CN110095547A - 一种益寿强身膏中芍药苷含量的检测方法 - Google Patents

一种益寿强身膏中芍药苷含量的检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种益寿强身膏中芍药苷含量的检测方法，所述方法，步骤如下：1、对照品溶液的制备；2、供试品溶液的特殊制备；3、阴性对照溶液的制备：4、用高效液相色谱法测定芍药苷的含量，其中色谱条件为：色谱柱Agilent ZORBAX SB‑C18(4.6*250mm*5um)；流动相：乙腈：0.1％磷酸溶液＝16:84；流速：1.0ml/min；检测波长：230nm；柱温：30℃；进样量10ul，色谱柱的理论塔板数按芍药苷峰计算大于5000。

Description

一种益寿强身膏中芍药苷含量的检测方法
技术领域
本发明属于药物含量检测技术领域，涉及一种益寿强身膏补药中芍药苷的检测方法。
背景技术
益寿强身膏为一种已经上市的中成药，国药准字Z32020942，用于补气养血，滋补肝肾，养心安神，强筋健骨，健脾开胃。用于体虚气弱，食欲不振，腰膝酸软，神疲乏力，头晕目眩，失眠健忘，年老体弱。
益寿强身膏处方共计二十二味药材：党参(炒)；人参；茯苓；黄芪(炙)；白术(炒)；山药；制首乌；当归；熟地黄；川芎；泽泻；牡丹皮；牛膝；白芍；杜仲叶；续断；阿胶；红花；三七；甘草(炙)；黄精(制)；陈皮。
益寿强身膏制备方法如下：
以上二十二味药材，除了人参、三七、阿胶外，其余党参等十九味加水煎煮三次，第一次3小时，第二三次各2小时，合并煎液，静置沉淀，滤过；另将人参、三七加适量水煎煮4次，每次2小时，合并静置，滤过；另将阿胶加适量水烊化，合并上述药液，浓缩至相对密度为1.2(70℃～80℃)清膏；每100g清膏加糖200g，加热熔化，混匀，继续浓缩至规定的相对密度，即得所需益寿强身膏。
益寿强身膏的鉴别：取本品10g，加乙醇50ml，超声处理45分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次25ml，合并正丁醇液，用氨试液25ml洗涤，弃去氨洗液，正丁醇液蒸干，残渣加乙醇5ml使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg对照品的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40:5:10:0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛的10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
目前益寿强身膏的质量标准中，仅有对相对密度的检查，没有对其中重要成分含量的测定指标，由此无法达到现代化质量控制要求和标准的制定。为此本发明在现有技术的基础上对有关活性成分进行了研究，找到一种可以作为质量控制标准的活性成分并进行了含量测定研究。
发明内容
发明目的：本发明的目在于：针对现有技术存在的问题，提供一种能更好地控制产品质量的益寿强身膏中芍药苷含量的测定方法，从而严格控制益寿强身膏补药中芍药苷的含量，确保益寿强身膏的功效。
技术方案：为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为：
一种益寿强身膏补药中芍药苷含量的检测方法，该方法包括如下步骤：
一种益寿强身膏中芍药苷含量的测定方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
1)对照品溶液的制备：精密称取对照品芍药苷12.66mg和12.65mg，置于25ml的量瓶中，加流动相(16％乙腈+84％的磷酸水)溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品储备液；分别精密吸取上述对照品储备液1ml，置10ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，经0.45um滤膜过滤，即得。
2)供试品溶液的制备：取益寿强身膏5g精密称定，置50ml量瓶中，加入52.9％的稀乙醇35ml,超声处理30min，放冷，加稀乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，经0.45um滤膜过滤即得。
3)阴性对照溶液的制备：按照益寿强身膏的处方，制备不含芍药苷和牡丹皮的膏剂，按照步骤2)的方法制备阴性对照溶液；
4)测定法：分别精密吸取上述两种对照品和供试品溶液各10ul，注入Agilent 1200高效液相色谱仪，得到色谱图，根据色谱图计算供试品中芍药苷的含量；
其中所述高效液相色谱仪的色谱条件如下：色谱柱Agilent ZORBAX SB-C18(4.6*250mm*5um)；流动相：乙腈：0.1％磷酸溶液＝16:84；流速：1.0ml/min；检测波长：230nm；柱温：30℃；进样量10ul，色谱柱的理论塔板数按芍药苷峰计算大于5000。
检测仪器与试剂：Agilent 1200高效液相色谱仪、METTLER TOLEDO电子天平、超声波清洗器、分液漏斗、超纯水、乙醇(国药，AR级)、乙腈(默克，HPLC级)、磷酸(TEDIA,HPLC级)、芍药苷(中国)。
根据本发明的研究，将益寿强身膏中含芍药苷的量的标准确定为，每10g不得少于5mg芍药苷，作为质量控制指标之一。
本发明的实验条件和检测方法是经过筛选获得的，本发明根据芍药苷的化学性质，对流动相进行了大量筛选，最终确定采用体积比为16:84的乙腈-0.1％磷酸溶液作为缓冲液，保证芍药苷和其他组分能达到很好的分离效果；流动相流速设置为1.0ml/min,芍药苷的峰形最好、分离度最好，色谱柱在30℃条件下分离效果最好；本发明所采用的的检测方法可以灵敏、准确的检测芍药苷的含量，且采用该检测方法的分离效果好，检测灵敏度高，稳定性好，可以客观、全面、准确的评价益寿强身膏补药中芍药苷的含量及质量，对控制益寿强身膏补药生产过程的功效有着重要作用。
附图说明
附图1是空白溶剂色谱图
附图2是阴性对照溶液色谱图
附图3是供试品溶液色谱图
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，下面通过实施例来进一步阐述本发明，应理解，此处所述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例：本发明一种益寿强身膏中芍药苷含量的检测方法，其中所述益寿强身膏的处方为，按重量份计：
党参(炒)50份；人参6份；茯苓50份；黄芪(炙)40份；白术(炒)50份；山药40份；制首乌50份；当归50份；熟地黄100份；川芎20份；泽泻25份；牡丹皮25份；牛膝25份；白芍40份；杜仲叶60份；续断25份；阿胶6份；红花10份；三七6份；甘草(炙)12份；黄精(制)24份；陈皮2.5份；
以上二十二味药材，除了人参、三七、阿胶外，其余党参等十九味加水煎煮三次，第一次3小时，第二三次各2小时，合并煎液，静置沉淀，滤过；另将人参、三七加适量水煎煮4次，每次2小时，合并静置，滤过；另将阿胶加适量水烊化，合并上述药液，浓缩至相对密度为1.2(70℃～80℃)清膏；每100g清膏加糖200g，加热熔化，混匀，继续浓缩至规定的相对密度，即得所需益寿强身膏。
1)供试品溶液的制备：取成品益寿强身膏5g精密称定，置50ml量瓶中，加入52.9％的稀乙醇35ml,超声处理30min，放冷，加稀乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
2)阴性对照溶液的制备：按照益寿强身膏的处方，制备不含芍药苷和牡丹皮的膏剂，再按照供试品溶液的制备方法进行阴性对照溶液的制备；
3)对照品溶液的制备：精密称取对照品12.66mg和12.65mg，置于25ml的量瓶中，加流动相(16％乙腈+84％的磷酸水)溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品储备液；分别精密吸取对照品储备液1ml，置10ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得对照品溶液；
检测仪器与试剂：Agilent 1200高效液相色谱仪、METTLER TOLEDO电子天平、超声波清洗器、分液漏斗、超纯水、乙醇(国药，AR级)、乙腈(默克，HPLC级)、磷酸(TEDIA,HPLC级)、芍药苷(中国)。
4)色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈：0.1％磷酸溶液(体积比16:84)为流动相；流速：1.0ml/min；检测波长：230nm；柱温：30℃；进样量10ul，色谱柱的理论塔板数按芍药苷峰计算大于5000。
5)测定方法：分别精密吸取上述两种对照品和供试品溶液各10ul，注入Agilent1200高效液相色谱仪，测定，即得芍药苷含量。
采用以上方法进行检测，最终益寿强身膏含芍药苷计，每10g不得少于5mg。
筛选试验如下：
1、仪器与试药
1.1仪器：高效液相色谱仪
1.2试剂：乙腈为色谱纯试剂，水为超纯水，磷酸为色谱纯试剂，其他试剂均为分析纯。
1.3对照品：芍药苷，批号(110736-201741)，中国药品生物制品检定所提供；精密称取对照品12.66mg和12.65mg，置于25ml的量瓶中，加流动相(16％乙腈+84％的磷酸水)溶解并稀释至刻度，摇匀，得对照品储备液；分别精密吸取对照品储备液1ml，置10ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，制成每1ml含48ug对照品溶液。
1.4供试品：益寿强身膏，批号(170109)，规格：400g/瓶，由本公司提供。
2、色谱条件
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈：0.1％磷酸溶液(体积比16:84)为流动相；流速：1.0ml/min；检测波长230nm，柱温：30℃；进样量10ul，色谱柱的理论塔板数按芍药苷峰计算大于5000。
3、供试品制备方法中超声提取时间的确定试验：
分别精密称取益寿强身膏5g左右于4个50ml量瓶中，并加入52.9％的稀乙醇35ml,分别超声处理25、30、40、45min，放冷，加稀乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，经0.45um滤膜过滤即得供试品溶液；然后测定芍药苷含量，结果见表1；
表1：超声处理时间试验
超声时间(分钟) 25 30 40 45
芍药苷含量(mg/g) 0.4927 0.5195 0.5183 0.5195
以上结果表明，超声处理30分钟能提取完全，故超声时间确定为30分钟。
4、方法学验证
4.1专属性与***适用性
4.1.1空白溶剂干扰试验
取流动相适量，按1-2色谱条件进样测定，记录色谱图，结果不干扰测定。(见图1)
4.1.2阴性对照溶液干扰试验
按[0012]制备阴性对照溶液，按[0025]色谱条件进样测定，记录色谱图，结果不干扰测定。(见图2)
4.1.3***适用性试验
按[0011]制备供试品溶液，按[0025]色谱条件连续进样6针，记录色谱图(见图3)。结果见下表2：
样品 保留时间min 峰面积 分离度 理论塔板数
1 9.2 11.724 57.05 11715
2 9.2 11.66 56.9 11752
3 9.231 11.654 58.18 11956
4 9.228 11.7 56.6 11417
5 9.295 11.512 57.34 12267
6 9.356 11.458 56.15 11924
RSD％ 0.6679 0.9259 / /
结果表明，主成分与相邻峰分离度大于5，分离良好，芍药苷理论塔板数大于10000，***适用性结果良好。
4.2线性和范围
精密称取芍药苷对照品适量，按[0022]配制成一系列对照品溶液，浓度分别为12.66、25.32、37.98、50.64、75.96和101.28μg/ml分别注入液相色谱仪，测定芍药苷含量。以对照品溶液浓度对峰面积计算回归方程，结果见表3：
结果表明，芍药苷在浓度12.66-101.28μg/ml范围内，线性结果良好。
4.3精密度
4.3.1进样精密度
按[0022]配制对照品溶液，连续进样6针，计算芍药苷峰面积的RSD，结果见表4：
样品 1 2 3 4 5 6 RSD％
峰面积 10.761 10.775 10.78 10.788 10.802 10.793 0.1339
结果表明，该检测方法的进样精密度结果良好。
4.3.1重复性试验
取同一批次的产品按照本发明的方法中制备供试品溶液的方法制备6份供试品溶液，测定芍药苷含量，结果见下表5：
结果表明，重复性RSD＜2％，说明本发明的方法，重复性好。
4.4稳定性试验
取供试品溶液，室温条件下，于0、4、6、8、12、16h、25h和30h进样，记录色谱图。计算芍药苷峰面积RSD。结果见下表6：
时间 0h 4h 6h 8h 12h 16h 25h 30h RSD％
峰面积 11.574 11.621 11.56 11.546 11.458 11.518 11.707 11.687 0.7256
结果表明，30h内溶液稳定性峰面积RSD＜2％，表明本发明的供试品溶液制备的供试品稳定性好。
4.5回收率试验
精密称取同一批已知含量的供试品2.5g左右于50ml的量瓶中。按照高、中、低浓度的配比，芍药苷钠对照品加入量与供试液中芍药苷量比例在1.5:1，1:1，0.5:1，每个浓度各三份。按照本发明的方法中制备供试品溶液的方法制备供试品溶液。测定芍药苷含量，结果见表7：
样品 1 2 3 4 5 6 7 8 9 RSD(％)
回收率(％) 93.7 94.6 93.9 94.5 92.7 92.6 92.7 93.2 93.7 0.7969
结果表明，回收率均大于90％，说明本发明方法检测芍药苷含量准确。
5、结论
综上所述，采用本发明，使得益寿强身膏含量测定的重复性、稳定性和准确性好，从而能更好的保证产品的质量。
本发明也益寿强身膏中芍药苷含量的测定方法也适用于其他强身健体膏剂中芍药苷含量的测定。

Claims (1)

1.一种益寿强身膏中芍药苷含量的测定方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
1)对照品溶液的制备：精密称取对照品芍药苷12.66mg和12.65mg，置于25ml的量瓶中，加流动相：16％乙腈+84％的磷酸水，溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品储备液；分别精密吸取上述对照品储备液1ml，置10ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，经0.45um滤膜过滤，即得。
2)供试品溶液的制备：取益寿强身膏5g精密称定，置50ml量瓶中，加入52.9％的稀乙醇35ml,超声处理30min，放冷，加稀乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，经0.45um滤膜过滤即得。
3)阴性对照溶液的制备：按照益寿强身膏的处方，制备不含芍药苷和牡丹皮的膏剂，按照2)的方法制备阴性对照溶液；
4)测定法：分别精密吸取上述两种对照品和供试品溶液各10ul，注入Agilent1200高效液相色谱仪，得到色谱图，根据色谱图计算供试品中芍药苷的含量；
其中所述高效液相色谱仪的色谱条件如下：色谱柱Agilent ZORBAX SB-C18(4.6×250mm×5um)；流动相：乙腈：0.1％磷酸溶液＝16:84；流速：1.0ml/min；检测波长：230nm；柱温：30℃；进样量10ul，色谱柱的理论塔板数按芍药苷峰计算大于5000。
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Address after: 214028 Changjiang South Road, new Wu District, Wuxi, Jiangsu Province, No. 12

Applicant after: Wuxi Jiyu Shanhe Pharmaceutical Co.,Ltd.

Address before: 214028 No. 12 Changjiang South Road, New District, Jiangsu, Wuxi

Applicant before: WUXI JIMIN KEXIN SHANHE PHARMACEUTICAL Co.,Ltd.

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Application publication date: 20190806

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