KR20220092578A - M-단백질 검정 및 이의 용도 - Google Patents

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라사 산톡키테
지아닝 젱
오스카 푸이그
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브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니
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Abstract

본 개시내용은 정제된 면역글로불린을 액체 크로마토그래피 (LC) 질량 분광측정 (MS)에 적용하는 단계를 포함하는, 대상체로부터 수득된 생물학적 샘플에서 M-단백질을 측정하는 방법을 제공한다. 일부 측면에서, 면역글로불린은 면역포획 (IC)을 이용하여 정제된다. 특정 측면에서, 대상체는 형질 세포 장애, 예컨대 다발성 골수종을 갖는다.

Description

M-단백질 검정 및 이의 용도
관련 출원에 대한 상호 참조
본 PCT 출원은 2019년 11월 5일에 출원된 미국 가출원 번호 62/931,063의 우선권 이익을 주장하며, 이는 전체가 참조로 본원에 포함된다.
본 개시내용의 분야
본 개시내용은 생물학적 샘플에서 M-단백질을 측정하는 방법을 제공한다.
모노클로날 감마병증은 일반적으로 M-단백질로 공지된 하나 이상의 모노클로날 면역글로불린의 비정상적인 생성을 특징으로 하는 혈액학적 장애이다. M-단백질은 골수에서 클론 형질 세포를 빠르게 분열시킴으로써 발현되고 혈류로 분비되므로 혈청 내 M-단백질을 측정함으로써 악성 형질 세포를 검출할 수 있다. M-단백질은 본질적으로 다양하다: 각각의 환자의 과생성된 항체의 가변 영역은 상이하지만; 개별 악성 형질 세포는 원래의 전구체 세포와 동일한 분자 질량을 갖는 정의된 면역글로불린을 발현한다.
M-단백질의 측정은 다발성 골수종 환자의 진단 및 모니터링에 필요하다. 현재의 겔 전기영동-기반 M-단백질 검정은 민감성, 특이성이 낮고, M-단백질과 함께 이동하는 면역글로불린 또는 다른 혈청 단백질의 존재로 인해 매우 낮은 M-단백질 농도에서 정량적이지 않다. 따라서, 생물학적 샘플에서 M-단백질을 측정하기 위한 개선된 방법이 필요하다.
본 개시내용의 특정 측면은 형질 세포 장애를 갖는 대상체로부터 수득된 샘플에서 M-단백질을 측정하는 방법에 관한 것이며, (i) 샘플 중의 면역글로불린 및 유리 경쇄를 면역포획에 의해 정제하는 단계, 및 (ii) 면역글로불린 및 유리 경쇄를 액체 크로마토그래피 (LC) 질량 분광측정 (MS)에 적용하는 단계를 포함한다.
본 개시내용의 특정 측면은 형질 세포 장애에 대한 요법 후 완전 반응자의 결정에서 위양성을 감소시키는 방법에 관한 것이며, (i) 생물학적 샘플 중의 면역글로불린 및 유리 경쇄를 면역포획에 의해 정제하는 단계, 및 (ii) 정제된 면역글로불린 및 유리 경쇄를 액체 크로마토그래피 (LC) 질량 분광측정 (MS)에 적용하는 단계를 포함한다.
본 개시내용의 특정 측면은 잔류 질환을 갖는 대상체를 확인하는 방법에 관한 것이며, 대상체로부터 수득된 생물학적 샘플에서 M-단백질을 측정하는 단계를 포함하고, 여기서 M-단백질은 (1) 생물학적 샘플 중의 면역글로불린 및 유리 경쇄를 면역포획에 의해 정제하고, (2) 정제된 면역글로불린 및 유리 경쇄를 액체 크로마토그래피 (LC) 질량 분광측정 (MS)에 적용함으로써 측정되고; 여기서 대상체는 이전에 형질 세포 장애를 갖는 것으로 확인되었다.
본 개시내용의 특정 측면은 형질 세포 장애를 치료하기 위한 요법에 적합한 대상체를 확인하는 방법에 관한 것이며, (i) 대상체로부터 수득된 생물학적 샘플에서 M-단백질을 측정하는 단계를 포함하고, 여기서 M-단백질은 (1) 생물학적 샘플 중의 면역글로불린 및 유리 경쇄를 면역포획에 의해 정제하고, (2) 정제된 면역글로불린 및 유리 경쇄를 액체 크로마토그래피 (LC) 질량 분광측정 (MS)에 적용함으로써 측정된다. 일부 측면에서, 방법은 (ii) M-단백질을 갖는 것으로 확인된 대상체에게 형질 세포 장애를 치료하기 위한 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 측면에서, 대상체는 형질 세포 장애를 갖는다.
본 개시내용의 특정 측면은 형질 세포 장애를 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이며, 대상체로부터 수득된 생물학적 샘플에서 M-단백질을 측정하는 단계이며, 여기서 M-단백질은 (1) 생물학적 샘플 중의 면역글로불린 및 유리 경쇄를 면역포획에 의해 정제하고, (2) 정제된 면역글로불린 및 유리 경쇄를 액체 크로마토그래피 (LC) 질량 분광측정 (MS)에 적용함으로써 측정되는 것인 단계; 및 M-단백질을 갖는 것으로 확인된 대상체에게 형질 세포 장애에 대한 요법을 투여하는 단계를 포함한다.
본 개시내용의 특정 측면은 형질 세포 장애를 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이며, (i) 대상체에게 형질 세포 장애에 대한 요법을 투여하는 단계; (ii) 대상체로부터 수득된 생물학적 샘플에서 M-단백질을 측정하는 단계이며, 여기서 M-단백질은 (1) 생물학적 샘플 중의 면역글로불린 및 유리 경쇄를 면역포획에 의해 정제하고, (2) 정제된 면역글로불린 및 유리 경쇄를 액체 크로마토그래피 (LC) 질량 분광측정 (MS)에 적용함으로써 측정되는 것인 단계; 및 (iii) 대상체에게 형질 세포 장애에 대한 추가 요법을 투여하는 단계를 포함한다.
일부 측면에서, 생물학적 샘플은 소변 샘플 또는 혈청 샘플이다.
본 개시내용의 특정 측면은 형질 세포 장애를 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이며, 대상체에게 형질 세포 장애에 대한 요법을 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 대상체는 혈청 및 또는 소변 M-단백질을 갖는 것으로 확인되었고, 여기서 혈청 및/또는 소변 M-단백질은 면역포획을 이용하여 정제된 면역글로불린 및 유리 경쇄를 액체 크로마토그래피 (LC) 질량 분광측정 (MS)에 적용함으로써 대상체로부터 수득된 생물학적 샘플에서 측정되었다.
일부 측면에서, 대상체는 형질 세포 장애를 치료하기 위해 이전 요법을 받았다. 일부 측면에서, 이전 요법은 면역요법을 포함한다. 일부 측면에서, 형질 세포 장애에 대한 요법은 면역요법을 포함한다. 일부 측면에서, 면역요법은 항체 요법을 포함한다. 일부 측면에서, 면역요법은 체크포인트 억제제의 요법을 포함한다. 일부 측면에서, 항체는 SLAMF7, PD-1, CTLA-4, LAG3, TIGIT, TIM3, NKG2a, OX40, ICOS, CD137, KIR, TGFβ, IL-10, IL-8, IL-2, CD96, VISTA, B7-H4, Fas 리간드, CXCR4, 메소텔린, CD27, GITR, CD40, CD56, CD38, CD229, CD200, CD28, CD19, BCMA, CD317, CD70, B2M 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함한다. 일부 측면에서, 형질 세포 장애에 대한 요법은 항-SLAMF7 항체를 포함한다.
일부 측면에서, 형질 세포 장애에 대한 요법은 사이클로포스파미드, 독소루비신, 에토포시드, 리포솜 독소루비신, 멜팔란, 빈크리스틴, 보르테조밉, 레날리도마이드, 카르필조밉, 포말리도마이드, 파노비노스타트, 탈리도마이드, 줄기 세포 이식, CAR-T 요법, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
일부 측면에서, M-단백질은 IgG, IgA, 및 IgM, IgD, 이들의 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 일부 측면에서, M-단백질은 카파 이소형 또는 람다 이소형을 포함한다. 일부 측면에서, M-단백질은 하나 이상의 유리 경쇄를 포함한다.
일부 측면에서, MS는 전기분무 (ESI) 비행 시간 (TOF) MS를 포함한다. 일부 측면에서, MS는 레이저 탈착 이온화 (MALDI) TOF를 포함한다. 일부 측면에서, MS는 MALDI TOF MS를 포함한다.
일부 측면에서, 면역포획은 자동화된 면역포획이다. 일부 측면에서, 정제된 면역글로불린은 경쇄 및 중쇄로 해리된다. 일부 측면에서, 방법은 정제된 면역글로불린을 경쇄 및 중쇄로 해리시키는 단계를 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 정제된 면역글로불린은 화학적 환원에 의해 해리된다. 일부 측면에서, 정제된 면역글로불린은 이를 트리스 (2-카르복시에틸)포스핀 (TCEP); TCEP-HCl 및 다른 TCEP 염; DTT (2,3 디히드록시부탄-1,4-디티올), DTE (2,3 디히드록시부탄-1,4-디티올); 티오글리콜레이트; 술파이트; 비술파이트; 술파이드; 비술파이드; 2-메르캅토에탄올; 2-메르캅토에탄올-HCl; 결합-브레이커 TCEP 용액, 중성 pH; 시스테인-HCl; 구아니딘-HCl; 우레아; 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 시약과 접촉시킴으로써 해리된다.
일부 측면에서, LC는 초고성능 (UC) LC이다. 일부 측면에서, LC는 MS와 온-라인이다.
일부 측면에서, 형질 세포 장애는 다발성 골수종을 포함한다. 일부 측면에서, 다발성 골수종은 경쇄 다발성 골수종을 포함한다. 일부 측면에서, 다발성 골수종은 형질 세포 백혈병을 포함한다. 일부 측면에서, 형질 세포 백혈병은 1차 형질 세포 백혈병 또는 2차 형질 세포 백혈병을 포함한다.
일부 측면에서, 항-SLAMF7 항체는 인간 SLAMF7에 대한 결합에 대해 엘로투주맙과 교차-경쟁한다. 일부 측면에서, 항-SLAMF7 항체는 엘로투주맙과 동일하거나 중첩되는 인간 SLAMF7 상의 에피토프에 결합한다. 일부 측면에서, 항-SLAMF7 항체는 인간 항체, 인간화 항체, 또는 키메라 항체이다. 일부 측면에서, 항-SLAMF7 항체는 엘로투주맙이다. 일부 측면에서, 항-SLAMF7 항체는 정맥내 투여된다.
일부 측면에서, 방법은 추가의 항암제를 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 방법은 레날리도마이드를 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 방법은 포말리도마이드를 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 방법은 덱사메타손을 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 방법은 디펜히드라민을 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 방법은 라니티딘을 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 방법은 아세트아미노펜을 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 측면에서, 잔류 질환은 최소 잔류 질환 (MRD)을 포함한다.
도 1은 인간으로부터 수득된 생물학적 샘플에서 M-단백질을 측정하기 위한 면역포획 (IC) 액체 크로마토그래피 (LC) 질량 분광측정 (MS) 방법론을 예시하는 순서도이다.
도 2a-2i는 정상적인 인간 혈청으로부터 면역포획된 면역글로불린 (도 2a-2c); 1차 다발성 골수종 환자 혈청으로부터 수득된 혈청 샘플로부터 면역포획된 면역글로불린 (도 2d-2f); 및 2차 다발성 골수종 환자로부터 수득된 혈청 샘플로부터 면역포획된 면역글로불린 (도 2g-2i)에 대한 액체 크로마토그래피 (도 2a, 2d, 및 2g), 대표적인 질량 스펙트럼 (도 2b, 2e, 및 2h), 및 재구성된 스펙트럼 (도 2c, 2f, 및 2i)에 의한 면역글로불린의 단순화된 분리 결과를 나타내는 그래프 표현이다.
도 3은 피팁(PHYTIP)TM 항-람다/카파 포획 접근법을 이용한 M-단백질 및 모노클로날 치료 항체 (t-mAb)의 일관된 고수율 회수율의 그래프 표현이다.
도 4는 나타낸 바와 같이 5개의 동일하지 않은 치료 mAb (t-mAb)에 대한 디컨볼루션된 경쇄 표준 곡선의 그래프를 나타낸다.
도 5a-5i는 폴리클로날 배경을 초과하는 단일 모노클로날 항체 경쇄의 저수준 정량화를 나타낸다. 3개의 개별 모노클로날 항체를 정상적인 인간 혈청에 스파이킹하고, 면역포획 IC-LC-MS 방법론을 이용하여 시험하였다. mAb1에 대한 결과는 도 5a-5c에 제시되고, mAb2에 대한 결과는 도 5d-5f에 제시되고, mAb3에 대한 결과는 도 5g-5i에 제시된다. 각각의 항체는 1000 μg/mL (도 5a, 5d, 및 5g), 100 μg/mL (도 5b, 5e, 및 5h), 및 10 μg/mL (도 5c, 5f, 및 5i)의 농도에서 시험되었다. 면역포획 IC-LC-HRMS 방법론에 대한 추정된 LOD는 1000 μg/mL의 민감도를 갖는 임상 SPEP 검정의 LOD보다 100배 낮다. 도 5j-5m은 건강한 혈청에 상이한 M-단백질을 스파이킹하여 구성된 인공 샘플에서 IC-LC-MS에 대한 검출 한계를 나타낸다 (IgGK, 도 5j; IgGL, 도 5k; IgAK, 도 5l; 및 IgAL, 도 5m). 검출 한계는 M-단백질 피크 대 폴리클로날 배경의 비율에 따라 다르다.
도 6은 SIFE에 의해 측정 가능한 최저 연속 희석 농도에서 IC-LC-MS 방법에 의해 측정된 M-단백질 MS 반응의 분포를 나타내는 플롯이다. 추정된 IC-LC-MS 방법 LOD는 SIFE LOD보다 10-100배 낮다.
도 7a-7n은 IC-LC-MS 방법 검정이 M-단백질을 검출할 때 치료 모노클로날 항체로부터의 간섭을 제거한다는 것을 나타내는 대표적인 질량 스펙트럼이다.
도 8a-8h는 IC-LC-MS 검정 (도 8c 및 8g)과 비교하여 표준 임상 시험 (SPEP, 도 8a 및 8e; SIFE, 도 8b 및 8f; 및 sFLC, 도 8d 및 8h)의 민감도를 나타내는 그래프 표현이다. 상이한 치료 주기 (1주기는 28일임)에서 2명의 다발성 골수종 환자 (환자 1, 도 8a-8d; 환자 2, 도 8e-8h)로부터 수집된 혈청 샘플을 이 분석에 사용하였다.
도 9a-9f는 다발성 골수종 환자로부터의 혈청 샘플에서 C1D1 (도 9a), C18D1 (도 9b), C8D1 (도 9c), C26D1 (도 9d), C15D1 (도 9e), 및 C31D1 (도 9f)에 대한 IC-LC-MS 검정에 의한 면역글로불린 프로파일의 그래프 표현이며, 이는 모든 치료 시점에서 22470 ± 1.5 Da에서 검출 가능한 모노클로날 경쇄 피크를 나타낸다.
본 개시내용은 대상체로부터 수득된 샘플에서 M-단백질을 측정하는 방법을 제공한다. 본 개시내용은 또한 대상체로부터 수득된 샘플에서 M-단백질을 측정하는 단계를 포함하는, 형질 세포 장애에 대한 요법에 적합한 대상체를 확인하는 방법을 제공한다. 일부 측면에서, M-단백질은 샘플 중의 면역글로불린 및/또는 유리 경쇄를 정제하고 정제된 면역글로불린 및 유리 경쇄를 액체 크로마토그래피 (LC) 질량 분광측정 (MS)에 적용함으로써 측정된다. 일부 측면에서, 면역글로불린 및/또는 유리 경쇄는 면역포획을 이용하여 정제된다. 일부 측면에서, 방법은 형질 세포 장애에 대한 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 방법은 형질 세포 장애를 치료하는데 유용한 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 예컨대 인간 SLAMF7에 특이적으로 결합하는 항체 (항-SLAMF7 항체)를 대상체에 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
I. 용어
본 개시내용을 보다 쉽게 이해할 수 있도록 먼저 특정 용어를 정의한다. 본 출원에 사용된 바와 같이, 본원에 달리 명시적으로 제공된 경우를 제외하고, 하기 용어 각각은 하기에 설명된 의미를 갖는다. 추가 정의는 본 출원 전체에 걸쳐 설명된다.
본원에 사용된 용어 "M-단백질"은 대상체에서 모노클로날 감마병증, 예컨대 다발성 골수종에 의한 하나 이상의 모노클로날 면역글로불린의 비정상적인 생성의 결과인 면역글로불린의 다양한 그룹을 지칭한다. M-단백질은 골수에서 클론 형질 세포를 빠르게 분열시킴으로써 발현되고 혈류로 분비된다. M-단백질은 본질적으로 다양하다: 각각의 환자의 과생성된 항체의 가변 영역은 상이하지만; 개별 악성 형질 세포는 원래의 전구체 세포와 동일한 분자 질량을 갖는 정의된 면역글로불린을 발현한다. 중쇄의 불변 영역을 기준으로 하여, M-단백질은 IgG, IgA, IgM 또는 IgD 부류에 속할 수 있다. 다발성 골수종에서, IgG는 가장 흔한 면역글로불린이며, IgA가 두 번째로 흔하고, IgM은 단지 0.5% 미만의 사례를 포함하고, IgD는 극히 드물다. 경쇄의 불변 영역을 기준으로 하여, 각각의 면역글로불린은 카파 및 람다 이소형으로 나뉠 수 있다. 각각의 M-단백질은 온전한 면역글로불린 분자 및/또는 벤스 존스 (Bence Jones) 단백질로도 공지된 "유리 경쇄" (FLC)와 같은 면역글로불린 단편으로 본질적으로 이루어지거나 이로 이루어질 수 있다. "유리 경쇄"는 중쇄와 회합되지 않은 면역글로불린의 경쇄를 지칭한다. 소변 또는 혈청에서 유리 경쇄의 존재는 다발성 골수종의 여러 마커 중 하나이다. 유리 경쇄는 소변에서 저분자량 단량체, 이량체 또는 고분자량 중합체로 존재할 수 있고 혈청에서 사량체로 존재할 수 있다.
M-단백질은 전형적으로 혈류로 분비되기 때문에, 악성 형질 세포는 혈청에서 M-단백질을 측정함으로써 검출될 수 있다. 용어 "측정하는" 또는 "측정된" 또는 "측정"은 대상체로부터 수득된 생물학적 샘플에서 M-단백질의 측정 가능한 양을 결정하는 것을 의미한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 측정은 질량 분광측정 단계를 포함하는 방법을 이용하여 달성된다. 질량 분광측정은 샘플에 존재하는 하나 이상의 분자의 질량 대 전하 비율 (m/z)을 측정하는데 유용한 분석 도구이다. 이들 측정은 종종 샘플 성분의 정확한 분자량을 계산하는 데에도 이용될 수 있다. 전형적으로, 질량 분광측정기는 분자량 결정을 통해 미지의 화합물을 확인하고 공지된 화합물을 정량화하며 분자의 구조 및 화학적 특성을 결정하는데 사용될 수 있다. 본원에 개시된 방법에서, 정제 및 환원된 면역글로불린을 질량 분광측정기에 적용하여 생물학적 샘플에서 M-단백질을 확인하는 능력을 증가시킨다.
본원에 사용된 용어 "생물학적 샘플"은 대상체로부터 단리된 생물학적 물질을 지칭한다. 생물학적 샘플은 M-단백질을 포함할 수 있는 임의의 생물학적 물질을 함유할 수 있다. 생물학적 샘플은, 예컨대 혈액, 혈장, 혈청, 골수 생검 및/또는 소변과 같은 임의의 적합한 생물학적 조직 또는 유체일 수 있다. 한 측면에서, 샘플은 혈청 샘플이다. 한 측면에서, 샘플은 소변 샘플이다. 한 측면에서, 샘플은 골수 생검이다.
본원에 사용된 "모노클로날 감마병증"은 하나 이상의 M-단백질의 생성을 특징으로 하는 일 유형의 혈액학적 장애를 지칭한다. 모노클로날 감마병증은 미결정된 의미의 모노클로날 감마병증과 같은 양성으로부터 다발성 골수종과 같은 암에 이르기까지 다양하다.
본원에 사용된 "형질 세포 장애"는 전악성 또는 악성 형질 세포의 클론 또는 다중 클론 (때때로 림프형질세포양 세포 또는 B 림프구와 관련됨)이 M-단백질을 과생성하고 혈류로 분비하는 점진적으로 더 심각한 모노클로날 감마병증의 스펙트럼을 지칭한다. 형질 세포 장애의 비배타적 예는 다발성 골수종, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 및 다른 B 세포-관련된 신생물을 포함한 미결정된 의미의 모노클로날 감마병증 (MGUS) 및 혈액학적 악성종양을 포함한다.
본원에 사용된 "다발성 골수종" 또는 "형질 세포 골수종"은 형질 세포의 암을 지칭한다. 형질 세포는 항체를 생성하는 백혈구의 일 부류이다. 다발성 골수종은 골수에 암 세포가 축적되는 것과 더 관련이 있다. 암 세포는 비정상적인 모노클로날 항체 (M-단백질)를 생성한다.
"투여하는"은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 임의의 공지된 임의의 다양한 방법 및 전달 시스템을 사용하여 대상체에게 치료제를 포함하는 조성물을 물리적으로 도입하는 것을 지칭한다. 투여 경로의 비제한적 예는 정맥내, 근육내, 피하, 복강내, 척추 또는 다른 비경구 투여 경로, 예컨대 주사 또는 주입을 포함한다. 본원에 사용된 어구 "비경구 투여"는 일반적으로 주사에 의한 장내 및 국소 투여 이외의 투여 방식을 의미하며, 제한 없이, 정맥내, 근육내, 동맥내, 경막내, 림프내, 병변내, 피막내, 안와내, 심장내, 피내, 복강내, 경기관, 피하, 표피하, 관절내, 피막하, 지주막하, 척수내, 경막외 및 흉골내 주사 및 주입 뿐만 아니라 생체내 전기천공을 포함한다. 다른 비-비경구 경로는 경구, 국소, 표피 또는 점막 투여 경로, 예컨대 비강내, 질내, 직장, 설하 또는 국소 투여를 포함한다. 투여는 또한, 예컨대 1회, 다수회 및/또는 1회 이상의 연장된 기간에 걸쳐 수행될 수 있다.
본원에 사용된 "유해 사례" (AE)는 의학적 치료의 사용과 관련된 임의의 불리하고 일반적으로 의도하지 않거나 바람직하지 않은 징후 (비정상적인 실험실 소견 포함), 증상 또는 질환이다. 예컨대, 유해 사례는 치료에 대한 반응으로 면역계의 활성화 또는 면역계 세포 (예컨대, T 세포)의 확장과 관련될 수 있다. 의학적 치료는 하나 이상의 관련된 AE를 가질 수 있고, 각각의 AE는 동일하거나 상이한 수준의 중증도를 가질 수 있다. "유해 사례를 변경"할 수 있는 방법에 대한 언급은 상이한 치료 요법의 사용과 관련된 하나 이상의 AE의 발생률 및/또는 중증도를 감소시키는 치료 요법을 의미한다.
"항체" (Ab) 또는 "면역글로불린"은, 제한 없이, 항원에 특이적으로 결합하고 디술파이드 결합에 의해 상호연결된 적어도 2개의 중쇄 (H) 및 2개의 경쇄 (L)를 포함하는 당단백질 면역글로불린, 또는 이의 항원-결합 부분을 포함한다. 각각의 H쇄는 중쇄 가변 영역 (본원에서 V H 로 약칭됨) 및 중쇄 불변 영역을 포함한다. 중쇄 불변 영역은 3개의 불변 도메인 C H 1, C H 2 및 C H 3을 포함한다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역 (본원에서 V L 로 약칭됨) 및 경쇄 불변 영역을 포함한다. 경쇄 불변 영역은 하나의 불변 도메인 C L 을 포함한다. V H 및 V L 영역은 프레임워크 영역 (FR)으로 불리는 보다 보존된 영역이 산재되어 있는 상보성 결정 영역 (CDR)으로 불리는 초가변성 영역으로 더 세분화될 수 있다. 각각의 V H 및 V L 은 3개의 CDR 및 4개의 FR을 포함하며, 아미노-말단으로부터 카르복시-말단으로 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4의 순서로 배열된다. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 함유한다. 항체의 불변 영역은 면역계의 다양한 세포 (예컨대, 이펙터 세포) 및 고전적 보체 시스템의 제1 성분 (C1q)을 포함한 숙주 조직 또는 인자에 대한 면역글로불린의 결합을 매개할 수 있다.
면역글로불린은 IgA, 분비 IgA, IgG 및 IgM을 포함하지만 이에 제한되지 않는 일반적으로 공지된 임의의 이소형으로부터 유래할 수 있다. IgG 아부류는 또한 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있으며, 인간 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. "이소형"은 중쇄 불변 영역 유전자에 의해 코딩되는 항체 부류 또는 아부류 (예컨대, IgM 또는 IgG1)를 지칭한다. 인간에서 면역글로불린 경쇄는 2개의 유전자좌: 면역글로불린 카파 유전자좌 및 면역글로불린 람다 유전자좌에 의해 코딩된다. 이와 같이, 인간 면역글로불린 경쇄는 카파 경쇄 또는 람다 경쇄로 분류된다. 카파 경쇄 또는 람다 경쇄에 특이적으로 결합할 수 있는 캡처실렉트(CaptureSelect)TM LC-람다 및 LC-카파 나노바디 (써모피셔 (THERMOFISHER)) 뿐만 아니라 다양한 상업적 항체가 이용 가능하고, 제한 없이, 베크만 코울터 라이프 사이언스 (Beckman Coulter Life Sciences)에 의한 카파-FITC (C15623), 람다-PE (C15189), 람다-PC7 (B90416), 및 카파-APC (B90420); 아브캄 (Abcam)에 의한 항-카파 경쇄 항체 (예컨대, ab134083, ab79558, 및 ab1936) 및 항-람다 경쇄 항체 (예컨대, ab124719, ab187370, ab185131, 및 ab200966); 및 이바이오사이언스 (eBioscience)TM에 의한 카파 경쇄 모노클로날 항체 (TB28-2), FITC, 및 람다 경쇄 모노클로날 항체 (1-155-2), APC를 포함한다. 이들 예는 제한하려는 것이 아니며, 임의의 공지된 항-카파 및/또는 항-람다 포획 시약이 본원에 개시된 방법에서 사용될 수 있다.
용어 "포획 시약"은, 예컨대 자연 발생 및 비-자연 발생 항체 모두; 모노클로날 및 폴리클로날 항체; 키메라 및 인간화 항체; 인간 또는 비인간 항체; 완전 합성 항체; 및 단일 쇄 항체, 나노바디, 아피머, 다른 분석물 결합 단백질 및 압타머, 및 이들의 임의의 조합을 포함한다. 명시적으로 언급되지 않은 경우, 및 문맥에서 달리 나타내지 않는 한, 용어 "포획 시약"은 또한 전술한 면역글로불린 중 어느 것의 항원-결합 단편 또는 항원-결합 부분을 포함하고, 1가 및 2가 단편 또는 부분, 및 단일 쇄 항체를 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 항체, 예컨대 치료 항체의 항원-결합 "부분" 또는 "단편"은 항원에 결합하는 능력을 보유하는 전체보다 적은 항체의 일부를 지칭한다. 항체의 항원-결합 기능은 전장 항체의 단편에 의해 수행될 수 있다는 것이 충분히 입증되었다. 항체의 "항원-결합 부분"이라는 용어에 포괄되는 결합 단편의 예는 (i) Fab 단편, V L , V H , C L 및 C H1 도메인으로 이루어진 일가 단편; (ii) F(ab')2 단편, 힌지 영역에 디술파이드 브리지에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 이가 단편; (iii) V H 및 C H1 도메인을 이루어진 Fd 단편; (iv) 항체의 단일 아암의 V L 및 V H 도메인으로 이루어진 Fv 단편, 또는 (v) 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본원에 사용된 "치료 항체"는 항원에 결합할 수 있고 생체내 또는 시험관내에서 효과를 유발할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 지칭한다.
"단리된 항체"는 상이한 항원 특이성을 갖는 다른 항체가 실질적으로 없는 항체를 지칭한다 (예컨대, SLAMF7에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 SLAMF7 이외의 항원에 특이적으로 결합하는 항체가 실질적으로 없음). 그러나, SLAMF7에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 상이한 종으로부터의 SLAMF7 분자와 같은 다른 항원에 대해 교차-반응성을 가질 수 있다. 더욱이, 단리된 항체는 다른 세포 물질 및/또는 화학물질이 실질적으로 없을 수 있다.
용어 "모노클로날 항체" (mAb)는 단일 분자 조성의 항체 분자, 즉 1차 서열이 본질적으로 동일하고 특정 에피토프에 대해 단일 결합 특이성 및 친화성을 나타내는 항체 분자의 비-자연 발생 제제를 지칭한다. 모노클로날 항체는 단리된 항체의 예이다. 모노클로날 항체는 하이브리도마, 재조합, 트랜스제닉 또는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 다른 기술에 의해 생성될 수 있다.
"인간 항체" (HuMAb)는 프레임워크 및 CDR 영역 모두가 인간 배선 면역글로불린 서열로부터 유래되는 가변 영역을 갖는 항체를 지칭한다. 또한, 항체가 불변 영역을 함유하는 경우, 불변 영역은 또한 인간 배선 면역글로불린 서열로부터 유래된다. 본 개시내용의 인간 항체는 인간 배선 면역글로불린 서열에 의해 코딩되지 않은 아미노산 잔기 (예컨대, 시험관내에서 무작위 또는 부위-특이적 돌연변이유발에 의해 또는 생체내에서 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)를 포함할 수 있다. 그러나, 본원에 사용된 용어 "인간 항체"는 마우스와 같은 또 다른 포유동물 종의 배선으로부터 유래된 CDR 서열이 인간 프레임워크 서열에 이식된 항체를 포함하도록 의도되지 않는다. 용어 "인간 항체" 및 "완전한 인간 항체"는 동의어로 사용된다.
"인간화 항체"는 비-인간 항체의 CDR 외부의 아미노산의 일부, 대부분 또는 전부가 인간 면역글로불린으로부터 유래된 상응하는 아미노산으로 대체된 항체를 지칭한다. 항체의 인간화 형태의 한 측면에서, CDR 외부의 아미노산의 일부, 대부분 또는 전부는 인간 면역글로불린으로부터의 아미노산으로 대체되는 반면, 하나 이상의 CDR 내의 일부, 대부분 또는 모든 아미노산은 변하지 않는다. 특정 항원에 결합하는 항체의 능력을 없애지 않는 한 아미노산의 작은 추가, 결실, 삽입, 치환 또는 변형이 허용된다. "인간화 항체"는 원래 항체와 유사한 항원 특이성을 보유한다.
"키메라 항체"는 가변 영역이 하나의 종으로부터 유래되고 불변 영역이 또 다른 종으로부터 유래된 항체, 예컨대 가변 영역은 마우스 항체로부터 유래되고 불변 영역은 인간 항체로부터 유래된 항체를 지칭한다.
"항-항원 항체"는 항원에 특이적으로 결합하는 항체를 지칭한다. 예컨대, 항-SLAMF7 항체는 SLAMF7에 특이적으로 결합한다.
"암"은 신체에서 비정상적인 세포의 비제어된 성장을 특징으로 하는 다양한 질환의 광범위한 그룹을 지칭한다. 비조절된 세포 분열 및 성장 분열 및 성장은 주변 조직을 침범하는 악성 종양의 형성을 초래하고 림프계 또는 혈류를 통해 신체의 먼 부분으로 전이될 수도 있다.
용어 "면역요법"은 면역 반응을 유도, 향상, 억제 또는 달리 변형하는 것을 포함하는 방법에 의해 질환에 걸리거나, 질환에 걸리거나 재발을 겪을 위험이 있는 대상체를 치료하는 것을 지칭한다. 대상체의 "치료" 또는 "요법"은 질환과 관련된 증상, 합병증 또는 병태, 또는 생화학적 징후의 발병, 진행, 발달, 중증도 또는 재발을 역전, 완화, 개선, 억제, 감속 또는 예방할 목적으로 대상체에 대해 수행되는 임의의 유형의 개입 또는 과정 또는 대상체에의 활성제의 투여를 지칭한다. 일부 측면에서, 면역요법은 대상체에게 치료 항체를 투여하는 것을 포함한다.
"신호전달 림프구 활성화 분자 F7", "SLAMF7", "CD319" 또는 "CS-1"은 자연 살해 (NK) 세포, 활성화된 T 세포, 대부분의 B 세포, 및 다발성 골수종 세포에 의해 발현되는 면역조절 수용체를 지칭한다. SH2D1B를 공동-발현하는 세포에서, SLAMF7은 포스포릴화된 SH2D1B에 의존하는 메커니즘에 의해 NK 세포 기능을 적극적으로 조절한다. SH2D1B 부재 시, SLAMF7은 NK 세포 기능을 억제한다. 본원에 사용된 용어 "SLAMF7"은 인간 SLAMF7 (hSLAMF7), hSLAMF7의 변이체, 이소형 및 종 상동체, 및 hSLAMF7과 적어도 하나의 공통 에피토프를 갖는 유사체를 포함한다. 완전한 hSLAMF7 서열은 유니프로트 (UniProt) 번호 Q9NQ25에서 찾을 수 있다.
"대상체"는 임의의 인간 또는 비인간 동물이 포함된다. 용어 "비인간 동물"은 비인간 영장류, 양, 개와 같은 척추동물, 및 마우스, 래트 및 기니피그와 같은 설치류를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 바람직한 측면에서, 대상체는 인간이다. 용어 "대상체" 및 "환자"는 본원에서 상호교환적으로 사용된다.
약물 또는 치료제의 "치료 유효량" 또는 "치료 유효 용량"은 단독으로 또는 또 다른 치료제와 조합하여 사용될 때, 질환 증상의 중증도 감소, 질환 무증상 기간의 빈도 및 지속 기간 증가, 또는 질환의 고통으로 인한 손상 또는 장애 예방에 의해 입증되는, 질환의 발병에 대해 대상체를 보호하거나 질환 퇴행을 촉진하는 약물의 임의의 양이다. 질환 퇴행을 촉진하는 치료제의 능력은, 예컨대 임상 시험 동안 인간 대상체에서, 인간에서의 효능을 예측하는 동물 모델 시스템에서, 숙련된 의사에게 공지된 다양한 방법을 이용하여, 또는 시험관내 검정에서 작용제의 활성을 검정함으로써 평가될 수 있다.
예로서, "항암제"는 대상체에서 암의 퇴행을 촉진한다. 바람직한 측면에서, 치료 유효량의 약물은 암을 제거하는 지점까지 암 퇴행을 촉진한다. "암 퇴행 촉진"은 유효량의 약물을 단독으로 또는 항-신생물제와 조합하여 투여함으로써 종양 성장 또는 크기의 감소, 종양의 괴사, 적어도 하나의 질환 증상의 중증도의 감소, 질환 무증상 기간의 빈도 및 지속 기간 증가, 또는 질환의 고통으로 인한 손상 또는 장애의 예방을 초래하는 것을 의미한다. 또한, 치료에 관한 용어 "효과적인" 및 "유효성"은 약리학적 유효성 및 생리학적 안전성을 모두 포함한다. 약리학적 유효성은 환자의 암 퇴행을 촉진하는 약물의 능력을 지칭한다. 생리학적 안전성은 약물의 투여로 인한 독성, 또는 세포, 기관 및/또는 유기체 수준에서 다른 생리학적 역효과 (부작용)의 수준을 지칭한다.
"면역 반응"은 관련 기술분야에서 이해되는 바와 같으며, 일반적으로 외래 작용제 또는 비정상, 예컨대 암 세포에 대한 척추동물 내의 생물학적 반응을 지칭하며, 이러한 반응은 이들 작용제 및 이들에 의해 야기되는 질환에 대해 유기체를 보호한다. 면역 반응은 면역계의 하나 이상의 세포 (예컨대, T 림프구, B 림프구, 자연 살해 (NK) 세포, 대식세포, 호산구, 비만 세포, 수지상 세포 또는 호중구) 및 이들 세포 중 임의의 세포 또는 간에 의해 생성되는 가용성 거대분자 (항체, 시토카인 및 보체 포함)의 작용에 의해 매개되며, 이는 척추동물의 신체로부터 침입 병원체, 병원체로 감염된 세포 또는 조직, 암 또는 다른 비정상적인 세포, 또는 자가면역 또는 병리학적 염증의 경우 정상적인 인간 세포 또는 조직의 선택적 표적화, 이에 대한 결합, 이에 대한 손상, 이의 파괴 및/또는 제거를 초래한다. 면역 반응은, 예컨대 T 세포, 예컨대 이펙터 T 세포, Th 세포, CD4+ 세포, CD8+ T 세포, 또는 Treg 세포의 활성화 또는 억제, 또는 면역계의 임의의 다른 세포, 예컨대 NK 세포의 활성화 또는 억제를 포함한다.
"면역-관련된 반응 패턴"은 암-특이적 면역 반응을 유도하거나 천연 면역 과정을 변형함으로써 항종양 효과를 생성하는 면역치료제로 치료된 암 환자에서 종종 관찰되는 임상 반응 패턴을 지칭한다. 이 반응 패턴은, 전통적인 화학요법제의 평가에서 질환 진행으로 분류되고 약물 실패와 아주 밀접한, 종양 부담의 초기 증가 또는 새로운 병변의 출현에 이어지는 유익한 치료 효과를 특징으로 한다. 따라서, 면역치료제의 적절한 평가는 표적 질환에 대한 이들 작용제의 효과의 장기간의 모니터링을 요구할 수 있다.
"면역조정제" 또는 "면역조절제"는 작용제, 예컨대 면역 반응을 조정, 조절 또는 변형하는데 관여할 수 있는 신호전달 경로의 성분을 표적으로 하는 작용제를 지칭한다. 면역 반응을 "조정하는", "조절하는" 또는 "변형하는"은 면역계의 세포 또는 이러한 세포 (예컨대, Th1 세포와 같은 이펙터 T 세포)의 활성에서의 임의의 변경을 지칭한다. 이러한 조정은 다양한 세포 유형의 수의 증가 또는 감소, 이들 세포의 활성의 증가 또는 감소, 또는 면역계 내에서 발생할 수 있는 임의의 다른 변화에 의해 나타날 수 있는 면역계의 자극 또는 억제를 포함한다. 억제 및 자극 면역조정제가 모두 확인되었으며, 이 중 일부는 종양 미세환경에서 향상된 기능을 가질 수 있다. 일부 측면에서, 면역조정제는 T 세포 표면 상의 분자를 표적으로 한다. "면역조정 표적" 또는 "면역조절 표적"은 물질, 작용제, 모이어티, 화합물 또는 분자에 의한 결합을 표적으로 하고 이의 결합에 의해 활성이 변경되는 분자, 예컨대 세포 표면 분자이다. 면역조정 표적은, 예컨대 세포 표면 상의 수용체 ("면역조정 수용체") 및 수용체 리간드 ("면역조정 리간드")를 포함한다.
"면역요법"은 면역계 또는 면역 반응을 유도, 향상, 억제 또는 달리 변형하는 것을 포함하는 방법에 의해 질환에 걸리거나, 질환에 걸리거나 재발을 겪을 위험이 있는 대상체를 치료하는 것을 지칭한다. 특정 측면에서, 면역요법은 대상체에게 항체를 투여하는 것을 포함한다. 다른 측면에서, 면역요법은 소분자를 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 다른 측면에서, 면역요법은 시토카인 또는 이의 유사체, 변이체 또는 단편을 투여하는 것을 포함한다.
약물의 치료 유효량은 "예방적 유효량"을 포함하며, 이는 암이 발병할 위험이 있는 대상체 (예컨대, 전악성 병태를 갖는 대상체) 또는 암의 재발을 겪을 위험이 있는 대상체에게 단독으로 또는 항-신생물제와 조합하여 투여될 때 암의 발병 또는 재발을 억제하는 약물의 임의의 양이다. 바람직한 측면에서, 예방적 유효량은 암의 발병 또는 재발을 완전히 예방한다. 암의 발병 또는 재발을 "억제"한다는 것은 암의 발병 또는 재발의 가능성을 줄이거나 암의 발병 또는 재발을 완전히 예방하는 것을 의미한다.
대안 (예컨대, "또는")의 사용은 대안의 하나, 둘 다, 또는 이들의 임의의 조합을 의미하는 것으로 이해되어야 한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 단수 형태는 임의의 인용되거나 열거된 성분의 "하나 이상"을 지칭하는 것으로 이해되어야 한다.
용어 "약" 또는 "본질적으로 포함하는"은 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 결정되는 특정 값 또는 조성에 대해 허용 가능한 오차 범위 내에 있는 값 또는 조성을 지칭하며, 값 또는 조성이 어떻게 측정 또는 결정되는지, 즉 측정 시스템의 한계에 부분적으로 의존할 것이다. 예컨대, "약" 또는 "본질적으로 포함하는"은 관련 기술분야의 관행에 따라 1 또는 1 초과의 표준 편차 이내를 의미할 수 있다. 대안적으로, "약" 또는 "본질적으로 포함하는"은 최대 10%의 범위를 의미할 수 있다. 또한, 특히 생물학적 시스템 또는 과정과 관련하여 용어는 최대 한 자릿수 또는 최대 5-배 값을 의미할 수 있다. 특정 값 또는 조성이 본 출원 및 청구범위에 제공되는 경우, 달리 언급되지 않는 한, "약" 또는 "본질적으로 포함하는"의 의미는 그 특정 값 또는 조성에 대해 허용 가능한 오차 범위 내에 있는 것으로 가정되어야 한다.
본원에 기재된 바와 같이, 임의의 농도 범위, 백분율 범위, 비율 범위 또는 정수 범위는, 달리 나타내지 않는 한, 인용된 범위 내의 임의의 정수 값 및 적절한 경우 이의 분수 (예컨대, 정수의 1/10 및 1/100)를 포함하도록 이해되어야 한다.
본 개시내용의 다양한 측면이 하기 서브섹션에서 더 상세히 설명된다.
II. 본 개시내용의 방법
본 개시내용의 특정 측면은 형질 세포 장애를 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이며, 대상체로부터 수득된 생물학적 샘플에서 M-단백질을 측정하는 단계이며, 여기서 M-단백질은 (1) 생물학적 샘플 중의 면역글로불린 및 유리 경쇄를 면역포획에 의해 정제하고, (2) 정제된 면역글로불린 및 유리 경쇄를 액체 크로마토그래피 (LC) 질량 분광측정 (MS)에 적용함으로써 측정되는 것인 단계; 및 M-단백질을 갖는 것으로 확인된 대상체에게 치료 유효량의 면역요법을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 측면에서, 면역요법은 SLAMF7에 특이적으로 결합하는 항체 ("항-SLAMF7 항체") 또는 이의 항원 결합 부분을 포함한다.
본 개시내용의 일부 측면은 형질 세포 장애를 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이며, (i) 대상체에게 치료 유효량의 면역요법을 투여하는 단계; (ii) 대상체로부터 수득된 생물학적 샘플에서 M-단백질을 측정하는 단계이며, 여기서 M-단백질은 (1) 생물학적 샘플 중의 면역글로불린 및 유리 경쇄를 면역포획에 의해 정제하고, (2) 정제된 면역글로불린 및 유리 경쇄를 액체 크로마토그래피 (LC) 질량 분광측정 (MS)에 적용함으로써 측정되는 것인 단계; 및 (iii) 대상체에게 추가의 치료 유효량의 면역요법을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 측면에서, 면역요법은 항-SLAMF7 항체를 포함한다.
본 개시내용의 일부 측면은 면역요법에 적합한 대상체를 확인하는 방법에 관한 것이며, (i) 대상체로부터 수득된 생물학적 샘플에서 M-단백질을 측정하는 단계를 포함하고, 여기서 M-단백질은 (1) 생물학적 샘플 중의 면역글로불린 및 유리 경쇄를 면역포획에 의해 정제하고, (2) 정제된 면역글로불린 및 유리 경쇄를 액체 크로마토그래피 (LC) 질량 분광측정 (MS)에 적용함으로써 측정된다. 일부 측면에서, 방법은 M-단백질을 갖는 것으로 확인된 대상체에게 치료 유효량의 면역요법을 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 면역요법은 항-SLAMF7 항체를 포함한다. 일부 측면에서, 대상체는 형질 세포 장애를 갖는다.
본 개시내용의 일부 측면은 잔류 질환을 갖는 대상체를 확인하는 방법에 관한 것이며, 대상체로부터 수득된 생물학적 샘플에서 M-단백질을 측정하는 단계를 포함하고, 여기서 M-단백질은 (1) 생물학적 샘플 중의 면역글로불린 및 유리 경쇄를 면역포획에 의해 정제하고, (2) 정제된 면역글로불린 및 유리 경쇄를 액체 크로마토그래피 (LC) 질량 분광측정 (MS)에 적용함으로써 측정되고; 여기서 대상체는 이전에 형질 세포 장애를 갖는 것으로 확인되었다.
본 개시내용의 일부 측면은 대상체로부터 수득된 생물학적 샘플에서 M-단백질을 측정하는 방법에 관한 것이며, (1) 생물학적 샘플 중의 면역글로불린 및 유리 경쇄를 면역포획에 의해 정제하는 단계, 및 (2) 정제된 면역글로불린 및 유리 경쇄를 액체 크로마토그래피 (LC) 질량 분광측정 (MS)에 적용하는 단계를 포함한다. 일부 측면에서, 대상체는 형질 세포 장애를 갖는다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 방법은 위양성의 발생을 감소시킨다. 다발성 골수종을 포함한 형질 세포 장애를 치료하기 위한 치료 옵션 중에는 항-SLAMF7 항체와 같은 치료 항체의 사용이 있다. 그러나, M-단백질을 측정하는 기존의 방법은 형질 세포 장애, 예컨대 다발성 골수종을 나타내는 M-단백질과 최근 치료된 대상체의 혈청에 잔류하는 치료 항체를 구별할 수 없다. 결과적으로, 측정 가능한 M-단백질이 잔류하지 않는 경우에도 대상체는 포지티브 M-단백질 수준을 갖는 것으로 잘못 분류된다. 이들 위양성은 결과를 확인하기 위해 골수 생검과 같은 더 침습적인 시험 또는 필요하지 않을 수 있는 추가 치료로 이어질 수 있다. 본원에 개시된 방법은 질환을 나타내는 M-단백질과 치료 항체의 구별을 허용하여 위양성의 발생률을 감소시킨다.
일부 측면에서, 본원에 개시된 방법은 M 단백질을 측정하는 표준 방법과 비교하여 대상체로부터 수득된 샘플에서 M 단백질의 조기 검출을 허용한다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 방법은 SPEP 검정과 비교하여 대상체로부터 수득된 샘플에서 M 단백질의 조기 검출을 허용한다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 방법은 SIFE 검정과 비교하여 대상체로부터 수득된 샘플에서 M 단백질의 조기 검출을 허용한다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 방법은 표준 방법을 이용하여 sFLC 비율을 측정하는 것과 비교하여 대상체로부터 수득된 샘플에서 M 단백질의 조기 검출을 허용한다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 방법은 M 단백질을 표준 방법보다 적어도 약 10% 빨리, 적어도 약 20% 빨리, 적어도 약 25% 빨리, 적어도 약 30% 빨리, 적어도 약 40% 빨리, 적어도 약 50% 빨리, 적어도 약 60% 빨리, 적어도 약 70% 빨리, 적어도 약 80% 빨리, 적어도 약 90% 빨리, 적어도 약 95% 빨리 검출하는 것을 허용한다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 방법은 M 단백질을 표준 방법보다 적어도 약 1주기 빨리, 적어도 약 2주기 빨리, 적어도 약 3주기 빨리, 적어도 약 4주기 빨리, 적어도 약 5주기 빨리, 적어도 약 6주기 빨리, 적어도 약 7주기 빨리, 적어도 약 8주기 빨리, 적어도 약 9주기 빨리, 적어도 약 10주기 빨리, 적어도 약 15주기 빨리, 적어도 약 20주기 빨리, 적어도 약 25주기 빨리, 적어도 약 30주기 빨리 검출하는 것을 허용한다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 방법은 M 단백질을 표준 방법보다 적어도 약 10주기 빨리 검출하는 것을 허용한다.
A. 형질 세포 장애
본 개시내용의 특정 측면은 형질 세포 장애를 진단, 모니터링, 및/또는 치료하는 방법에 관한 것이다. 형질 세포 장애는 전악성 또는 악성 형질 세포의 클론 또는 다중 클론 (때로는 림프형질세포양 세포 또는 B 림프구와 관련됨)을 과생성하여 혈류로 M-단백질을 분비하는 점진적으로 더 심각한 모노클로날 감마병증의 스펙트럼을 포함한다. 형질 세포 장애의 비배타적 예는 다발성 골수종, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 및 다른 B 세포-관련된 신생물을 포함한 미결정된 의미의 모노클로날 감마병증 (MGUS) 및 혈액학적 악성종양을 포함한다.
본 개시내용의 특정 측면에서, 형질 세포 질환은 MGUS이다. MGUS는 클론 형질 세포 증식의 무증상 전암 단계이다. MGUS는 50세 초과 인구의 대략 3-5%에 존재한다. MGUS를 갖는 대상체의 대략 1%는 매년 다발성 골수종으로 진행한다.
본 개시내용의 특정 측면에서, 형질 세포 장애는 다발성 골수종이다. 다발성 골수종 (MM)은 모든 혈액학적 암의 10-15%를 차지하는 클론 형질 세포 악성 종양이다. MM은 골수에서 모노클로날 형질 세포의 비제어된 증식을 특징으로 하며, 이는 비기능성의 온전한 면역글로불린 또는 면역글로불린 쇄 (예컨대, M-단백질)의 생성 및 말단 기관 손상을 유발한다.
MM은 일반적으로 연간 대략 1%의 비율로 MGUS에서 진화한다. "무증상 다발성 골수종" (SMM)으로 지칭되는 중간의 증상이 없는 보다 진행된 전암 단계도 MM으로 진행되기 전에 일부 환자에서 발생한다.
MM의 표준 진단은 철저한 병력-대화, 신체 검사, 및 24시간 소변 샘플 분석, 골수 생검, 및 골격 방사선 촬영을 포함한 다양한 실험실 시험을 포함한다. MM은 골수 형질세포증가증 및 골수종-관련된 말단-기관 손상과 함께 환자의 혈청 및 소변에 모노클로날 단백질 (M-단백질)이 존재하는 것이 특징이다. MM 환자에서 M-단백질의 혈청 수준은 적어도 30 g/L이다. MGUS 및 SMM은 또한 혈청에서 M-단백질의 존재를 특징으로 한다. MM과 같이 SMM 환자에서 M-단백질은 적어도 30 g/L의 농도로 혈청에서 발견된다. 그러나, SMM 환자는 소변에 M-단백질이 없고, 말단-기관 손상을 나타내지 않는다. MGUS는 30 g/L 미만의 M-단백질 혈청 농도를 특징으로 한다.
MM에 대한 치료는 개별 환자의 연령, 동반질환, 및 위험 프로파일을 기반으로 한다. 최근 MM 치료의 발전으로 5년 생존율이 대략 50%로 높아졌다. 그러나, 대부분의 환자는 결국 치명적인 재발을 겪는다. 70세 미만의 대부분의 환자에 대한 표준 치료는 자가 줄기 세포 이식이다. 환자는 전형적으로 이식을 받기 전에 완전하거나 거의 완전한 반응을 달성하는 것을 목표로 2-6주기의 유도 치료를 받는다. 이식 후 환자는 전형적으로 12개월 동안 프레드니손 또는 덱사메타손과 함께 또는 없이 유지 탈리도마이드 또는 레날리도마이드를 받는다. 환자가 이식에 부적합한 경우, 치료는 일반적으로 스테로이드, 세포독성제 (예컨대, 사이클로포스파미드), 및 탈리도마이드, 레날리도마이드 또는 보르테조밉의 조합으로 이루어진다.
최근 개발로 5년 생존율이 증가했지만, 이들 발전은 고위험 MM을 갖는 환자 또는 재발 MM 환자의 생존율을 증가시키지 않았다. 고위험 MM을 갖는 환자의 중앙 생존은 2 내지 3년에 불과하다. 고위험 및 재발 MM 환자에 대한 치료의 발전은 거의 없었지만, 하나의 발전은 종양 세포 표면 항원을 표적으로 하는 면역요법의 사용이다.
신호전달 림프구 활성화 분자 (SLAM) 계열 수용체는 면역치료적 MM 치료를 위한 하나의 표적이다. SLAM 수용체는 암, 특히 MM과 같은 상이한 질환의 발병기전에 연루되어 있다. 엘로투주맙은 면역치료적 MM 치료로 사용되는 SLAMF7에 대한 IgG1 인간화 항체이다. 엘로투주맙, 레날리도마이드 및 덱사메타손의 조합은 상당한 항-MM 활성을 나타낸다. 엘로투주맙의 레날리도마이드 및 덱사메타손과의 조합 사용은 재발 및 불응성 다발성 골수종 (MM) 치료에 승인되었다. 엘로투주맙, 레날리도마이드 및 덱사메타손의 조합은 또한 동반질환 또는 고령으로 인해 고용량 요법 및 자가 줄기 세포 이식의 후보자가 아닌 새로 진단된 MM 환자에서 사용하기 위해 연구되고 있다.
본원에 기재된 방법은 임의의 공지된 유형의 형질 세포 질환을 갖는 대상체로부터 수득된 샘플에서 M-단백질을 측정하는데 사용될 수 있다. 특정 측면에서, 형질 세포 질환은 MM이다. 일부 측면에서, MM은 경쇄 MM을 포함한다. 일부 측면에서, MM은 형질 세포 백혈병을 포함한다. 일부 측면에서, 형질 세포 백혈병은 1차 형질 세포 백혈병 또는 2차 형질 세포 백혈병을 포함한다. 일부 측면에서, 형질 세포 질환은 MGUS이다. 일부 측면에서, 형질 세포 질환은 SMM이다.
일부 측면에서, 생물학적 샘플은 형질 세포 질환, 예컨대 MM을 갖는 대상체로부터 수집된다. 일부 측면에서, 대상체는 이전에 형질 세포 질환, 예컨대 MM으로 진단되었다. 일부 측면에서, 대상체는 완화 중이다. 일부 측면에서, 대상체는 재발 또는 불응성이다. 일부 측면에서, 대상체는 형질 세포 질환, 예컨대 MM의 치료를 위한 표준 요법 후 재발 또는 불응성이다. 일부 측면에서, 대상체는 잔류 질환을 갖고 있으며, 여기서 대상체는 이전에 형질 세포 질환, 예컨대 MM으로 진단되었다.
일부 측면에서, 대상체는 형질 세포 장애, 예컨대 MM을 치료하기 위해 이전 요법을 받았다. 일부 측면에서, 이전 요법은 형질 세포 장애, 예컨대 MM의 치료를 위한 표준 치료 요법이었다. 일부 측면에서, 이전 요법은 자가 줄기 세포 이식을 포함한다. 일부 측면에서, 이전 요법은 키메라 항원 수용체 T 세포 (CAR-T 세포) 요법을 포함한다. 일부 측면에서, 이전 요법은 스테로이드, 세포독성제 (예컨대, 화학요법제, 예컨대 사이클로포스파미드), 면역조정제 (예컨대, 탈리도마이드, 레날리도마이드, 포말리도마이드), 보르테조밉, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 일부 측면에서, 선행 요법은 면역요법을 포함한다. 일부 측면에서, 면역요법은 본원에 개시된 임의의 면역요법이다. 일부 측면에서, 면역요법은 항-SLAMF7 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함한다. 일부 측면에서, 면역요법은 엘로투주맙을 포함한다.
일부 측면에서, 생물학적 샘플은 대상체로부터 수득되는 조직 또는 유체 샘플이다. 일부 측면에서, 생물학적 샘플은 혈액, 혈장, 혈청 또는 소변 샘플로부터 선택된다. 특정 측면에서, 생물학적 샘플은 혈청 샘플이다. 특정 측면에서, 생물학적 샘플은 소변 샘플이다. 일부 측면에서, 생물학적 샘플은 골수 생검이다. 생물학적 샘플은 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법으로 수집될 수 있다.
B. 질환 진단 방법
본 개시내용의 특정 측면은 대상체에서 형질 세포 장애를 진단하는 방법에 관한 것이다. M-단백질의 측정은 다발성 골수종과 같은 형질 세포 장애의 진단에 필요하다. 그러나, 겔 전기영동-기반 M-단백질 검정을 포함한 현재의 방법은 민감성 및 특이성이 낮고 M-단백질과 함께 이동하는 면역글로불린 또는 다른 혈청 단백질의 존재로 인해 10 mg/mL 미만의 M-단백질 농도에서 정량적이지 않다. 또한, 이들 전기영동-기반 검정은 유리 경쇄 (FLC)를 분비하는 다발성 골수종 환자에게 매우 제한된 유용성을 갖는다. 혈청 FLC는 소변으로 빠르게 배설되며; 따라서, FLC는 소변 단백질 전기영동 (UPEP) 및 소변 면역고정 전기영동 (UIFE) 시험을 이용하여 소변에서 측정되었다. 또한, SPEP 및 SIFE 검정은 비관련 면역글로불린으로 지칭되는 정상적인 폴리클로날 면역글로불린과 질환-관련된 모노클로날 면역글로불린을 잘 구별하지 못한다. 결과적으로, 다발성 골수종 환자를 진단 및 모니터링하려면 복잡한 시험 알고리즘이 필요하다.
본 개시내용의 일부 측면은 대상체에서 형질 세포 장애를 진단하는 방법에 관한 것이며, 대상체로부터 수득된 생물학적 샘플에서 M 단백질을 측정하는 단계를 포함하고, 여기서 M 단백질은 (1) 생물학적 샘플 중의 면역글로불린 및 유리 경쇄를 면역포획에 의해 정제하고, (2) 정제된 면역글로불린 및 유리 경쇄를 액체 크로마토그래피 (LC) 질량 분광측정 (MS)에 적용함으로써 측정된다. 일부 측면에서, 대상체는 형질 세포 장애를 나타내는 하나 이상의 마커를 갖는다. 일부 측면에서, 대상체는 이전에 골 통증 (예컨대, 척추 또는 흉부), 구역, 변비, 식욕 상실, 정신적 혼탁 또는 혼란, 피로, 잦은 감염, 체중 감소, 다리의 약화 또는 무감각, 과도한 갈증으로부터 선택되는, 형질 세포 장애, 예컨대 다발성 골수종의 하나 이상의 증상을 나타내었다. 일부 측면에서, 측정 M-단백질 수준이 역치 수준보다 큰 경우, 대상체는 형질 세포 장애를 갖는 것으로 확인된다.
본 개시내용의 특정 측면은 잔류 질환, 예컨대 최소 잔류 질환을 갖는 대상체를 확인하는 방법에 관한 것이며, 대상체로부터 수득된 생물학적 샘플에서 M-단백질을 측정하는 단계를 포함하고, 여기서 M-단백질은 (1) 생물학적 샘플 중의 면역글로불린 및 유리 경쇄를 면역포획에 의해 정제하고 (2) 정제된 면역글로불린 및 유리 경쇄를 액체 크로마토그래피 (LC) 질량 분광측정 (MS)에 적용함으로써 측정되고; 여기서 대상체는 이전에 형질 세포 장애를 갖는 것으로 확인되었다.
최소 잔류 질환 (MRD)은 치료 동안 또는 치료 후 환자가 완화 중일 때 (질환의 증상 또는 징후가 없음) 사람에게 잔류하는 소수의 암 세포에 부여되는 명칭이다. 이는 암 재발의 주요 원인이다. 암 치료에서 MRD 시험은 여러 가지 중요한 역할을 한다: 치료로 암이 근절되었는지 또는 흔적이 잔류하는지를 결정하고, 상이한 치료의 효능을 비교하고, 환자의 완화 상태를 모니터링할 뿐만 아니라, 암의 재발을 검출하고, 이러한 요구를 가장 잘 충족시킬 치료를 선택한다. 일부 측면에서, MRD는 형질 세포 MRD이다.
일부 측면에서, 대상체는 형질 세포 장애의 치료를 위해 적어도 하나의 선행 요법을 받았다. 일부 측면에서, 대상체는 형질 세포 장애의 치료를 위해 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개의 선행 요법, 적어도 6개의 선행 요법, 적어도 7개의 선행 요법, 적어도 8개의 선행 요법, 적어도 9개의 선행 요법, 또는 적어도 10개의 선행 요법을 받았다. 일부 측면에서, 대상체는 형질 세포 장애의 치료를 위해 8개의 선행 요법을 받았다. 일부 측면에서, 대상체는 잔류 질환을 나타내는 다른 마커를 나타내지 않는다. 일부 측면에서, 측정 M-단백질 수준이 역치 수준보다 큰 경우, 대상체는 잔류 질환을 갖는 것으로 확인된다.
일부 측면에서, 선행 요법은 사이클로포스파미드, 독소루비신, 에토포시드, 리포솜 독소루비신, 멜팔란, 빈크리스틴, 보르테조밉, 레날리도마이드, 카르필조밉, 포말리도마이드, 파노비노스타트, 탈리도마이드, 레날리도마이드, 포말리도마이드, 줄기 세포 이식, CAR-T 세포 요법, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
일부 측면에서, 선행 요법은 사이클로포스파미드를 포함한다. 다른 명칭들 중에서 시토포스판으로도 공지된 사이클로포스파미드 (CP)는 화학요법으로 면역계를 억제하기 위해 사용되는 약물이다. 이는 화학요법으로 림프종, 다발성 골수종, 백혈병, 난소암, 유방암, 소세포 폐암, 신경모세포종 및 육종을 치료하는데 사용된다. 이는 입으로 복용되거나 정맥 주사로 투여된다.
일부 측면에서, 선행 요법은 독소루비신을 포함한다. 특히 아드리아마이신이라는 상품명으로 판매되는 독소루비신은 암 치료에 사용되는 화학요법 약물이다. 이는 유방암, 방광암, 카포시 육종, 림프종 및 급성 림프구성 백혈병을 포함한다. 이는 종종 다른 화학요법제와 함께 사용된다. 독소루비신은 정맥 주사로 투여된다.
일부 측면에서, 선행 요법은 에토포시드를 포함한다. 특히 에토포포스라는 브랜드명으로 판매되는 에토포시드는 다수 유형의 암 치료에 사용되는 화학요법 약물이다. 이는 고환암, 폐암, 림프종, 백혈병, 신경모세포종 및 난소암을 포함한다. 이는 입으로 복용되거나 정맥 주사로 투여된다.
일부 측면에서, 선행 요법은 멜팔란을 포함한다. 특히 알케란이라는 상품명으로 판매되는 멜팔란은 다발성 골수종, 난소암, AL 아밀로이드증, 및 때때로 악성 흑색종을 치료하는데 사용되는 화학요법 약물이다. 이 작용제는 흑색종에 사용하기 위한 가능한 약물로 처음 조사되었지만 효과적인 것으로 밝혀지지 않았다. 이는 2016년 미국에서 다발성 골수종 (MM) 환자의 조혈 전구 (줄기) 세포 이식 전 고용량 컨디셔닝 치료로서 경구 요법이 적절하지 않은 MM 환자의 경감 치료에 사용하기 위해 승인되었다.
일부 측면에서, 선행 요법은 빈크리스틴을 포함한다. 류로크리스틴으로도 공지되어 있고 특히 온코빈이라는 브랜드명으로 판매되는 빈크리스틴은 여러 유형의 암을 치료하는데 사용되는 화학요법 약물이다. 이는 특히 급성 림프구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 호지킨 질환, 신경모세포종, 및 소세포 폐암을 포함한다. 빈크리스틴은 다양한 유형의 화학요법 레지먼에 사용하기 위해 정맥 주입을 통해 전달된다. 주요 용도는 화학요법 레지먼 CHOP의 일부로서 비-호지킨 림프종, MOPP, COPP, BEACOPP의 일부로서 호지킨 림프종, 또는 급성 림프모구성 백혈병 (ALL)에서 덜 인기 있는 표준 V 화학요법 레지먼, 및 신장모세포종 치료에 있다. 이는 또한 덱사메타손 및 L-아스파라기나제와 함께 ALL에서 완화를 유도하고 소아 백혈병을 치료하기 위해 프레드니손과 조합하여 사용한다. 빈크리스틴은 때때로, 예컨대 혈전성 혈소판감소성 자반병 (TTP) 또는 만성 특발성 혈소판감소성 자반병 (ITP)의 치료에 면역억제제로 사용된다.
일부 측면에서, 선행 요법은 보르테조밉을 포함한다. 특히 벨카데라는 브랜드명으로 판매되는 보르테조밉은 다발성 골수종 및 맨틀 세포 림프종 치료에 사용되는 항암 약물이다. 이는 이전에 치료를 받았거나 받지 않은 이들의 다발성 골수종을 포함한다. 이는 일반적으로 다른 약물과 함께 사용된다. 이는 주사로 투여된다. 2건의 공개-라벨 시험은 재발/불응성 다발성 골수종을 갖는 중증의 전처리된 사람들에서 최대 8주기 동안 21일 주기의 제1, 제4, 제8, 제11일에 보르테조밉 (덱사메타손의 존재 또는 부재)의 효능을 확립하였다. III상은 고용량 덱사메타손 레지먼에 비해 보르테조밉의 우월성을 입증하였다 (예컨대, 중앙 TTP 6.2 대 3.5개월, 및 1년 생존율 80% 대 66%).
일부 측면에서, 선행 요법은 레날리도마이드를 포함한다. 특히 레블리미드라는 상품명으로 판매되는 레날리도마이드는 다발성 골수종 (MM) 및 골수형성이상 증후군 (MDS) 치료에 사용되는 약물이다. MM의 경우 이는 적어도 하나의 다른 치료 후에 사용되며 일반적으로 덱사메타손과 함께 사용된다. 이는 탈리도마이드의 더 강력한 분자 유사체이며, 아폽토시스 유도를 통해 종양 혈관신생, 종양 분비된 시토카인 및 종양 증식을 억제한다.
레날리도마이드는 완전 또는 "매우 우수한 부분" 반응을 유도할 뿐만 아니라 무진행 생존을 개선하는데 효과적이다. 골수종에 대해 레날리도마이드를 투여받은 사람들에게서 더 흔한 유해 사례는 호중구감소증 (백혈구 수 감소), 심부정맥 혈전증, 감염, 및 다른 혈액학적 악성종양의 위험 증가였다. 재발성 또는 불응성 다발성 골수종에서 2차 원발성 혈액학적 악성종양의 위험이 레날리도마이드 사용의 이익보다 크지 않다.
일부 측면에서, 선행 요법은 카르필조밉을 포함한다. 카르필조밉 (오닉스 파마슈티칼스 (Onyx Pharmaceuticals)에 의해 개발된 키프롤리스라는 상품명으로 판매됨)은 선택적 프로테아좀 억제제로 작용하는 항암 약물이다. 화학적으로, 이는 테트라펩티드 에폭시케톤 및 에폭소마이신의 유사체이다. 미국 식품의약국 (FDA)은 2012년 7월 20일에 보르테조밉 및 면역조정 요법 (예컨대, 레날리도마이드)으로의 치료를 포함한 적어도 2개의 선행 요법을 받고 마지막 요법의 완료 60일에 또는 이내에 질환 진행을 입증한 다발성 골수종을 갖는 환자에서의 사용을 승인하였다. 초기 승인은 응답률을 기반으로 하였다. 전체 생존 (OS) 이익을 입증하는 데이터는 나중에 엔데아보르 (ENDEAVOR) 시험에서 입증되었고 FDA에 의해 승인되었다.
일부 측면에서, 선행 요법은 포말리도마이드를 포함한다. 포말리도마이드 (INN; 미국에서는 폴라리스트로, 유럽 및 러시아에서는 임노비드로 판매됨)는 셀젠 (Celgene)에 의해 판매되는 탈리도마이드의 유도체이다. 이는 항-혈관신생성이고 면역조정제로서 작용한다. 포말리도마이드는 재발성 및 불응성 다발성 골수종 치료제로 2013년 2월에 미국 식품의약국 (FDA)에 의해 승인되었다. 이는 레날리도마이드 및 보르테조밉을 포함한 적어도 2개의 선행 요법을 받았고 마지막 요법 완료 60일에 또는 이내에 질환 진행을 입증한 사람들에서의 사용이 승인되었다. 이는 2013년 8월에 유럽 위원회 (European Commission)로부터 유사한 승인을 받았다.
일부 측면에서, 선행 요법은 파노비노스타트를 포함한다. 파노비노스타트(상품명 파리닥 (Farydak))는 다양한 암 치료를 위한 노바르티스 (Novartis)의 약물이다. 이는 히드록삼산이고, 비-선택적 히스톤 데아세틸라제 억제제 (pan-HDAC 억제제)로 작용한다. 이는 2015년 2월 23일에 다발성 골수종을 갖는 환자에서의 사용에 대해 FDA 가속 승인을 받았고, 2015년 8월 28일에 동일한 용도로 유럽 의약품청 (European Medicines Agency)에 의해 승인되었다.
일부 측면에서, 선행 요법은 탈리도마이드를 포함한다. 특히 탈로미드라는 브랜드명으로 판매되는 탈리도마이드는 면역조정 약물이며, 탈리도마이드 부류 약물의 원형이다. 이는 주로 특정 암 (다발성 골수종) 및 나병의 합병증의 치료제로 사용된다. 이는 세계보건기구의 필수 의약품 목록에 등재된, 건강 시스템에 필요한 가장 안전하고 가장 효과적인 약물이다.
일부 측면에서, 선행 요법은 조혈 줄기 세포 이식을 포함한다. 조혈 줄기 세포 이식 (HSCT) (줄기 세포 이식)은 일반적으로 골수, 말초혈액 또는 제대혈로부터 유래된 다능성 조혈 줄기 세포의 이식이다. 이는 자가 (환자 자신의 줄기 세포가 사용됨), 동종이계 (공여자로부터 제공된 줄기 세포) 또는 동계 (일란성 쌍둥이로부터의 것)일 수 있다. 특정 측면에서, 선행 요법은 키메라 항원 수용체 T 세포 (CAR-T 세포) 요법을 포함한다.
이는 다발성 골수종 또는 백혈병과 같은 특정 혈액암 또는 골수암을 갖는 환자에 대해 가장 흔히 수행된다. 이들 경우에서, 수령자의 면역계는 일반적으로 이식 전에 방사선 또는 화학요법으로 파괴된다. 감염 및 이식편 대 숙주 질환은 동종이계 HSCT의 주요 합병증이다.
일부 측면에서, 생물학적 샘플에서 측정되는 M-단백질의 수준은 대상체가 고통받는 형질 세포 장애의 유형을 나타낸다. 일부 측면에서, 대상체로부터 수득된 혈청 샘플이 (본원에 개시된 임의의 방법을 이용하여 측정 시) 적어도 약 30 g/L의 M-단백질을 갖는 것으로 결정되는 경우, 대상체는 형질 세포 질환, 예컨대 다발성 골수종을 갖는 것으로 확인된다. 일부 측면에서, 대상체로부터 수득된 혈청 샘플이 (본원에 개시된 임의의 방법을 이용하여 측정 시) 적어도 약 5 g/L 내지 적어도 약 30 g/L의 M-단백질을 갖는 것으로 결정되는 경우, 대상체는 형질 세포 질환, 예컨대, 다발성 골수종을 가질 위험이 있는 후보자로 확인된다. 일부 측면에서, 대상체로부터 수득된 혈청 샘플이 검출 한계 미만의 M-단백질 수준을 갖는 경우, 대상체는 형질 세포 질환, 예컨대 다발성 골수종을 갖지 않는 것으로 확인된다.
C. 형질 세포 질환 요법에 대한 반응성 측정 방법
M-단백질의 측정은 환자의 진단 뿐만 아니라 치료를 받고 있는 다발성 골수종 환자의 모니터링을 위해서도 필요하다. 그러나, 항-SLAMF7 항체와 같은 치료 모노클로날 항체로 치료되는 다발성 골수종 환자는 기존의 혈청 단백질 전기영동 (SPEP) 및 혈청 면역고정 전기영동 (SIFE) 검정을 이용하여 치료 반응을 모니터링할 때 잠재적인 약물 간섭을 갖는다. 현재의 M-단백질 시험은 임의의 잔류 M-단백질이 완전한 반응보다 낮은 반응을 나타내므로 완전한 완화 (CR) 환자를 모니터링할 수 없다.
본 개시내용의 특정 측면은 형질 세포 장애의 치료를 위한 요법에 대해 완전한 반응을 갖는 대상체를 확인하는 방법에 관한 것이며, 대상체로부터 수득된 생물학적 샘플에서 M 단백질을 측정하는 단계를 포함하고, 여기서 M 단백질은 (1) 생물학적 샘플 중의 면역글로불린 및 유리 경쇄를 면역포획에 의해 정제하고, (2) 정제된 면역글로불린 및 유리 경쇄를 액체 크로마토그래피 (LC) 질량 분광측정 (MS)에 적용함으로써 측정된다. 특정 측면에서, 본원에 개시된 방법은 M-단백질과 치료 항체를 구별할 수 있다.
일부 측면에서, 형질 세포 장애의 치료를 위한 요법은 사이클로포스파미드, 독소루비신, 에토포시드, 리포솜 독소루비신, 멜팔란, 빈크리스틴, 보르테조밉, 레날리도마이드, 카르필조밉, 포말리도마이드, 파노비노스타트, 탈리도마이드, 줄기 세포 이식, CAR-T 세포 요법 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
일부 측면에서, 형질 세포 장애의 치료를 위한 요법은 사이클로포스파미드를 포함한다. 일부 측면에서, 형질 세포 장애의 치료를 위한 요법은 독소루비신을 포함한다. 일부 측면에서, 형질 세포 장애의 치료를 위한 요법은 리포솜 독소루비신을 포함한다. 일부 측면에서, 형질 세포 장애의 치료를 위한 요법은 에토포시드를 포함한다. 일부 측면에서, 형질 세포 장애의 치료를 위한 요법은 멜팔란을 포함한다. 일부 측면에서, 형질 세포 장애의 치료를 위한 요법은 빈크리스틴을 포함한다. 일부 측면에서, 형질 세포 장애의 치료를 위한 요법은 보르테조밉을 포함한다. 일부 측면에서, 형질 세포 장애의 치료를 위한 요법은 레날리도마이드를 포함한다. 일부 측면에서, 형질 세포 장애의 치료를 위한 요법은 카르필조밉을 포함한다. 일부 측면에서, 형질 세포 장애의 치료를 위한 요법은 포말리도마이드를 포함한다. 일부 측면에서, 형질 세포 장애의 치료를 위한 요법은 파노비노스타트를 포함한다. 일부 측면에서, 형질 세포 장애의 치료를 위한 요법은 탈리도마이드를 포함한다. 일부 측면에서, 형질 세포 장애의 치료를 위한 요법은 조혈 줄기 세포 이식을 포함한다. 일부 측면에서, 형질 세포 장애의 치료를 위한 요법은 키메라 항원 수용체 T 세포 (CAR-T 세포) 요법을 포함한다.
일부 측면에서, 요법은 면역요법을 투여하는 것을 포함한다. 일부 측면에서, 요법은 치료 항체를 투여하는 것을 포함한다. 형질 세포 장애의 치료에 유용한 임의의 면역요법이 본원에 개시된 방법에 사용될 수 있다. 일부 측면에서, 요법은 항-SLAMF7 항체를 투여하는 것을 포함한다. 일부 측면에서, 면역요법은 체크포인트 억제제를 포함한다. 관련 기술분야에 공지된 임의의 체크포인트 억제제가 본원에 개시된 방법에 사용될 수 있다. 일부 측면에서, 체크포인트 억제제는 하나 이상의 체크포인트 단백질의 활성을 차단, 억제, 또는 감소시키는 임의의 시약이다. 일부 측면에서, 체크포인트 단백질은 PD-1, CTLA-4, LAG3, TIGIT, TIM3, NKG2a, OX40, ICOS, CD137, KIR, TGFβ, IL-10, IL-8, IL-2, CD96, VISTA, B7-H4, Fas 리간드, CXCR4, 메소텔린, CD27, GITR, 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 면역요법은 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함한다. 관련 기술분야에 공지된 항-PD-1 항체가 현재 기재된 조성물 및 방법에 사용될 수 있다. 고친화도로 PD-1에 특이적으로 결합하는 다양한 인간 모노클로날 항체가 미국 특허 번호 8,008,449에 개시되어 있다. 미국 특허 번호 8,008,449에 개시된 항-PD-1 인간 항체는 하기 특징 중 하나 이상을 나타내는 것으로 입증되었다: (a) 비아코어(Biacore) 바이오센서 시스템을 사용하여 표면 플라즈몬 공명에 의해 결정 시 1 x 10-7 M 이하의 KD로 인간 PD-1에 결합; (b) 인간 CD28, CTLA-4 또는 ICOS에 실질적으로 결합하지 않음; (c) 혼합 림프구 반응 (MLR) 검정에서 T-세포 증식 증가; (d) MLR 검정에서 인터페론-γ 생성 증가; (e) MLR 검정에서 IL-2 분비 증가; (f) 인간 PD-1 및 시노몰구스 원숭이 PD-1에 결합; (g) PD-1에 대한 PD-L1 및/또는 PD-L2 결합 억제; (h) 항원-특이적 기억 반응 자극; (i) 항체 반응 자극; (j) 생체내에서 종양 세포 성장 억제. 본 개시내용에서 사용 가능한 항-PD-1 항체는 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고 전술한 특징 중 적어도 하나, 일부 측면에서, 적어도 5개를 나타내는 모노클로날 항체를 포함한다.
다른 항-PD-1 모노클로날 항체는, 예컨대 미국 특허 번호 6,808,710, 7,488,802, 8,168,757 및 8,354,509, 미국 공개 번호 2016/0272708, 및 PCT 공개 번호 WO 2012/145493, WO 2008/156712, WO 2015/112900, WO 2012/145493, WO 2015/112800, WO 2014/206107, WO 2015/35606, WO 2015/085847, WO 2014/179664, WO 2017/020291, WO 2017/020858, WO 2016/197367, WO 2017/024515, WO 2017/025051, WO 2017/123557, WO 2016/106159, WO 2014/194302, WO 2017/040790, WO 2017/133540, WO 2017/132827, WO 2017/024465, WO 2017/025016, WO 2017/106061, WO 2017/19846, WO 2017/024465, WO 2017/025016, WO 2017/132825, 및 WO 2017/133540 (이들 각각은 전체가 참조로 포함됨)에 기재되어 있다.
일부 측면에서, 항-PD-1 항체는 니볼루맙 (또한 옵디보(OPDIVO)®, 5C4, BMS-936558, MDX-1106, 및 ONO-4538로 공지됨), 펨블로리주맙 (머크 (Merck); 또한 키트루다(KEYTRUDA)®, 람블로리주맙, 및 MK-3475로 공지됨; WO2008/156712 참조), PDR001 (노바르티스; WO 2015/112900 참조), MEDI-0680 (아스트라제네카 (AstraZeneca); 또한 AMP-514로 공지됨; WO 2012/145493 참조), 세미플리맙 (레게네론 (Regeneron); 또한 REGN-2810으로 공지됨; WO 2015/112800 참조), JS001 (타이즈호우 준시 파마 (TAIZHOU JUNSHI PHARMA); 또한 토리팔리맙으로 공지됨; 문헌 (Si-Yang Liu et al., J. Hematol. Oncol. 10:136 (2017)) 참조), BGB-A317 (베이젠 (Beigene); 또한 티슬렐리주맙으로 공지됨; WO 2015/35606 및 US 2015/0079109 참조), INCSHR1210 (지앙수 헨그루이 메디신 (Jiangsu Hengrui Medicine); 또한 SHR-1210으로 공지됨; 문헌 (WO 2015/085847; Si-Yang Liu et al., J. Hematol. Oncol. 10:136 (2017)) 참조), TSR-042 (테사로 바이오파마슈티칼 (Tesaro Biopharmaceutical); 또한 ANB011로 공지됨; WO2014/179664 참조), GLS-010 (윅시/하빈 글로리아 파마슈티칼스 (Wuxi/Harbin Gloria Pharmaceuticals); 또한 WBP3055로 공지됨; 문헌 (Si-Yang Liu et al., J. Hematol. Oncol. 10:136 (2017)) 참조), AM-0001 (아르모 (Armo)), STI-1110 (소렌토 쎄라피틱스 (Sorrento Therapeutics); WO 2014/194302 참조), AGEN2034 (아게누스 (Agenus); WO 2017/040790 참조), MGA012 (마크로제닉스 (Macrogenics), WO 2017/19846 참조), BCD-100 (바이오카드 (Biocad); 문헌 (Kaplon et al., mAbs 10(2):183-203 (2018)) 참조), 및 IBI308 (이노벤트 (Innovent); WO 2017/024465, WO 2017/025016, WO 2017/132825, 및 WO 2017/133540 참조)로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 측면에서, 체크포인트 억제제는 CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분이다. 일부 측면에서, 체크포인트 억제제는 LAG3에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분이다. 일부 측면에서, 체크포인트 억제제는 TIGIT에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분이다. 일부 측면에서, 체크포인트 억제제는 TIM3에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분이다. 일부 측면에서, 체크포인트 억제제는 NKG2a에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분이다. 일부 측면에서, 체크포인트 억제제는 OX40에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분이다. 일부 측면에서, 체크포인트 억제제는 ICOS에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분이다. 일부 측면에서, 체크포인트 억제제는 CD137에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분이다. 일부 측면에서, 체크포인트 억제제는 KIR에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분이다. 일부 측면에서, 체크포인트 억제제는 TGFβ에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분이다. 일부 측면에서, 체크포인트 억제제는 IL-10에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분이다. 일부 측면에서, 체크포인트 억제제는 IL-8에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분이다. 일부 측면에서, 체크포인트 억제제는 IL-2에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분이다. 일부 측면에서, 체크포인트 억제제는 CD96에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분이다. 일부 측면에서, 체크포인트 억제제는 VISTA에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분이다. 일부 측면에서, 체크포인트 억제제는 B7-H4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분이다. 일부 측면에서, 체크포인트 억제제는 Fas 리간드에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분이다. 일부 측면에서, 체크포인트 억제제는 CXCR4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분이다. 일부 측면에서, 체크포인트 억제제는 메소텔린에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분이다. 일부 측면에서, 체크포인트 억제제는 CD27에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분이다. 일부 측면에서, 체크포인트 억제제는 GITR에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분이다.
일부 측면에서, 면역요법은 CD40, CD56, CD38, CD229, CD200, CD28, CD19, BCMA, CD317, CD70, 및 B2M으로부터 선택되는 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함한다. 일부 측면에서, 면역요법은 CD40에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함한다. 일부 측면에서, 면역요법은 CD56에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함한다. 일부 측면에서, 면역요법은 CD38에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함한다. 일부 측면에서, 면역요법은 CD229에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함한다. 일부 측면에서, 면역요법은 CD200에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함한다. 일부 측면에서, 면역요법은 CD28에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함한다. 일부 측면에서, 면역요법은 CD19에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함한다. 일부 측면에서, 면역요법은 BCMA에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함한다. 일부 측면에서, 면역요법은 CD317에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함한다. 일부 측면에서, 면역요법은 CD70에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함한다. 일부 측면에서, 면역요법은 B2M에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함한다.
일부 측면에서, 대상체는 단일요법, 예컨대 항-PD-1 단일요법을 투여받고, 예컨대 여기서 대상체는 하나 이상의 추가의 항암제를 투여받지 않는다. 일부 측면에서, 대상체는 조합 요법을 투여받고, 예컨대 여기서 대상체는 제1 체크포인트 억제제, 예컨대 항-PD-1 항체, 및 하나 이상의 추가의 항암제를 투여받는다. 특정 측면에서, 대상체는 항-PD-1 항체 및 항-CTLA-4 항체를 포함하는 조합 요법을 투여받는다.
본 개시내용의 다른 측면에서, 항-PD-L1 항체는 항-PD-1 항체를 대체한다. 특정 측면에서, 방법은 항-PD-L1 항체를 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 측면에서, 대상체는 항-PD-L1 단일요법을 투여받는다. 일부 측면에서, 대상체는 항-PD-L1 항체 및 제2 항암제, 예컨대 항-CTLA-4 항체를 포함하는 조합 요법을 투여받는다.
일부 측면에서, 항체는 키메라, 인간화 또는 인간 모노클로날 항체 또는 이의 일부이다.
일부 측면에서, 요법은 측정 전에 투여된다. 일부 측면에서, 요법은 측정 시점에 진행 중이다. 일부 측면에서, 요법은 측정하기 적어도 하루 전에 투여된다. 일부 측면에서, 요법은 측정하기 적어도 2일, 적어도 3일, 적어도 4일, 적어도 5일, 적어도 6일, 적어도 1주, 적어도 2주, 또는 적어도 1개월 전에 투여된다. 일부 측면에서, 요법은 측정하기 1주 미만 전에 투여된다. 일부 측면에서, 요법은 측정하기 6일 미만, 5일 미만, 4일 미만, 3일 미만, 또는 2일 미만 전에 투여된다.
D. 면역글로불린 정제
본 개시내용의 특정 측면에서, 면역글로불린은 LC-MS 분석 전에 생물학적 샘플로부터 정제된다. 면역글로불린을 정제하기 위해 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법이 본원에 개시된 방법에 이용될 수 있다. 특정 측면에서, 면역글로불린은 리간드-결합 기술을 이용하여 생물학적 샘플로부터 정제된다. 면역글로불린의 리간드-결합 정제는 표적 면역글로불린을 농축하거나 정제하기 위해 표적 면역글로불린과 상호작용하는 포획 시약의 사용을 수반한다. 본원에 개시된 방법에서, 표적 면역글로불린은 M-단백질이며, 이는 IgG, IgA, IgM 및/또는 IgD 부류 면역글로불린에 속할 수 있는 M-단백질로 구성된 면역글로불린의 매우 다양한 집단일 수 있다. 추가로, M-단백질은 온전한 면역글로불린 분자 및/또는 면역글로불린 단편, 예컨대 벤스 존스 (Bence Jones) 단백질로도 공지된 유리 경쇄 (FLC)를 포함할 수 있다.
일부 측면에서, 포획 시약은 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 측면에서, 포획 시약은 하나 이상의 모노클로날 항체를 포함한다. 일부 측면에서, 포획 시약은 하나 이상의 폴리클로날 항체를 포함한다. 일부 측면에서, 포획 시약은 하나 이상의 모노클로날 항체 및 하나 이상의 폴리클로날 항체를 포함한다. 일부 측면에서, 포획 시약은 하나 이상의 나노바디를 포함한다. 일부 측면에서, 포획 시약은 항원, 예컨대 표적 면역글로불린에 의해 결합될 수 있는 폴리펩티드를 포함한다.
일부 측면에서, 단일 포획 시약을 사용하여 표적 면역글로불린 (예컨대, M-단백질)을 포획 및 정제한다. 일부 측면에서, 표적 면역글로불린 (예컨대, M-단백질)을 정제하기 위해 하나 초과의 포획 시약이 사용된다. 일부 측면에서, 표적 면역글로불린 (예컨대, M-단백질)을 정제하기 위해 여러 포획 시약이 사용된다. 일부 측면에서, 포획 시약은 면역글로불린의 표적 부류에 특이적이다. 일부 측면에서, 포획 시약은 IgG 부류 면역글로불린에 특이적이다. 일부 측면에서, 포획 시약은 IgA 부류 면역글로불린에 특이적이다. 일부 측면에서, 포획 시약은 IgM 부류 면역글로불린에 특이적이다. 일부 측면에서, 포획 시약은 IgD 부류 면역글로불린에 특이적이다.
일부 측면에서, 포획 시약은 일반 포획 시약이다. 본원에 사용된 "일반 포획 시약"은 하나 초과의 인간 면역글로불린에 결합할 수 있는 리간드 또는 다른 결합제이다. 일부 측면에서, 일반 포획 시약은 적어도 2가지 부류의 인간 면역글로불린에 결합할 수 있다. 일부 측면에서, 일반 포획 시약은 적어도 3가지 부류의 인간 면역글로불린에 결합할 수 있다. 일부 측면에서, 일반 포획 시약은 적어도 4가지 부류의 인간 면역글로불린에 결합할 수 있다. 일부 측면에서, 일반 포획 시약은 모든 공지된 부류의 인간 면역글로불린에 결합할 수 있다. 일부 측면에서, 일반 포획 시약은 IgG, IgA, IgM 및 IgD 부류 면역글로불린에 결합할 수 있다. 일부 측면에서, 일반 포획 시약은 온전한 면역글로불린 분자 및 면역글로불린 단편 (예컨대, 유리 경쇄) 모두에 결합할 수 있다.
특정 측면에서, 포획 시약은 면역글로불린 경쇄에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 측면에서, 포획 시약은 면역글로불린 경쇄 불변 영역에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 측면에서, 포획 시약은 면역글로불린 람다 경쇄에 특이적으로 결합하는 항체 ("항-람다 항체") 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 본원에 개시된 항-람다 항체를 포함하지만 이에 제한되지 않는 관련 기술분야에 공지된 인간 람다 경쇄에 특이적으로 결합할 수 있는 임의의 항-람다 항체가 본원에 개시된 방법에 사용될 수 있다. 일부 측면에서, 포획 시약은 면역글로불린 카파 경쇄에 특이적으로 결합하는 항체 ("항-카파 항체") 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 본원에 개시된 항-카파 항체를 포함하지만 이에 제한되지 않는 관련 기술분야에 공지된 인간 카파 경쇄에 특이적으로 결합할 수 있는 임의의 항-카파 항체가 본원에 개시된 방법에 사용될 수 있다. 일부 측면에서, 포획 시약은 항-람다 항체 및 항-카파 항체를 포함한다.
일부 측면에서, 항-람다 항체 대 항-카파 항체의 비율은 약 1:1, 약 1.5:1, 약 2:1, 약 2.5:1, 약 3:1, 약 3.5:1, 약 4:1 약, 약 4.5:1, 약 5:1 약, 약 6:1, 약 7:1 약, 약 8:1, 약 9:1 약, 또는 약 10:1이다. 일부 측면에서, 항-카파 항체 대 항-람다 항체의 비율은 약 1:1, 약 1.5:1, 약 2:1, 약 2.5:1, 약 3:1, 약 3.5:1, 약 4:1 약, 약 4.5:1, 약 5:1 약, 약 6:1, 약 7:1 약, 약 8:1, 약 9:1 약, 또는 약 10:1이다. 일부 측면에서, 항-람다 항체 대 항-카파 항체의 비율은 약 1:1이다. 특정 측면에서, 포획 시약은 친화성 매트릭스에 통합된다. 일부 측면에서, 친화성 매트릭스는 캡처실렉트(CAPTURESELECT)® 나노바디 수지(써모피셔)를 포함한다. 특정 측면에서, 친화성 매트릭스는 1:1 비율의 항-람다 항체 대 항-카파 항체를 포함하는 캡처실렉트® 나노바디 수지 (써모피셔)를 포함한다.
본 개시내용의 일부 측면에서, 친화성 시약, 예컨대 친화성 매트릭스는 컬럼에 패키징된다. 일부 측면에서, 컬럼은 자동화가 가능하다. 본원에 개시된 면역포획 방법에 의한 M-단백질 정제의 자동화는 검정 처리량 및 개선된 검정 재현성을 포함하지만 이에 제한되지 않는 여러 이점을 갖는다. 특정 측면에서, 컬럼은 팁 컬럼이다. 특정 측면에서, 컬럼은 피팁 컬럼 (피넥수스 (PHYNEXUS))이다. 특정 측면에서, 컬럼은 적어도 약 10 μg, 적어도 약 15 μg, 적어도 약 20 μg, 적어도 약 25 μg, 적어도 약 30 μg, 적어도 약 35 μg, 적어도 약 40 μg, 적어도 약 45 μg, 적어도 약 50 μg, 적어도 약 55 μg, 적어도 약 60 μg, 적어도 약 65 μg, 적어도 약 70 μg, 적어도 약 75 μg, 적어도 약 80 μg, 적어도 약 85 μg, 적어도 약 90 μg, 적어도 약 95 μg, 적어도 약 100 μg, 또는 적어도 약 150 μg의 면역글로불린을 로딩할 용량을 갖는다. 특정 측면에서, 컬럼은 적어도 약 10 μg, 적어도 약 15 μg, 적어도 약 20 μg, 적어도 약 25 μg, 적어도 약 30 μg, 적어도 약 35 μg, 적어도 약 40 μg, 적어도 약 45 μg, 적어도 약 50 μg, 적어도 약 55 μg, 적어도 약 60 μg, 적어도 약 65 μg, 적어도 약 70 μg, 적어도 약 75 μg, 또는 적어도 약 80 μg 적어도 약 85 μg, 적어도 약 90 μg, 적어도 약 95 μg, 적어도 약 100 μg, 또는 적어도 약 150 μg의 람다 면역글로불린을 로딩할 용량을 갖는다. 특정 측면에서, 컬럼은 적어도 약 10 μg, 적어도 약 15 μg, 적어도 약 20 μg, 적어도 약 25 μg, 적어도 약 30 μg, 적어도 약 35 μg, 적어도 약 40 μg, 적어도 약 45 μg, 적어도 약 50 μg, 적어도 약 55 μg, 적어도 약 60 μg, 적어도 약 65 μg, 적어도 약 70 μg, 적어도 약 75 μg, 또는 적어도 약 80 μg 적어도 약 85 μg, 적어도 약 90 μg, 적어도 약 95 μg, 적어도 약 100 μg, 또는 적어도 약 150 μg의 카파 면역글로불린을 로딩할 용량을 갖는다. 특정 측면에서, 컬럼은 적어도 약 40 μg의 람다 및 적어도 약 40 μg의 카파 면역글로불린을 로딩할 용량을 갖는다.
특정 측면에서, 컬럼은 다중채널 디바이스에 로딩된다. 일부 측면에서, 다중채널 디바이스는 다중 채널 피펫이다. 일부 측면에서, 다중채널 디바이스는 로봇 디바이스이다. 일부 측면에서, 다중채널 디바이스는 자동화가 가능한 로봇 디바이스이다. 일부 측면에서, 다중채널 디바이스는 프리덤 EVO(Freedom EVO)® 플랫폼이다. 일부 측면에서, 프리덤 EVO® 플랫폼은 96개의 채널이 장착되어 있다.
일부 측면에서, 컬럼은 단일 채널 디바이스, 예컨대 단일 채널 피펫에 로딩된다.
일부 측면에서, 정제된 면역글로불린은 경쇄 및 중쇄로 추가로 해리된다. 일부 측면에서, 정제된 면역글로불린은 화학적 환원에 의해 해리된다. 일부 측면에서, 정제된 면역글로불린은 변성제와 접촉된다. 일부 측면에서, 정제된 면역글로불린은 정제된 면역글로불린을 트리스 (2-카르복시에틸)포스핀 (TCEP); TCEP-HCl 및 다른 TCEP 염; DTT (2,3 디히드록시부탄-1,4-디티올), DTE (2,3 디히드록시부탄-1,4-디티올); 티오글리콜레이트; 술파이트; 비술파이트; 술파이드; 비술파이드; 2-메르캅토에탄올; 2-메르캅토에탄올-HCl; 결합-브레이커 TCEP 용액, 중성 pH; 시스테인-HCl; 구아니딘-HCl; 우레아; 또는 이들의 임의의 조합으로부터 선택되는 환원제와 접촉시킴으로써 해리된다. 일부 측면에서, 정제된 면역글로불린은 정제된 면역글로불린을 TCEP와 접촉시킴으로써 해리된다.
특정 측면에서, 정제된 면역글로불린은 환원제, 예컨대 TCEP에서 최종 농도가 적어도 약 1 mM 내지 적어도 약 100 mM인 환원제, 예컨대 TCEP에서 인큐베이션함으로써 환원된다. 일부 측면에서, 정제된 면역글로불린은 환원제, 예컨대 TCEP에서 최종 농도가 적어도 약 10 mM 내지 적어도 약 100 mM, 적어도 약 20 mM 내지 적어도 약 100 mM, 적어도 약 30 mM 내지 적어도 약 100 mM, 적어도 약 40 mM 내지 적어도 약 100 mM, 적어도 약 50 mM 내지 적어도 약 100 mM, 적어도 약 2 mM 내지 적어도 약 30 mM, 적어도 약 3 mM 내지 적어도 약 30 mM, 적어도 약 4 mM 내지 적어도 약 30 mM, 적어도 약 5 mM 내지 적어도 약 30 mM, 적어도 약 6 mM 내지 적어도 약 30 mM, 적어도 약 7 mM 내지 적어도 약 30 mM, 적어도 약 8 mM 내지 적어도 약 30 mM, 적어도 약 9 mM 내지 적어도 약 30 mM, 적어도 약 10 mM 내지 적어도 약 30 mM, 적어도 약 15 mM 내지 적어도 약 30 mM, 적어도 약 20 mM 내지 적어도 약 30 mM, 적어도 약 10 mM 내지 적어도 약 25 mM, 적어도 약 10 mM 내지 적어도 약 20 mM, 적어도 약 15 mM 내지 적어도 약 25 mM, 또는 적어도 약 15 mM 내지 적어도 약 20 mM인 환원제, 예컨대 TCEP에서 인큐베이션함으로써 환원된다. 특정 측면에서, 정제된 면역글로불린은 환원제, 예컨대 TCEP에서 최종 농도가 적어도 약 10 mM, 적어도 약 mM, 적어도 약 11 mM, 적어도 약 12 mM, 적어도 약 13 mM, 적어도 약 14 mM, 적어도 약 15 mM, 적어도 약 16 mM, 적어도 약 17 mM, 적어도 약 18 mM, 적어도 약 19 mM, 적어도 약 20 mM, 적어도 약 21 mM, 적어도 약 22 mM, 적어도 약 23 mM, 적어도 약 24 mM, 적어도 약 25 mM, 적어도 약 26 mM, 적어도 약 27 mM, 적어도 약 28 mM, 적어도 약 29 mM, 또는 적어도 약 30 mM인 환원제, 예컨대 TCEP에서 인큐베이션함으로써 환원된다. 특정 측면에서, 정제된 면역글로불린은 환원제, 예컨대 TCEP에서 최종 농도가 적어도 약 20 mM인 환원제, 예컨대 TCEP에서 인큐베이션함으로써 환원된다.
일부 측면에서, 정제된 면역글로불린은 TCEP에서 적어도 약 20℃ 내지 적어도 약 30℃에서 인큐베이션함으로써 환원된다. 일부 측면에서, 정제된 면역글로불린은 TCEP에서 적어도 약 21℃ 내지 적어도 약 29℃, 적어도 약 22℃ 내지 적어도 약 28℃, 적어도 약 23℃ 내지 적어도 약 27℃, 또는 적어도 약 24℃ 내지 적어도 약 26℃에서 인큐베이션함으로써 환원된다. 일부 측면에서, 정제된 면역글로불린은 TCEP에서 적어도 적어도 약 20℃, 적어도 약 21℃, 적어도 약 22℃, 적어도 약 23℃, 적어도 약 24℃, 적어도 약 25℃, 적어도 약 26℃, 적어도 약 27℃, 적어도 약 28℃, 적어도 약 29℃, 또는 적어도 약 30에서 인큐베이션함으로써 환원된다. 일부 측면에서, 정제된 면역글로불린은 TCEP에서 약 20℃에서 인큐베이션함으로써 환원된다.
일부 측면에서, 정제된 면역글로불린은 TCEP에서 적어도 약 20 내지 적어도 약 30분, 적어도 약 21 내지 적어도 약 30분, 적어도 약 22 내지 적어도 약 30분, 적어도 약 23 내지 적어도 약 30분, 적어도 약 24 내지 적어도 약 30분, 적어도 약 25 내지 적어도 약 30분, 적어도 약 26 내지 적어도 약 30분, 적어도 약 27 내지 적어도 약 30분, 적어도 약 28 내지 적어도 약 30분, 적어도 약 29 내지 적어도 약 30분, 적어도 약 20 내지 적어도 약 29분, 적어도 약 20 내지 적어도 약 28분, 적어도 약 20 내지 적어도 약 27분, 적어도 약 20 내지 적어도 약 26분, 적어도 약 20 내지 적어도 약 25분, 적어도 약 20 내지 적어도 약 24분, 적어도 약 20 내지 적어도 약 23분, 적어도 약 20 내지 적어도 약 22분, 적어도 약 20 내지 적어도 약 21분, 적어도 약 21 내지 적어도 약 29분, 적어도 약 22 내지 적어도 약 28분, 적어도 약 23 내지 적어도 약 27분, 또는 적어도 약 24 내지 적어도 약 26분 동안 인큐베이션함으로써 환원된다. 용출된 샘플은 100 mM 완충된 TCEP 용액을 20 mM의 최종 농도로 첨가한 후 25℃에서 30분 동안 인큐베이션하여 즉시 환원되었다.
일부 측면에서, 정제된 면역글로불린은 정제 직후에 환원된다. 일부 측면에서, 정제된 단백질은 환원 전 일정 기간 동안 저장된다.
E. 액체 크로마토그래피 - 질량 분광측정 (LC-MS)
질량 분광측정 (MS)은 소분자, 거대분자 및 혼합 모드 바이오-중합체 샘플의 정성적 및 정량적 분석을 모두 수행하는 수단이다. MS는 약물 발견, 합성 반응 모니터링, 및 나노-입자 특징규명을 포함한 다양한 상이한 적용에서 성공적으로 사용되었다. MS는 샘플에 대한 전체 서비스를 제공하며, 방법 개발, 검증 및 시험 샘플 분석의 실시를 가능하게 한다.
본 개시내용에 유용한 MS 시스템은 일반적으로 하기 비제한적인 능력 중 하나 이상을 제공한다: 펩티드/단백질 분자량 결정; 정확한 질량 분석/분자식 검증; LC-UV-MS를 이용한 샘플의 순도 분석; 유동 주입 또는 UPLC 분리로 복잡한 혼합물의 정확한 질량 분석; 생물학적 또는 환경적 샘플에서 유기 화합물 정량화; 올리고뉴클레오티드 분자량 결정; 질량 분광측정에 의한 이미징; 임상 약리학 및 신속한 약동학 (PK) 분석; 또는 이들의 임의의 조합.
정성적 및 정량적 분석에 사용되는 많은 상이한 유형의 고분해능 MS 기기가 있으며, 이들 중 임의의 것이 본원에 개시된 방법에 사용될 수 있다. MS 기기의 비제한적인 예는 브루커 막시스 (Bruker Maxis) 또는 임팩트 시스템스 (Impact systems), AB사이엑스 트리플TOF (ABSciex TripleTOF) 5600/6600, AB사이엑스 X500R, 아질런트 (Agilent) 6545XT, 워터스 제보(Waters Xevo)® G2 TOF 또는 임의의 다른 모델을 포함한다.
본 개시내용의 특정 측면은 샘플을 액체 크로마토그래피 (LC)에 이어 MS에 적용함으로써 생물학적 샘플에서 M-단백질을 측정하는 방법에 관한 것이다. MS와 LC의 조합 기술은 일반적으로 LC-MS로 공지되어 있다. LC와 MS의 조합은 실험 오차를 줄이고 정확도를 향상시킨다. 일부 측면에서, LC-MS의 LC는 고성능 LC (HPLC)를 포함한다. 일부 측면에서, 면역글로불린은 먼저 면역포획에 의해 정제되고, 이어서 정제된 면역글로불린은 화학적 환원에 의해 해리되고, 이어서 정제되고, 해리된 면역글로불린은 LC-MS에 적용된다. 일부 측면에서, 정제되고 해리된 면역글로불린은 LC-MS에 적용된다.
LC-MS는 혼합물을 물리적 및 화학적 특성에 따라 분리한 다음, 각각의 피크 내의 성분을 확인하고, 질량 스펙트럼을 기반으로 하여 검출하는 수단을 제공한다. 일부 측면에서, LC-MS에서 사용되는 유속은 HPLC에 전형적으로 사용되는 것 미만이다. HPLC보다 낮은 유속을 유지하면 완전한 이온화 가능성이 증가하고, 200 μL/분 이상으로 감소하기 시작하는 MS의 검출 민감도를 유지할 수 있다. 일부 측면에서, LC-MS에 사용되는 컬럼은 더 작은 용매 유속 및 샘플 부피를 수용하기 위해 HPLC에 전형적으로 사용되는 컬럼보다 작다. 일부 측면에서, 주사기 펌프가 LC-MS에 사용된다. 주사기 펌프는 낮은 유속에서도 매우 정확한 전달을 가능하게 한다.
특정 측면에서, LC-MS는 액퀴티 UPLC H-클래스 플러스 바이오 시스템 (Acquity UPLC H-Class Plus Bio System)을 포함한다. 액퀴티 UPLC H-클래스 플러스 바이오 시스템은 전형적으로 UPLC 기술로부터 예상되는 고분해, 고민감도 분리를 제공한다. 또한, 이 시스템은 크기 배제 (SEC) 또는 역상 (RP)을 포함하지만 이에 제한되지 않는 필요한 모든 크로마토그래피 모드를 실행하기 위한 유연성 및 견고성을 허용한다. 이 시스템은 또한 기존의 모든 HPLC, UHPLC 및 UPLC 방법을 지원한다. 액퀴티 UPLC H-클래스 플러스 바이오 시스템은 비-스테인리스-스틸 재료로 제조된 바이오-불활성 유로를 포함한다. 이는 더 우수한 샘플 회수 및 캐리오버 (carryover) 없음을 위해 큰 분자를 온전하게 유지하고 이동하게 한다.
일부 측면에서, LC-MS는 LC 컬럼을 포함한다. 일부 측면에서, LC 컬럼은 C3 컬럼이다. 일부 측면에서, LC 컬럼은 C4 컬럼이다. 본 개시내용에 유용한 C4 컬럼의 예는 액퀴티 단백질 BEH C4 300Å, 1.7 μm, 2.1 mm x 100 mm (워터스 코포레이션 (Waters Corporation), 매사추세츠주); 엑스브리지 OBD 프렙 컬럼 역상 5 μm (XBridge OBD Prep Column Reversed-Phase 5 μm) (워터스 코포레이션), 에어리스 와이드포어 3.6u C4 (Aeris WIDEPORE 3.6u C4) (페노메넥스 (Phenomenex)); 조르박스 SB-C3, 80Å, 5 μm (ZORBAX SB-C3, 80Å, 5 μm) (아질런트); 및 포로쉘 300SB-C3 (Poroshell 300SB-C3) (아질런트)을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 특정 측면에서, LC-MS는 C4 컬럼이 장착된 액퀴티 UPLC H-클래스 플러스 바이오 시스템을 포함한다. 일부 측면에서, 컬럼 온도가 약 70℃ 내지 약 90℃, 약 70℃ 내지 약 85℃, 약 70℃ 내지 약 80℃, 약 70℃ 내지 약 75℃, 약 75℃ 내지 약 90℃, 약 75℃ 내지 약 85℃, 약 75℃ 내지 약 80℃, 약 80℃ 내지 약 90℃, 또는 약 85℃ 내지 약 90℃로 설정된 컬럼, 예컨대 C4 컬럼에 샘플이 주입된다. 일부 측면에서, 컬럼 온도는 약 75℃ 내지 약 85℃로 설정된다. 일부 측면에서, 컬럼 온도는 약 75℃ 내지 약 80℃로 설정된다. 일부 측면에서, 컬럼 온도는 약 70℃, 약 71℃, 약 72℃, 약 73℃, 약 74℃, 약 75℃, 약 76℃, 약 77℃, 약 78℃, 약 79℃, 약 80℃, 약 81℃, 약 82℃, 약 83℃, 약 84℃, 약 85℃, 약 86℃, 약 87℃, 약 88℃, 약 89℃, 또는 약 90℃로 설정된다. 일부 측면에서, 샘플은 컬럼 온도가 약 75℃로 설정된 컬럼, 예컨대 C4 컬럼에 주입된다. 일부 측면에서, 샘플은 컬럼 온도가 약 76℃로 설정된 컬럼, 예컨대 C4 컬럼에 주입된다. 일부 측면에서, 샘플은 컬럼 온도가 약 77℃로 설정된 컬럼, 예컨대 C4 컬럼에 주입된다. 일부 측면에서, 샘플은 컬럼 온도가 약 78℃로 설정된 컬럼, 예컨대 C4 컬럼에 주입된다. 일부 측면에서, 샘플은 컬럼 온도가 약 79℃로 설정된 컬럼, 예컨대 C4 컬럼에 주입된다. 일부 측면에서, 샘플은 컬럼 온도가 약 80℃로 설정된 컬럼, 예컨대 C4 컬럼에 주입된다.
일부 측면에서, 이동상은 이동상 A 및 이동상 B를 포함한다. 일부 측면에서, 이동상 A는 물 중 약 0.01% 내지 약 1.0%, 약 0.02% 내지 약 0.9%, 약 0.03% 내지 약 0.8%, 약 0.04% 내지 약 0.7%, 약 0.05% 내지 약 0.6%, 약 0.06% 내지 약 0.5%, 약 0.07% 내지 약 0.4%, 약 0.08% 내지 약 0.3%, 약 0.09% 내지 약 0.2%, 약 0.1% 내지 약 0.2%, 약 0.01% 내지 약 0.2%, 약 0.02% 내지 약 0.2%, 약 0.03% 내지 약 0.2%, 약 0.04% 내지 약 0.2%, 약 0.05% 내지 약 0.2%, 약 0.06% 내지 약 0.2%, 약 0.07% 내지 약 0.2%, 약 0.08% 내지 약 0.2%, 약 0.09% 내지 약 0.2%, 약 0.01% 내지 약 0.19%, 약 0.02% 내지 약 0.18%, 약 0.03% 내지 약 0.17%, 약 0.04% 내지 약 0.16%, 약 0.05% 내지 약 0.15%, 약 0.06% 내지 약 0.14%, 약 0.07% 내지 약 0.18%, 약 0.08% 내지 약 0.12%, 약 0.09% 내지 약 0.11%, 약 0.05% 내지 약 0.1%, 또는 약 0.1% 내지 약 0.15% 포름산 (FA)을 포함한다. 일부 측면에서, 이동상 A는 물 중 약 0.05% 내지 약 0.15% FA를 포함한다. 일부 측면에서, 이동상 A는 물 중 약 0.05%, 약 0.06%, 약 0.07%, 약 0.08%, 약 0.09%, 약 0.10%, 약 0.11%, 약 0.12%, 약 0.13%, 약 0.14%, 또는 약 0.15% FA를 포함한다. 일부 측면에서, 이동상 A는 물 중 약 0.1% FA를 포함한다.
일부 측면에서, 이동상 B는 아세토니트릴 중 약 0.01% 내지 약 1.0%, 약 0.02% 내지 약 0.9%, 약 0.03% 내지 약 0.8%, 약 0.04% 내지 약 0.7%, 약 0.05% 내지 약 0.6%, 약 0.06% 내지 약 0.5%, 약 0.07% 내지 약 0.4%, 약 0.08% 내지 약 0.3%, 약 0.09% 내지 약 0.2%, 약 0.1% 내지 약 0.2%, 약 0.01% 내지 약 0.2%, 약 0.02% 내지 약 0.2%, 약 0.03% 내지 약 0.2%, 약 0.04% 내지 약 0.2%, 약 0.05% 내지 약 0.2%, 약 0.06% 내지 약 0.2%, 약 0.07% 내지 약 0.2%, 약 0.08% 내지 약 0.2%, 약 0.09% 내지 약 0.2%, 약 0.01% 내지 약 0.19%, 약 0.02% 내지 약 0.18%, 약 0.03% 내지 약 0.17%, 약 0.04% 내지 약 0.16%, 약 0.05% 내지 약 0.15%, 약 0.06% 내지 약 0.14%, 약 0.07% 내지 약 0.18%, 약 0.08% 내지 약 0.12%, 약 0.09% 내지 약 0.11%, 약 0.05% 내지 약 0.1%, 또는 약 0.1% 내지 약 0.15% 포름산 (FA)을 포함한다. 일부 측면에서, 이동상 B는 아세토니트릴 중 약 0.05% 내지 약 0.15% FA를 포함한다. 일부 측면에서, 이동상 B는 아세토니트릴 중 약 0.05%, 약 0.06%, 약 0.07%, 약 0.08%, 약 0.09%, 약 0.10%, 약 0.11%, 약 0.12%, 약 0.13%, 약 0.14%, 또는 약 0.15% FA를 포함한다. 일부 측면에서, 이동상 B는 아세토니트릴 중 약 0.1% FA를 포함한다.
일부 측면에서, 구배 분리 프로그램은 하기와 같이 사용된다: 0-1.0분 10% 이동상 B; 1.1-3.0분 10-33% 이동상 B 3.0-10.0분 33-40% 이동상 B; 10.1-10.5분 40-90% 이동상 B; 90% 이동상 B에서 10.5-13.0분 유지; 13.0-15.0분 90-10% 이동상 B; 및 15.0분에 실행 정지. 구배 분리 프로그램을 통해 사용자는 하나 이상의 이동상의 시간 및 전달량을 설정하고 원하는 설정으로 실행하고 분석을 적절하게 종료할 수 있다.
일부 측면에서, 유속 (즉, 분당 기기에 의해 전달되는 이동상(들)의 양 (부피))은 약 0.025 mL/분 내지 약 1.0 mL/분, 약 0.05 mL/분 내지 약 1.0 mL/분, 약 0.075 mL/분 내지 약 1.0 mL/분, 약 0.025 mL/분 내지 약 0.9 mL/분, 약 0.025 mL/분 내지 약 0.8 mL/분, 약 0.025 mL/분 내지 약 0.7 mL/분, 약 0.025 mL/분 내지 약 0.6 mL/분, 약 0.025 mL/분 내지 약 0.5 mL/분, 약 0.1 mL/분 내지 약 0.9 mL/분, 0.1 mL/분 내지 약 0.8 mL/분, 0.1 mL/분 내지 약 0.7 mL/분, 0.1 mL/분 내지 약 0.6 mL/분, 0.1 mL/분 내지 약 0.5 mL/분, 0.1 mL/분 내지 약 0.4 mL/분, 0.1 mL/분 내지 약 0.3 mL/분, 0.2 mL/분 내지 약 0.9 mL/분, 0.2 mL/분 내지 약 0.8 mL/분, 0.2 mL/분 내지 약 0.7 mL/분, 0.2 mL/분 내지 약 0.6 mL/분, 0.2 mL/분 내지 약 0.5 mL/분, 0.2 mL/분 내지 약 0.4 mL/분, 0.2 mL/분 내지 약 0.3 mL/분, 0.3 mL/분 내지 약 0.9 mL/분, 0.3 mL/분 내지 약 0.8 mL/분, 0.3 mL/분 내지 약 0.7 mL/분, 0.3 mL/분 내지 약 0.6 mL/분, 0.3 mL/분 내지 약 0.5 mL/분, 또는 0.3 mL/분 내지 약 0.4 mL/분으로 설정된다. 일부 측면에서, 유속은 약 0.1 mL/분 내지 0.5 mL/분으로 설정된다. 일부 측면에서, 유속은 약 0.025 mL/분, 약 0.05 mL/분, 약 0.075 mL/분, 약 0.1 mL/분, 약 0.2 mL/분, 약 0.25 mL/분, 약 0.26 mL/분, 약 0.27 mL/분, 약 0.28 mL/분, 약 0.29 mL/분, 약 0.30 mL/분, 약 0.31 mL/분, 약 0.32 mL/분, 약 0.33 mL/분, 약 0.34 mL/분, 또는 약 0.35 mL/분으로 설정된다. 일부 측면에서, 유속은 약 0.3 mL/분으로 설정된다.
일부 측면에서, 주입 부피 (즉, 각각의 실행을 위해 기기에 주입된 샘플의 양 (부피))는 약 1.0 μL 내지 약 3.0 μL, 약 1.0 μL 내지 약 2.5 μL, 약 1.0 μL 내지 약 2.0 μL, 약 1.0 μL 내지 약 1.5 μL, 약 1.5 μL 내지 약 3.0 μL, 약 2.0 μL 내지 약 3.0 μL, 약 2.5 μL 내지 약 3.0 μL, 또는 약 1.5 μL 내지 약 2.5 μL이다. 일부 측면에서, 주입 부피는 약 1.5 μL 내지 약 2.5 μL이다. 일부 측면에서, 주입 부피는 약 1.0 μL, 약 1.5 μL, 약 2.0 μL, 약 2.5 μL, 또는 약 3.0 μL이다. 일부 측면에서, 주입 부피는 약 2.0 μL이다.
일부 측면에서, LC는 MS와 온-라인이다. 일부 측면에서, 면역글로불린은 고성능 액체 크로마토그래피 컬럼 (HPLC)에서 분리된 후 MS에 의해 직접적으로 분석된다. 일부 측면에서, MS는 비행 시간 MS 고분해능 기기를 포함한다. 일부 측면에서, MS는 비행 시간 MS를 포함한다. 일부 측면에서, MS는 레이저 탈착 이온화 (MALDI) MS를 포함한다. 특정 측면에서, MS는 MALDI TOF MS를 포함한다. 특정 측면에서, MS는 막시스 4G Q-TOF (Maxis 4G Q-TOF) (일명 UHR) 기기를 포함한다. 일부 측면에서, MS는 MALDI MS를 포함하지 않는다. 일부 측면에서, MS는 마이크로플로우 MS를 포함하지 않는다. 일부 측면에서 막시스 4G Q-TOF는 표준 전기분무 (ESI) 아폴로-소스 (Apollo-source) (브루커 달토닉스 (Bruker Daltonics), 독일 함부르크)를 포함한다. 일부 측면에서, 기기는, 예컨대 ESI-L 저농도 튜닝 믹스 (아질런트 테크놀로지스 (Agilent Technologies), 캘리포니아주)를 주입함으로써 보정된다. 일부 측면에서, 각각의 15분 실행은 하기와 같이 분할된다: 폐기 세그먼트, 소스 세그먼트, 및 추가 폐기 세그먼트. 일부 측면에서, 각각의 15분 실행은 하기와 같이 분할된다: 폐기에 약 3분, 이어서 소스에 약 7분, 및 폐기에 마지막 약 5분.
일부 측면에서, 모세관 전압 (즉, 전기분무에 인가된 전압)은 약 4000 V 내지 약 6000 V, 약 4000 V 내지 약 5900 V, 약 4000 V 내지 약 5800 V, 약 4000 V 내지 약 5700 V, 4000 V 내지 약 5600 V, 4000 V 내지 약 5500 V, 4000 V 내지 약 5400 V, 4000 V 내지 약 5300 V, 4000 V 내지 약 5200 V, 4000 V 내지 약 5100 V, 4000 V 내지 약 5000 V, 4000 V 내지 약 4900 V, 4000 V 내지 약 4800 V, 4000 V 내지 약 4700 V, 약 4000 V 내지 약 4600 V, 약 4000 V 내지 약 4500 V, 약 4000 V 내지 약 4400 V, 약 4000 V 내지 약 4300 V, 약 4000 V 내지 약 4200 V, 약 4000 V 내지 약 4100 V, 약 4100 V 내지 약 5000 V, 약 4200 V 내지 약 5000 V, 약 4300 V 내지 약 5000 V, 약 4400 V 내지 약 5000 V, 약 4500 V 내지 약 5000 V, 약 4600 V 내지 약 5000 V, 약 4700 V 내지 약 5000 V, 약 4800 V 내지 약 5000 V, 약 4900 V 내지 약 5000 V, 약 4100 V 내지 약 4900 V, 약 4200 V 내지 약 4800 V, 약 4300 V 내지 약 4700 V, 또는 약 4400 V 내지 약 4600 V로 설정된다. 일부 측면에서, 모세관 전압은 약 4000 V, 약 4100 V, 약 4200 V, 약 4300 V, 약 4400 V, 약 4500 V, 4600 V, 약 4700 V, 약 4800 V, 약 4900 V, 또는 약 5000 V로 설정된다. 일부 측면에서, 모세관 전압은 약 4500 V로 설정된다.
일부 측면에서, 분무기 (즉, 액체를 미세한 미스트로 전환시키는 장치)는 약 1.0 bar 내지 약 2.2 bar, 약 1.0 bar 내지 약 2.1 bar, 약 1.0 bar 내지 약 2.0 bar, 약 1.0 bar 내지 약 1.9 bar, 약 1.0 bar 내지 약 1.8 bar, 약 1.0 bar 내지 약 1.7 bar, 약 1.0 bar 내지 약 1.6 bar, 약 1.0 bar 내지 약 1.5 bar, 약 1.0 bar 내지 약 1.4 bar, 약 1.0 bar 내지 약 1.3 bar, 약 1.0 bar 내지 약 1.2 bar, 약 1.0 bar 내지 약 1.1 bar, 약 1.0 bar 내지 약 2.2 bar, 약 1.1 bar 내지 약 2.2 bar, 약 1.2 bar 내지 약 2.2 bar, 약 1.3 bar 내지 약 2.2 bar, 약 1.4 bar 내지 약 2.2 bar, 약 1.5 bar 내지 약 2.2 bar, 약 1.6 bar 내지 약 2.2 bar, 약 1.7 bar 내지 약 2.2 bar, 약 1.8 bar 내지 약 2.2 bar, 약 1.9 bar 내지 약 2.2 bar, 약 2.0 bar 내지 약 2.2 bar, 약 2.1 bar 내지 약 2.2 bar, 약 1.1 bar 내지 약 2.1 bar, 약 1.2 bar 내지 약 2.0 bar, 약 1.3 bar 내지 약 1.9 bar, 약 1.4 bar 내지 약 1.8 bar, 약 1.5 bar 내지 약 1.7 bar, 또는 약 1.5 bar 내지 약 2.0 bar로 설정된다. 일부 측면에서, 분무기는 약 1.0 bar, 약 1.1 bar, 약 1.2 bar, 약 1.3 bar, 약 1.4 bar, 약 1.5 bar, 약 1.6 bar, 약 1.7 bar, 약 1.8 bar, 약 1.9 bar, 약 2.0 bar, 약 2.1 bar, 또는 약 2.2 bar로 설정된다. 일부 측면에서, 분무기는 약 1.6 bar로 설정된다.
일부 측면에서, 건조 기체 (즉, 고등굽, 저수분 기체)는 약 7.5 L/분 내지 약 9.5 L/분, 약 7.6 L/분 내지 약 9.5 L/분, 약 7.7 L/분 내지 약 9.5 L/분, 약 7.8 L/분 내지 약 9.5 L/분, 약 7.9 L/분 내지 약 9.5 L/분, 약 8.0 L/분 내지 약 9.5 L/분, 약 8.1 L/분 내지 약 9.5 L/분, 약 8.2 L/분 내지 약 9.5 L/분, 약 8.3 L/분 내지 약 9.5 L/분, 약 8.4 L/분 내지 약 9.5 L/분, 약 8.5 L/분 내지 약 9.5 L/분, 약 8.6 L/분 내지 약 9.5 L/분, 약 8.7 L/분 내지 약 9.5 L/분, 약 8.8 L/분 내지 약 9.5 L/분, 약 8.9 L/분 내지 약 9.5 L/분, 약 9.0 L/분 내지 약 9.5 L/분, 약 9.1 L/분 내지 약 9.5 L/분, 약 9.2 L/분 내지 약 9.5 L/분, 약 9.3 L/분 내지 약 9.5 L/분, 약 9.4 L/분 내지 약 9.5 L/분, 약 7.5 L/분 내지 약 9.4 L/분, 약 7.5 L/분 내지 약 9.3 L/분, 약 7.5 L/분 내지 약 9.2 L/분, 약 7.5 L/분 내지 약 9.1 L/분, 약 7.5 L/분 내지 약 9.0 L/분, 약 7.5 L/분 내지 약 8.9 L/분, 약 7.5 L/분 내지 약 8.8 L/분, 약 7.5 L/분 내지 약 8.7 L/분, 약 7.5 L/분 내지 약 8.6 L/분, 약 7.5 L/분 내지 약 8.5 L/분, 약 7.5 L/분 내지 약 8.4 L/분, 약 7.5 L/분 내지 약 8.3 L/분, 약 7.5 L/분 내지 약 8.2 L/분, 약 7.5 L/분 내지 약 8.1 L/분, 약 7.5 L/분 내지 약 8.0, 약 7.5 L/분 내지 약 7.9 L/분, 약 7.5 L/분 내지 약 7.8 L/분, 약 7.5 L/분 내지 약 7.7 L/분, 약 7.5 L/분 내지 약 7.6 L/분, 약 7.6 L/분 내지 약 9.4 L/분, 약 7.7 L/분 내지 약 9.3 L/분, 약 7.8 L/분 내지 약 9.2 L/분, 약 7.9 L/분 내지 약 9.1 L/분, 약 8.0 L/분 내지 약 9.0 L/분, 약 8.1 L/분 내지 약 8.9 L/분, 약 8.2 L/분 내지 약 8.8 L/분, 약 8.3 L/분 내지 약 8.7 L/분, 또는 약 8.4 L/분 내지 약 8.6 L/분로 설정된다. 일부 측면에서, 건조 기체는 약 8.0 L/분, 약 8.1 L/분, 약 8.2 L/분, 약 8.3 L/분, 약 8.4 L/분, 약 8.5 L/분, 약 8.6 L/분, 약 8.7 L/분, 약 8.8 L/분, 약 8.9 L/분, 또는 약 9.0 L/분으로 설정된다. 일부 측면에서, 건조 기체는 약 8.5 L/분으로 설정된다.
일부 측면에서, 건조 온도 (즉, 방사선 및 습기로부터 차폐된 공기 온도)는 약 175℃ 내지 약 225℃, 약 180℃ 내지 약 225℃, 약 185℃ 내지 약 225℃, 약 190℃ 내지 약 225℃, 약 195℃ 내지 약 225℃, 약 200℃ 내지 약 225℃, 약 205℃ 내지 약 225℃, 약 210℃ 내지 약 225℃, 약 215℃ 내지 약 225℃, 약 220℃ 내지 약 225℃, 약 175℃ 내지 약 220℃, 약 175℃ 내지 약 215℃, 약 175℃ 내지 약 210℃, 약 175℃ 내지 약 205℃, 약 175℃ 내지 약 200℃, 약 175℃ 내지 약 195℃, 약 175℃ 내지 약 190℃, 약 175℃ 내지 약 185℃, 약 175℃ 내지 약 180℃, 약 180℃ 내지 약 220℃, 약 185℃ 내지 약 215℃, 약 190℃ 내지 약 210℃, 또는 약 195℃ 내지 약 205℃로 설정된다. 일부 측면에서, 건조 온도는 약 175℃, 약 180℃, 약 185℃, 약 190℃, 약 195℃, 약 200℃, 약 205℃, 약 210℃, 약 215℃, 약 220℃, 또는 약 225℃로 설정된다. 일부 측면에서, 건조 온도는 약 200℃로 설정된다.
일부 측면에서, 전달 펀넬 무선 주파수 (RF) 및/또는 다중극 RF 파라미터는 약 350 Vpp 내지 약 450 Vpp, 약 360 Vpp 내지 약 450 Vpp, 약 370 Vpp 내지 약 450 Vpp, 약 380 Vpp 내지 약 450 Vpp, 약 390 Vpp 내지 약 450 Vpp, 약 400 Vpp 내지 약 450 Vpp, 약 410 Vpp 내지 약 450 Vpp, 약 420 Vpp 내지 약 450 Vpp, 약 430 Vpp 내지 약 450 Vpp, 약 440 Vpp 내지 약 450 Vpp, 약 350 Vpp 내지 약 440 Vpp, 약 350 Vpp 내지 약 435 Vpp, 약 350 Vpp 내지 약 430 Vpp, 약 350 Vpp 내지 약 420 Vpp, 약 350 Vpp 내지 약 410 Vpp, 약 350 Vpp 내지 약 400 Vpp, 약 350 Vpp 내지 약 390 Vpp, 약 350 Vpp 내지 약 380 Vpp, 약 350 Vpp 내지 약 370 Vpp, 약 350 Vpp 내지 약 360 Vpp, 약 360 Vpp 내지 약 440 Vpp, 약 370 Vpp 내지 약 430 Vpp, 약 380 Vpp 내지 약 420 Vpp, 또는 약 390 Vpp 내지 약 410 Vpp로 설정된다. 일부 측면에서, 전달 펀넬 RF 및/또는 다중극 RF 파라미터는 약 350 Vpp, 약 360 Vpp, 약 370 Vpp, 약 380 Vpp, 약 390 Vpp, 약 400 Vpp, 약 410 Vpp, 약 420 Vpp, 약 430 Vpp, 약 440 Vpp, 또는 약 450 Vpp로 설정된다. 일부 측면에서, 전달 펀넬 RF 및/또는 다중극 RF 파라미터는 약 400 Vpp로 설정된다.
일부 측면에서, 소스 내 충돌 유도된 해리 (isCID) 에너지가 적용된다. 일부 측면에서, isCID 에너지가 적용되지 않는다. isCID는 기체상에서 선택된 이온의 단편화를 유도하는 질량 분광측정 기술이다. 선택된 이온 (전형적으로 분자 이온 또는 양성자화된 분자)은 일반적으로 이온 운동 에너지를 증가시키기 위해 전위를 적용하여 가속시키고 중성 분자 (예컨대, 헬륨, 질소 또는 아르곤)와 충돌시킨다. 충돌 시 운동 에너지의 일부가 내부 에너지로 전환되어 결합이 끊어지고 분자 이온이 더 작은 단편으로 단편화된다.
일부 측면에서, 이온 쿨러 전달 시간은 약 50 μs 내지 약 150 μs, 약 60 μs 내지 약 150 μs, 약 70 μs 내지 약 150 μs, 약 80 μs 내지 약 150 μs, 약 90 μs 내지 약 150 μs, 약 100 μs 내지 약 150 μs, 약 110 μs 내지 약 150 μs, 약 120 μs 내지 약 150 μs, 약 130 μs 내지 약 150 μs, 약 140 μs 내지 약 150 μs, 약 50 μs 내지 약 140 μs, 약 50 μs 내지 약 130 μs, 약 50 μs 내지 약 120 μs, 약 50 μs 내지 약 110 μs, 약 50 μs 내지 약 100 μs, 약 50 μs 내지 약 90 μs, 약 50 μs 내지 약 80 μs, 약 50 μs 내지 약 70 μs, 약 50 μs 내지 약 60 μs, 약 60 μs 내지 약 140 μs, 약 70 μs 내지 약 130 μs, 약 80 μs 내지 약 120 μs, 또는 약 90 μs 내지 약 110 μs이다. 일부 측면에서, 이온 쿨러 전달 시간은 약 50 μs, 약 60 μs, 약 70 μs, 약 80 μs, 약 90 μs, 약 100 μs, 약 110 μs, 약 120 μs, 약 130 μs, 약 140 μs, 또는 약 150 μs이다. 일부 측면에서, 이온 쿨러 전달 시간은 약 100μs이다. 이온 쿨러 전달은 분석 동안 고에너지 이온의 속도를 늦추는 수단이다.
일부 측면에서, 이온 쿨러 전달은 약 20 μs 내지 약 30 μs, 약 21 μs 내지 약 30 μs, 약 22 μs 내지 약 30 μs, 약 23 μs 내지 약 30 μs, 약 24 μs 내지 약 30 μs, 약 25 μs 내지 약 30 μs, 약 26 μs 내지 약 30 μs, 약 27 μs 내지 약 30 μs, 약 28 μs 내지 약 30 μs, 약 29 μs 내지 약 30 μs, 약 20 μs 내지 약 29 μs, 약 20 μs 내지 약 28 μs, 약 20 μs 내지 약 27 μs, 약 20 μs 내지 약 26 μs, 약 20 μs 내지 약 25 μs, 약 20 μs 내지 약 24 μs, 약 20 μs 내지 약 23 μs, 약 20 μs 내지 약 22 μs, 약 20 μs 내지 약 21 μs, 약 21 μs 내지 약 29 μs, 약 22 μs 내지 약 28 μs, 약 23 μs 내지 약 27 μs, 또는 약 24 μs 내지 약 26 μs의 프리펄스 저장을 갖는다. 일부 측면에서, 이온 쿨러 전달은 약 20 μs, 약 21 μs, 약 22 μs, 약 23 μs, 약 24 μs, 약 25 μs, 약 26 μs, 약 27 μs, 약 28 μs, 약 29 μs, 또는 약 30 μs의 프리펄스 저장을 갖는다. 일부 측면에서, 이온 쿨러 전달은 약 25 μs의 프리펄스 저장을 갖는다.
일부 측면에서, TOF MS 스캔은 약 1.0 Hz의 획득 속도로 m/z 700-2700에서 획득된다.
본원에 개시된 방법을 위해, 임의의 ESI Q-TOF 질량 분광측정기가 사용될 수 있다. 이는 브루커 막시스, AB사이엑스 트리플TOF 5600/6600, AB사이엑스 X500R, 아질런트 6545XT, 워터스 제보® G2 TOF 분광측정기 또는 임의의 다른 모델을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
F. 치료 방법
본 개시내용의 일부 측면은 형질 세포 장애를 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다. 본 개시내용의 특정 측면은 형질 세포 장애를 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이며, 본원에 개시된 임의의 방법을 이용하여 대상체로부터 수득된 생물학적 샘플에서 M-단백질을 측정하는 단계 및 M-단백질을 갖는 것으로 확인된 대상체에게 SLAMF7에 특이적으로 결합하는 항체 ("항-SLAMF7 항체") 또는 이의 항원 결합 부분의 치료 유효량을 투여하는 단계를 포함한다. 본 개시내용의 다른 측면은 형질 세포 장애를 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이며, (i) 대상체에게 치료 유효량의 항-SLAMF7 항체를 대상체에게 투여하는 단계; (ii) 본원에 개시된 임의의 방법을 이용하여 대상체로부터 수득된 생물학적 샘플에서 M-단백질을 측정하는 단계; 및 (iii) 대상체에게 추가의 치료 유효량의 항-SLAMF7 항체를 투여하는 단계를 포함한다. 본 개시내용의 또 다른 측면은 항-SLAMF7 항체 요법에 적합한 대상체를 확인하는 방법에 관한 것이며, 본원에 개시된 임의의 방법을 이용하여 대상체로부터 수득된 생물학적 샘플에서 M-단백질을 측정하는 단계를 포함한다. 일부 측면에서, 방법은 M-단백질을 갖는 것으로 확인된 대상체에게 치료 유효량의 항-SLAMF7 항체를 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
인간 SLAMF7에 특이적으로 결합하는 임의의 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 본원에 개시된 방법에서 사용될 수 있다. 일부 측면에서, 항-SLAMF7 항체는 인간 SLAMF7에 대한 결합에 대해 엘로투주맙과 교차-경쟁한다. 일부 측면에서, 항-SLAMF7 항체는 엘로투주맙과 동일한 인간 SLAMF7 상의 에피토프에 결합한다. 일부 측면에서, 항-SLAMF7 항체는 엘로투주맙과 중첩되는 인간 SLAMF7 상의 에피토프에 결합한다. 일부 측면에서, 항-SLAMF7 항체는 인간 항체이다. 일부 측면에서, 항-SLAMF7 항체는 인간화 항체이다. 일부 측면에서, 항-SLAMF7 항체는 키메라 항체이다. 특정 측면에서, 항-SLAMF7 항체는 엘로투주맙이다.
엘로투주맙 (BMS-901608 및 HuLuc63으로도 지칭됨)은 다발성 골수종에서 고도로 균일하게 발현되는 세포 표면 당단백질인 SLAMF7 (CS-1로도 공지됨)에 대한 인간화 모노클로날 IgG1 항체이다 (미국 공개 번호 US 2006/024296, US 2010/168397, US 2009/246852, US 2009/238835, US 2012/064067, US 2012/070440, US 2012/064068, US 2012/064083, US 2012/064069, US 2014/065063, US 2016/002335, US 2005/025763, US 2009/238827, US 2008/124332, US 2011/165154, US 2016/206734, US 2008/152646, US 2014/322201, US 2016/137735, US 2017/342150, US 2008/095768, US 2011/206701, US 2013/052158, 및 US 2013/058921; 및 PCT 공개 번호 WO 2004/100898, WO 2005/102387, WO 2008/019376, WO 2008/019378, WO 2008/019379, WO 2010/051391, WO 2011/053321, 및 WO 2011/053322 참조; 이들 각각은 전부 참조로 본원에 포함됨). 엘로투주맙은 말초 림프구의 존재 하에 1차 다발성 골수종 세포에 대해 상당한 항체-의존성 세포 세포독성 (ADCC)을 유도한다 (Tai et al., Blood, 112:1329-1337 (2008)). 엘로투주맙은 NK 세포를 통해 ADCC를 매개하는 것으로 공지되어 있다 (van Rhee, F. et al., Mol. Cancer Ther., 8(9):2616-2624 (2009)). 재발성 또는 불응성 다발성 골수종을 갖는 환자를 치료하기 위해 단독으로 (Zonder et al., Blood, 120(3):552-559 (2012)), 보르테조밉 (Jakubowiak et al., J. Clin. Oncol., 30(16):1960-1965 (Jun. 1, 2012)), 또는 레날리도마이드 및 저용량 덱사메타손 (Lonial et al., J. Clin. Oncol., 30:1953-1959 (2012); 및 Richardson et al., Blood (ASH Annual Meeting Abstracts) 116:986 (2010))와 조합하여 투여되는 이 약물의 안정성 및 효능을 평가한 3개의 연구 결과가 보고되었다. 3개의 조합 모두 관리 가능한 안전성 프로파일 및 고무적인 활성을 나타내었다. 예컨대, 재발성 또는 불응성 다발성 골수종 치료를 위해 레날리도마이드 및 저용량 덱사메타손을 조합한 엘로투주맙의 안전성 및 효능을 평가하는 I/II상 연구는 10 mg/kg 용량을 투여받은 환자에 대해 33개월 PFS 뿐만 아니라 92%의 반응률을 입증하였다 (Lonial et al., J. Clin. Oncol., 31 (2013) (Suppl., Abstr. 8542)). 이전에 치료를 받은 적이 없는 다발성 골수종 환자에서 엘로투주맙이 있거나 없는 레날리도마이드/덱사메타손의 III상 임상 시험이 진행 중이며, 제1선 세팅에서 이러한 동일한 조합을 평가하기 위해 설계된 또 다른 III상 임상 시험도 진행 중이다.
특정 측면에서, 치료 유효량의 항-SLAMF7 항체, 예컨대 엘로투주맙은 치료 유효량의 추가 치료제와의 조합 요법으로 투여된다. 일부 측면에서, 항-SLAMF7 항체, 예컨대 엘로투주맙은 추가 치료제와 공동으로 투여된다. 일부 측면에서, 항-SLAMF7 항체, 예컨대 엘로투주맙은 추가 치료제 전에 투여된다. 일부 측면에서, 항-SLAMF7 항체, 예컨대 엘로투주맙은 추가 치료제 후에 투여된다. 일부 측면에서, 치료제는 항암제이다. 일부 측면에서, 추가 치료제는 보르테조밉, 레날리도마이드, 포말리도마이드, 덱사메타손, 또는 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다. 일부 측면에서, 추가 치료제는 보르테조밉, 레날리도마이드, 포말리도마이드, 덱사메타손, 또는 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다. 일부 측면에서, 치료 유효량의 항-SLAMF7 항체는 치료 유효량의 보르테조밉과 조합하여 투여된다. 일부 측면에서, 치료 유효량의 항-SLAMF7 항체는 치료 유효량의 레날리도마이드와 조합하여 투여된다. 일부 측면에서, 치료 유효량의 항-SLAMF7 항체는 치료 유효량의 덱사메타손과 조합하여 투여된다. 일부 측면에서, 치료 유효량의 항-SLAMF7 항체는 치료 유효량의 보르테조밉 및 치료 유효량의 레날리도마이드와 조합하여 투여된다. 일부 측면에서, 치료 유효량의 항-SLAMF7 항체는 치료 유효량의 보르테조밉 및 치료 유효량의 덱사메타손과 조합하여 투여된다. 일부 측면에서, 치료 유효량의 항-SLAMF7 항체는 치료 유효량의 레날리도마이드 및 치료 유효량의 덱사메타손과 조합하여 투여된다. 일부 측면에서, 치료 유효량의 항-SLAMF7 항체는 치료 유효량의 보르테조밉, 치료 유효량의 레날리도마이드, 및 치료 유효량의 덱사메타손과 조합하여 투여된다.
일부 측면에서, 치료 유효량의 항-SLAMF7 항체는 치료 유효량의 디펜히드라민과 조합하여 투여된다. 일부 측면에서, 치료 유효량의 항-SLAMF7 항체는 치료 유효량의 라니티딘과 조합하여 투여된다. 일부 측면에서, 치료 유효량의 항-SLAMF7 항체는 치료 유효량의 아세트아미노펜과 조합하여 투여된다.
일부 측면에서, 치료 유효량의 항-SLAMF7 항체는 치료 유효량의 효능적 CD137 항체와 조합되어 투여된다 (US 2016/0264670 A1 참조, 이는 전체가 본원에 참조로 포함됨). 일부 측면에서, 치료 유효량의 항-SLAMF7 항체는 치료 유효량의 우렐루맙과 조합하여 투여된다.
항-SLAMF7 항체는 임의의 경로로 투여될 수 있다. 일부 측면에서, 항-SLAMF7 항체는 정맥내, 피하, 피내, 복강내, 근육내, 또는 이들의 임의의 조합으로 투여된다. 특정 측면에서, 항-SLAMF7 항체는 정맥내 투여된다.
일부 측면에서, 항-SLAMF7 항체는 본원에 개시된 임의의 방법을 이용하여 결정 시 M-단백질을 갖는 대상체에게 투여된다. 일부 측면에서, M-단백질이 M-단백질의 역치 수준을 초과하는 경우, 대상체에게 항-SLAMF7 항체가 투여된다. 일부 측면에서, M-단백질의 역치 수준은 대상체로부터 수득되는 혈청 샘플 중 적어도 약 1 g/L, 적어도 약 2 g/L, 적어도 약 3 g/L, 적어도 약 4 g/L, 적어도 약 5 g/L, 적어도 약 10 g/L, 적어도 약 15 g/L, 적어도 약 20 g/L, 적어도 약 25 g/L, 적어도 약 30 g/L, 적어도 약 35 g/L, 적어도 약 40 g/L, 적어도 약 45 g/L, 적어도 약 50 g/L의 M-단백질이다. 특정 측면에서, M-단백질의 역치 수준은 대상체로부터 수득되는 혈청 샘플 중 약 30 g/L의 M-단백질이다.
일부 측면에서, 역치 수준은 대상체가 특정 유형의 형질 세포 장애를 갖는다는 것을 나타내었다. 일부 측면에서, 대상체로부터 수득된 혈청 샘플이 (본원에 개시된 임의의 방법을 이용하여 측정 시) 적어도 약 30 g/L의 M-단백질을 갖는 것으로 결정되는 경우, 대상체는 MM을 갖는 것으로 확인된다. 일부 측면에서, 방법은 MM을 갖는 것으로 확인된 대상체에게 항-SLAMF7 항체를 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 방법은 MM을 갖는 것으로 확인된 대상체로부터 골수 생검을 수득하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 측면에서, 대상체로부터 수득된 혈청 샘플이 (본원에 개시된 임의의 방법을 이용하여 측정 시) 적어도 약 1 g/L 내지 적어도 약 30 g/L of M-단백질을 갖는 것으로 결정되는 경우, 대상체는 MM을 가질 위험이 있는 후보자로 확인된다. 일부 측면에서, 대상체로부터 수득된 혈청 샘플이 (본원에 개시된 임의의 방법을 이용하여 측정 시) 적어도 약 5 g/L 내지 적어도 약 30 g/L of M-단백질을 갖는 것으로 결정되는 경우, 대상체는 MM을 가질 위험이 있는 후보자로 확인된다. 일부 측면에서, 대상체로부터 수득된 혈청 샘플이 (본원에 개시된 임의의 방법을 이용하여 측정 시) 적어도 약 10 g/L 내지 적어도 약 30 g/L of M-단백질을 갖는 것으로 결정되는 경우, 대상체는 MM을 가질 위험이 있는 후보자로 확인된다. 일부 측면에서, 방법은 MM을 가질 위험이 있는 후보자로 확인된 대상체로부터 골수 생검을 수득하는 단계를 추가로 포함한다. 특정 측면에서, 골수 생검은 MM의 마커에 대해 추가로 분석된다.
상기 인용된 모든 참조 문헌 뿐만 아니라 본원에 인용된 모든 참조 문헌은 전체가 참조로 본원에 포함된다.
하기 실시예는 제한이 아니라 예시를 위해 제공된다.
실시예
본 실시예는 완전 자동화된 면역포획 단계, 분석 유동 크로마토그래피, 및 단순화된 데이터 추출 절차를 사용하여 M-단백질을 검출하는 면역포획 (IC) 액체 크로마토그래피 (LC) 질량 분광측정 (MS) 검정을 설명한다. IC-LC-MS 검정은 M-단백질을 검출할 때 치료 모노클로날 항체의 간섭을 제거한다.
재료 및 방법
1. 재료
인간 골수종 혈장으로부터 정제된 면역글로불린 아유형, 완충된 트리스 (2-카르복시에틸)포스핀 히드로클로라이드 (TCEP) 용액, 쯔비터전트 3-12, 염산, HPLC 등급 아세토니트릴 및 2-프로판올은 시그마-알드리치 (Sigma-Aldrich, 미국 미주리주)에서 입수되었다. 모노클로날 치료 항체는 브리스톨-마이어스 스퀴브 리서치 앤드 디벨로프먼트 (Bristol-Myers Squibb Research and Development)에서 입수되었다. 포름산 (초순수 (SupraPur) 등급)은 EMD 케미칼스 (EMD Chemicals, 미국 뉴저지주)에서 입수되었다. ESI-둘베코 (ESI-Dulbecco)의 포스페이트-완충된 식염수는 론자 워커빌, 인크. (Lonza Walkersville, Inc., 미국 메릴랜드주)에서 입수되었다. 캡처실렉트 LC-람다 (Hu) 및 캡처실렉트 카파 XL 수지의 1:1 혼합물을 함유하는 피팁 컬럼은 피넥수스 (미국 캘리포니아주)에서 맞춤 제작되었다. 인간 혈청은 바이오리클라메이션 IVT (Bioreclamation IVT, 미국 뉴욕주)에서 입수되었다.
2. 혈청 샘플
4개의 정상적인 인간 혈청 풀을 합하여 정상적인 폴리클로날 배경을 갖는 인간 혈청 풀을 제조하였다. 다발성 골수종 샘플의 연속 희석액은 이전에 정량화된 M-단백질 농도 (≥5000.0 μg/mL 및 ≤ 35.0 μg/mL)를 갖는 혈청으로부터 제조되었다. 총 50개의 다발성 골수종 혈청 샘플이 선택되었다: 30개의 샘플은 IgG(카파)를 함유하였고; 13개의 샘플은 IgG(람다)를 함유하였고; 7개의 샘플은 IgA를 함유하였고, 4개는 카파 경쇄를 함유하였고, 3개는 람다 경쇄를 함유하였다. 각각의 선택된 M-단백질에 대해, 혈청을 정상적인 혈청 풀과 혼합하여 1000.0 μg/mL의 M-단백질로 희석한 다음, 1000.0 μg/mL 샘플을 500.0, 250.0, 100.0, 50.0, 25.0 및 10.0 μg/mL의 분석물 농도로 연속 희석하였다.
3. 표준 및 품질 제어 샘플
엘로투주맙은 다발성 골수종의 치료를 위한 인간화 IgG1 모노클로날 항체이다. 이는 순수하고 안정적이며 대량으로 이용 가능하기 때문에 내인성 모노클로날 항체를 모방하는 좋은 대리 분석물이다. 엘로투주맙의 스톡 용액은 25 mg/mL의 최종 농도로 동결건조된 mAb를 함유하는 약물 바이알에 풀링된 인간 혈청을 첨가하여 제조하였다. 많은 풀링된 인간 혈청을 스크리닝하고, 어떠한 M-스파이크도 함유하지 않은 것들을 품질 제어 (QC) 제조를 위해 풀링하였다. 엘로투주맙 및 QC 샘플을 풀링된 블랭크 인간 혈청으로 연속 희석하여 스톡 용액으로부터 제조하였다.
4. 샘플 제조
혈청 샘플, 표준, 및 QC를 PBS로 40배 희석하고, 110 μL의 희석된 샘플을 면역포획에 사용하였다. 캡처실렉트 LC-람다 (Hu) 및 캡처실렉트 카파 XL 수지의 1:1 혼합물을 함유하는 맞춤형 피팁 컬럼을 면역글로불린의 면역포획에 사용하였다. 이들 피팁 컬럼은 96개 채널 (테칸 (TECAN), 미국)이 장착된 프리덤 EVO® 자동화 플랫폼에서 사용되었다. 자동화된 면역포획 공정은 하기 단계를 포함하였다: 1) PBS로 팁을 세척하는 4주기; 2) 희석된 혈청으로부터 면역글로불린을 포획하는 32주기; 3) 세척 버퍼 I (10 mM 포스페이트, 500 mM NaCl 및 0.1% 쯔비터전트, pH 7.4), PBS 및 물로 팁을 세척하는 총 8주기; 4) 100 mM NaCl을 함유하는 12 mM HCl로 용출하는 10주기. 용출된 샘플은 100 mM 완충된 TCEP 용액을 20 mM의 최종 농도로 첨가한 후 25℃에서 30분 동안 인큐베이션하여 즉시 환원시켰다.
5. LC-MS
액퀴티 UPLC H-클래스 바이오 시스템 (워터스 코포레이션, 매사추세츠주) 상에서 크로마토그래피를 수행하였다. 샘플을 컬럼 온도를 80℃로 설정한 C4 컬럼 (액퀴티 프로테인 BEH C4 300Å, 1.7 μm, 2.1 mm x 100 mm; 워터스 코포레이션, 매사추세츠주)에 주입하였다. 이동상 A는 물 중 0.1% 포름산 (FA)을 함유하고, 이동상 B는 아세토니트릴 중 0.1% FA를 함유하였다. 구배 분리 프로그램은 하기와 같이 사용되었다: 0-1.0분 10% B; 1.1-3.0분 10-33% B 3.0-10.0분 33-40% B; 10.1-10.5분 40-90% B; 90% B에서 10.5-13.0분 유지; 13.0-15.0분 90-100% B; 및 15.0분에 실행 정지. 유속은 0.3 mL/분으로 설정되었고 주입 부피는 2.0 μL였다.
UPLC는 표준 전기분무 (ESI) 아폴로-소스 (브루커 달토닉스, 독일 함부르크)를 갖는 막시스 4G Q-TOF 기기로 온-라인으로 수행되었다. 질량 정확도를 보장하기 위해 각각의 실행 전에 ESI-L 저농도 튜닝 믹스 (아질런트 테크놀로지스, 캘리포니아주)를 주입하여 기기를 보정하였다. 각각의 15분 실행은 하기와 같이 분할되었다: 폐기에 3분, 이어서 소스에 7분, 및 폐기에 마지막 5분. 모세관 전압은 4500 V로 설정되었다. 분무기는 1.6 bar로 설정되었다. 건조 기체는 8.5 L/분으로 설정되었다. 건조 온도는 200℃로 설정되었다. 전송 펀넬 RF 및 다중극 RF 파라미터는 400 Vpp로 설정되었고; isCID 에너지는 적용되지 않았다. 이온 쿨러 전달 시간은 100 μs이고 프리펄스 저장은 25 μs였다. 이온 극성은 포지티브였고, 롤링 평균이 활성화되어 2로 설정되었다. TOF MS 스캔은 1.0 Hz의 획득 속도로 m/z 700-2700으로부터 획득되었다.
6. MS 데이터 분석
MS 데이터 파일은 콤파스 데이터어낼리시스 (Compass DataAnalysis) 4.3 소프트웨어를 사용하여 처리되었다. 방법의 세부 사항은 하기와 같다: 분석물 보유 시간 (RT)은 시험된 모든 면역글로불린이 이 보유 창에서 공동-용출되었기 때문에 5.6-6.8분으로 설정되었다. MS 피크 스펙트럼 추출 창은 800 및 2400m/z 이내였고; 질량 스펙트럼에 대한 평활화 및 기준선 차감은 비활성화되었으며, 최대 엔트로피 디콘볼루션 범위는 20,000 내지 28,000 Da였다. 디콘볼루션된 스펙트럼의 통합은 크로마토그래피 피크의 통합과 유사하였다 (Jian et al., 8 Bioanalysis 1679-1691 (2016)). 피크 발견 파라미터를 상기 기재된 바와 같이 조정하고, 분석물의 피크 높이를 계산하였다. 경쇄 분자 질량 및 스펙트럼 피크 높이를 mgf 파일로 내보냈다. 모노클로날 경쇄 (LC)의 후속 검출은 전처리 모노클로날 LC의 ± 1.0 Da 이내의 분자 질량을 갖는 폴리클로날 배경을 초과하는 피크의 존재를 검색하여 수행되었다. 경쇄 피크 높이를 카운트로 기록하였다. 관심 분석물에 인접한 폴리클로날 배경에서 LC의 피크 높이도 기록되었다. 배경을 차감하고 폴리클로날 배경의 차이를 설명하기 위해, 분석물의 피크 높이로부터 인접한 경쇄의 피크 높이를 차감하였다. 경쇄의 비-정량적 측정을 위해, 정확한 개별 경쇄 보유 시간을 사용하여 질량 스펙트럼을 추출하였다.
7. 혈청 단백질 전기영동
SPEP 및 SIFE 분석은 제조사의 지침에 따라 헬레나 랩스 (Helena labs) 겔 전기영동 시스템 (헬레나 라보라토리즈 (Helena laboratories), 텍사스주)에서 수행되었다. 네가티브 SIFE는 전기영동 겔에 뚜렷한 밴드가 없는 것으로 정의되었다.
결과 및 토의
1. IC-LC-MS 검정 워크플로우
기재된 IC-LC-MS 검정은 완전 자동화된 면역포획 단계 및 단순화된 데이터 추출 절차를 사용한다. 면역글로불린 및 유리 경쇄는 테칸 프리덤 EVO® 로봇 플랫폼에서 항-카파/항-람다 수지 혼합물로 충전된 피넥수스 팁을 사용하여 혈청으로부터 정제된다. 정제 단계 후, 온전한 항체는 환원되고, 경쇄는 LC-MS로 분석된다. M-단백질의 디컨볼루션된 피크 높이의 강도는 분석물을 정량화하는데 편리하게 사용된다. 검정 워크플로우의 요약은 도 1에 제공된다.
2. LC-MS 및 데이터 분석
액체 크로마토그래피 단계를 사용하여 공동-정제 단백질로부터 경쇄를 탈염 및 분리하였으나; 각각의 개별 경쇄 분석물은 분리되지 않았다. 정의된 크로마토그램 프로파일은 72초 폭이었다: 시험된 모든 인간 면역글로불린 경쇄는 이 보유 창에서 용출되었다. 각각의 M-단백질의 디컨볼루션된 스펙트럼 피크 높이의 강도는 분석물의 상대량 측정에 사용되었다. 도 2a-2i는 정상적인 인간 혈청 (도 2a-2c), 다발성 골수종 환자 01 (도 2d-2f), 및 다발성 골수종 환자 02 (도 2g-2i) 혈청으로부터 정제된 면역글로불린에 대한 단순화된 크로마토그램, 질량 스펙트럼, 및 디컨볼루션된/재구성된 스펙트럼을 나타낸다. 총 이온 크로마토그램 (TIC)은 환원된 면역글로불린의 넓은 1.2분 용출 피크를 나타낸다 (도 2a, 2d, 및 2g). 정상적인 혈청으로부터 추출된 질량 스펙트럼 (도 2a)은 광범위한 비분해된 피크를 나타내고; 다발성 골수종 혈청 면역글로불린으로부터 추출된 질량 스펙트럼 (도 2e 및 2h)은 잘 정의된 다중 하전 이온을 나타낸다. 정상적인 인간 면역글로불린의 디컨볼루션된 질량 스펙트럼 (도 2c)은 폴리클로날 배경을 초과하는 피크가 없는 다수의 저강도 피크를 갖는다. 반면, 다발성 골수종 면역글로불린의 질량 스펙트럼의 디콘볼루션은 각각의 환자에 대한 질환-관련된 경쇄를 나타내는 단일 고강도 피크를 생성한다 (도 2f 및 2i). 질환 관련된 경쇄의 질량은 구별되며 각각의 개체에 의해 악성 형질 세포에 의해 과생성된 상이한 면역글로불린을 나타낸다. 면역글로불린 정제에 사용되는 리칭 (leaching) 람다/카파 나노바디의 질량 스펙트럼은 별표로 표시된다.
현재의 바이오분석 실시에서, 다중 하전 이온은 온전한 단백질을 정량화하기 위해 합산된다. 이들 이온을 처리하여 정량화를 위한 추출된 이온 크로마토그램 (XIC)을 생성한다. 그러나, 각각의 환자의 M-단백질에 대해 개별 m/z 이온을 선택하는 접근법은 실용적이지 않다. 또한, 신호 강도는 광범위하게 하전된 이온 사이에서 상당히 희석되고, 잠재적 간섭으로부터 분석물 이온의 분해가 매우 어려워진다. 상기 기재된 이유로 인해, 디컨볼루션된 경쇄 피크 높이가 정량화에 사용되었다. "디컨볼루션된 피크 높이" 접근법은 정량화를 위한 XIC를 생성하기 위해 다중 하전 이온을 사용하는 것보다 강력하고 우수한 민감도를 산출하는 것으로 나타났다.
3. 면역글로불린 정제
방법의 분석 민감도를 개선하기 위해, 면역글로불린은 혈청 샘플로부터 정제될 필요가 있다. 분석물의 다양성으로 인해, 모든 인간 면역글로불린에 우수한 친화도로 결합하는 일반 포획 시약이 필요하였다. 항체 정제에 이용 가능한 몇 가지 통상적인 방법이 있으나; 대부분은 특정 부류의 면역글로불린에만 결합할 것이다. 다발성 골수종 M-단백질은 중쇄 또는 경쇄 면역글로불린 부류 중 임의의 것과 관련될 수 있다. 따라서, 단순하고 강력한 검정을 개발하기 위해 모든 항체 부류 뿐만 아니라 유리 경쇄에 결합하는 포획 시약이 모색되었다. 신중한 기술적 고려 및 초기 실험 후, 1:1 비율로 혼합된 항-람다/항-카파 포획 수지가 선택되었다. 이 적용을 위한 최상 성능의 친화성 매트릭스는 써모피셔로부터 이용 가능한 캡처실렉트® 나노바디 수지였다. 이 수지는 완전히 자동화 가능한 피팁스(PhyTips)TM에 패킹되었다. 선택된 피팁스TM은 40 μg의 람다 및 40 μg의 카파 면역글로불린의 로딩을 위한 용량을 가졌다. 팁의 과포화를 방지하고 모든 내인성 면역글로불린을 포획하기 위해, 혈청 샘플을 40배 희석하였다. 면역포획 절차는 내인성 IgG, IgA 및 IgM 뿐만 아니라 치료 모노클로날 항체를 사용하여 시험되었으며; 시그마 (Sigma)에서 입수된 9개의 내인성 M-단백질, 및 8개의 치료 모노클로날 항체를 사용하여 면역포획 회수율을 평가하였다. 인간 혈청으로부터 정제된 분석물의 MS 반응 (피크 높이)을 스파이크 없이 정상적인 인간 혈청으로부터 정제된 폴리클로날 배경에 포스트-스파이킹된 상응하는 분석물의 피크 높이와 비교하여 면역포획 회수율을 평가하였다. 도 3에 나타난 바와 같이, 시험된 모든 항체에 대한 정량적 회수율은 일관되게 80.0%보다 높았다.
IC-LC-MS 검정 평가
1. 신호 강도에 대한 분석물 불균질의 영향
불균질한 분석물에 대한 주요 관심사 중 하나는 MS 반응이 크게 달라지고 분석물의 농도만이 아니라 특성에 의존할 것이라는 것이다. 상이한 경쇄 사이의 이온화 차이가 중요한지를 조사하기 위해, 10.0; 25.0; 50.0; 100.0; 250.0; 500.0, 및 1000.0 μg/mL의 농도로 정상적인 혈청에 스파이킹된 5개의 동일하지 않은 IgG 카파 치료 항체를 시험하여 표준 디컨볼루션된 곡선을 생성하였다. 시험된 모든 항체에 대한 검정 LLOQ는 25.0 μg/mL였고, LOD는 10.0 μg/mL였다. MS 반응은 상이한 분석물 사이에서 20-30%로 다양하였다. 이는 분석물과 및 교정물이 거의 동일하지 않기 때문에 바이오마커 농도가 일반적으로 상대적임을 고려할 때 허용 가능한 변형이다. 5개의 동일하지 않은 치료 mAb에 대한 디컨볼루션된 경쇄 표준 곡선이 도 4에 나타나 있다.
2. IC-LC-MS 검정 민감도
IC-LC-MS 검정의 민감도를 시험하기 위해, 3개의 개별 모노클로날 항체 (A, B 및 C)를 정상적인 인간 혈청에 스파이킹하고 면역포획 IC-LC-HRMS 방법론에 의해 시험하였다 (도 5a-5i). 각각의 항체는 1000 μg/mL (도 5a, 5d, 및 5g), 100　 μg/mL (도 5b, 5e, 및 5h), 및 10 μg/mL (도 5c, 5d, 및 5i)의 농도로 시험되었다. 10 μg/mL에서 분석물을 검출하기 위해, 관심 분석물에 특정한 0.2분 크로마토그래피 창으로부터 질량 스펙트럼을 추출하였다. 시험된 항체의 분자 질량은 시험된 모든 농도에서 ±1.0 Da 이내에서 원래 피크 질량과 일치하였다. 3개의 피크 모두 신호 대 잡음 비가 낮았지만, 정확한 질량에 기인하여 높은 신뢰도로 검출될 수 있었다. 이 데이터를 기반으로 하면, 면역포획 IC-LC-MS 방법론의 추정된 검출 한계 LOD는 1000 μg/mL의 민감도를 갖는 임상 SPEP 검정의 한계보다 100배 낮다. 최대 민감도를 달성하기 위해, 상기 기재된 바와 같이 정확한 개별 경쇄 보유 시간을 사용하여 질량 스펙트럼을 추출하였다.
IC-LC-MS 검정에 대한 검출 한계를 시험하기 위해, 건강한 혈청에 상이한 M 단백질을 스파이킹하였다 (도 5j-5m; 표 1). IgGK (10 mg/L; 도 5j), IgGL (5 mg/L; 도 5k), IgAK (10 mg/L; 도 5l), 및 IgAL (10 mg/L; 도 5m)에 상응하는 피크 )는 도 5j-5m에서 화살표로 표시된다.
<표 1>
Figure pct00001
3. SIFE 및 IC-LC-MS 검정 민감도의 직접적 비교
LC-MS 및 SIFE 검정 민감도를 비교하기 위해, 50개의 다발성 골수종 혈청을 1000.0 내지 50.0 μg/mL의 이론적인 M-단백질 농도로 연속적으로 희석하였다. 모든 희석된 샘플을 2개로 분할하고, SIFE 및 IC-LC-MS 모두로 분석하였다. SIFE LOD는 원래 샘플의 농도 및 희석 계수를 기반으로 하여 계산되었다. SIFE 겔에 뚜렷한 밴드를 제공하는 마지막 원본 샘플 희석액으로 결정되었다. 예측된 바와 같이, SIFE 민감도는 분석물에 따라 크게 달라지며, 250.0-1000.0 μg/mL인 것으로 나타났다. 문헌에 보고된 SIFE 민감도보다 약간 낮은 민감도는 모든 다발성 골수종 혈청이 다발성 골수종 혈청보다 높은 폴리클로날 면역글로불린 농도를 갖는 정상적인 인간 혈청 풀에서 희석되었다는 사실에 의해 설명될 수 있다. 높은 폴리클로날 배경은 심하게 염색된 겔에서 뚜렷한 밴드를 보는 분석자의 능력을 당연히 방해한다. SIFE에 의해 측정 가능한 최저 연속 희석 농도에서 IC-LC-방법에 의해 측정된 MS 반응의 분포를 나타내는 플롯이 도 6에 나타나 있다. 추정된 IC-LC-MS 방법 LOD는 SIFE LOD보다 10-100배 낮다.
4. 치료 항체 간섭 해결
IC-LC-MS 검정이 내인성 항체 및 치료 항체를 쉽게 구별한다는 것을 보여주기 위해, 내인성 모노클로날 항체 농도를 갖는 50개의 다발성 골수종 혈청에 200.0 μg/mL (이 생물학적 약물의 약동학적 EC50과 동일한 농도)의 엘로투주맙을 스파이킹하였다. 49개의 경우에서, 내인성 항체는 엘로투주맙과 구별될 수 있었다. 엘로투주맙 및 M-단백질의 대표적인 질량 피크가 도 7a-7n에 나타나 있다. 도 7e는 엘로투주맙을 함유하지 않는 M-단백질 대조군을 나타낸다. M-단백질 경쇄의 분자 질량은 하나의 경우를 제외하고는 모두 정확하게 확인되었다. 내인성 모노클로날 항체 분자량은 엘로투주맙 질량 피크를 제외하고 2.0 Da 미만이었으므로, 혈청 중 하나는 엘로투주맙 간섭을 갖는 것으로 결정되었다. 엘로투주맙 피크의 존재 하에 1.0 Da 초과의 M-단백질 질량 피크 이동은 이것이 실제 간섭 사례임을 입증하였다 (데이터는 나타내지 않음).
5. IC-LC-MS 검정은 골수종 질환을 민감하게 모니터링하고 표준 방법보다 빨리 M-단백질의 증가를 검출할 수 있다.
본 발명자들은 IC-LC-MS 검정이 표준 SPEP/SIFE/sFLC 시험과 비교하여 다발성 골수종 질환 모니터링에 대한 더 정확한 정보를 제공할 수 있는지의 여부를 조사하였다. 각각의 대상체에 대해 M-단백질의 지속적인 증가가 시작되는 주기를 결정하기 위해, log10 척도의 IC-LC-MS 측정 및 시각적으로 확인되는 명확한 변곡점을 조사하였다. 매우 우수한 부분 반응 (VGPR) 및 완전 반응 (CR)을 갖는 골수종 환자의 경우, IC-LC-MS가 더 민감하였다: M-단백질은 본원에 개시된 신규 검정에 의해 측정된 모든 시점에서 검출 가능하였다. 그러나, SPEP/SIFE는 환자 1에 대해 주기 5-29 (도 8a-8b) 및 환자 2에 대해 주기 8-28 (도 8e-8f)에서 네가티브였다. IC-LC-MS 검정은 SPEP/SIFE 둘 다보다 훨씬 빨리 M-단백질의 지속적인 증가를 검출할 수 있었다. 환자 1의 경우, 지속적 증가가 주기 20에서, 또는 SPEP에 의한 것보다 10주기 빨리 검출되었다 (도 8c와 도 8a 비교). 환자 2의 경우, 지속적 증가가 주기 16에서, 또는 SPEP에 의한 것보다 13주기 빨리 검출되었다 (도 8g와 도 8e 비교).
도 9a-9f는 대상체에서 선택된 시점에 대한 IC-LC-MS 프로파일을 나타내며, 여기서 M-단백질은 검정의 우수한 특이성으로 인해 모든 시점에서 IC-LC-MS 피크 분석 알고리즘에 의해 검출되었다. M-단백질 경쇄 질량 특징은 기준선 샘플에서 쉽게 확인된 다음 순차적 샘플에서 추적될 수 있다. 이 접근법은 폴리클로날 배경을 초과하여 M-단백질의 매우 특이적인 추적을 가능하게 한다.
본원에 개시된 모든 공개문, 특허 및 특허 출원은 각각의 개별 공개문, 특허 또는 특허 출원이 참조로 포함되는 것으로 구체적이고 개별적으로 표시된 것과 동일한 정도로 참조로 포함된다.

Claims (48)

  1. 형질 세포 장애를 갖는 대상체로부터 수득된 샘플에서 M-단백질을 측정하는 방법이며,
    (i) 샘플 중의 면역글로불린 및 유리 경쇄를 면역포획에 의해 정제하는 단계, 및
    (ii) 면역글로불린 및 유리 경쇄를 액체 크로마토그래피 (LC) 질량 분광측정 (MS)에 적용하는 단계
    를 포함하는 방법.
  2. 형질 세포 장애에 대한 요법 후 완전 반응자 결정에서 위양성을 감소시키는 방법이며,
    (i) 생물학적 샘플 중의 면역글로불린 및 유리 경쇄를 면역포획에 의해 정제하는 단계, 및
    (ii) 정제된 면역글로불린 및 유리 경쇄를 액체 크로마토그래피 (LC) 질량 분광측정 (MS)에 적용하는 단계
    를 포함하는 방법.
  3. 잔류 질환을 갖는 대상체를 확인하는 방법이며, 대상체로부터 수득된 생물학적 샘플에서 M-단백질을 측정하는 단계를 포함하고, 여기서 M-단백질은
    (1) 생물학적 샘플 중의 면역글로불린 및 유리 경쇄를 면역포획에 의해 정제하고,
    (2) 정제된 면역글로불린 및 유리 경쇄를 액체 크로마토그래피 (LC) 질량 분광측정 (MS)에 적용함으로써 측정되고,
    여기서 대상체는 이전에 형질 세포 장애를 갖는 것으로 확인된 것인 방법.
  4. 형질 세포 장애를 치료하기 위한 요법에 적합한 대상체를 확인하는 방법이며,
    (i) 대상체로부터 수득된 생물학적 샘플에서 M-단백질을 측정하는 단계를 포함하고, 여기서 M-단백질은
    (1) 생물학적 샘플 중의 면역글로불린 및 유리 경쇄를 면역포획에 의해 정제하고,
    (2) 정제된 면역글로불린 및 유리 경쇄를 액체 크로마토그래피 (LC) 질량 분광측정 (MS)에 적용함으로써 측정되는 것인 방법.
  5. 제3항 또는 제4항에 있어서,
    (ii) M-단백질을 갖는 것으로 확인된 대상체에게 형질 세포 장애를 치료하기 위한 요법을 투여하는 단계
    를 추가로 포함하는 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 형질 세포 장애를 갖는 것인 방법.
  7. 형질 세포 장애를 갖는 대상체를 치료하는 방법이며,
    (i) 대상체로부터 수득된 생물학적 샘플에서 M-단백질을 측정하는 단계이며, 여기서 M-단백질은
    (1) 생물학적 샘플 중의 면역글로불린 및 유리 경쇄를 면역포획에 의해 정제하고,
    (2) 정제된 면역글로불린 및 유리 경쇄를 액체 크로마토그래피 (LC) 질량 분광측정 (MS)에 적용함으로써 측정되는 것인 단계; 및
    (ii) M-단백질을 갖는 것으로 확인된 대상체에게 형질 세포 장애에 대한 요법을 투여하는 단계
    를 포함하는 방법.
  8. 형질 세포 장애를 갖는 대상체를 치료하는 방법이며,
    (i) 대상체에게 형질 세포 장애에 대한 요법을 투여하는 단계;
    (ii) 대상체로부터 수득된 생물학적 샘플에서 M-단백질을 측정하는 단계이며, 여기서 M-단백질은
    (1) 생물학적 샘플 중의 면역글로불린 및 유리 경쇄를 면역포획에 의해 정제하고,
    (2) 정제된 면역글로불린 및 유리 경쇄를 액체 크로마토그래피 (LC) 질량 분광측정 (MS)에 적용함으로써 측정되는 것인 단계; 및
    (iii) 대상체에게 형질 세포 장애에 대한 추가 요법을 투여하는 단계
    를 포함하는 방법.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 생물학적 샘플이 소변 샘플 또는 혈청 샘플인 방법.
  10. 형질 세포 장애를 갖는 대상체를 치료하는 방법이며, 대상체에게 형질 세포 장애에 대한 요법을 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 대상체는 혈청 및/또는 소변 M-단백질을 갖는 것으로 확인되었고, 여기서 혈청 및/또는 소변 M-단백질은 면역포획을 이용하여 정제된 면역글로불린 및 유리 경쇄를 액체 크로마토그래피 (LC) 질량 분광측정 (MS)에 적용함으로써 대상체로부터 수득된 생물학적 샘플에서 측정되는 것인 방법.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 형질 세포 장애를 치료하기 위해 이전 요법을 받은 것인 방법.
  12. 제11항에 있어서, 이전 요법이 면역요법을 포함하는 것인 방법.
  13. 제2항, 제4항 내지 제8항 및 제10항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 형질 세포 장애에 대한 요법이 면역요법을 포함하는 것인 방법.
  14. 제13항에 있어서, 면역요법이 항체 요법을 포함하는 것인 방법.
  15. 제14항에 있어서, 면역요법이 체크포인트 억제제의 요법을 포함하는 것인 방법.
  16. 제14항에 있어서, 항체가 SLAMF7, PD-1, CTLA-4, LAG3, TIGIT, TIM3, NKG2a, OX40, ICOS, CD137, KIR, TGFβ, IL-10, IL-8, IL-2, CD96, VISTA, B7-H4, Fas 리간드, CXCR4, 메소텔린, CD27, GITR, CD40, CD56, CD38, CD229, CD200, CD28, CD19, BCMA, CD317, CD70, B2M 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함하는 것인 방법.
  17. 제2항, 제4항 내지 제8항 및 제10항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 형질 세포 장애에 대한 요법이 항-SLAMF7 항체를 포함하는 것인 방법.
  18. 제2항, 제4항 내지 제8항 및 제10항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 형질 세포 장애에 대한 요법이 사이클로포스파미드, 독소루비신, 에토포시드, 리포솜 독소루비신, 멜팔란, 빈크리스틴, 보르테조밉, 레날리도마이드, 카르필조밉, 포말리도마이드, 파노비노스타트, 탈리도마이드, 줄기 세포 이식, CAR-T 요법, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 것인 방법.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, M-단백질이 IgG, IgA, 및 IgM, IgD, 이들의 단편, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 것인 방법.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, M-단백질이 카파 이소형 또는 람다 이소형을 포함하는 것인 방법.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, M-단백질이 하나 이상의 유리 경쇄를 포함하는 것인 방법.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, MS가 전기분무 (ESI) 비행 시간 (TOF) MS를 포함하는 것인 방법.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, MS가 레이저 탈착 이온화 (MALDI) TOF를 포함하는 것인 방법.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, MS가 MALDI TOF MS를 포함하는 것인 방법.
  25. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 면역포획이 자동화된 면역포획인 방법.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 정제된 면역글로불린이 경쇄 및 중쇄로 해리되는 것인 방법.
  27. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 정제된 면역글로불린을 경쇄 및 중쇄로 해리시키는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  28. 제26항 또는 제27항에 있어서, 정제된 면역글로불린이 화학적 환원에 의해 해리되는 것인 방법.
  29. 제26항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 정제된 면역글로불린을 트리스 (2-카르복시에틸)포스핀 (TCEP); TCEP-HCl 및 다른 TCEP 염; DTT (2,3 디히드록시부탄-1,4-디티올), DTE (2,3 디히드록시부탄-1,4-디티올); 티오글리콜레이트; 술파이트; 비술파이트; 술파이드; 비술파이드; 2-메르캅토에탄올; 2-메르캅토에탄올-HCl; 결합-브레이커 TCEP 용액, 중성 pH; 시스테인-HCl; 구아니딘-HCl; 우레아; 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 시약과 접촉시킴으로서 정제된 면역글로불린이 해리되는 것인 방법.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, LC가 초고성능 (UC) LC인 방법.
  31. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, LC가 MS와 온-라인인 방법.
  32. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 형질 세포 장애가 다발성 골수종을 포함하는 것인 방법.
  33. 제32항에 있어서, 다발성 골수종이 경쇄 다발성 골수종을 포함하는 것인 방법.
  34. 제32항 또는 제33항에 있어서, 다발성 골수종이 형질 세포 백혈병을 포함하는 것인 방법.
  35. 제34항에 있어서, 형질 세포 백혈병이 1차 형질 세포 백혈병 또는 2차 형질 세포 백혈병을 포함하는 것인 방법.
  36. 제17항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 항-SLAMF7 항체가 인간 SLAMF7에 대한 결합에 대해 엘로투주맙과 교차-경쟁하는 것인 방법.
  37. 제17항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 항-SLAMF7 항체가 엘로투주맙과 동일하거나 중첩되는 인간 SLAMF7 상의 에피토프에 결합하는 것인 방법.
  38. 제17항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 항-SLAMF7 항체가 인간 항체, 인간화 항체, 또는 키메라 항체인 방법.
  39. 제17항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 항-SLAMF7 항체가 엘로투주맙인 방법.
  40. 제17항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 항-SLAMF7 항체가 정맥내 투여되는 것인 방법.
  41. 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 추가의 항암제를 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  42. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 레날리도마이드를 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  43. 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 포말리도마이드를 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  44. 제1항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 덱사메타손을 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  45. 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 디펜히드라민을 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  46. 제1항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 라니티딘을 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  47. 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 아세트아미노펜을 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  48. 제3항, 제5항, 제9항 및 제11항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 잔류 질환이 최소 잔류 질환 (MRD)을 포함하는 것인 방법.
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