CN1148791A - 用于控制植物疾病的组合物和方法 - Google Patents

用于控制植物疾病的组合物和方法 Download PDF

Info

Publication number
CN1148791A
CN1148791A CN95193172A CN95193172A CN1148791A CN 1148791 A CN1148791 A CN 1148791A CN 95193172 A CN95193172 A CN 95193172A CN 95193172 A CN95193172 A CN 95193172A CN 1148791 A CN1148791 A CN 1148791A
Authority
CN
China
Prior art keywords
composition
active component
plant
fungi
seed
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN95193172A
Other languages
English (en)
Other versions
CN1073806C (zh
Inventor
B·格哈尔德森
A·古斯塔森
T·杰克曼
B·M·金斯特罗姆
L·约翰森
M·霍克伯格
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Acanova AB
Original Assignee
Acanova AB
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Acanova AB filed Critical Acanova AB
Publication of CN1148791A publication Critical patent/CN1148791A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN1073806C publication Critical patent/CN1073806C/zh
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A01N63/27—Pseudomonas
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/38—Pseudomonas
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/874—Pseudomonas

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Pretreatment Of Seeds And Plants (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Compounds Of Unknown Constitution (AREA)

Abstract

本发明提供保藏于The National Collectionsof Industrial and Marine Bacteria Limited，Scotland，保藏号为NCIMB 40616的新绿针假单胞菌菌株MA342及其用途或具有基本上相同的特征的突变体或其抗病原活性代谢物或衍生物组合物以及用于控制真菌疾病的方法。

Description

用于控制植物疾病的组合物和方法
本发明涉及植物保护产物。更具体地说，本发明涉及细菌菌种绿针假单胞菌(Pseudomonas chlororaphis)的新菌株和含该细菌菌株或由该菌株在植物生产中产生的抗生素物质的组合物的应用以保护植物抵御植物病原微生物的攻击。
数种微生物性质的因子有能力诱发植物疾病，在作物中引起非常大的损伤，从而造成经济损失。它们中的许多攻击叶子和/或其他空气植物部分，然后通过空气传播的孢子到达新的未感染的作物。其他的通过种子传播从一代传到下一代，数种经济上重要的诱发疾病的因子是土壤传播的，在土壤中多少有些失活直到敏感性植物生长。
在植物生产中控制引发微生物疾病的因子的方法常常是很昂贵的，但在大多数作物生长***中有经济上的需要。一种广泛使用的方法是用生物机能结构或杀生物的化学物质处理。在大多数情况下，是将其喷洒在生长的作物上，作为种子或根处理或作为土壤消毒剂。其他标准方法是抗性育种和耕作作物***本身的管理。
所有这些标准控制方法均有些缺陷。作物***管理只对特定疾病问题是有效的或方便的。作物抗性育种可能或只在某种特定的情况下适用，还要花很长时间而且在一定时间后，由于新病原体菌株的出现会破坏得到的抗性。化学化合物经常是非常有效的，但它们会对环境产生不利影响，而且由于大多对人类健康有威胁，所以需要小心地处置，并且在抗性病原体菌株产生后，它们就会成为无效的。
使用生物控制剂或生物杀虫剂比使用其他控制方法更有效或更好，因此，已经广泛地尝试了这类试剂。已知数种细菌和真菌菌株能抑制各种诱发微生物疾病的因子的生长。为了有效和可用，它们在地里必须是稳定的，能产生可再现的结果而且必须有可能在地里条件下施用它们。到目前为止，没有几种能满足这些要求并因此将其作为商业产品使用的。
本发明提供了在商业植物生长中，对于控制植物病原体有用并有效的生物控制剂。提供了表现出所需特征的细菌绿针假单胞菌新菌株(MA342)。根据布达佩斯条约，将分离物保藏在National Collections ofIndustrial and Marine Bacteria Limited (NCIMB)，Aberdeen，Scotland，1994年2月14日，NCIMB登记号为No.40616。
本发明还提供了植物疾病控制组合物，含有作为活性成分的新菌株MA 342或其具有基本上相同的特征的突变体或其抗病原体活性代谢产物或其衍生物。此外，本发明还提供了用新菌株MA 342或其具有基本上相同的特征的突变体或其抗病原体活性代谢产物或其衍生物控制植物疾病的方法。图1 该附图表示用微生物鉴定***(MIDI，Newark Ltd.，USA)得到的细菌分离物MA 342的脂肪酸图。
下面将是新细菌菌株的特征并描述菌株增殖的优选方法和用于田地或温室的配方。提供了数个实施例以进一步说明(但不是限制)本发明的方法和组合物。新细菌菌株MA 342的特征形态学特征：在TSA10(在1000ml蒸馏水中有10g Tryptic SoyBroth(Difco Ltd.)；12g Technical Agar(0xoid Ltd.))上的菌落形态是圆的，白色，适度凸起的菌落，以高细胞密度在琼脂中形成很好的可见晶体。是革兰氏阴性杆菌，在Kings培养基B(1.5g K2HPO4；1.5gMgSO4·7HO；20g Proteose Peptone(Difco Ltd.)；10ml甘油，1.5gBacto Agar(Difco Ltd.)，在1000ml蒸馏水中)中有亮黄色的荧光。脂肪酸分析：在附图1中列出了细菌的脂肪酸图。用微生物鉴定***(MIDI Ltd.，Newark，USA)，版本3.7进行该分析。根据该试验程序，MA 342与绿针假单胞菌最相似，匹配指数为0.705。生物化学特征：用API20 NE*快速试验检测的特征            分离物MA 342的反应硝酸盐还原                                       -吲哚产生                                         -来自葡萄糖的酸                                   -精氨酸二水解酶                                   +脲酶                                             -七叶苷水解                               -明胶水解                                 +B-半乳糖苷酶                             -葡萄糖同化                               +***糖同化                             -甘露糖同化                               -？甘露糖醇同化                             +N-乙酰葡糖胺同化                         -麦芽糖同化                               -葡糖酸盐同化                             +癸酸盐同化                               -己二酸盐同化                             -苹果酸盐同化                             +柠檬酸盐同化                             +苯基-乙酸盐同化                          -细胞色素氧化酶                           +*API System Ltd.，France在其他试验中检测的特征果聚糖产生                               -木糖同化                                 -？山梨醇同化                               +？
用于菌株增殖以及田地或温室中配制和应用的优选方法
最好是通过发酵方法得到大量的活性菌株，所述方法包括将菌株纯培养物的样品接种到液体摇瓶培养中或含适宜发酵培养基的发酵罐中。所述菌株也可以在无菌表面，如琼脂表面上生长，在长出后，将细胞悬浮在水或本领域已知的其他液体培养基中。原则上，生长培养基可以是本领域已知的任何细菌生长培养基。一直发酵直到得到足够的浓度的细胞，如约5-109cfu(菌落形成单位)/ml液体培养物。可以在植物保护中使用这样所得的发酵液或细菌悬浮液，或者在使用前将其处理或配制。
在一种处理方法中，可以通过例如加热或离心杀死发酵液中细菌细胞，将含细菌代谢产物的所得发酵液或上清液用于植物保护目的，可以或不必预先纯化和/或浓缩。还可以将细菌悬浮液和发酵液与本领域中已知的一种或多种化合物或化合物组均匀混合在一起，只要所述化合物与细菌菌株或其抗病原体活性代谢产物或衍生物相容即可。适宜的化合物可以是粉末添加剂或固体载体，如滑石，高岭土，膨润土或蒙脱土，本领域已知的可润湿的粉末，碳源营养物质(如葡萄糖，蔗糖和果糖)或复合细菌营养物质(如酵母提取物，细菌蛋白胨和胰蛋白胨)，金属盐，脂肪酸盐，脂肪酸酯，离子或非离子表面活性剂，植物营养物质，植物生长调节剂，杀真菌剂，杀昆虫剂，杀菌剂等。还可在与适当的化合物混合前或之后将细菌悬浮液和发酵液干燥或冻干，然后将所得的产物用于植物保护。干燥的适宜途径是例如用蛭石空气干燥细菌发酵液。
可以将细菌和代谢产物制品以任何已知的方式用于处理种子，植物营养繁殖单元，植物和带有细菌菌株的土壤。根据所需的目的和周围的环境，可以选择喷雾，雾化，尘化，扩散，颗粒化，浸渍或喷淋。用于种子处理的有利速率通常为1011-1012cfu/ha，用于喷雾的为1012-1014cfu/ha或相应的细菌代谢产物量。实施例l分离微生物MA342
挖出植物Empetrum nigrum的根，用消毒自来水洗涤除去附着的土壤。从一个幼根上切下一2-3cm长的段，在无菌条件下处理。从根顶部上取出该段。用火焰灭菌的刮刀将所述根段切成小片。然后将所述根片在TSA10琼脂上磨擦。细菌生长出后，挑出MA342并且在TSA10上纯化培养。实施例2保存微生物MA 342
在-70℃将纯培养物深度冷冻在小安瓿中。使用自来水中的10％甘油作为保护剂，在高压灭菌后，将pH调到7.15。在-70℃冷冻后，将安瓿于-20℃贮存。
为了长期保存，将分离物冷冻干燥。在TSA10琼脂上生长48小时后，从琼脂表面刮下细菌菌苔，与冷冻干燥的保护剂(在1000ml蒸馏水中，有50g Dextran T70(Pharmacia Fine Chemicals Ltd.)；50g L-谷氨酸钠(Kebo AB))混合，注入到小安瓿(20ml)中，然后在Hetosicc冷冻干燥器(Heto Ltd.，Denmark)放24小时。冷冻干燥后，用橡胶塞将安瓿紧紧气封，在4℃贮存。实施例3在基本温室筛选中MA342抗Microdochium nivale的作用
按如下将所述细菌应用于小麦种子：从9cm平皿的琼脂表面刮下在TSA10上15℃生长24小时的老培养物，与40ml营养液(SNB：在1000ml蒸馏水中，18g蔗糖；5g细菌蛋白胨(Oxoid Ltd.)；2g酵母提取物(Oxoid Ltd.)；0.5gK2HPO4和0.25g MgSO4·7H2O，将其pH调到7.2-7.4)和40ml在无菌蒸馏水中的2％(w/v)羧甲基纤维素(CMC)钠溶液混合。将所述混合物浇到种子上。20分钟后，倒掉过量的混合物，在风扇下过夜干燥种子。
对于每种处理，在温室中选两盆播种，每盆有50个种子。所述盆的直径为18cm，高4cm，装有2/3的未灭菌的市售泥炭土混合物(Enhetsjord K Normal)，用20％(v/v)的沙子混合。
在用细菌处理前，用M.nivale人工侵染冬小麦种子(cv.“Kosack”)。在室温旋转振荡器上，在马铃薯葡糖培养基(每1000ml蒸馏水中，24g Potato Dextrose Broth(Difco Ltd.))中将病原体培养7天。用厨房搅拌器将所得的浆液匀浆，然后浇在种子上。30分钟后，倒掉液体，将种子放在风扇下过夜。然后用MA342处理由此侵染的种子并按上述播种在盆中。
播种后，用玻璃盖子将所述盆盖上，放在6℃的黑暗中。5天后，揭掉盖子，给每盆浇100ml水，放在由两个木棍支持的5升塑料袋中。然后在12-15℃的温室中将所述盆放8天。
检测下列处理的种子：1 在M.nivale侵染的种子上与SNB/CMC混合的绿针假单胞菌菌株MA3422 M.nivale侵染的种子作为疾病对照3 未处理的种子作为健康对照
将疾病抑制作用记录成在播种的种子中出苗的健康(＝没有菌丝体)植物的百分比。在表1中列出了来自典型的M.nivale初级筛选的结果。表1 从M.nivale侵染的种子中，MA342对冬小麦出苗和疾病发展的作用。处理         出苗百分比(％)     在播种的种子中健康植物的百分比1 MA342           87                            812 疾病对照        13                            73 未处理对照      90                            89实施例4在二级温室筛选中，MA对Drechslera teres的作用
为了这些筛选，在18-20℃、黑暗中，在旋转振荡器上，使分离物MA342在半强度(15g/l)Tryptic大豆培养基(Difco Ltd.)中生长48小时。将用D.teres自然侵染的大麦栽培品种“Golf”在塑料袋中以每公斤种子300ml的所得细菌悬浮液进行混合，混合后，将所述袋摇晃约4分钟。在室温，将由此处理的种子干燥1天，然后按实施例3所述播种在盆中。
先将播种的盆(每种材料3盆)放在6℃黑暗中7天，然后按实施例3所述放在约20℃的温室中。为了阅读处理效果，计数发芽植物的频率和在第一片叶子上有初次攻击的植物的频率。细菌作用与未处理对照和用杀真菌剂Panoctine Plus 400(guazatine 150g/l+imazalil10g/l)，Rhone-Poulenc Ltd.(每公斤种子4ml的剂量)处理的种子有关。表2.在典型的温室二次筛选中，MA342和Panoctine Plus400对大麦中D.teres的作用。处理           出芽植物百分比(％)       第一片叶受攻击的植物百分比1 对照                 92.5                              13.02 Panoctine Plus       95.5                               0.0400，4ml/kg3 MA342，300ml/kg      96.1                               0.0实施例5在田地试验中MA342对植物病原体的作用
田地试验(设计为随机的部分，有3-8个重复)的大小为0.15m2(一个小麦网腥黑粉菌(Tilletia caries)试验)到约15m2(大多数试验)。将试验放在瑞典不同的地区，在大多数情况下在含约3％腐殖土的壤土上完成。
按上述实施例4所述用细菌和Panoctine Plus400处理种子。用风扇将处理后的种子干燥后，将其在播种于试验区之前，于室温贮存不同的时间。用各种待测的疾病自然侵染或感染所有种子，除用小麦网腥黑粉菌侵染的外。通过将2g破碎的小麦网腥黑粉菌穗与1公斤小麦种子混合来用小麦网腥黑粉菌孢子人工侵染冬小麦种子(cv.“Kosack”)。MA342对小麦网腥黑粉菌的作用
将所述作用读成在成熟时被感染穗的频率。在表3中列出了在两个1991/92和两个1992/93试验中得到的结果。在1992/93中，细菌处理和杀真菌剂处理之间的差异是显著的。表3.MA342细菌悬浮液抗种子传播小麦网腥黑粉菌的作用处理                         受感染穗的百分比
                         1991/92     1992/93对照                          23           65Panoct.400*，4ml/kg          2            24MA342，300mg/kg               0            0*Panoctine 400(guazatine 150g/l)，Rhone-Poulenc Ltd.MA 342对Drechslera teres，D.Graminea，D.avenae和燕麦散黑粉菌(Ustilago avenae)的作用
在用这些病原体进行的田间试验中，测量每平方米发芽植物的数量和每平方米被感染植物的数量，另外，在大多数试验中还要测量i)产率ii)千粒种子重和iii)每百升重。对Drechslera teres的作用：在表4，5和6中列出了在1991-1993进行并检验了在大麦中抗D.teres感染的作用的田间试验的结果。表4.在1991年用Drechslera teres感染的大麦中四个田间试验的结果。在Alnarp，Lanna，Strngns和Ultuna完成的四个试验的平均值。处理       产率   植物数/m2  受感染的植物/m2  百升重，kg   1000粒重，g
       kg/ha对照       4970      361            47             64.7       41.5Pan.Plus   5390      353            1              66.3       43.8400，4mlMA342      5480      353            1              66.0       43.7300ml/kg表5.在1992年用Drechslera teres感染的大麦中五个田间试验的结果。Svalf，Nygrd，Klbck，Ultuna和Rbcksdalen完成的试验的平均值。处理          产率    植物数/m2   受感染的植物/m2   百升重，kg   1000粒重，g
          kg/ha对照          4290       358             48                67.9        51.7Pan.Plus      4380       378             1                 67.8        50.5400，4mlMA342         4300       380             1                 68.3        52.6300ml/kg表6.在1993年用Drechslera teres感染的大麦中两个田间试验的结果。在Kolback和Ultuna完成的试验的平均值。处理                 产率               受感染的植物数/m2
                 kg/ha对照                 6310                      74Pan.Plus 400，4ml    6730                      1MA342，300ml/kg      6720                      5对Drechslera graminea的作用：在表7，8和9中列出了在1991-1993年完成的用D.graminea感染的种子的试验结果。表7.1991年在Uppsala对用D.graminea感染的大麦完成的一个田间试验的结果。处理                产率             受感染的植物数/m2
                kg/ha对照                3440                      31Pan.Plus 400，4ml   4160                      2MA342，300ml/kg     4390                      1表8.1992年对用D.graminea感染的大麦完成的五个田间试验的结果。在Svalv，Nygrd，Klbck Ultuna和Rbcksdalen完成的试验的平均值。处理      产率      植物数/m2     受感染的植物/m2   百升重，kg     1000粒重，g
      kg/ha对照      2590      383            101                66.2           40.2Pan.Plus  3470      381            5                  66.6           39.9400，4mlMA342，   3460      368            7                  66.2           39.8300ml/kg表9.在1993年用D.graminea感染的大麦的两个田间试验的结果。在Klbck和Ultuna完成的试验的平均值。处理            产率，kg/ha            受感染的植物数/m2对照                2810                      46Pan.Plus 400，4ml   4160                      1MA342，300ml/kg     3990                      8对Drechslera avenae的作用：在表10，11和12中列出了在1991-1993年，对用D.avenae感染的燕麦种子完成的试验的结果。表10.1991年在Uppsala用D.avenae感染的燕麦(“Puhti”)完成的一个田间试验的结果。处理            产率，kg/ha          受感染的植物数/m2对照               4940                      74Pan.Plus 400，4ml  4860                      32MA342，300ml/kg    5090                      17表11.在1992年用D.avenae感染的燕麦(“Puhti”和“Vital”)完成的四个田间试验的结果。在Svalv和Ultuna完成的试验的平均值处理       产率      植物数/m2    受感染的植物/m2    百升重，kg    1000粒重，g
       kg/ha对照       3990      428           22                  57.5          35.4Pan.Plus   4080      456           13                  57.8          35.5400，4mlMA342，    4000      445           3                   57.4          35.0300ml/kg表12.1993年在Uppsala用D.avenae感染的燕麦(“Vital”)完成的一个田间试验的结果。处理                产率，kg/ha       受感染的植物数/m2对照                  7570                 79Pan.Plus 400，4ml     7870                 14MA342，300ml/kg       7680                 27对燕麦散黑粉菌的作用：在成熟时读出每m2用燕麦散黑粉菌黑穗(bundears)的田间试验的结果或黑穗的百分比。不测量谷物产率。在表13中列出了在1991-1993年完成的三个试验的结果。表13.在Uppsala用燕麦散黑粉菌感染的燕麦完成的三个田间试验的结果。处理                 1991          1992            1993
                黑穗/m2     ％受感染穗        黑穗/m2对照                  7            10，6            95Panoctine Plus        3             8，7          未检测400，4mlMA342，3001)ml/kg    1             1，7            151991和1992年为300ml；1993年为200ml。实施例6将MA342应用于种子和其他植物部位将含MA342的水混合物应用于种子。将按实施例3或实施例4中所述生产的细菌悬浮液与下列物质或化合物中的每一种混合：
滑石粉(Kebo Lab AB)，48g/l细菌悬浮液
细菌蛋白胨(Oxoid，Ltd.)，5g/l细菌悬浮液
吐温20(Merck Ltd.)，20ml/l细菌悬浮液
Metocel(纤维素醚，Sveda Kemi AB)，每升细菌悬浮液12g
Lissapol(ICI Agrochemicals Ltd.)，每升细菌悬浮液1g
Bond(Newman Agrochemicals Ltd.)，每升细菌悬浮液1g
在其他试验中，将细菌悬浮液以10,000xg离心大约10分钟，然后将所得的沉淀再悬浮于0.1M MgSO4或胨水(每升自来水5g细菌胨(Oxoid，Ltd.))。
在完全混合后，按实施例4有关未混合的细菌悬浮液所述，将所得的悬浮液用于种子。将冻干细菌用于植物种子。将按上述实施例4中所述，在振荡培养中生长的MA342细菌离心，将所得的沉淀重悬于脱脂奶溶液(每升无菌蒸馏水中200g脱脂奶粉，Semper AB，瑞典)作为冻干保护剂。在玻璃罐中将所述混合物带套冷冻，然后用Hetosicc冻干仪(Heto Ltd.，丹麦)在这些罐中冻干约48小时。将所得的粉末在塑料袋或带有螺旋帽的塑料烧瓶中于4℃贮存直到使用。为了应用于种子，将所述粉末用水或其他水溶液混合，然后按实施例4有关细菌悬浮液的描述用于种子，或在干燥条件下，通过在塑料容器中完全振荡粉末和种子(每公斤种子约10g粉末)而将其与种子混合。
沉淀用MA342处理的种子。将按上述实施例4中所述，在振荡培养中生长的MA342细菌与粘附剂(2％w/v羧甲基纤维素钠的水溶液或50％w/v gummi arabicum的水溶液)以1∶1的体积混合。按上文实施例4所述，用所述混合物处理种子。将过量膨润土(Dresser Minerals Inc.)或滑石粉(Kebo Lab AB)加到塑料袋中，使所述袋膨胀，并将其剧烈摇动几分钟。此后，将种子铺在大板上，放在风扇下，使其在室温下干燥。
用细菌悬浮液喷雾植物茎。将按上述实施例4所述，在振荡培养中生长的MA342细菌装在塑料手动喷雾器或粉末喷雾器中，然后喷洒在植物的叶子和茎上。在其他处理中，先将细菌在10000xg下离心10分钟，将沉淀重悬在自来水中，然后将所得的细菌悬浮液用于喷洒植物叶和茎。实施例7在温室试验中，纯化的MA342代谢产物对因Drechslera teres而引起的疾病的抵抗作用
在18-20℃的黑暗中，在旋转振荡器上、半强度(15g/l)的Tryptic大豆培养基(Difco Ltd.)中使分离物MA342生长48小时。以48,000g将所得的细菌悬浮液离心30分钟，再按下述，用Sep-pak C18cartridges(Waters Associates)纯化在上清液中的代谢产物：1 将80ml上清液加到用10ml甲醇激活的Sep-pak中。2 先用5ml30％乙醇洗涤Sep-pac，然后用5ml 40％的乙醇洗涤。3 用5ml70％的乙醇洗脱代谢产物。4 用旋转蒸发器蒸发70％的乙醇洗脱物，直到剩下约1.5ml的水溶液。然后用自来水稀释到6.5ml。将用D.teres自然感染的大麦栽培品种“Golf”的种子在所述6.5ml代谢产物的水溶液中浸泡30分钟，然后播种在盆中，每盆播种50个种子。用玻璃盖盖上所述盆，然后放在6℃的黑暗中。9天后，去掉盖子，在15-22℃的温室中将所述盆放置约两周。再按实施例4所述确定发芽的植物和疾病攻击的植物。对照使用1)未处理的种子和2)未用Sep-pac纯化的并含MA342细胞的悬浮液处理的种子。表14.在典型温室试验中，MA342的纯化代谢产物和含MA342细胞的悬浮液抗大麦中D.teres的作用。处理               出芽植物的百分比      第一片叶受攻击的植物百分比未处理的对照               97，0                         21，6含MA342细胞的上清液        99，0                         1，0蒸发的无细胞洗脱液         99，0                         0，0实施例8
MA342分离物和从不同培养收集物中得到的11种其他绿针假单胞菌分离物的对比试验的结果
检测具有表1中命名的11种非瑞典的绿针假单胞菌分离物和MA342分离物抗大麦中叶斑病的作用和在按照检测***API 20 NE的生物化学试验中诱导反应的情况。另外，比较分离物的菌落外观和在琼脂板上晶体的形成。11中非瑞典分离物来自不同的国家并保存在四个素负盛誉的培养物收集中心(表1)。
      检测在温室中抑制疾病的能力
按实施例4所述，用Drechslera teres感染的大麦完成检测，同时检测所有的分离物以得到充分的比较。正如从表1中所看到的，从在此种试验中，本文所检测的其他分离物没有一种有类似MA342的特性(即抑制Drechslera teres感染的能力)的意义上说，MA342显然是独特的。表1.MA342和11种其他绿针假单胞菌分离物的命名，来源国家和在温室试验中，在大麦中抗D.teres感染的效果。分离物命名             来源国家             温室实验中对叶斑病的
                                        效果。用该分离物处理后，
                                        感染植物的百分数。MA342                  Sweden                          9USDA B2075             Czechoslovakia                  53USDA B1869             New Zealand                     60USDA B14874            USA，Colorado                   56USDA B14869            USA，Illinois                   58USDA B1854             USA，Loisiana                   43NCTC 10686             England                         54NCTC 7357              England                         58DSM 6508               Germany                         56ATCC 9446              USA                             61ATCC 17414             USA                             50ATCC 17811             USA                             58未处理的对照                                           71在根据试验***API20 NE的生物化学试验中诱导反应
按上述完成试验。在表2中列出了结果。它们表明，在此方面，MA342是独特的，不同于所试验的11种其他分离物。根据该试验，可以认为所试验的某些分离物在绿针假单胞菌内是主要的。表2.根据试验***API20 NE在大量的生物化学试验中检测的不同分离物诱导的反应。“+”表示阳性反应，“-”表示没有/阴性反应。
API20 NE                   检测的分离物
试验中检测
的性质           MA    B     B     B      B     B    NCTC   NCTC   DSM    ATCC   ATCC   ATCC
                342   2075  1869  14874 14869  1854  10686  7357   6508   9446   17414  17811硝酸盐还原         -     -     +      -     -     +     +      +      +      +       +      +吲哚产生           -     -     -      -     -     -     -      -      -      -       -      -来自葡萄糖的酸       -     -     -      -     -     -     -      -      -      -       -      -精氨酸二水解酶       +     +     +      +     -     +     +      +      +      +       +      +脲酶                 -     -     -      -     -     -     -      -      -      -       -七叶甘水解           -     -     -      -     -     -     -      -      -      -       -       -明胶水解             +     +     -      -     -     +     +      +      -      +       +       +β-半乳糖苷酶        -     -     -      -     -     -     -      -      -      -       -       -葡萄糖同化           +     +     +      +     +     +     +      +      +      +       +       +***糖同化         -     +     +      -     -     -     +      -      +      -       -       -甘露糖同化           -     +     +      -     +     +     +      +      +      +       +       +甘露醇同化           +     +     +      -     -     +     +      +      +      +       +       +葡糖胺同化           -     +     +      -     -     +     +      +      +      +       +       +麦芽糖同化           -     -     -      -     -     -     -      -      -      -       -       -葡糖酸盐同化         +     +     +      +     +     +     +      +      +      +       +       +癸酸盐同化           -     +     +      +     +     +     +      +      +      +       +       +己二酸盐同化         -     -     -      -     -     +     -      -      -      -       -       -苹果酸盐同化         +     +     +      +     +     +     +      +      +      +       +       +柠檬酸盐同化         +     +     +      +     +     +     +      +      +      +       +       +苯基乙酸盐同化       -     -     +      +     +     +     +      +      +      -       -       +细胞色素氧化酶       +     -     +      +     +     +     -      +      +      +       +       +比较琼脂板上的菌落外现和晶体形成
按上述在TSA10平皿中培养所述分离物。在所有不同分离物的菌落外观方面，我们观察到细微的差异，但用这种方法不能区别所有的分离物。但是，MA342分离物是在琼脂中形成典型的透明晶体的唯一分离物，并因此用该特性可将其与所有其他分离物相区别。
权利要求书
按照条约第19条的修改1 保藏在The National Collections of Industrial and Marine BacteriaLimited，Aberdeen，Scotland，保藏号为40616的绿针假单胞菌或其具有生产抗病原体活性代谢产物能力的生物学纯培养物，或其与亲本菌株基本具有相同特征的突变体。2 控制因病原体真菌引起的植物疾病的组合物，其特征在于含权利要求1的微生物或其含其抗病原体活性代谢产物的培养液作为活性成分。3 权利要求2的组合物，其特征在于所述病原体是真菌Drechslerateres。4 权利要求2的组合物，其特征在于所述病原体是真菌Drechsleragraminea。5 权利要求2的组合物，其特征在于所述病原体是真菌Drechsleraavenae。6 权利要求2的组合物，其特征在于所述病原体是真菌Microdochiumnivale。7 权利要求2的组合物，其特征在于所述病原体是真菌小麦网腥黑粉菌。8 权利要求2的组合物，其特征在于所述病原体是真菌燕麦散黑粉菌。9 权利要求2-8的组合物，其特征在于所述活性成分是与农业实践中可接受的载体组合物混合的混合物。10 权利要求9的组合物，其特征在于所述活性是与液体载体的混合物。11 权利要求9的组合物，其特征在于所述活性成分渗透在固体多孔物质中。12 权利要求9的组合物，其特征在于还含有作为粘附剂的添加剂。13 权利要求9的组合物，其特征在于还含有营养源。14 控制因病原体真菌引起的植物疾病的方法，包括将有效量的活性成分导入到有待抑制诱发疾病的因子的环境中，其特征在于所述活性成分是权利要求1的微生物或其含抗病原体活性代谢产物或其衍生物的培养液。15 权利要求14的方法，其特征在于将所述活性成分施用于种子。16 权利要求14的方法，其特征在于将所述活性成分施用到植物营养繁殖单位。17 权利要求14的方法，其特征在于将所述活性成分施用于植物。18 权利要求14的方法，其特征在于将所述活性成分施用到植物正在生长或要在其中生长的生长培养基中。

Claims (19)

1 保藏在The National Collections of Industrial and Marine BacteriaLimited，Aberdeen，Scotland，保藏号为40616的绿针假单胞菌或其生物学纯培养物。
2 从权利要求1菌株衍生的并基本具有与亲本菌株相同的特征的突变体。
3 控制因病原体真菌引起的植物疾病的组合物，其特征在于含权利要求1或2的微生物或其抗病原体活性代谢产物或衍生物作为活性成分。
4 权利要求3的组合物，其特征在于所述病原体是真菌Drechslerateres。
5 权利要求3的组合物，其特征在于所述病原体是真菌Drechsleragraminea。
6 权利要求3的组合物，其特征在于所述病原体是真菌Drechsleraavenae。
7 权利要求3的组合物，其特征在于所述病原体是真菌Microdochiumnivale。
8 权利要求3的组合物，其特征在于所述病原体是真菌小麦网腥黑粉菌。
9 权利要求3的组合物，其特征在于所述病原体是真菌燕麦散黑粉菌。
10 权利要求3-9的组合物，其特征在于所述活性成分是与农业实践中可接受的载体组合物混合的混合物。
11 权利要求10的组合物，其特征在于所述活性成分是与液体载体的混合物。
12 权利要求10的组合物，其特征在于所述活性成分渗透在固体多孔物质中。
13 权利要求10的组合物，其特征在于含有作为粘附剂的添加剂。
14 权利要求10的组合物，其特征在于还含有营养源。
15 控制因病原体真菌引起的植物疾病的方法，包括将有效量的活性成分导入到有待抑制诱发疾病因子的环境中，其特征在于所述活性成分是权利要求1或2的微生物或其抗病原体活性代谢产物或衍生物。
16 权利要求15的方法，其特征在于将所述活性成分施用于种子。
17 权利要求15的方法，其特征在于将所述活性成分施用到植物营养繁殖单位。
18 权利要求15的方法，其特征在于将所述活性成分施用于植物。
19 权利要求15的方法，其特征在于将所述活性成分施用到植物正在生长或要在其中生长的生长培养基中。
CN95193172A 1994-04-18 1995-04-13 用于控制植物疾病的组合物和方法 Expired - Fee Related CN1073806C (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE9401307A SE502660C2 (sv) 1994-04-18 1994-04-18 Stam av Pseudomonas chlororapis med förmågan att framställa antipatogeniskt aktiva metaboliter, kompositoiner därav och förfarande med användning därav för kontroll av växtsjukdomar
SE9401307-5 1994-04-18
SE94013075 1994-04-18

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1148791A true CN1148791A (zh) 1997-04-30
CN1073806C CN1073806C (zh) 2001-10-31

Family

ID=20393690

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN95193172A Expired - Fee Related CN1073806C (zh) 1994-04-18 1995-04-13 用于控制植物疾病的组合物和方法

Country Status (29)

Country Link
US (1) US5900236A (zh)
EP (1) EP0756454B1 (zh)
JP (1) JP3536180B2 (zh)
KR (1) KR100358671B1 (zh)
CN (1) CN1073806C (zh)
AT (1) ATE183616T1 (zh)
AU (1) AU690683B2 (zh)
BG (1) BG62753B1 (zh)
BR (1) BR9507322A (zh)
CA (1) CA2187927C (zh)
CZ (1) CZ287510B6 (zh)
DE (1) DE69511691T2 (zh)
DK (1) DK0756454T3 (zh)
EE (1) EE03414B1 (zh)
ES (1) ES2139204T3 (zh)
FI (1) FI119994B (zh)
GR (1) GR3031952T3 (zh)
HU (1) HU220582B1 (zh)
LV (1) LV11718B (zh)
NL (1) NL350040I2 (zh)
NO (1) NO316012B1 (zh)
NZ (1) NZ284874A (zh)
PL (1) PL186440B1 (zh)
RO (1) RO118786B1 (zh)
RU (1) RU2143199C1 (zh)
SE (1) SE502660C2 (zh)
SK (1) SK281576B6 (zh)
UA (1) UA43366C2 (zh)
WO (1) WO1995028085A1 (zh)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103333845A (zh) * 2013-07-19 2013-10-02 上海农乐生物制品股份有限公司 一种绿针假单胞菌及其发酵培养方法
CN103614312A (zh) * 2013-09-22 2014-03-05 山东农业大学 一株有效控制玉米纹枯病并促进玉米生长的绿针假单胞菌
CN109258695A (zh) * 2018-10-18 2019-01-25 江苏师范大学 绿针假单胞菌在防治线虫中的应用
US10651311B2 (en) 2014-10-17 2020-05-12 Taiwan Semiconductor Manufacturing Company, Ltd. Metal gate with silicon sidewall spacers
CN113631040A (zh) * 2018-10-30 2021-11-09 农业生物群落股份有限公司 控制植物害虫和改善植物健康的组合物和方法

Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2835598B2 (ja) * 1996-05-20 1998-12-14 多木化学株式会社 育苗培土及びその製造方法並びに耐病性苗の育成方法
EP1155617A1 (en) * 2000-05-17 2001-11-21 Rockwool International A/S Mineral wool plant substrate
US6995007B2 (en) * 2001-12-21 2006-02-07 University Of Massachusetts Antifungal bacterium ATCC PTA-4838
KR100891720B1 (ko) 2007-09-13 2009-04-03 전남대학교산학협력단 식물병에 대한 저항성을 유도하는 슈도모나스 클로로라피스ｏ6 유래 4-카바모일페닐아세트산 및 그의 용도
HUP0900407A2 (en) 2009-06-26 2011-01-28 Biopure Kft Plant conditioning composition of natural origin and process for using it
TR201007613A2 (tr) * 2010-09-16 2012-04-24 Yed�Tepe �N�Vers�Tes� Liyofilize biyopestisit efervesan granül ve üretim yöntemi
US10681914B2 (en) 2012-05-29 2020-06-16 Neozyme International, Inc. Non-toxic plant agent compositions and methods and uses thereof
US10557234B2 (en) 2012-05-29 2020-02-11 Neozyme International, Inc. Papermaking additive compositions and methods and uses thereof
WO2014160354A1 (en) 2013-03-14 2014-10-02 Georgia State University Research Foundation, Inc. Inhibiting or reducing fungal growth
RU2548199C1 (ru) * 2014-01-17 2015-04-20 Государственное научное учреждение (ГНУ) Всероссийский научно-исследовательский институт гельминтологии им. К.И. Скрябина (ВИГИС) Россельхозакадемии СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА ДЛЯ ЗАЩИТЫ ОЗИМЫХ ЗЕРНОВЫХ КУЛЬТУР ОТ РОЗОВОЙ СНЕЖНОЙ ПЛЕСЕНИ Microdochium nivale
PT3099172T (pt) 2014-01-31 2021-11-08 Agbiome Inc Agentes modificados de controlo biológico e seus usos
US9877486B2 (en) 2014-01-31 2018-01-30 AgBiome, Inc. Methods of growing plants using modified biological control agents
LU92774B1 (en) 2015-07-13 2017-01-31 Oget Innovations Gmbh Plant conditioning composition, method of preparation and uses thereof
DE102015111314B4 (de) 2015-07-13 2019-05-02 Oget Innovations Gmbh Pflanzenstärkungsmittel, Verfahren zu dessen Herstellung und dessen Verwendungen
RU2603281C1 (ru) * 2015-12-09 2016-11-27 Федеральное бюджетное учреждение науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии (ФБУН ГНЦ ПМБ) ФОСФАТРАСТВОРЯЮЩИЙ ШТАММ Pseudomonas chlororaphis ssp chlororaphis Vsk-26a3, ОБЛАДАЮЩИЙ ФУНГИЦИДНОЙ И БАКТЕРИЦИДНОЙ АКТИВНОСТЬЮ
RU2646160C2 (ru) * 2016-05-18 2018-03-01 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина Российской академии наук (ИБФМ РАН) Штамм бактерий pseudomonas fluorescens для защиты растений от фитопатогенных грибов и бактерий и стимуляции роста растений
JPWO2018047918A1 (ja) * 2016-09-08 2019-06-27 イビデン株式会社 植物賦活剤および植物賦活剤の製造方法
WO2020006555A1 (en) * 2018-06-29 2020-01-02 AgBiome, Inc. Compositions comprising bacteria and methods for controlling plant pests and improving plant health
CN111944728B (zh) * 2020-08-26 2022-02-22 河南大学 一株绿针假单孢菌及其应用

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5310521A (en) * 1976-07-17 1978-01-31 Kinokuniya Sangiyou Kk Pillar
US5244658A (en) * 1988-08-03 1993-09-14 Wisconsin Alumni Research Foundation Biological inoculant effective against aphanomyces
AU9113791A (en) * 1990-12-26 1992-08-17 Monsanto Company Control of fruit ripening and senescence in plants

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103333845A (zh) * 2013-07-19 2013-10-02 上海农乐生物制品股份有限公司 一种绿针假单胞菌及其发酵培养方法
CN103614312A (zh) * 2013-09-22 2014-03-05 山东农业大学 一株有效控制玉米纹枯病并促进玉米生长的绿针假单胞菌
US10651311B2 (en) 2014-10-17 2020-05-12 Taiwan Semiconductor Manufacturing Company, Ltd. Metal gate with silicon sidewall spacers
US11437518B2 (en) 2014-10-17 2022-09-06 Taiwan Semiconductor Manufacturing Company, Ltd. Metal gate with silicon sidewall spacers
CN109258695A (zh) * 2018-10-18 2019-01-25 江苏师范大学 绿针假单胞菌在防治线虫中的应用
CN113631040A (zh) * 2018-10-30 2021-11-09 农业生物群落股份有限公司 控制植物害虫和改善植物健康的组合物和方法
CN113631040B (zh) * 2018-10-30 2023-07-07 农业生物群落股份有限公司 控制植物害虫和改善植物健康的组合物和方法

Also Published As

Publication number Publication date
CZ302596A3 (en) 1997-04-16
LV11718A (lv) 1997-04-20
AU690683B2 (en) 1998-04-30
EP0756454A1 (en) 1997-02-05
RU2143199C1 (ru) 1999-12-27
DE69511691T2 (de) 2000-03-02
PL316910A1 (en) 1997-02-17
NL350040I1 (nl) 2009-02-02
EE03414B1 (et) 2001-06-15
CZ287510B6 (en) 2000-12-13
EP0756454B1 (en) 1999-08-25
HU9602828D0 (en) 1996-12-30
AU2354795A (en) 1995-11-10
HUT75369A (en) 1997-05-28
GR3031952T3 (en) 2000-03-31
BG62753B1 (bg) 2000-07-31
SE9401307D0 (sv) 1994-04-18
SK281576B6 (sk) 2001-05-10
US5900236A (en) 1999-05-04
CA2187927C (en) 2006-10-31
BG100919A (en) 1997-12-30
DK0756454T3 (da) 2000-03-27
BR9507322A (pt) 1997-09-30
HU220582B1 (hu) 2002-03-28
SK131096A3 (en) 1997-06-04
RO118786B1 (ro) 2003-11-28
PL186440B1 (pl) 2004-01-30
KR100358671B1 (ko) 2003-04-26
FI964162A (fi) 1996-12-10
JPH10502803A (ja) 1998-03-17
NO964359D0 (no) 1996-10-14
ATE183616T1 (de) 1999-09-15
ES2139204T3 (es) 2000-02-01
NO316012B1 (no) 2003-12-01
SE9401307L (sv) 1995-10-19
JP3536180B2 (ja) 2004-06-07
FI964162A0 (fi) 1996-10-16
CA2187927A1 (en) 1995-10-26
LV11718B (en) 1997-08-20
NL350040I2 (nl) 2009-11-02
CN1073806C (zh) 2001-10-31
SE502660C2 (sv) 1995-12-04
UA43366C2 (uk) 2001-12-17
WO1995028085A1 (en) 1995-10-26
NO964359L (no) 1996-12-16
NZ284874A (en) 1997-09-22
FI119994B (fi) 2009-05-29
DE69511691D1 (de) 1999-09-30
EE9600164A (et) 1997-06-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN1073806C (zh) 用于控制植物疾病的组合物和方法
US5968503A (en) Use of streptomyces bacteria to control plant pathogens and degrade turf thatch
RU2127521C1 (ru) Штамм актиномицета streptomyces lydicus для защиты растений от грибковой инфекции, композиция для защиты растений от грибковой инфекции (варианты), способ снижения чувствительности растения к грибковой инфекции (варианты)
CA2216794C (en) Use of streptomyces bacteria to control plant pathogens and degrade turf thatch
RU2154381C2 (ru) Штамм гриба nectria pityrodes montagne, используемый в качестве биофунгицида (варианты), биофунгицид, способ его получения (варианты), способ подавления грибковой инфекции у растений, метод скрининга фунгицидных микроорганизмов
US20020000540A1 (en) Materials and methods for biological control of soilborne pathogens
WO1995020646A9 (en) Microorganisms for biological control of plant diseases
US5968504A (en) Fungus Gliocladium catenulatum for biological control of plant diseases
CN1165536A (zh) 壳二孢属(Ascochyta)的微生物及其用途
CN1211276A (zh) 壳二孢属的微生物及其应用
MXPA96002967A (es) Microorganismos para el control biologico de lasenfermedades de las plantas

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: GR

Ref document number: 1032293

Country of ref document: HK

C17 Cessation of patent right
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20011031

Termination date: 20140413