CN115960885A - 一种提取肝素钠样品中核酸的方法及组合物 - Google Patents
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Abstract
本公开提供一种核酸提取方法及组合物，属于生物技术领域，具体涉及一种肝素钠样本中病毒核酸提取的方法及其组合物。本公开的方法利用降低裂解液和/或洗涤液中的乙醇含量有效提高了核酸扩增效率。
Description
技术领域
本公开属于核酸提取领域，具体涉及一种肝素钠样本中核酸提取的方法及其组合物。
背景技术
肝素作为一种抗凝剂，是由二种多糖交替连接而成的多聚体，在体内外都有抗凝血作用。临床上可用于血栓栓塞性疾病、心肌梗死、心血管手术、心脏导管检查、体外循环、血液透析等多种疾病的治疗。同时肝素作为公认的PCR强抑制剂，具有和核酸相近似的特性，会结合聚合酶活性位点抑制PCR。因此含肝素的血液、血浆等生物样品在PCR前需要通过不同的前处理方法来去除肝素带来的影响，防止假阴性的发生，或是要求病人提前终止肝素治疗，使其体内肝素含量降低。目前去除肝素的方法第一种是使用肝素酶消化，此类方法耗时较长，且商品化肝素酶价格较为昂贵，Langer等报道利用肝素酶***用于体外治疗，使用肝素酶固定血液过滤器，通过酶降解实现100％去除肝素(Langer R,Linhardt RJ,Cooney CL,Klein M,Tapper D,Hoffberg SM,LarsenA.1982.An enzymatic system forremoving heparin in extracorporeal therapy.Science.217:261–263)。第二种是使用一些介质材料来吸附生物体液中的肝素，如Kaminski等人报道利用一种对于pH敏感的京尼平交联壳聚糖微球，可以从水中高效去除肝素，未来有可能应用于生物医学领域(KaminskiK,Zazakowny K,Szczubialka K,Nowakowska M.pH-Sensitive genipin-cross-linkedchitosan microspheres forheparinremoval.Biomacromolecules.2008；9:3127–3132)，再如
Baydemir等人报道利用分子印迹冷冻凝胶去除血浆中的肝素。第三种则是核酸纯化的方法，可在纯化过程中去除肝素杂质。如CN103952398A所示从肝素制品中提取基因组的方法，整体耗时仅需40min，与前述方法相比，大大缩短时间成本。此外前两种方法成本较高，耗时较长，独特的材料也无法被广泛应用，且这两种方法仅仅去除了样本中的肝素，若需样本中核酸还需要额外的核酸提取试剂盒。
发明内容
本公开的目的是提出一种可以快速从肝素钠血浆样本中提取病毒核酸的方法，通过特异性的裂解、结合、洗涤、漂洗体系，去除样本中所含有的多种杂质，特别是肝素钠。提取的产物可直接应用于PCR等多种下游应用，同时能够兼容含肝素钠样品在内的多种液体样本，为临床应用提供方便。
在第一方面，本公开提供一种液体组合物，所述液体组合物包含缓冲物质、变性剂、表面活性剂和无水乙醇，其中无水乙醇的体积分数为20％-35％。所述液体组合物用于裂解含有肝素钠的血浆样本中的病毒颗粒，释放出病毒DNA和/或RNA核酸。
在一些实施方案中，所述无水乙醇的体积分数为20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％或35％。
在一些实施方案中，所述缓冲物质选自三羟甲基氨基甲烷、3-(N-***啉)丙磺酸(即Mops)、醋酸钠、柠檬酸钠、碳酸钠中的至少一种。
在一些实施方案中，所述变性剂选自异硫氰酸胍、盐酸胍、硫氰酸胍、高氯酸盐、NaI、KI、尿素中的至少一种。
在一些实施方案中，所述表面活性剂选自Triton X-100、吐温-20、吐温-80、NP-40、SDS、CHAPS、脱氧胆酸钠、胆酸钠、甜菜碱、PEG8000中的至少一种、至少两种或至少三种。
在一些实施方案中，所述液体组合物包含三羟甲基氨基甲烷、异硫氰酸胍、吐温-20、Triton X-100和无水乙醇，其中无水乙醇的体积分数为20％-35％。在一些实施方案中，所述三羟甲基氨基甲烷浓度为20mM、异硫氰酸胍浓度为2M、吐温-20体积分数为1％、TritonX100体积分数为0.1％，所述无水乙醇的体积分数为24％-32％。在一些实施方案中，所述无水乙醇的体积分数为20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％或35％。
在一些实施方案中，所述液体组合物还包含金属离子螯合剂。在一些实施方案中，所述金属离子螯合剂选自EDTA·2Na、EDTA·4Na、EDTA、柠檬酸钠、EGTA、HEDTA中的至少一种。在一些实施方案中，金属离子螯合剂为EDTA·2Na，其浓度为5mM。
在一些实施方案中，所述液体组合物还包含甜菜碱，所述甜菜碱的浓度为0.1mM。
在一些实施方案中，所述液体组合物还包含PEG8000，所述PEG8000的体积分数为0.005％。
在一些实施方案中，所述液体组合物的pH为7.0-7.5。在一些实施方案中，所述液体组合物的pH为7.3。
在第二方面，本公开提供一种液体组合物，所述液体组合物包含缓冲物质、金属离子螯合剂、变性剂、表面活性剂和无水乙醇，其中无水乙醇的体积分数为15％-45％。所述液体组合物用于清除残留的蛋白质等杂质。
在一些实施方案中，所述无水乙醇体积分数为15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％或45％。
在一些实施方案中，所述缓冲物质选自三羟甲基氨基甲烷、3-(N-***啉)丙磺酸(即Mops)、醋酸钠、柠檬酸钠、碳酸钠中的至少一种。
在一些实施方案中，所述金属离子螯合剂选自EDTA·2Na、EDTA·4Na、EDTA、柠檬酸钠、EGTA、HEDTA中的至少一种。在一些实施方案中，金属离子螯合剂为EDTA·2Na，其浓度为10mM。
在一些实施方案中，所述变性剂选自异硫氰酸胍、盐酸胍、硫氰酸胍、高氯酸盐、NaI、KI、尿素中的至少一种。
在一些实施方案中，所述表面活性剂选自Triton X-100、吐温-20、吐温-80、NP-40、SDS、CHAPS、脱氧胆酸钠、胆酸钠中的至少一种、至少两种或至少三种。
在一些实施方案中，所述液体组合物包含三羟甲基氨基甲烷、EDTA·2Na盐、盐酸胍、吐温-20和无水乙醇，其中，无水乙醇的体积分数为15％-45％。在一些实施方案中，所述三羟甲基氨基甲烷浓度为20mM、EDTA·2Na盐浓度为10mM、盐酸胍浓度为2M、吐温-20体积分数为0.002％，所述无水乙醇的体积分数为15％-45％。在一些实施方案中，所述无水乙醇体积分数为15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％或45％。
在一些实施方案中，所述液体组合物pH为7.3-7.7。在一些实施方案中，所述液体组合物的pH为7.5。
在第三方面，本公开提供一种试剂盒，所述试剂盒包含第一方面所述液体组合物和/或第二方面所述液体组合物。
在一些实施方案中，所述试剂盒还包含用于漂洗吸附柱的液体组合物，所述液体组合物包含三羟甲基氨基甲烷、EDTA·2Na盐、盐酸胍、氯化钠和乙醇。在一些实施方案中，所述三羟甲基氨基甲烷浓度为20mM、EDTA·2Na盐浓度为0.5mM、盐酸胍浓度为100mM、氯化钠浓度为50mM、乙醇体积分数为80％。在一些实施方案中，用于漂洗吸附柱的液体组合物pH为8.0。
在一些实施方案中，所述试剂盒还包含用于洗脱核酸的液体组合物，所述液体组合物包含三羟甲基氨基甲烷和Nuclease-free Water。在一些实施方案中，所述三羟甲基氨基甲烷浓度为10mM，所述液体组合物pH为6.0。
在第四方面，本公开提供第三方面所述试剂盒在含肝素钠的样本上提取病毒RNA的应用。在一些实施方案中，提供第三方面所述试剂盒在含肝素钠的样本上共同提取DNA和RNA核酸的应用。
在第五方面，本公开提供一种样本核酸提取方法，所述方法包含样本裂解、核酸结合吸附柱、洗涤吸附柱、漂洗吸附柱、洗脱核酸，其中使用上述第一方面所述液体组合物裂解样本和/或使用上述第二方面所述液体组合物洗涤吸附柱。
在一些实施方案中，所述样本是含有肝素钠的血浆样本。
在一些实施方案中，所述样本核酸提取方法用于提取样本中的病毒RNA。在一些实施方案中，所述样本核酸提取方法用于共同提取样本中的DNA和RNA。
本公开的方法可有效富集病毒核酸，对于肝素钠去除效果较优，降低了肝素钠对PCR或QPCR的扩增效率的影响。提取产物可直接应用于下游逆转录、PCR、荧光定量PCR、RT-PCR、RT-qPCR、二代测序、生物芯片分析等应用。
名称解释
本文中“缓冲物质”指能够维持溶液pH环境，包含三羟甲基氨基甲烷、3-(N-***啉)丙磺酸(即Mops)、醋酸钠、柠檬酸钠、碳酸钠等。
本文中“变性剂”指具有裂解病毒颗粒、变性蛋白、抑制RNase、提供高盐环境的作用的变性剂，能够促使病毒DNA和/或RNA与吸附膜结合，包含异硫氰酸胍、盐酸胍、硫氰酸胍、高氯酸盐、NaI、KI、尿素等。
本文中“表面活性剂”指具有溶解、变性样本中蛋白质的作用，包含Triton X-100、吐温-20、吐温-80、NP-40、SDS、CHAPS、脱氧胆酸钠、胆酸钠、甜菜碱、PEG8000等。
本文中“金属离子螯合剂”指具有螯合金属离子作用的物质，包含EDTA·2Na、EDTA·4Na、EDTA、柠檬酸钠、EGTA、HEDTA等。
附图说明
图1：不同裂解液提取人血浆中PEDV核酸qPCR结果；
图2：不同裂解液提取人血浆中PRV核酸qPCR结果；
图3：实施例2中三种裂解液提取人血浆中PEDV核酸qPCR结果；
图4：实施例3中三种洗涤液提取人血浆中PEDV核酸qPCR结果；
图5：实施例4中两种洗涤液提取人血浆中PEDV核酸qPCR结果；
图6：实施例5中两种不同组合提取人血浆中PEDV核酸qPCR结果。
具体实施方式(实施例)
下面结合附图并通过具体实施方式来进一步说明本公开的技术方案，但下述的实例仅仅是本公开的简易例子，并不代表或限制本公开的权利保护范围，本公开的保护范围以权利要求书为准。
以下实施例中，若无特殊说明，所用试剂及耗材均购自本领域常规试剂厂商；若无特殊说明，所用实验方法和技术手段均为本领域常规的方法和手段。
实施例1：不同裂解液提取含肝素钠的病毒样本并检测
1、模拟样本制备
取一瓶10头份科腹净疫苗(含猪流行性腹泻病毒PEDV疫苗)(科前生物，科腹净)、一瓶10头份科伪宁疫苗(含伪狂犬病毒PRV疫苗)(科前生物，科伪宁)，分别加入10ml科腹净专用疫苗稀释液、科伪宁专用疫苗稀释液，充分溶解混匀后，使用PBS将两份溶解好的疫苗分别梯度稀释100倍。取2μl稀释后的科腹净疫苗和2μl稀释后的科伪宁疫苗加入至296μl人肝素钠血浆样本中，充分混匀，制备得一份模拟核酸提取样本。每次实验均以实际所需样本量，按照上述比例扩大进行样本制备。
2、模拟样本裂解
分别向三组1.5ml离心管中依次加入20μl PK、300μl模拟样本和500μl不同组分的裂解液，充分震荡混匀后，室温孵育5min。
按照表1配制不同裂解液：
表1：不同裂解液组分及含量
| 组分 | 裂解液1 | 裂解液2 | 裂解液3 |
| 三羟甲基氨基甲烷 | 20mM | 20mM | 20mM |
| <![CDATA[EDTA·2Na·2H<sub>2</sub>O]]> | 5mM | 5mM | / |
| 异硫氰酸胍 | 2M | 2M | 2M |
| 甜菜碱 | 0.1mM | / | / |
| 吐温-20 | 1％ | 1％ | 1％ |
| TritonX-100 | 0.1％ | 0.1％ | 0.1％ |
| PEG8000 | 0.005％ | 0.005％ | / |
| 无水乙醇 | 32％ | 32％ | 32％ |
| pH | 7.3 | 7.3 | 7.3 |
3、核酸结合吸附柱
将孵育后的三组裂解样本分别全部转入三组吸附柱中，12000rpm离心1min，弃废液。
4、洗涤吸附柱
向上述三组吸附柱中分别加入700μl洗涤液，12000rpm离心30sec，弃废液。其中所使用的洗涤液组分及含量为：20mM三羟甲基氨基甲烷、10mM EDTA·2Na·2H2O、2M盐酸胍、0.002％吐温-20、40％无水乙醇，洗涤液pH 7.5(此配比的洗涤液命名为洗涤液1)。
5、漂洗吸附柱
向洗涤后的吸附柱中加入700μl漂洗液，12000rpm离心30sec，弃废液。其中所使用的漂洗液组分及含量为：20mM三羟甲基氨基甲烷、0.5mM EDTA·2Na·2H2O、100mM盐酸胍、50mM氯化钠、80％无水乙醇，漂洗液pH8.0(此配比的漂洗液命名为漂洗液1)。
6、洗脱裂解产物
首先将上步骤的吸附柱放入离心机中，12000rpm离心2min，然后将吸附柱转移至新的1.5mL离心管中，并加入50μl洗脱液，静置1min，后12000rpm离心1min，得到的三份溶液即为模拟样本提取的病毒DNA/RNA溶液。其中所使用的洗脱液组分及含量为10mM三羟甲基氨基甲烷、Nuclease-free Water、洗脱液pH6.0。
7、对提取产物进行检测
使用HiScript II U+One Step qRT-PCR Probe Kit(诺唯赞生物，货号：Q222-CN)试剂盒对提取产物进行qPCR检测。
按照表2反应体系和表3反应程序对提取产物进行PEDV和PRV病毒基因检测。
表2：qPCR反应体系
| <![CDATA[RNase-freeddH<sub>2</sub>O]]> | 9.4μl |
| <![CDATA[2×OneStepU<sup>+</sup>Mix]]> | 15μl |
| <![CDATA[OneStepU<sup>+</sup>EnzymeMix]]> | 1.5μl |
| 50×ROXReferenceDye2 | 0.6μl |
| PEDV-F或PRV-F(10μM) | 0.6μl |
| PEDV-R或PRV-R(10μM) | 0.6μl |
| PEDV-Probe或PRV-Probe(10μM) | 0.3μl |
| 提取产物 | 2μl |
| 总体积 | 30μl |
表3：qPCR反应程序
其中PEDV和PRV病毒基因检测使用的引物探针序列见表4。
表4：PEDV和PRV病毒基因检测引物探针序列
| 序列编号 | 序列名称 | 序列 |
| SEQ ID NO:1 | PEDV-F | CGTGAGCCTGGCTTAGTCTTG |
| SEQ ID NO:2 | PEDV-R | CATACGTCGCGATGAAACAAA |
| SEQ ID NO:3 | PEDV-Probe | CGCATGAACTTCAAAATCATACTGCGACG |
| SEQ ID NO:4 | PRV-F | GCGTGGACCAGCACCG |
| SEQ ID NO:5 | PRV-R | TCCACGCCCCGCTTG |
| SEQ ID NO:6 | PRV-Probe | CAAGTTCGGCGCGTGCTGGA |
8、结果分析
qPCR结果见附图1(PEDV病毒检测结果)和附图2(PRV病毒检测结果)，其中L1代表通过裂解液1裂解模拟样本获得产物的qPCR结果，L2代表通过裂解液2裂解模拟样本获得产物的qPCR结果，L3代表通过裂解液3裂解模拟样本获得产物的qPCR结果。附图1可以看出三个不同配方的裂解液用于提取PEDV病毒，其提取效果相当，附图2可以看出三个不同配方的裂解液用于提取PRV病毒，其提取效果相当。
实施例2：降低裂解液中乙醇含量可有效提高提取产物的扩增效率
按照表5分别配制裂解液3、裂解液4和裂解液5，分别使用裂解液3、裂解液4和裂解液5对模拟样本进行病毒核酸裂解提取，获得三份提取产物，并对三份产物进行qPCR病毒基因检测，比较三种裂解液对提取产物的影响。
表5：裂解液3、裂解液4和裂解液5组分及含量
| 组分 | 裂解液3 | 裂解液4 | 裂解液5 |
| 三羟甲基氨基甲烷 | 20mM | 20mM | 20mM |
| 异硫氰酸胍 | 2M | 2M | 2M |
| 吐温-20 | 1％ | 1％ | 1％ |
| TritonX-100 | 0.1％ | 0.1％ | 0.1％ |
| 无水乙醇 | 32％ | 24％ | 40％ |
| pH | 7.3 | 7.3 | 7.3 |
其中，本实施例中的模拟样本制备、漂洗液、洗脱液以及qPCR反应均与实施例1相同，本实施例中使用的洗涤液组分及配比为20mM三羟甲基氨基甲烷、10mM EDTA·2Na·2H2O、2M盐酸胍、0.002％吐温-20、57％无水乙醇，洗涤液pH 7.5(此配比的洗涤液命名为洗涤液2)。
结果分析
实施例2结果如附图3，其中，L3、L4、L5分别代表对使用裂解液3、裂解液4、裂解液5获得的提取产物进行PEDV基因检测qPCR结果。从附图3中可以看出使用裂解液3、裂解液4提取PEDV病毒效果相当，裂解液5提取PEDV病毒效果最差，表明降低裂解液中乙醇含量，能够有效提高PEDV提取产物的扩增效率。
实施例3：三种不同洗涤液对提取产物扩增效率的影响
按照表6分别配制洗涤液2、洗涤液3和洗涤液4，分别使用洗涤液2、洗涤液3和洗涤液4对模拟样本进行提取，获得三份提取产物，并对三份产物进行qPCR病毒基因检测，比较三种洗涤液对提取产物的影响。
表6：洗涤液2、洗涤液3和洗涤液4组分及含量
| 组分 | 洗涤液2 | 洗涤液3 | 洗涤液4 |
| 三羟甲基氨基甲烷 | 20mM | 20mM | 20mM |
| <![CDATA[EDTA·2Na·2H<sub>2</sub>O]]> | 10mM | 10mM | 10mM |
| 盐酸胍 | 2M | 2M | 2M |
| 吐温-20 | 0.002％ | 0.002％ | 0.002％ |
| 无水乙醇 | 57％ | 28％ | 17％ |
| pH | 7.5 | 7.5 | 7.5 |
其中，本实施例中的模拟样本制备、漂洗液、洗脱液以及qPCR反应均与实施例1相同，本实施例中使用的裂解液为实施例2中裂解液5。
结果分析
实施例3结果如附图4，其中，W2、W3、W4分别代表对使用洗涤液2、洗涤液3、洗涤液4获得的提取产物进行PEDV基因检测qPCR结果。从附图4中可以看出使用洗涤液3、洗涤液4提取PEDV病毒的扩增效率相当，而洗涤液2提取产物的扩增效率稍差，表明降低洗涤液中乙醇含量能够有效提高PEDV提取产物的扩增效率。
实施例4：两种不同洗涤液对提取产物扩增效率的影响
按照实施例1、实施例3分别配制洗涤液1和洗涤液2，分别使用洗涤液1和洗涤液2对模拟样本进行提取，获得两份提取产物，并对两份产物进行qPCR病毒基因检测，比较两种洗涤液对提取产物扩增效率的影响。其中，本实施例中的模拟样本制备、漂洗液、洗脱液以及qPCR反应均与实施例1相同，本实施例中使用的裂解液为实施例2中裂解液5。
结果分析
实施例4结果如附图5，其中，W1、W2分别代表对使用洗涤液1、洗涤液2获得的提取产物进行PEDV基因检测qPCR结果。从附图5中可以看出使用洗涤液1提取PEDV病毒的扩增效率显著优于使用洗涤液2，表明降低洗涤液中乙醇含量能够有效提高PEDV产物质量。
实施例5：同时降低裂解液和洗涤液中乙醇含量可有效提高提取产物的扩增效率
使用裂解液5和洗涤液2(命名为组合1)对模拟生物样本进行核酸提取，使用裂解液4和洗涤液1(命名为组合2)对模拟生物样本进行核酸提取，对两份核酸提取产物进行qPCR病毒基因检测，比较两种组合对提取产物扩增效率的影响。其中，本实施中的模拟样本制备、漂洗液、洗脱液以及qPCR反应均与实施例1相同。
结果分析
实施例5结果如图6，其中，Before代表对使用组合1获得的提取产物进行PEDV基因检测qPCR结果，After代表对使用组合2获得的提取产物进行PEDV基因检测qPCR结果。从附图6中可以看出使用组合2提取PEDV的扩增效率显著优于组合1，说明降低裂解液和洗涤液中乙醇含量可以有效提高PEDV产物的扩增效率。
Claims (25)
1.一种液体组合物，所述液体组合物包含缓冲物质、变性剂、表面活性剂和无水乙醇，其中无水乙醇的体积分数为20％-35％。
2.如权利要求1所述的液体组合物，所述无水乙醇的体积分数为20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％或35％。
3.如权利要求1所述的液体组合物，所述缓冲物质选自三羟甲基氨基甲烷、3-(N-***啉)丙磺酸、醋酸钠、柠檬酸钠、碳酸钠中的至少一种。
4.如权利要求1所述的液体组合物，所述变性剂选自异硫氰酸胍、盐酸胍、硫氰酸胍、高氯酸盐、NaI、KI、尿素中的至少一种。
5.如权利要求1所述的液体组合物，所述表面活性剂选自Triton X-100、吐温-20、吐温-80、NP-40、SDS、CHAPS、脱氧胆酸钠、胆酸钠、甜菜碱、PEG8000中的至少一种、至少两种或至少三种。
6.如权利要求1所述的液体组合物，所述液体组合物包含三羟甲基氨基甲烷、异硫氰酸胍、吐温-20、Triton X-100和无水乙醇，其中无水乙醇的体积分数为20％-35％。
7.如权利要求6所述的液体组合物，所述三羟甲基氨基甲烷浓度为20mM、异硫氰酸胍浓度为2M、吐温-20体积分数为1％、Triton X100体积分数为0.1％，所述无水乙醇的体积分数为20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％或35％。
8.如权利要求7所述液体组合物，所述液体组合物还包含金属离子螯合剂，所述金属离子螯合剂选自EDTA·2Na、EDTA·4Na、EDTA、柠檬酸钠、EGTA、HEDTA中的至少一种，优选地，金属离子螯合剂为EDTA·2Na，其浓度为5mM。
9.如权利要求8所述液体组合物，所述液体组合物还包含甜菜碱，所述甜菜碱的浓度为0.1mM。
10.如权利要求9所述液体组合物，所述液体组合物还包含PEG8000，所述PEG8000的体积分数为0.005％。
11.如权利要求1-10任一项所述液体组合物，所述液体组合物的pH为7.0-7.5，优选地，所述液体组合物的pH为7.3。
12.一种液体组合物，所述液体组合物包含缓冲物质、金属离子螯合剂、变性剂、表面活性剂和无水乙醇，其中无水乙醇的体积分数为15％-45％。
13.如权利要求12所述液体组合物，所述无水乙醇体积分数为15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％或45％。
14.如权利要求12所述液体组合物，所述缓冲物质选自三羟甲基氨基甲烷、3-(N-***啉)丙磺酸、醋酸钠、柠檬酸钠、碳酸钠中的至少一种；所述金属离子螯合剂选自EDTA·2Na、EDTA·4Na、EDTA、柠檬酸钠、EGTA、HEDTA中的至少一种；所述变性剂选自异硫氰酸胍、盐酸胍、硫氰酸胍、高氯酸盐、NaI、KI、尿素中的至少一种；所述表面活性剂选自Triton X-100、吐温-20、吐温-80、NP-40、SDS、CHAPS、脱氧胆酸钠、胆酸钠中的至少一种、至少两种或至少三种。
15.如权利要求14所述液体组合物，所述液体组合物包含三羟甲基氨基甲烷、EDTA·2Na盐、盐酸胍、吐温-20和无水乙醇，其中，无水乙醇的体积分数为15％-45％。
16.如权利要求15所述液体组合物，所述三羟甲基氨基甲烷浓度为20mM、EDTA·2Na盐浓度为10mM、盐酸胍浓度为2M、吐温-20体积分数为0.002％，所述无水乙醇的体积分数为15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％或45％。
17.如权利要求12-16任一项所述液体组合物，所述液体组合物pH为7.3-7.7，优选地，所述液体组合物的pH为7.5。
18.一种试剂盒，所述试剂盒包含权利要求1-11任一项所述的液体组合物，和/或所述试剂盒包含权利要求12-17任一项所述液体组合物。
19.如权利要求18所述试剂盒，所述试剂盒还包含用于漂洗吸附柱的液体组合物，所述液体组合物包含三羟甲基氨基甲烷、EDTA·2Na盐、盐酸胍、氯化钠和乙醇。
20.如权利要求19所述试剂盒，所述三羟甲基氨基甲烷浓度为20mM、EDTA·2Na盐浓度为0.5mM、盐酸胍浓度为100mM、氯化钠浓度为50mM、乙醇体积分数为80％，所述液体组合物pH为8.0。
21.如权利要求18所述试剂盒，所述试剂盒还包含用于洗脱核酸的液体组合物，所述液体组合物包含三羟甲基氨基甲烷和Nuclease-free Water，所述三羟甲基氨基甲烷浓度为10mM，所述液体组合物pH为6.0。
22.权利要求18-21任一项所述试剂盒在含肝素钠的样本上提取病毒RNA的应用或共同提取DNA和RNA核酸的应用。
23.一种样本核酸提取方法，所述方法包含样本裂解、核酸结合吸附柱、洗涤吸附柱、漂洗吸附柱、洗脱核酸，其中使用权利要求1-11任一项所述液体组合物裂解样本和/或使用权利要求12-17任一项所述液体组合物洗涤吸附柱。
24.如权利要求23所述的样本核酸提取方法，所述样本是含有肝素钠的血浆样本。
25.如权利要求23或24任一项所述样本核酸提取方法，所述样本核酸提取方法用于提取样本中的病毒RNA或用于共同提取样本中的DNA和RNA。
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