CN115121295A - 包含载体粒子、分散剂和静电结合的分层粒子的复合物的离子交换组合物 - Google Patents

Abstract

包含载体粒子、分散剂和静电结合的分层粒子的复合物的离子交换组合物。本发明提供一种制造适用于离子交换色谱的离子交换组合物的方法，包含：(a)形成中性乙烯基聚合物载体粒子不可逆地结合到分散剂的第一复合物，所述分散剂具有可电离位点，(b)将所述第一复合物填充到色谱柱中，(c)在pH为12.5‑14的强碱性条件下形成所述第一复合物与细分层粒子的含水浆料的混合物，在所述细分层粒子的表面上用离子交换位点官能化，使得所述分散剂包括所述已电离位点，并且(d)使所述分散剂的已电离位点静电结合到所述细粒子离子交换位点的一部分，产生载体粒子‑分散剂‑细分层粒子复合物。

Description

包含载体粒子、分散剂和静电结合的分层粒子的复合物的离 子交换组合物

本发明专利申请是申请号为201610613362.7，申请日为2016年7月29日，名称为“包含载体粒子、分散剂和静电结合的分层粒子的复合物的离子交换组合物”的发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及一种适用于进行离子交换色谱的组合物。更确切地说，本发明涉及一种改良组合物和用于制备离子交换组合物的方法，其中树脂载体粒子经由分散剂材料不可逆地连接到细树脂分层粒子。本发明组合物可以用于常规柱色谱中，但最尤其适合高效液相色谱。

背景技术

一般来说，离子交换色谱采用管柱。这些管柱填充有树脂，树脂常常呈具有吸附活性表面或已涂有吸附活性物质的表面的颗粒形式。

在本领域中普遍认为，极佳的色谱载体由多个离散粒子组成，这些粒子形状规则，优选是球形，表面含大量表层浅孔。为了使管柱给出可再现的色谱结果，载体粒子理想地应该表面规则并且其表面特征是可容易再现的。

用于执行液相色谱分析的材料是已知的，其中仅色谱载体材料的薄外表面可用于与液体介质主动地交换离子。举例来说，Small等人在美国专利第4,101,460号(1978)中描述了离子交换组合物的制备和用途，所述离子交换组合物包含组分A，一种至少在可用表面上具有离子交换位点的不可溶合成树脂衬底，并且具有组分B，一种不可逆地连接着的细粉状不可溶材料。

在以上现有技术静电方法中，树脂载体粒子通常通过悬浮聚合工艺形成。在树脂载体粒子的聚合过程中经常使用分散剂材料以在产生粒子时维持粒子在反应溶液中分开，防止所要大小的粒子彼此粘住和形成更大的聚集粒子。然后通过使树脂载体粒子在室温下暴露于浓硫酸中持续几分钟而使所述粒子略微磺化。此操作使得在树脂载体粒子的表面上产生了非常薄的一层磺酸盐位点并且允许如胺化乳胶珠粒等细树脂分层粒子的静电连接。

因此，在以上现有技术静电方法中，有必要通过至少在细分层粒子的表面形成正电荷或负电荷，从而使那些粒子官能化，以便静电连接。此操作通过使乳胶衍生粒子胺化或磺化来进行。如果乳胶胺化，那么树脂载体粒子磺化。在乳胶磺化的情况下，树脂载体粒子胺化。然后使乳胶和载体粒子彼此接触，促使一层单珠粒胶乳粒子静电连接到树脂载体粒子的表面。这产生了薄膜阴离子交换或薄膜阳离子交换树脂珠粒。

Barretto等人的美国专利第5,532,279号(“'279专利”)在第1-3栏中描述了各种用于制造这类离子交换组分B粒子以静电方式分层在组分A粒子上的聚集物的现有技术方法。此外，它描述了一种离子交换组合物，所述离子交换组合物包含合成树脂载体粒子、能够使载体粒子悬浮在水性介质中以抑制或防止聚集的分散剂以及细合成树脂分层粒子。所述复合物可以通过使合适的分散剂与单体在所述单体不可溶的水溶液中接触来形成。在适合悬浮聚合的条件下，单体将聚合形成树脂载体粒子，其中分散剂不可逆地连接到那些粒子。分散剂是通过共价键结或永久性物理缠结而不可逆地连接到合成树脂载体粒子的。分散剂还通过共价键结或通过静电力连接到细分层粒子。结果是形成了载体粒子-分散剂-分层粒子复合物。

'279专利披露，离子交换组合物可以通过形成分散剂不可逆地连接到载体粒子的合成树脂载体粒子-分散剂复合物制成。然后可以使所述复合物以含水浆料形式与细树脂分层粒子在适合形成树脂分层粒子不可逆地连接到分散剂的树脂载体粒子-分散剂-树脂分层粒子复合物的条件下混合。实际上，分散剂在载体粒子与分层粒子之间形成了不可逆的桥。分散剂不可逆地连接到树脂载体粒子。分散剂含有离子官能团或可能具反应性的官能团，这些官能团可以通过另外的化学过程在载体粒子聚合之后采用。'279专利中所述类型的离子交换组合物由赛默飞世尔科技(Thermo Fisher Scientific)以商品名称OmniPac^TM出售，包括OmniPac^TMPAX-100、OmniPac^TMPAX-500、OmniPac^TMPCX-100和OmniPac^TMPCX-500管柱。

发明内容

在本发明的一个实施例中，提供一种用于制造适用于离子交换色谱的离子交换组合物的方法。所述方法包含以下步骤：形成中性乙烯基聚合物载体粒子不可逆地结合到分散剂的第一复合物。分散剂具有可电离位点，所述可电离位点在中性pH下不电离并且在强碱性或强酸性条件下电离。

在强碱性或强酸性条件下，在所述复合物与细分层粒子的含水浆料之间形成混合物，在细分层粒子的表面上用离子交换位点官能化，使得分散剂包括已电离位点。使分散剂的已电离位点静电结合到细粒子离子交换位点的一部分，产生载体粒子-分散剂-细分层粒子复合物。

在本发明的另一个实施例中，形成一种适用于离子交换色谱的离子交换组合物。中性乙烯基聚合物载体粒子不可逆地结合到具有可电离位点的分散剂，所述可电离位点在中性pH下不电离并且在强酸性或强碱性条件下电离。细分层粒子用离子交换位点使其表面官能化。可电离位点的一部分电离并且静电结合到细分层粒子离子交换位点的一部分，产生载体粒子-分散剂-细分层粒子复合物。

附图说明

图1展示使用现有技术CarboPac^TM PA 20 3×150mm管柱分离的色谱图，其中首先使载体粒子的表面磺化以产生负表面，带正电荷的胶乳粒子静电连接到所述负表面。

图2展示使用根据本发明的管柱的色谱图。

图3展示使用根据本发明的管柱的色谱图。

图4展示使用根据本发明的管柱的色谱图。

图5展示使用根据本发明的管柱的色谱图。

图6展示使用根据本发明的管柱的色谱图。

图7是比较根据本发明在各种pH下聚集的管柱的运行时间的表格。

图8A到图8D是比较根据本发明在各种pH水平下聚集的管柱的运行时间的图表。

图9A和图9B是比较根据本发明在各种pH水平下聚集的管柱的运行时间的图表。

具体实施方式

本发明的离子交换组合物包括中性乙烯基聚合物(例如合成树脂)载体粒子、能够使载体粒子悬浮在水性介质中以抑制或防止聚集的分散剂以及细合成树脂分层粒子。分散剂通过共价键结或通过永久性缠结或通过这两者而不可逆地连接到载体粒子，并且还静电连接到分层粒子。

中性乙烯基聚合物载体粒子可以由任何可与特定相关分散剂反应的合成树脂材料形成，如通过引用并入的'279专利中所述。举例来说，以下是合适的：合成聚合物树脂，如聚(苯酚-甲醛)、聚丙烯酸或聚甲基丙烯酸、苯乙烯于聚乙烯或聚丙烯上的接枝聚合物；聚-(芳乙烯)树脂，如由苯乙烯、α-甲基苯乙烯、乙烯基甲苯、苯乙烯和类似不饱和单体、单亚乙烯基单体以及共聚物衍生的那些聚-(芳乙烯)树脂。本发明的中性乙烯基载体粒子(如'279专利中的那些)是“中性”的，也就是说不包括可供静电连接的离子交换位点，如美国专利第4,101,468号。

本发明的载体粒子可以通过众所周知的悬浮聚合技术形成，这种技术涉及使单体小液滴悬浮在其不可溶的水性介质中，如'279专利中所述。因此，树脂载体粒子可以包含交联聚合物或共聚物珠粒，如含有以重量计介于约2％到约100％之间的二乙烯基苯单体的苯乙烯-二乙烯基苯共聚物。在其最优选实施例中，苯乙烯-二乙烯基苯共聚物含有以重量计介于约25％到约80％之间的二乙烯基苯单体。

本发明的细分层粒子可以由合成聚合物(例如树脂)形成，所述合成聚合物经过选择以适当地连接到特定分散剂材料并且不可逆地连接到分散剂的一个或多个官能团。优选地，分层粒子通过乳液聚合形成并且将衍生自不可溶于其将接触的溶剂中的单体混合物。聚合可以通过常规乳液聚合技术进行，如通过在合适的乳化剂存在下，加热并搅拌单体于合适溶剂中的悬浮液。或者，聚合可以通过悬浮法、本体法或溶液法进行，然后通过如球磨机、棒磨机等机械构件将树脂研磨到所要大小。

细树脂分层粒子可以由任何众所周知的合成离子交换树脂形成，如结合上文所述和'279专利中的合成树脂载体粒子所述。优选地，分层粒子将由交联聚合物形成。分层粒子可以适当地由聚(芳乙烯)树脂形成，所述聚(芳乙烯)树脂如以下共聚物：苯乙烯-二乙烯基苯共聚物、二乙烯基苯-乙烯基苯甲基氯共聚物或甲基丙烯酸酯-乙烯基苯甲基氯共聚物。分层粒子可以选自用于形成用作阳离子交换或阴离子交换组合物的聚集物的已知分层粒子中的任一种，如'279专利中所披露。

分层粒子可以衍生自乳胶乳液。在一个优选实施例中，分层粒子包含含有以重量计约0.25％到约100％的交联单体的交联聚合物或共聚物。在其最优选实施例中，分层粒子包含含有以重量计介于约1％到约5％之间的交联单体的交联聚合物或共聚物。

优选地，分层粒子的中值直径介于0.002到0.08微米范围内，同时载体粒子与分层粒子的中值直径比介于100:1与5,000:1之间的范围内，如Pohl(1983)的美国专利第4,376,047号中所述。

本发明的分散剂材料经过优选地选择，使得其含有将不可逆地连接到载体粒子和分层粒子的官能位点。分散剂抑制或防止在悬浮期间在用于聚合的水性介质中聚集。在一个最优选的实施例中，分散剂包含以重量计介于约0.1％到约25％之间的分散剂于水中。

分散剂具有可电离位点，所述可电离位点在中性pH下不电离并且在强碱性或强酸性条件下电离。因此，分散剂不包括在中性pH下电离的离子位点(如磺酸盐)。举例来说，为了制造阴离子交换组合物，分散剂可以是醇，优选地聚乙烯醇，其在中性pH下不电离，但其在强碱性条件下去质子化，从而形成离子交换位点，所述离子交换位点在分层粒子连接到载体粒子上的分散剂期间静电结合到分层粒子上带相反电荷的离子交换位点，从而形成产生本发明的载体粒子-分散剂-细分层粒子离子交换组合物。

分散剂与载体粒子的不可逆连接可以通过共价键结或永久性物理连接完成，如通过引用并入的'279专利的第6栏第3-54行中所阐述。

如本文所用的术语“不可逆地连接”意指大多数分散剂粒子将不会因为强电解质溶液或如在使用本发明的新颖组合物使液体通过离子交换床时形成的剪切力而从与树脂载体粒子或树脂分层粒子的连接中移开。如本文所用的“不可逆地连接”包括分散剂通过共价键结或永久性缠结连接到树脂载体粒子。如本文所用的“不可逆地连接”还包括分散剂通过连接时的静电力连接到细树脂分层粒子。即使在将pH调整到分散剂不再电离的pH之后，细分层粒子仍然保持连接。假设即使在分散剂不再处于电离状态时细分层粒子仍然保持连接是归因于以下事实：在由静电引力所致的连接过程期间，聚合物分散剂和细分层粒子变成永久性缠结。“不可逆连接”不包括单独的物理吸附。

所述复合物和其形成模式与'279专利的复合物和其形成模式的显著差异是细分层粒子与分散剂的不可逆连接模式。如上文所阐述，聚乙烯醇是用于制造阴离子交换组合物的优选分散剂。还可以使用其它分散剂，如聚乙烯吡咯烷酮、***胶或聚丙烯酰胺，只要其包括在中性pH条件下不电离并且在强碱性或强酸性条件下去质子化或质子化并因此电离的位点即可。

形成离子交换复合物的方法包括形成如上文所阐述的载体粒子不可逆地结合到分散剂的复合物。将这种复合物与细分层粒子的含水浆料混合，所述细分层粒子含有带有与已电离分散剂位点的电荷相反的电荷的离子交换位点。关于使用聚乙烯醇的阴离子交换组合物，分层粒子上的离子交换位点是碱性的，并且不可逆地静电结合到去质子化聚乙烯醇分散剂。分层粒子表面上的合适的离子交换位点包括三甲基季铵、二甲基乙醇季铵和甲基二乙醇季铵离子交换位点。用于阴离子交换组合物的优选分层粒子是羟基处于β位或γ位的季胺。

关于醇分散剂，合适的强碱性条件是pH至少12，优选地至少12.5到14.0。在分层粒子聚集期间，pH越高，电离的醇位点的数量越多。优选地，分散剂的已电离位点静电结合到大部分(例如超过10％)的细粒子离子交换位点。这使得连接到载体粒子的分层粒子的浓度更高。这又促使运行时间变长，并且因此产生了提高特定应用的色谱材料的容量的能力。应注意，术语“运行时间”也可以被称作“保留时间”，它表示将特定化学物质从色谱柱上洗脱下来所需的时间。

本发明也适用于阳离子交换组合物。在这种情况下，分散剂在中性pH下不电离并且在强酸性条件下，适当地在小于3、优选地小于2的pH下电离。这种类型的合适的分散剂是聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酰胺和氧化胺聚合物分散剂。关于阳离子交换组合物，细分层粒子上的离子交换位点是酸性的并且在强酸性条件下不可逆地结合到分散剂上的已电离位点。这种类型的合适的离子交换位点包括磺酸或膦酸阳离子交换位点。

在一个实施例中，本发明的载体粒子-分散剂-细分层粒子复合物可以在填充到色谱柱中之前形成。在第二优选实施例中，首先将载体粒子和分散剂的复合物填充到色谱柱中，并且然后向管柱中添加分层粒子，形成三组分复合物。用于执行第二实施例的方法的合适方法如下：1.使用足以装满管柱且至少过量10％的量的粒子，在超声波浴中制备连接有分散剂的合适粒子于表面活性剂与氢氧化钠的混合物中的浆料。2.将浆料转移到下面连有空管柱的浆料储集器。3.通过在高压力下，通常在至少3倍于预计管柱将使用的流速的流速下，将浆料泵吸到管柱中，从而将粒子填充到空管柱中。4.然后从浆料储集器取下管柱并且将进口端配件连接到管柱。5.将细分层粒子浆料分散于足量氢氧化钠中，从而使浆料pH达到14。6.然后将这份浆料以低流速，通常为管柱的预计操作流速的25％或更小的流速泵送通过填充柱，所述填充柱含有经分散剂涂布的粒子。7.最后，通过用去离子水冲洗管柱来去除过量细分层粒子。

以上方法中的任一种优于形成三组分复合物的现有技术方法的优势在于，本发明方法使用常规静电乳胶涂布方法，在更短的时间内产生组合物并且与大量市售固定相是相容的。分层粒子与载体粒子-分散剂复合物在色谱柱中原位静电结合的优势包括：如碘离子或高氯酸根等可极化离子的色谱性能改良，如蛋白质或DNA等大分子的色谱性能更好，并且如蛋白质等大分子残留更少。

树脂载体粒子和细树脂分层粒子经过选择，使得树脂分层粒子的外表面上的离子交换位点是将其离子与应从溶液中去除的离子物质交换的位点。因此，组合物可以制备成使得取决于想要从溶液中去除的离子的性质，其在细树脂分层粒子上具有阳离子或阴离子交换位点。合适的阳离子或阴离子交换分层粒子是本领域的普通技术人员众所周知的。

使待解析的离子物质通过管柱，在所述管柱中，不同离子归因于对填充材料上的离子交换位点的不同吸引程度而得以分离。为了从管柱中移出离子，使洗脱剂通过管柱，洗脱剂也连接到这类位点，从而驱动离子，使得可以收集到离子进行分析。通常，这些洗脱剂具有与待解析的离子相同的电荷并且是不同的化学类型。

本发明的离子交换组合物尤其适合用作管柱填充材料，用于通过在管柱上的差异性保留，以色谱方式分离溶液中带相反电荷的离子物质。这可以通过使这种溶液与色谱柱接触来实现，色谱柱包括由本发明组合物形成的离子交换粒子填充床。粒子上的离子交换位点吸引有待从溶液中去除的离子。

待采用的洗脱剂的范围、其流速和离子交换色谱的参数是本领域的普通技术人员众所周知的。

为了说明本发明，提供其实践的以下非限制性实例。

实例1

制备树脂载体粒子-分散剂复合物(共价或永久性缠结).

可以将20克75％过氧化苯甲酰于230克二乙烯基苯(实际上含有55％的二乙烯基苯)和230克乙基乙烯基苯的混合物中的溶液以细小液滴形式分散在1600mL含有水和8克聚乙烯醇(Polysciences Inc.目录号4398，125,000克/摩尔，88％水解)的水溶液中。可以通过在反应容器内维持氮气氛围来保护整个混合物隔绝空气。可以将混合物加热到80℃并且在此温度下保持二十小时，在此期间发生聚合。可以从树脂粒子中排出液体并且然后可以用水洗涤以去除水溶性产物，从而得到呈球形粒子形式的白色不透明聚合物。

实例2

制备经过阴离子交换基团官能化的乳胶衍生分层粒子-(阳离子表面活性剂)

用30.5克水、0.13克碳酸氢钠、0.13克过硫酸钾和4.5克12.5％

MA溶液(磺基丁二酸二己酯钠)制备水溶液，同时用氮气净化。接着，向所述水溶液中添加8.29克乙烯基苯甲基氯、0.91克二乙烯基苯(实际上含有55％的二乙烯基苯)和0.40克乙烯基膦酸二乙酯，同时搅拌以形成乳液并且维持氮气净化。向水溶液中添加3克10％焦亚硫酸钠溶液，同时搅拌并且维持氮气净化。将整个混合物放置在16盎司细颈瓶中并且用氮气脱气五分钟。给瓶子加盖并且在保持在32℃下的水浴中翻滚18小时以完成聚合并且形成乳胶。向乳胶中添加6.84克70％Triton X-405(乙氧基化壬基苯酚)溶液并且搅拌以使其稳定。通过4号滤纸过滤白色不透明混合物以从乳胶中去除任何凝结物。通过向47.86克乳胶中添加86.12克1M 1,4-二氮杂双环(2.2.2)辛烷，搅拌混合物5分钟，并且然后将混合物在烘箱中于85℃下放置24小时来使乳胶官能化。所得乳胶或细分层粒子5％与二乙烯基苯交联并且95％与乙烯基苯甲基氯交联，并且经过二-叔胺1,4-二氮杂双环(2,2,2)辛烷官能化。胺化乳胶的最终大小是约235nm。

实例3

制备与乳胶聚集的树脂载体粒子-分散剂复合物.

对类似于实例1的树脂载体粒子-分散剂复合物进行干燥，使得其所有水分小于2％。在这种情况下，树脂载体粒子是用55％二乙烯基苯制备的6μm树脂，其中在合成期间，使用聚乙烯醇(PVA)作为分散剂。向100克甲醇中添加15克干的树脂载体粒子，并且声处理15分钟以形成树脂载体粒子和甲醇的混合物。接着，向树脂/甲醇混合物中添加100克去离子水并且搅拌5分钟。然后过滤这份树脂/甲醇/水混合物，形成过滤后的树脂的湿滤饼。然后用去离子水洗涤这份过滤后的树脂两次。用12克pH 14(1M NaOH)水溶液稀释3克过滤后的树脂，形成NaOH/树脂混合物。将这份NaOH/树脂混合物声处理5分钟以确保良好混合。在搅拌这份NaOH/树脂混合物的同时，添加2克来自实例2的阴离子交换乳胶溶液并且搅拌15分钟，形成聚集的树脂。过滤聚集的树脂并且然后用20克pH 14水溶液洗涤。将聚集的树脂在50克pH 14水溶液中制成浆料，搅拌5分钟，并且然后过滤。接着，重复这一步骤，其中将树脂用50克pH 14水溶液再制成浆料，搅拌5分钟，并且然后过滤。在过滤后，用丙酮/碱水溶液执行制浆-洗涤步骤三次。制浆-洗涤步骤包括：用丙酮和pH 14NaOH水溶液(各20克)的50/50混合物形成树脂浆料，搅拌5分钟，过滤经过搅拌的浆料，并且用相同的50/50混合物(总共40克)洗涤。用去离子水洗涤这份聚集的树脂两次(不调整pH)，并且然后将其填充到色谱柱中，其用于图2。

使用类似方法制备图3到6中所用的色谱柱，其例外之处在于用于形成NaOH/树脂混合物的NaOH溶液对于图3来说是pH 13.5(0.32M NaOH)，对于图4来说是pH 13(0.10MNaOH)，对于图5来说是pH 12.5(0.032M)并且对于图6来说是pH 12.0(0.01M NaOH)。类似于pH 14聚集的乳胶复合物，将pH 13.5、13、12.5和12聚集的乳胶复合物进行洗涤并且制成浆料，其例外之处在于洗涤溶液、浆料溶液和丙酮/碱水溶液的水溶液部分的pH类似于聚集pH。类似于pH 14聚集，这些聚集的乳胶复合物用去离子水洗涤两次(不调整pH)，并且然后填充到色谱柱中。

实例4

(使用现有技术色谱柱所得的离子分离的色谱图)

在这个实例中，使用由戴安公司(Dionex Corporation)出售的市售表面磺化的CarboPac^TM PA20(3×150mm)管柱。它一般通过美国专利第6,248,798号中所述的方法制成。使用电化学电池(Dionex ED50)，并且四重波形示出在下表1中。

表1.

分离参数如下。

管柱：CarboPac PA20

洗脱剂：10mM KOH

洗脱剂来源：Dionex EGC 500KOH滤筒

流速：0.5mL/min

注射体积：10μL

垫圈：2mil

温度：30℃

检测：积分安培法，四重脉冲波形

工作电极：PTFE金一次性电极

参比电极：银/氯化银

标准：对于以下所列分析物来说浓度是10mg/L

峰：

1.海藻糖

2.半乳糖胺

3.葡糖胺

4.半乳糖

5.葡萄糖

6.甘露糖

分离色谱图示出在图1中。应注意，y轴表示以纳米库仑(nC)为单位的所测量到的电荷。

实例5

(使用根据本发明的复合物分离)

用实例3的复合物填充管柱(3mm内部直径×150mm长度)，其中在pH 14.0下进行聚集。其它参数如下：

管柱：实例1的树脂，在pH 14下聚集

洗脱剂：10mM KOH

洗脱剂来源：Dionex EGC 500KOH滤筒

流速：0.5mL/min

注射体积：10μL

垫圈：2mil

温度：30℃

检测：积分安培法，四重脉冲波形

工作电极：PTFE金一次性电极

参比电极：银/氯化银

标准：对于以下所列分析物来说浓度是10mg/L

峰：

1.海藻糖

2.半乳糖胺

3.葡糖胺

4.半乳糖

5.葡萄糖

6.甘露糖

分离色谱图示出在图2中。

实例6

除了在pH 13.5下进行聚集之外，这个实例与实例5相同。分离色谱图示出在图3中。

实例7

除了在pH 13.0下进行聚集之外，这个实例与实例5相同。分离色谱图示出在图4中。

实例8

除了在pH 12.5下进行聚集之外，这个实例与实例5相同。分离色谱图示出在图5中。

实例9

除了在pH 12.0下进行聚集之外，这个实例与实例5相同。分离色谱图示出在图6中。

实例10

图7是比较运行时间(分钟)和pH(例如5-9)的表格。

图8A到8D以及9A和9B是展示根据图7的表格，运行时间和聚集(aggl)pH(例如5-9)的图表。

Claims (2)

1.一种制造适用于离子交换色谱的离子交换组合物的方法，所述方法包含以下步骤：

(a)形成中性乙烯基聚合物载体粒子不可逆地结合到分散剂的第一复合物，所述分散剂具有可电离位点，所述可电离位点在中性pH下不电离并且在强碱性或强酸性条件下电离，且所述的分散剂选自聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮和聚丙烯酰胺，

(b)将所述第一复合物填充到色谱柱中，

(c)在pH为12.5-14的强碱性条件下形成所述第一复合物与细分层粒子的含水浆料的混合物，在所述细分层粒子的表面上用离子交换位点官能化，使得所述分散剂包括所述已电离位点，并且

(d)使所述分散剂的已电离位点静电结合到所述细粒子离子交换位点的一部分，产生载体粒子-分散剂-细分层粒子复合物。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述分散剂是醇基去质子化产生所述已电离位点的聚乙烯醇。

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