CN102379906A - 一种提高灵芝孢子油抗肿瘤功效的加工方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种提高灵芝孢子油抗肿瘤功效的加工方法，该方法是将破壁灵芝孢子粉提取得到灵芝孢子油，再超声、离心后静置，所得油液分为3层，取中层油液在温度60～80℃，真空度0.1MPa条件下加热后，冷却。通过采用本发明灵芝孢子油的加工方法能进一步提高灵芝孢子油的抗肿瘤功效，抑瘤率达到55％以上。

Description

一种提高灵芝孢子油抗肿瘤功效的加工方法

技术领域

本发明属于中药技术领域，具体涉及一种提高灵芝孢子油抗肿瘤功效的加工方法。

背景技术

灵芝，为多孔菌科真菌灵芝的子实体。味甘性平，功能益气血、安心神、健脾胃。始载于《神农本草经》，列为上品，称其有益心气、补中、增智慧不忘、保神、益精气、利关节、坚筋骨、久服轻身延年不老等多种作用。

灵芝孢子粉则为灵芝成熟时从菌盖弹射的孢子。灵芝孢子经破壁加工后，开发成新的保健药材，它浓缩了灵芝的精华，禀天地生云之气，药效及临床应用效果更有明显提高。

灵芝孢子含有蛋白质、氨基酸类、三萜类、多糖类、腺苷类、甾醇类、生物碱类、脂肪酸类等化学物质。现代药理研究及临床试验证实，灵芝孢子粉比灵芝具有更强更全面的作用，灵芝孢子具有抗染色体突变，诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞增殖、杀伤癌细胞，拈抗环磷酰胺引起的小鼠耐力下降、血红蛋白与白细胞下降、巨噬细胞吞噬力下降和SGPT升高，抑制⁶⁰Co照射引起的白细胞减少不良反应、激活并提高特异性杀伤细胞(CTL)和非特异性杀伤细胞(NK、LAK)的抗肿瘤作用、增强单核-巨噬细胞吞噬功能，并具有抗脂质过氧化反应等作用。

灵芝孢子油是从破壁灵芝孢子中通过CO₂超临界萃取提取出来的天然成分，具有调节血脂，增强免疫，抗肿瘤等多方面的作用。相对于灵芝孢子粉，灵芝孢子油集中了灵芝孢子中的三萜类等成分，是灵芝孢子有效成分的集合体，是灵芝孢子的“精华”。

但是，按照已有方法提取得到的灵芝孢子油对于抗肿瘤功效已达不到需求。

发明内容

本发明的目的是克服上述不足之处提供一种提高灵芝孢子油抗肿瘤功效的加工方法。

本发明的目的是通过以下方式实现的：

一种提高灵芝孢子油抗肿瘤功效的加工方法，该方法包括以下步骤：

a)、将破壁灵芝孢子粉放入萃取器中，通入CO₂，控制萃取压力20～35Mpa，萃取温度35～65℃，萃取时间1～35小时；从萃取器流出的含有灵芝孢子油的CO₂进入分离器，控制分离器内的分离压力为8～10Mpa，从分离器底部分离得到萃取物；

b)、将通过步骤“a)”得到的萃取物超声提取10～20分钟，收集提取物；

c)、将提取物离心10～20分钟后静置12小时以上，所得油液分为3层，取中层油液在温度60～80℃，真空度0.1MPa条件下加热0.5～1.5小时，冷却。优选在温度60℃，真空度0.1MPa条件下加热1～1.5小时。

所述的超声条件优选采用功率2500W的超声器。所述的离心转速优选为10000转/分钟。

以下通过试验例对本发明方法的效果做进一步阐述。

试验例1  灵芝孢子油ig对小鼠移植瘤肉瘤S₁₈₀实体型的抑制作用

试验材料：按照专利ZL99123952.0实施例1的方法得到的孢子油为原灵芝孢子油。按照实施例1方法制备得到的灵芝孢子油为新灵芝孢子油。

试验方法：取ICR小鼠40只，按移植性肿瘤研究法接种S₁₈₀实体型瘤(在无菌操作下取瘤块，称重，用玻璃组织匀浆器研磨，磨匀后放人无菌容器内，加生理盐水稀释成1∶3的细胞悬液，容器置冰块上，用空针抽吸，每次抽吸前将细胞混匀，每只小鼠右前肢腋窝皮下接种0.2ml)，接种后24小时称鼠重，并随机分为4组，每组10只，空白对照组(0.5％CMC-Na)、环磷酰胺(20mg/kg)组分别为阴、阳性对照组，原灵芝孢子油组(160mg/kg)，新灵芝孢子油组(160mg/kg)。于接种24小时后给药，ig给药，每天一次，共给药7次，于停药后第2天处死荷瘤小鼠称重，并分离瘤块称重，所得数据进行统计学处理(t检验)，结果见表1。

表1.灵芝孢子油ig对小鼠移植瘤肉瘤S₁₈₀实体型的抑制作用(n＝10)

^*P＜0.05，^**P＜0.01与空白组比较

试验例2灵芝孢子油ig对小鼠胸腔积液中原代肿瘤细胞的抑制作用

试验材料：按照专利ZL99 1 23952.0实施例1的方法得到的孢子油为原灵芝孢子油。按照实施例1方法制备得到的灵芝孢子油为新灵芝孢子油。

实验方法：取上述规格ICR小鼠40只，按移植性肿瘤研究法接种原代肿瘤细胞(在无菌操作下取瘤块，称重，用玻璃组织匀浆器研磨，磨匀后放人无菌容器内，加生理盐水稀释成1∶3的细胞悬液，容器置冰块上，用空针抽吸，每次抽吸前将细胞混匀，每只小鼠右前肢腋窝皮下接种0.2ml)，接种后24小时称鼠重，并随机分为4组，每组10只，空白对照组(0.5％CMC-Na)、环磷酰胺(20mg/kg)组分别为阴、阳性对照组，原灵芝孢子油组(160mg/kg)，新灵芝孢子油组(160mg/kg)。于接种24小时后给药，ig给药，每天一次，共给药7次，于停药后第2天处死荷瘤小鼠称重，并分离瘤块称重，所得数据进行统计学处理(t检验)，具体结果见表2。

表2  灵芝孢子油ig对小鼠胸腔积液中原代肿瘤细胞的抑制作用

(n＝10)

^*P＜0.05，^**P＜0.01与空白组比较

结果：经动物实验证明，原孢子油及新加工方法提取的新孢子油均能抑制小鼠移植瘤肉瘤S₁₈₀的肿瘤生长，但是，原孢子油的抑瘤率仅为45.3％，新孢子油的抑瘤率为55.6％。

原孢子油及新加工方法提取的新孢子油均能抑制胸腔积液中原代肿瘤细胞生长，其中，原孢子油的抑瘤率为45.8％，新孢子油的抑瘤率为56.1％。

与现有技术比较本发明的有益效果：原灵芝孢子油的抑瘤率在40～50％之间，但通过本发明采用的加工方法，可以进一步提高生产的灵芝孢子油的抗肿瘤功效，抑瘤率达到55％以上。

具体实施方式

实施例1

取破壁灵芝孢子粉(破壁率为95％以上)80kg放入100L萃取器中，升温，启动高压泵升压，当达到预定压力和温度(萃取压力30Mpa，萃取温度50℃)时，调节减压阀，使分离器内的分离压力为8Mpa左右，进行全循环流程操作，萃取全过程约2h。将从分离器底部分离得到萃取物用功率2500W的移动式超声器超声提取15分钟，打开阀门，收集提取物。提取物在转速为10000转/分条件下离心15分钟后静置。静置12小时后，可以看到油液分为3层，上层为深黄色液体，中层为金黄色液体，下层为无色液体，取中层油液加入真空罐中，在温度为60℃，真空度0.1MPa下加热约1小时，充分脱水后，将油液冷却，共得21.7kg孢子油，提取率为27.1％。

实施例2

取破壁灵芝孢子粉(破壁率为95％以上)80kg放入100L萃取器中，升温，启动高压泵升压，当达到预定压力和温度(萃取压力20Mpa，萃取温度65℃)时，调节减压阀，使分离器内的分离压力为8Mpa左右，进行全循环流程操作，萃取全过程约30h。将从分离器底部分离得到萃取物用功率2500W的移动式超声器超声提取10分钟，打开阀门，收集提取物。提取物离心，转速为10000转/分，离心10分钟后静置。静置12小时后，可以看到油液分为3层，上层为深黄色液体，中层为金黄色液体，下层为无色液体，取中层油液加入真空罐中，在温度为80℃，真空度0.1MPa下加热约1.5小时，充分脱水后，将油液冷却，共得21.3kg孢子油，提取率为26.6％。

实施例3

取破壁灵芝孢子粉(破壁率为95％以上)80kg放入100L萃取器中，升温，启动高压泵升压，当达到预定压力和温度(萃取压力35Mpa，萃取温度35℃)时，调节减压阀，使分离器内的分离压力为10Mpa左右，进行全循环流程操作，萃取全过程约10h。将从分离器底部分离得到萃取物用功率2500W的移动式超声器超声提取20分钟，打开阀门，收集提取物。提取物离心，转速为10000转/分，离心20分钟后静置。静置12小时后，可以看到油液分为3层，上层为深黄色液体，中层为金黄色液体，下层为无色液体，取中层油液加入真空罐中，在温度为60℃，真空度0.1MPa下加热约0.5小时，充分脱水后，将油液冷却，共得21.5kg孢子油，提取率为26.9％。

Claims (4)

1.一种提高灵芝孢子油抗肿瘤功效的加工方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

a)、将破壁灵芝孢子粉放入萃取器中，通入CO₂，控制萃取压力20～35Mpa，萃取温度35～65℃，萃取时间1～35小时；从萃取器流出的含有灵芝孢子油的CO₂进入分离器，控制分离器内的分离压力为8～10Mpa，从分离器底部分离得到萃取物；

b)、将通过步骤“a)”得到的萃取物超声提取10～20分钟，收集提取物；

c)、将提取物离心10～20分钟后静置12小时以上，所得油液分为3层，取中层油液在温度60～80℃，真空度0.1MPa条件下加热0.5～1.5小时，冷却。

2.根据权利要求1所述的提高灵芝孢子油抗肿瘤功效的加工方法，其特征在于在温度60℃，真空度0.1MPa条件下加热1～1.5小时。

3.根据权利要求1所述的提高灵芝孢子油抗肿瘤功效的加工方法，其特征在于所述的超声条件为采用功率2500W的超声器。

4.根据权利要求1所述的提高灵芝孢子油抗肿瘤功效的加工方法，其特征在于所述的离心转速为10000转/分钟。