CN114903129A - 一种浆果花色苷-胶原蛋白-透明质酸钠稳态化复合果汁的制备方法及应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种浆果花色苷‑胶原蛋白‑透明质酸钠稳态化复合果汁的制备方法及应用，属于食品领域。将胶原蛋白溶解在透明质酸钠溶液中得到透明质酸钠‑胶原蛋白溶液；将浆果果汁与透明质酸钠‑胶原蛋白溶液混合，进行超声处理，得到含有浆果花色苷‑透明质酸钠‑胶原蛋白稳态化复合物的溶液。本发明提供了一种浆果花色苷‑胶原蛋白‑透明质酸钠高稳态化复合物的制备及其在饮料中的应用，同时描述了其通过调控酪氨酸酶抑制黑色素生成的功效作用效果，包括三种浆果花色苷在抑制酪氨酸酶活性上的协同增效作用，以及相比于各组分单独作用，浆果花色苷‑胶原蛋白‑透明质酸钠三相复合体系在酪氨酸酶活性，稳定性以及感官评价效果方面的显著提升作用。

Description

一种浆果花色苷-胶原蛋白-透明质酸钠稳态化复合果汁的制 备方法及应用

技术领域

本发明涉及一种浆果花色苷-胶原蛋白-透明质酸钠稳态化复合果汁的制备方法及应用，属于食品领域。

背景技术

小浆果是一种多汁肉质单果，除了具有独特的鲜食风味，还具有丰富的保健营养价值，小浆果富含水溶性色素花色苷，研究表明长期摄入富含花色苷的浆果产品对健康有积极的影响，是近些年来世界上发展最为迅速的“第三代”新兴水果，被***粮农组织誉为世界五大健康水果之一。但花色苷不稳定，对温度、pH、贮藏时间、压力、光照敏感，在加工过程中易降解。蛋白质具有良好的表面性质、自组装性能和凝胶化特性，可以作为通用载体运送微量营养素，所以食品来源的胶原蛋白的添加提高了花色苷的加工稳定性。

肌肤损伤是由自由基、化学成分、紫外线等共同作用导致的皮肤暗黄干燥、色素沉积等。肌肤在紫外线照射下可以刺激黑色素细胞产生黑色素，正常情况下黑色素的作用是吸收紫外线，保护皮肤免受紫外线损害并去除活性氧(ROS)。但是，黑色素异常蓄积会引起色素沉着过度，这可能会导致皮肤出现“老年斑”、“雀斑”或显得暗淡无光。酪氨酸酶是黑色素生成过程中的主要限速酶，黑色素是酪氨酸经过一连串的化学反应形成的。在黑色素细胞中，酪氨酸经酪氨酸酶作用，羟化生成多巴以及多巴醌，后者经氧化、脱羧等反应转变成吲哚醌，最后吲哚醌聚合为黑色素。酪氨酸酶的抑制已被确立为调节黑色素产生的主要策略之一，并且该抑制剂被用于治疗色素沉着过度和其他来自黑色素生成的不良作用。现在有多种抑制黑色素生成的药物，可治疗黑色素的过量产生或人类皮肤色素沉着，例如，天然植物来源的熊果苷，抗坏血酸等。

透明质酸钠是人体细胞和组织的重要组成部分，被称为最理想的天然保湿因子，透明质酸钠也在2021年1月8日被国家卫生健康委获批，成为新食品原料。

发明内容

本发明的目的在于提供了浆果花色苷-胶原蛋白-透明质酸钠高稳态复合物的制备方法和在饮料中的应用，以及其在感官评价和通过调控酪氨酸酶抑制黑色素生成方面的效果。该发明为浆果花色苷-胶原蛋白-透明质酸钠高稳态复合物在食品加工和食品功能性新用途领域的应用开辟了新道路。

本产品在添加新兴食品原料透明质酸钠的同时，将蓝莓、黑加仑和蔓越莓三种浆果与胶原蛋白复合，形成比较稳定的三元复合体系，活性成分保留率高，且不易降解。浆果花色苷-胶原蛋白-透明质酸钠三相复合饮品相比于单纯浆果果汁体系具有显著的酪氨酸酶抑制活性，且三种主要浆果组分在抑制黑色素生成方面具有协同增效效果。目前并没有一种具有酪氨酸抑制活性的浆果花色苷-胶原蛋白-透明质酸钠高稳态化复合饮品，经过感官评价结果显示，该三相复合饮品更受年轻女性欢迎。

一种浆果花色苷-胶原蛋白-透明质酸钠稳态化复合果汁的制备方法，所述方法按下述步骤进行：

5℃±1℃下，配制浓度为0.2g/L的透明质酸钠溶液；45℃±1℃下，将胶原蛋白溶解在透明质酸钠溶液中得到透明质酸钠-胶原蛋白溶液，其中，透明质酸钠与胶原蛋白的质量比为1：5；

25～30℃下，按质量比为7：100，将浆果果汁与透明质酸钠-胶原蛋白溶液混合，得制备液；将所得制备液进行超声处理，得到含有浆果花色苷-透明质酸钠-胶原蛋白稳态化复合物的溶液，

其中，所述浆果果汁为由蓝莓、黑加仑、蔓越莓果汁按质量比为4:2:1组成的混合果汁。

上述技术方案涉及的蓝莓、黑加仑、蔓越莓果汁是指将蓝莓、黑加仑、蔓越莓果实分别进行破碎后所获得的浆果原汁。

优选地，将所得含有浆果花色苷-透明质酸钠-胶原蛋白稳态化复合物的溶液添加或不添加添加剂后稀释至所需浓度，得浆果花色苷-透明质酸钠-胶原蛋白果汁原液，将原液进行真空脱气，微孔膜过滤，杀菌后得复合果汁，其中，所述添加剂为赤藓糖醇、麦芽糖醇、益生元、聚葡萄糖、三氯蔗糖、柠檬酸、苹果酸、柠檬酸钠、黄原胶、海藻酸钠、山梨酸钾中的至少一种。

优选地，所述添加剂的添加量占浆果果汁、透明质酸钠、胶原蛋白和添加剂总重量的40～50％。

优选地，所述透明质酸钠溶液按下述方法制得：按照浓度为0.2g/L，将透明质酸钠溶解于22-25℃脱氧RO水中，20～40RPM速度下搅拌至完全溶解，得到透明质酸钠溶液。

优选地，将透明质酸钠溶液升温至45℃±1℃，60～100RPM速度下搅拌的同时加入胶原蛋白，然后保持45℃搅拌至胶原蛋白完全溶解，得到透明质酸钠-胶原蛋白溶液。

优选地，将透明质酸钠-胶原蛋白溶液降温至25～30℃，60～100RPM速度下搅拌的同时加入浆果果汁，恒温搅拌至完全溶解，得到浆果花色苷-透明质酸钠-胶原蛋白制备液；将所得制备液在30℃±1℃、70-90kHz的条件下进行复合，期间20～40RPM速度下搅拌，得到含有浆果花色苷-透明质酸钠-胶原蛋白稳态化复合物的溶液。

优选地，将浆果花色苷-透明质酸钠-胶原蛋白果汁原液进行微孔膜过滤，孔径0.45μm，然后通过管道进入灌装机。

优选地，将包装好的浆果花色苷-透明质酸钠-胶原蛋白果汁原液进行UHT杀菌，杀菌温度115～121℃、杀菌时间15～30s，得到浆果花色苷-胶原蛋白-透明质酸钠稳态化复合果汁。

本发明的另一目的是提供由上述方法制得的浆果花色苷-胶原蛋白-透明质酸钠稳态化复合果汁。

本发明的又一目的是提供上述浆果花色苷-胶原蛋白-透明质酸钠稳态化复合果汁抑制酪氨酸酶活性的应用。

本发明具有以下有益效果为：本发明制备的浆果花色苷-胶原蛋白-透明质酸钠复合物具有高活性成分含量以及加工稳定性和较高的酪氨酸抑制黑色素生成效果，可用应用于一般饮料的制备。基于以上发明结果显示，在一系列浆果中，蓝莓、黑加仑和蔓越莓三种浆果对抑制酪氨酸酶活性从而影响黑色素的生成有极为显著的作用，蓝莓、黑加仑、蔓越莓的酪氨酸酶抑制率明显高于其它浆果，且复合后有协同增效的效果；复合体系饮品在抑制酪氨酸酶效果上要显著优于单纯浆果果汁。另外，在一系列感官评价和数据分析之后，确定复合果汁饮品比单纯浆果果汁口感好，风味突出，具有浓厚的香味又不失本饮料特有的风味，品质最佳，色泽和物理状态都优良，且更受年轻女性的欢迎。

附图说明

图1(A)为不同浆果以L-多巴作为底物时对酪氨酸酶的抑制活性以及其IC₅₀值；(B)为不同浆果以L-酪氨酸为底物时对酪氨酸酶的抑制活性以及其IC₅₀值；

图2(A)在以L-多巴为底物时将蓝莓、蔓越莓、黑加仑三种浆果乙醇提取物以及三者协同后在不同浓度(0.1mg/ml、0.25mg/ml、0.5mg/ml、0.75mg/ml、1mg/ml、2.5mg/ml)下对酪氨酸酶的抑制效果以及(B)其CI值；

图3(A)以L-多巴为底物时果汁样品(组1-4)对酪氨酸酶的抑制效果；(B)果汁样品(组1-4)在口感，气味，色泽，组织状态以及喜爱程度五个方面的感官评价结果(C)不同性别对果汁样品在的感官评价的结果；

注：图中图注*表示在95％置信区间内比较组别之间的显著差异，*表示P<0.05、**表示P<0.01、***表示P<0.001、****表示P<0.0001，统计学计算采用方差分析ANOVA法。

具体实施方式

下述非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。

下述实施例中所述试验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。

具体实施方式之一：

一种浆果花色苷-透明质酸钠-胶原蛋白复合体系的制备方法及其应用，通过活性评价选取蓝莓、草莓、蔓越莓、黑加仑、树莓、软枣猕猴桃、沙棘、枸杞中的三种浓缩汁，透明质酸钠和胶原蛋白为原料，经程序添加，超声波辅助形成浆果花色苷-透明质酸钠-胶原蛋白复合物，添加或不添加赤藓糖醇、麦芽糖醇、益生元、聚葡萄糖、三氯蔗糖、柠檬酸、苹果酸、柠檬酸钠、黄原胶、海藻酸钠、山梨酸钾，经调配，脱气，微孔膜过滤，灌装，中温超高压杀菌，制成浆果花色苷-透明质酸钠-胶原蛋白饮料，具体步骤如下：

(1)透明质酸钠溶解：按照浓度为0.2g/L，将透明质酸钠溶解于22-25℃脱氧RO水中，20～40RPM速度下搅拌至完全溶解，得到透明质酸钠溶液。

(2)胶原蛋白溶解：将透明质酸钠溶液升温至45℃±1℃，60～100RPM速度下搅拌的同时加入胶原蛋白，然后保持45℃搅拌至胶原蛋白完全溶解，得到透明质酸钠-胶原蛋白溶液；

(3)浆果浓缩汁溶解：将透明质酸钠-胶原蛋白溶液降温至25～30℃，60～100RPM速度下搅拌的同时加入浆果果汁，恒温搅拌至完全溶解，得到浆果花色苷-透明质酸钠-胶原蛋白制备液；将所得制备液在30℃±1℃、70-90kHz的条件下进行复合，期间20～40RPM速度下搅拌，得到含有浆果花色苷-透明质酸钠-胶原蛋白稳态化复合物的溶液，其中，所述浆果果汁为由蓝莓、黑加仑、蔓越莓果汁按质量比为4:2:1组成的混合果汁，浆果果汁与透明质酸钠-胶原蛋白溶液的质量比为7:100。

(4)超声波辅助复合：将的到的复合体系制备液在30℃±1℃、70-90kHz的条件下进行复合，期间20～40RPM速度搅拌，得到浆果花色苷-透明质酸钠-胶原蛋白复合体系溶液；

(5)配料：将所得含有浆果花色苷-透明质酸钠-胶原蛋白稳态化复合物的溶液添加或不添加添加剂后稀释至所需浓度，得浆果花色苷-透明质酸钠-胶原蛋白果汁原液，其中，所述添加剂为赤藓糖醇、麦芽糖醇、益生元、聚葡萄糖、三氯蔗糖、柠檬酸、苹果酸、柠檬酸钠、黄原胶、海藻酸钠、山梨酸钾中的至少一种；所述添加剂的添加量占浆果果汁、透明质酸钠、胶原蛋白和添加剂总重量的40～50％。

(6)脱气：将浆果花色苷-透明质酸钠-胶原蛋白饮料原液进行真空脱气；

(7)微孔膜过滤：将浆果花色苷-透明质酸钠-胶原蛋白饮料原液进行微孔膜过滤，孔径0.45μm，然后通过管道进入灌装机；

(8)UHT杀菌：将包装好的浆果花色苷-透明质酸钠-胶原蛋白饮料原液进行UHT杀菌，杀菌温度115-121℃、杀菌时间15-30s，得到浆果花色苷-透明质酸钠-胶原蛋白饮料；

(9)负压灌装：将浆果花色苷-透明质酸钠-胶原蛋白饮料负压灌装进软包装并进行后续封盖。

酪氨酸酶是黑色素酶生成过程中的主要限速酶，在酪氨酸酶反应生成黑色素的过程中，酪氨酸酶的催化作用主要发生在酪氨酸转化为多巴以及多巴转化为多巴醌这两个反应中，多巴醌是一种有色物质，在475nm波长有最大吸收峰。由此以L-多巴或者L-酪氨酸为底物，通过测量多巴醌的量，计算出样品对酪氨酸酶的抑制效果。通过测定八种不同浆果花色苷不同剂量的酪氨酸酶抑制率，计算出IC₅₀值。利用Compusyn软件可以得到剂量-效应曲线以及药物的中效浓度Dm，并可以计算联合指数CI值，当CI值<1、＝1或>1时，分别说明两种或多种样品复合后具有协同作用、相加以及拮抗作用。

感官评价的试验包括：(1)评价器具：一次性透明度高的塑料杯。(2)样品编号:随机的三位数字编码，不要使用特殊数字，递送给每位评价员的样品编码也应互不相同。(3)同一样品应有多个编号，尽量避免使用重复编号。(4)每次评价时，设计一个重复样品，此重复样品用于评价前热身、熟悉评价规则、熟悉评分。此样品编号同样不能与其他编号重复，使用随机的三位数字编码。(5)用不透明带盖塑料杯盛果汁，评价时打开瓶盖，等待5s，嗅闻气味。嗅闻之后再进行口味评价。

实施例1

一种浆果花色苷-胶原蛋白-透明质酸钠稳态化复合果汁的制备方法，所述方法按下述步骤进行：

(1)透明质酸钠溶解：称取透明质酸钠0.1g，溶解于500ml 22-25℃脱氧RO水中，30RPM速度下搅拌至完全溶解，得到透明质酸钠溶液；

(2)胶原蛋白溶解：将透明质酸钠溶液升温至45℃±1℃，80RPM速度下搅拌的同时加入0.5g胶原蛋白，然后保持45℃搅拌至胶原蛋白完全溶解，得到透明质酸钠-胶原蛋白溶液；

(3)浆果浓缩汁溶解：将透明质酸钠-胶原蛋白溶液降温至25-30℃，80RPM速度下搅拌的同时加入10g蓝莓原汁、5g黑加仑原汁、2.5g蔓越莓原汁，恒温搅拌至完全溶解，按质量比为7：100将17.5g浆果果汁与250ml透明质酸钠-胶原蛋白溶液混合后，得到浆果花色苷-透明质酸钠-胶原蛋白制备液；

(4)超声波辅助复合：将得到的复合体系制备液在30℃±1℃、85kHz的条件下进行复合，30RPM速度下搅拌，得到浆果花色苷-透明质酸钠-胶原蛋白复合体系溶液；

(5)配料：添加赤藓糖醇2.5g、三氯蔗糖0.05g、柠檬酸0.75g、柠檬酸钠0.75g、黄原胶0.07g、山梨酸钾0.15g、益生元-果糖2.5g、膳食纤维10g，使用脱氧RO水定至500ml，得到浆果花色苷-透明质酸钠-胶原蛋白饮料原液；

(6)脱气：将浆果花色苷-透明质酸钠-胶原蛋白饮料原液进行真空脱气；

(7)微孔膜过滤：将浆果花色苷-透明质酸钠-胶原蛋白饮料原液进行微孔膜过滤，孔径0.45μm，然后通过管道进入灌装机；

(8)UHT杀菌：将浆果花色苷-透明质酸钠-胶原蛋白饮料原液进行UHT杀菌，杀菌温度121℃、杀菌时间15s，得到浆果花色苷-透明质酸钠-胶原蛋白饮料；

(9)负压灌装：将浆果花色苷-透明质酸钠-胶原蛋白饮料负压灌装进软包装并进行后续封盖。该浆果花色苷-透明质酸钠-胶原蛋白饮料酪氨酸酶抑制率为35.6±1.3％。

1、酪氨酸酶抑制实验

下述抑制实验中，所述浆果乙醇提取物按下述方法制备的：将浆果果粉按1g果粉加25ml的比例加入70％乙醇，超声混匀后，进行过滤、旋蒸，冻干后得到浆果乙醇提取物。

将111μL 2.5mML-多巴或L-酪氨酸溶液与200μL 0.1M磷酸盐缓冲液混合，25℃孵化，然后加入11μL样品溶液和11μL酪氨酸酶的水溶液(1000unit/mL)，总反应体系333μL混匀，孵育540s检测475nm处吸光度值。曲酸作为该实验的阳性对照。

酪氨酸酶活性＝(A样品/A对照)×100％(吸光度为平均值)

CI计算方法:分别配制不同浓度的蓝莓、蔓越莓、黑加仑及三者复合的浆果乙醇提取物溶液，通过进行酪氨酸酶抑制实验，可得知在不同浓度下三种浆果及其复合乙醇提取物对酪氨酸酶的抑制率。在同时获得单个浆果乙醇提取物及其复合浆果乙醇提取物对酪氨酸酶的抑制率时，根据中效方程式：fa/fu＝(D/Dm)^m；fu＝1-fa fa；Fa为作用效应，D为浆果乙醇提取物浓度，m为斜率，Dm为中效浓度(效应为0.5时的药物浓度)。上式两边取对数后为lg(fa/fu)＝mlgD-mlgDm，以y＝g(fa/fu)，x＝lgD，a＝-mlgDm，b＝m，得到回归直线方程式y＝bx+a，依据上述原理，CI值由Compusyn软件进行计算。

计算公式如下：

式中(D)₁、(D)₂、(D)₃为联合使用的剂量，分别显示fa的酪氨酸酶抑制率。(Dx)₁、(Dx)₂和(Dx)₃分别表示蓝莓、蔓越莓和黑加仑在相同酪氨酸酶抑制率下分别给予的剂量。

由图1A和1B可知，在筛选的七种不同浆果乙醇提取物中，我们发现其在调控酪氨酸酶抑制黑色素生成效果上，蓝莓、草莓、蔓越莓、黑加仑、树莓、软枣猕猴桃、沙棘七种浆果乙醇提取物，在底物为L-多巴时有良好的酪氨酸酶抑制作用，并与其浓度呈现良好相关性，IC₅₀值分别为2.07±0.69、5.02±0.66、2.56±0.23、3.19±0.74、4.09±1.03、10.58±0.76、3.89±0.87mg/ml。蓝莓、草莓、蔓越莓、黑加仑、树莓、沙棘六种浆果乙醇提取物，在以L-酪氨酸为底物时有良好的酪氨酸酶抑制作用，并与其浓度呈现良好相关性，IC₅₀值分别为0.83±0.79、3.16±0.22、1.11±0.45、2.96±0.34、3.14±0.53、4.16±0.67mg/ml。由于蓝莓、蔓越莓和黑加仑在不同底物下都显出良好的酪氨酸酶抑制效果，所以我们筛选出这三种浆果乙醇提取物用于活性的验证和果汁的制备。

由图2A和2B可知，在所测浓度范围内(0.1～2.5mg/ml)，蓝莓、蔓越莓和黑加仑乙醇提取物在除了对酪氨酸酶抑制活性呈现较好的浓度依赖性，还可以看出三者联合添加比单独添加对酪氨酸酶的抑制效果增强，且呈现出较好的协同增效的作用；当浓度小于1mg/ml时，所测组合蓝莓蔓越莓黑加仑的CI值均小于1，说明蓝莓、蔓越莓和黑加仑复合物对酪氨酸酶具有协同抑制作用。蓝莓、蔓越莓和黑加仑三种浆果复合后可提高酪氨酸酶抑制活性，显著抑制黑色素的生成，以上结果揭示了复合果汁饮料在抑制黑色素生成方面的效果，由于黑色素沉着所导致的疾病包括但不限于雀斑、黄褐斑、黑色素瘤，以上结果揭示了其在预防黑色素过度沉着所导致的疾病方面的新用途。

2、感官评定

表1感官评定标准

根据产品口感、气味、色泽、组织状态以及喜爱状态，按照满分100分的评分标准，对20名年龄在20-22岁左右的被测试者(男10人，女10人)组成感官评定小组，图3揭示了20名被测试者对不同分组果汁样品在酪氨酸酶抑制活性，口感，气味，色泽，组织状态以及喜爱程度等方面的感官评价结果。

实施例2

不加入胶原蛋白，其他步骤同实施例1。图3A中浆果果汁加透明质酸钠的酪氨酸酶抑制率为37.8±1.0％。

实施例3

不加入透明质酸钠，其他步骤同实施例1。图3A中浆果果汁加胶原蛋白的酪氨酸酶抑制率为27.7±0.7％。

实施例4

不加入胶原蛋白和透明质酸钠，其他步骤同实施例1。图3A中单独浆果果汁的酪氨酸酶抑制率为0.9±0.2％。

上述实施例1～4所得产品分别记为组1～4。由图3(A)可知，组1(浆果果汁+透明质酸钠+胶原蛋白)、组2(浆果果汁+透明质酸钠)、组3(浆果果汁+胶原蛋白)对于酪氨酸酶的抑制效果要显著性高于组4(浆果果汁)，且P<0.0001。说明添加透明质酸和胶原蛋白可以增加单纯果汁的酪氨酸酶抑制效果，其中组1和组2的酪氨酸酶抑制效果较强，两者无显著性差异。另外，结果3(B)显示出被测试者对组1(浆果果汁+透明质酸钠+胶原蛋白)，组2(浆果果汁+透明质酸钠)，组3(浆果果汁+胶原蛋白)的口感和喜爱程度评分要明显高于组4(浆果果汁)，表明复合果汁饮料比单纯浆果果汁饮料的口感和受喜爱程度高。添加透明质酸和胶原蛋白可以增加口感，但色泽和组织状态不如纯浆果果汁。另外，3(C)说明对于4组样品的评分均值女性都比男性高，可以考虑该产品更受女性消费者欢迎。

Claims (9)

1.一种浆果花色苷-胶原蛋白-透明质酸钠稳态化复合果汁的制备方法，其特征在于，所述方法按下述步骤进行：

5℃±1℃下，配制浓度为0.2g/L的透明质酸钠溶液；45℃±1℃下，将胶原蛋白溶解在透明质酸钠溶液中得到透明质酸钠-胶原蛋白溶液，其中，透明质酸钠与胶原蛋白的质量比为1：5；

25～30℃下，按质量比为7：100，将浆果果汁与透明质酸钠-胶原蛋白溶液混合，得制备液；将所得制备液进行超声处理，得到含有浆果花色苷-透明质酸钠-胶原蛋白稳态化复合物的溶液，

其中，所述浆果果汁为由蓝莓、黑加仑、蔓越莓果汁按质量比为4:2:1组成的混合果汁。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将所得含有浆果花色苷-透明质酸钠-胶原蛋白稳态化复合物的溶液添加或不添加添加剂后稀释至所需浓度，得浆果花色苷-透明质酸钠-胶原蛋白果汁原液，将原液进行真空脱气，微孔膜过滤，杀菌后得复合果汁，其中，所述添加剂为赤藓糖醇、麦芽糖醇、益生元、聚葡萄糖、三氯蔗糖、柠檬酸、苹果酸、柠檬酸钠、黄原胶、海藻酸钠、山梨酸钾中的至少一种。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述添加剂的添加量占浆果果汁、透明质酸钠、胶原蛋白和添加剂总重量的40～50％。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述透明质酸钠溶液按下述方法制得：按照浓度为0.2g/L，将透明质酸钠溶解于22-25℃脱氧RO水中，20～40RPM速度下搅拌至完全溶解，得到透明质酸钠溶液。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将透明质酸钠溶液升温至45℃±1℃，60～100RPM速度下搅拌的同时加入胶原蛋白，然后保持45℃搅拌至胶原蛋白完全溶解，得到透明质酸钠-胶原蛋白溶液。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将透明质酸钠-胶原蛋白溶液降温至25～30℃，60～100RPM速度下搅拌的同时加入浆果果汁，恒温搅拌至完全溶解，得到浆果花色苷-透明质酸钠-胶原蛋白制备液；将所得制备液在30℃±1℃、70-90kHz的条件下进行复合，期间20～40RPM速度下搅拌，得到含有浆果花色苷-透明质酸钠-胶原蛋白稳态化复合物的溶液。

7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，将浆果花色苷-透明质酸钠-胶原蛋白果汁原液进行微孔膜过滤，孔径0.45μm，然后通过管道进入灌装机；将包装好的浆果花色苷-透明质酸钠-胶原蛋白果汁原液进行UHT杀菌，杀菌温度115～121℃、杀菌时间15～30s，得到浆果花色苷-胶原蛋白-透明质酸钠稳态化复合果汁。

8.权利要求1～7任一项所述方法制得的浆果花色苷-胶原蛋白-透明质酸钠稳态化复合果汁。

9.权利要求8所述的浆果花色苷-胶原蛋白-透明质酸钠稳态化复合果汁抑制酪氨酸酶活性的应用。

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