CN115120550A - 包含对毛发带来有益功效的链球菌培养液的毛发化妆品组合物 - Google Patents

包含对毛发带来有益功效的链球菌培养液的毛发化妆品组合物 Download PDF

Info

Publication number
CN115120550A
CN115120550A CN202111152017.5A CN202111152017A CN115120550A CN 115120550 A CN115120550 A CN 115120550A CN 202111152017 A CN202111152017 A CN 202111152017A CN 115120550 A CN115120550 A CN 115120550A
Authority
CN
China
Prior art keywords
hair
streptococcus
cosmetic composition
hyaluronic acid
culture
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202111152017.5A
Other languages
English (en)
Inventor
朴慧琳
金珍英
李康爀
申松锡
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hyundai Bioland Co Ltd
Original Assignee
Hyundai Bioland Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hyundai Bioland Co Ltd filed Critical Hyundai Bioland Co Ltd
Publication of CN115120550A publication Critical patent/CN115120550A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/99—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from microorganisms other than algae or fungi, e.g. protozoa or bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q7/00—Preparations for affecting hair growth
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
    • A61K2800/85—Products or compounds obtained by fermentation, e.g. yoghurt, beer, wine

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Cosmetics (AREA)

Abstract

本发明涉及包含以不形成透明质酸的方式培养的链球菌培养液的毛发化妆品组合物，更具体地，涉及包含以不形成透明质酸的方式在酸性pH条件下培养的链球菌属菌株培养液作为有效成分的防脱发及毛发生长用毛发化妆品组合物及其培养方法。根据本发明，以不形成透明质酸的方式在酸性pH条件下培养的链球菌培养液的脱发缓解、毛发生长、毛根强化及毛发涂布效果，比起以形成以往透明质酸的方式在中性pH条件下培养的链球菌培养液好。因此，根据本发明培养的链球菌培养液，作为防脱发及毛发生长用毛发化妆品组合物的原料可有效利用。

Description

包含对毛发带来有益功效的链球菌培养液的毛发化妆品组 合物
技术领域
本发明涉及包含以不形成透明质酸的方式培养的链球菌培养液的毛发化妆品组合物，更具体地，涉及包含以不形成透明质酸的方式在酸性pH条件下培养的链球菌属菌株培养液作为有效成分的防脱发及毛发生长用毛发化妆品组合物及其培养方法。
背景技术
在现代社会上，因脱发而感到困扰的人数越来越多，其年龄层也逐渐变低。因这些理由，在重视外在美的现代社会上，脱发目前成为社会的大问题。
脱发的主要原因在于，形成毛发的细胞的功能低下、男性荷尔蒙的过度分泌、皮脂的过度分泌、头皮屑的过度产生、营养摄取不足等。这些问题不仅是因为遗传及老化现象引起的原因，而且因饮食习惯、精神压力、卫生情况等复合产生，但是，尚未究明关于脱发的明确原因。
最近，日常生活中使用护理角度上的防脱发产品的女性或年轻人的需求剧增，针对这些走向，处于平常每天使用的洗发精组合物中包含有助于防脱发的有效成分来预防脱发的趋势。
目前，代表性的防脱发剂有美国FDA认证的非那雄胺和米诺地尔等。虽然这些药物在临床上呈现明显效果，但是不仅出现性功能障碍及皮肤刺激等副作用，而且具有女性不可使用或者受限的缺点。最近正在活跃进行将可完善这些药物的缺点的安全而不受性别限制地可使用的天然物或微生物培养物开发为原料的研究。
韩国授权专利10-1098526中提及到包含将链球菌菌株发酵的发酵物的毛发生长用毛发化妆品组合物，韩国公开专利10-2001-0107152中提及到包含复合乳酸菌发酵液的毛发化妆品组合物。并且，韩国公开专利10-2020-0126920中提及到包含透明质酸和蛋白聚糖偶联蛋白作为有效成分的脱发预防或治疗用药学组合物，韩国授权专利10-1516445提及到利用阳离子化透明质酸和/或其盐的毛发改性剂，2019年地区特色(主力)产业培育技术开发事业的最终报告书上发表过“利用包含毛发相关信号传递多肽的透明质酸微针粒子的最新脱发缓解剂开发”。
关于链球菌菌株的培养条件，以往发表的论文“Effect of pH,a gitation andaeration on hyaluronic acid production by Streptococcus zooepidemicus”(Biotechnology Letters volume 16,pages507-512(1994))中揭示pH 6.7±0.2是用于链球菌的透明质酸生产收率的最佳pH，韩国授权专利10-1784864中揭示为了防止因培养链球菌时所生成的乳酸而导致菌株培养被抑制，将pH保持到6.5～7.5为宜，韩国授权专利10-1322227中揭示用于最佳生产透明质酸的链球菌的培养条件为pH 7.0、34℃的条件。即，揭示以往生产透明质酸的链球菌的培养条件仅为中性pH。
对此，本发明人组合上述现有技术，以能够生产更多的对脱发预防有效果的透明质酸的方式做培养链球菌菌株的实验的过程中，偶然发现到相比于以往以形成透明质酸的方式在中性pH条件下培养的链球菌培养液，以不形成透明质酸的方式在酸性pH条件下培养的链球菌培养液的脱发缓解、毛发生长、毛根强化及毛发涂抹效果反而更佳，由此完成了本发明。
发明内容
因此，本发明的主要目的在于，提供包含以不形成透明质酸的方式培养的链球菌属菌株培养液的防脱发及毛发生长用毛发化妆品组合物。
本发明的另一目的在于，提供以不形成透明质酸的方式培养链球菌属菌株的方法。
根据本发明的一实施方式，本发明提供包含以不形成透明质酸的方式在酸性pH条件下培养的链球菌属菌株培养液作为有效成分的毛发化妆品组合物。
在本发明中，提供一种毛发化妆品组合物，其特征在于，上述酸性pH条件为pH 2～4。以往的链球菌属菌株的培养，通常是为了菌株的最佳培养和透明质酸的生产而在pH 6.5～7.5的中性pH条件下培养。相比于以往的中性pH条件，本发明的酸性pH条件是可抑制链球菌属菌株的培养及透明质酸的生产的苛刻条件。在本发明的实验例1中最初确认到如下，对于pH 2～4的酸性条件下培养的实施例而言，与中性pH条件不同的是，透明质酸几乎未被形成。
在本发明中，提供如下的毛发化妆品组合物，其特征在于，上述链球菌属菌株均可使用被公知为生产以往透明质酸的任何链球菌属菌株，优选地为选自由兽疫链球菌(Streptococcus zooepidemicus)、嗜热链球菌(Streptococcus Thermophilus)及唾液链球菌(Streptoco ccus salivarius)组成的组中的任一个。
在本发明中，上述培养液是不仅包含培养的原液，也包含将其纯化的培养纯化物的概念。在本发明中，提供如下的毛发化妆品组合物，其特征在于，培养液的纯化均可使用以往微生物培养领域中公知的任何纯化方法，优选地，上述培养液利用离心分离器、过滤器及活性炭进行纯化。
在本发明中，提供如下的毛发化妆品组合物，其特征在于，上述培养液的脱发缓解、毛发生长、毛根强化及毛发涂抹效果，比起以形成透明质酸的方式在中性pH条件下培养的链球菌属菌株培养液好。在本发明中，实验例2进行毛发抗拉强度评价，实验例3利用AFM测定毛发平均粗糙度，实验例4进行毛根强化评价，实验例5进行毛发生长评价，实验例6进行男性型脱发缓解评价，由此证明了本发明的效果。
由于以往公知为透明质酸具有脱发预防效果，因此预料到以能够生产更多透明质酸的方式培养的链球菌菌株培养液的脱发缓解、毛发生长等效果更佳，然而，本发明人出乎意料地最初发现了以不形成透明质酸的方式在酸性pH条件下培养的链球菌培养液的脱发缓解、毛发生长等效果更佳，由此完成了本发明。这被推测为也许根据酸性pH的苛刻培养条件，使得培养液中形成有助于脱发缓解、毛发生长的更好的成分。
在本发明中，提供如下的毛发化妆品组合物，其特征在于，以不形成上述透明质酸的方式在酸性pH条件下培养的链球菌属菌株培养液包含为0.01至100重量百分比。
在本发明中，提供如下的毛发化妆品组合物，其特征在于，上述毛发化妆品组合物的剂型为选自由洗发精、生发液、护发素、焗油膏、发膏、发露、啫喱水、发膜、发胶、摩丝、洗发皂、发粉及发油等组成的组中的任一个。
根据本发明的另一实施方式，本发明提供包括如下步骤的以不形成透明质酸的方式培养链球菌属菌株的方法：
a)，将链球菌属菌株接种于灭菌的生产培养基之后，在培养温度20～40℃、pH 2～4下，以100～250rpm培养2～8小时的步骤；以及，
b)，随后在培养温度20～30℃、pH 2～4的条件下，以0～100rpm培养20～30小时的步骤。
在本发明中，还可包括在上述步骤a)的接种之前用于增殖链球菌属菌株的种菌培养步骤。优选地，上述种菌培养步骤包括将链球菌属菌株接种于灭菌的液体培养基之后，在pH 6～8、27～35℃下，以100～250rpm培养15～20小时的步骤。
在本发明中，提供如下的培养链球菌属菌株的方法，其特征在于，上述步骤a)的生产培养基均可使用包含用于培养链球菌属菌株的葡萄糖等营养成分和无机盐类的任何生产培养基，但是优选地，每1L水包含葡萄糖3～7％、酵母浓缩液0.3～0.7％、磷酸钾0.1～0.3％、硫酸镁0.03～0.07％、多聚蛋白胨1～3％。
在本发明中，上述步骤a)及步骤b)中，根据链球菌的培养，生成乳酸，导致pH变低，因此如以往一样不使用NaOH等碱性pH调节剂，就可以将pH保持为pH 2～4。
在本发明中，在上述步骤b)中，不仅是酸性pH条件，而且培养温度也调节为低于适当培养温度的20～30℃，rpm也调节为低于适当rpm的0～100rpm，如此在更苛刻的条件下培养，由此可更确切地保证不形成透明质酸。在本发明的实验例1中，对于如上所述的苛刻条件下培养的实施例而言，确认到几乎不形成透明质酸。
根据本发明，以不形成透明质酸的方式在酸性pH条件下培养的链球菌培养液的脱发缓解、毛发生长、毛根强化及毛发涂布效果，比起以形成以往透明质酸的方式在中性pH条件下培养的链球菌培养液好。因此，根据本发明培养的链球菌培养液，作为防脱发及毛发生长用毛发化妆品组合物的原料可有效利用。
附图说明
图1是表示基于透明质酸的生成的咔唑反应后的颜色变化的照片。
图2是为了评价毛根强化而表示肝细胞生长因子实时聚合酶链式反应(HGFRealtime PCR)结果的图表。
图3是为了评价毛根强化而表示VEGF Realtime PCR结果的图表。
图4是为了评价毛发生长而表示Wnt10b实时聚合酶链式反应(Wnt10b RealtimePCR)结果的图表。
图5是为了评价男性型脱发缓解而表示雄激素受体实时聚合酶链式反应(Androgen receptor Realtime PCR)结果的图表。
图6是为了评价男性型脱发缓解而表示转移生长因子-β2实时聚合酶链式反应(TGF-β2Realtime PCR)结果的图表。
具体实施方式
以下，通过实施例更详细说明本发明。这些实施例仅用于例示本发明，因此本发明的范围不得解释为限定于这些实施例。
实施例1.以不形成透明质酸的方式培养链球菌属菌株的步骤
使用Todd-Hewitt灭菌液体培养基(BD公司，美国，pH 7)，在30℃下将链球菌种菌株(S.zooepidermicus HDB5021)培养17小时。将培养结束的种菌液接种于灭菌的生产培养基(每1L水中，葡萄糖5％、酵母浓缩液0.5％、磷酸钾0.2％、硫酸镁0.05％、多聚蛋白胨1.5％)之后，以1vvm、35℃、pH 2～4、200rpm的条件培养6小时。然后，在培养温度25℃、pH 2～4的条件下以50rpm培养24小时。
实施例2.对实施例1中获得的培养液进行纯化的步骤
利用100倍的纯化水稀释实施例1中获得的培养液。利用离心分离器(CentrifugeMF-80,Hanil,Korea)，以4,000rpm运转5min，使沉淀物下沉，仅取出上清液，利用0.3Fm过滤器进行过滤。用1～10％活性炭来处理过滤的滤液，去除颜色和气味。
比较例1.以生成透明质酸的方式培养的培养液
使用Todd-Hewitt灭菌液体培养基(BD公司，美国，pH)，在30℃下将链球菌种菌株(S.zooepidermicus HDB5021)培养17小时。将培养结束的种菌液接种于灭菌的生产培养基(每1L水中，葡萄糖5％、酵母浓缩液0.5％、磷酸钾0.2％、硫酸镁0.05％、多聚蛋白胨1.5％)之后，以1vvm、35℃、200rpm的条件培养6小时，并利用10％NaOH溶液将pH调节为7。随后，保持培养温度35℃，并利用10％NaOH溶液继续将pH调节为7，以600rpm培养24小时。该培养液也如同实施例2一样进行纯化。
实验例1.实施例2与比较例1的透明质酸比较确认实验
通过咔唑方法(Z.Dische,J.Biol.Chem.167,189(1947))，对透明质酸生产性进行定量分析。将实验例2中获得的培养液100mL和比较例1中获得的培养液100mL沉淀于10倍乙醇中，对250网状滤布中获得的沉淀物进行冷冻干燥，使其被使用在分析中。图1是表示基于透明质酸的生成的咔唑反应后的颜色变化的照片。
咔唑反应后，利用分光光度计(Spectrophotometer V-730,JASCO,UK)测定吸光度，计算透明质酸含量，将其重复3次做实验，将其平均值记载于表1中。
表1
区分 透明质酸浓度(g/L)
实施例2 0
比较例1 5.51
实验例2.毛发抗拉强度的测定
作为实验中使用的毛发，使用了18个月以上未做过烫发、染发、漂染等化学施术的25岁女性的毛发。即使是相同条件的毛发，由于在日常生活中的暴露程度(洗发精、毛发吹干、紫外线暴露等)不同，因此从毛根隔开2cm的部分，使用剪发用剪刀来采集受损比较少的头后部内侧毛发。用中性洗发精洗涤所采集的毛发以去除残留的污染物，然后自然干燥之后，各取约1g制作发束来使用。
为了制作受损发束，在由6％过氧化氢、0.5％氢氧化铵、0.1％EDTA组成的液中，将之前制作的发束静置3小时之后，用水冲洗1分钟以上，然后用吹风机吹干而使用。
在正常发束和受损发束中，将实施例2和比较例1浸渍2小时之后，用中性洗发精洗涤之后，自然干燥，然后通过以下方法测定抗拉强度。
利用万能试验机(Universal Testing Machine)(Instron 5584，USA)测定抗拉强度。委托给韩国纺织研究院(FITI)进行评价，抗拉试验的测定规格，对准于测定纤维单纱的韩国产业规格纤维的抗拉强度及拉伸度的试验方法(KS K ISO 5079:2007)来测定。以抗拉速度30mm/min进行试验，为了测定值的可靠性，每一个试样测定10次之后求出平均值，将其结果记载于表2中。
表2
Figure BDA0003287505950000081
Figure BDA0003287505950000091
实验例3.利用AFM测定毛发平均粗糙度
为了对毛发表面的微细结构进行定量比较分析，用实施例2和比较例1处理正常毛发的组中分别示出谱线轮廓(Line profile)，求出平均粗糙度。正常毛发的表面微细结构非常粗糙，并存在较多的杂质，但是用实施例2处理时，表面非常平滑，呈现杂质被去除的结果。将5μm x 5μm的宽度分别指定3处，测定topography之后，求出有关整体面积的平均粗糙度Ra，将其结果示于下列表中。
表3
区分 平均粗糙度Ra
正常毛发+实施例2 60.83±23.41nm
正常毛发+比较例1 10.64±4.84nm
实验例4.毛根强化评价
为了评价毛根强化功效，执行肝细胞生长因子(HGF，Hepatocyte growthfactor)、血管内皮生长因子(VEGF，Vascular Endothelial Growth Factor)基因表达实验。作为目前为止从毛囊表达的生长因子，有***1(insulin like growthfactor 1，IGF-1)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor，HGF)、角化细胞生长因子(keratinocytegrowth factor，KGF)等，这些生长因子形成毛发，使其生长起来，起到保持毛发生长期的作用[1,2]。据悉，HGF刺激毛***细胞中毛囊的生长，并调节毛发生长周期[3]，据悉，VEGF通过毛发周期调节及毛根周边血管扩张，供给营养成分，形成毛根，调节毛发大小[2,4]。
在6孔多孔板(6well multi plate)(康宁corning)中，按2.5X105cells/well，分别接种含有10％牛血清的DMEM培养基和毛***细胞(DPCs，细胞生物)各2仩，培养24小时之后，将各孔(well)替换为无血清(serum free)培养基。用试样处理无血清(serum free)培养基之后，培养24小时。利用磷酸盐缓冲溶液(PBS)进行洗涤(washing)之后，利用QIAzol(QIAGENL，USA)处理所培养的细胞，来进行细胞裂解(Cell lysis)之后，利用制造商(QIAGENL)提供的实验方案(protocol)分离RNA。利用PBS洗涤(washing)之后，利用QIAzol裂解试剂(QIAzol Lysis Reagent)(QIAGEN)1仩处理所培养的细胞，利用QIAGEN提供的实验方案(protocol)，准备(prep)RNA，利用QubitTM RNA BR Assay kit，定量所分离的RNA之后，合成cDNA，实施实时聚合酶链式反应(Real-time PCR)。cDNA的合成使用了cDNA合成试剂盒(Kit)(qPCRBIO cDNA Synthesis Kit，PCRBIOSYSTEMS，London，UK)，根据Kit的方法执行实验。Real-time PCR利用Real-time PCR Kit(2x qPCRBIO SyGreen Blue mix Lo-ROX，PCRBIOSYSTEMS，London，UK)来扩增基因之后，对扩增产物进行定量分析。
PCR中使用的HGF、VEGF、β-肌动蛋白(β-actin)的引物(primer)由cosmo genetech公司(韩国)合成并使用，引物序列(primer sequence)示于[表4]中。
表4
Figure BDA0003287505950000101
cDNA合成反应条件为如下，HGF、VEGF、β-actin均在95℃下5秒，在60℃下25秒，40个循环。对照组(Control)使用了处理用作溶解溶剂的纯化水，使用为阳性对照组的米诺地尔(Minoxidil)是被公知为通过血液循环改善及钾通道开放，具有促进毛发生长的功效的物质。将表达量的结果示于表5、6和图2、3中。如图2所示，相比于对照组(Control)而言，实施例2中，将在毛***细胞株中生长期表达的HGF基因表达浓度依赖性地增加，由此具有在细胞水平下强化毛根的功效。如图3所示，相比于对照组(Control)而言，实施例2在毛囊中诱导新的血管形成，增加毛根及毛发的营养成分的供给，将诱导细胞增殖及移动的VEGF基因表达浓度依赖性地增加，由此可知具有在细胞水平下强化毛根的功效。
表5
Figure BDA0003287505950000111
表6
Figure BDA0003287505950000112
Figure BDA0003287505950000121
实验例5.毛发生长评价
为了评价毛发生长功效，执行Wnt10b(wingless-related mousemammary tumourvirus integration site 10b)基因表达实验。据悉，Wnt信号通路(Wnt signalling)是对Hair follicle(HF，毛囊)发达最重要的通路之一，调节毛发细胞(生发细胞株、外毛根鞘细胞、毛***细胞)的增殖及移动，与毛囊的再生相关联[5,6]。并且，据悉，Wnt10起到促进上皮细胞的***和毛发生长的作用[7]。在6孔多孔板(6well multi plate)(corning)中，按2.5X105 cells/well，分别接种含有5％牛血清的MSCM培养基和生发细胞(人生发基质细胞(Human Hair Germinal Matrix Cell)，HHGMC，ScienCell)各2仩，培养24小时之后，用试样处理各孔(well)之后，培养24小时。利用磷酸盐缓冲溶液(PBS)进行洗涤(washing)之后，利用QIAzol(QIAGENL，USA)处理所培养的细胞，来进行细胞裂解(Cell lysis)之后，利用制造商(QIAGENL)提供的实验方案(protocol)分离RNA。利用QubitTM RNA BR Assay kit，定量所分离的RNA之后，合成cDNA，实施实时聚合酶链式反应(Real-time PCR)。cDNA的合成使用了cDNA合成试剂盒(Kit)(qPCRBIO cDNA Synthesis Kit，PCRBIOSYSTEMS，London，UK)，根据Kit的方法执行实验。Real-time PCR利用Real-time PCR Kit(2x qPCRBIO SyGreen Bluemix Lo-ROX，PCRBIOSYSTEMS，London，UK)来扩增基因之后，对扩增产物进行定量分析。
PCR中使用的Wnt10b、β-actin的引物(primer)由cosmo genetech公司(韩国)合成并使用，引物序列(primer sequence)示于[表7]中。
表7
Figure BDA0003287505950000131
cDNA合成反应条件为如下，Wnt10b、β-actin均在95℃下5秒，在60℃下25秒，40个循环。对照组(Control)使用了处理用作溶解溶剂的纯化水，使用为阳性对照组的咖啡因(Caffeine)被公知为诱导毛发生长的物质。将表达量的结果示于表8和图4中。如图4所示，相比于对照组(Control)而言，实施例2中，将与毛发细胞的增殖及毛囊(hair follicle)的生成相关的Wnt信号通路(Wnt signaling)之一的Wnt10b的表达增加，由此具有在细胞水平下促进毛发生长的功效。
表8
Figure BDA0003287505950000132
实验例6.男性型脱发缓解评价
男性型脱发将毛根细胞内存在的***(testosteron)转换为更强的代谢体二氢睾酮(DHT)，DHT与毛囊的雄激素受体(androgen receptor)相结合，抑制要激活细胞内代谢的腺苷酸环化酶(adenylyl cyclase)的活性，降低细胞内环腺苷酸(Cyclic AMP)的浓度，并降低毛细胞的糖代谢，阻碍能量供给，延迟蛋白质的合成，缩短毛囊的生长期，如此重复该过程，本过程重复而增加休止期毛囊的比率，这说明毛发逐渐变细短[8-13]。为了评价男性型脱发缓解功效，执行转化生长因子-β2(TGF-β2，Transforming growth factor beta2)、雄激素受体(AR，Androgen receptor)的基因表达实验。雄激素受体(Androgenreceptor)是DHT的输送体，其起到将DHT传递至毛发细胞，诱导毛发细胞的凋亡，导致脱发的作用，TGF-β2被公知为促进毛发的生长期转移到衰退期[8-13]。
在6孔多孔板(6well multi plate)(康宁corning)中，按2.5X105 cells/well，接种毛***细胞(DPCs，细胞生物)2仩，培养24小时之后，将各孔(well)替换为无血清(serumfree)培养基，然后利用诱发男性型脱发的5α-二氢睾酮(5α-Dihydrotestosterone)(DHT，Selleckchem，Selleckchem韩国)溶液(solution)处理除了非处理组的实验组，并利用试样处理之后，培养48小时。利用磷酸盐缓冲溶液(PBS)进行洗涤(washing)之后，利用QIAzol(QIAGENL，USA)处理所培养的细胞，来进行细胞裂解(Cell lysis)之后，利用制造商(QIAGENL)提供的实验方案(protocol)分离RNA。利用QubitTM RNA BR Assay kit，定量所分离的RNA之后，合成cDNA，实施实时聚合酶链式反应(Real-time PCR)。cDNA的合成使用了cDNA合成试剂盒(Kit)(qPCRBIO cDNA Synthesis Kit，PCRBIOSYSTEMS，London，UK)，根据Kit的方法执行实验。Real-time PCR利用Real-time PCR Kit(2x qPCRBIO SyGreen BluemixLo-ROX，PCRBIOSYSTEMS，London，UK)来扩增基因之后，对扩增产物进行定量分析。PCR中使用的转化生长因子-β2(TGF-β2)、雄激素受体(androgen receptor)、β-肌动蛋白(β-actin)的引物(primer)由cosmo gene tech公司(韩国)合成并使用，引物序列(primersequence)示于[表9]中。
表9
Figure BDA0003287505950000151
cDNA合成反应条件为如下，TGF-β2、AR、β-actin均在95℃下5秒，在60℃下25秒，40个循环。对照组(Control)使用了处理用作溶解溶剂的纯化水，使用为阳性对照组的米诺地尔(Minoxidil)是被公知为通过血液循环改善及钾通道开放，具有促进毛发生长的功效的物质。将表达量的结果示于表10、11和图5、6中。如图5所示，实施例2中，阻碍诱导男性型脱发的DHT的输送体雄激素受体(androgen receptor)的表达，抑制DHT传递至毛囊细胞，阻碍脱发，由此具有在细胞水平下缓解男性型脱发症的功效。如图6所示，相比于对照组(Control)而言，实施例2中，因诱导男性型脱发的DHT而被增加的TGF-β2促进在毛发周期中从生长期移到退化期，并抑制上皮细胞的增殖，由此起到促进脱发的作用，通过抑制这些TGF-β2的基因表达，具有在细胞水平下缓解男性型脱发症的功效。
表10
Figure BDA0003287505950000152
Figure BDA0003287505950000161
表11
Figure BDA0003287505950000162
剂型例1：发露的制备
按下列表中记载的组成成分，通过常规方法制备了发露。
表12
成分 含量(重量百分比)
1 实施例的2培养纯化物 5.0
2 硬脂酸 5.0
3 鲸蜡醇 0.5
4 聚氧乙烯失水山梨醇倍半油酸酯 0.8
5 三乙醇胺 0.4
6 甘油 5.0
7 乙醇 8.0
8 香料 适量
9 纯化水 To 100
剂型例2：洗发精的制备
按下列表中记载的组成成分，通过常规方法制备了洗发精。
表13
成分 含量(重量百分比)
1 实施例2的培养纯化物 5.0
2 聚季铵盐 0.3
3 乙二胺四乙酸二钠 0.05
4 羟苯甲酯 0.3
5 聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯 0.5
6 月桂醇聚醚硫酸钠 20.0
7 椰油酰两性羧基甘氨酸盐 20.0
8 椰油酰胺基丙基甜菜碱 5.0
9 椰子油脂肪酸二乙醇酰胺 3.0
10 甲基氯异噻唑啉酮/甲基异噻唑啉酮 0.04
11 水解蚕丝 0.5
12 氯化钠 0.7
13 柠檬酸 0.3
14 香料 适量
15 纯化水 To 100
剂型例3：焗油膏的制备
按下列表中记载的组成成分，通过常规方法制备了焗油膏。
表14
成分 含量(重量百分比)
1 实施例2的培养纯化物 5.0
2 二烷基甲基氯化铵 1.0
3 单硬脂基三甲基氯化胺 1.0
4 十六十八醇 2.0
5 异硬脂酰乳酰乳酸盐 1.0
6 石蜡 3.0
7 多肽 5.0
8 阳离子化的纤维素 3.0
9 聚氧乙烯油基醚 0.5
10 羟苯甲酯 0.2
11 香料 适量
12 纯化水 To 100
虽然参照上述实施例说明了本发明，但是这仅是示例性的，本发明所属技术领域的普通技术人员应当理解由此可实现多种变形及等同的其他实施例。因此，本发明的真正的技术保护范围应当取决于所附的权利要求书的技术事项。

Claims (8)

1.一种毛发化妆品组合物，其特征在于，包含以不形成透明质酸的方式在酸性pH条件下培养的链球菌属菌株培养液作为有效成分。
2.根据权利要求1所述的毛发化妆品组合物，其特征在于，所述酸性pH条件为pH 2～4。
3.根据权利要求1所述的毛发化妆品组合物，其特征在于，所述链球菌属菌株为选自由兽疫链球菌、嗜热链球菌及唾液链球菌组成的组中的任一个。
4.根据权利要求1所述的毛发化妆品组合物，其特征在于，所述培养液利用离心分离器、过滤器及活性炭进行纯化。
5.根据权利要求1所述的毛发化妆品组合物，其特征在于，所述培养液的毛发生长、毛根强化、毛发涂抹效果，比起以形成透明质酸的方式在中性pH条件下培养的链球菌属菌株培养液好。
6.根据权利要求1所述的毛发化妆品组合物，其特征在于，所述毛发化妆品组合物的剂型为选自由洗发精、生发液、护发素、焗油膏、发膏、发露、啫喱水、发膜、发胶、摩丝、洗发皂、发粉及发油组成的组中的任一个。
7.一种以不形成透明质酸的方式培养链球菌属菌株的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤a)，将链球菌属菌株接种于灭菌的生产培养基之后，在培养温度20～40℃、pH 2～4下，以100～250rpm培养2～8小时；以及，
步骤b)，随后在培养温度20～30℃、pH 2～4的条件下，以0～100rpm培养20～30小时。
8.根据权利要求7所述的培养链球菌属菌株的方法，其特征在于，所述生产培养基中，每1L水包含葡萄糖3～7％、酵母浓缩液0.3～0.7％、磷酸钾0.1～0.3％、硫酸镁0.03～0.07％、多聚蛋白胨1～3％。
CN202111152017.5A 2021-03-26 2021-09-29 包含对毛发带来有益功效的链球菌培养液的毛发化妆品组合物 Pending CN115120550A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR10-2021-0039874 2021-03-26
KR1020210039874A KR102315133B1 (ko) 2021-03-26 2021-03-26 모발에 유익한 효능을 주는 스트렙토코커스 배양액을 포함하는 모발 화장료 조성물

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN115120550A true CN115120550A (zh) 2022-09-30

Family

ID=78228140

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111152017.5A Pending CN115120550A (zh) 2021-03-26 2021-09-29 包含对毛发带来有益功效的链球菌培养液的毛发化妆品组合物

Country Status (2)

Country Link
KR (1) KR102315133B1 (zh)
CN (1) CN115120550A (zh)

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN86100913A (zh) * 1985-01-18 1986-09-24 生物工艺总公司 用链球菌发酵制造高分子量透明质酸钠的方法
JPS63230613A (ja) * 1987-03-19 1988-09-27 Yakult Honsha Co Ltd 化粧料
WO2000069399A1 (fr) * 1999-05-14 2000-11-23 Japan Applied Microbiology Research Institute Co., Ltd. Stimulants de la pousse des cheveux
CN108374033A (zh) * 2018-02-13 2018-08-07 钟文文 一种乳酸链球菌素的提取方法
CN108721602A (zh) * 2018-06-28 2018-11-02 天津市康婷生物工程有限公司 一种联合ha促进毛发再生的干细胞新型生发剂
KR102137752B1 (ko) * 2020-01-22 2020-07-24 김충국 순지트를 포함하는 샴푸 조성물

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100351548B1 (ko) 2000-05-25 2002-09-11 나드리화장품주식회사 유산균 발효액을 함유하는 모발 화장료
EP2166022B1 (en) 2007-04-24 2016-09-21 Q.P. Corporation Cationized hyaluronic acid and/or salt thereof, method for producing the same, and hair modifying agent, cuticle repairing agent, skin modifying agent and cosmetic preparation each using the same
KR101098526B1 (ko) 2011-05-31 2011-12-26 (주)유셀 육모용 모발 화장료 조성물 및 이의 제조방법
KR20130015166A (ko) * 2011-08-02 2013-02-13 주식회사 남양 보습 및 노화방지 효과를 갖는 다당류 함유 화장품 조성물 및 그 제조방법
KR101322227B1 (ko) 2011-09-30 2013-10-28 일동제약주식회사 스트렙토코커스 디스갈락티애 ｉｄ9103 균주 및 이를 이용한 히알루론산 생산 방법
KR101746410B1 (ko) 2015-11-24 2017-06-14 (주)진우바이오 미생물 발효에 의한 고분자 히알루론산의 생산 방법
KR101784864B1 (ko) 2016-10-07 2017-10-12 (주)진우바이오 신규 스트렙토코커스 쥬에피데미쿠스 kdk0001 및 이로부터 고분자 히알루론산을 생산하는 방법
KR102390418B1 (ko) 2019-04-30 2022-04-26 주식회사 하플사이언스 Hapln1을 포함하는 탈모 예방 또는 치료용 조성물

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN86100913A (zh) * 1985-01-18 1986-09-24 生物工艺总公司 用链球菌发酵制造高分子量透明质酸钠的方法
JPS63230613A (ja) * 1987-03-19 1988-09-27 Yakult Honsha Co Ltd 化粧料
WO2000069399A1 (fr) * 1999-05-14 2000-11-23 Japan Applied Microbiology Research Institute Co., Ltd. Stimulants de la pousse des cheveux
CN108374033A (zh) * 2018-02-13 2018-08-07 钟文文 一种乳酸链球菌素的提取方法
CN108721602A (zh) * 2018-06-28 2018-11-02 天津市康婷生物工程有限公司 一种联合ha促进毛发再生的干细胞新型生发剂
KR102137752B1 (ko) * 2020-01-22 2020-07-24 김충국 순지트를 포함하는 샴푸 조성물

Also Published As

Publication number Publication date
KR102315133B1 (ko) 2021-10-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP4971072B2 (ja) 毛包メラノサイトの保護剤としてのドーパクローム異性化酵素（ｔｒｐ−２）活性を真似る薬剤の使用とその使用
JP4099173B2 (ja) コンブチャ（ｋｏｍｂｕｃｈａ）を含む化粧品または皮膚用薬組成物
JP2002524487A (ja) 自然老化または老化亢進性（日光皮膚炎、汚染）の際の、瘢痕化、保湿化および皮膚外観改良用のペプチドの化粧品としてのまたは皮膚薬品としての使用
JP2002529486A (ja) 皮膚ストレスの処置における末梢ベンゾジアゼピン受容体に結合する物質の使用
Mitsui et al. Genes for a range of growth factors and cyclin‐dependent kinase inhibitors are expressed by isolated human hair follicles
EP0120722A1 (fr) Procédé pour stimuler la multiplication des cellules, composition cosmétique, pharmaceutique et composition complémentaire pour milieu de culture cellulaire appliquant ce procédé
EP1014934B1 (fr) Utilisation d'au moins un extrait du genre chrysanthemum pour favoriser la pigmentation de la peau et/ou des cheveux
AU700465B2 (en) Use in a composition as tyrosinase stimulator, of at least one pyrimidine 3-oxide derivative, substituted in position 6
CN109069588A (zh) 包含gdf11的组合物和其用途
EP1097700A1 (en) Hair growth stimulants
CN110548031A (zh) 包含乌地那非作为活性成分的用于增强脂肪干细胞的生发诱导能力的组合物
WO2002024189A1 (fr) Activateur cellulaire
CN115120550A (zh) 包含对毛发带来有益功效的链球菌培养液的毛发化妆品组合物
KR102150680B1 (ko) 천연 항산화 컴플렉스 추출물을 포함하는 화장료 조성물
KR20100126945A (ko) 피부세포 재생용 조성물, 그 제조 방법, 피부세포 재생 방법 및 화장료 조성물
WO2018108973A1 (en) Oligopeptide fraction obtained from a biomass of bacterium or bacteria belonging to the genus vitreoscilla sp, as a cosmetic active ingredient
CA3138467A1 (en) Composition for prevention or treatment of hair loss including hapln1
KR101315638B1 (ko) 벼줄기세포 추출물을 함유하는 항노화용 화장료 조성물
KR102083211B1 (ko) 발효 용암해수염을 함유하는 탈모방지 또는 발모개선용 조성물
EP1705187A1 (fr) Compositions cosmetiques de soin, renforcement et/ou réparation des substrats kératiniques comprenant des polpeptides KAP
KR102062311B1 (ko) 흰들버섯 추출물 제조방법, 이를 이용한 추출물 및 화장료 조성물
CN116459271B (zh) Dna四面体在制备预防和/或治疗脱发的药物中的用途
CN114848821B (zh) 人β3肾上腺素受体及其抑制剂在制备防治脱发、白发产品中的应用
US20220202899A1 (en) Composition for prevention or treatment of hair loss including hapln1
CN111939176B (zh) 一种含有脂肪干细胞的皮肤损伤修复剂及制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20220930