CN115219635B - 一种基于气相色谱的联硼酸频那醇酯的检测方法 - Google Patents

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Abstract

本申请提供了一种基于气相色谱的联硼酸频那醇酯的检测方法。通过探索样品预处理和气相色谱条件，采用中极性气相色谱柱结合质谱检测的方法，可以延长待测物联硼酸频那醇酯在分析检测过程中的热稳定性，从而提高检测方法的准确性和灵敏度，解决了联硼酸频那醇酯在液相检测中发生水解反应或气相检测中由于样品基质致使目标物热稳定性差导致检测方法评价指标差的技术问题。本申请对检测方法的专属性、线性、检测限、准确度和稳定性进行验证，确认该方法适用于联硼酸频哪醇酯的含量测定。

Description

一种基于气相色谱的联硼酸频那醇酯的检测方法
技术领域
本申请属于化合物分析技术领域，尤其涉及一种基于气相色谱的联硼酸频那醇酯的检测方法。
背景技术
联硼酸频那醇酯是一种常用的医药中间体，同时也是一种基因毒杂质。基因毒杂质是一类可与DNA反应，造成DNA损伤，在很低水平下即可诱发基因突变，并可能致癌的杂质，因此需要严格控制样品中此类杂质的限度。
目前，针对联硼酸频那醇酯的检测方法中多采用液相色谱法，但硼酸酯类化合物中由于含有硼酸酯结构，容易和水、醇类发生水解反应，不同的硼酸酯反应速率不一，液相或者液质的流动相都会用到水或醇类，不利于目标物质的检测。而采用气相色谱法对化合物的热稳定性要求较高，硼酸酯的检测常常由于样品基质的存在导致在进样口气化过程中目标物热稳定性差，使得检测方法存在一定局限性。
发明内容
有鉴于此，本申请提供了一种基于气相色谱的联硼酸频那醇酯的检测方法，可以延长待测物的热稳定性，提高检测方法的准确性和灵敏度。
本申请的具体技术方案如下：
一种基于气相色谱的联硼酸频那醇酯的检测方法，气相色谱的色谱柱采用中极性气相色谱柱，样品预处理条件为：先采用少量二甲基亚砜溶解，再加入环己烷和超纯水的混合溶液萃取。
进一步的，样品与二甲基亚砜的用量比为（50~100）mg：（0.1~0.2）ml。
进一步的，混合溶液中环己烷与超纯水的体积比为1:（0.1~0.2）。
进一步的，样品与混合溶液的用量比为（50~100）mg：（2~2.5）ml。
进一步的，气相色谱的载气为He，分流比为（3~4）:1。
进一步的，气相色谱的升温程序为（50~70）℃，保持（1~2）min；（30~40）℃/min升温至（240~250）℃，保持（2~8）min。
进一步的，气相色谱的流速为（0.8~1.2）ml/min，进样体积为（1~5）μl。
进一步的，气相色谱采用质谱检测，质谱参数为：采集类型：MRM，离子源：EI，传输线温度：（250~300）℃，四极杆温度：150℃，离子源温度：250℃。
进一步的，气相色谱采用质谱检测，质谱扫描参数为：母离子239（m/z），子离子57/85（m/z），CE（5~25）（eV）。
进一步的，样品包括化工制品、生物制品和药品。
本申请提供了一种基于气相色谱的联硼酸频那醇酯的检测方法，通过二甲基亚砜溶解样品，然后再加入环己烷和水进行萃取，二甲基亚砜和水互溶后和环己烷分层，通过快速萃取的方式让联硼酸频那醇酯减少在水相停留的时间并快速从水相进入环己烷相以减少联硼酸频那醇酯的水解；同时液液萃取可以去除样品基质，并利用优化后的气相色谱条件能够大大提高联硼酸频那醇酯在气相进样口气化过程中目标物的热稳定性，使得用气相色谱串联质谱检测联硼酸频那醇酯成为可能。本申请的检测方法准确性和灵敏度高，解决了联硼酸频那醇酯在液相检测中发生水解反应或气相检测中由于样品基质致使目标物热稳定性差导致检测方法评价指标差的技术问题。本申请对检测方法的专属性、线性、检测限、准确度和稳定性进行验证，确认该方法适用于联硼酸频哪醇酯的含量测定。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。
图1为本申请实施例1专属性色谱图；
图2为本申请实施例1线性曲线图；
图3为本申请对比例1色谱图；
图4为本申请对比例2色谱图；
图5为本申请对比例4色谱图；
图6为本申请对比例5线性曲线图。
具体实施方式
为使得本申请的目的、特征、优点能够更加的明显和易懂，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，下面所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而非全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本申请保护的范围。
本申请实施例所使用的试剂和原料均为市售或自制。
实施例1
气相色谱条件：色谱柱：VF-624ms柱（30m×0.25mm，1.4μm）；流速：1.0ml/min；进样体积：1μl；分流模式：分流，分流比4：1；控制模式：恒定流量；载气：He；升温程序：70℃，保持1min；30℃/min升温至250℃，保持3min。
质谱参数：采集类型：MRM，离子源：EI，传输线温度：250℃，四级杆温度：150℃，离子源温度：250℃。
杂质扫描参数：母离子239（m/z），子离子57/85（m/z），驻留时间160（ms），CE15/25（eV）。
供试品溶液配制：称取样品约50mg，置于10ml离心管中，准确加入0.1ml二甲基亚砜，涡旋至样品完全溶解，依次精密加入2ml环己烷、0.2ml超纯水，涡旋1min后，静置分层，取上清液过滤，即得。
检测限溶液配制：精密称取联硼酸频哪醇酯对照品，置于10ml容量瓶中，加环己烷使溶解并稀释至刻度，摇匀，配制对照品储备液。取样品约50mg，置于10ml离心管中，准确加入0.1ml二甲基亚砜，涡旋至样品完全溶解，加入0.02ml 对照品储备液，涡旋振荡，再依次精密加入2ml环己烷、0.2ml超纯水，涡旋1min后，静置分层，取上清液过滤，即得。
标准曲线溶液配制：称取样品约50mg，置于不同10ml离心管中，准确加入0.1ml二甲基亚砜，涡旋至样品完全溶解；分别精密量取0.02ml各标准曲线储备液置于上述离心管中，涡旋振荡，再依次精密加入2ml环己烷、0.2ml超纯水，涡旋1min后，静置分层，取上清液过滤，即得一系列不同浓度标准曲线溶液。
准确度溶液配制：称取样品约50mg，置于10ml离心管中，准确加入0.1ml二甲基亚砜，涡旋振荡至样品完全溶解，加入0.02ml对照品储备液，涡旋振荡，再依次精密加入2ml环己烷、0.2ml超纯水，涡旋1min后，静置分层，取上清液过滤，即得。
（1）专属性：
分别取供试品溶液、100%限度浓度对照品溶液（浓度为316.96 ng/ml）和准确度溶液，按照测试条件进行分析。结果显示，供试品溶液色谱图中未检出目标峰；100%限度浓度对照品溶液色谱图中显示目标峰，且与峰面积大于LOQ的相邻峰分离度均大于1.5；准确度溶液色谱图（如图1所示）中均显示目标峰，且与峰面积大于LOQ的相邻峰分离度均大于1.5；结果均符合规定，该方法专属性良好。
（2）线性：
取标准曲线溶液，按照分析方法进样检测。结果如图2所示，结果表明：在4.75ng/ml~633.93ng/ml范围内，相当于限度浓度的1.5%～200%，联硼酸频哪醇酯峰面积与浓度呈良好的线性，相关系数r不小于0.990，y轴截距绝对值与100%限度浓度响应值之比为0.2%，线性符合规定。
（3）检测限：
取检测限溶液分别连续进样3次，记录色谱图。结果表明：连续3针检测限溶液中联硼酸频哪醇酯浓度为2.38ng/ml，相当于限度浓度的0.75%，S/N在7.6~10.9范围内，方法检测限结果符合规定。
（4）准确性：
取准确度溶液，按照测试条件分别进样3次进行分析，记录色谱图并计算回收率结果。100%限度浓度共3份加标供试品溶液中联硼酸频哪醇酯的回收率范围为89.0%～104.5%，回收率的RSD（n=3）小于6%，准确度结果符合规定。
（5）稳定性：
分别取供试品溶液、100%限度浓度对照品溶液和准确度溶液于室温条件下放置不同时间，按照分析方法进样分析，记录色谱图。于室温条件放置11.5h，供试品溶液均未检出联硼酸频哪醇酯；100%限度浓度对照品溶液中联硼酸频哪醇酯的检测浓度与初始（0h）检测浓度的比值介于88.4%~92.3%之间；准确度溶液中联硼酸频哪醇酯的检测浓度与初始（0h）检测浓度的比值介于86.4%~88.3%之间；因此，供试品溶液、100%限度浓度对照品溶液和准确度溶液于室温条件下放置至少11.5小时内稳定。
对比例1
参照实施例1的气相色谱和质谱条件对准确度溶液进行采样分析，区别仅在于准确度溶液配制中，先采用等量丙酮溶解样品，再加入2ml环己烷、2ml超纯水涡旋，其他条件均不变。结果见图3所示，待测物出峰时间7.744min，回收率约87%，但在5个小时后回收率跌至60%，稳定性不符合要求。
对比例2
参照实施例1的气相色谱和质谱条件对准确度溶液进行采样分析，区别仅在于气相色谱条件中，调整分流比为2:1，升温程序：70℃，保持1min；50℃/min升温至250℃，保持5min，其他条件均不变。结果见图4所示，待测物的出峰时间6.373min，回收率仅67%，准确性不符合要求。
对比例3
参照实施例1的气相色谱和质谱条件对准确度溶液进行采样分析，区别仅在于准确度溶液配制中，采用2ml环己烷、0.2ml氢氧化钠溶液涡旋，其他条件均不变。结果显示，目标峰峰面积较小、基本无响应。
对比例4
参照实施例1的气相色谱和质谱条件对准确度溶液进行采样分析，区别仅在于准确度溶液配制中，先采用等量1%四丁基溴化铵-丙酮溶液溶解，再加入2ml环己烷、2ml1mol/L HCl涡旋振荡，其余条件均不变。结果见图5所示，待测物与邻近峰分离度差，回收率和稳定性均不合格。
对比例5
参照实施例1的气相色谱和质谱条件对一系列不同加标量的准确度溶液进行采样分析，区别仅在于准确度溶液配制中，先采用等量N-甲基吡咯烷酮溶解样品，再精密移取2ml环己烷、5ml超纯水，涡旋振荡，其余条件均不变。结果见图6所示，待测物的线性较差，且平行6次检测中回收率RSD%超过15%。
以上所述，以上实施例仅用以说明本申请的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本申请进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本申请各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (5)

1.一种基于气相色谱的联硼酸频那醇酯的检测方法，其特征在于，气相色谱的色谱柱采用VF-624ms柱，气相色谱采用质谱检测，气相色谱的载气为He，分流比为（3~4）:1，气相色谱的升温程序为（50~70）℃，保持（1~2）min；（30~40）℃/min升温至（240~250）℃，保持（2~8）min；
样品预处理条件为：先采用少量二甲基亚砜溶解，再加入环己烷和超纯水的混合溶液萃取，样品与二甲基亚砜的用量比为（50~100）mg：（0.1~0.2）ml，混合溶液中环己烷与超纯水的体积比为1:（0.1~0.2），样品与混合溶液的用量比为（50~100）mg：（2~2.5）ml。
2.根据权利要求1所述的基于气相色谱的联硼酸频那醇酯的检测方法，其特征在于，气相色谱的流速为（0.8~1.2）ml/min，进样体积为（1~5）μl。
3.根据权利要求1所述的基于气相色谱的联硼酸频那醇酯的检测方法，其特征在于，质谱参数为：采集类型：MRM，离子源：EI，传输线温度：（250~300）℃，四极杆温度：150℃，离子源温度：250℃。
4.根据权利要求1所述的基于气相色谱的联硼酸频那醇酯的检测方法，其特征在于，质谱扫描参数为：母离子239（m/z），子离子57/85（m/z），CE（5~25）（eV）。
5.根据权利要求1所述的基于气相色谱的联硼酸频那醇酯的检测方法，其特征在于，样品包括化工制品、生物制品和药品。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102558209A (zh) * 2012-01-11 2012-07-11 海门瑞一医药科技有限公司 联硼酸频那醇酯生产工艺
CN105198911A (zh) * 2015-10-20 2015-12-30 华侨大学 一种烷基硼酸酯的催化合成方法

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EA201591610A1 (ru) * 2013-03-14 2015-12-30 Курадев Фарма Прайвит Лтд. Ингибиторы кинуренинового пути

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102558209A (zh) * 2012-01-11 2012-07-11 海门瑞一医药科技有限公司 联硼酸频那醇酯生产工艺
CN105198911A (zh) * 2015-10-20 2015-12-30 华侨大学 一种烷基硼酸酯的催化合成方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
2-氟-4-甲基吡啶-5-硼酸频那醇酯的合成工艺研究;吴省付等;《广东化工》;20141231;第41卷(第17期);第8页 *
Selective quantitation of B2Pin2 and B2(OH)4 in active pharmaceutical ingredients by gas chromatography-mass spectrometry;Armen Shamirian等;《Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis》;20210223;第198卷;第1-5页 *

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