CN115919908A - 一种提高抑瘤率的含灵芝孢子油组合物及其制备方法 - Google Patents

一种提高抑瘤率的含灵芝孢子油组合物及其制备方法 Download PDF

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华克伟
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Abstract

本发明公开了一种提高抑瘤率的灵芝孢子油组合物及其制备方法，该组合物包括以下重量份的组分：灵芝孢子油1～15重量份、灵芝醇提物1～15重量份；其中，所述的灵芝醇提物是将灵芝子实体按1：10～12的重量比例加质量浓度为75％的乙醇加热提取2‑3次，每次1.5‑2h，过滤，合并滤液，浓缩至比重1.15～1.25之间，喷雾干燥，得到。本发明以灵芝孢子油、灵芝醇提物为主要原料，制成一种高抑瘤率的含灵芝孢子油组合物。该组合物可增强机体免疫力，肿瘤抑制率高，其功效远远强于单方使用，具有新型药物的开发前景。

Description

一种提高抑瘤率的含灵芝孢子油组合物及其制备方法
技术领域
本发明属于中药技术领域，具体涉及一种提高抑瘤率的含灵芝孢子油组合物及其制备方法。
背景技术
灵芝，是一种多孔菌科真菌灵芝的子实体。其外形呈伞状，菌盖肾形、半圆形或近圆形。在明代大医学家李时珍编著的《本草纲目》中有灵芝的记载。灵芝醇提取物是适时采收成熟的新鲜子实体，烘干后采用酒精提取、真空浓缩、喷雾干燥等工艺，得到的灵芝浸膏粉，是灵芝粉高倍浓缩而成的灵芝精华。灵芝醇提取物中含比灵芝粉更丰富的灵芝多糖、三萜类灵芝酸等主要有效成分。具有改善睡眠、抗氧化、抗癌、提高免疫力等功能。
灵芝孢子是灵芝在生长成熟期，从灵芝菌褶中弹射出来的极其微小的卵形生殖细胞，灵芝孢子粉具有灵芝的全部遗传物质和保健作用。其药用价值日益受到重视，研究发现灵芝孢子具有增强机体免疫力，抑制肿瘤，保护肝损伤，辐射防护作用。灵芝孢子油是通过超临界二氧化碳流体萃取技术从破壁的灵芝孢子中提取的油状脂质物，集成了灵芝孢子的多种活性成分。灵芝孢子油，为黄色透明液体，主要成份是饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸等，含有少量灵芝酸成分，有护肝、解毒、止痛、提高免疫力、抑制肿瘤等方面作用。
现有的灵芝孢子油产品或者灵芝相关产品抑瘤率低且服用量高。
发明内容
本发明目的是针对上述现有技术不足之处，提供一种提高抑瘤率的灵芝孢子油组合物。
本发明的另一目的是提供上述提高抑瘤率的灵芝孢子油组合物的制备方法。
本发明的目的是通过以下方式实现的：
一种提高抑瘤率的灵芝孢子油组合物，该组合物包括以下重量份的组分：
灵芝孢子油1～15重量份、灵芝醇提物1～15重量份；其中，所述的灵芝醇提物是将灵芝子实体按1：10-12的重量比例加质量浓度为75％的乙醇加热提取2-3次，每次1.5-2h，过滤，合并滤液，浓缩至比重1.15～1.25之间，喷雾干燥，得到。
优选地，上述步骤中，将灵芝子实体按1：10的重量比例加质量浓度为75％的乙醇。
优选地，所述的灵芝孢子油是取破壁灵芝孢子粉加水制成条状颗粒，低温干燥至水分不高于6％，采用CO2超临界萃取脂溶性成分；其中，CO2超临界萃取条件为萃取压力25～28MPa，萃取温度25～30℃，萃取时间1～2小时。
优选地，所述的CO2超临界萃取采用的萃取压力25MPa，萃取温度30℃，萃取时间2小时。
优选地，所述破壁灵芝孢子粉中总三萜含量不低于2.5％。
优选地，所述的制成条状颗粒时采用的水量为破壁灵芝孢子粉重量1/5～1/4。
上述灵芝孢子油组合物中，优选灵芝孢子油1～3重量份、灵芝醇提物1～3重量份。
上述提高抑瘤率的灵芝孢子油组合物的制备方法包括以下步骤：
(1)取破壁灵芝孢子粉加水制成条状颗粒，低温干燥至水分不高于6％，采用CO2超临界萃取脂溶性成分；其中，CO2超临界萃取条件为萃取压力25～28MPa，萃取温度25～30℃，萃取时间1～2小时，得到灵芝孢子油；
(2)将灵芝子实体按1：10-12的重量比例加质量浓度为75％的乙醇加热提取2-3次，每次1.5-2h，过滤，合并滤液，浓缩至比重1.15～1.25之间，喷雾干燥，得到灵芝醇提物。
(3)取灵芝孢子油1～15重量份和灵芝醇提物1～15重量份混合得到。
优选地，步骤(1)中，所述破壁灵芝孢子粉总三萜不低于2.5％。
优选地，步骤(1)中，所述的水量为破壁灵芝孢子粉重量1/5-1/4。
优选的，上述步骤(2)中，CO2超临界萃取条件为：萃取压力25MPa，萃取温度30℃，萃取时间2小时。
与现有技术比较本发明的有益效果：本发明以灵芝孢子油、灵芝醇提物为主要原料，采用特定的制备方法制成高抑瘤率的含灵芝孢子油组合物。该组合物可增强机体免疫力，肿瘤抑制率高，其功效远远强于单方使用，具有新型药物的开发前景。
附图说明
图1为灵芝三萜典型色谱图。
图2为麦角甾醇典型色谱图。
具体实施方式
以下通过具体实施例对本发明进行进一步的解释说明。
灵芝孢子粉(总三萜含量不低于2.5％)来源于安徽黄山云乐灵芝有限公司，其总三萜不低于3.0％。
实施例1
灵芝孢子油1重量份、灵芝醇提物1重量份混合均匀，即得混合物。主要标志性成分为灵芝三萜及麦角甾醇，色谱图分别见图1和图2。
制备方法：
(1)取破壁率为95％以上的灵芝孢子粉(总三萜含量不低于2.5％)，加破壁灵芝孢子粉重量1/5的水制成条状颗粒，低温干燥至水分不高于6％，采用CO2超临界萃取脂溶性成分；其中，CO2超临界萃取条件为萃取压力25MPa，萃取温度30℃，萃取时间2小时，得到灵芝孢子油。
(2)将灵芝子实体按1：10的重量比例加质量浓度为75％的乙醇加热提取2次，每次2h，过滤，合并滤液，浓缩至比重1.15～1.25，喷雾干燥，得到灵芝醇提物。
(3)取灵芝孢子油1重量份和灵芝醇提物1重量份混合。
(4)将混合物加入药学上允许的辅料按照常规的软胶囊制备方法制成软胶囊。
实施例2
灵芝孢子油15重量份、灵芝醇提物1重量份混合均匀，即得混合物。
制备方法：
(1)取破壁率为95％以上的灵芝孢子粉(总三萜含量不低于2.5％)，加破壁灵芝孢子粉重量1/4的水制成条状颗粒，低温干燥至水分不高于6％，采用CO2超临界萃取脂溶性成分；其中，CO2超临界萃取条件为萃取压力25MPa，萃取温度30℃，萃取时间2小时，得到灵芝孢子油。
(2)将灵芝子实体按1：12的重量比例，加质量浓度为75％的乙醇加热提取2次，每次2h，过滤，合并滤液，浓缩至比重1.15～1.25，喷雾干燥，得到灵芝醇提物。
(3)取灵芝孢子油15重量份和灵芝醇提物1重量份，混合，得到。
将混合物加入药学上允许的辅料按照常规的软胶囊制备方法制成软胶囊。
实施例3
灵芝孢子油3重量份、灵芝醇提物2重量份混合均匀，即得混合物。
制备方法：
(1)取破壁率为95％以上的灵芝孢子粉(总三萜含量不低于2.5％)，加破壁灵芝孢子粉重量1/4的水制成条状颗粒，低温干燥至水分不高于6％，采用CO2超临界萃取脂溶性成分；其中，CO2超临界萃取条件为萃取压力25MPa，萃取温度30℃，萃取时间2小时，得到灵芝孢子油。
(2)将灵芝子实体按1：12的重量比例，加质量浓度为75％的乙醇加热提取3次，每次2h，过滤，合并滤液，浓缩至比重1.15～1.25，喷雾干燥，得到灵芝醇提物。
(3)取灵芝孢子油3重量份和灵芝醇提物2重量份，混合，得到。
将混合物加入药学上允许的辅料按照常规的胶囊制备方法制成胶囊。
以下通过药效学实验进一步说明本发明的效果：对本发明组合物药效试验的研究与说明：发明人对本发明提供的技术方案进行了实验研究，用来证明本发明的技术效果，下述实验用于进一步说明本发明的技术效果，但不限制本发明。
试验例
以下实验例所采用的灵芝孢子油组合物按实施例1方法制备得到。
1、受试药物：按照实施例1制备所得灵芝孢子油组合物、灵芝孢子油、醇提灵芝提取物(即灵芝醇提物)。
灵芝孢子油：取破壁率为95％以上的灵芝孢子粉(总三萜含量不低于2.5％)，加破壁灵芝孢子粉重量1/4的水制成条状颗粒，低温干燥至水分不高于6％，采用CO2超临界萃取脂溶性成分；其中，CO2超临界萃取条件为萃取压力25MPa，萃取温度30℃，萃取时间2小时。
醇提灵芝提取物：将灵芝子实体按1：10的重量比例加质量浓度为75％的乙醇加热提取2次，每次2h，过滤，合并滤液，浓缩至比重1.15～1.25，喷雾干燥，得到灵芝醇提物。
配制方法：量取适量灵芝孢子油组合物，后用大豆油(生产厂家：山东瑞生药用辅料有限公司，批号：DD20210701，规格：500mL)分别稀释成50mg/mL、25mg/mL、12.5mg/mL的工作溶液，给药体积为0.4ml/20g，即给药剂量分别为1000mg/kg，500mg/kg，250mg/kg。
量取适量灵芝孢子油，后用大豆油(生产厂家：山东瑞生药用辅料有限公司，批号：DD20210701，规格：500mL)分别稀释成50mg/mL、25mg/mL、12.5mg/mL的工作溶液，给药体积为0.4ml/20g，即给药剂量分别为1000mg/kg，500mg/kg，250mg/kg。
精密称取0.065g样品醇提灵芝提取物，加入0.5％ CMC-Na 10ml配制成6.5mg/mL的溶液；精密称取0.0325g样品醇提灵芝提取物，加入0.5％ CMC-Na10ml配制成3.25mg/mL的溶液；精密称取0.0163g样品醇提灵芝提取物，加入0.5％ CMC-Na 10ml配制成1.63mg/mL的溶液；得浓度为6.5g/ml，3.25g/ml，1.63g/m的溶液。给药体积为0.4mL/20g，即给药剂量为130mg/kg，65mg/kg，32.5mg/kg。
2、对照药物
名称：5-FU(5-氟尿嘧啶)
提供单位：天津金耀药业有限公司
配制方法：一瓶注射剂规格为0.25g/10ml，取1ml加7.33ml生理盐水(生产厂家：江苏淮安双鹤药业有限责任公司；批号：2103223C；规格：500ml：4.5g)摇匀得3mg/ml的溶液，于4℃保存，给药体积为0.2ml/20g，即给药剂量为30mg/kg。
3、试验动物
来源、种系、品系：ICR小鼠，由杭州医学院(生产)提供(实验动物生产许可证：SCXK(浙)2019-0002)。
周龄：6-8周龄
性别：雌性
4、实验动物分组(见表1-表2)
表1
表2
动物模型 药物 组别 剂量 给药方式 动物只数
H22 -- 空白对照组 -- -- 10
H22 5-FU 阳性对照组 30mg/kg i.v.1次/2天 10
H22 灵芝孢子油组合物 高剂量组 130mg/kg i.g.1次/1天 10
H22 灵芝孢子油组合物 中剂量组 65mg/kg i.g.1次/1天 10
H22 灵芝孢子油组合物 低剂量组 32.5mg/kg i.g.1次/1天 10
H22 灵芝孢子油 高剂量组 1000mg/kg i.g.1次/1天 10
H22 灵芝孢子油 中剂量组 500mg/kg i.g.1次/1天 10
H22 灵芝孢子油 低剂量组 250mg/kg i.g.1次/1天 10
H22 醇提灵芝提取物 高剂量组 1000mg/kg i.g.1次/1天 10
H22 醇提灵芝提取物 中剂量组 500mg/kg i.g.1次/1天 10
H22 醇提灵芝提取物 低剂量组 250mg/kg i.g.1次/1天 10
5、实验方法：
取ICR小鼠，按移植性肿瘤研究法，接种腹水型瘤(在无菌操作下取腹水，加生理盐水稀释成1:4的细胞悬液，容器置冰块上，用空针抽吸，每次抽吸前将细胞混匀，每只小鼠右前肢腋窝皮下接种0.2ml)，接种后24小时称鼠重，并随机分为17组。各给药组于接种24小时后(d1)第一次给药，1-5号样品灌胃给药，1次/1天，共给药9次。给药体积为0.4ml/20g。于接种后第10天(d10)处死荷瘤小鼠称重，并分离瘤块称重，所得数据进行统计学处理(t检验)。
6、实验结果
小鼠肉瘤S180细胞移植肿瘤模型实验结果如表3所示，灵芝孢子油组合物分别以1000mg/kg，500mg/kg，250mg/kg剂量灌胃给药，每天给药1次，给药周期10天，对小鼠肉瘤S180细胞移植瘤的抑瘤率分别达59.15％，48.00％，25.28％；灵芝孢子油分别以1000mg/kg，500mg/kg，250mg/kg剂量灌胃给药，每天给药1次，给药周期10天，对小鼠肉瘤S180细胞移植瘤的抑瘤率分别达48.26％，35.24％，21.35％；醇提灵芝提取物分别以130mg/kg，65mg/kg，32.5mg/kg剂量灌胃给药，每天给药1次，给药周期10天，对小鼠肉瘤S180细胞移植瘤的抑瘤率分别达53.27％，35.35％，22.45％；阳性药物5-FU以30mg/kg尾静脉注射给药，每2天给药1次，给药周期10天，对小鼠肉瘤S180细胞移植瘤的抑瘤率达71.36％。在试验过程中，并未发现1-5号样品各剂量组对实验动物体重有明显影响，但是阳性药5-FU则对实验动物体重具有极显著抑制作用。
表3样品对小鼠移植瘤S180抑制作用
*P<0.05**P<0.01与模型对照组比较
小鼠肝癌H22细胞移植肿瘤模型实验结果如表4所示，灵芝孢子油组合物分别以1000mg/kg，500mg/kg，250mg/kg剂量灌胃给药，每天给药1次，给药周期10天，对小鼠肝癌H22细胞移植瘤的抑瘤率分别达57.17％，42.41％，25.78％；灵芝孢子油分别以1000mg/kg，500mg/kg，250mg/kg剂量灌胃给药，每天给药1次，给药周期10天，对小鼠肝癌H22细胞移植瘤的抑瘤率分别达43.03％，29.52％，19.61％；醇提灵芝提取物分别以130mg/kg，65mg/kg，32.5mg/kg剂量灌胃给药，每天给药1次，给药周期10天，对小鼠肝癌H22细胞移植瘤的抑瘤率分别达50.52％，33.47％，18.85％；阳性药物5-FU以30mg/kg尾静脉注射给药，每2天给药1次，给药周期10天，对小鼠肝癌H22细胞移植瘤的抑瘤率达73.39％。在试验过程中，并未发现1-5号样品各剂量组对实验动物体重有明显影响，但是阳性药5-FU则对实验动物体重具有极显著抑制作用。
表4样品对小鼠移植瘤H22抑制作用
*P<0.05**P<0.01与模型对照组比较
由表3和表4数据可见，本发明药物组合物与单方比较，对小鼠肝癌H22细胞移植瘤的抑瘤率，以及对小鼠肉瘤S180细胞移植瘤的抑瘤率均有显著的提高。起到协同增效的作用。

Claims (8)

1.一种提高抑瘤率的灵芝孢子油组合物，其特征在于该组合物包括以下重量份的组分：
灵芝孢子油1～15重量份、灵芝醇提物1～15重量份；
其中，所述的灵芝醇提物是将灵芝子实体按1：10-12的重量比例加质量浓度为75％的乙醇加热提取2-3次，每次1.5-2h，过滤，合并滤液，浓缩至比重1.15～1.25之间，喷雾干燥，得到。
2.根据权利要求1所述的提高抑瘤率的灵芝孢子油组合物，其特征在于所述的灵芝孢子油是取破壁灵芝孢子粉加水制成条状颗粒，低温干燥至水分不高于6％，采用CO2超临界萃取脂溶性成分；其中，CO2超临界萃取条件为萃取压力25～28MPa，萃取温度25～30℃，萃取时间1～2小时。
3.根据权利要求2所述的提高抑瘤率的灵芝孢子油组合物，其特征在于所述的CO2超临界萃取采用的萃取压力25MPa，萃取温度30℃，萃取时间2小时。
4.根据权利要求2所述的提高抑瘤率的灵芝孢子油组合物，其特征在于所述破壁灵芝孢子粉中总三萜含量不低于2.5％。
5.根据权利要求2所述的提高抑瘤率的灵芝孢子油组合物，其特征在于所述的水量为破壁灵芝孢子粉重量1/5～1/4。
6.根据权利要求1所述的提高抑瘤率的灵芝孢子油组合物，其特征在于所述的将灵芝子实体按1：10的重量比例加质量浓度为75％的乙醇。
7.根据权利要求1所述的提高抑瘤率的灵芝孢子油组合物，其特征在于所述的灵芝孢子油1～3重量份、灵芝醇提物1～3重量份。
8.一种高抑瘤率的灵芝孢子油组合物的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：
(1)取破壁灵芝孢子粉加水制成条状颗粒，低温干燥至水分不高于6％，采用CO2超临界萃取脂溶性成分；其中，CO2超临界萃取条件为萃取压力25～28MPa，萃取温度25～30℃，萃取时间1～2小时，得到灵芝孢子油；
(2)将灵芝子实体按1：10-12的重量比例加质量浓度为75％的乙醇加热提取2-3次，每次1.5-2h，过滤，合并滤液，浓缩至比重1.15～1.25，喷雾干燥，得到灵芝醇提物；
(3)取灵芝孢子油1～15重量份和灵芝醇提物1～15重量份混合得到。
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