CN115836125A - 纤维素酶用于从纺织品去除尘螨的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及包含能够降解纤维素材料的酶的洗涤剂组合物及其用于从纺织品的表面去除尘螨的用途。在一方面，所述能够降解纤维素材料的酶是GH45纤维素酶。在另外的方面，所述GH45纤维素酶是土生嗜热根串珠霉内切葡聚糖酶。

Description

纤维素酶用于从纺织品去除尘螨的用途

技术领域

本发明涉及能够降解纤维素材料的酶的用途，特别是纤维素酶用于从纺织品表面去除尘螨的用途。

序列表的引用

本申请含有计算机可读形式的序列表。该计算机可读形式通过引用并入本文。

背景技术

尘螨是螨虫(一种蛛形纲动物，如蜘蛛和蝎子)。它们的大小在0.1mm与0.5mm之间，生活在所有类型的纤维(包括地毯、衣服、布艺沙发和床单)中。在过去的几十年中，人们已经清楚地知道尘螨极易引起过敏，并可能引发哮喘和其他过敏发作。已经尝试通过使用有机或无机杀螨剂、清洁剂或紫外线来防止接触过敏原。特别地，US 5672362 A使用四水八硼酸二钠(DOT)溶液杀死尘螨。WO 9836640披露了用于控制尘螨的含有苯甲酸苄酯和醇的组合物。KR 200287251披露了用于去除尘螨的便携式紫外线(UV)消毒器。但到目前为止，结果令人失望，因为杀螨剂或清洁剂可能会导致新的过敏发作。US 2004255983披露了通过将制品重复洗涤至所希望水平来去除尘螨的方法。然而，过多的洗涤循环可能会破坏纺织品的完整性和安全性，从而减少使用寿命。

需要一种新的方法来去除纺织品表面的尘螨，同时不会引入新的过敏原或减少纺织品的使用寿命。

发明内容

在一方面，本发明涉及通过在洗涤循环中添加一种或多种能够降解纤维素材料的酶使得所述一种或多种酶从纺织品减少尘螨的用途。在另一方面，所述酶是纤维素酶或半纤维素酶。在另外的方面，所述纤维素酶可以是GH45纤维素酶。

在另一方面，本发明还涉及用于去除尘螨的酶组合物。所述酶组合物包含能够降解纤维素材料的酶，并且可用于任何洗涤、清洁和/或织物护理方法，包括浸泡方法、预处理方法、具有漂洗步骤的方法(其中可以添加单独的漂洗剂和所述组合物)、以及后处理方法。

在另一方面，所述酶组合物包含一种或多种纤维素酶或半纤维素酶。另外，所述纤维素酶可以是GH45纤维素酶。在一方面，所述GH45纤维素酶是土生嗜热根串珠霉(Thermothielavioides terrestris)(T.t)内切葡聚糖酶。

在另外的方面，所述T.t内切葡聚糖酶选自由以下组成的组：

(1)T.t内切葡聚糖酶，该T.t内切葡聚糖酶包含SEQ ID NO:2的成熟多肽或其片段，或由其组成；

(2)T.t内切葡聚糖酶，该T.t内切葡聚糖酶包含与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性的氨基酸序列，或由其组成；

(3)T.t内切葡聚糖酶，该T.t内切葡聚糖酶由多核苷酸编码，该多核苷酸包含与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性的核苷酸序列，或由其组成；

(4)T.t内切葡聚糖酶，该T.t内切葡聚糖酶由多核苷酸编码，该多核苷酸在至少高严格条件、非常高严格条件下，与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列或其全长互补序列杂交。在另一方面，所述纤维素酶组合物进一步包含一种或多种洗涤剂组分或织物柔软剂。

在另一方面，本申请进一步包含洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物包含能够降解纤维素材料的酶或包含如上文提到的酶组合物。

在再一方面，本申请包含用于减少或去除尘螨的方法，该方法包括：

(1)用包含能够降解纤维素材料的酶的洗涤剂组合物或包含能够降解纤维素材料的酶的酶组合物洗涤或暴露纺织品，其中所述能够降解纤维素材料的酶包含GH45纤维素酶，其中所述GH45纤维素酶是GH45内切葡聚糖酶，在另外的方面，所述内切葡聚糖酶是T.t内切葡聚糖酶；

(2)任选地漂洗该纺织品。

附图说明

图1示出了示例性抗起球实验。

图2示出了T.t.内切葡聚糖酶对E-252PA织物的抗尘螨结果。

图3示出了T.t.内切葡聚糖酶对CN-42织物的抗尘螨结果。

定义

抗起球：术语“抗起球”表示从纺织品表面去除绒球和/或预防在纺织品表面上形成绒球。

纤维素分解酶或纤维素酶：术语“纤维素分解酶”或“纤维素酶”意指水解纤维素材料的一种或多种(例如，几种)酶。此类酶包括一种或多种内切葡聚糖酶、一种或多种纤维二糖水解酶、一种或多种β-葡糖苷酶、或其组合。用于测量纤维素分解活性的两种基本方法包括：(1)测量总纤维素分解活性，和(2)测量单独的纤维素分解活性(内切葡聚糖酶、纤维二糖水解酶和β-葡糖苷酶)，如Zhang等人,Outlook for cellulase improvement:Screeningand selection strategies[纤维素酶改进的展望：筛选和选择策略],2006,Biotechnology Advances[生物技术进展]24:452-481中综述。通常使用不溶性底物，包括Whatman№1滤纸、微晶纤维素、细菌纤维素、藻类纤维素、棉、预处理的木质纤维素等，测量总纤维素分解活性。最常见的总纤维素分解活性测定是将Whatman№1滤纸用作底物的滤纸测定。该测定是由国际纯粹与应用化学联合会(IUPAC)(Ghose,1987,Measurement ofcellulase activities[纤维素酶活性的测量],Pure Appl.Chem.[纯粹与应用化学]59:257-68)确立的。

出于本发明的目的，纤维素分解酶活性通过测量在以下条件下由一种或多种纤维素分解酶进行的纤维素材料水解的增加来确定：与未添加纤维素分解酶蛋白的对照水解相比，在合适的温度(例如50℃、55℃、或60℃)下添加1-50mg纤维素分解酶蛋白/g预处理的玉米秸秆(PCS)中的纤维素(或其他预处理的纤维素材料)，持续3-7天。典型条件为：1ml反应，洗涤或未洗涤的PCS，5％不溶性固体，50mM乙酸钠(pH 5)，1mM MnSO₄，50℃、55℃、或60℃，72小时，通过

HPX-87H柱(伯乐实验室有限公司(Bio-Rad Laboratories,Inc.)，赫拉克勒斯，加利福尼亚州，美国)进行的糖分析。本领域已知的用于测量纤维素分解酶活性的其他方法也可以是适用的。

纤维素材料：术语“纤维素材料”意指含有纤维素的任何材料。生物质的初生细胞壁中的主要多糖是纤维素，第二丰富的是半纤维素，而第三丰富的是果胶。细胞停止生长后产生的次生细胞壁也含有多糖，并且它通过与半纤维素共价交联的聚合木质素得到强化。纤维素是脱水纤维二糖的均聚物，并且因此是直链β-(1-4)-D-葡聚糖，而半纤维素包括多种具有一系列取代基处于复杂支链结构的化合物，例如木聚糖、木葡聚糖、***糖基木聚糖、以及甘露聚糖。尽管纤维素通常为多形态的，但发现其在植物组织中主要作为平行葡聚糖链的不溶性晶体基质存在。半纤维素通常氢键结合至纤维素以及其他半纤维素，这有助于稳定细胞壁基质。

纤维素通常发现于例如蔬菜食物产品，如沙拉、番茄、菠菜、卷心菜、谷物等。

洗涤剂组分：本文将术语“洗涤剂组分”定义为意指可以用于针对例如洗衣的洗涤剂组合物中的化学品的类型。洗涤剂组分的实例是表面活性剂、助洗剂、螯合剂(chelator)或螯合试剂(chelating agent)、漂白***或漂白组分、聚合物、织物调理剂、增泡剂、抑泡剂、染料、香料、晦暗抑制剂、杀细菌剂、杀真菌剂、污垢悬浮剂、防腐蚀剂、酶抑制剂或稳定剂、酶激活剂、一种或多种转移酶、水解酶、氧化还原酶、上蓝剂和荧光染料、抗氧化剂、和增溶剂。

洗涤剂组合物：术语“洗涤剂组合物”是指用于从有待清洁的表面(例如纺织品表面)去除不希望的化合物的组合物。该洗涤剂组合物可以用于例如清洁纺织品，用于家用清洁和工业清洁二者。这些术语涵盖针对所希望的特定类型的清洁组合物和产品的形式(例如，液体、凝胶、粉末、颗粒、糊剂或喷雾组合物)选择的任何材料/化合物，并且包括但不限于洗涤剂组合物(例如，液体和/或固体衣物洗涤剂和精细织物洗涤剂；织物清新剂；织物柔软剂；以及纺织品和衣物预去污剂/预处理)。洗涤剂组合物可以含有一种或多种酶，如半纤维素酶、过氧化物酶、蛋白酶、纤维素酶、木聚糖酶、脂肪酶、磷脂酶、酯酶、角质酶、果胶酶、甘露聚糖酶、果胶裂解酶、角蛋白酶、还原酶、氧化酶、酚氧化酶、脂加氧酶、木质酶、支链淀粉酶、鞣酸酶、戊聚糖酶、马拉纳酶、β-葡聚糖酶、***糖苷酶、透明质酸酶、软骨素酶、漆酶、DNA酶、叶绿素酶、淀粉酶、过水解酶、过氧化物酶、黄原胶酶及其混合物。洗涤剂组合物可以进一步包含洗涤剂组分，如表面活性剂、助洗剂、螯合剂或螯合试剂、漂白***或漂白组分、聚合物、织物调理剂、增泡剂、抑泡剂、染料、香料、晦暗抑制剂、杀细菌剂、杀真菌剂、污垢悬浮剂、防腐蚀剂、酶抑制剂或稳定剂、酶激活剂、一种或多种转移酶、水解酶、氧化还原酶、上蓝剂和荧光染料、抗氧化剂、和增溶剂。

尘螨：

尘螨(尘螨属物种(Dermatophagoides spp.))是一种微小的蛛形纲节肢动物，生长在温暖(22℃-26℃)和潮湿(75％-80％湿度)的环境中。它生活在人类或动物(猫或狗)的皮屑和毛发上。家居环境中有16种尘螨，包括欧洲屋尘螨、美国屋尘螨、梅内拉(Maynella)尘螨、以及带有热带爪螨和粉螨(acarid mite)的食甜螨、泰螨(Tymite)等，其中欧洲屋尘螨(Dermatophagoides pteronyssinus)、美国屋尘螨(Dermatophagoides farinae)和热带爪螨(Blomia tropicalis)这三种是过敏原。特别地，欧洲屋尘螨(Dermatophagoidespteronyssinus)是哮喘、打喷嚏、过敏性结膜炎和特应性皮炎的主要过敏原。

内切葡聚糖酶：术语“内切葡聚糖酶”意指内切-1,4-(1,3；1,4)-β-D-葡聚糖4-葡聚糖水解酶(E.C.3.2.1.4)，其催化纤维素、纤维素衍生物(如羧甲基纤维素和羟乙基纤维素)、地衣多糖中的1,4-β-D-糖苷键，混合β-1,3葡聚糖如谷类β-D-葡聚糖或木葡聚糖以及含有纤维素组分的其他植物材料中的β-1,4键的内切水解。可以通过测量底物粘度的降低或通过还原性糖测定所确定的还原性末端的增加来确定内切葡聚糖酶活性(Zhang等人,2006,Biotechnology Advances[生物技术进展]24:452-481)。出于本发明的目的，根据Ghose,1987,Pure and Appl.Chem.[纯粹与应用化学]59:257-268的程序，在pH 5，40℃下，使用羧甲基纤维素(CMC)作为底物确定内切葡聚糖酶活性。

片段：术语“片段”意指从成熟多肽主要部分的氨基和/或羧基末端缺失一个或多个(例如，几个)氨基酸的多肽；其中该片段具有酶活性。在一方面，片段含有酶的成熟多肽的至少85％(例如至少90％、或至少95％)的氨基酸残基。

半纤维素分解酶或半纤维素酶：术语“半纤维素分解酶”或“半纤维素酶”意指可对半纤维素材料进行水解的一种或多种(例如，几种)酶。参见，例如，Shallom,D.和Shoham,Y.,Microbial hemicellulases[微生物半纤维素酶],Current Opinion In Microbiology[微生物学新见],2003,6(3):219-228)。半纤维素酶是植物生物质降解中的关键组分。半纤维素酶的实例包括但不限于：乙酰甘露聚糖酯酶、乙酰木聚糖酯酶、***聚糖酶、***呋喃糖苷酶、香豆酸酯酶、阿魏酸酯酶、半乳糖苷酶、葡糖醛酸糖苷酶、葡糖醛酸酯酶、甘露聚糖酶、甘露糖苷酶、木聚糖酶、和木糖苷酶。这些酶的底物(半纤维素)是支链和直链多糖的异质群体，该多糖经由氢键与植物细胞壁中的纤维素微纤维键合，从而将它们交联成稳固网络。半纤维素还共价附接至木质素，从而与纤维素一起形成高度复杂的结构。半纤维素的可变结构和组织要求许多酶的协同作用以使其完全降解。半纤维素酶的催化模块是水解糖苷键的糖苷水解酶(GH)，或是水解乙酸或阿魏酸侧基团的酯键的碳水化合物酯酶(CE)。这些催化模块基于其一级序列的同源性，可以分配到GH和CE家族。一些家族(具有总体上类似的折叠)可以进一步分组为宗族(clan)，以字母标记(例如，GH-A)。在碳水化合物活性酶(CAZy)数据库中可得到这些以及其他碳水化合物活性酶的最详实和最新的分类。可以根据Ghose和Bisaria,1987,Pure&AppI.Chem[纯粹与应用化学],59:1739-1752，在合适的温度(例如50℃、55℃、或60℃)和pH(例如5.0或5.5)下测量半纤维素分解酶活性。

改善的洗涤性能：术语“改善的洗涤性能”在本文定义为相对于没有酶的类似洗涤的洗涤性能，酶展示出增加的洗涤性能，例如，通过增加尘螨去除或增加尘螨减少。

低严格条件：术语“低严格条件”意指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言，遵循标准DNA印迹程序，在42℃，于5X SSPE、0.3％SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼***DNA和25％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。最后在50℃使用2X SSC、0.2％SDS将运载体材料洗涤三次，每次15分钟。

成熟多肽：术语“成熟多肽”意指在翻译和任何翻译后修饰如N-末端加工、C-末端截短、糖基化、磷酸化等之后处于其最终形式的多肽。在本发明中，基于预测SEQ ID NO:2的氨基酸1至21是信号肽的SignalP 3.0程序(Bendtsen等人,2004,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]340:783-795)，SEQ ID NO:2的成熟多肽是SEQ ID NO:2的氨基酸22至300。

成熟多肽编码序列：术语“成熟多肽编码序列”意指编码具有酶活性的成熟多肽的多核苷酸。在一方面，基于SignalP程序(Nielsen等人,1997,Protein Engineering[蛋白质工程]10:1-6)，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO:1的核苷酸64至858，并且SEQ ID NO:1的核苷酸1至63编码信号肽。

中严格条件：术语“中严格条件”意指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言，遵循标准DNA印迹程序，在42℃，于5X SSPE、0.3％SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼***DNA和35％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。最后在55℃使用2X SSC、0.2％SDS将运载体材料洗涤三次，每次15分钟。

中-高严格条件：术语“中-高严格条件”意指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言，遵循标准DNA印迹程序，在42℃，于5X SSPE、0.3％SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼***DNA和35％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。最后在60℃使用2X SSC、0.2％SDS将运载体材料洗涤三次，每次15分钟。

序列同一性：两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的关联度通过参数“序列同一性”来描述。

出于本发明的目的，使用尼德曼-翁施算法(Needleman-Wunsch algorithm)(Needleman和Wunsch,1970,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48:443-453)来确定两个氨基酸序列之间的序列同一性，该算法如EMBOSS软件包(EMBOSS：The European MolecularBiology Open Software Suite[欧洲分子生物学开放软件套件],Rice等人,2000,TrendsGenet.[遗传学趋势]16:276-277)(优选5.0.0版本或更新版本)的尼德尔程序中所实施的。使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5以及EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版本)取代矩阵。将标记为“最长同一性”的尼德尔的输出(使用非简化选项获得)用作同一性百分比并且计算如下：

出于本发明的目的，使用尼德曼-翁施算法(Needleman和Wunsch,1970,同上)来确定两个脱氧核糖核苷酸序列之间的序列同一性，该算法如EMBOSS软件包(EMBOSS：TheEuropean Molecular Biology Open Software Suite[欧洲分子生物学开放软件套件],Rice等人,2000,同上)(优选5.0.0版本或更新版本)的尼德尔程序中所实施的。使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5以及EDNAFULL(NCBI NUC4.4的EMBOSS版本)取代矩阵。将标记为“最长同一性”的尼德尔的输出(使用非简化选项获得)用作同一性百分比并且计算如下：

纺织品：术语“纺织品”意指任何纺织品材料，该任何纺织品材料包括纱线、纱线中间体、纤维、非机织材料、天然材料、合成材料、以及任何其他纺织品材料，由这些材料制成的织物和由织物制成的产品(例如，服装和其他制品)。该纺织品或织物可以处于针织品、机织物(woven)、牛仔布(denim)、非机织物、毡、纱线、以及毛巾布的形式。该纺织品可以是基于纤维素的，如天然纤维素制品，包括棉、亚麻/亚麻布、黄麻、苎麻、剑麻或椰壳纤维，或者人造纤维素(例如，来源于木浆)，包括粘胶纤维/人造丝、乙酸纤维素纤维(三胞)、莱赛尔纤维(lyocell)或其共混物。纺织品或织物也可以不基于纤维素，如天然聚酰胺，包括羊毛、驼毛、羊绒、马海毛、兔毛和蚕丝，或合成聚合物如尼龙、芳族聚酰胺、聚酯、丙烯酸酯、聚丙烯和氨纶/弹性纤维(spandex/elastane)、或其共混物以及基于纤维素的纤维和不基于纤维素的纤维的共混物。共混物的实例是棉和/或人造丝/粘胶纤维与一种或多种伴随材料的共混物，该伴随材料如羊毛、合成纤维(例如聚酰胺纤维、丙烯酸纤维、聚酯纤维、聚氯乙烯纤维、聚氨酯纤维、聚脲纤维、芳族聚酰胺纤维)和/或含纤维素的纤维(例如人造丝/粘胶纤维、苎麻、亚麻/亚麻布、黄麻、乙酸纤维素纤维、莱赛尔纤维)。织物可以是常规的可洗涤衣物，例如有污渍的家用衣物。当使用术语织物或服装时，旨在也包括广义术语纺织品。

洗涤循环：术语“洗涤循环”在本文定义为洗涤操作，其中通过循环洗涤液并且任选地机械处理纺织品使纺织品暴露于洗涤液中持续一段时间，以便清洁纺织品，并且最后去除多余的洗涤液。在相同或不同温度下，洗涤循环可以重复一次、两次、三次、四次、五次或甚至六次。此后，通常将纺织品漂洗并且干燥。洗涤循环之一可以是浸泡步骤，其中将该纺织品保持浸泡在洗涤液中一段时间。

洗涤液：术语“洗涤液”旨在意指任选地包括用于例如洗衣的酶的水和洗涤剂组分的溶液或混合物。

器皿洗涤洗涤剂组合物：术语“器皿洗涤洗涤剂组合物”是指可用于从待清洁的表面(例如器皿的表面或器皿洗涤机内部存在的表面)去除和/或减少不希望的化合物的组合物。

器皿洗涤洗涤剂组合物可以是旨在用于减少和/或去除盘、餐桌用餐具、罐、锅、刀叉的污垢的任何组合物和用于减少和/或去除餐具洗涤机内表面的污垢的组合物的所有形式。本发明不限于任何特定类型的器皿洗涤洗涤剂组合物。这些术语涵盖针对所希望的特定类型的清洁组合物和产品的形式(例如，液体、凝胶、粉末、条、颗粒、糊剂或喷雾组合物)选择的任何洗涤剂组分。洗涤剂组合物可含有除了组合物中包含的淀粉酶和/或蛋白酶外的酶，例如一种或多种另外的酶，例如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、木葡聚糖酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原胶酶、过氧化物酶、卤代过氧合酶、过氧化氢酶和甘露聚糖酶，或其任何混合物；和洗涤剂组分。

器皿洗涤机：术语“器皿洗涤机”是指可用于工业的或机构的器皿洗涤的任何种类的洗涤机。该术语包括但不限于门器皿洗涤机、罩器皿洗涤机、传送带器皿洗涤机、台下器皿洗涤机(undercounter warewashing machine)、玻璃洗涤器、飞机器皿洗涤机(flightwarewashing machine)、罐和锅器皿洗涤机以及器具洗涤器。

器皿：术语“器皿”旨在意指任何形式的餐具、厨房器具、成套餐具或餐桌用餐具，例如但不限于锅、盘、饮水玻璃杯、杯子、刀、叉、匙、瓷料等。器皿可以由任何合适的材料(如金属、玻璃、橡胶、塑料、PVC、丙烯酸材料、陶瓷、瓷器或瓷料)制成。

洗涤性能：术语“洗涤性能”用作酶在例如清洁循环期间去除或减少待清洁表面或纺织品上存在的尘螨的能力。

洗涤时间：术语“洗涤时间”在本文定义为完整洗涤过程所花费的时间；即一个或多个洗涤循环和一个或多个漂洗循环在一起的时间。

具体实施方式

本发明涉及通过在洗涤循环中向洗涤剂中添加能够降解纤维素材料的一种或多种酶使得所述一种或多种酶从纺织品减少尘螨的用途。本发明的诸位发明人已经发现，通过向洗涤剂中添加能够降解纤维素材料的酶，可以显著减少附着在纺织品上的尘螨的数量。在一方面，所述酶是包含纤维素酶或半纤维素酶的酶组合物。

在另一方面，本发明涉及用于去除尘螨的酶组合物。其中，所述用于去除尘螨的酶组合物包含一种或多种纤维素酶或半纤维素酶。其中，所述纤维素酶可以是GH45纤维素酶。另外，所述GH45纤维素酶可以是GH45内切葡聚糖酶。在另外的方面，所述纤维素酶是SEQ IDNO:2的土生嗜热根串珠霉内切葡聚糖酶，或包含与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性的氨基酸序列或由其组成的纤维素酶。

在另一方面，本申请进一步包含洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物包含能够降解纤维素材料的酶或包含如上文提到的酶组合物。

在再一方面，本申请包含用于去除尘螨的方法，该方法包括：

(1)用包含能够降解纤维素材料的酶的洗涤剂组合物或包含能够降解纤维素材料的酶的酶组合物洗涤或暴露纺织品，其中所述能够降解纤维素材料的酶包含GH45纤维素酶，其中所述GH45纤维素酶是GH45内切葡聚糖酶，在另外的方面，所述内切葡聚糖酶是T.t内切葡聚糖酶；

(2)任选地漂洗该纺织品。

酶

包含纤维素酶或半纤维素酶的酶或酶组合物可以进一步包含一种或多种酶，

如蛋白酶、脂肪酶、角质酶、淀粉酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、***糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、氧化酶，例如漆酶、和/或过氧化物酶。

通常，选择的一种或多种酶的特性应当与所选择的洗涤剂相容(即，最适pH，与其他酶成分或非酶成分的相容性等)，并且该一种或多种酶应当以有效量存在。

纤维素酶

合适的纤维素酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。合适的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属(Bacillus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、腐质霉属(Humicola)、镰孢属(Fusarium)、梭孢壳霉属(Thielavia)、枝顶孢霉属(Acremonium)的纤维素酶，例如披露于US 4,435,307、US 5,648,263、US 5,691,178、US 5,776,757以及WO 89/09259中的由特异腐质霉(Humicola insolens)、嗜热毁丝霉(Myceliophthora thermophila)和尖孢镰孢(Fusarium oxysporum)产生的真菌纤维素酶。

尤其合适的纤维素酶是具有颜色护理益处的碱性或中性纤维素酶。此类纤维素酶的实例是描述于EP 0 495 257、EP 0 531 372、WO 96/11262、WO 96/29397、WO 98/08940中的纤维素酶。其他实例是例如描述于WO 94/07998、EP 0 531 315、US 5,457,046、US 5,686,593、US 5,763,254、WO 95/24471、WO 98/12307以及WO99/001544中的那些纤维素酶变体。

其他纤维素酶是具有以下序列的内切-β-1,4-葡聚糖酶，该序列与WO 2002/099091的SEQ ID NO:2的位置1至位置773的氨基酸序列具有至少97％的同一性，或具有以下序列的家族44木葡聚糖酶，该序列与WO 2001/062903的SEQ ID NO:2的位置40-559具有至少60％的同一性。

可商购的纤维素酶包括Celluzyme^TM和Carezyme^TM(诺维信公司(Novozymes A/S))、Carezyme Premium^TM(诺维信公司)、Celluclean^TM(诺维信公司)、CellucleanClassic^TM(诺维信公司)、Cellusoft^TM(诺维信公司)、Whitezyme^TM(诺维信公司)、Clazinase^TM和Puradax HA^TM(杰能科国际有限公司(Genencor International Inc.))以及KAC-500(B)^TM(花王株式会社(Kao Corporation))。

GH45纤维素酶

GH家族45纤维素酶(以前称为家族K)以转化异头构型方式起作用，以产生作为产物的寡糖的α-D异头体。已经阐明，在活性部位中，一种天冬氨酸氨基酸充当广义酸并且另一种充当广义碱。

家族45酶的三维结构已被阐明(参见，例如，以下文献中的特异腐质霉的结构：Davies等人，1996，ActaCrystallographica Section D-Biological Crystallography[结晶学学报D辑-生物晶体学]52:7-17第1部分)。这些酶含有附着第七条链的六条链的β-桶状结构。该结构含有平行和反平行的β链。活性中心位于开放的底物结合槽中。

如本文使用的，术语“GH45纤维素酶”、“家族45纤维素酶”或“Cel45”意指含有根据EC 3.2.1.4分类的糖苷水解酶家族45催化结构域的碳水化合物活性纤维素酶。该术语涵盖使用转化机制水解纤维素和纤维寡糖的碳水化合物活性酶，并且在催化性天冬氨酸氨基酸附近具有以下两个特征序列之一：(i)A/S/T-T-R/N/T-Y/F/T-X-D-X-X-X-X-X-C/A-A/G/S-W/C的第一保守特征序列和H/Q/D/N-F/L-D-I/L/F的第二保守特征序列两者；或(ii)具有H/Q/D/N-F/L-D-I/L/F的第二保守特征序列，但缺少所述第一保守序列。在一个实施例中，第二保守特征序列是H-F-D-I。

表1：家族45纤维素酶亚家族B成员：

表2：家族45纤维素酶亚家族A成员：

在优选的实施例中，GH45纤维素酶是土生嗜热根串珠霉内切葡聚糖酶。

在另外的方面，所述T.t内切葡聚糖酶选自由以下组成的组：

(1)T.t内切葡聚糖酶，该T.t内切葡聚糖酶包含SEQ ID NO:1的成熟多肽或其片段，或由其组成；

(2)T.t内切葡聚糖酶，该T.t内切葡聚糖酶包含与SEQ ID NO:1的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性的氨基酸序列，或由其组成；

(3)T.t内切葡聚糖酶，该T.t内切葡聚糖酶由多核苷酸编码，该多核苷酸包含与SEQ ID NO:2的成熟多肽编码序列具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性的核苷酸序列，或由其组成；

(4)T.t内切葡聚糖酶，该T.t内切葡聚糖酶由多核苷酸编码，该多核苷酸在至少高严格条件、非常高严格条件下，与SEQ ID NO:2的成熟多肽编码序列或其全长互补序列杂交。

洗涤剂组合物

能够降解纤维素材料的酶可以存在于包含至少一种或多种另外的酶的衣物洗涤剂组合物中。另外的酶可以选自由以下组成的组：半纤维素酶、过氧化物酶、蛋白酶、纤维素酶、木聚糖酶、脂肪酶、磷脂酶、酯酶、角质酶、果胶酶、甘露聚糖酶、果胶裂解酶、角蛋白酶、还原酶、氧化酶、酚氧化酶、脂加氧酶、木质酶、支链淀粉酶、鞣酸酶、戊聚糖酶、马拉纳酶、β-葡聚糖酶、***糖苷酶、透明质酸酶、软骨素酶、漆酶、DNA酶、叶绿素酶、淀粉酶、过水解酶、过氧化物酶、黄原胶酶及其混合物。在本发明的一个实施例中，至少一种或多种另外的酶选自蛋白酶、脂肪酶、甘露聚糖酶、果胶裂解酶和淀粉酶。

洗涤剂组合物包含表面活性剂，该表面活性剂可以选自由以下组成的组：阴离子、阳离子、非离子、半极性和兼性离子表面活性剂。另外，其他洗涤剂组分(如助洗剂和聚合物)可以包含在洗涤剂组合物中。当改善纺织品的吸水性时，它的益处在于物品(例如毛巾)在用于干燥皮肤或表面时可以吸收更多的水。

本发明进一步包含用于去除尘螨的方法，该方法包括使纺织品经受能够降解纤维素材料的酶，或经受包含能够降解纤维素材料的酶的酶组合物。

在一方面，用于去除尘螨的方法包括：

(3)用包含能够降解纤维素材料的酶的洗涤剂组合物或包含能够降解纤维素材料的酶的酶组合物洗涤或暴露纺织品，其中所述能够降解纤维素材料的酶包含GH45纤维素酶，其中所述GH45纤维素酶是GH45内切葡聚糖酶，在另外的方面，所述内切葡聚糖酶是T.t内切葡聚糖酶，

(4)任选地漂洗该纺织品。

洗涤剂组合物可以是例如衣物洗涤剂组合物，并且可以呈以下形式：粉末，条，均匀的片剂，具有两层或更多层的片剂，具有一个或多个室的袋，规则的或压缩的粉末，颗粒，糊剂，凝胶，或规则的、压缩的或浓缩的液体。该组合物可以是粉末或颗粒，其中该酸性材料作为外层涂覆在粉末或颗粒上。

甘露聚糖酶

合适的甘露聚糖酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学或遗传修饰的突变体。甘露聚糖酶可以是家族5或26的碱性甘露聚糖酶。它可以是来自芽孢杆菌属或腐质霉属的野生型，特别是来自粘琼脂芽孢杆菌(B.agaradhaerens)、地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)、嗜碱芽孢杆菌(B.halodurans)、克劳氏芽孢杆菌(B.clausii)、或特异腐质霉(H.insolens)。合适的甘露聚糖酶描述于WO 1999/064619中。可商购的甘露聚糖酶是Mannaway(诺维信公司)。

过氧化物酶/氧化酶

合适的过氧化物酶/氧化酶包括植物、细菌、或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。有用的过氧化物酶的实例包括来自鬼伞属(Coprinus)，例如来自灰盖鬼伞(C.cinereus)的过氧化物酶，及其变体，如在WO 93/24618、WO 95/10602和WO 98/15257中描述的那些。可商购的过氧化物酶包括Guardzyme^TM(诺维信公司)。根据本发明的过氧化物酶还包括卤代过氧化物酶，如氯过氧化物酶、溴过氧化物酶以及展示出氯过氧化物酶或溴过氧化物酶活性的化合物。根据其对卤素离子的特异性将卤代过氧化物酶进行分类。氯过氧化物酶(E.C.1.11.1.10)催化从氯离子形成次氯酸盐。

在实施例中，本发明的卤代过氧化物酶是氯过氧化物酶。优选地，卤代过氧化物酶是钒卤代过氧化物酶，即含钒酸盐的卤代过氧化物酶。在本发明的优选的方法中，将含钒酸盐的卤代过氧化物酶与氯离子来源组合。

已从许多不同真菌，特别是从暗色丝孢菌(dematiaceous hyphomycete)真菌组中分离出了卤代过氧化物酶，如卡尔黑霉属(Caldariomyces)(例如，煤卡尔黑霉(C.fumago))、链格孢属(Alternaria)、弯孢属(Curvularia)(例如，疣枝弯孢(C.verruculosa)和不等弯孢(C.inaequalis))、内脐蠕孢属(Drechslera)、细基格孢属(Ulocladium)以及葡萄孢属(Botrytis)。

还已从细菌如假单胞菌属(例如吡咯假单胞菌(P.pyrrocinia))和链霉菌属(Streptomyces)(例如，金色链霉菌(S.aureofaciens))中分离出了卤代过氧化物酶。

在优选的实施例中，卤代过氧化物酶可来源于弯孢属物种(Curvularia sp.)，特别是疣枝弯孢(Curvularia verruculosa)或不等弯孢(Curvularia inaequalis)，如描述于WO 95/27046中的不等弯孢CBS 102.42；或如描述于WO 97/04102中的疣枝弯孢CBS147.63或疣枝弯孢CBS 444.70；或来源于如描述于WO 01/79459中的Drechslerahartlebii、如描述于WO 01/79458中的盐沼小树状霉(Dendryphiella salina)、如描述于WO 01/79461中的Phaeotrichoconis crotalarie、或如描述于WO 01/79460中的Geniculosporium属物种。

根据本发明的氧化酶特别包括由酶分类EC 1.10.3.2囊括的任何漆酶或来源于其中的展示出漆酶活性的片段、或展示出类似活性的化合物，例如儿茶酚氧化酶(EC1.10.3.1)、邻氨基苯酚氧化酶(EC 1.10.3.4)或胆红素氧化酶(EC 1.3.3.5)。

蛋白酶

合适的蛋白酶包括细菌、真菌、植物、病毒或动物来源的那些，例如植物或微生物来源。优选微生物来源。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。它可以是碱性蛋白酶，如丝氨酸蛋白酶或金属蛋白酶。丝氨酸蛋白酶可以例如是S1家族(如胰蛋白酶)或S8家族(如枯草杆菌蛋白酶)的丝氨酸蛋白酶。金属蛋白酶可以例如是来自例如M4家族的嗜热菌蛋白酶或其他金属蛋白酶，如来自M5、M7或M8家族的那些。

术语“枯草杆菌酶”是指根据Siezen等人,Protein Engng.[蛋白质工程]4(1991)719-737和Siezen等人,Protein Science[蛋白质科学]6(1997)501-523的丝氨酸蛋白酶亚组。丝氨酸蛋白酶是特征为在活性位点具有与底物形成共价加合物的丝氨酸的蛋白酶的亚组。枯草杆菌酶可以被划分为6个亚类，即，枯草杆菌蛋白酶家族、嗜热蛋白酶家族、蛋白酶K家族、羊毛硫氨酸抗生素肽酶家族、Kexin家族和Pyrolysin家族。

枯草杆菌酶的实例是来源于芽孢杆菌属的那些，例如，US 7262042和WO 09/021867中所述的迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)、嗜碱芽孢杆菌(B.alkalophilus)、枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)和吉氏芽孢杆菌(Bacillus gibsonii)；和描述于WO 89/06279中的迟缓枯草杆菌蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶Novo、枯草杆菌蛋白酶Carlsberg、地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)、枯草杆菌蛋白酶BPN’、枯草杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白酶168以及描述于(WO 93/18140)中的蛋白酶PD138。其他有用的蛋白酶可以是描述于WO 92/175177、WO 01/016285、WO 02/026024和WO 02/016547中的那些。胰蛋白酶样蛋白酶的实例是胰蛋白酶(例如猪或牛来源的)和镰孢属蛋白酶(描述于WO 89/06270、WO 94/25583和WO 05/040372中)，以及来源于纤维单胞菌(Cellumonas)的胰凝乳蛋白酶(描述于WO 05/052161和WO 05/052146中)。

另外优选的蛋白酶是来自迟缓芽孢杆菌DSM 5483的碱性蛋白酶(如描述于例如WO95/23221中)及其变体(描述于WO 92/21760、WO 95/23221、EP 1921147以及EP 1921148中)。

金属蛋白酶的实例是如WO 07/044993(杰能科国际有限公司(Genencor Int.))中所描述的中性金属蛋白酶，例如来源于解淀粉芽孢杆菌的那些。

有用的蛋白酶的实例是描述于以下中的变体：WO 92/19729、WO 96/034946、WO98/20115、WO 98/20116、WO 99/011768、WO 01/44452、WO 03/006602、WO 04/03186、WO 04/041979、WO 07/006305、WO 11/036263、WO 11/036264，尤其是在以下位置中的一个或多个处具有取代的变体：3、4、9、15、27、36、57、68、76、87、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、106、118、120、123、128、129、130、160、167、170、194、195、199、205、206、217、218、222、224、232、235、236、245、248、252和274，使用BPN’进行编号。更优选地，枯草杆菌酶变体可以包含以下突变：S3T、V4I、S9R、A15T、K27R、*36D、V68A、N76D、N87S,R、*97E、A98S、S99G,D,A、S99AD、S101G,M,R S103A、V104I,Y,N、S106A、G118V,R、H120D,N、N123S、S128L、P129Q、S130A、G160D、Y167A、R170S、A194P、G195E、V199M、V205I、L217D、N218D、M222S、A232V、K235L、Q236H、Q245R、N252K、T274A(使用BPN’进行编号)。

合适的可商购的蛋白酶包括以下列商品名出售的那些：

Duralase^Tm、Durazym^Tm、

(诺维信公司)，以下列商品名出售的那些：

(丹尼斯克集团(Danisco)/杜邦公司(DuPont))、Axapem^TM(吉斯特-布罗卡德斯公司(Gist-Brocases N.V.))、BLAP(US 5352604的图29中所示的序列)及其变体(汉高公司(Henkel AG))和来自花王株式会社(Kao)的KAP(嗜碱芽孢杆菌(Bacillus alkalophilus)枯草杆菌蛋白酶)。

脂肪酶和角质酶

合适的脂肪酶和角质酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体酶或蛋白质工程化的突变体酶。实例包括来自嗜热丝孢菌属(Thermomyces)，例如来自如EP258068和EP 305216中描述的疏棉状嗜热丝孢菌(T.lanuginosus)(早先命名为疏棉状腐质霉(Humicola lanuginosa))的脂肪酶；来自腐质霉属(Humicola)，例如特异腐质霉(H.insolens)(WO 96/13580)的角质酶；来自假单胞菌属的菌株(这些中的一些现在改名为伯克霍尔德菌属(Burkholderia))，例如产碱假单胞菌(P.alcaligenes)或假产碱假单胞菌(P.pseudoalcaligenes)(EP 218272)、洋葱假单胞菌(P.cepacia)(EP 331376)、假单胞菌属菌株SD705(WO 95/06720和WO 96/27002)、威斯康星假单胞菌(P.wisconsinensis)(WO96/12012)的脂肪酶；GDSL-型链霉菌属(Streptomyces)脂肪酶(WO 10/065455)；来自稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)的角质酶(WO 10/107560)；来自门多萨假单胞菌(Pseudomonasmendocina)的角质酶(US 5,389,536)；来自褐色嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca)的脂肪酶(WO 11/084412)；嗜热脂肪土芽孢杆菌(Geobacillus stearothermophilus)脂肪酶(WO11/084417)；来自枯草芽孢杆菌的脂肪酶(WO 11/084599)；以及来自灰色链霉菌(Streptomyces griseus)(WO 11/150157)和始旋链霉菌(S.pristinaespiralis)(WO 12/137147)的脂肪酶。

其他实例是脂肪酶变体，例如EP 407225、WO 92/05249、WO 94/01541、WO 94/25578、WO 95/14783、WO 95/30744、WO 95/35381、WO 95/22615、WO 96/00292、WO 97/04079、WO 97/07202、WO 00/34450、WO 00/60063、WO 01/92502、WO 07/87508以及WO 09/109500中描述的那些。

优选的商业化脂肪酶产品包括Lipolase^TM、Lipex^TM；Lipolex^TM和Lipoclean^TM(诺维信公司)、Lumafast(最初来自杰能科公司(Genencor))、以及Lipomax(最初来自吉斯特-布罗卡德斯公司(Gist-Brocades))。

仍其他实例是有时称为酰基转移酶或过水解酶的脂肪酶，例如与南极假丝酵母(Candida antarctica)脂肪酶A具有同源性的酰基转移酶(WO 10/111143)、来自耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)的酰基转移酶(WO 05/56782)、来自CE 7家族的过水解酶(WO 09/67279)以及耻垢分枝杆菌过水解酶的变体(特别是来自亨斯迈纺织品染化有限公司(Huntsman Textile Effects Pte Ltd)的商业化产品Gentle Power Bleach中所用的S54V变体)(WO 10/100028)。

淀粉酶

可以与本发明的酶制剂一起使用的合适的淀粉酶可以是α-淀粉酶或葡糖淀粉酶并且可以具有细菌或真菌起源。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。淀粉酶包括例如从芽孢杆菌属、例如地衣芽孢杆菌的特定菌株(更详细地描述于GB 1,296,839中)获得的α-淀粉酶。

合适的淀粉酶包括具有WO 95/10603中的SEQ ID NO:2的淀粉酶或与SEQ ID NO:3具有90％序列同一性的其变体。优选的变体描述于WO 94/02597、WO 94/18314、WO 97/43424中以及WO 99/019467的SEQ ID NO:4中，如在以下位置的一个或多个处具有取代的变体：15、23、105、106、124、128、133、154、156、178、179、181、188、190、197、201、202、207、208、209、211、243、264、304、305、391、408和444。

不同的合适的淀粉酶包括具有WO 02/010355中的SEQ ID NO:6的淀粉酶或与SEQID NO:6具有90％序列同一性的其变体。SEQ ID NO:6的优选的变体是在位置181和182中具有缺失并且在位置193中具有取代的那些。

其他合适的淀粉酶是包含示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:6中的来源于解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33和示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:4中的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶的残基36-483的杂合α-淀粉酶或其具有90％序列同一性的变体。此杂合α-淀粉酶的优选的变体是在以下位置中的一个或多个位置处具有取代、缺失或***的那些：G48、T49、G107、H156、A181、N190、M197、I201、A209、和Q264。包含示于WO 2006/066594的SEQ IDNO:6中的来源于解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33和SEQ ID NO:4的残基36-483的杂合α-淀粉酶的最优选的是具有以下取代的变体：

M197T；

H156Y+A181T+N190F+A209V+Q264S；或

G48A+T49I+G107A+H156Y+A181T+N190F+I201F+A209V+Q264S。

另外的合适的淀粉酶是具有WO 99/019467中的SEQ ID NO:6的淀粉酶或与SEQ IDNO:6具有90％序列同一性的其变体。SEQ ID NO:6的优选的变体是在以下位置中的一个或多个位置中具有取代、缺失、或***的那些：R181、G182、H183、G184、N195、I206、E212、E216和K269。特别优选的淀粉酶是在位置R181和G182、或位置H183和G184中具有缺失的那些。

可以使用的另外的淀粉酶是具有WO 96/023873的SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQID NO:2或SEQ ID NO:7的那些或与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7具有90％序列同一性的其变体。SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、或SEQ ID NO:7的优选的变体是在以下位置中的一个或多个位置处具有取代、缺失或***的那些：140、181、182、183、184、195、206、212、243、260、269、304、和476(使用WO 96/023873的SEQ ID 2进行编号)。更优选的变体是在选自181、182、183、和184的两个位置(如181和182、182和183、或位置183和184)中具有缺失的那些。SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:7的最优选的淀粉酶变体是在位置183和184中具有缺失并且在位置140、195、206、243、260、304、和476中的一个或多个位置处具有取代的那些。

可以使用的其他淀粉酶是具有WO 08/153815的SEQ ID NO:2、WO 01/66712中的SEQ ID NO:10，或与WO 08/153815的SEQ ID NO:2具有90％序列同一性的其变体，或与WO01/66712中的SEQ ID NO:10具有90％序列同一性的其变体的淀粉酶。WO 01/66712中的SEQID NO:10的优选的变体是在以下位置中的一个或多个位置处具有取代、缺失或***的那些：176、177、178、179、190、201、207、211、和264。

另外的合适的淀粉酶是具有WO 09/061380的SEQ ID NO:2的淀粉酶或与SEQ IDNO:2具有90％序列同一性的其变体。SEQ ID NO:2的优选的变体是在以下位置中的一个或多个位置处具有C-末端截短、和/或取代、缺失或***的那些：Q87、Q98、S125、N128、T131、T165、K178、R180、S181、T182、G183、M201、F202、N225、S243、N272、N282、Y305、R309、D319、Q320、Q359、K444、和G475。SEQ ID NO:2的更优选的变体是在以下位置中的一个或多个位置处具有取代的那些：Q87E,R、Q98R、S125A、N128C、T131I、T165I、K178L、T182G、M201L、F202Y、N225E,R、N272E,R、S243Q,A,E,D、Y305R、R309A、Q320R、Q359E、K444E、以及G475K，和/或在位置R180和/或S181或T182和/或G183中具有缺失的那些。SEQ ID NO:2的最优选的淀粉酶变体是具有以下取代的那些：

N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K；

N128C+K178L+T182G+F202Y+Y305R+D319T+G475K；

S125A+N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K；或

S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+Y305R+G475K，其中这些变体是C-末端截短的，并且任选地进一步包含在位置243处的取代和/或在位置180和/或位置181处的缺失。

另外的合适的淀粉酶是具有WO 13184577的SEQ ID NO:1的淀粉酶或与SEQ IDNO:1具有90％序列同一性的其变体。SEQ ID NO:1的优选的变体是在以下位置中的一个或多个位置处具有取代、缺失或***的那些：K176、R178、G179、T180、G181、E187、N192、M199、I203、S241、R458、T459、D460、G476和G477。SEQ ID NO:1的更优选的变体是在以下位置中的一个或多个位置处具有取代的那些：K176L、E187P、N192FYH、M199L、I203YF、S241QADN、R458N、T459S、D460T、G476K、以及G477K，和/或在位置R178和/或S179或T180和/或G181中具有缺失的那些。SEQ ID NO:1的最优选的淀粉酶变体是具有以下取代的那些：

E187P+I203Y+G476K

E187P+I203Y+R458N+T459S+D460T+G476K

其中这些变体任选地进一步包含在位置241处的取代和/或在位置178和/或位置179处的缺失。

另外的合适的淀粉酶是具有WO 10104675的SEQ ID NO:1的淀粉酶或与SEQ IDNO:1具有90％序列同一性的其变体。SEQ ID NO:1的优选的变体是在以下位置中的一个或多个位置处具有取代、缺失或***的那些：N21、D97、V128、K177、R179、S180、I181、G182、M200、L204、E242、G477和G478。SEQ ID NO:1的更优选的变体是在以下位置中的一个或多个位置处具有取代的那些：N21D、D97N、V128I、K177L、M200L、L204YF、E242QA、G477K、以及G478K，和/或在位置R179和/或S180或I181和/或G182中具有缺失的那些。SEQ ID NO:1的最优选的淀粉酶变体是具有以下取代的那些：

N21D+D97N+V128I

其中这些变体任选地进一步包含在位置200处的取代和/或在位置180和/或位置181处的缺失。

其他合适的淀粉酶是具有WO 01/66712中的SEQ ID NO:12的α-淀粉酶或与SEQ IDNO:12具有至少90％序列同一性的变体。优选的淀粉酶变体是在WO 01/66712中的SEQ IDNO:12的以下位置中的一个或多个位置处具有取代、缺失或***的那些：R28、R118、N174；R181、G182、D183、G184、G186、W189、N195、M202、Y298、N299、K302、S303、N306、R310、N314；R320、H324、E345、Y396、R400、W439、R444、N445、K446、Q449、R458、N471、N484。特别优选的淀粉酶包括具有D183和G184的缺失并且具有取代R118K、N195F、R320K和R458K的变体，以及另外在一个或多个选自下组的位置处具有取代的变体：M9、G149、G182、G186、M202、T257、Y295、N299、M323、E345、和A339，最优选的是另外地在所有这些位置处具有取代的变体。

其他实例是淀粉酶变体，例如WO 2011/098531、WO 2013/001078和WO 2013/001087中所述的那些。

可商购的淀粉酶是Duramyl^TM、Termamyl^TM、Fungamyl^TM、Stainzyme ^TM、StainzymePlus^TM、Natalase^TM、Liquozyme X和BAN^TM(来自诺维信公司)、以及Rapidase^TM、Purastar^TM/Effectenz^TM、Powerase、Preferenz S1000、Preferenz S100和Preferenz S110(来自杰能科国际公司/杜邦公司)。

酶的浓度

在本发明的一个实施例中，可以将本发明的能够降解纤维素材料的酶以对应于以下的量用于洗涤剂组合物中：每升的洗涤液0.001-200mg的蛋白质，如0.005-100mg的蛋白质，优选地0.01-50mg的蛋白质，更优选地0.05-20mg的蛋白质，甚至更优选地0.1-10mg的蛋白质。

可以使用常规稳定剂稳定化本发明的洗涤剂组合物的一种或多种酶，这些常规稳定剂例如是多元醇，例如丙二醇或甘油、糖或糖醇、乳酸、硼酸或硼酸衍生物，例如芳香族硼酸酯，或苯基硼酸衍生物，例如4-甲酰苯基硼酸，并且可以如在例如WO 92/19709和WO 92/19708中所描述配制该组合物。

表面活性剂

衣物洗涤剂组合物可以包含一种或多种表面活性剂，它们可以是阴离子的和/或阳离子的和/或非离子的和/或半极性的和/或兼性离子的，或其混合物。

在特定的实施例中，洗涤剂组合物包括一种或多种非离子表面活性剂和一种或多种阴离子表面活性剂的混合物。一种或多种表面活性剂典型地以按重量计从约0.1％至60％，例如约1％至约40％、或约3％至约20％、或约3％至约10％的水平存在。基于所希望的清洁应用来选择该一种或多种表面活性剂，并且该一种或多种表面活性剂可以包括本领域中已知的任何一种或多种常规表面活性剂。

当被包括在其中时，该洗涤剂将通常含有按重量计从约1％至约40％的阴离子表面活性剂，如从约5％至约30％，包括从约5％至约15％，或从约15％至约20％，或从约20％至约25％的阴离子表面活性剂。阴离子表面活性剂的非限制性实例包括硫酸盐和磺酸盐，特别是直链烷基苯磺酸盐(LAS)、LAS的异构体、支链烷基苯磺酸盐(BABS)、苯基链烷磺酸盐、α-烯烃磺酸盐(AOS)、烯烃磺酸盐、链烯烃磺酸盐、链烷-2,3-二基双(硫酸盐)、羟基链烷磺酸盐以及二磺酸盐、烷基硫酸盐(AS)(如十二烷基硫酸钠(SDS))、脂肪醇硫酸盐(FAS)、伯醇硫酸盐(PAS)、醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES，也被称为醇乙氧基硫酸盐或脂肪醇醚硫酸盐)、仲链烷磺酸盐(SAS)、石蜡磺酸盐(PS)、酯磺酸盐、磺化的脂肪酸甘油酯、α-磺基脂肪酸甲酯(α-SFMe或SES)(包括甲酯磺酸盐(MES))、烷基琥珀酸或烯基琥珀酸、十二烯基/十四烯基琥珀酸(DTSA)、氨基酸的脂肪酸衍生物、磺基琥珀酸的二酯和单酯或脂肪酸盐(皂)、及其组合。

当被包括在其中时，该洗涤剂将通常含有按重量计从约1％至约40％的阳离子表面活性剂，例如从约0.5％至约30％，特别是从约1％至约20％、从约3％至约10％，如从约3％至约5％、从约8％至约12％或从约10％至约12％。阳离子表面活性剂的非限制性实例包括烷基二甲基乙醇季胺(ADMEAQ)、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、二甲基二硬脂酰氯化铵(DSDMAC)、以及烷基苄基二甲基铵、烷基季铵化合物、烷氧基化季铵(AQA)化合物、酯季铵及其组合。

当被包括在其中时，该洗涤剂将通常含有按重量计从约0.2％至约40％的非离子表面活性剂，例如从约0.5％至约30％，特别是从约1％至约20％、从约3％至约10％，如从约3％至约5％、从约8％至约12％或从约10％至约12％。非离子表面活性剂的非限制性实例包括醇乙氧基化物(AE或AEO)、醇丙氧基化物、丙氧基化脂肪醇(PFA)、烷氧基化脂肪酸烷基酯(如乙氧基化和/或丙氧基化脂肪酸烷基酯)、烷基酚乙氧基化物(APE)、壬基酚乙氧基化物(NPE)、烷基多糖苷(APG)、烷氧基化胺、脂肪酸单乙醇酰胺(FAM)、脂肪酸二乙醇酰胺(FADA)、乙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺(EFAM)、丙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺(PFAM)、多羟基烷基脂肪酸酰胺、或葡萄糖胺的N-酰基N-烷基衍生物(葡糖酰胺(GA)、或脂肪酸葡糖酰胺(FAGA))、以及以SPAN和TWEEN商品名可获得的产品、及其组合。

当被包括在其中时，洗涤剂将通常含有按重量计从约0％至约20％的半极性表面活性剂。半极性表面活性剂的非限制性实例包括氧化胺(AO)，如烷基二甲胺氧化物、N-(椰油基烷基)-N,N-二甲胺氧化物和N-(牛油-烷基)-N,N-双(2-羟乙基)胺氧化物以及其组合。

当被包括在其中时，洗涤剂将通常含有按重量计约0％至约20％的兼性离子表面活性剂。兼性离子表面活性剂的非限制性实例包括甜菜碱，如烷基二甲基甜菜碱、磺基甜菜碱、及其组合。

本发明的多肽还可以结合到WO 97/07202中所披露的洗涤剂配制品中，将其通过引用而特此并入。

助洗剂和共助洗剂

洗涤剂组合物可以包含按重量计约0％-10％(如约0.1％至约5％)的助洗剂或共助洗剂、或其混合物。在柔软剂中，助洗剂的水平典型地为0％-1％，特别是0％-0.5％。助洗剂和/或共助洗剂可以特别是与Ca和Mg形成水溶性复合物的螯合试剂。可以使用本领域中已知的用于在柔软剂中使用的任何助洗剂和/或共助洗剂。助洗剂的非限制性实例包括沸石、二磷酸盐(焦磷酸盐)、三磷酸盐如三磷酸钠(STP或STPP)、碳酸盐如碳酸钠、可溶性硅酸盐如偏硅酸钠、层状硅酸盐(例如来自赫斯特公司(Hoechst)的SKS-6)、乙醇胺如2-氨基乙-1-醇(MEA)、二乙醇胺(DEA，又称为2,2’-亚氨基二乙-1-醇)、三乙醇胺(TEA，又称为2,2’,2”-次氮基三乙-1-醇)以及(羧甲基)菊粉(CMI)、及其组合。

洗涤剂组合物还可以包含按重量计0％-5％，如约0％至约2％的洗涤剂共助洗剂。洗涤剂组合物可以包括单独的共助洗剂、或与助洗剂例如沸石助洗剂组合的共助洗剂。共助洗剂的非限制性实例包括聚丙烯酸酯的均聚物或其共聚物，如聚(丙烯酸)(PAA)或共聚(丙烯酸/马来酸)(PAA/PMA)。另外的非限制性实例包括柠檬酸盐、螯合剂(例如氨基羧酸盐、氨基聚羧酸盐、和膦酸盐)、以及烷基琥珀酸、或烯基琥珀酸。另外的特别的实例包括2,2’,2”-次氨基三乙酸(NTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、亚氨基二丁二酸(IDS)、乙二胺-N,N’-二丁二酸(EDDS)、甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)、谷氨酸-N,N-二乙酸(GLDA)、1-羟基乙烷-1,1-二膦酸(HEDP)、乙二胺四(亚甲基膦酸)(EDTMPA)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTMPA或DTPMPA)、N-(2-羟乙基)亚氨基二乙酸(EDG)、天冬氨酸-N-单乙酸(ASMA)、天冬氨酸-N,N-二乙酸(ASDA)、天冬氨酸-N-单丙酸(ASMP)、亚氨基二丁二酸(iminodisuccinic acid)(IDA)、N-(2-磺甲基)-天冬氨酸(SMAS)、N-(2-磺乙基)-天冬氨酸(SEAS)、N-(2-磺甲基)-谷氨酸(SMGL)、N-(2-磺乙基)-谷氨酸(SEGL)、N-甲基亚氨基二乙酸(MIDA)、α-丙氨酸-N,N-二乙酸(α-ALDA)、丝氨酸-N,N-二乙酸(SEDA)、异丝氨酸-N,N-二乙酸(ISDA)、苯丙氨酸-N,N-二乙酸(PHDA)、邻氨基苯甲酸-N,N-二乙酸(ANDA)、磺胺酸-N,N-二乙酸(SLDA)、牛磺酸-N,N-二乙酸(TUDA)以及磺甲基-N,N-二乙酸(SMDA)、N-(2-羟乙基)-亚乙基二胺-N,N’,N”-三乙酸盐(HEDTA)、二乙醇甘氨酸(DEG)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTPMP)、氨基三(亚甲基膦酸)(ATMP)及其组合和盐。另外的示例性助洗剂和/或共助洗剂描述于例如WO 09/102854、US 5977053中。

聚合物

该洗涤剂可以包含按重量计0-10％(如0.5％-5％、2％-5％、0.5％-2％或0.2％-1％)的聚合物。可以使用本领域中已知的用于在柔软剂中使用的任何聚合物。聚合物可以作为如上文提到的共助洗剂起作用，或可以提供抗再沉积、纤维保护、污垢释放、染料转移抑制、消泡特性、香料包封性和润滑性。一些聚合物可以具有多于一种的以上提及的特性和/或多于一种的下文提及的基序。示例性聚合物包括聚季铵盐、三聚氰胺聚合物、硅氧烷、硅酮、(羧甲基)纤维素(CMC)、聚(乙烯醇)(PVA)、聚(乙烯吡咯烷酮)(PVP)、聚(乙二醇)或聚(环氧乙烷)(PEG)、乙氧基化的聚(亚乙基亚胺)、羧甲基菊粉(CMI)、和聚羧酸酯(例如PAA、PAA/PMA、聚-天冬氨酸、和甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物)、疏水修饰的CMC(HM-CMC)、对苯二甲酸和低聚乙二醇的共聚物、聚(对苯二甲酸乙二酯)和聚(氧乙烯对苯二甲酸酯)的共聚物(PET-POET)、PVP、聚(乙烯基咪唑)(PVI)、聚(乙烯吡啶-N-氧化物)(PVPO或PVPNO)以及聚乙烯吡咯烷酮-乙烯基咪唑(PVPVI)。另外的示例性聚合物包括磺化的聚羧酸酯、聚环氧乙烷和聚环氧丙烷(PEO-PPO)、以及乙氧基硫酸二季铵盐。其他示例性聚合物披露于例如WO2006/130575中。还考虑了以上提及的聚合物的盐。

辅料

还可以利用本领域中已知的用于在柔软剂中使用的任何洗涤剂组分。其他任选的柔软剂组分包括溶剂(包括异丙醇、丙二醇、烷烃/环烷烃)、防缩剂、抗污垢再沉积剂、抗皱剂、杀细菌剂、防腐剂(包括苯并异噻唑啉酮、甲基异噻唑啉酮和/或乳酸)、粘合剂、染料、酶稳定剂(包括硼酸、硼酸盐、CMC和/或多元醇，例如丙二醇)、乳液稳定剂、消泡剂(包括二甲硅油)、皮肤调理剂(包括辛酸/癸酸甘油酯、硬脂酸乙基己酯或椰油)，单独或组合使用。可以使用本领域中已知的用于在柔软剂中使用的任何成分。此类成分的选择完全在技术人员的技术范围内。

通过以下实例进一步描述本发明，这些实例不应理解为对本发明的范围进行限制。

抗再沉积剂

本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种抗再沉积剂，如羧甲基纤维素(CMC)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚氧乙烯和/或聚乙二醇(PEG)、丙烯酸的均聚物、丙烯酸和马来酸的共聚物、和乙氧基化的聚乙烯亚胺。以上在污垢释放聚合物下所描述的基于纤维素的聚合物还可以作为抗再沉积剂起作用。

洗涤剂产品的配制

本发明的洗涤剂组合物可以呈任何常规形式，例如条，均匀的片剂，具有两层或更多层的片剂，具有一个或多个室的袋，规则的或压缩的粉末，颗粒，糊剂，凝胶，或规则的、压缩的或浓缩的液体。

袋可以被配置为单一室或多室。它可以具有合适的用于容持组合物的任何形式、形状和材料，例如在与水接触之前，不使组合物从袋中释放出来。该袋由水溶性膜制成，它包含了一个内部体积。可以将所述内部体积分成袋的室。优选的膜是聚合物材料，优选地形成膜或薄片的聚合物。优选的聚合物、共聚物或其衍生物是经选择的聚丙烯酸酯、和水溶性丙烯酸酯共聚物、甲基纤维素、羧甲基纤维素、糊精钠、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、麦芽糊精、聚甲基丙烯酸酯，最优选地是聚乙烯醇共聚物以及羟丙基甲基纤维素(HPMC)。优选地，聚合物在膜例如PVA中的水平是至少约60％。优选的平均分子量将典型地是约20,000至约150,000。膜还可以是共混组合物，这些共混组合物包含可水解降解并且可水溶的聚合物共混物，如聚乳酸和聚乙烯醇(已知在贸易参考号M8630下，如由美国印第安纳州的MonoSol有限责任公司(MonoSol LLC)销售)加增塑剂，像甘油、乙二醇、丙二醇、山梨醇及其混合物。袋可以包含固体洗衣清洁组合物或部分组分和/或液体清洁组合物或由水溶性膜分开的部分组分。用于液体组分的室在组成上可以与含有固体的室不同：US2009/0011970 A1。

可以由水溶性袋中的或片剂的不同层中的室来将洗涤剂成分彼此物理分开。因此，可以避免组分间的不良的储存相互作用。在洗涤液中，每个室的不同溶解曲线还可以引起所选择的组分的延迟溶解。

非单位剂量的液体或凝胶洗涤剂可以是水性的，典型地含有按重量计至少20％并且高达95％的水，如高达约70％的水、高达约65％的水、高达约55％的水、高达约45％的水、高达约35％的水。包括但不限于链烷醇、胺、二醇、醚、以及多元醇的其他类型的液体可以被包括在水性液体或凝胶中。水性液体或凝胶洗涤剂可以含有从0-30％的有机溶剂。

液体或凝胶洗涤剂可以是非水性的。

共颗粒中酶的配制品

本发明的酶可以被配制为颗粒，例如，配制为组合一种或多种酶的共颗粒。然后，每种酶将存在于多种颗粒中，这些颗粒确保酶在洗涤剂中的分布更均匀。这还减少了由于不同的粒度而导致的不同酶的物理隔离。用于生产针对洗涤剂工业的多酶共颗粒的方法披露于IP.com披露内容IPCOM000200739D中。

通过使用共颗粒的酶的配制品的另一个实例披露于WO 2013/188331中，其涉及包含以下的洗涤剂组合物：(a)多酶共颗粒；(b)小于10wt沸石(无水的基础上)；和(c)少于10wt磷酸盐(无水的基础上)，其中所述酶共颗粒包含从10wt％至98wt％的水分汇组分(sink component)，并且所述组合物另外还包含从20wt％至80wt％的洗涤剂水分汇组分。

WO 2013/188331还涉及处理和/或清洁表面(优选地织物表面)的方法，该方法包括以下步骤：(i)使所述表面在水性洗涤液中与如在本文要求保护的并且描述的洗涤剂组合物接触，(ii)漂洗和/或干燥该表面。

多酶共颗粒可以包含本发明的酶和(a)一种或多种选自下组的酶，该组由以下组成：第一次洗涤脂肪酶、清洁纤维素酶、木葡聚糖酶、过水解酶、过氧化物酶、脂加氧酶、漆酶、及其混合物；和(b)选自由以下组成的组一种或多种酶：半纤维素酶、蛋白酶、护理纤维素酶、纤维二糖脱氢酶、木聚糖酶、磷脂酶、酯酶、角质酶、果胶酶、甘露聚糖酶、果胶裂解酶、角蛋白酶、还原酶、氧化酶、酚氧化酶、木质酶、支链淀粉酶、鞣酸酶、戊聚糖酶、地衣聚糖酶、葡聚糖酶、***糖苷酶、透明质酸酶、软骨素酶、淀粉酶、及其混合物。

实例

洗涤方法

本发明的组合物基本上用于任何洗涤、清洁和/或织物护理方法中，这些方法包括但不限于浸泡方法、预处理方法、具有漂洗步骤的方法(其中可以添加单独的漂洗剂和组合物)、以及后处理方法。

本文所述的方法以通常的方式使织物与洗涤溶液接触，并在下文中举例说明。常规的洗衣方法用溶解或分散在其中的有效量的衣物洗涤剂和/或织物护理组合物的水性液体处理弄脏的织物。本发明的方法在清洁过程中方便地进行。清洁方法优选在5℃至95℃，尤其是在10℃与60℃之间进行。处理溶液的pH值为6-12，优选地7至10。

以下实例旨在举例说明本发明的组合物，但不一定旨在限制或以其他方式限定本发明的范围。在洗涤剂组合物中，通过按总组合物的重量计的纯酶表示酶水平，并且除非另外说明，否则按总组合物的重量计的洗涤剂成分表示洗涤剂成分水平。

材料和方法

测试酶：

根据WO 2012/089024获得的SEQ ID NO:2的土生嗜热根串珠霉内切葡聚糖酶；

织物：

CN-42，针织棉，商购自测试材料BV中心(Center for Testmaterials B.V，CFT)，荷兰；

E-252，条纹彩色棉，商购自测试材料BV中心，荷兰；

E-252PA，条纹彩色棉，来源于上文提到的E-252，其通过以下方法制备：将E-252在Wascator自动洗涤机中在40℃温度下预处理12小时，以在表面上产生可见的起球；

标准洗涤剂A：

用以下成分制备标准洗涤剂A：

方法：

洗涤方法

Terg-O-tometer(TOM)洗涤测定

Terg-O-tometer(TOM)是一种中等规模标准洗涤***，它可以应用于同时测试16种不同的洗涤条件。TOM基本上是大型温控水浴，其中浸入了多达16个开口金属烧杯。每个烧杯构成一个小的顶装式洗涤机并且在实验期间，每个烧杯含有特定洗涤剂/酶***的溶液并且测试棉织物的性能。使用旋转搅拌臂来获得所需的机械应力。所述臂搅拌在每个烧杯内的液体。因为TOM烧杯没有盖子，所以能够在TOM实验期间收回样品并且在线分析信息。

设备：使用具有16个钢制烧杯并且每个烧杯具有1个旋转搅拌器的水浴，每个烧杯的容量是1000mL的洗涤剂溶液。将温度设置为40℃。将水浴充满水。将转速设定为200rpm/min。

1.将Terg-O-Tometer中的温度设置为40℃，并且启动在水浴中旋转。将温度保持在40+/-0.5℃。

2.通过向所述溶液中添加所需量的洗涤剂来制备洗涤液，并在40+/-0.5℃和14dH下将其置于桶中磁力搅拌10min。洗涤液应该在制备之后30至60min之内使用。

3.将1000ml洗涤液添加到TOM烧杯中。

4.以200rpm开始搅拌，并且任选地向该烧杯中添加酶。

5.将织物撒到烧杯中，然后放入压载加载物。

6.当小块布样和压载物添加到烧杯中时开始时间测量。

7.洗涤70分钟。

8.停止搅拌。

9.将洗涤加载物从TOM烧杯转移到筛子并且用冷自来水漂洗。

10.将测试材料与压载加载物分开。在流动的水下，将测试材料转移到含冷自来水的5L烧杯中。

11.设定计时器为5分钟。

12.用手温和地压出水并且将测试小块布样放在覆盖着一张纸的托盘上。将另一张纸加至小块布样的顶部。

13.将小块布样置于滚筒干燥机中干燥，然后用如下所述的Color Eye进行测量。

抗起球效果测定

通过Color Eye设备(CE7000/CE7000A，拉尔哥公司(Largo AB))测量E-252PA。L值用于量化抗起球益处。L指示从0至100等级的白/黑变化，并且L的降低意味着黑色的增加(白色的减少)，并且L的增加意味着白色的增加(黑色的减少)。因此，L值越低，抗起球效果越好。

由感官小组评估CN-42，邀请8-12名小组成员对抗起球效果进行评价。评分越高，CN-42的效果越好。

抗尘螨实验：

测试程序以及材料如下：

尘螨：休斯热带爪螨(Dermatophagoides farina Hughhes)

测试尘螨减少效果的步骤：

1.样品制备：将CN-42切成6*6cm大小，并按照之前的洗涤方法进行洗涤。将每个样品切成直径为58mm的圆形。

2.预防测试方案：将边长200mm，高10mm的海绵放入带盖的塑料容器中(边长200-300mm，高50-100mm，中间有通气孔，直径为50±10mm，用PTFE膜覆盖，该PTFE膜通过胶带固定在塑料容器盖上)，然后将饱和NaCl溶液注入所述海绵中(将海绵浸入饱和NaCl溶液中)。

3.使用7个培养皿，其中一个放在中心，其他6个培养皿放在***区域。将每2个相邻的培养皿通过scotch胶带桥接。然后将7个培养皿全部固定在板上。

4.将3个测试样品和3个基准样品放入***的6个培养皿中。每个测试样品与一个基准样品相邻。在每个培养皿中放置0.05g尘螨饲料(参见图1)。

5.将2000±200只活尘螨放入中心的培养皿中。

6.将顶部有培养皿的板转移到容器中的海绵上。将盖子盖上。将容器置于温度为25℃±2℃、湿度为75％±5％的温湿度箱中。

7.孵育24h后，将样品取出，用解剖透镜对尘螨的数量进行计数。

实例1.纤维素酶存在下的织物处理

在Terg-o-tometer洗涤测定中添加2克标准洗涤剂A。本文使用了SEQ IDNO:2的土生嗜热根串珠霉。所述洗涤剂中的酶蛋白浓度为0.005％。将每种洗涤剂用水稀释至1L。需要压载物将洗涤物品填充至40g。

将尺寸为8*8cm2的织物E-252PA用于评估测试酶的抗起球效果。将这种织物与Terg-o-tometer洗涤测定中稀释的标准洗涤剂A混合，并在40℃下洗涤3个循环，持续70min。L*值用于表示抗起球效果。结果如图2所示。图2显示出与未经纤维素酶处理的那些(空白)相比，在纤维素酶存在下实现了更好的抗起球效果。L值从大于34.1降至约27.9。

将尺寸为10*10cm2的织物CN-42用于评估抗尘螨效果。将这种织物与Terg-o-tometer洗涤测定中稀释的标准洗涤剂A混合，并在40℃下洗涤3个循环，持续70min。图3显示出与未经纤维素酶处理的实验(空白)相比的抗尘螨实验的结果。从图3中可以看出，尘螨的数量已经减少到空白的三分之一(从157只减少到48只)。

序列表

<110> 诺维信公司（Novozymes A/S）

<120> 纤维素酶用于从纺织品去除尘螨的用途

<130> 15170-WO-PCT[2]

<160> 2

<170> PatentIn 3.5版

<210> 1

<211> 1044

<212> DNA

<213> 土生梭孢壳霉（Thielavia terrestris）

<220>

<221> 内含子

<222> (90)..(167)

<220>

<221> 内含子

<222> (417)..(485)

<400> 1

atgcgctcta ctcccgttct tcgcacaacc ctggccgctg cacttcctct ggtcgcctcc 60

gcggccagtg gcagtggcca gtccacgagg tatgcgtccc tcaatgcgaa tgcctcacca 120

aacgagctag gtgtccagga cgccgcccat gctgactcgt ttcccagata ctgggactgc 180

tgcaagccgt cgtgcgcttg gcccgggaag gccgccgtca gccaaccggt ctacgcgtgc 240

gatgccaact tccagcgcct gtccgacttc aatgtccagt cgggctgcaa cggcggctcg 300

gcctactcct gcgccgacca gactccctgg gcggtgaacg acaatctcgc ctacggcttc 360

gccgcgacga gcatcgccgg cgggtccgaa tcctcgtggt gctgcgcctg ctacgcgtaa 420

gtcctctctg ccagctacca ggaagttgga ttagcgcgag ctaacctcac tccatcacac 480

tccaggctca ccttcacttc cggtcccgtc gccggcaaga caatggtggt gcagtcaacg 540

agcactggcg gcgacctggg aagtaaccat ttcgatatcg ccatgcccgg cggcggcgtg 600

ggcatcttca acggctgcag ctcgcagttc ggcggcctcc ccggcgctca atacggcggc 660

atttcgtcgc gcgaccagtg cgattccttc cccgcgccgc tcaagcccgg ctgccagtgg 720

cggtttgact ggttccagaa cgccgacaac ccgacgttca cgttccagca ggtgcagtgc 780

cccgccgaga tcgttgcccg ctccggctgc aagcgcaacg acgactccag cttccccgtc 840

ttcacccccc caagcggtgg caacggtggc accgggacgc ccacgtcgac tgcgcctggg 900

tcgggccaga cgtctcccgg cggcggcagt ggctgcacgt ctcagaagtg ggctcagtgc 960

ggtggcatcg gcttcagcgg atgcaccacc tgtgtctctg gcaccacctg ccagaagttg 1020

aacgactact actcgcagtg cctc 1044

<210> 2

<211> 299

<212> PRT

<213> 土生梭孢壳霉（Thielavia terrestris）

<220>

<221> 变体

<222> (1)..(299)

<220>

<221> 信号

<222> (1)..(21)

<400> 2

Met Arg Ser Thr Pro Val Leu Arg Thr Thr Leu Ala Ala Ala Leu Pro

1 5 10 15

Leu Val Ala Ser Ala Ala Ser Gly Ser Gly Gln Ser Thr Arg Tyr Trp

20 25 30

Asp Cys Cys Lys Pro Ser Cys Ala Trp Pro Gly Lys Ala Ala Val Ser

35 40 45

Gln Pro Val Tyr Ala Cys Asp Ala Asn Phe Gln Arg Leu Ser Asp Phe

50 55 60

Asn Val Gln Ser Gly Cys Asn Gly Gly Ser Ala Tyr Ser Cys Ala Asp

65 70 75 80

Gln Thr Pro Trp Ala Val Asn Asp Asn Leu Ala Tyr Gly Phe Ala Ala

85 90 95

Thr Ser Ile Ala Gly Gly Ser Glu Ser Ser Trp Cys Cys Ala Cys Tyr

100 105 110

Ala Leu Thr Phe Thr Ser Gly Pro Val Ala Gly Lys Thr Met Val Val

115 120 125

Gln Ser Thr Ser Thr Gly Gly Asp Leu Gly Ser Asn His Phe Asp Ile

130 135 140

Ala Met Pro Gly Gly Gly Val Gly Ile Phe Asn Gly Cys Ser Ser Gln

145 150 155 160

Phe Gly Gly Leu Pro Gly Ala Gln Tyr Gly Gly Ile Ser Ser Arg Asp

165 170 175

Gln Cys Asp Ser Phe Pro Ala Pro Leu Lys Pro Gly Cys Gln Trp Arg

180 185 190

Phe Asp Trp Phe Gln Asn Ala Asp Asn Pro Thr Phe Thr Phe Gln Gln

195 200 205

Val Gln Cys Pro Ala Glu Ile Val Ala Arg Ser Gly Cys Lys Arg Asn

210 215 220

Asp Asp Ser Ser Phe Pro Val Phe Thr Pro Pro Ser Gly Gly Asn Gly

225 230 235 240

Gly Thr Gly Thr Pro Thr Ser Thr Ala Pro Gly Ser Gly Gln Thr Ser

245 250 255

Pro Gly Gly Gly Ser Gly Cys Thr Ser Gln Lys Trp Ala Gln Cys Gly

260 265 270

Gly Ile Gly Phe Ser Gly Cys Thr Thr Cys Val Ser Gly Thr Thr Cys

275 280 285

Gln Lys Leu Asn Asp Tyr Tyr Ser Gln Cys Leu

290 295

Claims (20)

1.能够降解纤维素材料的酶在减少/去除纺织品上的尘螨中的用途。

2.如权利要求1所述的用途，其中所述能够降解纤维素材料的酶是GH45纤维素酶。

3.如权利要求1所述的用途，其中所述能够降解纤维素材料的酶是选自下表的任何一种或多种GH45纤维素酶：

。

4.如权利要求3所述的用途，其中所述GH45纤维素酶是土生嗜热根串珠霉内切葡聚糖酶。

5.如权利要求4所述的用途，其中所述土生嗜热根串珠霉内切葡聚糖酶选自由以下组成的组：

(1)T.t内切葡聚糖酶，该T.t内切葡聚糖酶包含SEQ ID NO:2的成熟多肽或其片段，或由其组成；

(2)T.t内切葡聚糖酶，该T.t内切葡聚糖酶包含与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性的氨基酸序列，或由其组成；

(3)T.t内切葡聚糖酶，该T.t内切葡聚糖酶由多核苷酸编码，该多核苷酸包含与SEQ IDNO:1的成熟多肽编码序列具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性的核苷酸序列，或由其组成；

(4)T.t内切葡聚糖酶，该T.t内切葡聚糖酶由多核苷酸编码，该多核苷酸在至少高严格条件、非常高严格条件下，与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列或其全长互补序列杂交，在另一方面，所述纤维素酶组合物进一步包含一种或多种洗涤剂组分或织物柔软剂。

6.一种用于从纺织品减少或去除尘螨的酶组合物，该酶组合物包含能够降解纤维素材料的酶。

7.如权利要求6所述的酶组合物，其中所述能够降解纤维素材料的酶是GH45纤维素酶。

8.如权利要求6所述的酶组合物，其中所述能够降解纤维素材料的酶是选自下表的GH45纤维素酶：

。

9.如权利要求8所述的酶组合物，其中所述GH45纤维素酶是土生嗜热根串珠霉内切葡聚糖酶。

10.如权利要求9所述的酶组合物，其中所述土生嗜热根串珠霉内切葡聚糖酶选自由以下组成的组：

(1)T.t内切葡聚糖酶，该T.t内切葡聚糖酶包含SEQ ID NO:2的成熟多肽或其片段，或由其组成；

(2)T.t内切葡聚糖酶，该T.t内切葡聚糖酶包含与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性的氨基酸序列，或由其组成；

(3)T.t内切葡聚糖酶，该T.t内切葡聚糖酶由多核苷酸编码，该多核苷酸包含与SEQ IDNO:1的成熟多肽编码序列具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性的核苷酸序列，或由其组成；

(4)T.t内切葡聚糖酶，该T.t内切葡聚糖酶由多核苷酸编码，该多核苷酸在至少高严格条件、非常高严格条件下，与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列或其全长互补序列杂交；在另一方面，所述纤维素酶组合物进一步包含一种或多种洗涤剂组分或织物柔软剂。

11.如权利要求6所述的酶组合物，该酶组合物进一步包含至少一种或多种另外的酶，该至少一种或多种另外的酶选自由以下组成的组：半纤维素酶、过氧化物酶、蛋白酶、纤维素酶、木聚糖酶、脂肪酶、磷脂酶、酯酶、角质酶、果胶酶、甘露聚糖酶、果胶裂解酶、角蛋白酶、还原酶、氧化酶、酚氧化酶、脂加氧酶、木质酶、支链淀粉酶、鞣酸酶、戊聚糖酶、马拉纳酶、β-葡聚糖酶、***糖苷酶、透明质酸酶、软骨素酶、漆酶、DNA酶、叶绿素酶、淀粉酶、过水解酶、过氧化物酶、黄原胶酶及其混合物。

12.如权利要求11所述的酶组合物，其中所述至少一种或多种另外的酶选自蛋白酶、脂肪酶、甘露聚糖酶、果胶裂解酶和淀粉酶。

13.一种用于从纺织品减少或去除尘螨的洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物包含如权利要求6-12中任一项所述的酶组合物、表面活性剂、助洗剂和聚合物。

14.如权利要求13所述的洗涤剂组合物，其中所述表面活性剂选自由以下组成的组：阴离子、阳离子、非离子、半极性和兼性离子表面活性剂。

15.如权利要求13或14所述的洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物进一步包含选自由以下组成的组的一种或多种组分：漂白***、漂白活化剂、漂白催化剂、硅酸盐和染料。

16.如前述权利要求中任一项所述的洗涤剂组合物，其中该组合物呈以下形式：粉末，条，均匀的片剂，具有两层或更多层的片剂，具有一个或多个室的袋，规则的或压缩的粉末，颗粒，糊剂，凝胶，或规则的、压缩的或浓缩的液体。

17.如前述权利要求中任一项所述的洗涤剂组合物，其中该洗涤剂组合物中使用的酶组合物的量对应以下：每升的洗涤液0.001-200mg的蛋白质，如0.005-100mg的蛋白质，优选地0.01-50mg的蛋白质，更优选地0.05-20mg的蛋白质，甚至更优选地0.1-10mg的蛋白质。

18.一种用于从纺织品减少或去除尘螨的方法，该方法包括：

(1)用如权利要求13-17中所述的任一洗涤剂组合物或用如权利要求6-12中所述的任一酶组合物洗涤或暴露该纺织品；

(2)任选地漂洗该纺织品。

19.如权利要求18所述的方法，其中该方法用手或机器进行。

20.如权利要求18-19中任一项所述的方法，其中该方法是洗衣或洗涤方法、或器皿洗涤方法。

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