe Ser Ile Val Tyr Ser Ala

50 55 60

Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Ser Arg Asp Ser Gly Arg Trp Gly Leu Asp Ala Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 18

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu.1B2.H10 VH

<400> 18

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Phe

20 25 30

Tyr Met Glu Trp Val Arg Gln Ala Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Ala Ser Arg Asn Lys Ala Asn Asp Phe Ser Ile Val Tyr Ser Ala

50 55 60

Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Thr

65 70 75 80

Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Ser Arg Asp Ser Gly Arg Trp Gly Leu Asp Ala Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 19

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu.1B2.DFS.H14 VH

<400> 19

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Phe

20 25 30

Tyr Met Glu Trp Val Arg Gln Ala Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Ala Ser Arg Asn Lys Ala Asn Asp Phe Ser Ile Val Tyr Ser Ala

50 55 60

Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Ser Arg Asp Ser Gly Arg Trp Gly Leu Asp Ala Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 20

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu.1B2.H1.N54D.S51Q VH

<400> 20

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Phe

20 25 30

Tyr Met Glu Trp Ile Arg Gln Ala Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Ala Ala Gln Arg Asn Lys Ala Asn Asp Phe Ser Ile Val Tyr Ser Ala

50 55 60

Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Ser Arg Asp Ser Gly Arg Trp Gly Leu Asp Ala Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 21

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu.1B2.v2 VH

<400> 21

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Phe

20 25 30

Tyr Met Glu Trp Ile Arg Gln Ala Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Ala Ala Gln Arg Asn Lys Ala Asn Asp Phe Ser Ile Val Tyr Ser Ala

50 55 60

Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Ser Arg Asp Gly Gly Arg Trp Gly Leu Asp Ala Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 22

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu.1B2.v4 VH

<400> 22

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Phe

20 25 30

Tyr Met Glu Trp Ile Arg Gln Ala Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Ala Ala Gln Arg Asn Lys Ala Asn Asp Phe Ser Ile Val Tyr Ser Ala

50 55 60

Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Ser Arg Asp Gly Gly Arg Leu Ala Leu Asp Ala Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 23

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu.1B2.v8 VH

<400> 23

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Phe

20 25 30

Tyr Met Glu Trp Ile Arg Gln Ala Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Ala Ala Gln Arg Asn Lys Ala Asn Asp Phe Ser Ile Val Tyr Ser Ala

50 55 60

Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Ser Arg Asp Gly Gly Lys Leu Ala Leu Asp Ala Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 24

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu.1B2.v9 VH

<400> 24

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Phe

20 25 30

Tyr Met Glu Trp Ile Arg Gln Ala Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Ala Ala Gln Arg Asn Lys Ala Asn Asp Phe Ser Ile Val Tyr Ser Ala

50 55 60

Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Ser Arg Asp Gly Gly Lys Trp Gly Leu Asp Ala Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 25

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu.1B2.v101 VL

<400> 25

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Thr Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Arg Leu Gln Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Phe Lys Tyr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 26

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu.1B2.v101 VH

<400> 26

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Phe

20 25 30

Tyr Met Glu Trp Val Arg Gln Ala Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Ala Gln Arg Asn Lys Ala Asn Asp Phe Ser Ile Val Tyr Ser Ala

50 55 60

Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Ser Arg Asp Gly Gly Arg Trp Gly Leu Asp Ala Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 27

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu.1B2.v102 VL

<400> 27

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Thr Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Arg Leu Gln Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Phe Lys Tyr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 28

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu.1B2.v102 VH

<400> 28

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Phe

20 25 30

Tyr Met Glu Trp Val Arg Gln Ala Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Ala Gln Arg Asn Lys Ala Asn Asp Phe Ser Ile Val Tyr Ser Ala

50 55 60

Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Ser Arg Asp Gly Gly Arg Leu Ala Leu Asp Ala Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 29

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu.1B2.v103 VL

<400> 29

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Thr Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Arg Leu Gln Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Phe Lys Tyr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 30

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu.1B2.v103 VH

<400> 30

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Phe

20 25 30

Tyr Met Glu Trp Val Arg Gln Ala Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Ala Gln Arg Asn Lys Ala Asn Asp Phe Ser Ile Val Tyr Ser Ala

50 55 60

Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Ser Arg Asp Gly Gly Lys Trp Gly Leu Asp Ala Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 31

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu.1B2.v104 VL

<400> 31

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Thr Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Arg Leu Gln Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Phe Lys Tyr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 32

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu.1B2.v104 VH

<400> 32

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Phe

20 25 30

Tyr Met Glu Trp Val Arg Gln Ala Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Ala Gln Arg Asn Lys Ala Asn Asp Phe Ser Ile Val Tyr Ser Ala

50 55 60

Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Thr

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Ser Arg Asp Gly Gly Lys Leu Ala Leu Asp Ala Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 33

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rat.3107 CDR-L1、hu.3107.L1、hu.3107.L6 和

hu.3107.L7

<400> 33

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu His

1 5 10 15

<210> 34

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rat.3107 CDR-L2、hu.3107.L1、hu.3107.L6 和

hu.3107.L7

<400> 34

Arg Ile Ser Asn Arg Phe Ser

1 5

<210> 35

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rat.3107 CDR-L3、hu.3107.L1、hu.3107.L6 和

hu.3107.L7

<400> 35

Leu Gln Ser Thr His Phe Pro Asp Thr

1 5

<210> 36

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rat.3107 CDR-H1、hu.3107.V1-2.H1、hu.3107.H12、

hu.3107.H13、hu.3107.V5-51.H1、hu.3107.H14 和 hu.3107.H15

<400> 36

Asn Tyr Val Ile His

1 5

<210> 37

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rat.3107 CDR-H2、hu.3107.V1-2.H1、hu.3107.H12、

hu.3107.H13、hu.3107.V5-51.H1、hu.3107.H14 和 hu.3107.H15

<400> 37

Tyr Ile Ile Pro Gly Ser Gly Gly Thr Lys Phe Asn Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 38

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rat.3107 CDR-H3、hu.3107.V1-2.H1、hu.3107.H12、

hu.3107.H13、hu.3107.V5-51.H1、hu.3107.H14 和 hu.3107.H15

<400> 38

Asp Gly Ala Gly Ser Phe Thr Tyr

1 5

<210> 39

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rat.3107 VL

<400> 39

Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Val Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Gly Gln Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Asp Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Ile Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Pro Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser

85 90 95

Thr His Phe Pro Asp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 40

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rat.3107 VH

<400> 40

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Lys Ser Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asn Tyr

20 25 30

Val Ile His Trp Ile Lys Gln Thr Thr Gly Gln Ala Pro Glu Trp Thr

35 40 45

Gly Tyr Ile Ile Pro Gly Ser Gly Gly Thr Lys Phe Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Pro Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Gly Ala Gly Ser Phe Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 41

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rb.2338 CDR-L1

<400> 41

Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 42

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rb.2338 CDR-L2

<400> 42

Arg Ala Ser Lys Leu Ala Ser

1 5

<210> 43

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rb.2338 CDR-L3

<400> 43

Gln Ser Asn Ser Tyr Gly Asn Asn Trp Val Gly Gly

1 5 10

<210> 44

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rb.2338 CDR-H1

<400> 44

Ser Gly Tyr Asp Met Cys

1 5

<210> 45

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rb.2338 CDR-H2

<400> 45

Cys Ile Tyr Ala Gly Ser Glu Gly Phe Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala

1 5 10 15

Lys

<210> 46

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rb.2338 CDR-H3

<400> 46

Trp Thr Asp Ser Asp Gly Ser Asn Leu

1 5

<210> 47

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rb.2338 VL

<400> 47

Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Ala Ala Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Arg Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Arg Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys

65 70 75 80

Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Asn Ser Tyr Gly Asn Asn

85 90 95

Trp Val Gly Gly Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 48

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rb.2338 VH

<400> 48

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Gly Tyr

20 25 30

Asp Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Ala Cys Ile Tyr Ala Gly Ser Glu Gly Phe Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp

50 55 60

Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Ser Ser Ser Thr Thr Val Thr

65 70 75 80

Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Val Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Trp Thr Asp Ser Asp Gly Ser Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 49

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rb.2430、rb.2430.C95dS CDR-L1

<400> 49

Gln Ala Ser Gln Ser Val Val Asn Asn Arg Leu Ala

1 5 10

<210> 50

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rb.2430、rb.2430.C95dS CDR-L2

<400> 50

Gly Ala Ser Thr Leu Glu Ser

1 5

<210> 51

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rb.2430 CDR-L3

<400> 51

Gln Gly Glu Phe Leu Cys Ser Ser Gly Asp Cys Val Ala

1 5 10

<210> 52

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rb.2430.C95dS CDR-L3

<400> 52

Gln Gly Glu Phe Leu Cys Ser Ser Gly Asp Ser Val Ala

1 5 10

<210> 53

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rb.2430、rb.2430.C95dS CDR-H1

<400> 53

Ser Tyr Asp Met Ser

1 5

<210> 54

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rb.2430、rb.2430.C95dS CDR-H2

<400> 54

Ile Ile Gln Ala Gly Ser Asn Thr Leu Phe Tyr Ala Ser Trp Ala

1 5 10 15

<210> 55

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rb.2430、rb.2430.C95dS CDR-H3

<400> 55

Gly Gly Val Ile Phe Ile Ile Gly His Phe Asn Leu

1 5 10

<210> 56

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rb.2430 VL

<400> 56

Ala Gln Val Leu Thr Gln Thr Ala Ser Ser Val Ser Ala Ala Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Val Asn Asn

20 25 30

Arg Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Met Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln

65 70 75 80

Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Glu Phe Leu Cys Ser

85 90 95

Ser Gly Asp Cys Val Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 57

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rb.2430.C95dS VL

<400> 57

Ala Gln Val Leu Thr Gln Thr Ala Ser Ser Val Ser Ala Ala Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Val Asn Asn

20 25 30

Arg Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Met Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln

65 70 75 80

Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Glu Phe Leu Cys Ser

85 90 95

Ser Gly Asp Ser Val Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 58

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rb.2430 VH

<400> 58

Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Asp

20 25 30

Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly

35 40 45

Ile Ile Gln Ala Gly Ser Asn Thr Leu Phe Tyr Ala Ser Trp Ala Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile

65 70 75 80

Thr Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly

85 90 95

Gly Val Ile Phe Ile Ile Gly His Phe Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 59

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rb.2621 CDR-L1

<400> 59

Gln Ala Ser Glu Ser Ile Gly Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 60

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rb.2621 CDR-L2

<400> 60

Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser

1 5

<210> 61

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rb.2621 CDR-L3

<400> 61

Gln Gln Thr Tyr Ser Gly Ala Gly Val Asp Asn Leu

1 5 10

<210> 62

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rb.2621 CDR-H1

<400> 62

Ser Gly Tyr Asp Met Cys

1 5

<210> 63

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rb.2621 CDR-H2

<400> 63

Cys Ile Val Thr Val Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys

1 5 10 15

<210> 64

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rb.2621 CDR-H3

<400> 64

Asp Gly Gly Phe Thr Asp Thr Trp Tyr Phe His Leu

1 5 10

<210> 65

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rb.2621 VL

<400> 65

Ala Tyr Asp Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Val Ala Val Gly

1 5 10 15

Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Gly Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Cys

65 70 75 80

Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Tyr Ser Gly Ala Gly

85 90 95

Val Asp Asn Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 66

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：rb.2621 VH

<400> 66

Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Ala Ser

1 5 10 15

Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Gly Tyr

20 25 30

Asp Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Ala Cys Ile Val Thr Val Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr Leu

65 70 75 80

Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala

85 90 95

Arg Asp Gly Gly Phe Thr Asp Thr Trp Tyr Phe His Leu Trp Gly Pro

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 67

<211> 605

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：MBP-huNotch2 EGF6-10

<400> 67

Ala Gly Ser Met Gly Lys Ile Glu Glu Gly Lys Leu Val Ile Trp Ile

1 5 10 15

Asn Gly Asp Lys Gly Tyr Asn Gly Leu Ala Glu Val Gly Lys Lys Phe

20 25 30

Glu Lys Asp Thr Gly Ile Lys Val Thr Val Glu His Pro Asp Lys Leu

35 40 45

Glu Glu Lys Phe Pro Gln Val Ala Ala Thr Gly Asp Gly Pro Asp Ile

50 55 60

Ile Phe Trp Ala His Asp Arg Phe Gly Gly Tyr Ala Gln Ser Gly Leu

65 70 75 80

Leu Ala Glu Ile Thr Pro Asp Lys Ala Phe Gln Asp Lys Leu Tyr Pro

85 90 95

Phe Thr Trp Asp Ala Val Arg Tyr Asn Gly Lys Leu Ile Ala Tyr Pro

100 105 110

Ile Ala Val Glu Ala Leu Ser Leu Ile Tyr Asn Lys Asp Leu Leu Pro

115 120 125

Asn Pro Pro Lys Thr Trp Glu Glu Ile Pro Ala Leu Asp Lys Glu Leu

130 135 140

Lys Ala Lys Gly Lys Ser Ala Leu Met Phe Asn Leu Gln Glu Pro Tyr

145 150 155 160

Phe Thr Trp Pro Leu Ile Ala Ala Asp Gly Gly Tyr Ala Phe Lys Tyr

165 170 175

Glu Asn Gly Lys Tyr Asp Ile Lys Asp Val Gly Val Asp Asn Ala Gly

180 185 190

Ala Lys Ala Gly Leu Thr Phe Leu Val Asp Leu Ile Lys Asn Lys His

195 200 205

Met Asn Ala Asp Thr Asp Tyr Ser Ile Ala Glu Ala Ala Phe Asn Lys

210 215 220

Gly Glu Thr Ala Met Thr Ile Asn Gly Pro Trp Ala Trp Ser Asn Ile

225 230 235 240

Asp Thr Ser Lys Val Asn Tyr Gly Val Thr Val Leu Pro Thr Phe Lys

245 250 255

Gly Gln Pro Ser Lys Pro Phe Val Gly Val Leu Ser Ala Gly Ile Asn

260 265 270

Ala Ala Ser Pro Asn Lys Glu Leu Ala Lys Glu Phe Leu Glu Asn Tyr

275 280 285

Leu Leu Thr Asp Glu Gly Leu Glu Ala Val Asn Lys Asp Lys Pro Leu

290 295 300

Gly Ala Val Ala Leu Lys Ser Tyr Glu Glu Glu Leu Ala Lys Asp Pro

305 310 315 320

Arg Ile Ala Ala Thr Met Glu Asn Ala Gln Lys Gly Glu Ile Met Pro

325 330 335

Asn Ile Pro Gln Met Ser Ala Phe Trp Tyr Ala Val Arg Thr Ala Val

340 345 350

Ile Asn Ala Ala Ser Gly Arg Gln Thr Val Asp Glu Ala Leu Lys Asp

355 360 365

Ala Gln Thr Asn Ser Ser Ser Asn Asn Asn Asn Asn Asn Asn Asn Asn

370 375 380

Asn Gly Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Ser Asp Ser Leu Tyr Val Pro

385 390 395 400

Cys Ala Pro Ser Pro Cys Val Asn Gly Gly Thr Cys Arg Gln Thr Gly

405 410 415

Asp Phe Thr Phe Glu Cys Asn Cys Leu Pro Gly Phe Glu Gly Ser Thr

420 425 430

Cys Glu Arg Asn Ile Asp Asp Cys Pro Asn His Arg Cys Gln Asn Gly

435 440 445

Gly Val Cys Val Asp Gly Val Asn Thr Tyr Asn Cys Arg Cys Pro Pro

450 455 460

Gln Trp Thr Gly Gln Phe Cys Thr Glu Asp Val Asp Glu Cys Leu Leu

465 470 475 480

Gln Pro Asn Ala Cys Gln Asn Gly Gly Thr Cys Ala Asn Arg Asn Gly

485 490 495

Gly Tyr Gly Cys Val Cys Val Asn Gly Trp Ser Gly Asp Asp Cys Ser

500 505 510

Glu Asn Ile Asp Asp Cys Ala Phe Ala Ser Cys Thr Pro Gly Ser Thr

515 520 525

Cys Ile Asp Arg Val Ala Ser Phe Ser Cys Met Cys Pro Glu Gly Lys

530 535 540

Ala Gly Leu Leu Cys His Leu Asp Asp Ala Cys Ile Ser Asn Pro Cys

545 550 555 560

His Lys Gly Ala Leu Cys Asp Thr Asn Pro Leu Asn Gly Gln Tyr Ile

565 570 575

Cys Thr Cys Pro Gln Gly Tyr Lys Gly Ala Asp Cys Thr Glu Asp Val

580 585 590

Asp Glu Gly Asn Ser His His His His His His His His

595 600 605

<210> 68

<211> 526

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：MBP-huNotch2 EGF7-9

<400> 68

Ala Gly Ser Met Gly Lys Ile Glu Glu Gly Lys Leu Val Ile Trp Ile

1 5 10 15

Asn Gly Asp Lys Gly Tyr Asn Gly Leu Ala Glu Val Gly Lys Lys Phe

20 25 30

Glu Lys Asp Thr Gly Ile Lys Val Thr Val Glu His Pro Asp Lys Leu

35 40 45

Glu Glu Lys Phe Pro Gln Val Ala Ala Thr Gly Asp Gly Pro Asp Ile

50 55 60

Ile Phe Trp Ala His Asp Arg Phe Gly Gly Tyr Ala Gln Ser Gly Leu

65 70 75 80

Leu Ala Glu Ile Thr Pro Asp Lys Ala Phe Gln Asp Lys Leu Tyr Pro

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<211> 2471

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<213> 食蟹猴

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<222> (1)..(2471)

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Gly Leu Ser Gly Tyr Lys Cys Leu Cys Asp Ala Gly Trp Val Gly Ile

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Asn Cys Glu Val Asp Lys Asn Glu Cys Leu Ser Asn Pro Cys Gln Asn

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Gly Gly Thr Cys Asp Asn Leu Val Asn Gly Tyr Arg Cys Thr Cys Lys

770 775 780

Lys Gly Phe Lys Gly Tyr Asn Cys Gln Val Asn Ile Asp Glu Cys Ala

785 790 795 800

Ser Asn Pro Cys Leu Asn Gln Gly Thr Cys Phe Asp Asp Ile Ser Gly

805 810 815

Tyr Thr Cys His Cys Val Leu Pro Tyr Thr Gly Lys Asn Cys Gln Thr

820 825 830

Val Leu Ala Pro Cys Ser Pro Asn Pro Cys Glu Asn Ala Ala Val Cys

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Lys Glu Ser Pro Asn Phe Glu Ser Tyr Thr Cys Leu Cys Ala Pro Gly

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Trp Gln Gly Gln Arg Cys Thr Ile Asp Ile Asp Glu Cys Ile Ser Lys

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Pro Cys Met Asn His Gly Leu Cys His Asn Thr Gln Gly Ser Tyr Met

885 890 895

Cys Glu Cys Pro Pro Gly Phe Ser Gly Met Asp Cys Glu Glu Asp Ile

900 905 910

Asp Asp Cys Leu Ala Asn Pro Cys Gln Asn Gly Gly Ser Cys Val Asp

915 920 925

Gly Val Asn Thr Phe Ser Cys Leu Cys Leu Pro Gly Phe Thr Gly Asp

930 935 940

Lys Cys Gln Thr Asp Met Asn Glu Cys Leu Ser Glu Pro Cys Lys Asn

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1280 1285 1290

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1310 1315 1320

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1325 1330 1335

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1385 1390 1395

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1400 1405 1410

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Tyr Cys Ala Asp Lys Ala Arg Asp Gly Val Cys Asp Glu Ala Cys

1430 1435 1440

Asn Ser His Ala Cys Gln Trp Asp Gly Gly Asp Cys Ser Leu Thr

1445 1450 1455

Met Glu Asn Pro Trp Ala Asn Cys Ser Ser Pro Leu Pro Cys Trp

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Asp Tyr Ile Asn Asn Gln Cys Asp Glu Leu Cys Asn Thr Ala Glu

1475 1480 1485

Cys Leu Phe Asp Asn Phe Glu Cys Gln Gly Asn Ser Lys Thr Cys

1490 1495 1500

Lys Tyr Asp Lys Tyr Cys Ala Asp His Phe Lys Asp Asn His Cys

1505 1510 1515

Asp Gln Gly Cys Asn Ser Glu Glu Cys Gly Trp Asp Gly Leu Asp

1520 1525 1530

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Ser Ile Pro Gly Glu Gln Glu Gln Glu Val Ala Gly Ser Lys Val

1610 1615 1620

Phe Leu Glu Ile Asp Asn Arg Gln Cys Val Gln Asp Ser Asp His

1625 1630 1635

Cys Phe Lys Asn Thr Asp Ala Ala Ala Ala Leu Leu Ala Ser His

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Glu Ser Leu Thr Pro Glu Arg Thr Gln Leu Leu Tyr Leu Leu Ala

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Val Ala Val Val Ile Ile Leu Phe Ile Ile Leu Leu Gly Val Ile

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Met Ala Lys Arg Lys Arg Lys His Gly Ser Leu Trp Leu Pro Glu

1700 1705 1710

Gly Phe Thr Leu Arg Arg Asp Ala Ser Asn His Lys Arg Arg Glu

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Pro Val Gly Gln Asp Ala Val Gly Leu Lys Asn Leu Ser Val Gln

1730 1735 1740

Val Ser Glu Ala Asn Leu Ile Gly Ser Gly Thr Ser Glu His Trp

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Val Asp Asp Glu Gly Pro Gln Pro Lys Lys Val Lys Ala Glu Asp

1760 1765 1770

Glu Ala Leu Leu Ser Glu Glu Asp Asp Pro Ile Asp Arg Arg Pro

1775 1780 1785

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1820 1825 1830

Leu Ala Ser Leu Arg Gly Gly Ser Ser Asp Leu Ser Asp Glu Asp

1835 1840 1845

Glu Asp Ala Glu Asp Ser Ser Ala Asn Ile Ile Thr Asp Leu Val

1850 1855 1860

Tyr Gln Gly Ala Ser Leu Gln Ala Gln Thr Asp Arg Thr Gly Glu

1865 1870 1875

Met Ala Leu His Leu Ala Ala Arg Tyr Ser Arg Ala Asp Ala Ala

1880 1885 1890

Lys Arg Leu Leu Asp Ala Gly Ala Asp Ala Asn Ala Gln Asp Asn

1895 1900 1905

Met Gly Arg Cys Pro Leu His Ala Ala Val Ala Ala Asp Ala Gln

1910 1915 1920

Gly Val Phe Gln Ile Leu Ile Arg Asn Arg Val Thr Asp Leu Asp

1925 1930 1935

Ala Arg Met Asn Asp Gly Thr Thr Pro Leu Ile Leu Ala Ala Arg

1940 1945 1950

Leu Ala Val Glu Gly Met Val Ala Glu Leu Ile Asn Cys Gln Ala

1955 1960 1965

Asp Val Asn Ala Val Asp Asp His Gly Lys Ser Ala Leu His Trp

1970 1975 1980

Ala Ala Ala Val Asn Asn Val Glu Ala Thr Leu Leu Leu Leu Lys

1985 1990 1995

Asn Gly Ala Asn Arg Asp Met Gln Asp Asn Lys Glu Glu Thr Pro

2000 2005 2010

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2015 2020 2025

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2030 2035 2040

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2450 2455 2460

His Asn Asn Met Gln Val Tyr Ala

2465 2470

<210> 72

<211> 2455

<212> PRT

<213> 豚鼠

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(2455)

<223> 豚鼠 Notch2，具有信号序列（氨基酸 1 至 9）

<400> 72

Met Tyr Leu Phe Cys Phe Val Leu Ala Leu Gln Cys Arg Asp Asp Tyr

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705 710 715 720

Gly Leu Ser Gly Tyr Lys Cys Leu Cys Asp Ala Gly Trp Val Gly Ile

725 730 735

Asn Cys Glu Val Asp Lys Asn Glu Cys Leu Ser Asn Pro Cys Gln Asn

740 745 750

Gly Gly Thr Cys Asp Asn Leu Val Asn Gly Tyr Lys Cys Thr Cys Lys

755 760 765

Lys Gly Phe Lys Gly Tyr Asn Cys Gln Val Asn Ile Asp Glu Cys Ala

770 775 780

Ser Asn Pro Cys Leu Asn Gln Gly Thr Cys Phe Asp Asp Val Ser Gly

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820 825 830

Lys Glu Ala Pro Asn Phe Glu Ser Phe Thr Cys Leu Cys Ala Pro Gly

835 840 845

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Pro Cys Met Asn His Gly Leu Cys His Asn Thr Gln Gly Ser Tyr Met

865 870 875 880

Cys Glu Cys Pro Pro Gly Phe Ser Gly Met Asp Cys Glu Glu Asp Ile

885 890 895

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915 920 925

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Leu Val Asn His Phe Lys Cys Ser Cys Pro Pro Gly Thr Arg Gly

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Leu Phe Cys Glu Glu Asn Ile Asp Asp Cys Ala Gly Gly Pro His

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Cys Leu Asn Gly Gly Gln Cys Val Asp Arg Ile Gly Gly Tyr Ser

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Cys Arg Cys Leu Pro Gly Phe Ala Gly Glu Arg Cys Glu Gly Asp

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Gln Lys Pro Cys Leu Asn Gly Gly Thr Cys Ala Val Ala Ser Asn

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Ala Lys Cys Gln Ser Ser Cys Gly Gln Val Lys Cys Arg Lys Gly

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Arg Met Asn Asp Gly Thr Thr Pro Leu Ile Leu Ala Ala Arg Leu

1925 1930 1935

Ala Val Glu Gly Met Val Ala Glu Leu Ile Asn Cys Gln Ala Asp

1940 1945 1950

Val Asn Ala Val Asp Asp His Gly Lys Ser Ala Leu His Trp Ala

1955 1960 1965

Ala Ala Val Asn Asn Val Glu Ala Thr Leu Leu Leu Leu Lys Asn

1970 1975 1980

Gly Ala Asn Arg Asp Met Gln Asp Asn Lys Glu Glu Thr Pro Leu

1985 1990 1995

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<210> 73

<211> 2473

<212> PRT

<213> 小家鼠

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(2473)

<223> 小鼠 Notch2，具有信号序列（氨基酸 1 至 25）

<400> 73

Met Pro Ala Leu Arg Pro Ala Ala Leu Arg Ala Leu Leu Trp Leu Trp

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210

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<213> 人工序列

<220>

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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180 185 190

Lys Gly Ala Asp Cys Thr Glu Asp Val Asp Glu Cys Ala Met Thr Asn

195 200 205

Ser Asn Pro Cys Glu His Ala Gly Lys Cys Val Asn Thr Asp Gly Ala

210 215 220

Phe His Cys Glu Cys Leu Lys Gly Tyr Ala Gly Pro Arg Cys Glu Met

225 230 235 240

Asp Ile Asn Glu Cys His Ser Asp Pro Cys Gln Asn Asp Ala Thr Cys

245 250 255

Leu Asp Lys Ile Gly Gly Phe Thr Cys Leu Cys Met Pro Gly Phe Lys

260 265 270

Gly Val His Cys Glu Ile Glu Ile Asn Glu Gly Asn Ser Gly Leu Asn

275 280 285

Asp Ile Phe Glu Ala Gln Lys Ile Glu Trp His Glu Asn Leu Tyr Phe

290 295 300

Gln Gly His His His His His His His His

305 310

<210> 77

<211> 309

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：huNotch2-EGF6-12.R268K

<400> 77

Ala Gly Ser Asp Ser Leu Tyr Val Pro Cys Ala Pro Ser Pro Cys Val

1 5 10 15

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20 25 30

Cys Leu Pro Gly Phe Glu Gly Ser Thr Cys Glu Arg Asn Ile Asp Asp

35 40 45

Cys Pro Asn His Lys Cys Gln Asn Gly Gly Val Cys Val Asp Gly Val

50 55 60

Asn Thr Tyr Asn Cys Arg Cys Pro Pro Gln Trp Thr Gly Gln Phe Cys

65 70 75 80

Thr Glu Asp Val Asp Glu Cys Leu Leu Gln Pro Asn Ala Cys Gln Asn

85 90 95

Gly Gly Thr Cys Ala Asn Arg Asn Gly Gly Tyr Gly Cys Val Cys Val

100 105 110

Asn Gly Trp Ser Gly Asp Asp Cys Ser Glu Asn Ile Asp Asp Cys Ala

115 120 125

Phe Ala Ser Cys Thr Pro Gly Ser Thr Cys Ile Asp Arg Val Ala Ser

130 135 140

Phe Ser Cys Met Cys Pro Glu Gly Lys Ala Gly Leu Leu Cys His Leu

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Asp Asp Ala Cys Ile Ser Asn Pro Cys His Lys Gly Ala Leu Cys Asp

165 170 175

Thr Asn Pro Leu Asn Gly Gln Tyr Ile Cys Thr Cys Pro Gln Gly Tyr

180 185 190

Lys Gly Ala Asp Cys Thr Glu Asp Val Asp Glu Cys Ala Met Ala Asn

195 200 205

Ser Asn Pro Cys Glu His Ala Gly Lys Cys Val Asn Thr Asp Gly Ala

210 215 220

Phe His Cys Glu Cys Leu Lys Gly Tyr Ala Gly Pro Arg Cys Glu Met

225 230 235 240

Asp Ile Asn Glu Cys His Ser Asp Pro Cys Gln Asn Asp Ala Thr Cys

245 250 255

Leu Asp Lys Ile Gly Gly Phe Thr Cys Leu Cys Met Pro Gly Phe Lys

260 265 270

Gly Val His Cys Glu Gly Asn Ser Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu Ala

275 280 285

Gln Lys Ile Glu Trp His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly His His His

290 295 300

His His His His His

305

<210> 78

<211> 314

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：muNotch2-EGF6-12.K268R

<400> 78

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20 25 30

Cys Leu Pro Gly Phe Glu Gly Ser Thr Cys Glu Arg Asn Ile Asp Asp

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Cys Pro Asn His Arg Cys Gln Asn Gly Gly Val Cys Val Asp Gly Val

50 55 60

Asn Thr Tyr Asn Cys Arg Cys Pro Pro Gln Trp Thr Gly Gln Phe Cys

65 70 75 80

Thr Glu Asp Val Asp Glu Cys Leu Leu Gln Pro Asn Ala Cys Gln Asn

85 90 95

Gly Gly Thr Cys Thr Asn Arg Asn Gly Gly Tyr Gly Cys Val Cys Val

100 105 110

Asn Gly Trp Ser Gly Asp Asp Cys Ser Glu Asn Ile Asp Asp Cys Ala

115 120 125

Tyr Ala Ser Cys Thr Pro Gly Ser Thr Cys Ile Asp Arg Val Ala Ser

130 135 140

Phe Ser Cys Leu Cys Pro Glu Gly Lys Ala Gly Leu Leu Cys His Leu

145 150 155 160

Asp Asp Ala Cys Ile Ser Asn Pro Cys His Lys Gly Ala Leu Cys Asp

165 170 175

Thr Asn Pro Leu Asn Gly Gln Tyr Ile Cys Thr Cys Pro Gln Gly Tyr

180 185 190

Lys Gly Ala Asp Cys Thr Glu Asp Val Asp Glu Cys Ala Met Ala Asn

195 200 205

Ser Asn Pro Cys Glu His Ala Gly Lys Cys Val Asn Thr Asp Gly Ala

210 215 220

Phe His Cys Glu Cys Leu Lys Gly Tyr Ala Gly Pro Arg Cys Glu Met

225 230 235 240

Asp Ile Asn Glu Cys His Ser Asp Pro Cys Gln Asn Asp Ala Thr Cys

245 250 255

Leu Asp Lys Ile Gly Gly Phe Thr Cys Leu Cys Met Pro Gly Phe Lys

260 265 270

Gly Val His Cys Glu Leu Glu Val Asn Glu Gly Asn Ser Gly Leu Asn

275 280 285

Asp Ile Phe Glu Ala Gln Lys Ile Glu Trp His Glu Asn Leu Tyr Phe

290 295 300

Gln Gly His His His His His His His His

305 310

<210> 79

<211> 235

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：ratNotch2-EGF6-10

<400> 79

Ala Gly Ser Asp Ser Pro Tyr Val Pro Cys Ala Pro Ser Pro Cys Val

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Asn Gly Gly Thr Cys Arg Gln Thr Gly Asp Phe Thr Ser Glu Cys His

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Cys Leu Pro Gly Phe Glu Gly Ser Asn Cys Glu Arg Asn Ile Asp Asp

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Cys Pro Asn His Lys Cys Gln Asn Gly Gly Val Cys Val Asp Gly Val

50 55 60

Asn Thr Tyr Asn Cys Arg Cys Pro Pro Gln Trp Thr Gly Gln Phe Cys

65 70 75 80

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100 105 110

Asn Gly Trp Ser Gly Asp Asp Cys Ser Glu Asn Ile Asp Asp Cys Ala

115 120 125

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130 135 140

Phe Ser Cys Leu Cys Pro Glu Gly Lys Ala Gly Leu Leu Cys His Leu

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Asp Asp Ala Cys Ile Ser Asn Pro Cys His Lys Gly Ala Leu Cys Asp

165 170 175

Thr Asn Pro Leu Asn Gly Gln Tyr Ile Cys Thr Cys Pro Gln Ala Tyr

180 185 190

Lys Gly Ala Asp Cys Thr Glu Asp Val Asp Glu Gly Asn Ser Gly Leu

195 200 205

Asn Asp Ile Phe Glu Ala Gln Lys Ile Glu Trp His Glu Asn Leu Tyr

210 215 220

Phe Gln Gly His His His His His His His His

225 230 235

<210> 80

<211> 37

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：muNotch2 EGF7（氨基酸 260 至 296）

<400> 80

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Gly Gln Phe Cys Thr

35

<210> 81

<211> 2471

<212> PRT

<213> 大鼠

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(2471)

<223> 大鼠 Notch2，具有信号序列（氨基酸 1 至 25）

<400> 81

Met Pro Ala Leu Arg Pro Ala Ala Leu Arg Ala Leu Leu Trp Leu Trp

1 5 10 15

Leu Cys Gly Ala Gly Pro Ala His Ala Leu Gln Cys Arg Gly Gly Gln

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165 170 175

Gln Lys Cys Asp Ala Asp Ile Asn Glu Cys Asp Ile Pro Gly Arg Cys

180 185 190

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195 200 205

Cys Pro Gln Arg Phe Thr Gly Gln His Cys Asp Ser Pro Tyr Val Pro

210 215 220

Cys Ala Pro Ser Pro Cys Val Asn Gly Gly Thr Cys Arg Gln Thr Gly

225 230 235 240

Asp Phe Thr Ser Glu Cys His Cys Leu Pro Gly Phe Glu Gly Ser Asn

245 250 255

Cys Glu Arg Asn Ile Asp Asp Cys Pro Asn His Lys Cys Gln Asn Gly

260 265 270

Gly Val Cys Val Asp Gly Val Asn Thr Tyr Asn Cys Arg Cys Pro Pro

275 280 285

Gln Trp Thr Gly Gln Phe Cys Thr Glu Asp Val Asp Glu Cys Leu Leu

290 295 300

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Gly Tyr Gly Cys Val Cys Val Asn Gly Trp Ser Gly Asp Asp Cys Ser

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885 890 895

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Gly Leu Leu Cys Glu Glu Asn Ile Asp Asp Cys Ala Gly Ala Pro

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His Cys Leu Asn Gly Gly Gln Cys Val Asp Arg Ile Gly Gly Tyr

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Ser Cys Arg Cys Leu Pro Gly Phe Ala Gly Glu Arg Cys Glu Gly

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Asp Ile Asn Glu Cys Leu Ser Asn Pro Cys Ser Ser Glu Gly Ser

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Val Ala Val Val Ile Ile Leu Phe Leu Ile Leu Leu Gly Val Ile

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Gly Asp Asp Glu Gly Pro Gln Pro Lys Lys Ala Lys Ala Glu Asp

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Ser Leu Ala Leu Thr Pro Pro Gln Ala Glu Gln Glu Val Asp Val

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Leu Asp Val Asn Val Arg Gly Pro Asp Gly Cys Thr Pro Leu Met

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Leu Ala Ser Leu Arg Gly Gly Ser Ser Asp Leu Ser Asp Glu Asp

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Met Ala Leu His Leu Ala Ala Arg Tyr Ser Arg Ala Asp Ala Ala

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Gly Val Phe Gln Ile Leu Ile Arg Asn Arg Val Thr Asp Leu Asp

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Thr Val Leu Thr Ser Ala Leu Ser Pro Val Leu Cys Gly Pro Asn

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Arg Ser Phe Leu Ser Leu Lys His Thr Pro Met Gly Lys Lys Ala

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Leu Ala Lys Glu Ala Lys Asp Val Lys Gly Ser Arg Arg Lys Lys

2120 2125 2130

Cys Leu Asn Glu Lys Val Gln Leu Ser Glu Ser Ser Val Thr Leu

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Ser Pro Val Asp Ser Leu Glu Ser Pro His Thr Tyr Val Ser Asp

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Ala Thr Ser Ser Pro Met Ile Thr Ser Pro Gly Ile Leu Gln Ala

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Ser Pro Thr Pro Leu Leu Ala Ala Ala Pro Ala Ala Pro Val His

2180 2185 2190

Ala Gln His Ala Leu Ser Phe Ser Asn Leu His Glu Met Gln Pro

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Leu Arg Pro Gly Ala Ser Thr Val Leu Pro Ser Val Ser Gln Leu

2210 2215 2220

Leu Ser His His His Ile Val Pro Pro Gly Ser Gly Ser Ala Gly

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Asn Arg Val Glu Met Ser Glu Thr Gln Tyr Ser Glu Met Phe Gly

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Met Val Leu Ala Pro Ala Glu Gly Thr His Pro Gly Met Ala Ala

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Glu Pro Leu Pro Pro Ile Val Thr Phe Gln Leu Ile Pro Lys Gly

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Ser Leu Ala Gln Ala Ala Gly Ala Pro Gln Thr Gln Ser Gly Cys

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Pro Pro Ala Val Ala Gly Pro Leu Pro Ser Met Tyr Gln Ile Pro

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Glu Met Ala Arg Leu Pro Ser Val Ala Phe Pro Pro Thr Met Met

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Pro Gln Gln Glu Gly Gln Val Ala Gln Thr Ile Val Pro Thr Tyr

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His Pro Phe Pro Ala Ser Val Gly Lys Tyr Pro Thr Pro Pro Ser

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His Gly Gly His Leu Gln Gly Glu His Pro Tyr Leu Thr Pro Ser

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Pro Glu Ser Pro Asp Gln Trp Ser Ser Ser Ser Pro His Ser Ala

2420 2425 2430

Ser Asp Trp Ser Asp Val Thr Thr Ser Pro Thr Pro Gly Gly Gly

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Gly Gly Gly Gln Arg Gly Pro Gly Thr His Met Ser Glu Pro Pro

2450 2455 2460

His Ser Asn Met Gln Val Tyr Ala

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<210> 82

<211> 193

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：huNotch2-EGF4-7

<400> 82

Gly Ser Gln Trp Thr Asp Ala Cys Leu Ser His Pro Cys Ala Asn Gly

1 5 10 15

Ser Thr Cys Thr Thr Val Ala Asn Gln Phe Ser Cys Lys Cys Leu Thr

20 25 30

Gly Phe Thr Gly Gln Lys Cys Glu Thr Asp Val Asn Glu Cys Asp Ile

35 40 45

Pro Gly His Cys Gln His Gly Gly Thr Cys Leu Asn Leu Pro Gly Ser

50 55 60

Tyr Gln Cys Gln Cys Leu Gln Gly Phe Thr Gly Gln Tyr Cys Asp Ser

65 70 75 80

Leu Tyr Val Pro Cys Ala Pro Ser Pro Cys Val Asn Gly Gly Thr Cys

85 90 95

Arg Gln Thr Gly Asp Phe Thr Phe Glu Cys Asn Cys Leu Pro Gly Phe

100 105 110

Glu Gly Ser Thr Cys Glu Arg Asn Ile Asp Asp Cys Pro Asn His Arg

115 120 125

Cys Gln Asn Gly Gly Val Cys Val Asp Gly Val Asn Thr Tyr Asn Cys

130 135 140

Arg Cys Pro Pro Gln Trp Thr Gly Gln Phe Cys Thr Glu Asp Val Asp

145 150 155 160

Glu Gly Asn Ser Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu Ala Gln Lys Ile Glu

165 170 175

Trp His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly His His His His His His His

180 185 190

His

<210> 83

<211> 196

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：huNotch2-EGF5-8

<400> 83

Gly Ser Glu Thr Asp Val Asn Glu Cys Asp Ile Pro Gly His Cys Gln

1 5 10 15

His Gly Gly Thr Cys Leu Asn Leu Pro Gly Ser Tyr Gln Cys Gln Cys

20 25 30

Leu Gln Gly Phe Thr Gly Gln Tyr Cys Asp Ser Leu Tyr Val Pro Cys

35 40 45

Ala Pro Ser Pro Cys Val Asn Gly Gly Thr Cys Arg Gln Thr Gly Asp

50 55 60

Phe Thr Phe Glu Cys Asn Cys Leu Pro Gly Phe Glu Gly Ser Thr Cys

65 70 75 80

Glu Arg Asn Ile Asp Asp Cys Pro Asn His Arg Cys Gln Asn Gly Gly

85 90 95

Val Cys Val Asp Gly Val Asn Thr Tyr Asn Cys Arg Cys Pro Pro Gln

100 105 110

Trp Thr Gly Gln Phe Cys Thr Glu Asp Val Asp Glu Cys Leu Leu Gln

115 120 125

Pro Asn Ala Cys Gln Asn Gly Gly Thr Cys Ala Asn Arg Asn Gly Gly

130 135 140

Tyr Gly Cys Val Cys Val Asn Gly Trp Ser Gly Asp Asp Cys Ser Glu

145 150 155 160

Asn Ile Asp Asp Gly Asn Ser Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu Ala Gln

165 170 175

Lys Ile Glu Trp His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly His His His His

180 185 190

His His His His

195

<210> 84

<211> 140

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：huNotch2-EGF7-9

<400> 84

Ala His His His His His His Gly Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Ser

1 5 10 15

Glu Arg Asn Ile Asp Asp Cys Pro Asn His Arg Cys Gln Asn Gly Gly

20 25 30

Val Cys Val Asp Gly Val Asn Thr Tyr Asn Cys Arg Cys Pro Pro Gln

35 40 45

Trp Thr Gly Gln Phe Cys Thr Glu Asp Val Asp Glu Cys Leu Leu Gln

50 55 60

Pro Asn Ala Cys Gln Asn Gly Gly Thr Cys Ala Asn Arg Asn Gly Gly

65 70 75 80

Tyr Gly Cys Val Cys Val Asn Gly Trp Ser Gly Asp Asp Cys Ser Glu

85 90 95

Asn Ile Asp Asp Cys Ala Phe Ala Ser Cys Thr Pro Gly Ser Thr Cys

100 105 110

Ile Asp Arg Val Ala Ser Phe Ser Cys Met Cys Pro Glu Gly Lys Ala

115 120 125

Gly Leu Leu Cys His Leu Asp Asp Ala Gly Asn Ser

130 135 140

<210> 85

<211> 235

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：huNotch1

<400> 85

Ala Gly Ser Glu Arg Pro Tyr Val Pro Cys Ser Pro Ser Pro Cys Gln

1 5 10 15

Asn Gly Gly Thr Cys Arg Pro Thr Gly Asp Val Thr His Glu Cys Ala

20 25 30

Cys Leu Pro Gly Phe Thr Gly Gln Asn Cys Glu Glu Asn Ile Asp Asp

35 40 45

Cys Pro Gly Asn Asn Cys Lys Asn Gly Gly Ala Cys Val Asp Gly Val

50 55 60

Asn Thr Tyr Asn Cys Arg Cys Pro Pro Glu Trp Thr Gly Gln Tyr Cys

65 70 75 80

Thr Glu Asp Val Asp Glu Cys Gln Leu Met Pro Asn Ala Cys Gln Asn

85 90 95

Gly Gly Thr Cys His Asn Thr His Gly Gly Tyr Asn Cys Val Cys Val

100 105 110

Asn Gly Trp Thr Gly Glu Asp Cys Ser Glu Asn Ile Asp Asp Cys Ala

115 120 125

Ser Ala Ala Cys Phe His Gly Ala Thr Cys His Asp Arg Val Ala Ser

130 135 140

Phe Tyr Cys Glu Cys Pro His Gly Arg Thr Gly Leu Leu Cys His Leu

145 150 155 160

Asn Asp Ala Cys Ile Ser Asn Pro Cys Asn Glu Gly Ser Asn Cys Asp

165 170 175

Thr Asn Pro Val Asn Gly Lys Ala Ile Cys Thr Cys Pro Ser Gly Tyr

180 185 190

Thr Gly Pro Ala Cys Ser Gln Asp Val Asp Glu Gly Asn Ser Gly Leu

195 200 205

Asn Asp Ile Phe Glu Ala Gln Lys Ile Glu Trp His Glu Asn Leu Tyr

210 215 220

Phe Gln Gly His His His His His His His His

225 230 235

<210> 86

<211> 312

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：huNotch3

<400> 86

Gly Ser Glu Asn Pro Ala Val Pro Cys Ala Pro Ser Pro Cys Arg Asn

1 5 10 15

Gly Gly Thr Cys Arg Gln Ser Gly Asp Leu Thr Tyr Asp Cys Ala Cys

20 25 30

Leu Pro Gly Phe Glu Gly Gln Asn Cys Glu Val Asn Val Asp Asp Cys

35 40 45

Pro Gly His Arg Cys Leu Asn Gly Gly Thr Cys Val Asp Gly Val Asn

50 55 60

Thr Tyr Asn Cys Gln Cys Pro Pro Glu Trp Thr Gly Gln Phe Cys Thr

65 70 75 80

Glu Asp Val Asp Glu Cys Gln Leu Gln Pro Asn Ala Cys His Asn Gly

85 90 95

Gly Thr Cys Phe Asn Thr Leu Gly Gly His Ser Cys Val Cys Val Asn

100 105 110

Gly Trp Thr Gly Glu Ser Cys Ser Gln Asn Ile Asp Asp Cys Ala Thr

115 120 125

Ala Val Cys Phe His Gly Ala Thr Cys His Asp Arg Val Ala Ser Phe

130 135 140

Tyr Cys Ala Cys Pro Met Gly Lys Thr Gly Leu Leu Cys His Leu Asp

145 150 155 160

Asp Ala Cys Val Ser Asn Pro Cys His Glu Asp Ala Ile Cys Asp Thr

165 170 175

Asn Pro Val Asn Gly Arg Ala Ile Cys Thr Cys Pro Pro Gly Phe Thr

180 185 190

Gly Gly Ala Cys Asp Gln Asp Val Asp Glu Cys Ser Ile Gly Ala Asn

195 200 205

Pro Cys Glu His Leu Gly Arg Cys Val Asn Thr Gln Gly Ser Phe Leu

210 215 220

Cys Gln Cys Gly Arg Gly Tyr Thr Gly Pro Arg Cys Glu Thr Asp Val

225 230 235 240

Asn Glu Cys Leu Ser Gly Pro Cys Arg Asn Gln Ala Thr Cys Leu Asp

245 250 255

Arg Ile Gly Gln Phe Thr Cys Ile Cys Met Ala Gly Phe Thr Gly Thr

260 265 270

Tyr Cys Glu Val Asp Ile Asp Glu Gly Asn Ser Gly Leu Asn Asp Ile

275 280 285

Phe Glu Ala Gln Lys Ile Glu Trp His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly

290 295 300

His His His His His His His His

305 310

<210> 87

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu1B2.L1、hu1B2.L7、hu.1B2.v101、hu.1B2.v102、

hu.1B2.v103、hu.1B2.v104 的 LC-FR1

<400> 87

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys

20

<210> 88

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu1B2.L1、hu1B2.L7、hu.1B2.v101、hu.1B2.v102、

hu.1B2.v103、hu.1B2.v104 的 LC-FR2

<400> 88

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 89

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu1B2.L1 的 LC-FR3

<400> 89

Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys

20 25 30

<210> 90

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu1B2.L7、hu.1B2.v101、hu.1B2.v102、hu.1B2.v103、

hu.1B2.v104 的 LC-FR3

<400> 90

Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 91

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu1B2.L1、hu1B2.L7、hu.1B2.v101、hu.1B2.v102、

hu.1B2.v103、hu.1B2.v104 的 LC-FR4

<400> 91

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

1 5 10

<210> 92

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu.1B2.v1.DFS.H1、hu.1B2.H10、

hu.1B2.DFS.H14、hu.1B2.H1.N54D.S51Q、hu.1B2.v2、hu.1B2.v4、

hu.1B2.v8、hu.1B2.v9、hu1B2.v101、hu1B2.v102、hu1B2.v103、

hu1B2.v104 的 HC-FR1

<400> 92

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser

20 25 30

<210> 93

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu.1B2.v1.DFS.H1、hu.1B2.H1.N54D.S51Q、hu.1B2.v2、

hu.1B2.v4、hu.1B2.v8、hu.1B2.v9 的 HC-FR2

<400> 93

Trp Ile Arg Gln Ala Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Ala

1 5 10

<210> 94

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu.1B2.H10、hu.1B2.DFS.H14、hu1B2.v101、hu1B2.v102、

hu1B2.v103、hu1B2.v104 的 HC-FR2

<400> 94

Trp Val Arg Gln Ala Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala

1 5 10

<210> 95

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu.1B2.v1.DFS.H1、hu.1B2.H1.N54D.S51Q、hu.1B2.v2、

hu.1B2.v4、hu.1B2.v8、hu.1B2.v9 的 HC-FR3

<400> 95

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Thr Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg

20 25 30

<210> 96

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu.1B2.DFS.H14、hu1B2.v101、hu1B2.v102、hu1B2.v103、

hu1B2.v104 的 HC-FR3

<400> 96

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Thr Leu Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg

20 25 30

<210> 97

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu.1B2.v1.DFS.H1、hu.1B2.H10、

hu.1B2.DFS.H14、hu.1B2.H1.N54D.S51Q、hu.1B2.v2、hu.1B2.v4、

hu.1B2.v8、hu.1B2.v9、hu1B2.v101、hu1B2.v102、hu1B2.v103、

hu1B2.v104 的 HC-FR4

<400> 97

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 98

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu.3107.L1 VL

<400> 98

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Asp Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Ile Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser

85 90 95

Thr His Phe Pro Asp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 99

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu.3107.L6 VL

<400> 99

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Asp Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ile Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile

65 70 75 80

Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser

85 90 95

Thr His Phe Pro Asp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 100

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu.3107.L7 VL

<400> 100

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Asp Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ile Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile

65 70 75 80

Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser

85 90 95

Thr His Phe Pro Asp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 101

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu.3107.V1-2.H1 VH

<400> 101

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asn Tyr

20 25 30

Val Ile His Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Pro Glu Trp Thr

35 40 45

Gly Tyr Ile Ile Pro Gly Ser Gly Gly Thr Lys Phe Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Val Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Gly Ala Gly Ser Phe Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 102

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu.3107.H12 VH

<400> 102

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asn Tyr

20 25 30

Val Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Pro Glu Trp Thr

35 40 45

Gly Tyr Ile Ile Pro Gly Ser Gly Gly Thr Lys Phe Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Ala Thr Ser Thr Val Asp Thr Ser Ser Thr Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Val Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Gly Ala Gly Ser Phe Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 103

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu.3107.H13 VH

<400> 103

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asn Tyr

20 25 30

Val Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Pro Glu Trp Thr

35 40 45

Gly Tyr Ile Ile Pro Gly Ser Gly Gly Thr Lys Phe Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Ala Thr Ser Thr Val Asp Thr Ser Ile Thr Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Val Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Gly Ala Gly Ser Phe Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 104

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu.3107.V5-51.H1 VH

<400> 104

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asn Tyr

20 25 30

Val Ile His Trp Ile Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Thr

35 40 45

Gly Tyr Ile Ile Pro Gly Ser Gly Gly Thr Lys Phe Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Gln Ala Thr Leu Ser Val Asp Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Gly Ala Gly Ser Phe Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 105

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu.3107.H14 VH

<400> 105

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asn Tyr

20 25 30

Val Ile His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Thr

35 40 45

Gly Tyr Ile Ile Pro Gly Ser Gly Gly Thr Lys Phe Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Gln Ala Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Gly Ala Gly Ser Phe Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 106

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu.3107.H15 VH

<400> 106

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asn Tyr

20 25 30

Val Ile His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Thr

35 40 45

Gly Tyr Ile Ile Pro Gly Ser Gly Gly Thr Lys Phe Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Gln Ala Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Ile Thr Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Gly Ala Gly Ser Phe Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 107

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的：hu.1B2.H10 的 HC-FR3

<400> 107

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Thr Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg

20 25 30

Claims (67)

1.一种与人Notch2结合的分离的抗体，其中所述抗体抑制Jagged1介导的信号传导，但不抑制DLL1介导的信号传导。

2.一种与人Notch2结合的分离的抗体，其中所述抗体抑制Jagged1介导的信号传导的程度大于抑制DLL1介导的信号传导。

3.根据权利要求2所述的分离的抗体，其中所述抗体能够实现对Jagged1介导的信号传导的最大抑制为100％，并且对DLL1介导的信号传导的最大抑制为小于80％、或小于70％、或小于60％。

4.根据权利要求2或权利要求3所述的分离的抗体，其中所述抗体为Fab片段。

5.根据权利要求4所述的分离的抗体，其中所述抗体当为包含两条重链和两条轻链的二价IgG抗体的形式时，抑制Jagged1介导的信号传导，但不抑制DLL1介导的信号传导。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体不抑制Jagged1与Notch2的结合。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体不抑制DLL1与Notch2的结合。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体结合Notch2的EGF7重复序列内的表位。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体结合Notch2的氨基酸260至296内的表位。

10.根据权利要求1至8中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体结合Notch2的氨基酸260至296内的不连续表位。

11.一种与Notch2结合的分离的抗体，其中所述抗体结合Notch2的EGF7重复序列内的表位。

12.一种与Notch2结合的分离的抗体，其中所述抗体结合Notch2的氨基酸260至296内的表位。

13.一种与Notch2结合的分离的抗体，其中所述抗体结合Notch2的氨基酸260至296内的不连续表位。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体接触人Notch2的精氨酸268(R268)。

15.根据权利要求14所述的分离的抗体，其中所述抗体不结合包含赖氨酸268(K268)的Notch2。

16.根据权利要求1至15中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体结合包含SEQ IDNO:74的氨基酸序列的多肽，并且不结合包含SEQ ID NO:77的氨基酸序列的多肽。

17.根据权利要求1至16中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体与人Notch2和食蟹猴Notch2结合。

18.根据权利要求1至17中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体不与小鼠Notch2结合。

19.根据权利要求1至18中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体与豚鼠Notch2结合。

20.根据权利要求1至19中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体不与人Notch1或人Notch3结合。

21.根据权利要求1至20中任一项所述的分离的抗体，其中如通过表面等离子体共振所确定的，所述抗体以小于20nM、小于15nM、小于10nM或小于5nM的亲和力(K_D)结合人Notch2。

22.根据权利要求1至21中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体以小于20nM、小于15nM、小于10nM或小于5nM的IC50抑制Jagged1介导的信号传导。

23.根据权利要求22所述的分离的抗体，其中对Jagged1介导的信号传导的抑制是使用高内涵筛选(HCS)测定来确定的。

24.根据权利要求1至23中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含：

a)重链可变结构域(VH)，其包含(a)含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的CDR-H1，(b)含有SEQ ID NO:6或7的氨基酸序列的CDR-H2和(c)含有SEQ ID NO:8、9、10、11或12的氨基酸序列的CDR-H3；以及轻链可变结构域(VL)，其包含(d)含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的CDR-L1，(e)含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的CDR-L2和(f)含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的CDR-L3；

b)重链可变结构域(VH)，其包含(a)含有SEQ ID NO:36的氨基酸序列的CDR-H1，(b)含有SEQ ID NO:37的氨基酸序列的CDR-H2和(c)含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR-H3；以及轻链可变结构域(VL)，其包含(d)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的CDR-L1，(e)含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的CDR-L2和(f)含有SEQ ID NO:35的氨基酸序列的CDR-L3；

c)重链可变结构域(VH)，其包含(a)含有SEQ ID NO:44的氨基酸序列的CDR-H1，(b)含有SEQ ID NO:45的氨基酸序列的CDR-H2和(c)含有SEQ ID NO:46的氨基酸序列的CDR-H3；以及轻链可变结构域(VL)，其包含(d)含有SEQ ID NO:41的氨基酸序列的CDR-L1，(e)含有SEQ ID NO:42的氨基酸序列的CDR-L2和(f)含有SEQ ID NO:43的氨基酸序列的CDR-L3；

d)重链可变结构域(VH)，其包含(a)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的CDR-H1，(b)含有SEQ ID NO:54的氨基酸序列的CDR-H2和(c)含有SEQ ID NO:55的氨基酸序列的CDR-H3；以及轻链可变结构域(VL)，其包含(d)含有SEQ ID NO:49的氨基酸序列的CDR-L1，(e)含有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的CDR-L2和(f)含有SEQ ID NO:51或52的氨基酸序列的CDR-L3；或

e)重链可变结构域(VH)，其包含(a)含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的CDR-H1，(b)含有SEQ ID NO:63的氨基酸序列的CDR-H2和(c)含有SEQ ID NO:64的氨基酸序列的CDR-H3；以及轻链可变结构域(VL)，其包含(d)含有SEQ ID NO:59的氨基酸序列的CDR-L1，(e)含有SEQ ID NO:60的氨基酸序列的CDR-L2和(f)含有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的CDR-L3。

25.一种与人Notch2结合的分离的抗体，其中所述抗体包含：

a)重链可变结构域(VH)，其包含(a)含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的CDR-H1，(b)含有SEQ ID NO:6或7的氨基酸序列的CDR-H2和(c)含有SEQ ID NO:8、9、10、11或12的氨基酸序列的CDR-H3；以及轻链可变结构域(VL)，其包含(d)含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的CDR-L1，(e)含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的CDR-L2和(f)含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的CDR-L3；

b)重链可变结构域(VH)，其包含(a)含有SEQ ID NO:36的氨基酸序列的CDR-H1，(b)含有SEQ ID NO:37的氨基酸序列的CDR-H2和(c)含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR-H3；以及轻链可变结构域(VL)，其包含(d)含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的CDR-L1，(e)含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的CDR-L2和(f)含有SEQ ID NO:35的氨基酸序列的CDR-L3；

c)重链可变结构域(VH)，其包含(a)含有SEQ ID NO:44的氨基酸序列的CDR-H1，(b)含有SEQ ID NO:45的氨基酸序列的CDR-H2和(c)含有SEQ ID NO:46的氨基酸序列的CDR-H3；以及轻链可变结构域(VL)，其包含(d)含有SEQ ID NO:41的氨基酸序列的CDR-L1，(e)含有SEQ ID NO:42的氨基酸序列的CDR-L2和(f)含有SEQ ID NO:43的氨基酸序列的CDR-L3；

d)重链可变结构域(VH)，其包含(a)含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的CDR-H1，(b)含有SEQ ID NO:54的氨基酸序列的CDR-H2和(c)含有SEQ ID NO:55的氨基酸序列的CDR-H3；以及轻链可变结构域(VL)，其包含(d)含有SEQ ID NO:49的氨基酸序列的CDR-L1，(e)含有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的CDR-L2和(f)含有SEQ ID NO:51或52的氨基酸序列的CDR-L3；或

e)重链可变结构域(VH)，其包含(a)含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的CDR-H1，(b)含有SEQ ID NO:63的氨基酸序列的CDR-H2和(c)含有SEQ ID NO:64的氨基酸序列的CDR-H3；以及轻链可变结构域(VL)，其包含(d)含有SEQ ID NO:59的氨基酸序列的CDR-L1，(e)含有SEQ ID NO:60的氨基酸序列的CDR-L2和(f)含有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的CDR-L3。

26.根据权利要求1至25中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含：

a)VH序列，其与SEQ ID NO:14的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；

b)VL序列，其与SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；

c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列；

d)VH序列，其与选自SEQ ID NO:17至24、26、28、30和32的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；

e)VL序列，其与选自SEQ ID NO:15、16、25、27、29和31的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；

f)如(d)中定义的VH序列和如(e)中定义的VL序列；

g)VH序列，其与SEQ ID NO:40的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；

h)VL序列，其与SEQ ID NO:39的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；

i)如(g)中定义的VH序列和如(h)中定义的VL序列；

j)VH序列，其与选自SEQ ID NO:102至106的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；

k)VL序列，其与选自SEQ ID NO:98至100的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；

l)如(j)中定义的VH序列和如(k)中定义的VL序列；

m)VH序列，其与SEQ ID NO:48的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；

n)VL序列，其与SEQ ID NO:47的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；

o)如(m)中定义的VH序列和如(n)中定义的VL序列；

p)VH序列，其与SEQ ID NO:58的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；

q)VL序列，其与SEQ ID NO:56或57的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；

r)如(p)中定义的VH序列和如(q)中定义的VL序列；

s)VH序列，其与SEQ ID NO:66的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；

t)VL序列，其与SEQ ID NO:65的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；或

u)如(s)中定义的VH序列和如(t)中定义的VL序列。

27.根据权利要求1至26中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含：

a)VH序列，其包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；

b)VL序列，其包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列；

c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列；

d)VH序列，其包含选自SEQ ID NO:17至24、26、28、30和32的氨基酸序列；

e)VL序列，其包含选自SEQ ID NO:15、16、25、27、29和31的氨基酸序列；

f)如(d)中定义的VH序列和如(e)中定义的VL序列；

g)VH序列，其包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列；

h)VL序列，其包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列；

i)如(g)中定义的VH序列和如(h)中定义的VL序列；

j)VH序列，其包含选自SEQ ID NO:101至106的氨基酸序列；

k)VL序列，其包含选自SEQ ID NO:98至100的氨基酸序列；

l)如(j)中定义的VH序列和如(k)中定义的VL序列；

m)VH序列，其包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列；

n)VL序列，其包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列；

o)如(m)中定义的VH序列和如(n)中定义的VL序列；

p)VH序列，其包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列；

q)VL序列，其包含SEQ ID NO:56或57的氨基酸序列；

r)如(p)中定义的VH序列和如(q)中定义的VL序列；

s)VH序列，其包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列；

t)VL序列，其包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列；或

u)如(s)中定义的VH序列和如(t)中定义的VL序列。

28.一种与人Notch2结合的分离的抗体，其中所述抗体包含：

a)VH序列，其包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；

b)VL序列，其包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列；

c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列；

d)VH序列，其包含选自SEQ ID NO:17至24、26、28、30和32的氨基酸序列；

e)VL序列，其包含选自SEQ ID NO:15、16、25、27、29和31的氨基酸序列；

f)如(d)中定义的VH序列和如(e)中定义的VL序列；

g)VH序列，其包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列；

h)VL序列，其包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列；

i)如(g)中定义的VH序列和如(h)中定义的VL序列；

j)VH序列，其包含选自SEQ ID NO:101至106的氨基酸序列；

k)VL序列，其包含选自SEQ ID NO:98至100的氨基酸序列；

l)如(j)中定义的VH序列和如(k)中定义的VL序列；

m)VH序列，其包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列；

n)VL序列，其包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列；

o)如(m)中定义的VH序列和如(n)中定义的VL序列；

p)VH序列，其包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列；

q)VL序列，其包含SEQ ID NO:56或57的氨基酸序列；

r)如(p)中定义的VH序列和如(q)中定义的VL序列；

s)VH序列，其包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列；

t)VL序列，其包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列；或

u)如(s)中定义的VH序列和如(t)中定义的VL序列。

29.根据权利要求1至25中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含：

a)VH序列，其与选自SEQ ID NO:17至24、26、28、30和32的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；

b)VL序列，其与选自SEQ ID NO:15、16、25、27、29和31的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；

c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列；

d)VH序列，其与选自SEQ ID NO:102至106的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；

e)VL序列，其与选自SEQ ID NO:98至100的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；或

f)如(d)中定义的VH序列和如(e)中定义的VL序列。

30.根据权利要求1至25和29中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：

a)VH序列，其包含选自SEQ ID NO:17至24、26、28、30和32的氨基酸序列；

b)VL序列，其包含选自SEQ ID NO:15、16、25、27、29和31的氨基酸序列；

c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列；

d)VH序列，其包含选自SEQ ID NO:101至106的氨基酸序列；

e)VL序列，其包含选自SEQ ID NO:98至100的氨基酸序列；或

f)如(d)中定义的VH序列和如(e)中定义的VL序列。

31.根据权利要求1至25中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体：

a)包含SEQ ID NO:26的VH序列和SEQ ID NO:25的VL序列；

b)包含SEQ ID NO:28的VH序列和SEQ ID NO:27的VL序列；

c)包含SEQ ID NO:30的VH序列和SEQ ID NO:29的VL序列；或

d)包含SEQ ID NO:32的VH序列和SEQ ID NO:31的VL序列。

32.一种与人Notch2结合的分离的抗体，其中所述抗体：

a)包含SEQ ID NO:26的VH序列和SEQ ID NO:25的VL序列；

b)包含SEQ ID NO:28的VH序列和SEQ ID NO:27的VL序列；

c)包含SEQ ID NO:30的VH序列和SEQ ID NO:29的VL序列；或

d)包含SEQ ID NO:32的VH序列和SEQ ID NO:31的VL序列。

33.根据权利要求1至32中任一项所述的分离的抗体，其为单克隆抗体。

34.根据权利要求1至33中任一项所述的分离的抗体，其为人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。

35.根据权利要求1至34中任一项所述的分离的抗体，其为结合Notch2的抗体片段。

36.根据权利要求35所述的分离的抗体，其中所述抗体片段选自Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH和F(ab')₂。

37.根据权利要求36所述的分离的抗体，其中所述抗体片段为Fab、Fab'或Fab'-SH。

38.根据权利要求1至3和6至37中任一项所述的分离的抗体，其为全长抗体。

39.根据权利要求38所述的分离的抗体，其中所述抗体为全长IgG抗体。

40.根据权利要求39所述的分离的抗体，其中所述抗体为IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体。

41.一种分离的抗体，其与根据权利要求1至40中任一项所述的抗体竞争与人Notch2结合。

42.一种分离的核酸，其编码根据权利要求1至41中任一项所述的抗体。

43.一种宿主细胞，其包含根据权利要求42所述的核酸。

44.一种宿主细胞，其表达根据权利要求1至41中任一项所述的抗体。

45.一种生产与人Notch2结合的抗体的方法，其包括在适合表达所述抗体的条件下培养根据权利要求43或权利要求44所述的宿主细胞。

46.根据权利要求45所述的方法，其进一步包括从所述宿主细胞回收所述抗体。

47.一种抗体，其通过根据权利要求45或权利要求46所述的方法生产。

48.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至41中任一项所述的抗体以及药用载体。

49.根据权利要求48所述的药物组合物，其进一步包含另外的治疗剂。

50.根据权利要求49所述的药物组合物，其中所述另外的治疗剂选自高渗盐水、甘露醇、阿法链道酶、N-乙酰半胱氨酸、半胱胺和支气管扩张剂。

51.根据权利要求1至41中任一项所述的抗体或根据权利要求48至50中任一项所述的药物组合物，其用作药物。

52.根据权利要求1至41中任一项所述的抗体或根据权利要求48至50中任一项所述的药物组合物，其用于治疗黏液阻塞性肺疾病。

53.根据权利要求52所述使用的抗体，其中所述黏液阻塞性肺疾病选自慢性阻塞性肺疾病(COPD)、囊性纤维化、原发性纤毛运动障碍、非囊性纤维化支气管扩张和细支气管炎。

54.根据权利要求1至41中任一项所述的抗体或根据权利要求48至50中任一项所述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗黏液阻塞性肺疾病。

55.根据权利要求54所述的用途，其中所述黏液阻塞性肺疾病选自慢性阻塞性肺疾病(COPD)、囊性纤维化、原发性纤毛运动障碍、非囊性纤维化支气管扩张和细支气管炎。

56.根据权利要求1至41中任一项所述的抗体或根据权利要求48至50中任一项所述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于减少受试者的分泌细胞的数量。

57.根据权利要求56所述的用途，所述药物将分泌细胞转化为纤毛细胞。

58.根据权利要求56或权利要求57所述的用途，其中所述分泌细胞在所述受试者的肺中。

59.根据权利要求56至58中任一项所述的用途，其中所述分泌细胞为杯状细胞。

60.一种治疗患有黏液阻塞性肺疾病的受试者的方法，其包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求1至41中任一项所述的抗体或根据权利要求48至50中任一项所述的药物组合物。

61.根据权利要求60所述的方法，其中所述黏液阻塞性肺疾病选自慢性阻塞性肺疾病(COPD)、囊性纤维化、原发性纤毛运动障碍、非囊性纤维化支气管扩张和细支气管炎。

62.一种减少受试者的分泌细胞的数量的方法，其包括向个体施用有效量的根据权利要求1至41中任一项所述的抗体或根据权利要求48至50中任一项所述的药物组合物以耗尽所述受试者的分泌细胞。

63.根据权利要求62所述的方法，其中所述方法包括将分泌细胞转化为纤毛细胞。

64.根据权利要求62或权利要求63所述的方法，其中所述分泌细胞在所述受试者的肺中。

65.根据权利要求62至64中任一项所述的方法，其中所述分泌细胞为杯状细胞。

66.根据权利要求60至65中任一项所述的方法，其进一步包括向所述受试者施用另外的治疗剂。

67.根据权利要求66所述的方法，其中所述另外的治疗剂选自高渗盐水、甘露醇、阿法链道酶、N-乙酰半胱氨酸、半胱胺和支气管扩张剂。

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