CN115298549A - M蛋白测定及其用途 - Google Patents

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Abstract

本公开文本提供了用于测量从受试者获得的生物样品中的M蛋白的方法，所述方法包括将纯化的免疫球蛋白施加至液相色谱(LC)质谱法(MS)。在一些方面，使用免疫捕获(IC)纯化所述免疫球蛋白。在某些方面，所述受试者患有浆细胞障碍，例如多发性骨髓瘤。

Description

M蛋白测定及其用途
相关申请的交叉引用
本PCT申请要求2019年11月5日提交的美国临时申请号62/931,063的优先权权益，将其通过引用以其整体并入本文。
技术领域
本公开文本提供了用于测量生物样品中的M蛋白的方法。
背景技术
单克隆丙种球蛋白病是特征在于一种或多种通常称为M蛋白的单克隆免疫球蛋白的异常产生的血液障碍。M蛋白通过骨髓中的快速***的克隆浆细胞表达并且分泌到血流中，因此恶性浆细胞可以通过测量血液中的M蛋白来检测。M蛋白本质上是多样的：每位患者的过度产生的抗体的可变区是不同的；然而，个体的恶性浆细胞表达与其原始前体细胞具有相同的分子质量的确定的免疫球蛋白。
M蛋白的测量对于多发性骨髓瘤患者的诊断和监测是必需的。由于与M蛋白共迁移的免疫球蛋白或其他血清蛋白的存在，因此当前基于凝胶电泳的M蛋白测定具有较差的灵敏度、特异性并且在极低M蛋白浓度下无法定量。因此，存在对于用于测量生物样品中的M蛋白的改善方法的需要。
发明内容
本公开文本的某些方面涉及一种测量从患有浆细胞障碍的受试者获得的样品中的M蛋白的方法，所述方法包括：(i)通过免疫捕获纯化所述样品中的免疫球蛋白和游离轻链，以及(ii)将所述免疫球蛋白和游离轻链施加至液相色谱(LC)质谱法(MS)。
本公开文本的某些方面涉及一种在用于浆细胞障碍的疗法后在确定完全反应者时减少假阳性的方法，所述方法包括：(i)通过免疫捕获纯化所述生物样品中的免疫球蛋白和游离轻链，以及(ii)将所述纯化的免疫球蛋白和游离轻链施加至液相色谱(LC)质谱法(MS)。
本公开文本的某些方面涉及一种鉴定患有残留病的受试者的方法，所述方法包括测量从所述受试者获得的生物样品中的M蛋白，其中所述M蛋白通过以下方式测量：(1)通过免疫捕获纯化所述生物样品中的免疫球蛋白和游离轻链，以及(2)将所述纯化的免疫球蛋白和游离轻链施加至液相色谱(LC)质谱法(MS)；其中所述患者先前被鉴定为患有浆细胞障碍。
本公开文本的某些方面涉及一种鉴定适于用于治疗浆细胞障碍的疗法的受试者的方法，所述方法包括：(i)测量从所述受试者获得的生物样品中的M蛋白，其中所述M蛋白通过以下方式测量：(1)通过免疫捕获纯化所述生物样品中的免疫球蛋白和游离轻链，以及(2)将所述纯化的免疫球蛋白和游离轻链施加至液相色谱(LC)质谱法(MS)。在一些方面，所述方法进一步包括：(ii)向被鉴定为具有M蛋白的受试者施用用于治疗所述浆细胞障碍的疗法。
在一些方面，所述受试者患有浆细胞障碍。
本公开文本的某些方面涉及一种治疗患有浆细胞障碍的受试者的方法，所述方法包括：测量从所述受试者获得的生物样品中的M蛋白，其中所述M蛋白通过以下方式测量：(1)通过免疫捕获纯化所述生物样品中的免疫球蛋白和游离轻链，以及(2)将所述纯化的免疫球蛋白和游离轻链施加至液相色谱(LC)质谱法(MS)；并且向被鉴定为具有M蛋白的受试者施用用于治疗所述浆细胞障碍的疗法。
本公开文本的某些方面涉及一种治疗患有浆细胞障碍的受试者的方法，所述方法包括：(i)向所述受试者施用用于所述浆细胞障碍的疗法；(ii)测量从所述受试者获得的生物样品中的M蛋白，其中所述M蛋白通过以下方式测量：(1)通过免疫捕获纯化所述生物样品中的免疫球蛋白和游离轻链，以及(2)将所述纯化的免疫球蛋白和游离轻链施加至液相色谱(LC)质谱法(MS)；以及(iii)向所述受试者施用用于所述浆细胞障碍的另外的疗法。
在一些方面，所述生物样品是尿液样品或血清样品。
本公开文本的某些方面涉及一种治疗患有浆细胞障碍的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用用于所述浆细胞障碍的疗法，其中所述受试者已经被鉴定为具有血清和/或尿液M蛋白，并且其中所述血清和/或尿液M蛋白是通过将使用免疫捕获纯化的免疫球蛋白和游离轻链施加至液相色谱(LC)质谱法(MS)在从所述受试者获得的生物样品中测量的。
在一些方面，所述受试者接受过用于治疗浆细胞障碍的先前疗法。在一些方面，所述先前疗法包括免疫疗法。在一些方面，所述用于浆细胞障碍的疗法包括免疫疗法。在一些方面，所述免疫疗法包括抗体疗法。在一些方面，所述免疫疗法包括检查点抑制剂的疗法。在一些方面，所述抗体包括特异性结合选自以下的蛋白质的抗体或其抗原结合部分：SLAMF7、PD-1、CTLA-4、LAG3、TIGIT、TIM3、NKG2a、OX40、ICOS、CD137、KIR、TGFβ、IL-10、IL-8、IL-2、CD96、VISTA、B7-H4、Fas配体、CXCR4、间皮素、CD27、GITR、CD40、CD56、CD38、CD229、CD200、CD28、CD19、BCMA、CD317、CD70、B2M及其任何组合。在一些方面，所述用于浆细胞障碍的疗法包括抗SLAMF7抗体。
在一些方面，所述用于浆细胞障碍的疗法包括环磷酰胺、多柔比星、依托泊苷、脂质体多柔比星、美法仑、长春新碱、硼替佐米、来那度胺、卡非佐米、泊马度胺、帕比司他、沙利度胺、干细胞移植、CAR-T疗法或其任何组合。
在一些方面，所述M蛋白包括IgG、IgA、和IgM、IgD、其片段或其任何组合。在一些方面，所述M蛋白包括κ同种型或λ同种型。在一些方面，所述M蛋白包含一条或多条游离轻链。
在一些方面，所述MS包括电喷雾(ESI)飞行时间(TOF)MS。在一些方面，所述MS包括激光解析电离(MALDI)TOF。在一些方面，所述MS包括MALDI TOF MS。
在一些方面，所述免疫捕获是自动化免疫捕获。在一些方面，所述纯化的免疫球蛋白被解离为轻链和重链。在一些方面，所述方法进一步包括将所述纯化的免疫球蛋白解离为轻链和重链。在一些方面，所述纯化的免疫球蛋白通过化学还原解离。在一些方面，所述纯化的免疫球蛋白是通过使所述纯化的免疫球蛋白与选自以下的试剂接触来解离：三(2-羧乙基)膦(TCEP)；TCEP-HCl和其他TCEP盐；DTT(2,3二羟基丁烷-1,4-二硫醇)、DTE(2,3二羟基丁烷-1,4-二硫醇)；巯基乙醇酸盐；亚硫酸盐；亚硫酸氢盐；硫化物；二硫化物；2-巯基乙醇；2-巯基乙醇-HCl；Bond-Breaker TCEP溶液，中性pH；半胱氨酸-HCl；胍-HCl；尿素；及其任何组合。
在一些方面，所述LC是超高效(UC)LC。在一些方面，所述LC与所述MS联机。
在一些方面，所述浆细胞障碍包括多发性骨髓瘤。在一些方面，所述多发性骨髓瘤包括轻链多发性骨髓瘤。在一些方面，所述多发性骨髓瘤包括浆细胞白血病。在一些方面，所述浆细胞白血病包括原发性浆细胞白血病或继发性浆细胞白血病。
在一些方面，所述抗SLAMF7抗体与艾洛珠单抗交叉竞争与人SLAMF7的结合。在一些方面，所述抗SLAMF7抗体与艾洛珠单抗结合人SLAMF7上的相同或重叠的表位。在一些方面，所述抗SLAMF7抗体是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。在一些方面，所述抗SLAMF7抗体是艾洛珠单抗。在一些方面，静脉内施用所述抗SLAMF7抗体。
在一些方面，所述方法进一步包括向所述受试者施用另外的抗癌剂。在一些方面，所述方法进一步包括向所述受试者施用来那度胺。在一些方面，所述方法进一步包括向所述受试者施用泊马度胺。在一些方面，所述方法进一步包括向所述受试者施用***。在一些方面，所述方法进一步包括向所述受试者施用苯海拉明。在一些方面，所述方法进一步包括向所述受试者施用雷尼替丁。在一些方面，所述方法进一步包括向所述受试者施用醋氨酚。
在一些方面，所述残留病包括微小残留病(MRD)。
附图说明
图1是展示用于测量从人获得的生物样品中的M蛋白的免疫捕获(IC)液相色谱(LC)质谱(MS)方法的流程图。
图2A-图2I是显示对于以下免疫球蛋白通过液相色谱法(图2A、图2D和图2G)、代表性质谱法(图2B、图2E和图2H)和重建光谱法(图2C、图2F和图2I)对免疫球蛋白简化分离的结果的图示：来自正常人血清的免疫捕获的免疫球蛋白(图2A-图2C)；来自从第一多发性骨髓瘤患者血清获得的血清样品的免疫捕获的免疫球蛋白(图2D-图2F)；和来自从第二多发性骨髓瘤患者获得的血清样品的免疫捕获的免疫球蛋白(图2G-图2I)。
图3是使用PHYTIPTM抗λ/κ捕获方法的M蛋白和单克隆治疗性抗体(t-mAb)的一致高产回收率的图示。
图4示出了对于如所指示的五种不同的治疗性mAb(t-mAb)的解卷积轻链标准曲线的图。
图5A-图5I示出了单个单克隆抗体轻链在多克隆背景上的低水平定量。将三种单独的单克隆抗体加标至正常人血清中，并且使用免疫捕获IC-LC-MS方法进行测试。mAb1的结果示于图5A-图5C中，mAb2示于图5D-5F中，并且mAb3示于图5G-图5I中。每种抗体在1000μg/mL(图5A、图5D和图5G)、100μg/mL(图5B、图5E和图5H)和10μg/mL(图5C、图5F和图5I)的浓度下进行测试。对于免疫捕获IC-LC-HRMS方法的估计的LOD是临床SPEP测定的估计的LOD的1/100，其灵敏度为1000μg/mL。图5J-图5M示出了IC-LC-MS对通过将不同的M蛋白(IgGK，图5J；IgGL，图5K；IgAK，图5L；和IgAL，图5M)加标至健康血清中构成的人工样品的检测限。检测限随着M蛋白峰与多克隆背景的比率而变化。
图6是表示在SIFE可测量的最低连续稀释浓度下通过IC-LC-MS方法测量的M蛋白MS响应的分布的图。估计的IC-LC-MS方法LOD是SIFE LOD的1/10-1/100。
图7A-图7N是显示IC-LC-MS方法测定在检测M蛋白时消除了来自治疗性单克隆抗体的干扰的代表性质谱法。
图8A-图8H是显示与IC-LC-MS测定(图8C和图8G)相比的标准临床测试(SPEP，图8A和图8E；SIFE，图8B和图8F；和sFLC，图8D和图8H)的灵敏度的图示。将从处于不同的治疗周期(1个周期是28天)的两名多发性骨髓瘤患者(患者1，图8A-图8D；患者2，图8E-图8H)收集的血清样品用于此分析。
图9A-图9F是在来自多发性骨髓瘤患者的血清样品中通过IC-LC-MS测定所测的对于C1D1(图9A)、C18D1(图9B)、C8D1(图9C)、C26D1(图9D)、C15D1(图9E)和C31D1(图9F)的免疫球蛋白图谱的图示，所述图示示出了在所有治疗时间点在22470±1.5Da处可检测的单克隆轻链峰。
具体实施方式
本公开文本提供了一种用于测量从受试者获得的样品中的M蛋白的方法。本公开文本还提供了一种用于鉴定适于用于浆细胞障碍的疗法的受试者的方法，所述方法包括测量从受试者获得的样品中的M蛋白。在一些方面，所述M蛋白是通过以下方式测量的：纯化所述样品中的免疫球蛋白和/或游离轻链，并且将所述纯化的免疫球蛋白和游离轻链施加至液相色谱(LC)质谱法(MS)。在一些方面，使用免疫捕获纯化所述免疫球蛋白和/或游离轻链。在一些方面，所述方法进一步包括施用用于浆细胞障碍的疗法。在一些方面，所述方法进一步包括向受试者施用可用于治疗浆细胞障碍的抗体或其抗原结合部分，例如特异性结合人SLAMF7的抗体(抗SLAMF7抗体)。
I.术语
为了可以更容易地理解本公开文本，首先定义某些术语。如本申请所用，除非本文另外明确提供，否则以下术语中的每一个应当具有下文所阐述的含义。另外的定义贯穿本申请进行阐述。
如本文所用，术语“M蛋白”是指多种多样的免疫球蛋白组，其是通过受试者中的单克隆丙种球蛋白病(例如多发性骨髓瘤)异常产生一种或多种单克隆免疫球蛋白的结果。M蛋白通过在骨髓中快速***的克隆浆细胞表达并且分泌到血流中。M蛋白本质上是多样的：每位患者的过度产生的抗体的可变区是不同的；然而，个体的恶性浆细胞表达与其原始前体细胞具有相同的分子质量的确定的免疫球蛋白。基于重链的恒定区，M蛋白可以属于IgG、IgA、IgM或IgD类。在多发性骨髓瘤中，IgG是最常见的免疫球蛋白，并且IgA是第二常见的，并且IgM仅构成少于0.5％的病例，并且IgD极为罕见。基于轻链的恒定区，每种免疫球蛋白可以分为κ和λ同种型。每种M蛋白可以基本上由完整的免疫球蛋白分子和/或免疫球蛋白片段(如也称为本周氏(Bence Jones)蛋白的“游离轻链”(FLC))组成或由其组成。“游离轻链”是指不与重链缔合的免疫球蛋白的轻链。尿液或血清中游离轻链的存在是多发性骨髓瘤的若干种标记物之一。游离轻链可以以低分子量单体、二聚体或高分子量聚合物存在于尿液中，并且以四聚体存在于血清中。
由于M蛋白通常分泌到血流中，因此可以通过测量血清中的M蛋白来检测恶性浆细胞。术语“测量”(“measuring”或“measured”或“measurement”)意指确定从受试者获得的生物样品中的M蛋白的可测量的量。如本文所用，使用包括质谱法步骤的方法来实现所述测量。质谱法是一种可用于测量样品中存在的一种或多种分子的质荷比(m/z)的分析工具。这些测量通常也可用于计算样品组分的准确分子量。通常，质谱仪可用于经由分子量确定来鉴定未知化合物、定量已知化合物以及确定分子的结构和化学特性。在本文公开的方法中，将纯化的和还原的免疫球蛋白施加至质谱仪，提高了鉴定生物样品中M蛋白的能力。
如本文所用，术语“生物样品”是指从受试者分离的生物材料。生物样品可以含有任何可能包含M蛋白的生物材料。生物样品可以是任何合适的生物组织或流体，例如像血液、血浆、血清、骨髓活检和/或尿液。在一个方面，所述样品是血清样品。在一个方面，所述样品是尿液样品。在一个方面，所述样品是骨髓活检。
如本文所用，“单克隆丙种球蛋白病”是指一种特征在于产生一种或多种M蛋白的血液障碍的类型。单克隆丙种球蛋白病的范围是从良性的(如意义未明的单克隆丙种球蛋白病)至癌性的(如多发性骨髓瘤)。
如本文所用，“浆细胞障碍”是指一系列逐渐加重的单克隆丙种球蛋白病，其中癌变前浆细胞或恶性浆细胞(有时与淋巴浆细胞样细胞或B淋巴细胞联合)的一个克隆或多个克隆过度产生并且将M蛋白分泌到血流中。浆细胞障碍的非排他性例子包括意义未明的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)和血液恶性肿瘤，包括多发性骨髓瘤、华氏巨球蛋白血症和其他B细胞相关肿瘤。
如本文所用，“多发性骨髓瘤”或“浆细胞骨髓瘤”是指浆细胞的癌症。浆细胞是一类产生抗体的白血细胞。多发性骨髓瘤还与癌细胞在骨髓中的积累相关。癌细胞产生异常的单克隆抗体(M蛋白)。
“施用”是指使用本领域技术人员已知的多种方法和递送***中的任何一种将包含治疗剂的组合物物理引入至受试者。施用途径的非限制性例子包括静脉内、肌肉内、皮下、腹膜内、脊髓或其他肠胃外施用途径，例如通过注射或输注。如本文所用，短语“肠胃外施用”意指除了肠施用和局部施用之外，通常通过注射的施用方式，并且包括但不限于静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、***内、病灶内、囊内、眼眶内、心脏内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外和胸骨内注射和输注以及体内电穿孔。其他非肠胃外途径包括口服、局部、表皮或粘膜施用途径，例如鼻内地、***地、直肠地、舌下地或局部地。给予还可以例如进行一次、多次和/或经一个或多个延长的时间段。
如本文所用，“不良事件”(AE)是与医学治疗的使用相关联的任何不利的并且通常是无意的或不希望的体征(包括异常的实验室发现)、症状或疾病。例如，不良事件可能与响应于治疗的免疫***的激活或免疫***细胞(例如，T细胞)的扩增相关联。医学治疗可能具有一种或多种相关联的AE，并且每种AE可能具有相同或不同级别的严重程度。对能够“改变不良事件”的方法的提及意指降低与不同治疗方案的使用相关联的一种或多种AE的发生率和/或严重程度的治疗方案。
“抗体”(Ab)或“免疫球蛋白”应当包括但不限于糖蛋白免疫球蛋白(其与抗原特异性结合并包含通过二硫键相互连接的至少两条重(H)链和两条轻(L)链)或其抗原结合部分。每条H链包含重链可变区(本文缩写为VH)和重链恒定区。重链恒定区包含三个恒定结构域，即CH1、CH2和CH3。每条轻链包含轻链可变区(本文缩写为VL)和轻链恒定区。轻链恒定区包含一个恒定结构域：CL。VH和VL区可以进一步细分为高变性区域，称为互补决定区(CDR)，其间穿插有更保守的区域，称为框架区(FR)。每个VH和VL包含三个CDR和四个FR，按照以下顺序从氨基末端到羧基末端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，所述宿主组织或因子包括免疫***的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体***的第一组分(C1q)。
免疫球蛋白可以源自任何公知的同种型，包括但不限于IgA、分泌型IgA、IgG和IgM。IgG亚类也是本领域技术人员熟知的，并且包括但不限于人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。“同种型”是指由重链恒定区基因编码的抗体类别或亚类(例如，IgM或IgG1)。在人中，免疫球蛋白轻链由两个基因座(免疫球蛋白κ基因座和免疫球蛋白λ基因座)编码。因此，人免疫球蛋白轻链被分类为κ轻链或λ轻链。可以特异性结合κ轻链或λ轻链的CaptureSelectTMLC-λ和LC-κ纳米抗体(THERMOFISHER)以及各种市售抗体是可获得的，包括但不限于BeckmanCoulter Life Sciences的κ-FITC(C15623)、λ-PE(C15189)、λ-PC7(B90416)和κ-APC(B90420)；Abcam的抗κ轻链抗体(例如，ab134083、ab79558和ab1936)和抗λ轻链抗体(例如，ab124719、ab187370、ab185131和ab200966)；以及eBioscienceTM的κ轻链单克隆抗体(TB28-2)即FITC和λ轻链单克隆抗体(1-155-2)即APC。这些例子不旨在是限制性的，并且任何已知的抗κ和/或抗λ捕获试剂都可以用于本文公开的方法中。
举例来说，术语“捕获试剂”包括天然存在的抗体和非天然存在的抗体二者；单克隆抗体和多克隆抗体；嵌合抗体和人源化抗体；人抗体或非人抗体；全合成抗体；以及单链抗体、纳米抗体、affirmers、其他分析物结合蛋白和适配体及其任何组合。在没有明确说明的情况下，除非上下文另有指示，否则术语“捕获试剂”还包括任何上述免疫球蛋白的抗原结合片段或抗原结合部分，并且包括单价和二价片段或部分以及单链抗体。
如本文所用，抗体(例如治疗性抗体)的抗原结合“部分”或“片段”是指保留与抗原结合的能力的小于整体的抗体的一部分。已经充分地证明，抗体的抗原结合功能可以通过全长抗体的片段来执行。包含在术语抗体的“抗原结合部分”内的结合片段的例子包括(i)Fab片段，即由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab’)2片段，即包含在铰链区由二硫桥连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体的单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段；或(v)其任何组合。
如本文所用，“治疗性抗体”是指能够结合抗原并且在体内或体外引发作用的抗体或其抗原结合部分。
“分离的抗体”是指基本上不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体(例如，与SLAMF7特异性结合的分离的抗体基本上不含与SLAMF7以外的抗原特异性结合的抗体)。然而，与SLAMF7特异性结合的分离的抗体可能与其他抗原(如来自不同物种的SLAMF7分子)具有交叉反应性。此外，分离的抗体可以基本上不含其他细胞材料和/或化学物质。
术语“单克隆抗体”(mAb)是指具有单一分子组成的抗体分子的非天然存在的制剂，即其一级序列基本上相同并且对特定表位展现出单一结合特异性和亲和力的抗体分子。单克隆抗体是分离的抗体的例子。单克隆抗体可以通过杂交瘤、重组、转基因或本领域技术人员已知的其他技术产生。
“人抗体”(HuMAb)是指具有这样的可变区的抗体，其中框架区和CDR区二者均源自人种系免疫球蛋白序列。此外，如果抗体含有恒定区，则所述恒定区也源自人种系免疫球蛋白序列。本公开文本的人抗体可以包括不是由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或位点特异性诱变或通过体内体细胞突变引入的突变)。然而，如本文所用，术语“人抗体”不旨在包括其中源自另一种哺乳动物物种(如小鼠)的种系的CDR序列已经被移植到人框架序列上的抗体。术语“人抗体”和“完全人抗体”同义使用。
“人源化抗体”是指非人抗体的CDR外的一些、大部分或所有氨基酸被源自人免疫球蛋白的相应氨基酸替代的抗体。在人源化形式的抗体的一个方面，CDR外的一些、大部分或所有氨基酸已经被来自人免疫球蛋白的氨基酸替代，而一个或多个CDR内的一些、大部分或所有氨基酸未改变。氨基酸的少量添加、缺失、***、取代或修饰是被允许的，只要它们不消除抗体结合特定抗原的能力即可。“人源化抗体”保留与原始抗体相似的抗原特异性。
“嵌合抗体”是指其中可变区源自一个物种并且恒定区源自另一物种的抗体，如其中可变区源自小鼠抗体并且恒定区源自人抗体的抗体。
“抗抗原抗体”是指与抗原特异性结合的抗体。例如，抗SLAMF7抗体与SLAMF7特异性结合。
“癌症”是指一组特征在于体内异常细胞的不受控制的生长的广泛的不同疾病。不受调节的细胞***和生长导致恶性肿瘤的形成，恶性肿瘤侵入邻近组织并且还可以通过淋巴***或血流转移到身体的远端部分。
术语“免疫疗法”是指通过包括诱导、增强、抑制或以其他方式修饰免疫应答的方法治疗患有疾病或者有感染疾病或遭受疾病复发风险的受试者。受试者的“治疗”或“疗法”是指对受试者进行的任何类型的干预或处理，或者向受试者施用活性剂，目的是逆转、减轻、改善、抑制、减缓或预防症状、并发症或病症的发作、进展、发展、严重程度或复发或者与疾病相关联的生化指标。在一些方面，免疫疗法包括向受试者施用治疗性抗体。
“信号传导淋巴细胞激活分子F7”、“SLAMF7”、“CD319”或“CS-1”是指由自然杀伤(NK)细胞、激活的T细胞、大多数B细胞和多发性骨髓瘤细胞表达的免疫调节受体。在共表达SH2D1B的细胞中，SLAMF7通过依赖于磷酸化SH2D1B的机制正向调节NK细胞功能。在不存在SH2D1B的情况下，SLAMF7抑制NK细胞功能。如本文所用的术语“SLAMF7”包括人SLAMF7(hSLAMF7)，hSLAMF7的变体、亚型和物种同源物，以及与hSLAMF7具有至少一个共同表位的类似物。完整的hSLAMF7序列可以在UniProt号Q9NQ25下找到。
“受试者”包括任何人或非人动物。术语“非人动物”包括但不限于脊椎动物，如非人灵长类动物、绵羊、狗和啮齿动物(如小鼠、大鼠和豚鼠)。在优选的方面，受试者是人。术语“受试者”和“患者”在本文可互换使用。
药物或治疗剂的“治疗有效量”或“治疗有效剂量”是药物的当单独地或与另一种治疗剂组合地使用时保护受试者免受疾病的发作或促进通过疾病症状的严重程度的降低、无疾病症状期的频率和持续时间的增加或由于疾病困扰引起的损伤或残疾的预防所证实的疾病消退的任何量。可以使用熟练的从业人员已知的多种方法评价治疗剂促进疾病消退的能力，如在临床试验期间的人受试者中，在预测人体中功效的动物模型***中，或者通过测定药剂在体外测定中的活性进行评价。
举例来说，“抗癌剂”促进受试者的癌症消退。在优选的方面，治疗有效量的药物促进癌症消退至消除癌症的程度。“促进癌症消退”意指单独地或与抗肿瘤剂组合地施用有效量的药物导致肿瘤生长或大小的减小、肿瘤的坏死、至少一种疾病症状的严重程度的降低、无疾病症状期的频率和持续时间的增加或由于疾病困扰引起的损伤或残疾的预防。另外，关于治疗的术语“有效的”和“有效性”包括药理学有效性和生理学安全性。药理学有效性是指药物促进患者中癌症消退的能力。生理学安全性是指由药物的给予引起的在细胞、器官和/或生物水平的毒性水平或其他不利生理效应(不利效应)。
“免疫应答”是如本领域所理解的，并且通常是指脊椎动物内针对外来因子(agent)或异常例如癌细胞的生物学反应，所述反应保护生物免受这些因子和由其引起的疾病的侵害。免疫应答是由免疫***的一种或多种细胞(例如，T淋巴细胞、B淋巴细胞、自然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞、树突细胞或嗜中性粒细胞)和通过这些细胞或肝脏中的任何一种产生的可溶性大分子(包括抗体、细胞因子和补体)的作用介导的，所述作用导致选择性靶向、结合、损伤、破坏和/或消除脊椎动物体中侵入的病原体、感染病原体的细胞或组织、癌性或其他异常细胞，或者在自身免疫性或病理性炎症的情况下导致选择性靶向、结合、损伤、破坏和/或消除正常的人细胞或组织。免疫应答包括例如T细胞(例如效应T细胞、Th细胞、CD4+细胞、CD8+T细胞或Treg细胞)的激活或抑制，或免疫***的任何其他细胞(例如NK细胞)的激活或抑制。
“免疫相关的反应模式”是指在用免疫治疗剂治疗的癌症患者中通常观察到的临床反应模式，所述免疫治疗剂通过诱导癌症特异性免疫应答或通过修饰天然免疫过程而产生抗肿瘤作用。此反应模式的特征在于在肿瘤负担初始增加或新病变出现之后的有益治疗效果，其在传统化学治疗剂的评价中将被分类为疾病进展并且将与药物失效同义。因此，对免疫治疗剂的适当评价可能需要长期监测这些药剂对目标疾病的影响。
“免疫调节剂”(“immunomodulator”或“immunoregulator”)是指一种药剂，例如靶向信号传导途径的组分的药剂，所述药剂可以参与调节(“modulating”、“regulating”)或修饰免疫应答。“调节”(“Modulating”、“regulating”)或“修饰”免疫应答是指免疫***的细胞或这种细胞(例如，效应T细胞，如Th1细胞)的活性的任何改变。这种调节包括对免疫***的刺激或抑制，这可以通过各种细胞类型数量的增加或减少、这些细胞的活性的增加或降低或免疫***内可能发生的任何其他变化来表现。已经鉴定了抑制性和刺激性免疫调节剂，其中一些在肿瘤微环境中可能具有增强的功能。在一些方面，所述免疫调节剂靶向T细胞的表面上的分子。“免疫调节靶标”(“immunomodulatory target”或“immunoregulatorytarget”)是如下一种分子(例如细胞表面分子)，其被靶向用于与物质、药剂、部分、化合物或分子结合，并且所述免疫调节靶标的活性通过物质、药剂、部分、化合物或分子的结合而改变。免疫调节靶标包括例如细胞表面上的受体(“免疫调节受体”)和受体配体(“免疫调节配体”)。
“免疫疗法”是指通过包括诱导、增强、抑制或以其他方式修饰免疫***或免疫应答的方法治疗患有疾病或者有感染疾病或遭受疾病复发风险的受试者。在某些方面，所述免疫疗法包括向受试者施用抗体。在其他方面，所述免疫疗法包括向受试者施用小分子。在其他方面，所述免疫疗法包括施用细胞因子或其类似物、变体或片段。
药物的治疗有效量包括“预防有效量”，其是药物的当单独地或与抗肿瘤剂组合地施用有患癌风险(例如，患有癌前病症的受试者)或有遭受癌症复发的风险的受试者时抑制癌症的发展或复发的任何量。在优选的方面，所述预防有效量完全预防癌症的发展或复发。“抑制”癌症的发展或复发意指减少癌症发展或复发的可能性、或者完全预防癌症的发展或复发。
替代方案(例如，“或”)的使用应理解为意指替代方案中的任一者、两者或其任何组合。如本文中所用，不定冠词“一个/一种(a)”或“一个/一种(an)”应被理解为是指任何所述或列举组分的“一个/一种或多个/多种”。
术语“约”或“基本上由……构成”是指在如通过本领域普通技术人员确定的特定值或组成的可接受误差范围内的值或组成，其将部分取决于如何测量或确定所述值或组成，即测量***的限制。例如，根据本领域的实践，“约”或“基本上由……构成”可以意指在1个或多于1个标准差内。可替代地，“约”或“基本上由……构成”可以意指多达10％的范围。此外，特别是关于生物***或过程，所述术语可以意指高达值的一个数量级或高达值的5倍。当在本申请和权利要求中提供特定值或组成时，除非另有说明，否则应假定“约”或“基本上由……构成”的含义在该特定值或组成的可接受误差范围内。
如本文所述，除非另有说明，否则任何浓度范围、百分比范围、比率范围或整数范围应理解为包括所列举范围内的任何整数及(在适当时)其分数(如整数的十分之一和百分之一)的值。
在以下小节中更详细地描述本公开文本的各个方面。
II.本公开文本的方法
本公开文本的某些方面涉及一种治疗患有浆细胞障碍的受试者的方法，所述方法包括：测量从所述受试者获得的生物样品中的M蛋白，其中所述M蛋白通过以下方式测量：(1)通过免疫捕获纯化所述生物样品中的免疫球蛋白和游离轻链，以及(2)将所述纯化的免疫球蛋白和游离轻链施加至液相色谱(LC)质谱法(MS)；并且向被鉴定为具有M蛋白的受试者施用治疗有效量的免疫疗法。在一些方面，所述免疫疗法包括施用特异性结合SLAMF7的抗体或其抗原结合部分(“抗SLAMF7抗体”)。
本公开文本的一些方面涉及一种治疗患有浆细胞障碍的受试者的方法，所述方法包括：(i)向所述受试者施用治疗有效量的免疫疗法；(ii)测量从所述受试者获得的生物样品中的M蛋白，其中所述M蛋白通过以下方式测量：(1)通过免疫捕获纯化所述生物样品中的免疫球蛋白和游离轻链，以及(2)将所述纯化的免疫球蛋白和游离轻链施加至液相色谱(LC)质谱法(MS)；以及(iii)向所述受试者施用治疗有效量的免疫疗法。在一些方面，所述免疫疗法包括抗SLAMF7抗体。
本公开文本的一些方面涉及一种鉴定适于免疫疗法的受试者的方法，所述方法包括：(i)测量从所述受试者获得的生物样品中的M蛋白，其中所述M蛋白通过以下方式测量：(1)通过免疫捕获纯化所述生物样品中的免疫球蛋白和游离轻链，以及(2)将所述纯化的免疫球蛋白和游离轻链施加至液相色谱(LC)质谱法(MS)。在一些方面，所述方法进一步包括：向被鉴定为具有M蛋白的受试者施用治疗治疗有效量的免疫疗法。在一些方面，所述免疫疗法包括抗SLAMF7抗体。在一些方面，所述受试者患有浆细胞障碍。
本公开文本的一些方面涉及一种鉴定患有残留病的受试者的方法，所述方法包括测量从所述受试者获得的生物样品中的M蛋白，其中所述M蛋白通过以下方式测量：(1)通过免疫捕获纯化所述生物样品中的免疫球蛋白和游离轻链，以及(2)将所述纯化的免疫球蛋白和游离轻链施加至液相色谱(LC)质谱法(MS)；其中所述患者先前被鉴定为患有浆细胞障碍。
本公开文本的一些方面涉及测量从患有浆细胞障碍的受试者获得的样品中的M蛋白的方法，所述方法包括：(1)通过免疫捕获纯化所述生物样品中的免疫球蛋白和游离轻链，以及(2)将所述纯化的免疫球蛋白和游离轻链施加至液相色谱(LC)质谱法(MS)。在一些方面，所述受试者患有浆细胞障碍。
在一些方面，本文公开的方法减少了假阳性的发生。用于治疗浆细胞障碍(包括多发性骨髓瘤)的治疗选择之一是使用治疗性抗体，如抗SLAMF7抗体。然而，用于测量M蛋白的现有方法无法区分指示浆细胞障碍(例如多发性骨髓瘤)的M蛋白与保留在最近治疗的受试者血清中的治疗性抗体。因此，即使没有保留可测量的M蛋白，受试者也被错误地归类为具有阳性M蛋白水平。这些假阳性可能导致用于确认结果的更具侵入性的测试(如骨髓活检)或可能不必需的另外的治疗。本文公开的方法允许区分指示疾病的M蛋白与治疗性抗体，从而降低假阳性的发生率。
在一些方面，与测量M蛋白的标准方法相比，本文公开的方法允许更早地检测从受试者获得的样品中的M蛋白。在一些方面，与SPEP测定相比，本文公开的方法允许更早地检测从受试者获得的样品中的M蛋白。在一些方面，与SIFE测定相比，本文公开的方法允许更早地检测从受试者获得的样品中的M蛋白。在一些方面，与使用标准方法测量sFLC比率相比，本文公开的方法允许更早地检测从受试者获得的样品中的M蛋白。在一些方面，与标准方法相比，本文公开的方法允许M蛋白的检测提前至少约10％、提前至少约20％、提前至少约25％、提前至少约30％、提前至少约40％、提前至少约50％、提前至少约60％、提前至少约70％、提前至少约80％、提前至少约90％、提前至少约95％。在一些方面，与标准方法相比，本文公开的方法允许M蛋白的检测提前至少约1个周期、提前至少约2个周期、提前至少约3个周期、提前至少约4个周期、提前至少约5个周期、提前至少约6个周期、提前至少约7个周期、提前至少约8个周期、提前至少约9个周期、提前至少约10个周期、提前至少约15个周期、提前至少约20个周期、提前至少约25个周期、提前至少约30个周期。在一些方面，与标准方法相比，本文公开的方法允许M蛋白的检测提前至少约10个周期。
A.浆细胞障碍
本公开文本的某些方面涉及诊断、监测和/或治疗浆细胞障碍的方法。浆细胞障碍包括一系列逐渐加重的单克隆丙种球蛋白病，其中癌变前浆细胞或恶性浆细胞(有时与淋巴浆细胞样细胞或B淋巴细胞联合)的一个克隆或多个克隆过度产生并且将M蛋白分泌到血流中。浆细胞障碍的非排他性例子包括意义未明的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)和血液恶性肿瘤，包括多发性骨髓瘤、华氏巨球蛋白血症和其他B细胞相关肿瘤。
在本公开文本的某些方面，所述浆细胞疾病是MGUS。MGUS是克隆浆细胞增殖的无症状癌变前阶段。MGUS存在于大约3％-5％的大于50岁的群体中。每年大约1％的MGUS受试者进展为多发性骨髓瘤。
在本公开文本的某些方面，所述浆细胞障碍是多发性骨髓瘤。多发性骨髓瘤(MM)是一种克隆浆细胞恶性肿瘤，占所有血液癌症的10％-15％。MM的特征在于骨髓中单克隆浆细胞的不受控制的增殖，导致无功能的完整免疫球蛋白或免疫球蛋白链(例如M蛋白)的产生以及终末器官损伤。
MM通常以每年大约1％的速率由MGUS演变而来。一些患者在进展为MM之前也会出现中间无症状、更晚期的癌变前阶段，称为“冒烟型多发性骨髓瘤”(SMM)。
MM的标准诊断包括彻底的病史采集、体检和各种实验室测试，包括24小时尿液样品分析、骨髓活检和骨骼放射摄影术。MM的特征在于患者的血清和尿液中存在单克隆蛋白(M蛋白)以及骨髓浆细胞增多和骨髓瘤相关的终末器官损伤。在MM患者中，M蛋白的血清水平是至少30g/L。MGUS和SMM的特征也在于血清中M蛋白的存在。在SMM患者中，类似于MM，M蛋白以至少30g/L的浓度在血清中发现。然而，在SMM患者的尿液中没有M蛋白，并且也没有显示出终末器官损伤。MGUS的特征在于M蛋白血清浓度低于30g/L。
用于MM的治疗是基于个体患者的年龄、共病和风险特征。MM治疗的最新发展已经将5年存活率提高至大约50％。然而，大多数患者最终将遭受致命的复发。大多数小于70岁患者的标准治疗是自体干细胞移植。患者通常在接受移植之前接受2-6个周期的诱导治疗，目的是达到完全反应或接近完全的反应。移植后，患者通常接受维持性沙利度胺或来那度胺(有或没有***或***)12个月。如果患者不符合移植条件，治疗通常由类固醇、细胞毒性剂(如环磷酰胺)和沙利度胺、来那度胺或硼替佐米的组合组成。
虽然最新发展已经提高了5年存活率，但是这些进展并未提高在高风险MM患者或复发性MM患者中的存活率。高风险MM患者的中位存活期仅为二至三年。虽然在治疗高风险和复发性MM患者方面几乎没有什么进展，但是其中一项进展是使用针对肿瘤细胞表面抗原的免疫疗法。
信号传导淋巴细胞激活分子(SLAM)家族受体是一个用于免疫治疗性MM治疗的靶标。SLAM受体参与不同疾病(如癌症，特别是MM)的发病机制。艾洛珠单抗是一种用作免疫治疗性MM治疗的针对SLAMF7的IgG1人源化抗体。艾洛珠单抗、来那度胺和***的组合展示出显著的抗MM活性。艾洛珠单抗与来那度胺和***组合使用已经被批准用于治疗复发性和难治性MM。艾洛珠单抗、来那度胺和***的组合也正在被研究用于新诊断的MM患者，所述患者由于共病或高龄而不是高剂量疗法和自体干细胞移植的候选者。
本文所述的方法可用于测量从患有任何已知类型的浆细胞疾病的受试者获得的样品中的M蛋白。在某些方面，所述浆细胞疾病是MM。在一些方面，所述MM包括轻链MM。在一些方面，所述MM包括浆细胞白血病。在一些方面，所述浆细胞白血病包括原发性浆细胞白血病或继发性浆细胞白血病。在一些方面，所述浆细胞疾病是MGUS。在一些方面，所述浆细胞疾病是SMM。
在一些方面，所述生物样品是从患有浆细胞疾病(例如，MM)的受试者收集的。在一些方面，所述受试者先前被诊断患有浆细胞疾病，例如，MM。在一些方面，所述受试者处于缓解期。在一些方面，所述受试者是复发的或难治的。在一些方面，所述受试者是在用于治疗浆细胞疾病(例如，MM)的标准疗法后复发的或难治的。在一些方面，所述受试者患有残留病，其中所述受试者先前被诊断患有浆细胞疾病，例如，MM。
在一些方面，所述受试者接受过用于治疗浆细胞障碍(例如，MM)的先前疗法。在一些方面，所述先前疗法是用于治疗浆细胞障碍(例如，MM)的护理疗法的标准。在一些方面，所述先前疗法包括自体干细胞移植。在一些方面，所述先前疗法包括嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)疗法。在一些方面，所述先前疗法包括类固醇、细胞毒性剂(例如，化学疗法，例如环磷酰胺)、免疫调节剂(例如，沙利度胺、来那度胺、泊马度胺)、硼替佐米或其任何组合。在一些方面，所述先前疗法包括免疫疗法。在一些方面，所述免疫疗法是本文公开的任何免疫疗法。在一些方面，所述免疫疗法包括抗SLAMF7抗体或其抗原结合部分。在一些方面，所述免疫疗法包括艾洛珠单抗。
在一些方面，所述生物样品是从受试者获得的组织或流体样品。在一些方面，所述生物样品选自血液、血浆、血清或尿液样品。在某些方面，所述生物样品是血清样品。在某些方面，所述生物样品是尿液样品。在一些方面，所述生物样品是骨髓活检。可以通过本领域已知的任何方法收集生物样品。
B.诊断疾病的方法
本公开文本的某些方面涉及诊断受试者中的浆细胞障碍的方法。M蛋白的测量对于浆细胞障碍(如多发性骨髓瘤)的诊断是必需的。然而，由于与M蛋白共迁移的免疫球蛋白或其他血清蛋白的存在，当前的方法(包括基于凝胶电泳的M蛋白测定)具有较差的灵敏度和特异性并且在低于10mg/mL的M蛋白浓度下无法定量。此外，这些基于电泳的测定对于分泌游离轻链(FLC)的多发性骨髓瘤患者的效用非常有限。血清FLC迅速***到尿液中；因此，已使用尿液蛋白电泳(UPEP)和尿液免疫固定电泳(UIFE)测试测量尿液中的FLC。此外，SPEP和SIFE测定不能很好地区分正常的多克隆免疫球蛋白(称为未涉及的免疫球蛋白)和与疾病相关的单克隆免疫球蛋白。因此，需要复杂的测试算法来诊断和监测多发性骨髓瘤患者。
本公开文本的一些方面涉及一种诊断受试者中的浆细胞障碍的方法，所述方法包括：(i)测量从所述受试者获得的生物样品中的M蛋白，其中所述M蛋白通过以下方式测量：(1)通过免疫捕获纯化所述生物样品中的免疫球蛋白和游离轻链，以及(2)将所述纯化的免疫球蛋白和游离轻链施加至液相色谱(LC)质谱法(MS)。在一些方面，所述受试者具有一种或多种指示浆细胞障碍的标记物。在一些方面，所述受试者先前已经呈现浆细胞障碍(例如多发性骨髓瘤)的一种或多种症状，其选自骨痛(例如，脊柱或胸部)、恶心、便秘、食欲不振、精神模糊或意识错乱、疲劳、频繁感染、体重减轻、腿部无力或麻木、过度口渴。在一些方面，如果测量的M蛋白水平大于阈值水平，则所述受试者被鉴定为患有浆细胞障碍。
本公开文本的某些方面涉及鉴定患有残留病(例如微小残留病)的受试者的方法，所述方法包括测量从所述受试者获得的生物样品中的M蛋白，其中所述M蛋白通过以下方式测量：(1)通过免疫捕获纯化所述生物样品中的免疫球蛋白和游离轻链，以及(2)将所述纯化的免疫球蛋白和游离轻链施加至液相色谱(LC)质谱法(MS)；其中所述受试者先前被鉴定为患有浆细胞障碍。
微小残留病(MRD)是指在治疗期间或治疗后患者处于缓解期(没有疾病症状或体征)时残留在人体内的少量癌细胞。它是癌症复发的主要原因。在癌症治疗中，MRD测试具有几个重要的作用：确定治疗是否已经根除癌症或是否留下痕迹、比较不同治疗的功效、监测患者缓解状态以及检测癌症的复发、以及选择最能满足这些需求的治疗。在一些方面，所述MRD是浆细胞MRD。
在一些方面，所述受试者接受过至少一种用于治疗浆细胞障碍的先前疗法。在一些方面，所述受试者接受了至少两种、至少三种、至少四种、至少五种、至少六种、至少七种、至少八种、至少九种或至少十种用于治疗浆细胞障碍的先前疗法。在一些方面，所述受试者接受过八种用于治疗浆细胞障碍的先前疗法。在一些方面，所述受试者不存在指示残留病的其他标记物。在一些方面，如果测量的M蛋白水平大于阈值水平，则所述受试者被鉴定为患有残留病。
在一些方面，所述先前疗法包括环磷酰胺、多柔比星、依托泊苷、脂质体多柔比星、美法仑、长春新碱、硼替佐米、来那度胺、卡非佐米、泊马度胺、帕比司他、沙利度胺、来那度胺、泊马度胺、干细胞移植、CAR-T细胞疗法或其任何组合。
在一些方面，所述先前疗法包括环磷酰胺。环磷酰胺(Cyclophosphamide，CP)也称为环磷酰胺(cytophosphane)等，其是一种用作化学疗法并且抑制免疫***的药物。作为化学疗法，其用于治疗淋巴瘤、多发性骨髓瘤、白血病、卵巢癌、乳腺癌、小细胞肺癌、神经母细胞瘤和肉瘤。其通过口服或注射到静脉中服用。
在一些方面，所述先前疗法包括多柔比星。多柔比星以商品名阿霉素等出售，其是一种用于治疗癌症的化学疗法药物。所述癌症包括乳腺癌、膀胱癌、卡波西肉瘤、淋巴瘤和急性淋巴细胞白血病。其通常与其他化学疗法药剂一起使用。多柔比星通过注射至静脉内来给予。
在一些方面，所述先前疗法包括依托泊苷。依托泊苷以品牌名凡毕复(Etopophos)等销售，其是一种用于治疗多种类型的癌症的化学疗法药物。所述癌症包括睾丸癌、肺癌、淋巴瘤、白血病、神经母细胞瘤和卵巢癌。其通过口服或注射到静脉中来使用。
在一些方面，所述先前疗法包括美法仑。美法仑以商品名爱克兰(Alkeran)等销售，其是一种用于治疗多发性骨髓瘤、卵巢癌、AL淀粉样变性和潜在恶性黑色素瘤的化学疗法药物。所述药剂最初作为一种可能用于治疗黑色素瘤的药物进行了研究，但是并未发现有效。在2016年，它在美国被批准：用作在多发性骨髓瘤(MM)患者中造血祖(干)细胞移植之前的高剂量调理治疗，不适合口服疗法的MM患者的姑息治疗。
在一些方面，所述先前疗法包括长春新碱。长春新碱也称为新长春碱并且以品牌名安可平(Oncovin)等市售，其是一种用于治疗多种类型的癌症的化学疗法药物。所述癌症包括急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞白血病、霍奇金病、神经母细胞瘤和小细胞肺癌等。长春新碱经由静脉内输注递送以用于各种类型的化学疗法方案。其主要用途是在非霍奇金淋巴瘤中作为化学疗法方案CHOP的一部分、在霍奇金淋巴瘤中作为MOPP、COPP、BEACOPP的一部分、或在急性淋巴母细胞性白血病(ALL)中的不太普遍的斯坦福V化学疗法方案、以及用于肾胚细胞瘤的治疗中。其还用于与***和L-天冬酰胺酶一起诱导ALL的缓解，并且与***组合用于治疗儿童白血病。长春新碱偶尔用作免疫抑制剂，例如用于治疗血栓性血小板减少性紫癜(TTP)或慢性特发性血小板减少性紫癜(ITP)。
在一些方面，所述先前疗法包括硼替佐米。硼替佐米以品牌名万珂(Velcade)等销售，其是一种用于治疗多发性骨髓瘤和套细胞淋巴瘤的抗癌药物。这包括先前接受过和未接受过治疗的人的多发性骨髓瘤。其通常与其他药物一起使用。其通过注射给予。两项开放标签试验确定了在21天周期的第1、4、8和11天施用硼替佐米(有或没有***)持续最多八个周期对患有复发性/难治性多发性骨髓瘤的深度预治疗患者的功效。III期证明了硼替佐米相对于高剂量***方案的优势(例如中位TTP为6.2相比于3.5个月，并且1年存活率为80％相比于66％)。
在一些方面，所述先前疗法包括来那度胺。来那度胺以商品名瑞复美(Revlimid)等销售，其是一种用于治疗多发性骨髓瘤(MM)和骨髓增生异常综合征(MDS)的药物。对于MM，其在至少一种其他治疗后使用，并且通常与***一起使用。其是沙利度胺的一种更有效的分子类似物，其通过诱导细胞凋亡抑制肿瘤血管生成、肿瘤分泌的细胞因子和肿瘤增殖。
来那度胺可以有效诱导完全反应或“很好的部分”反应以及改善无进展存活期。在接受来那度胺用于骨髓瘤的人中更常见的不良事件是嗜中性粒细胞减少症(白血细胞计数的降低)、深静脉血栓形成、感染和其他血液恶性肿瘤的增加的风险。在复发性或难治性多发性骨髓瘤中，第二次原发性血液恶性肿瘤的风险并不能超过使用来那度胺的益处。
在一些方面，所述先前疗法包括卡非佐米。卡非佐米(以商品名凯洛斯(Kyprolis)市售，由Onyx Pharmaceuticals开发)是一种充当选择性蛋白酶体抑制剂的抗癌药物。在化学上，其是四肽环氧酮和环氧酶素的类似物。美国食品和药物管理局(FDA)在2012年7月20日批准了它用于接受过至少两种先前疗法(包括用硼替佐米和一种免疫调节疗法(如来那度胺)的治疗)并且已显示出在最后一次疗法完成时或60天内疾病进展的多发性骨髓瘤患者。最初的批准是基于反应率。显示出总存活率(OS)益处的数据后来在ENDEAVOR试验中得到证明，并且由FDA批准。
在一些方面，所述先前疗法包括泊马度胺。泊马度胺(INN；在美国以Pomalyst市售并且在欧盟和俄罗斯以Imnovid市售)是以Celgene市售的沙利度胺的衍生物。其是抗血管生成，并且还充当免疫调节剂。泊马度胺在2013年2月被美国食品和药物管理局(FDA)批准用作用于复发性和难治性多发性骨髓瘤的治疗。其已经被批准用于接受过至少两种先前疗法(包括来那度胺和硼替佐米)并且已显示出在最后一次疗法完成时或60天内疾病进展的人。其在2013年8月获得了欧洲委员会的类似批准。
在一些方面，所述先前疗法包括帕比司他。帕比司他(商品名Farydak)是Novartis的用于治疗各种癌症的药物。其是异羟肟酸并且充当非选择性组蛋白脱乙酰酶抑制剂(泛HDAC抑制剂)。在2015年2月23日其获得了FDA加速批准以用于患有多发性骨髓瘤的患者中，并且在2015年8月28日其被欧洲药品管理局批准用于同样的用途。
在一些方面，所述先前疗法包括沙利度胺。沙利度胺以品牌名撒利多迈(Thalomid)等销售，其是一种免疫调节药物和沙利度胺类药物的原型。其主要用作某些癌症(多发性骨髓瘤)和麻风病并发症的治疗。其是世界卫生组织的基本药物清单，即卫生***中所需的最安全且最有效的药物。
在一些方面，所述先前疗法包括造血干细胞移植。造血干细胞移植(HSCT)(干细胞移植)是多能造血干细胞(通常源自骨髓、外周血或脐带血)的移植。其可以是自体的(使用患者自己的干细胞)、同种异体的(干细胞来自供体)或同基因的(来自同卵双胞胎)。在某些方面，所述先前疗法包括嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)疗法。
其最常用于患有某些血液或骨髓癌症(如多发性骨髓瘤或白血病)的患者。在这些情况下，移植前接受者的免疫***通常会用放射或化学疗法破坏。感染和移植物抗宿主病是同种异体HSCT的主要并发症。
在一些方面，在生物样品中测量的M蛋白水平指示受试者患有的浆细胞障碍的类型。在一些方面，如果从受试者获得的血清样品被确定为具有(如使用本文公开的任何方法测量的)至少约30g/L的M蛋白，则所述受试者被鉴定为患有浆细胞疾病，例如，多发性骨髓瘤。在一些方面，如果从受试者获得的血清样品被确定为具有(如使用本文公开的任何方法测量的)至少约5g/L至至少约30g/L的M蛋白，则所述受试者被鉴定为有风险患上浆细胞疾病(例如，多发性骨髓瘤)的候选者。在一些方面，如果从受试者获得的血清样品具有低于检测限的M蛋白水平，则所述受试者被鉴定为不患有浆细胞疾病，例如，多发性骨髓瘤。
C.测量对浆细胞疾病疗法的反应性的方法
M蛋白的测量不仅对于患者的诊断是必需的，而且对于监测正在进行治疗的多发性骨髓瘤患者也是必需的。然而，用治疗性单克隆抗体(如抗SLAMF7抗体)治疗的多发性骨髓瘤患者在使用现有的血清蛋白电泳(SPEP)和血清免疫固定电泳(SIFE)测定监测治疗反应时存在潜在的药物干扰。当前的M蛋白测试无法监测完全缓解(CR)的患者，因为任何剩余的M蛋白均指示不到完全反应。
本公开文本的某些方面涉及鉴定对用于治疗浆细胞障碍的疗法具有完全反应的受试者，所述方法包括测量从所述受试者获得的生物样品中的M蛋白，其中所述M蛋白通过以下方式测量：(1)通过免疫捕获纯化所述生物样品中的免疫球蛋白和游离轻链，以及(2)将所述纯化的免疫球蛋白和游离轻链施加至液相色谱(LC)质谱法(MS)。在某些方面，本文公开的方法能够区分M蛋白与治疗性抗体。
在一些方面，所述用于治疗浆细胞障碍的疗法包括环磷酰胺、多柔比星、依托泊苷、脂质体多柔比星、美法仑、长春新碱、硼替佐米、来那度胺、卡非佐米、泊马度胺、帕比司他、沙利度胺、干细胞移植、CAR-T细胞疗法或其任何组合。
在一些方面，所述用于治疗浆细胞障碍的疗法包括环磷酰胺。在一些方面，所述用于治疗浆细胞障碍的疗法包括多柔比星。在一些方面，所述用于治疗浆细胞障碍的疗法包括脂质体多柔比星。在一些方面，所述用于治疗浆细胞障碍的疗法包括依托泊苷。在一些方面，所述用于治疗浆细胞障碍的疗法包括美法仑。在一些方面，所述用于治疗浆细胞障碍的疗法包括长春新碱。在一些方面，所述用于治疗浆细胞障碍的疗法包括硼替佐米。在一些方面，所述用于治疗浆细胞障碍的疗法包括来那度胺。在一些方面，所述用于治疗浆细胞障碍的疗法包括卡非佐米。在一些方面，所述用于治疗浆细胞障碍的疗法包括泊马度胺。在一些方面，所述用于治疗浆细胞障碍的疗法包括帕比司他。在一些方面，所述用于治疗浆细胞障碍的疗法包括沙利度胺。在一些方面，所述用于治疗浆细胞障碍的疗法包括造血干细胞移植。在一些方面，所述用于治疗浆细胞障碍的疗法包括嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)疗法。
在一些方面，所述疗法包括施用免疫疗法。在一些方面，所述疗法包括施用治疗性抗体。可用于治疗浆细胞障碍的任何免疫疗法可以用于本文公开的方法中。在一些方面，所述疗法包括施用抗SLAMF7抗体。在一些方面，所述免疫疗法包括检查点抑制剂。本领域已知的任何检查点抑制剂可以用于本文公开的方法中。在一些方面，所述检查点抑制剂是阻断、抑制或降低一种或多种检查点蛋白的活性的任何试剂。在一些方面，所述检查点蛋白选自PD-1、CTLA-4、LAG3、TIGIT、TIM3、NKG2a、OX40、ICOS、CD137、KIR、TGFβ、IL-10、IL-8、IL-2、CD96、VISTA、B7-H4、Fas配体、CXCR4、间皮素、CD27、GITR及其任何组合。
在一些方面，所述免疫疗法包括特异性结合PD-1的抗体或其抗原结合部分。本领域已知的抗PD-1抗体可以用于本发明所述的组合物和方法中。以高亲和力与PD-1特异性结合的多种人单克隆抗体已经公开在美国专利号8,008,449中。已经证明美国专利号8,008,449中披露的抗PD-1人抗体展现出以下特征中的一种或多种：(a)以1x 10-7M或更小的KD与人PD-1结合，如使用Biacore生物传感器***通过表面等离子体共振确定的；(b)基本上不与人CD28、CTLA-4或ICOS结合；(c)在混合淋巴细胞反应(MLR)测定中增加T细胞增殖；(d)在MLR测定中增加干扰素-γ产生；(e)在MLR测定中增加IL-2分泌；(f)与人PD-1和食蟹猴PD-1结合；(g)抑制PD-L1和/或PD-L2与PD-1的结合；(h)刺激抗原特异性记忆应答；(i)刺激抗体应答；以及(j)抑制体内肿瘤细胞生长。可用于本公开文本中的抗PD-1抗体包括与人PD-1特异性结合并且展现出前述特征中的至少一种、在一些方面至少五种的单克隆抗体。
其他抗PD-1单克隆抗体已经描述于例如以下中：美国专利号6,808,710、7,488,802、8,168,757和8,354,509，美国公开号2016/0272708，以及PCT公开号WO 2012/145493、WO 2008/156712、WO 2015/112900、WO 2012/145493、WO 2015/112800、WO 2014/206107、WO2015/35606、WO 2015/085847、WO 2014/179664、WO 2017/020291、WO 2017/020858、WO2016/197367、WO 2017/024515、WO 2017/025051、WO 2017/123557、WO 2016/106159、WO2014/194302、WO 2017/040790、WO 2017/133540、WO 2017/132827、WO 2017/024465、WO2017/025016、WO 2017/106061、WO 2017/19846、WO 2017/024465、WO 2017/025016、WO2017/132825和WO 2017/133540，将所述文献中的每一篇均通过引用以其整体并入。
在一些方面，所述抗PD-1抗体选自纳武单抗(也称为
Figure BDA0003716116120000141
5C4、BMS-936558、MDX-1106和ONO-4538)、派姆单抗(Merck；也称为
Figure BDA0003716116120000142
帕博利珠单抗和MK-3475；参见WO 2008/156712)、PDR001(Novartis；参见WO 2015/112900)、MEDI-0680(AstraZeneca；也称为AMP-514；参见WO 2012/145493)、西米普利单抗(Regeneron；也称为REGN-2810；参见WO 2015/112800)、JS001(TAIZHOU JU NSHI PHARMA；也称为特瑞普利单抗(toripalimab)；参见Si-Yang Liu等人,J.Hema tol.Oncol.10:136(2017))、BGB-A317(Beigene；也称为替雷利珠单抗；参见WO 2015/35606和US 2015/0079109)、INCSHR1210(Jiangsu Hengrui Medicine；也称为SHR-1210；参见WO 2015/085847；Si-Yang Liu等人,J.Hematol.Oncol.10:136(2017))、TSR-042(Tesaro Biopharmaceutical；也称为ANB011；参见WO2014/179664)、GLS-010(W uxi/Harbin Gloria Pharmaceuticals；也称为WBP3055；参见Si-Yang Liu等人,J.Hematol.Oncol.10:136(2017))、AM-0001(Armo)、STI-1110(Sorrento Therapeutics；参见WO 2014/194302)、AGEN2034(Agenus；参见WO 2017/040790)、MGA012(Macrogeni cs，参见WO 2017/19846)、BCD-100(Biocad；Kaplon等人,mAbs10(2):183-203(2018)、和IBI308(Innovent；参见WO 2017/024465、WO 2017/025016、WO2017/132825和WO 2017/133540)。
在一些方面，所述检查点抑制剂是特异性结合CTLA-4的抗体或其抗原结合部分。在一些方面，所述检查点抑制剂是特异性结合LAG3的抗体或其抗原结合部分。在一些方面，所述检查点抑制剂是特异性结合TIGIT的抗体或其抗原结合部分。在一些方面，所述检查点抑制剂是特异性结合TIM3的抗体或其抗原结合部分。在一些方面，所述检查点抑制剂是特异性结合NKG2a的抗体或其抗原结合部分。在一些方面，所述检查点抑制剂是特异性结合OX40的抗体或其抗原结合部分。在一些方面，所述检查点抑制剂是特异性结合ICOS的抗体或其抗原结合部分。在一些方面，所述检查点抑制剂是特异性结合CD137的抗体或其抗原结合部分。在一些方面，所述检查点抑制剂是特异性结合KIR的抗体或其抗原结合部分。在一些方面，所述检查点抑制剂是特异性结合TGFβ的抗体或其抗原结合部分。在一些方面，所述检查点抑制剂是特异性结合IL-10的抗体或其抗原结合部分。在一些方面，所述检查点抑制剂是特异性结合IL-8的抗体或其抗原结合部分。在一些方面，所述检查点抑制剂是特异性结合IL-2的抗体或其抗原结合部分。在一些方面，所述检查点抑制剂是特异性结合CD96的抗体或其抗原结合部分。在一些方面，所述检查点抑制剂是特异性结合VISTA的抗体或其抗原结合部分。在一些方面，所述检查点抑制剂是特异性结合B7-H4的抗体或其抗原结合部分。在一些方面，所述检查点抑制剂是特异性结合Fas配体的抗体或其抗原结合部分。在一些方面，所述检查点抑制剂是特异性结合CXCR4的抗体或其抗原结合部分。在一些方面，所述检查点抑制剂是特异性结合间皮素的抗体或其抗原结合部分。在一些方面，所述检查点抑制剂是特异性结合CD27的抗体或其抗原结合部分。在一些方面，所述检查点抑制剂是特异性结合GITR的抗体或其抗原结合部分。
在一些方面，所述免疫疗法包括特异性结合选自以下的蛋白质的抗体或其抗原结合部分：CD40、CD56、CD38、CD229、CD200、CD28、CD19、BCMA、CD317、CD70和B2M。在一些方面，所述免疫疗法包括特异性结合CD40的抗体或其抗原结合部分。在一些方面，所述免疫疗法包括特异性结合CD56的抗体或其抗原结合部分。在一些方面，所述免疫疗法包括特异性结合CD38的抗体或其抗原结合部分。在一些方面，所述免疫疗法包括特异性结合CD229的抗体或其抗原结合部分。在一些方面，所述免疫疗法包括特异性结合CD200的抗体或其抗原结合部分。在一些方面，所述免疫疗法包括特异性结合CD28的抗体或其抗原结合部分。在一些方面，所述免疫疗法包括特异性结合CD19的抗体或其抗原结合部分。在一些方面，所述免疫疗法包括特异性结合BCMA的抗体或其抗原结合部分。在一些方面，所述免疫疗法包括特异性结合CD317的抗体或其抗原结合部分。在一些方面，所述免疫疗法包括特异性结合CD70的抗体或其抗原结合部分。在一些方面，所述免疫疗法包括特异性结合B2M的抗体或其抗原结合部分。
在一些方面，向所述受试者施用单一疗法(例如抗PD-1单一疗法)，例如，其中不向所述受试者施用一种或多种另外的抗癌剂。在一些方面，向所述受试者施用组合疗法，例如，其中向所述受试者施用第一检查点抑制剂(例如抗PD-1抗体)和一种或多种另外的抗癌剂。在某些方面，向所述受试者施用包含抗PD-1抗体和抗CTLA-4抗体的组合疗法。
在本公开文本的其他方面，抗PD-L1抗体替代所述抗PD-1抗体。在某些方面，所述方法包括向受试者施用抗PD-L1抗体。在一些方面，向所述受试者施用抗PD-L1单一疗法。在一些方面，向所述受试者施用包含抗PD-L1抗体和第二抗癌剂(例如抗CTLA-4抗体)的组合疗法。
在一些方面，所述抗体是嵌合、人源化或人单克隆抗体或其一部分。
在一些方面，在所述测量之前施用所述疗法。在一些方面，在所述测量时进行所述疗法。在一些方面，在所述测量前至少一天施用所述疗法。在一些方面，在所述测量前至少两天、至少三天、至少四天、至少五天、至少六天、至少一周、至少两周或至少一个月施用所述疗法。在一些方面，在所述测量前少于一周施用所述疗法。在一些方面，在所述测量前少于六天、少于五天、少于四天、少于三天或少于两天施用所述疗法。
D.免疫球蛋白纯化
在本公开文本的某些方面，在LC-MS分析之前从生物样品纯化免疫球蛋白。本领域已知的用于纯化免疫球蛋白的任何方法可以用于本文公开的方法中。在某些方面，使用配体结合技术从生物样品纯化免疫球蛋白。免疫球蛋白的配体结合纯化涉及使用与靶免疫球蛋白相互作用的捕获试剂以富集或纯化所述靶免疫球蛋白。在本文公开的方法中，所述靶免疫球蛋白是M蛋白，其可以是非常多样化的免疫球蛋白群体，其由可以属于IgG、IgA、IgM和/或IgD类免疫球蛋白的M蛋白组成。此外，M蛋白可以包含完整的免疫球蛋白分子和/或免疫球蛋白片段(如也称为本周氏蛋白的“游离轻链”(FLC))。
在一些方面，所述捕获试剂包含抗体或其抗原结合片段。在一些方面，所述捕获试剂包含一种或多种单克隆抗体。在一些方面，所述捕获试剂包含一种或多种多克隆抗体。在一些方面，所述捕获试剂包含一种或多种单克隆抗体和一种或多种多克隆抗体。在一些方面，所述捕获试剂包含一种或多种纳米抗体。在一些方面，所述捕获试剂包含抗原，例如能够由靶免疫球蛋白结合的多肽。
在一些方面，使用单一捕获试剂捕获和纯化靶免疫球蛋白(例如，M蛋白)。在一些方面，使用多于一种捕获试剂纯化靶免疫球蛋白(例如，M蛋白)。在一些方面，使用若干种捕获试剂纯化靶免疫球蛋白(例如，M蛋白)。在一些方面，所述捕获试剂对目标类别的免疫球蛋白是特异性的。在一些方面，所述捕获试剂对IgG类免疫球蛋白是特异性的。在一些方面，所述捕获试剂对IgA类免疫球蛋白是特异性的。在一些方面，所述捕获试剂对IgM类免疫球蛋白是特异性的。在一些方面，所述捕获试剂对IgD类免疫球蛋白是特异性的。
在一些方面，所述捕获试剂是通用捕获试剂。如本文所用，“通用捕获试剂”是能够与多于一种人免疫球蛋白结合的配体或其他结合剂。在一些方面，所述通用捕获试剂能够与至少两类人免疫球蛋白结合。在一些方面，所述通用捕获试剂能够与至少三类人免疫球蛋白结合。在一些方面，所述通用捕获试剂能够与至少四类人免疫球蛋白结合。在一些方面，所述通用捕获试剂能够与所有已知类别的人免疫球蛋白结合。在一些方面，所述通用捕获试剂能够与IgG、IgA、IgM和IgD类免疫球蛋白结合。在一些方面，所述通用捕获试剂能够与完整的免疫球蛋白分子和免疫球蛋白片段(例如，游离轻链)二者结合。
在某些方面，所述捕获试剂包含特异性结合免疫球蛋白轻链的抗体或其抗原结合片段。在一些方面，所述捕获试剂包含特异性结合免疫球蛋白轻链恒定区的抗体或其抗原结合片段。在一些方面，所述捕获试剂包含特异性结合免疫球蛋白λ轻链的抗体或其抗原结合片段(“抗λ抗体”)。本领域已知的能够特异性结合人λ轻链的任何抗λ抗体(包括但不限于本文公开的抗λ抗体)均可用于本文公开的方法。在一些方面，所述捕获试剂包含特异性结合免疫球蛋白κ轻链的抗体或其抗原结合片段(“抗κ抗体”)。本领域已知的能够特异性结合人κ轻链的任何抗κ抗体(包括但不限于本文公开的抗κ抗体)均可用于本文公开的方法。在一些方面，所述捕获试剂包含抗λ抗体和抗κ抗体。
在一些方面，抗λ抗体与抗κ抗体的比率是约1:1、约1.5:1、约2:1、约2.5:1、约3:1、约3.5:1、约4:1、约4.5:1、约5:1、约6:1、约7:1、约8:1、约9:1、或约10:1。在一些方面，抗κ抗体与抗λ抗体的比率是约1:1、约1.5:1、约2:1、约2.5:1、约3:1、约3.5:1、约4:1、约4.5:1、约5:1、约6:1、约7:1、约8:1、约9:1、或约10:1。在一些方面，抗λ抗体与抗κ抗体的比率是约1:1。在某些方面，将捕获试剂掺入亲和基质中。在一些方面，所述亲和基质包含
Figure BDA0003716116120000173
纳米抗体树脂(THERMOFISHER)。在特定方面，所述亲和基质包含
Figure BDA0003716116120000174
纳米抗体树脂(THERMOFISHER)，其含有比率为1:1的抗λ抗体与抗κ抗体。
在本公开文本的一些方面，将亲和试剂(例如亲和基质)包装到柱中。在一些方面，所述柱适合于自动化。通过本文公开的免疫捕获方法纯化M蛋白的自动化具有几个优点，包括但不限于测定通量和改善的测定再现性。在某些方面，所述柱是尖端柱。在某些方面，所述柱是PHYTIP柱(PHYNEXUS)。在某些方面，所述柱具有装载至少约10μg、至少约15μg、至少约20μg、至少约25μg、至少约30μg、至少约35μg、至少约40μg、至少约45μg、至少约50μg、至少约55μg、至少约60μg、至少约65μg、至少约70μg、至少约75μg、至少约80μg、至少约85μg、至少约90μg、至少约95μg、至少约100μg或至少约150μg的免疫球蛋白的容量。在某些方面，所述柱具有装载至少约10μg、至少约15μg、至少约20μg、至少约25μg、至少约30μg、至少约35μg、至少约40μg、至少约45μg、至少约50μg、至少约55μg、至少约60μg、至少约65μg、至少约70μg、至少约75μg,or至少约80μg至少约85μg、至少约90μg、至少约95μg、至少约100μg或至少约150μg的λ免疫球蛋白的容量。在某些方面，所述柱具有装载至少约10μg、至少约15μg、至少约20μg、至少约25μg、至少约30μg、至少约35μg、至少约40μg、至少约45μg、至少约50μg、至少约55μg、至少约60μg、至少约65μg、至少约70μg、至少约75μg,or至少约80μg至少约85μg、至少约90μg、至少约95μg、至少约100μg或至少约150μg的κ免疫球蛋白的容量。在某些方面，所述柱具有装载至少约40μg的λ免疫球蛋白和至少约40μg的κ免疫球蛋白的容量。
在某些方面，将所述柱装载到多通道装置中。在一些方面，所述多通道装置是多通道移液器。在一些方面，所述多通道装置是机器人装置。在一些方面，所述多通道装置是能够自动化的机器人装置。在一些方面，所述多通道装置是Freedom
Figure BDA0003716116120000171
平台。在一些方面，所述Freedom
Figure BDA0003716116120000172
平台配备有96个通道。
在一些方面，将所述柱装载到单通道装置(例如单通道移液器)上。
在一些方面，所述纯化的免疫球蛋白被进一步解离为轻链和重链。在一些方面，所述纯化的免疫球蛋白通过化学还原解离。在一些方面，使所述纯化的免疫球蛋白与变性剂接触。在一些方面，所述纯化的免疫球蛋白是通过使所述纯化的免疫球蛋白与选自以下的还原剂接触来解离：三(2-羧乙基)膦(TCEP)；TCEP-HCl和其他TCEP盐；DTT(2,3二羟基丁烷-1,4-二硫醇)、DTE(2,3二羟基丁烷-1,4-二硫醇)；巯基乙醇酸盐；亚硫酸盐；亚硫酸氢盐；硫化物；二硫化物；2-巯基乙醇；2-巯基乙醇-HCl；Bond-Breaker TCEP溶液，中性pH；半胱氨酸-HCl；胍-HCl；尿素；或其任何组合。在一些方面，所述纯化的免疫球蛋白是通过使所述纯化的免疫球蛋白与TCEP接触来解离。
在某些方面，所述纯化的免疫球蛋白通过在还原剂(例如，TCEP)中在至少约1mM至至少约100mM的还原剂(例如，TCEP)的终浓度下孵育而被还原。在一些方面，所述纯化的免疫球蛋白通过在还原剂(例如，TCEP)中在至少约10mM至至少约100mM、至少约20mM至至少约100mM、至少约30mM至至少约100mM、至少约40mM至至少约100mM、至少约50mM至至少约100mM、至少约2mM至至少约30mM、至少约3mM至至少约30mM、至少约4mM至至少约30mM、至少约5mM至至少约30mM、至少约6mM至至少约30mM、至少约7mM至至少约30mM、至少约8mM至至少约30mM、至少约9mM至至少约30mM、至少约10mM至至少约30mM、至少约15mM至至少约30mM、至少约20mM至至少约30mM、至少约10mM至至少约25mM、至少约10mM至至少约20mM、至少约15mM至至少约25mM或至少约15mM至至少约20mM的还原剂(例如，TCEP)的终浓度下孵育而被还原。在某些方面，所述纯化的免疫球蛋白通过在还原剂(例如，TCEP)中在至少约10mM、至少约mM、至少约11mM、至少约12mM、至少约13mM、至少约14mM、至少约15mM、至少约16mM、至少约17mM、至少约18mM、至少约19mM、至少约20mM、至少约21mM、至少约22mM、至少约23mM、至少约24mM、至少约25mM、至少约26mM、至少约27mM、至少约28mM、至少约29mM或至少约30mM的还原剂(例如，TCEP)的终浓度下孵育而被还原。在某些方面，所述纯化的免疫球蛋白通过在还原剂(例如，TCEP)中在至少约20mM的还原剂(例如，TCEP)的终浓度下孵育而被还原。
在一些方面，所述纯化的免疫球蛋白通过在TCEP中在至少约20℃至至少约30℃下孵育而被还原。在一些方面，所述纯化的免疫球蛋白通过在TCEP中在至少约21℃至至少约29℃、至少约22℃至至少约28℃、至少约23℃至至少约27℃或至少约24℃至至少约26℃下孵育而被还原。在一些方面，所述纯化的免疫球蛋白通过在TCEP中在至少约20℃、至少约21℃、至少约22℃、至少约23℃、至少约24℃、至少约25℃、至少约26℃、至少约27℃、至少约28℃、至少约29℃或至少约30下孵育而被还原。在一些方面，所述纯化的免疫球蛋白通过在TCEP中在约20℃下孵育而被还原。
在一些方面，所述纯化的免疫球蛋白通过在TCEP中孵育至少约20至至少约30分钟、至少约21至至少约30分钟、至少约22至至少约30分钟、至少约23至至少约30分钟、至少约24至至少约30分钟、至少约25至至少约30分钟、至少约26至至少约30分钟、至少约27至至少约30分钟、至少约28至至少约30分钟、至少约29至至少约30分钟、至少约20至至少约29分钟、至少约20至至少约28分钟、至少约20至至少约27分钟、至少约20至至少约26分钟、至少约20至至少约25分钟、至少约20至至少约24分钟、至少约20至至少约23分钟、至少约20至至少约22分钟、至少约20至至少约21分钟、至少约21至至少约29分钟、至少约22至至少约28分钟、至少约23至至少约27分钟或至少约24至至少约26分钟而被还原。所述洗脱的样品立即通过以下方法还原：添加100mM缓冲TCEP溶液至20mM的终浓度，然后在25℃下孵育30min。
在一些方面，所述纯化的免疫球蛋白在纯化后被立即还原。在一些方面，所述纯化的蛋白质在还原前储存一段时间。
E.液相色谱-质谱法(LC-MS)
质谱法(MS)是一种进行小分子、大分子和混合模式生物聚合物样品的定性和定量分析的方法。MS已经成功用于各种不同的应用，包括药物发现、合成反应监测和纳米颗粒表征。MS提供了全面的样品服务，并且允许人们进行方法开发、验证和测试样品分析。
可用于本公开文本的MS***通常提供以下非限制性能力中的一种或多种：肽/蛋白质分子量确定；精确质量分析/分子式验证；使用LC-UV-MS对样品的纯度分析；用流动注射或UPLC分离对复杂混合物的精确质量分析；生物或环境样品中有机化合物的定量；寡核苷酸分子量确定；通过质谱法成像；临床药理学和快速药代动力学(PK)分析；或其任何组合。
存在许多不同类型的用于定性和定量分析的高分辨率MS仪器，其中任何一种均可以用于本文公开的方法中。MS仪器的非限制性例子包括Bruker Maxis或Impact***、ABSciex TripleTOF 5600/6600、ABSciex X500R、Agilent 6545XT、Waters
Figure BDA0003716116120000181
G2 TOF或任何其他型号。
本公开文本的某些方面涉及通过将生物样品施加至液相色谱法(LC)接着进行MS来测量所述样品中的M蛋白的方法。MS与LC之间的组合技术通常称为LC-MS。LC与MS的组合减少了实验误差并且改善了准确度。在一些方面，所述LC-MS的LC包括高效LC(HPLC)。在一些方面，首先将免疫球蛋白通过免疫捕获纯化，然后纯化的免疫球蛋白通过化学还原解离，并且然后将纯化的、解离的免疫球蛋白施加至LC-MS。在一些方面，将纯化的、解离的免疫球蛋白施加至LC-MS。
LC-MS提供了如下方法：根据混合物的物理和化学特性分离混合物，然后鉴定每个峰内的组分并且根据它们的质谱进行检测。在一些方面，LC-MS中使用的流速低于通常用于HPLC的流速。保持低于HPLC的流速可以增加完全电离的可能性并且维持MS的检测灵敏度，所述灵敏度在超过200μL/min时开始下降。在一些方面，用于LC-MS的柱比通常用于HPLC的柱小，以适应较小的溶剂流速和样品体积。在一些方面，注射泵用于LC-MS。即使在低流速下，注射泵也能实现非常精确的递送。
在某些方面，LC-MS包括Acquity UPLC H-Class Plus Bio***。所述AcquityUPLC H-Class Plus Bio***提供了对于UPLC技术通常预期的高分辨率、高灵敏度分离。此外，此***允许灵活性和耐用性以运行所有所需的色谱模式，包括但不限于尺寸排阻(SEC)或反相(RP)。此***进一步支持所有现有的HPLC、UHPLC和UPLC方法。所述Acquity UPLC H-Class Plus Bio***包括由非不锈钢材料制成的生物惰性流路。这允许保持大分子完整性并且保持移动，以更好地回收样品而无带出(carryover)。
在一些方面，所述LC-MS包含LC柱。在一些方面，所述LC柱是C3柱。在一些方面，所述LC柱是C4柱。可用于本公开文本的C4柱的例子包括但不限于Acquity Protein BEH C4
Figure BDA0003716116120000191
1.7μm，2.1mmx100mm(Waters Corporation，马萨诸塞州)；XBridge OBD Prep柱反相5μm(Waters Corporation)、Aeris WIDEPORE 3.6u C4(Phenomenex)；ZORBAX SB-C3，
Figure BDA0003716116120000192
5μm(Agilent)；和Poroshell 300SB-C3(Agilent)。在某些方面，所述LC-MS包括配备有C4柱的Acquity UPLC H-Class Plus Bio***。在一些方面，将样品注射到柱(例如，C4柱)中，其中将柱温设置为约70℃至约90℃、约70℃至约85℃、约70℃至约80℃、约70℃至约75℃、约75℃至约90℃、约75℃至约85℃、约75℃至约80℃、约80℃至约90℃或约85℃至约90℃。在一些方面，将柱温设置为约75℃至约85℃。在一些方面，将柱温设置为约75℃至约80℃。在一些方面，将柱温设置为约70℃、约71℃、约72℃、约73℃、约74℃、约75℃、约76℃、约77℃、约78℃、约79℃、约80℃、约81℃、约82℃、约83℃、约84℃、约85℃、约86℃、约87℃、约88℃、约89℃或约90℃。在一些方面，将样品注射到柱(例如，C4柱)中，其中将柱温设置为约75℃。在一些方面，将样品注射到柱(例如，C4柱)中，其中将柱温设置为约76℃。在一些方面，将样品注射到柱(例如，C4柱)中，其中将柱温设置为约77℃。在一些方面，将样品注射到柱(例如，C4柱)中，其中将柱温设置为约78℃。在一些方面，将样品注射到柱(例如，C4柱)中，其中将柱温设置为约79℃。在一些方面，将样品注射到柱(例如，C4柱)中，其中将柱温设置为约80℃。
在一些方面，所述流动相包含流动相A和流动相B。在一些方面，所述流动相A包含在水中的约0.01％至约1.0％、约0.02％至约0.9％、约0.03％至约0.8％、约0.04％至约0.7％、约0.05％至约0.6％、约0.06％至约0.5％、约0.07％至约0.4％、约0.08％至约0.3％、约0.09％至约0.2％、约0.1％至约0.2％、约0.01％至约0.2％、约0.02％至约0.2％、约0.03％至约0.2％、约0.04％至约0.2％、约0.05％至约0.2％、约0.06％至约0.2％、约0.07％至约0.2％、约0.08％至约0.2％、约0.09％至约0.2％、约0.01％至约0.19％、约0.02％至约0.18％、约0.03％至约0.17％、约0.04％至约0.16％、约0.05％至约0.15％、约0.06％至约0.14％、约0.07％至约0.18％、约0.08％至约0.12％、约0.09％至约0.11％、约0.05％至约0.1％或约0.1％至约0.15％甲酸(FA)。在一些方面，所述流动相A包含在水中的约0.05％至约0.15％FA。在一些方面，所述流动相A包含在水中的约0.05％、约0.06％、约0.07％、约0.08％、约0.09％、约0.10％、约0.11％、约0.12％、约0.13％、约0.14％或约0.15％FA。在一些方面，所述流动相A包含在水中的约0.1％FA。
在一些方面，所述流动相B包含在乙腈中的约0.01％至约1.0％、约0.02％至约0.9％、约0.03％至约0.8％、约0.04％至约0.7％、约0.05％至约0.6％、约0.06％至约0.5％、约0.07％至约0.4％、约0.08％至约0.3％、约0.09％至约0.2％、约0.1％至约0.2％、约0.01％至约0.2％、约0.02％至约0.2％、约0.03％至约0.2％、约0.04％至约0.2％、约0.05％至约0.2％、约0.06％至约0.2％、约0.07％至约0.2％、约0.08％至约0.2％、约0.09％至约0.2％、约0.01％至约0.19％、约0.02％至约0.18％、约0.03％至约0.17％、约0.04％至约0.16％、约0.05％至约0.15％、约0.06％至约0.14％、约0.07％至约0.18％、约0.08％至约0.12％、约0.09％至约0.11％、约0.05％至约0.1％或约0.1％至约0.15％甲酸(FA)。在一些方面，所述流动相B包含在乙腈中的约0.05％至约0.15％FA。在一些方面，所述流动相B包含在乙腈中的约0.05％、约0.06％、约0.07％、约0.08％、约0.09％、约0.10％、约0.11％、约0.12％、约0.13％、约0.14％或约0.15％FA。在一些方面，所述流动相B包含在乙腈中的约0.1％FA。
在一些方面，如下使用梯度分离程序：0-1.0min 10％流动相B；1.1-3.0min10％-33％流动相B；3.0-10.0min 33％-40％流动相B；10.1-10.5min 40％-90％流动相B；在90％流动相B下保持10.5-13.0min；13.0-15.0min 90％-10％流动相B；并且在15.0min时停止运行。梯度分离程序允许用户设置时间和一种或多种流动相的递送量，以在所需设置下运行并且正确结束分析。
在一些方面，将流速(即，仪器每分钟递送的一种或多种流动相的量(体积))设置为约0.025mL/min至约1.0mL/min、约0.05mL/min至约1.0mL/min、约0.075mL/min至约1.0mL/min、约0.025mL/min至约0.9mL/min、约0.025mL/min至约0.8mL/min、约0.025mL/min至约0.7mL/min、约0.025mL/min至约0.6mL/min、约0.025mL/min至约0.5mL/min、约0.1mL/min至约0.9mL/min、0.1mL/min至约0.8mL/min、0.1mL/min至约0.7mL/min、0.1mL/min至约0.6mL/min、0.1mL/min至约0.5mL/min、0.1mL/min至约0.4mL/min、0.1mL/min至约0.3mL/min、0.2mL/min至约0.9mL/min、0.2mL/min至约0.8mL/min、0.2mL/min至约0.7mL/min、0.2mL/min至约0.6mL/min、0.2mL/min至约0.5mL/min、0.2mL/min至约0.4mL/min、0.2mL/min至约0.3mL/min、0.3mL/min至约0.9mL/min、0.3mL/min至约0.8mL/min、0.3mL/min至约0.7mL/min、0.3mL/min至约0.6mL/min、0.3mL/min至约0.5mL/min或0.3mL/min至约0.4mL/min。在一些方面，将流速设置为约0.1mL/min至0.5mL/min。在一些方面，将流速设置为约0.025mL/min、约0.05mL/min、约0.075mL/min、约0.1mL/min、约0.2mL/min、约0.25mL/min、约0.26mL/min、约0.27mL/min、约0.28mL/min、约0.29mL/min、约0.30mL/min、约0.31mL/min、约0.32mL/min、约0.33mL/min、约0.34mL/min或约0.35mL/min。在一些方面，将流速设置为约0.3mL/min。
在一些方面，注射体积(即，每次运行注射到仪器中的样品的量(体积))是约1.0μL至约3.0μL、约1.0μL至约2.5μL、约1.0μL至约2.0μL、约1.0μL至约1.5μL、约1.5μL至约3.0μL、约2.0μL至约3.0μL、约2.5μL至约3.0μL或约1.5μL至约2.5μL。在一些方面，注射体积是约1.5μL至约2.5μL。在一些方面，注射体积是约1.0μL、约1.5μL、约2.0μL、约2.5μL或约3.0μL。在一些方面，注射体积是约2.0μL。
在一些方面，所述LC与MS联机。在一些方面，免疫球蛋白在高效液相色谱柱(HPLC)上分离后直接通过MS分析。在一些方面，所述MS包括飞行时间MS高分辨率仪器。在一些方面，所述MS包括飞行时间MS。在一些方面，所述MS包括激光解析电离(MALDI)MS。在某些方面，所述MS包括MALDI TOF MS。在特定方面，所述MS包括Maxis 4G Q-TOF(a.k.a.UHR)仪器。在一些方面，所述MS不包括MALDI MS。在一些方面，所述MS不包括微流MS。在一些方面，所述Maxis 4G Q-TOF包括标准电喷雾(ESI)Apollo源(Bruker Daltonics，德国汉堡)。在一些方面，将仪器在每次运行之前例如通过注入ESI-L低浓度调谐混合物(AgilentTechnologies，加利福尼亚州)进行校准。在一些方面，每个15分钟运行分段如下：废液段、源段和另外的废液段。在一些方面，每个15分钟运行分段如下：约3min至废液，然后约7min至源，并且最后约5min至废液。
在一些方面，将毛细管电压(即，施加至电喷雾的电压)设置为约4000V至约6000V、约4000V至约5900V、约4000V至约5800V、约4000V至约5700V、4000V至约5600V、4000V至约5500V、4000V至约5400V、4000V至约5300V、4000V至约5200V、4000V至约5100V、4000V至约5000V、4000V至约4900V、4000V至约4800V、4000V至约4700V、约4000V至约4600V、约4000V至约4500V、约4000V至约4400V、约4000V至约4300V、约4000V至约4200V、约4000V至约4100V、约4100V至约5000V、约4200V至约5000V、约4300V至约5000V、约4400V至约5000V、约4500V至约5000V、约4600V至约5000V、约4700V至约5000V、约4800V至约5000V、约4900V至约5000V、约4100V至约4900V、约4200V至约4800V、约4300V至约4700V或约4400V至约4600V。在一些方面，将毛细管电压设置为约4000V、约4100V、约4200V、约4300V、约4400V、约4500V、4600V、约4700V、约4800V、约4900V或约5000V。在一些方面，将毛细管电压设置为约4500V。
在一些方面，将喷雾器(即，将液体转化为细雾的设备)设置为约1.0巴至约2.2巴、约1.0巴至约2.1巴、约1.0巴至约2.0巴、约1.0巴至约1.9巴、约1.0巴至约1.8巴、约1.0巴至约1.7巴、约1.0巴至约1.6巴、约1.0巴至约1.5巴、约1.0巴至约1.4巴、约1.0巴至约1.3巴、约1.0巴至约1.2巴、约1.0巴至约1.1巴、约1.0巴至约2.2巴、约1.1巴至约2.2巴、约1.2巴至约2.2巴、约1.3巴至约2.2巴、约1.4巴至约2.2巴、约1.5巴至约2.2巴、约1.6巴至约2.2巴、约1.7巴至约2.2巴、约1.8巴至约2.2巴、约1.9巴至约2.2巴、约2.0巴至约2.2巴、约2.1巴至约2.2巴、约1.1巴至约2.1巴、约1.2巴至约2.0巴、约1.3巴至约1.9巴、约1.4巴至约1.8巴、约1.5巴至约1.7巴或约1.5巴至约2.0巴。在一些方面，将喷雾器设置为约1.0巴、约1.1巴、约1.2巴、约1.3巴、约1.4巴、约1.5巴、约1.6巴、约1.7巴、约1.8巴、约1.9巴、约2.0巴、约2.1巴或约2.2巴。在一些方面，将喷雾器设置为约1.6巴。
在一些方面，将干燥气体(即，高级别，低湿度气体)设置为约7.5L/min至约9.5L/min、约7.6L/min至约9.5L/min、约7.7L/min至约9.5L/min、约7.8L/min至约9.5L/min、约7.9L/min至约9.5L/min、约8.0L/min至约9.5L/min、约8.1L/min至约9.5L/min、约8.2L/min至约9.5L/min、约8.3L/min至约9.5L/min、约8.4L/min至约9.5L/min、约8.5L/min至约9.5L/min、约8.6L/min至约9.5L/min、约8.7L/min至约9.5L/min、约8.8L/min至约9.5L/min、约8.9L/min至约9.5L/min、约9.0L/min至约9.5L/min、约9.1L/min至约9.5L/min、约9.2L/min至约9.5L/min、约9.3L/min至约9.5L/min、约9.4L/min至约9.5L/min、约7.5L/min至约9.4L/min、约7.5L/min至约9.3L/min、约7.5L/min至约9.2L/min、约7.5L/min至约9.1L/min、约7.5L/min至约9.0L/min、约7.5L/min至约8.9L/min、约7.5L/min至约8.8L/min、约7.5L/min至约8.7L/min、约7.5L/min至约8.6L/min、约7.5L/min至约8.5L/min、约7.5L/min至约8.4L/min、约7.5L/min至约8.3L/min、约7.5L/min至约8.2L/min、约7.5L/min至约8.1L/min、约7.5L/min至约8.0、约7.5L/min至约7.9L/min、约7.5L/min至约7.8L/min、约7.5L/min至约7.7L/min、约7.5L/min至约7.6L/min、约7.6L/min至约9.4L/min、约7.7L/min至约9.3L/min、约7.8L/min至约9.2L/min、约7.9L/min至约9.1L/min、约8.0L/min至约9.0L/min、约8.1L/min至约8.9L/min、约8.2L/min至约8.8L/min、约8.3L/min至约8.7L/min或约8.4L/min至约8.6L/min。在一些方面，将干燥气体设置为约8.0L/min、约8.1L/min、约8.2L/min、约8.3L/min、约8.4L/min、约8.5L/min、约8.6L/min、约8.7L/min、约8.8L/min、约8.9L/min或约9.0L/min。在一些方面，将干燥气体设置为约8.5L/min。
在一些方面，将干燥温度(即，屏蔽辐射和湿度的空气温度)设置为约175℃至约225℃、约180℃至约225℃、约185℃至约225℃、约190℃至约225℃、约195℃至约225℃、约200℃至约225℃、约205℃至约225℃、约210℃至约225℃、约215℃至约225℃、约220℃至约225℃、约175℃至约220℃、约175℃至约215℃、约175℃至约210℃、约175℃至约205℃、约175℃至约200℃、约175℃至约195℃、约175℃至约190℃、约175℃至约185℃、约175℃至约180℃、约180℃至约220℃、约185℃至约215℃、约190℃至约210℃或约195℃至约205℃。在一些方面，将干燥温度设置为约175℃、约180℃、约185℃、约190℃、约195℃、约200℃、约205℃、约210℃、约215℃、约220℃或约225℃。在一些方面，将干燥温度设置为约200℃。
在一些方面，将转移漏斗射频(RF)和/或多极RF参数设置为约350Vpp至约450Vpp、约360Vpp至约450Vpp、约370Vpp至约450Vpp、约380Vpp至约450Vpp、约390Vpp至约450Vpp、约400Vpp至约450Vpp、约410Vpp至约450Vpp、约420Vpp至约450Vpp、约430Vpp至约450Vpp、约440Vpp至约450Vpp、约350Vpp至约440Vpp、约350Vpp至约435Vpp、约350Vpp至约430Vpp、约350Vpp至约420Vpp、约350Vpp至约410Vpp、约350Vpp至约400Vpp、约350Vpp至约390Vpp、约350Vpp至约380Vpp、约350Vpp至约370Vpp、约350Vpp至约360Vpp、约360Vpp至约440Vpp、约370Vpp至约430Vpp、约380Vpp至约420Vpp或约390Vpp至约410Vpp。在一些方面，将转移漏斗RF和/或多极RF参数设置为约350Vpp、约360Vpp、约370Vpp、约380Vpp、约390Vpp、约400Vpp、约410Vpp、约420Vpp、约430Vpp、约440Vpp或约450Vpp。在一些方面，将转移漏斗RF和/或多极RF参数设置为约400Vpp。
在一些方面，施加源内碰撞诱导解离(isCID)能量。在一些方面，不施加isCID能量。isCID是一种用于诱导气相中选定离子的碎片化的质谱技术。所述选定离子(通常是分子离子或质子化分子)通常通过施加电势来加速以增加离子动能，并且然后允许其与中性分子(例如，氦、氮或氩)碰撞。在碰撞中，一些动能转化为内能，这导致键断裂和分子离子碎片化为更小的碎片。
在一些方面，离子冷却器转移时间是约50μs至约150μs、约60μs至约150μs、约70μs至约150μs、约80μs至约150μs、约90μs至约150μs、约100μs至约150μs、约110μs至约150μs、约120μs至约150μs、约130μs至约150μs、约140μs至约150μs、约50μs至约140μs、约50μs至约130μs、约50μs至约120μs、约50μs至约110μs、约50μs至约100μs、约50μs至约90μs、约50μs至约80μs、约50μs至约70μs、约50μs至约60μs、约60μs至约140μs、约70μs至约130μs、约80μs至约120μs或约90μs至约110μs。在一些方面，离子冷却器转移时间是约50μs、约60μs、约70μs、约80μs、约90μs、约100μs、约110μs、约120μs、约130μs、约140μs或约150μs。在一些方面，离子冷却器转移时间是约100μs。离子冷却器转移是一种在分析过程中减慢高能离子的方法。
在一些方面，所述离子冷却器转移具有以下的前脉冲存储：约20μs至约30μs、约21μs至约30μs、约22μs至约30μs、约23μs至约30μs、约24μs至约30μs、约25μs至约30μs、约26μs至约30μs、约27μs至约30μs、约28μs至约30μs、约29μs至约30μs、约20μs至约29μs、约20μs至约28μs、约20μs至约27μs、约20μs至约26μs、约20μs至约25μs、约20μs至约24μs、约20μs至约23μs、约20μs至约22μs、约20μs至约21μs、约21μs至约29μs、约22μs至约28μs、约23μs至约27μs或约24μs至约26μs。在一些方面，所述离子冷却器转移具有以下的前脉冲存储：约20μs、约21μs、约22μs、约23μs、约24μs、约25μs、约26μs、约27μs、约28μs、约29μs或约30μs。在一些方面，所述离子冷却器转移具有约25μs的前脉冲存储。
在一些方面，TOF MS扫描是从m/z 700-2700以约1.0Hz的采集速率采集的。
对于本文公开的方法，可以使用任何ESI Q-TOF质谱仪。这包括但不限于BrukerMaxis、ABSciex TripleTOF 5600/6600、ABSciex X500R、Agilent 6545XT、Waters
Figure BDA0003716116120000221
G2 TOF光谱仪或任何其他型号。
F.治疗方法
本公开文本的一些方面涉及治疗患有浆细胞障碍的受试者的方法。本公开文本的某些方面涉及治疗患有浆细胞障碍的受试者的方法，所述方法包括：使用本文公开的任何方法测量从所述受试者获得的生物样品中的M蛋白，并且向被鉴定为具有M蛋白的受试者施用治疗有效量的特异性结合SLAMF7的抗体或其抗原结合部分(“抗SLAMF7抗体”)。本公开文本的其他方面涉及治疗患有浆细胞障碍的受试者的方法，所述方法包括：(i)向所述受试者施用治疗有效量的抗SLAMF7抗体；(ii)使用本文公开的任何方法测量从所述受试者获得的生物样品中的M蛋白；以及(iii)向所述受试者施用另外的治疗有效量的抗SLAMF7抗体。本公开文本的仍其他方面涉及鉴定适于抗SLAMF7抗体疗法的受试者的方法，所述方法包括使用本文公开的任何方法测量从所述受试者获得的生物样品中的M蛋白。在一些方面，所述方法进一步包括：向被鉴定为具有M蛋白的受试者施用治疗治疗有效量的抗SLAMF7抗体。
特异性结合人SLAMF7的任何抗体或其抗原结合部分均可用于本文公开的方法中。在一些方面，所述抗SLAMF7抗体与艾洛珠单抗交叉竞争与人SLAMF7的结合。在一些方面，所述抗SLAMF7抗体与艾洛珠单抗结合人SLAMF7上的相同表位。在一些方面，所述抗SLAMF7抗体与艾洛珠单抗结合人SLAMF7上的重叠的表位。在一些方面，所述抗SLAMF7抗体是人抗体。在一些方面，所述抗SLAMF7抗体是人源化抗体。在一些方面，所述抗SLAMF7抗体是嵌合抗体。在某些方面，所述抗SLAMF7抗体是艾洛珠单抗。
艾洛珠单抗(也称为BMS-901608和HuLuc63)是针对细胞表面糖蛋白SLAMF7(也称为CS-1)的人源化单克隆IgG1抗体，所述SLAMF7在多发性骨髓瘤中高度且均一地表达(参见美国申请号US 2006/024296、US 2010/168397、US 2009/246852、US 2009/238835、US2012/064067、US 2012/070440、US 2012/064068、US 2012/064083、US 2012/064069、US2014/065063、US 2016/002335、US 2005/025763、US 2009/238827、US 2008/124332、US2011/165154、US 2016/206734、US 2008/152646、US 2014/322201、US 2016/137735、US2017/342150、US 2008/095768、US 2011/206701、US 2013/052158和US 2013/058921；以及PCT申请号WO 2004/100898、WO 2005/102387、WO 2008/019376、WO 2008/019378、WO 2008/019379、WO 2010/051391、WO 2011/053321和WO 2011/053322；将其每一个通过引用以其整体并入本文)。在外周淋巴细胞的存在下，艾洛珠单抗诱导针对原发性多发性骨髓瘤细胞的显著的抗体依赖性细胞毒性(AD CC)(Tai等人,Blood,112:1329-1337(2008))。已知艾洛珠单抗通过NK细胞介导ADC C(van Rhee,F.等人,Mol.Cancer Ther.,8(9):2616-2624(2009))。已经报道了三项研究的结果，其评价了施用单独的此药物(Zonder等人,Blood,120(3):552-559(2012))、与硼替佐米的组合(Jakubowiak等人,J.Clin.Oncol.,30(16):1960-1965(Jun.1,2012))、或与来那度胺和低剂量***的组合(Lonial等人,J.Clin.Oncol.,30:1953-1959(2012)；和Richardson等人,Blood(ASH Annual MeetingAbstracts)116:986(2010))用于治疗患有复发性或难治性多发性骨髓瘤的患者的安全性和功效。所有三种组合均显示出可控的安全性特征和令人鼓舞的活性。例如，一项评价艾洛珠单抗与来那度胺和低剂量***组合用于治疗复发性或难治性多发性骨髓瘤的安全性和功效的I/II期研究显示了对于接受10mg/kg剂量的患者，PFS为33个月且反应率为92％(Lonial等人,J.Clin.Onc ol.,31(2013)(增刊，摘要8542))。在先前未治疗的多发性骨髓瘤患者中来那度胺/***(有或没有艾洛珠单抗)的III期临床试验正在进行中，而被设计为在一线环境中评价这一相同组合的另一项III期试验也正在进行中。
在某些方面，治疗有效量的抗SLAMF7抗体(例如艾洛珠单抗)作为与治疗有效量的另外的治疗剂的组合疗法施用。在一些方面，所述抗SLAMF7抗体(例如，艾洛珠单抗)与所述另外的治疗剂同时施用。在一些方面，所述抗SLAMF7抗体(例如，艾洛珠单抗)在所述另外的治疗剂之前施用。在一些方面，所述抗SLAMF7抗体(例如，艾洛珠单抗)在所述另外的治疗剂之后施用。在一些方面，所述治疗剂是抗癌剂。在一些方面，所述另外的治疗剂选自硼替佐米、来那度胺、泊马度胺、***或其任何组合。在一些方面，所述另外的治疗剂选自硼替佐米、来那度胺、泊马度胺、***或其任何组合。在一些方面，治疗有效量的抗SLAMF7抗体与治疗有效量的硼替佐米组合施用。在一些方面，治疗有效量的抗SLAMF7抗体与治疗有效量的来那度胺组合施用。在一些方面，治疗有效量的抗SLAMF7抗体与治疗有效量的***组合施用。在一些方面，治疗有效量的抗SLAMF7抗体与治疗有效量的硼替佐米和治疗有效量的来那度胺组合施用。在一些方面，治疗有效量的抗SLAMF7抗体与治疗有效量的硼替佐米和治疗有效量的***组合施用。在一些方面，治疗有效量的抗SLAMF7抗体与治疗有效量的来那度胺和治疗有效量的***组合施用。在一些方面，治疗有效量的抗SLAMF7抗体与治疗有效量的硼替佐米、治疗有效量的来那度胺和治疗有效量的***组合施用。
在一些方面，治疗有效量的抗SLAMF7抗体与治疗有效量的苯海拉明组合施用。在一些方面，治疗有效量的抗SLAMF7抗体与治疗有效量的雷尼替丁组合施用。在一些方面，治疗有效量的抗SLAMF7抗体与治疗有效量的醋氨酚组合施用。
在一些方面，治疗有效量的抗SLAMF7抗体与治疗有效量的激动性CD137抗体组合施用(参见US 2016/0264670 A1，将其通过引用以其整体并入本文)。在一些方面，治疗有效量的抗SLAMF7抗体与治疗有效量的乌瑞鲁单抗组合施用。
所述抗SLAMF7抗体可以通过任何途径施用。在一些方面，静脉内、皮下、皮内、腹膜内、肌肉内或以其任何组合施用所述抗SLAMF7抗体。在某些方面，静脉内施用所述抗SLAMF7抗体。
在一些方面，将抗SLAMF7抗体施用至如使用本文公开的任何方法确定的具有M蛋白的受试者。在一些方面，如果所述M蛋白高于M蛋白的阈值水平，则向所述受试者施用抗SLAMF7抗体。在一些方面，所述M蛋白的阈值水平是在从所述受试者获得的血清样品中的至少约1g/L、至少约2g/L、至少约3g/L、至少约4g/L、至少约5g/L、至少约10g/L、至少约15g/L、至少约20g/L、至少约25g/L、至少约30g/L、至少约35g/L、至少约40g/L、至少约45g/L、至少约50g/L的M蛋白。在某些方面，所述M蛋白的阈值水平是在从所述受试者获得的血清样品中的约30g/L的M蛋白。
在一些方面，所述阈值水平指示所述受试者患有某种类型的浆细胞障碍。在一些方面，如果从所述受试者获得的血清样品被确定为具有(如使用本文公开的任何方法测量的)至少约30g/L的M蛋白，则所述受试者被鉴定为患有MM。在一些方面，所述方法进一步包括向被鉴定为患有MM的受试者施用抗SLAMF7抗体。在一些方面，所述方法进一步包括从被鉴定为患有MM的受试者获得骨髓活检。
在一些方面，如果从受试者获得的血清样品被确定为具有(如使用本文公开的任何方法测量的)至少约1g/L至至少约30g/L的M蛋白，则所述受试者被鉴定为有风险患上MM的候选者。在一些方面，如果从受试者获得的血清样品被确定为具有(如使用本文公开的任何方法测量的)至少约5g/L至至少约30g/L的M蛋白，则所述受试者被鉴定为有风险患上MM的候选者。在一些方面，如果从受试者获得的血清样品被确定为具有(如使用本文公开的任何方法测量的)至少约10g/L至至少约30g/L的M蛋白，则所述受试者被鉴定为有风险患上MM的候选者。在一些方面，所述方法进一步包括从被鉴定为有风险患上MM的候选者的受试者获得骨髓活检。在某些方面，进一步分析所述骨髓活检的MM标记物。
将以上引用的所有参考文献以及本文引用的所有参考文献均通过引用以其整体并入本文。
通过说明的方式而不是通过限制的方式，提供以下实施例。
实施例
本发明实施例描述了一种免疫捕获(IC)液相色谱(LC)质谱法(MS)测定，其使用全自动化免疫捕获步骤、分析型流动色谱法和简化的数据提取程序来检测M蛋白。IC-LC-MS测定在检测M蛋白时消除了来自治疗性单克隆抗体的干扰。
材料和方法
1.材料
从人骨髓瘤血浆纯化的免疫球蛋白亚型、缓冲三(2-羧乙基)膦盐酸盐(TCEP)溶液、两性洗涤剂3-12、盐酸、HPLC级乙腈和2-丙醇购自Sigma-Aldrich(美国密苏里州)。单克隆治疗性抗体获自Bristol-Myers Squibb Research and Development。甲酸(SupraPur级)购自EMD Chemicals(美国新泽西州)。ESI-杜氏磷酸盐缓冲盐水获得自LonzaWalkersville,Inc.(美国马里兰州)。含有CaptureSelect LC-λ(Hu)和CaptureSelectκXL树脂的1:1混合物的PhyTip柱由PhyNexus(美国加利福尼亚州)定制。人血清购自Bioreclamation IVT(美国纽约)。
2.血清样品
具有正常多克隆背景的人血清库是通过组合四个正常人血清库制备的。多发性骨髓瘤样品的系列稀释液是从具有先前定量的M蛋白浓度(≥5000.0μg/mL和≤35.0μg/mL)的血清制备的。选择总共五十份多发性骨髓瘤血清样品：三十份样品含有IgG(κ)；十三份样品含有IgG(λ)；并且七份样品含有IgA(四份含有κ轻链，并且三份含有λ轻链)。对于每种选定的M蛋白，通过与正常血清库混合将血清稀释至1000.0μg/mL的M蛋白，然后将1000.0μg/mL样品连续稀释至分析物浓度为500.0、250.0、100.0、50.0、25.0和10.0μg/mL。
3.标准品和质量控制样品
艾洛珠单抗是一种用于治疗多发性骨髓瘤的人源化IgG1单克隆抗体。它是模拟内源性单克隆抗体的良好替代分析物，因为它纯度高、稳定且可大量使用。艾洛珠单抗的储备溶液是通过将合并的人血清添加到含有冻干mAb的药物小瓶中至25mg/mL的终浓度来制备的。筛选了许多合并的人血清，并且将不含任何M加标物的那些合并用于质量控制(QC)制备。艾洛珠单抗和QC样品是通过用合并的空白人血清连续稀释从储备溶液制备的。
4.样品制备
将血清样品、标准品和QC用PBS稀释40倍，并且将110μL的稀释样品用于免疫捕获。将含有CaptureSelect LC-λ(Hu)和CaptureSelectκXL树脂的1:1混合物的定制PhyTip柱用于免疫球蛋白的免疫捕获。这些PhyTip柱在配备有96个通道的Freedom
Figure BDA0003716116120000251
自动化平台(TECAN，美国)上使用。自动化免疫捕获方法包括以下步骤：1)用PBS洗涤吸头的四个循环；2)从稀释的血清中捕获免疫球蛋白的三十二个循环；3)用洗涤缓冲液I(10mM磷酸盐、500mMNaCl和0.1％两性洗涤剂(pH 7.4))、PBS和水洗涤吸头的总共8个循环；4)用含有12mM HCl的100mM NaCl洗脱的10个循环。所述洗脱的样品立即通过以下方法还原：添加100mM缓冲TCEP溶液至20mM的终浓度，然后在25℃下孵育30min。
5.LC-MS
色谱法在Acquity UPLC H-class Bio***(Waters Corporation，马萨诸塞州)上进行。将样品注入C4柱(Acquity Protein BEH C4
Figure BDA0003716116120000252
1.7μm，2.1mmx100mm；WatersCorporation，马萨诸塞州)中，其中将柱温设置为80℃，流动相A含有在水中的0.1％甲酸(FA)，并且流动相B含有在乙腈中的0.1％FA。如下使用梯度分离程序：0-1.0min 10％B；1.1-3.0min 10％-33％B；3.0-10.0min 33％-40％B；10.1-10.5min 40％-90％B；在90％B下保持10.5-13.0min；13.0-15.0min 90％-100％B；并且在15.0min时停止运行。将流速设置为0.3mL/min并且注射体积是2.0μL。
UPLC与具有标准电喷雾(ESI)Apollo源的Maxis 4G Q-TOF仪器(BrukerDaltonics，德国汉堡)联机进行。为确保质量准确度，将仪器在每次运行前通过注入ESI-L低浓度调谐混合物(Agilent Technologies，加利福尼亚州)进行校准。每个15-min运行分段如下：约3min至废液，然后7min至源，并且最后5min至废液。将毛细管电压设置为4500V。将喷雾器设置为1.6巴。将干燥气体设置为8.5L/min。将干燥温度设置为200℃。将转移漏斗RF和多极RF参数设置为400Vpp；没有施加isCID能量。离子冷却器转移时间为100μs，且前脉冲存储为25μs。离子极性为正，滚动平均值被激活并且设置为2。TOF MS扫描是从m/z 700-2700以1.0Hz的采集速率采集的。
6.MS数据分析
将MS数据文件使用Compass DataAnalysis 4.3软件处理。所述方法的详细信息如下：将分析物保留时间(RT)设置为5.6-6.8min，因为所有测试的免疫球蛋白都在此保留窗口中共同洗脱。MS峰光谱提取窗口在800与2400m/z内；禁用用于质谱法的平滑化和基线减法，并且最大熵解卷积范围为从20,000至28,000Da。解卷积光谱的积分类似于色谱峰的积分。Jian等人,8Bioanalysis 1679-1691(2016)。如上所述调整峰发现参数并且计算分析物的峰高。将轻链分子量和光谱峰高导出为mgf文件。单克隆轻链(LC)的随后检测是通过搜索在多克隆背景上是否存在具有预处理单克隆LC的±1.0Da内的分子质量的峰而进行的。将轻链峰高记录为计数。还记录了在多克隆背景中与目的分析物相邻的LC的峰高。为了减去背景并且解释多克隆背景的差异，从分析物的峰高减去相邻轻链的峰高。对于轻链的非定量测量，使用精确的单个轻链保留时间提取质谱。
7.血清蛋白电泳
SPEP和SIFE分析是按照制造商的说明在Helena labs凝胶电泳***(Helenalaboratories，德克萨斯州)上进行的。阴性SIFE被定义为电泳凝胶上不存在明显的条带。
结果和讨论
1.IC-LC-MS测定流程图
所描述的IC-LC-MS测定使用完全自动化免疫捕获步骤和简化的数据提取程序。在TECAN Freedom
Figure BDA0003716116120000261
机器人平台上，使用填充有抗κ/抗λ树脂混合物的Phynexus吸头从血清中纯化免疫球蛋白和游离轻链。纯化步骤后，完整抗体被还原，并且通过LC-MS分析轻链。M蛋白的解卷积峰高的强度可以便利地用于定量分析物。测定流程的总结提供在图1中。
2.LC-MS和数据分析
液相色谱法步骤用于从共纯化的蛋白质中脱盐和分离轻链；然而，每个单独的轻链分析物都没有被分离。定义的色谱图特征是72秒宽：所有测试的人免疫球蛋白轻链都在此保留窗口中洗脱。将每个M蛋白的解卷积光谱峰高的强度用于测量分析物的相对量。图2A-图2I示出了从正常人血清(图2A-图2C)、多发性骨髓瘤患者01(图2D-图2F)和多发性骨髓瘤患者02(图2G-图2I)血清纯化的免疫球蛋白的简化色谱图、质谱和解卷积/重构光谱。总离子色谱图(TIC)表示还原的免疫球蛋白的宽1.2min洗脱峰(图2A、图2D和图2G)。从正常血清中提取的质谱(图2A)示出了范围广泛的不可分辨的峰；而从多发性骨髓瘤血清免疫球蛋白中提取的质谱(图2E和图2H)表示明确定义的多电荷离子。正常人免疫球蛋白的解卷积质谱(图2C)具有多个低强度峰，并且在多克隆背景上没有峰。然而多发性骨髓瘤免疫球蛋白的质谱的解卷积产生了表示每个患者的疾病相关轻链的单个高强度峰(图2F和图2I)。疾病相关轻链的质量是不同的并且表示每个个体的恶性浆细胞过度产生的不同的免疫球蛋白。用于免疫球蛋白纯化的浸出λ/κ纳米抗体的质谱用星号指示。
在当前的生物分析实践中，将多电荷离子加和以定量完整蛋白质。对这些离子进行处理以产生用于定量的提取离子色谱图(XIC)。然而，针对每位患者的M蛋白选择单独m/z离子的方法并不实用。此外，信号强度在广泛带电的离子中被显著稀释，并且从潜在干扰分辨分析物离子变得非常具有挑战性。由于上述原因，将解卷积的轻链峰高用于定量。与使用多电荷离子产生用于定量的XIC相比，“解卷积的峰高”方法被证明更稳健，并且产生更好的灵敏度。
3.免疫球蛋白纯化
为了改善所述方法的分析灵敏度，需要从血清样品纯化免疫球蛋白。由于分析物的多样性，需要与所有人免疫球蛋白具有良好亲和力的通用捕获试剂。存在可用于抗体纯化的若干种常规方法；然而，这些方法中的大多数将只结合特定类别的免疫球蛋白。多发性骨髓瘤M蛋白可以与任何重链或轻链免疫球蛋白类别缔合。因此，寻求将结合所有抗体类别以及游离轻链的捕获试剂以开发一种简单且稳健的测定。在仔细的技术考虑和初步实验后，选择了以1:1比率混合的抗λ/抗κ捕获树脂。对于此应用表现最好的亲和基质是可从ThermoFisher获得的
Figure BDA0003716116120000272
纳米抗体树脂。这种树脂被包装到完全适合自动化的PhyTipsTM中。选定的PhyTipsTM能够装载40μg的λ免疫球蛋白和40μg的κ免疫球蛋白。为了防止吸头过饱和并且捕获所有内源性免疫球蛋白，将血清样品稀释四十倍。使用内源性IgG、IgA和IgM以及治疗性单克隆抗体测试免疫捕获程序：将购自Sigma的九种内源性M蛋白和八种治疗性单克隆抗体用于评价免疫捕获回收率。通过将从人血清纯化的分析物的MS响应(峰高)与从没有加标物的正常人血清纯化的被后加标至多克隆背景中的相应分析物的峰高进行比较来评价免疫捕获回收率。如图3所示，所有测试的抗体的定量回收率始终大于80.0％。
IC-LC-MS测定评价
1.分析物异质性对信号强度的影响
异质分析物的主要问题之一是MS响应变化很大并且取决于分析物的性质，而不仅仅是分析物的浓度。为了探究不同轻链之间的电离差异是否显著，测试以10.0；25.0；50.0；100.0；250.0；500.0和1000.0μg/mL的浓度加标至正常血清中的五种不同的IgGκ治疗性抗体以生成标准解卷积曲线。所有测试的抗体的测定LLOQ是25.0μg/mL，并且LOD是10.0μg/mL。不同分析物之间的MS响应在20％-30％之间变化。考虑到因为分析物和校准物很少相同所以生物标记物浓度通常是相对的，因此这是一个可接受的变化。五种不同的治疗性mAb的解卷积的轻链标准曲线示于图4中。
2.IC-LC-MS测定灵敏度
为了测试IC-LC-MS测定的灵敏度，将三种单独的单克隆抗体(A、B和C)加标至正常人血清中，并且通过免疫捕获IC-LC-HRMS方法进行测试(图5A-图5I)。每种抗体在1000μg/mL(图5A、图5D和图5G)、100μg/mL(图5B、图5E和图5H)和10μg/mL(图5C、图5D和图5I)的浓度下进行测试。为了检测在10μg/mL下的分析物，从对于目的分析物特定的0.2min色谱窗口中提取质谱。在测试的所有浓度下，将所测试的抗体的分子质量与其原始峰质量在±1.0Da以内进行匹配。所有三个峰均具有很低的信噪比，但是由于精确的质量可以以高可信置信度检测到。根据此数据，免疫捕获IC-LC-MS方法的检测LOD的估计限值是临床SPEP测定的1/100，其灵敏度为1000μg/mL。为了实现最大灵敏度，使用如上所述的精确的单独轻链保留时间提取质谱。
为了测试IC-LC-MS测定的检测限，将健康血清用不同的M蛋白加标(图5J-图5M；表1)。对应于IgGK(10mg/L；图5J)、IgGL(5mg/L；图5K)、IgAK(10mg/L；图5L)和IgAL(10mg/L；图5M)的峰在图5J-图5M中由箭头指示。
表1：IC-LC-MS测定-检测限分析
Figure BDA0003716116120000271
3.SIFE和IC-LC-MS测定灵敏度的直接比较
为了比较LC-MS与SIFE测定灵敏度，将五十份多发性骨髓瘤血清连续稀释至1000.0至50.0μg/mL的理论M蛋白浓度。将所有稀释的样品分成两份，并且通过SIFE和IC-LC-MS二者进行分析。SIFE LOD是基于原始样品的浓度和稀释倍数计算的。并且被确定为最后一个原始样品稀释液，其在SIFE凝胶上产生了明显的条带。正如预期的那样，SIFE灵敏度基于分析物而极大地不同，并且发现在250.0-1000.0μg/mL之间。灵敏度略低于文献报道的SIFE灵敏度，这可以通过以下事实来解释：所有多发性骨髓瘤血清均在正常人血清库中稀释，所述正常人血清库的多克隆免疫球蛋白浓度高于多发性骨髓瘤血清。高多克隆背景自然会干扰分析人员在重度染色凝胶上观察明显条带的能力。表示在SIFE可测量的最低连续稀释浓度下通过IC-LC方法测量的MS响应的分布的图示于图6中。估计的IC-LC-MS方法LOD是SIFE LOD的1/10-1/100。
4.解决治疗性抗体干扰
为了证明IC-LC-MS测定可以轻易区分内源性抗体与治疗性抗体，在五十份具有内源性单克隆抗体浓度的多发性骨髓瘤血清中加标200.0μg/mL的艾洛珠单抗，所述浓度相当于此生物药物的药代动力学EC50。在四十九种情况中，内源性抗体可以与艾洛珠单抗区分开。艾洛珠单抗和M蛋白的代表性质量峰示于图7A-图7N中。图7E示出了不含艾洛珠单抗的M蛋白对照。在所有情况下(一种情况除外)均准确地确定了M蛋白轻链的分子质量。确定一种血清具有艾洛珠单抗干扰，因为内源性单克隆抗体分子量与艾洛珠单抗质量峰相距小于2.0Da。在存在艾洛珠单抗峰的情况下的M蛋白质量峰偏移大于1.0Da，表明这是一个真正的干扰情况(数据未显示)。
5.IC-LC-MS分析可以灵敏地监测骨髓瘤疾病并且比标准方法更早地检测到M蛋白的增加
我们研究了当与标准SPEP/SIFE/sFLC测试相比时，IC-LC-MS测定是否能够提供关于多发性骨髓瘤疾病监测的更准确的信息。为了确定对于每位受试者的M蛋白在哪个周期开始持续增加，检查了log10标度中的IC-LC-MS测量和视觉识别的明确拐点。对于具有非常好的部分反应(VGPR)和完全反应(CR)的骨髓瘤患者，IC-LC-MS更灵敏：通过本文公开的新型测定在所测量的所有时间点均可检测到M蛋白。然而，患者1(图8A-图8B)的周期5-29以及患者2(图8E-图8F)的周期8-28中SPEP/SIFE为阴性。IC-LC-MS测定可以比SPEP/SIFE早得多地检测到M蛋白的持续增加。对于患者1，在周期20中或比SPEP早10个周期检测到持续增加(比较图8C与图8A)。对于患者2，在周期16中或比SPEP早13个周期检测到持续增加(比较图8G与图8E)。
图9A-9F示出了受试者中对于选定时间点的IC-LC-MS曲线，其中由于所述测定的出色特异性，因此M蛋白通过IC-LC-MS峰分析算法在所有时间点上被检测到。M蛋白轻链质量特征可以在基线样品中被轻松识别，并且然后在顺序样品中遵循。这种方法允许M蛋白在多克隆背景上的非常具有特异性的追踪。
本文公开的所有出版物、专利和专利申请均通过引用并入，其程度就如同已特定地和个别地指示将每个单独的出版物、专利或专利申请通过引用并入一样。

Claims (48)

1.一种测量从患有浆细胞障碍的受试者获得的样品中的M蛋白的方法，所述方法包括：
(i)通过免疫捕获纯化所述样品中的免疫球蛋白和游离轻链，以及
(ii)将所述免疫球蛋白和游离轻链施加至液相色谱(LC)质谱法(MS)。
2.一种在用于浆细胞障碍的疗法后在确定完全反应者时减少假阳性的方法，所述方法包括：
(i)通过免疫捕获纯化所述生物样品中的免疫球蛋白和游离轻链，以及
(ii)将所述纯化的免疫球蛋白和游离轻链施加至液相色谱(LC)质谱法(MS)。
3.一种鉴定患有残留病的受试者的方法，所述方法包括测量从所述受试者获得的生物样品中的M蛋白，其中所述M蛋白通过以下方式测量：
(1)通过免疫捕获纯化所述生物样品中的免疫球蛋白和游离轻链，以及
(2)将所述纯化的免疫球蛋白和游离轻链施加至液相色谱(LC)质谱法(MS)；
其中所述受试者先前被鉴定为患有浆细胞障碍。
4.一种鉴定适于用于治疗浆细胞障碍的疗法的受试者的方法，所述方法包括：
(i)测量从所述受试者获得的生物样品中的M蛋白，其中所述M蛋白通过以下方式测量：
(1)通过免疫捕获纯化所述生物样品中的免疫球蛋白和游离轻链，以及
(2)将所述纯化的免疫球蛋白和游离轻链施加至液相色谱(LC)质谱法(MS)。
5.根据权利要求3或4所述的方法，所述方法进一步包括：
(ii)向被鉴定为具有M蛋白的受试者施用用于治疗所述浆细胞障碍的疗法。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述受试者患有浆细胞障碍。
7.一种治疗患有浆细胞障碍的受试者的方法，所述方法包括：
(i)测量从所述受试者获得的生物样品中的M蛋白，其中所述M蛋白通过以下方式测量：
(1)通过免疫捕获纯化所述生物样品中的免疫球蛋白和游离轻链，以及
(2)将所述纯化的免疫球蛋白和游离轻链施加至液相色谱(LC)质谱法(MS)；以及
(ii)向被鉴定为具有M蛋白的受试者施用用于所述浆细胞障碍的疗法。
8.一种治疗患有浆细胞障碍的受试者的方法，所述方法包括：
(i)向所述受试者施用用于所述浆细胞障碍的疗法；
(ii)测量从所述受试者获得的生物样品中的M蛋白，其中所述M蛋白通过以下方式测量：
(1)通过免疫捕获纯化所述生物样品中的免疫球蛋白和游离轻链，以及
(2)将所述纯化的免疫球蛋白和游离轻链施加至液相色谱(LC)质谱法(MS)；以及
(iii)向所述受试者施用用于所述浆细胞障碍的另外的疗法。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述生物样品是尿液样品或血清样品。
10.一种治疗患有浆细胞障碍的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用用于所述浆细胞障碍的疗法，其中所述受试者已经被鉴定为具有血清和/或尿液M蛋白，并且其中所述血清和/或尿液M蛋白是通过将使用免疫捕获纯化的免疫球蛋白和游离轻链施加至液相色谱(LC)质谱法(MS)在从所述受试者获得的生物样品中测量的。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述受试者接受用于治疗浆细胞障碍的先前疗法。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述先前疗法包括免疫疗法。
13.根据权利要求2、4至8和10至12中任一项所述的方法，其中所述用于浆细胞障碍的疗法包括免疫疗法。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述免疫疗法包括抗体疗法。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述免疫疗法包括检查点抑制剂的疗法。
16.根据权利要求14所述的方法，其中所述抗体包括特异性结合选自以下的蛋白质的抗体或其抗原结合部分：SLAMF7、PD-1、CTLA-4、LAG3、TIGIT、TIM3、NKG2a、OX40、ICOS、CD137、KIR、TGFβ、IL-10、IL-8、IL-2、CD96、VISTA、B7-H4、Fas配体、CXCR4、间皮素、CD27、GITR、CD40、CD56、CD38、CD229、CD200、CD28、CD19、BCMA、CD317、CD70、B2M及其任何组合。
17.根据权利要求2、4至8和10至12中任一项所述的方法，其中所述用于浆细胞障碍的疗法包括抗SLAMF7抗体。
18.根据权利要求2、4至8和10至12中任一项所述的方法，其中所述用于浆细胞障碍的疗法包括环磷酰胺、多柔比星、依托泊苷、脂质体多柔比星、美法仑、长春新碱、硼替佐米、来那度胺、卡非佐米、泊马度胺、帕比司他、沙利度胺、干细胞移植、CAR-T疗法或其任何组合。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的方法，其中所述M蛋白包括IgG、IgA、和IgM、IgD、其片段或其任何组合。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的方法，其中所述M蛋白包括κ同种型或λ同种型。
21.根据权利要求1至20中任一项所述的方法，其中所述M蛋白包含一条或多条游离轻链。
22.根据权利要求1至21中任一项所述的方法，其中所述MS包括电喷雾(ESI)飞行时间(TOF)MS。
23.根据权利要求1至22中任一项所述的方法，其中所述MS包括激光解析电离(MALDI)TOF。
24.根据权利要求1至23中任一项所述的方法，其中所述MS包括MALDI TOF MS。
25.根据权利要求1至23中任一项所述的方法，其中所述免疫捕获是自动化免疫捕获。
26.根据权利要求1至25中任一项所述的方法，其中所述纯化的免疫球蛋白被解离为轻链和重链。
27.根据权利要求1至25中任一项所述的方法，所述方法进一步包括将所述纯化的免疫球蛋白解离为轻链和重链。
28.根据权利要求26或27所述的方法，其中所述纯化的免疫球蛋白通过化学还原解离。
29.根据权利要求26至28中任一项所述的方法，其中所述纯化的免疫球蛋白是通过使所述纯化的免疫球蛋白与选自以下的试剂接触来解离：三(2-羧乙基)膦(TCEP)；TCEP-HCl和其他TCEP盐；DTT(2,3二羟基丁烷-1,4-二硫醇)、DTE(2,3二羟基丁烷-1,4-二硫醇)；巯基乙醇酸盐；亚硫酸盐；亚硫酸氢盐；硫化物；二硫化物；2-巯基乙醇；2-巯基乙醇-HCl；Bond-Breaker TCEP溶液，中性pH；半胱氨酸-HCl；胍-HCl；尿素；及其任何组合。
30.根据权利要求1至29中任一项所述的方法，其中所述LC是超高效(UC)LC。
31.根据权利要求1至29中任一项所述的方法，其中所述LC与所述MS联机。
32.根据权利要求1至31中任一项所述的方法，其中所述浆细胞障碍包括多发性骨髓瘤。
33.根据权利要求32所述的方法，其中所述多发性骨髓瘤包括轻链多发性骨髓瘤。
34.根据权利要求32或33所述的方法，其中所述多发性骨髓瘤包括浆细胞白血病。
35.根据权利要求34所述的方法，其中所述浆细胞白血病包括原发性浆细胞白血病或继发性浆细胞白血病。
36.根据权利要求17至35中任一项所述的方法，其中所述抗SLAMF7抗体与艾洛珠单抗交叉竞争与人SLAMF7的结合。
37.根据权利要求17至36中任一项所述的方法，其中所述抗SLAMF7抗体与艾洛珠单抗结合人SLAMF7上的相同或重叠的表位。
38.根据权利要求17至37中任一项所述的方法，其中所述抗SLAMF7抗体是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。
39.根据权利要求17至38中任一项所述的方法，其中所述抗SLAMF7抗体是艾洛珠单抗。
40.根据权利要求17至39中任一项所述的方法，其中静脉内施用所述抗SLAMF7抗体。
41.根据权利要求1至40中任一项所述的方法，所述方法进一步包括向所述受试者施用另外的抗癌剂。
42.根据权利要求1至41中任一项所述的方法，所述方法进一步包括向所述受试者施用来那度胺。
43.根据权利要求1至42中任一项所述的方法，所述方法进一步包括向所述受试者施用泊马度胺。
44.根据权利要求1至43中任一项所述的方法，所述方法进一步包括向所述受试者施用***。
45.根据权利要求1至44中任一项所述的方法，所述方法进一步包括向所述受试者施用苯海拉明。
46.根据权利要求1至45中任一项所述的方法，所述方法进一步包括向所述受试者施用雷尼替丁。
47.根据权利要求1和2至42中任一项所述的方法，所述方法进一步包括向所述受试者施用醋氨酚。
48.根据权利要求3、5、9和11至47中任一项所述的方法，其中所述残留病包括微小残留病(MRD)。
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