CN115494175A - 一种痫愈胶囊的含量测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种痫愈胶囊的含量测定方法,现行质量控制标准仅对产品中的甘草酸进行有效成分测定,不能有效保障产品的质量和疗效,本发明进一步完善该产品的检测方法,增加了对制剂中钩藤的有效成分钩藤碱、异钩藤碱,郁金的有效成分牻牛儿酮、莪术二酮共计4种有效成分同时进行含量测定的方法,该检测方法灵敏度高、专属性强、准确度及重现性好,能够弥补现有方法的不足,同时实现一次测定多个有效成分,节约检验时间提升检测效率,促使其指标性成分多个覆盖,更能有效保障产品的质量,使药物质量与临床治疗有效成分进行关联,从而达到稳定、可控、高效及安全的标准,进一步更好地满足医疗需要,对该品种的质量标准的提升提供依据。
Description
技术领域
本发明属于药品质量分析技术领域,具体涉及一种用于治疗风痰闭阻所致的癫痫抽搐、小儿惊风、面肌痉挛的痫愈胶囊的含量测定方法。
背景技术
癫痫归属于神经内科的一种精神性病症,它的患病率高,仅次头痛的患病率。癫痫是平时老百姓常常说的“羊癫风”,因为大脑神经元高宽比同步化出现异常充放电,进而造成人的大脑多功能性短暂性阻碍的一种慢性疾病,临床症状关键为发病性、暂时性、可重复性和呆板性。因这类出现异常充放电的起止位置、蔓延到范畴和传送方法的不一样,癫痫发作的临床症状也是十分复杂多种多样的,可主要表现为发病性运动、觉得、自主神经***、观念及精神疾病。进而促使造成癫痫发作的原因也是各种各样。癫痫在每个年龄层都能看到,是全球最常见的神经***疾病,影响各年龄层约5000万人。一般来说,小儿癫痫的患病率比成年人高于许多,伴随着年纪的增长,癫痫患病率会出现一定的减少。在进到老年期之后,因为心脑血管病、老年痴呆症和中枢神经***衰落占位性病变增加,癫痫患病率又主要表现出增长的趋势。现阶段用于治疗有关癫痫疾病的方法也多种多样,包括:常规的药物治疗、手术治疗等,但都存在各种利弊,在这方面中成药考虑得比较全面,在治疗思想上,考虑到了祛邪与扶正的有机结合。在治法上,追求标本兼治,阴阳平衡,其危害小,效果稳定持久。
痫愈胶囊(标准编号WS-10525(ZD-0525)-2002-2012Z,国药准字Z20025728),为西安千禾药业股份有限公司生产的独家品种,已上市销售多年,在治疗风痰闭阻所致的癫痫抽搐、小儿惊风、面肌痉挛方面取得了显著的临床效果,其具有豁痰开窍,安神定惊,息风解痉的功效。用于治疗风痰闭阻所致的癫痫抽搐、小儿惊风、面肌痉挛。处方为:黄芪,党参,丹参,柴胡,酸枣仁,远志,天麻,钩藤,石菖蒲,胆南星,当归,僵蚕,六神曲,郁金,甘草,制白附子。其处方药味中钩藤和郁金为主要药物,钩藤性凉,归肝经,具有清热平肝的功效,对于肝阳上逆引起的头目眩晕、头重脚轻、腰膝酸软、舌红少津等病症有一定的缓解作用。钩藤归心包经,还可以起到息风定惊的作用,能够改善高热惊厥、惊痫抽搐、小儿惊啼等病症。郁金可以治疗癫狂、发疯、发狂,或者热病,有清心解郁的作用,能入心经并能清除心热、解郁开窍,对人类经常出现的癫痫和神昏都有明显的治疗作用。现有痫愈胶囊的检测方法中,仅有对制剂中甘草中的有效成分甘草酸进行了含量测定,未对钩藤中的主要成分钩藤碱、异钩藤碱,郁金中的主要成分牻牛儿酮、莪术二酮的含量作相关检测分析和含量测定,为更好的控制痫愈胶囊的产品质量,确保其临床疗效,很有必要进一步完善该产品的检测方法,从而更进一步保证该产品的质量和疗效。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足,提供一种痫愈胶囊的含量测定方法,该分析方法对制剂中的钩藤有效成分钩藤碱和异钩藤碱,郁金有效成分牻牛儿酮、莪术二酮共4种有效成分同时进行测定。该检测方法能够弥补现有方法的不足,有效控制药物的质量,使药物质量与临床治疗有效成分进行关联,从而达到稳定、可控、高效及安全的标准,进一步更好地满足医疗需要,对该品种的质量标准的提升提供依据。
本发明是采用以下技术方案来实现的:
一种痫愈胶囊的含量测定方法,所述药物组合物由以下十六味药材制备而成:黄芪,党参,丹参,柴胡,酸枣仁,远志,天麻,钩藤,石菖蒲,胆南星,当归,僵蚕,六神曲,郁金,甘草,制白附子,采用液相色谱法测定钩藤碱和异钩藤碱、牻牛儿酮和莪术二酮的含量,包含以下步骤:
(1)色谱条件与***适用性试验
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以有机溶剂为A相、一定浓度的氨水溶液为B相,梯度洗脱,所述有机溶剂为选自甲醇、乙腈或乙腈-甲醇混合液,所述氨水溶液选自0.01-0.1mol/L的三乙胺水溶液(冰醋酸调节pH6.5)三乙胺水溶液、氨水(冰醋酸调节pH5.5-7.0)或以上两种的混合;柱温20-40℃;采用紫外检测器或二极管阵列检测器,检测波长:203-215nm和240-255nm;流速为0.5ml/min-1.0ml/min;理论板数钩藤碱峰计算应不低于3000;
优选的,所述A相为乙腈,B相为0.01mol/L的三乙胺水溶液(冰醋酸调节pH6.5);流速为1.0ml/min;柱温为35℃;检测波长:0-25min,245nm;25-65min,210nm。
优选的,梯度洗脱时,梯度洗脱程序为:0~20min,45%A;20~25min,55%~60%A;25~30min,60%A;30~40min,75%~80%A;40~50min,85%A;50~65min,45%A;具体梯度洗脱程序为:
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0~20 | 45 | 55 |
20~25 | 55→60 | 45→40 |
25~30 | 60 | 40 |
30~40 | 75→80 | 25→20 |
40~50 | 85 | 15 |
50~65 | 45 | 55 |
(2)对照品溶液的制备
取对照品钩藤碱、异钩藤碱、牻牛儿酮、莪术二酮适量,精密称定,加甲醇制成每lml含50μg钩藤碱、50μg异钩藤碱、50μg牻牛儿酮、100μg莪术二酮的混合溶液,即得;
(3)供试品溶液的制备
取痫愈胶囊内容物,研细,称取1.0-3.0g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇50-100ml,称定重量,超声处理(200W,40kHz)30-90min,放冷,用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,离心,滤过,取续滤液,即得。
优选的,取痫愈胶囊内容物,研细,称取2.0g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇50ml,称定重量,超声处理(200W,40kHz)60min,放冷,用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,离心,滤过,取续滤液,即得。
(4)测定
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10-20μl,注入高效液相色谱仪,测定,即得测定结果。
本发明中痫愈胶囊具体处方为:黄芪140g、党参140g、丹参140g、柴胡70g、酸枣仁105g、远志70g、天麻105g、钩藤105g、石菖蒲70g、胆南星140g、当归140g、僵蚕105g、六神曲70g、郁金70g、甘草70g、制白附子35g。
与现有技术相比,本发明具有以下有益的技术效果:
本发明痫愈胶囊的含量测定方法,在原质量标准WS-10525(ZD-0525)-2002-2012-Z及相关文献中,未对产品中的钩藤及郁金进行有效成分测定,现行质量控制标准不能有效保障产品的质量和疗效的基础上进一步完善该产品的检测方法,本发明增加了对处方中钩藤的有效成分钩藤碱、异钩藤碱,郁金的有效成分牻牛儿酮、莪术二酮共计4种有效成分同时进行含量测定的方法,该检测方法灵敏度高、专属性强、准确度及重现性好,能够弥补现有方法的不足,同时实现一次测定多个有效成分,节约检验时间提升检测效率,促使其指标性成分多个覆盖,更能有效保障产品的质量。
附图说明
下面结合附图对本发明作进一步的说明:
图1为本发明实施例色谱条件下的空白样品的色谱图;
图2为本发明实施例色谱条件下的混合对照品的色谱图;
图3为本发明实施例色谱条件下的供试品的色谱图;
图4为本发明实施例色谱条件下的钩藤阴性样品色谱图;
图5为本发明实施例色谱条件下的郁金阴性样品色谱图;
其中1为钩藤碱峰、2为异钩藤碱峰、3为莪术二酮峰、4为牻牛儿酮峰。
图6为本发明实施例色谱条件下的钩藤碱、异钩藤碱、莪术二酮、牻牛儿酮线性关系图。
具体实施方式
以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解,这些实施例仅用于说明本发明,其不以任何方式限制本发明的范围。下述实施例中的实验方法,如无特殊说明,均为常规方法。下述实施例中所用的原辅料、试剂材料等,如无特殊说明,均为市售购买产品。
实施例1:痫愈胶囊的处方及制备方法
处方:黄芪140g、党参140g、丹参140g、柴胡70g、酸枣仁105g、远志70g、天麻105g、钩藤105g、石菖蒲70g、胆南星70g、当归140g、僵蚕105g、六神曲70g、郁金70g、甘草70g、制白附子35g;
制法:以上十六味,僵蚕、六神曲粉碎成细粉,过筛,备用;其余黄芪等十四味加水煎煮三次,第一次加10倍量水,煎煮2小时,第二次加8倍量水,煎煮1.5小时,第三次加6倍量水,煎煮1小时,合并煎液,滤过,滤液减压浓缩至相对密度为1.20~1.25(60℃)的稠膏,加入上述细粉,混匀,真空干燥(60~80℃),粉碎成细粉,加入碳酸钙22g,磷酸氢钙22g,混匀,用80~85%的乙醇适量制粒,干燥(75~80℃),装胶囊,制成1000粒,即得。
实施例2:
2.1仪器与材料
岛津LC-2030C Plus型高效液相色谱仪;AS5150A超声波清洗机,昆山超声波仪器有限公司;GB204电子天平,AT201电子天平,梅特勒-托利多。
甲醇/乙腈(色谱纯)购于赛默飞世尔科技公司;其余试剂购买均为分析纯,购置于天津大茂化学试剂厂;
本实验所才用的痫愈胶囊均为西安千禾药业股份有限公司所生产。对照品均购置于陕西标普医药科技有限公司,由中国药品生物制品检定所生产。
2.2波长的选择
将钩藤碱、异钩藤碱对照品溶液在190-400nm范围内进行波长扫描,结果显示在215nm和245nm处均有最大吸收,考虑到有效成分在215nm处吸收度也较大,但分离效果不好,故选择干扰较少、分离效果较好的245nm做为检测波长。
将牻牛儿酮、莪术二酮对照品溶液在190-400nm范围内进行波长扫描,结果显示分别在190nm、311nm和190nm、302nm处均有最大吸收,但在190nm处吸收度也较大,在302或311nm吸收度较小,考虑到190nm末端吸收存在干扰较多,故这两种成分选择210nm做为检测波长。
在色谱图中,钩藤碱峰、异钩藤碱峰、莪术二酮峰、牻牛儿酮峰第次分离出,根据试验最终选择,0-25min,检测波长245nm,25-65min,检测波长210nm。
2.3流动相的选择
为使供试品中4种有效成分能得到有效的分离,同时峰形、理论塔板数等达到要求,预试验分别采用乙腈-0.01mol/L三乙胺水溶液、乙腈-0.05mol/L三乙胺水溶液、乙腈-0.1%氨水水溶液、乙腈-0.5%氨水水溶液、乙腈-0.1%甲酸水溶液等不同比例25~45:75~55或40~80:60~20等流动相进行等度洗脱,发现钩藤碱、异钩藤碱与莪术二酮、牻牛儿酮两种都不能同时进行兼顾,要么保留时间太长,莪术二酮、牻牛儿酮峰90分钟还未出峰;要么有效成分出峰太相近,总是有相邻的成分分离度不好、或出现肩峰或峰合并而出;要么基线漂移厉害或峰拖尾或有肩峰等等,等度洗脱花费2周时间都没找到合适的流动相。后采用不同流动相进行梯度洗脱试验,效果有改善,梯度洗脱时钩藤碱、异钩藤碱检测波长245nm,等钩藤碱、异钩藤碱色谱峰出后,采用210nm检测莪术二酮、牻牛儿酮,实际试验梯度试验调整不同的梯度试验条件也耗时一周才最终确定了合适的流动相和梯度洗脱条件,对每种流动相都进行很多梯度条件进行了试验,本申请只提供了部分结果较好的实施例,结果见下表:
表1流动相选择试验结果
结果表明:采用乙腈-0.01mol/L的三乙胺水溶液(冰醋酸调节PH6.5)组成的流动相体系,在进行梯度洗脱的条件下分离效果最好,基线平稳,4种成分的色谱峰可完全分离,各组分出峰时间、峰型和分离度均符合要求,故该条件能满足分析测定的相关要求。
实施例3:专属性研究
3.1各阴性样品的制备:
按痫愈胶囊的处方及制备方法(实施例1),分别制备不含钩藤或不含郁金的阴性样品;如钩藤阴性样品的制备:取不含钩藤的十五味药材,僵蚕、六神曲粉碎成细粉,过筛,备用;其余黄芪等十三味加水煎煮三次,第一次加10倍量水,煎煮2小时,第二次加8倍量水,煎煮1.5小时,第三次加6倍量水,煎煮1小时,合并煎液,滤过,滤液减压浓缩至相对密度为1.20~1.25(60℃)的稠膏,加入上述细粉,混匀,真空干燥(60~80℃),粉碎成细粉,加入碳酸钙22g,磷酸氢钙22g,混匀,用80~85%的乙醇适量制粒,干燥(75~80℃),装胶囊,制成1000粒,即得。
3.2阴性样品溶液的制备:
分别称取各阴性样品2.0g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇50ml,称定重量,超声处理(200W,40kHz)60min,放冷,用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,离心,滤过,取续滤液,即得。
3.3供试品溶液的制备:
试验方法:取痫愈胶囊内容物,研细,称取2.0g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇、70%甲醇或100%甲醇50ml,称定重量,超声处理(200W,40kHz)30-90min,放冷,补足减失的重量,摇匀,离心,滤过,取续滤液,即得。
方法1:精密加甲醇50ml,精密称定,超声提取30min,放冷补足重量,过滤;
方法2:精密加甲醇50ml,精密称定,超声提取60min,放冷补足重量,过滤;
方法3:精密加甲醇50ml,精密称定,超声提取90min,放冷补足重量,过滤;
方法4:精密加50%甲醇50ml,精密称定,超声提取30min,放冷补足重量,过滤;
方法5:精密加50%甲醇50ml,精密称定,超声提取60min,放冷补足重量,过滤;
方法6:精密加50%甲醇50ml,精密称定,超声提取90min,放冷补足重量,过滤;
方法7:精密加70%甲醇50ml,精密称定,超声提取30min,放冷补足重量,过滤;
方法8:精密加70%甲醇50ml,精密称定,超声提取60min,放冷补足重量,过滤;
方法9:精密加70%甲醇50ml,精密称定,超声提取90min,放冷补足重量,过滤;
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入高效液相色谱仪,测定,即得测定结果。结果详见表2。
表2供试品制备方法的选择试验结果
结果表明:采用方法1、采用方法2、采用方法3时钩藤碱提取不充分,峰面积明显低于其他方法;采用方法4、方法5、方法6时甲醇浓度低各有效成分能得到有效提取,但峰面积明显低于方法8,表明超声提取30min有效成分未能100%转移;采用方法7时因超声时间短各有效成分峰面积明显较低,说明有效成分转移率较低;采用方法9时峰面积与采用方法8时无显著性差异,但其超声提取较长;
故确定最佳的供试品溶液的制备方法为:取痫愈胶囊内容物,研细,称取2.0g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇50ml,称定重量,超声处理(200W,40kHz)60min,放冷,补足减失的重量,摇匀,离心,滤过,取续滤液,即得。
3.4色谱条件与***适用性试验
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;按表1中规定流动相,以流速为0.8ml/min;柱温为35℃;钩藤碱、异钩藤碱测定的检测波长均为245nm,牻牛儿酮、莪术二酮测定的检测波长均为210nm;进样体积为10μl;理论板均应不低于3000;
对照品溶液的制备:精密称取各对照品适量,分别加甲醇制成含钩藤碱0.6816mg/ml、异钩藤碱0.6115mg/ml、牻牛儿酮0.5649mg/ml、莪术二酮0.7792mg/ml的贮备液,依次精密吸取上述4种贮备液各1ml置于同一10ml棕色容量瓶中,加70%甲醇溶解并定容,摇匀,作为质量浓度分别为68.16,61.15,56.49,77.92μg/ml的混合对照品溶液。
测定:
分别精密吸取各阴性样品溶液、混合对照品溶液、供试品溶液各10μl,注入高效液相色谱仪,测定。
结果显示:供试品溶液色谱图中,在4种对照品色谱峰相应的位置上有相同的色谱峰;阴性无干扰,且分离度和理论板数均符合要求;表明该色谱条件专属性良好。具体见下附图1-5。
实施例4:重复性试验
4.1色谱条件与***适用性试验
同实施例3
4.2精密吸取同一供试品溶液10μl,注入液相色谱仪,重复进样6次,计算峰面积RSD。
4.3结果显示,4种有效成分峰面积的RSD值分别为0.12%、0.29%、0.46%、0.36%,均小于2.0%;表明精密度良好。具体结果见下表2。
表2:重复性实验4种有效成分峰面积数据表
次数 | 钩藤碱 | 异钩藤碱 | 莪术二酮 | 牻牛儿酮 |
第一次 | 2367827 | 2307617 | 222844 | 1246531 |
第二次 | 2359991 | 2296319 | 221967 | 1259643 |
第三次 | 2367562 | 2315603 | 221456 | 1249974 |
第四次 | 2366314 | 2307456 | 219992 | 1249470 |
第五次 | 2365002 | 2299875 | 222574 | 1250014 |
第六次 | 2364631 | 2304521 | 221977 | 1248967 |
平均值 | 2365221 | 2305231 | 221801 | 1250766 |
RSD% | 0.12 | 0.29 | 0.46 | 0.36 |
实施例5:线性范围
5.1色谱条件与***适用性试验
同实施例3
5.2分别精密吸取各对照品贮备液1.5ml置于10ml棕色量瓶中用70%甲醇定容,得混合对照品溶液,再分别精密吸取上述混合对照品溶液各2μl、5μl、8μl、10μl、15μl、20μl、按实施例3所述色谱条件进行检测,记录色谱图,以峰面积(Y)对浓度(X)进行线性回归分析,绘制线性关系图,报告线性方程。结果见表3(4种成分的标准曲线方程和相关系数及线性范围),图6(4种成分的线性关系图)。
表3:4种成分的标准曲线方程和相关系数及线性范围
成分名称 | 回归方程 | R | 线性范围(μg/ml) |
钩藤碱 | Y=23134X-16667 | 0.9993 | 20.45-204.48 |
异钩藤碱 | Y=24757X+9403.7 | 0.9986 | 18.34-183.45 |
莪术二酮 | Y=1906.2X-68.119 | 0.9999 | 23.38-233.76 |
牻牛儿酮 | Y=14971X-8191.9 | 0.9998 | 16.95-169.47 |
实施例6:准确度(回收率)
6.1色谱条件与***适用性试验
同实施例3
6.3试品溶液的制备:
取痫愈胶囊内容物,研细,分别称取0.5g样品各6份,精密称定,置10ml棕色量瓶中,再分别精密吸取钩藤碱0.6816mg/ml的贮备液、异钩藤碱0.6115mg/ml的贮备液l、牻牛儿酮0.5649mg/ml的贮备液、莪术二酮0.7792mg/ml的贮备液各0.5ml、1.0ml、1.5ml置于上述棕色量瓶中加70%甲醇适量,超声处理(200W,40kHz)60min,放冷,用70%甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
测定:分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μl,注入高效液相色谱仪,测得钩藤碱、异钩藤碱、牻牛儿酮、莪术二酮的回收率和RSD%,标准要求:回收率要求85%~110%,回收率RSD<4.0%;结果见表4;
表4回收率试验数据表
实验结果表明该方法准确度良好。回收率%=(C-A)/B×100%,式中A为供试品所含被测成分量;B为加入对照品量;C为实测值。
实施例7:中间精密度
7.1色谱条件与***适用性试验
同实施例3
7.2在同一实验室,由不同实验人员A和B在不同日期,使用不同色谱仪、进行实验,计算各有效成分含量。结果见表5,结果表明发明专利方法精密度良好。
表5:中间精密度试验数据表
实施例8:耐用性
8.1色谱条件与***适用性试验
同实施例3
8.2取同一供试品溶液,室温下放置,分别于0、4、8、12、24小时,精密吸取10μl注入高效液相色谱仪;结果见表6,结果表明,供试品溶液24小时内保峰面积的RSD最大值仅为0.19%,远小于标准2.0%;表明试品溶液在室温条件下36h内稳定。
表6:样品稳定性试验数据表
进样时间 | 0h | 2h | 4h | 8h | 12h | 24h | 平均 | RSD% |
钩藤碱 | 2367827 | 2367847 | 2347826 | 2357205 | 2345631 | 2365002 | 2358556 | 0.42 |
异钩藤碱 | 2307617 | 2304561 | 2305789 | 2308563 | 2310452 | 2314250 | 2308538 | 0.15 |
莪术二酮 | 222844 | 221709 | 221521 | 221994 | 221849 | 221603 | 221920 | 0.22 |
牻牛儿酮 | 1246531 | 1250121 | 1247892 | 1234789 | 1247440 | 1239651 | 1244404 | 0.47 |
综上所述:本发明痫愈胶囊中多种有效成分的含量测定方法,从专属性、重复、准确度(回收率)、中间精密度、耐用性等方面验证了本方法的科学性。通过对处方中2味药材中4种有效成分含量的测定,进一步提升了产品质量保证,保证了痫愈胶囊的安全性和有效性,弥补了现有技术的不足。
实施例9:稳定性试验
9.1色谱条件与***适用性试验
同实施例3
9.2取痫愈胶囊市售样品(批号:20191001、20191002、20191003,西安千禾药业股份有限公司生产)进行加速稳定性实验和室温长期稳定性实验。加速实验条件:将样品放置在相对湿度为75%±5%,温度为40℃±2℃的稳定性试验箱中进行6个月加速实验考察,分别在第0、1、2、3、6月取样进行检测;室温实验条件:将样品放置在相对湿度60%±5%,温度25℃±2℃的稳定性试验箱中进行长期24个月的实验考察,分别在第0、3、6、12、18月、24个月检查。试验结果见表7。
表7:痫愈胶囊加速及长期稳定性试验数据
实验结果表明,加速试验6个月和长期实验24个月,所检测的有效成分钩藤碱、异钩藤碱、牻牛儿酮、莪术二酮含量均未发生显著性变化,符合要求,说明该检测方法,能有效控制药物的质量,可考虑纳入质量标准中。另,从连续三批售产品(批号:20200701、20200702、20200702)24个月末的检测结果来看,考虑到不同原料之间的差异及生产及检验过程种的误差,建议可将含量标准定为:含钩藤碱≥0.02mg/粒、异钩藤碱≥0.12mg/粒、牻牛儿酮≥0.22mg/粒、莪术二酮≥0.05mg/粒。本发明痫愈胶囊中4种有效成分的含量测定方法,从重复性色谱表现图、供试品溶液稳定性图、仪器精密度、回收率、线性、专属性等方面确定本方法的科学性。增加了制剂中重要药材的含量测定,降低检验成本,提高检验效率,保证了制剂的安全性和有效性,弥补现有技术的不足,同时在检测的精确性上进一步提升。
以上给出的实施例是实现本发明较优的例子,本发明不限于上述实施例。本领域的技术人员根据本发明技术方案的技术特征所做出的任何非本质的添加、替换,均属于本发明的保护范围。
Claims (4)
1.一种痫愈胶囊的含量测定方法,其特征在于采用液相色谱法同时测定制剂钩藤中钩藤碱和异钩藤碱、郁金中牻牛儿酮和莪术二酮4种有效成分的含量,具体包含以下步骤:
1)色谱条件与***适用性试验
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以有机溶剂为A相、一定浓度的水溶液为B相,梯度洗脱,所述有机溶剂为选自甲醇、乙腈或乙腈-甲醇混合液,所述水溶液选自0.01-0.1mol/L的三乙胺水溶液或0.1%-1.0%氨水,以冰醋酸调节pH5.5-7.0,或以上两种的混合;柱温20-40℃;采用紫外检测器或二极管阵列检测器,检测波长:203-215nm和240-255nm;流速为0.5ml/min-1.0ml/min;理论板数钩藤碱峰计算应不低于3000;
2)对照品溶液的制备
取对照品钩藤碱、异钩藤碱、牻牛儿酮、莪术二酮适量,精密称定,加甲醇制成每lml含50μg钩藤碱、50μg异钩藤碱、50μg牻牛儿酮、100μg莪术二酮的混合溶液,即得;
3)供试品溶液的制备
取痫愈胶囊内容物,研细,称取1.0-3.0g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇50-100ml,称定重量,超声处理30-90min,超声处理的条件为功率200W,频率40kHz,放冷,用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,离心,滤过,取续滤液,即得;
4)测定
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10-20μl,注入高效液相色谱仪,测定,即得测定结果。
2.根据权利要求1所述的痫愈胶囊的含量测定方法,其特征在于:所述A相为乙腈,B相为0.01mol/L的三乙胺水溶液,冰醋酸调节pH6.5;流速为1.0ml/min;柱温为35℃;检测波长,0-25min,245nm;25-65min,210nm。
3.根据权利要求2所述的痫愈胶囊的含量测定方法,其特征在于:梯度洗脱时,梯度洗脱程序为:0~20min,45%A;20~25min,55%~60%A;25~30min,60%A;30~40min,75%~80%A;40~50min,85%A;50~65min,45%A。
4.根据权利要求1所述的痫愈胶囊的含量测定方法,其特征在于:步骤3)供试品溶液的制备:取痫愈胶囊内容物,研细,称取2.0g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇50ml,称定重量,超声处理60min,超声处理的条件为功率200W,频率40kHz,放冷,用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,离心,滤过,取续滤液,即得。
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