CN114487420A - 一种肌酸激酶同工酶检测试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种肌酸激酶同工酶检测试剂盒，属于生物检测技术领域。该肌酸激酶同工酶检测试剂盒括试剂R1和试剂R2；其中试剂R1的组分为：缓冲液、促凝剂、螯合剂、阻断剂、表面活性剂、稳定剂和防腐剂；试剂R2的组分为：缓冲液、肌酸激酶同工酶抗体包被的胶乳颗粒、封闭剂、稳定剂和防腐剂。本发明的肌酸激酶同工酶检测试剂盒克服了现有的肌酸激酶同工酶检测试剂盒所存在的缺陷，具有抗干扰性强、灵敏度高、特异性高、准确性高、线性范围宽以及稳定性好等优点，为肌酸激酶同工酶的检测提供了一种安全、快捷、准确、无污染的检测手段。

Description

一种肌酸激酶同工酶检测试剂盒
技术领域
本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种肌酸激酶同工酶检测试剂盒。
背景技术
肌酸激酶(CK)是一种二聚体酶，它有四种不同的形式：线粒体同工酶、胞浆同工酶CK-MM(肌型)、肌酸激酶脑型同工酶CK-BB(脑型)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)，其中肌酸激酶同工酶主要位于心肌。
肌酸激酶同工酶诊断透壁型心肌梗死的敏感性及特异性均极高，在正常条件下其表达水平较低，在发病后4-8小时肌酸激酶同工酶从受损细胞排出并迅速开始在血液中增加，在12-24小时后达到最高水平，并在24-48小时内恢复正常。若肌酸激酶同工酶在急性心肌梗死后仍保持高水平，表明心肌坏死还在进行；若恢复正常后再次升高，表明原梗死部位扩展或者新的梗死部位出现。因此，定量检测血液中肌酸激酶同工酶水平，对于早期诊断急性心肌梗死(AMI)有着非常重要的价值。
目前，肌酸激酶同工酶的测定方法有电泳法、免疫抑制法、放射性免疫法、免疫酶标法、金标记法、离子交换柱层析法等。应用较多的方法主要是电泳法和免疫抑制法，但电泳法无法应用于全自动生化分析仪，所用仪器价格昂贵，无法普及其应用；免疫抑制法有迅速、省时以及敏感性高等优点，但是影响因素多。其他常用的检测方法还有免疫比浊法和酶联免疫吸附法等，酶联免疫吸附法存在着操作繁琐、灵敏度低、线性范围窄和检测周期长等缺点，不能满足大型医院快速定量简单检测的要求，而免疫比浊法随着全自动生化仪的普及，已经发展出来多种快速免疫比浊检测技术。
胶乳增强免疫比浊法是一种抗原抗体结合动态检测方法，通过将待测的目的抗原相对应的抗体包被在胶乳微球上，使抗原抗体结合物的体积增大，在检测光路中，透射光和散射光的强度变化更为显著，从而提高检测的灵敏度。
目前市场上虽然存在基于胶乳增强免疫比浊法的肌酸激酶同工酶检测试剂盒，但是这些试剂盒存在检测线性范围不宽、灵敏度不高、抗干扰能力差以及试剂存放不稳定等问题。
基于以上所述，本领域需要研究开发出一种抗干扰性强、灵敏度高、特异性高、准确性高、检测范围宽以及稳定性好的肌酸激酶同工酶检测试剂盒，使得肌酸激酶同工酶在急性心肌梗死的临床诊断上得以大规模的推广应用。
发明内容
针对以上问题，本发明提供具有抗干扰性强、灵敏度高、特异性高、准确性高、线性范围宽以及稳定性好的肌酸激酶同工酶检测试剂盒。
本发明通过以下技术方案实现：
一种肌酸激酶同工酶检测试剂盒，所述试剂盒包括试剂R1和试剂R2；
所述试剂R1的组分及含量为：缓冲液10-50mM、促凝剂2-5g/L、螯合剂1-2g/L、阻断剂0.5-2g/L、表面活性剂1-5g/L、稳定剂0.5-1g/L、防腐剂1-2g/L；
所述试剂R2的组分及含量为：缓冲液10-50mM、肌酸激酶同工酶抗体包被的胶乳颗粒0.05-0.4％w/v、封闭剂1-10g/L、稳定剂5-20g/L、防腐剂1-2g/L。
进一步地，所述试剂R1中的表面活性剂由TritonX-100和苯乙烯聚氧乙烯醚按照质量比2-5:1复配而成。
进一步地，所述试剂R2中的封闭剂由三乙醇胺、甘氨酸和酪蛋白按照质量比0.5-2:1:1-4复配而成。
进一步地，所述试剂R1中的阻断剂为小鼠IgG；螯合剂为EGTA。
进一步地，所述试剂R1中的促凝剂为PEG-4000、PEG-6000、PEG-8000、葡聚糖中的任一种。
进一步地，所述试剂R1和试剂R2中的缓冲液分别独自选自磷酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液、MES缓冲液中的一种。
进一步地，所述试剂R1和试剂R2中的稳定剂分别独自选自牛血清白蛋白、海藻糖、壳聚糖、甘油中的一种。
进一步地，所述试剂R1和试剂R2中的防腐剂分别独自选自ProClin300、ProClin950、苯酚、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲醛乙酯中的一种。
进一步地，所述试剂R2中的肌酸激酶同工酶抗体为鼠源单克隆抗体；胶乳颗粒为聚苯乙烯胶乳微球，直径为250-400nm，微球表面修饰有官能团，修饰的官能团选自羧基、氨基或羟基。
进一步地，所述试剂R2中的肌酸激酶同工酶抗体通过化学交联法包被至胶乳微球的表面，所用化学交联剂选自1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐、马来酰亚胺、碳化亚胺、巯基烟酰胺、异氰酸酯中的一种，交联缓冲液选自HEPES缓冲液、MOPS缓冲液、MES缓冲液、MOPSO缓冲液中的一种，pH在6.0-8.0之间。
进一步地，制备以上所述的肌酸激酶同工酶检测试剂盒的方法，包括以下方法：
(1)试剂R1的制备：取试剂R1的各组分，加入纯化水中，混合均匀，调整pH值至6.5-8.0，经滤膜过滤，以及定容得到试剂R1；
(2)试剂R2的制备：
①微球活化：在pH为6.0-8.0的缓冲液中加入直径为250-400nm的表面修饰有羧基、氨基或羟基的聚苯乙烯胶乳微球，并加入活化剂，在25-30℃下反应30-40min，经离心后去除上清液中多余的活化剂，取沉淀，再使用缓冲液重悬，即可得活化的聚苯乙烯胶乳微球；
②抗体交联：将肌酸激酶同工酶抗体加入已活化的聚苯乙烯胶乳微球，在25-30℃下反应1.5-2h，即可在胶乳微球的表面上交联抗体；
③微球封闭：将交联有抗体后的胶乳微球反应液中加入封闭剂，封闭1-2h，将胶乳微球表面上未被抗体粘附的区域进行封闭；
④杂质去除：将封闭后的胶乳微球的混合液进行离心，去除多余的交联剂、交联副产物、抗体以及封闭剂，底部沉淀即为肌酸激酶同工酶抗体包被的胶乳颗粒；
⑤混合与保存：取试剂R2中的缓冲液、稳定剂和防腐剂，加入纯化水中，混合均匀，并加入肌酸激酶同工酶抗体包被的胶乳颗粒，充分搅拌，混合均匀，经定容后得到试剂R2。
本发明的肌酸激酶同工酶检测试剂盒，采用胶乳增强免疫比浊法定量检测血液中肌酸激酶同工酶的含量，其原理是：待测样本中的肌酸激酶同工酶抗原与包被在胶乳颗粒上肌酸激酶同工酶抗体发生抗原抗体反应，形成抗原-抗体-胶乳颗粒的复合物并发生凝集，导致浊度上升，从而改变反应液的散光或透光性能，利用标准品绘制标准曲线，便可根据样本吸光度值变化测定待测物含量。
与现有技术相比，本发明的优点及有益效果为：
1、本发明的肌酸激酶同工酶检测试剂盒克服了现有的肌酸激酶同工酶检测试剂盒所存在的缺陷，具有抗干扰性强、灵敏度高、特异性高、准确性高、线性范围宽以及稳定性好等优点，为肌酸激酶同工酶的检测提供了一种安全、快捷、准确、无污染的检测手段，从而为急性心肌梗死的临床诊断提供有力的试验诊断依据。
2、本申请的试剂R1中的表面活性剂由TritonX-100和苯乙烯聚氧乙烯醚复配而成，可以很好地促进试剂体系中各组分以及检测样本中各物质的均匀分散，从而提高检测的精密度，确保检测结果的重现性，使得检测结果稳定性好，以及还能减少样本浊度对检测结果的影响，提高试剂的抗干扰能力。
3、本发明的试剂R2中的封闭剂由三乙醇胺、甘氨酸和酪蛋白复配而成，可以与胶乳颗粒中游离的-COOH位点结合，避免游离的羧基位点对检测结果造成不良影响，有效地提高了检测的灵敏度和试剂盒的稳定性。
4、本发明在试剂R1中加入阻断剂小鼠IgG可有效降低抗原抗体反应过程中的非特异性吸附，避免非特异性反应对检测结果的干扰，显著地提高了样本检测的灵敏度，使得试剂盒具有更低的检测下限。本发明还在试剂R1中加入螯合剂EGTA，有效地提高了试剂盒检测范围的上限。与现有方法相比，本发明试剂盒线性范围更宽，本发明试剂盒检测范围为3.0-180.0ng/mL。
5、本发明试剂R2中聚苯乙烯胶乳微球的表面官能团为羧基、氨基或羟基，其表面的官能团可以和抗体表面的氨基等结合形成共价偶联结构，使肌酸激酶同工酶抗体牢固的结合在胶乳微球表面，保证了试剂R2具有很好的稳定性，有效地延长了试剂的有效期。
6、本发明采用的聚苯乙烯胶乳颗粒的粒径为250-400nm，具有较大的粒径，可以增加血液中肌酸激酶同工酶和肌酸激酶同工酶抗体反应时的浊度，从而增加检测过程中反应的灵敏度，有效地缩短了反应时间。
附图说明
图1为实施例1所制备的肌酸激酶同工酶检测试剂盒和北京九强试剂盒比对。
图2为对比例1所制备的肌酸激酶同工酶检测试剂盒和北京九强试剂盒比对。
图3为实施例1和对比例2试剂在2-8℃储存14个月稳定性趋势图。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明做进一步地详细说明，这些实施例仅用来说明本发明，并不限制本发明的保护范围。
实施例1
本实施例所提供的肌酸激酶同工酶检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1和试剂R2的组成如下：
试剂R1：
Figure BDA0003470294990000041
Figure BDA0003470294990000051
表中：TritonX-100和苯乙烯聚氧乙烯醚的质量比为3.2:1。
试剂R1的制备：分别按上表中试剂R1的组分和含量，取试剂R1的各组分，加入纯化水中，混合均匀，调整pH值至7.0，经滤膜过滤，以及定容得到试剂R1。
试剂R2：
Figure BDA0003470294990000052
表中：三乙醇胺、甘氨酸和酪蛋白的质量比为0.5:1:2.5。
试剂R2的制备：
①微球活化：在pH为7.2的MOPS缓冲液中加入直径为300nm的表面修饰有羧基的聚苯乙烯胶乳微球，并加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐，在25℃下反应30min，经离心后去除上清液中多余的活化剂，取沉淀，再使用MOPS缓冲液重悬，即可得活化的聚苯乙烯胶乳微球；
②抗体交联：将肌酸激酶同工酶抗体加入已活化的聚苯乙烯胶乳微球，在25℃下反应1.5h，即可在胶乳微球的表面上交联抗体；
③微球封闭：将交联有抗体后的胶乳微球反应液中加入三乙醇胺、甘氨酸和酪蛋白，封闭1.5h，将胶乳微球表面上未被抗体粘附的区域进行封闭；
④杂质去除：将封闭后的胶乳微球的混合液进行离心，去除多余的交联副产物、肌酸激酶同工酶抗体、三乙醇胺、甘氨酸和酪蛋白，底部沉淀即为肌酸激酶同工酶抗体包被的胶乳颗粒；
⑤混合与保存：取磷酸盐缓冲液、壳聚糖和ProClin950，加入纯化水中，混合均匀，并加入肌酸激酶同工酶抗体包被的胶乳颗粒，充分搅拌，混合均匀，经定容后得到试剂R2。
实施例2
本实施例所提供的肌酸激酶同工酶检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1和试剂R2的组成如下：
试剂R1：
Figure BDA0003470294990000061
表中：TritonX-100和苯乙烯聚氧乙烯醚的质量比为2.5:1。
试剂R1的制备：分别按上表中试剂R1的组分和含量，取试剂R1的各组分，加入纯化水中，混合均匀，调整pH值至6.5，经滤膜过滤，以及定容得到试剂R1。
试剂R2：
Figure BDA0003470294990000062
表中：三乙醇胺、甘氨酸和酪蛋白的质量比为1:1:3。
试剂R2的制备：
①微球活化：在pH为6.0的HEPES缓冲液中加入直径为400nm的表面修饰有氨基的聚苯乙烯胶乳微球，并加入巯基烟酰胺，在30℃下反应35min，经离心后去除上清液中多余的活化剂，取沉淀，再使用HEPES缓冲液重悬，即可得活化的聚苯乙烯胶乳微球；
②抗体交联：将肌酸激酶同工酶抗体加入已活化的聚苯乙烯胶乳微球，在30℃下反应2h，即可在胶乳微球的表面上交联抗体；
③微球封闭：将交联有抗体后的胶乳微球反应液中加入三乙醇胺、甘氨酸和酪蛋白，封闭1h，将胶乳微球表面上未被抗体粘附的区域进行封闭；
④杂质去除：将封闭后的胶乳微球的混合液进行离心，去除多余的交联副产物、肌酸激酶同工酶抗体、三乙醇胺、甘氨酸和酪蛋白，底部沉淀即为肌酸激酶同工酶抗体包被的胶乳颗粒；
⑤混合与保存：取甘氨酸缓冲液、壳聚糖和苯酚，加入纯化水中，混合均匀，并加入肌酸激酶同工酶抗体包被的胶乳颗粒，充分搅拌，混合均匀，经定容后得到试剂R2。
实施例3
本实施例所提供的肌酸激酶同工酶检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1和试剂R2的组成如下：
试剂R1：
Figure BDA0003470294990000071
表中：TritonX-100和苯乙烯聚氧乙烯醚的质量比为4.5:1。
试剂R1的制备：分别按上表中试剂R1的组分和含量，取试剂R1的各组分，加入纯化水中，混合均匀，调整pH值至8.0，经滤膜过滤，以及定容得到试剂R1。
试剂R2：
Figure BDA0003470294990000072
Figure BDA0003470294990000081
表中：三乙醇胺、甘氨酸和酪蛋白的质量比为2:1:4。
试剂R2的制备：
①微球活化：在pH为7.5的MOPSO缓冲液中加入直径为250nm的表面修饰有羟基的聚苯乙烯胶乳微球，并加入异氰酸酯，在25℃下反应40min，经离心后去除上清液中多余的活化剂，取沉淀，再使用MOPSO缓冲液重悬，即可得活化的聚苯乙烯胶乳微球；
②抗体交联：将肌酸激酶同工酶抗体加入已活化的聚苯乙烯胶乳微球，在25℃下反应2h，即可在胶乳微球的表面上交联抗体；
③微球封闭：将交联有抗体后的胶乳微球反应液中加入三乙醇胺、甘氨酸和酪蛋白，封闭1h，将胶乳微球表面上未被抗体粘附的区域进行封闭；
④杂质去除：将封闭后的胶乳微球的混合液进行离心，去除多余的交联副产物、肌酸激酶同工酶抗体、三乙醇胺、甘氨酸和酪蛋白，底部沉淀即为肌酸激酶同工酶抗体包被的胶乳颗粒；
⑤混合与保存：取Tris缓冲液、牛血清白蛋白和对羟基苯甲酸，加入纯化水中，混合均匀，并加入肌酸激酶同工酶抗体包被的胶乳颗粒，充分搅拌，混合均匀，经定容后得到试剂R2。
实施例4
本实施例所提供的肌酸激酶同工酶检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1和试剂R2的组成如下：
试剂R1：
Figure BDA0003470294990000082
表中：TritonX-100和苯乙烯聚氧乙烯醚的质量比为5:1。
试剂R1的制备：分别按上表中试剂R1的组分和含量，取试剂R1的各组分，加入纯化水中，混合均匀，调整pH值至6.5，经滤膜过滤，以及定容得到试剂R1。
试剂R2：
Figure BDA0003470294990000091
表中：三乙醇胺、甘氨酸和酪蛋白的质量比为1:1:3.5。
试剂R2的制备：
①微球活化：在pH为6.0的MES缓冲液中加入直径为400nm的表面修饰有羧基的聚苯乙烯胶乳微球，并加入碳化亚胺，在30℃下反应40min，经离心后去除上清液中多余的活化剂，取沉淀，再使用MES缓冲液重悬，即可得活化的聚苯乙烯胶乳微球；
②抗体交联：将肌酸激酶同工酶抗体加入已活化的聚苯乙烯胶乳微球，在30℃下反应2h，即可在胶乳微球的表面上交联抗体；
③微球封闭：将交联有抗体后的胶乳微球反应液中加入三乙醇胺、甘氨酸和酪蛋白，封闭1h，将胶乳微球表面上未被抗体粘附的区域进行封闭；
④杂质去除：将封闭后的胶乳微球的混合液进行离心，去除多余的交联副产物、肌酸激酶同工酶抗体、三乙醇胺、甘氨酸和酪蛋白，底部沉淀即为肌酸激酶同工酶抗体包被的胶乳颗粒；
⑤混合与保存：取MES缓冲液、甘油和对羟基苯甲醛乙酯，加入纯化水中，混合均匀，并加入肌酸激酶同工酶抗体包被的胶乳颗粒，充分搅拌，混合均匀，经定容后得到试剂R2。
实施例5
本实施例所提供的肌酸激酶同工酶检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1和试剂R2的组成如下：
试剂R1：
Figure BDA0003470294990000092
Figure BDA0003470294990000101
表中：TritonX-100和苯乙烯聚氧乙烯醚的质量比为2:1。
试剂R1的制备：分别按上表中试剂R1的组分和含量，取试剂R1的各组分，加入纯化水中，混合均匀，调整pH值至7.0，经滤膜过滤，以及定容得到试剂R1。
试剂R2：
Figure BDA0003470294990000102
表中：三乙醇胺、甘氨酸和酪蛋白的质量比为2:1:1。
试剂R2的制备：
①微球活化：在pH为8.0的MES缓冲液中加入直径为300nm的表面修饰有羧基的聚苯乙烯胶乳微球，并加入马来酰亚胺，在25℃下反应40min，经离心后去除上清液中多余的活化剂，取沉淀，再使用MES缓冲液重悬，即可得活化的聚苯乙烯胶乳微球；
②抗体交联：将肌酸激酶同工酶抗体加入已活化的聚苯乙烯胶乳微球，在25℃下反应2h，即可在胶乳微球的表面上交联抗体；
③微球封闭：将交联有抗体后的胶乳微球反应液中加入三乙醇胺、甘氨酸和酪蛋白，封闭2h，将胶乳微球表面上未被抗体粘附的区域进行封闭；
④杂质去除：将封闭后的胶乳微球的混合液进行离心，去除多余的交联副产物、肌酸激酶同工酶抗体、三乙醇胺、甘氨酸和酪蛋白，底部沉淀即为肌酸激酶同工酶抗体包被的胶乳颗粒；
⑤混合与保存：取HEPES缓冲液、牛血清白蛋白和ProClin300，加入纯化水中，混合均匀，并加入肌酸激酶同工酶抗体包被的胶乳颗粒，充分搅拌，混合均匀，经定容后得到试剂R2。
对比例1
对比例1与实施例1的区别在于，对比例1的试剂R1中表面活性剂仅为TritonX-100，其余均匀实施例1的相同。
对比例2
对比例2与实施例1的区别在于，对比例2的试剂R2中封闭剂仅为酪蛋白，其余均匀实施例1的相同。
对比例3
对比例3与实施例1的区别在于，对比例3的试剂R1中无阻断剂小鼠IgG，其余均匀实施例1的相同。
性能评价
试验例1肌酸激酶同工酶检测试剂盒的线性范围试验
1、试验样品
(1)供试样品：实施例1-5所制备的肌酸激酶同工酶检测试剂盒；
(2)对照样品：对比例1-3所制备的肌酸激酶同工酶检测试剂盒；
2、试验方法
通过将高浓度样本与低浓度样本进行倍比稀释得到，配制方案如下表。每份样本的浓度与体积单位统一，在进行液体吸取时应选择精密度与准确性好的移液装置；制备时将样本完全混合并避免蒸发或其他使样本变质的情况
样本号 1 2 3 4 5 6
低浓度血清3.2ng/ml 1.00 0.80 0.60 0.40 0.20 0.00
高浓度血清180ng/ml 0.00 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00
分别采用实施例1-5以及对比例1-3所制备的肌酸激酶同工酶检测试剂盒对其进行检测，绘制各检测试剂盒标准工作曲线。
检测方法为两点终点法，包括以下步骤：向10μL待检测样本(校准管以校准品做样本，空白以蒸馏水为样本)中加入150μL的试剂R1充分混匀，37℃恒温5min，然后再加入50μL试剂R2，混匀，37℃恒温40sec后，在波长660nm下，测定各管吸光度Al，260sec后读取吸光度A2，则反应吸光度OA＝A2-A1。根据多点校准品浓度和对应吸光度变化值OA，采用多点非线性校准模式确定工作曲线，样本吸光度变化在工作曲线上相对应的浓度值即为测定浓度。
3、试验结果
实施例1-5以及对比例1-3的肌酸激酶同工酶检测试剂盒的分析结果如下：(技术指标：在[3，180]ng/mL内，线性相关系数r≥0.990.在[3，20]ng/mL范围内，线性绝对偏差应不超过±3ng/mL，在(20，180]ng/mL范围内，线性相对偏差应不超过±15％)
Figure BDA0003470294990000121
Figure BDA0003470294990000131
Figure BDA0003470294990000141
结果分析：通过以上表格中的实验数据，可以看出实施例1-5线性范围指标均满足技术指标要求，而对比例1和对比例2在低值浓度不满足要求，说明试剂R1中的表面活性剂和试剂R2中的封闭剂对试剂胶乳的分散性以及背景值有影响，而对比例3测试线性范围数据非常杂乱，说明试剂R1中无阻断剂小鼠IgG，将会导致强烈的干扰出现。
试验例2肌酸激酶同工酶检测试剂盒的最低检测限试验
1、试验样品
(1)供试样品：实施例1所制备的肌酸激酶同工酶检测试剂盒；
(2)对照样品：对比例1所制备的肌酸激酶同工酶检测试剂盒；
2、试验方法
采用蒸馏水作为空白样本，分别采用实施例1以及对比例1所制备的肌酸激酶同工酶检测试剂盒对其进行检测，连续检测10次。计算10次结果均值和标准差，以空白均值加两倍标准差作为最低检测限(+2SD)。
3、试验结果
(技术指标：用空白样本测试试剂盒，试剂的空白限应≤2ng/mL)
实施例1的肌酸激酶同工酶检测试剂盒的试验结果
Figure BDA0003470294990000151
对比例1的肌酸激酶同工酶检测试剂盒的试验结果
Figure BDA0003470294990000152
结果分析：实施例1与对比例1的最低检测限结果显示，实施例1的最低检测限达到0.43，而对比例1试剂的背景值很高，导致最低检测限不合格。
试验例3肌酸激酶同工酶检测试剂盒的准确性试验
1、试验样品
(1)供试样品：实施例1所制备的肌酸激酶同工酶检测试剂盒；
(2)对照样品：对比例1所制备的肌酸激酶同工酶检测试剂盒；
2、试验方法
分别采用实施例1以及对比例1所制备的肌酸激酶同工酶检测试剂盒和已经上市的北京九强生物肌酸激酶同工酶检测试剂盒对40份含量不同的肌酸激酶同工酶样本进行临床检测，对测定值进行相关性分析。
3、试验结果
实施例1以及对比例1的肌酸激酶同工酶检测试剂盒的测定结果如图1和图2所示。
结果分析：由结果可知，与北京九强已上市产品进行血清临床比对，实施例1比对比例1具有更好的相关性(实施例1相关性r＝0.99，对比例1相关性r＝0.92)，同时可以看出对比例1在测血清时存在大量的干扰情况，在低浓度水平偏差较大。
试验例4肌酸激酶同工酶检测试剂盒的稳定性试验
1、试验样品
(1)供试样品：实施例1所制备的肌酸激酶同工酶检测试剂盒；
(2)对照样品：对比例2所制备的肌酸激酶同工酶检测试剂盒；
2、试验方法
在2-8℃的储存条件下，分别采用实施例1以及对比例2所制备的肌酸激酶同工酶检测试剂盒于0月、3月、6月、9月、12月以及14月后对高浓度120ng/mL和低浓度50ng/mL的肌酸激酶同工酶样本进行检测，每个样本检测10次，取平均值。
3、试验结果
Figure BDA0003470294990000161
Figure BDA0003470294990000162
Figure BDA0003470294990000171
结果分析：由实施例1稳定性数据方差分析可得，实施例1试剂2-8℃储存14月，高浓度的p＝0.868，低浓度p＝0.252，高低浓度的p＞0.05，所以趋势不显著，即实施例1试剂2-8℃储存14月，其检测结果的变化趋势不显著，处于稳定状态。
Figure BDA0003470294990000172
Figure BDA0003470294990000181
Figure BDA0003470294990000182
结果分析：由对比例2稳定性数据方差分析可得，对比例2试剂2-8℃储存14月，试剂测试值出现明显的下降，高低浓度的p＜0.05，即对比例2试剂2-8℃储存14月，其检测结果的变化趋势显著，处于极不稳定状态。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种肌酸激酶同工酶检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括试剂R1和试剂R2；
所述试剂R1的组分及含量为：缓冲液10-50mM、促凝剂2-5g/L、螯合剂1-2g/L、阻断剂0.5-2g/L、表面活性剂1-5g/L、稳定剂0.5-1g/L、防腐剂1-2g/L；
所述试剂R2的组分及含量为：缓冲液10-50mM、肌酸激酶同工酶抗体包被的胶乳颗粒0.05-0.4％w/v、封闭剂1-10g/L、稳定剂5-20g/L、防腐剂1-2g/L。
2.根据权利要求1所述的肌酸激酶同工酶检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中的表面活性剂由TritonX-100和苯乙烯聚氧乙烯醚按照质量比2-5:1复配而成。
3.根据权利要求1所述的肌酸激酶同工酶检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R2中的封闭剂由三乙醇胺、甘氨酸和酪蛋白按照质量比0.5-2:1:1-4复配而成。
4.根据权利要求1所述的肌酸激酶同工酶检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中的阻断剂为小鼠IgG；螯合剂为EGTA。
5.根据权利要求1所述的肌酸激酶同工酶检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中的促凝剂为PEG-4000、PEG-6000、PEG-8000、葡聚糖中的任一种。
6.根据权利要求1所述的肌酸激酶同工酶检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1和试剂R2中的缓冲液分别独自选自磷酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液、MES缓冲液中的一种。
7.根据权利要求1所述的肌酸激酶同工酶检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1和试剂R2中的稳定剂分别独自选自牛血清白蛋白、海藻糖、壳聚糖、甘油中的一种。
8.根据权利要求1所述的肌酸激酶同工酶检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1和试剂R2中的防腐剂分别独自选自ProClin300、ProClin950、苯酚、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲醛乙酯中的一种。
9.根据权利要求1所述的肌酸激酶同工酶检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R2中的肌酸激酶同工酶抗体为鼠源单克隆抗体；胶乳颗粒为聚苯乙烯胶乳微球，直径为250-400nm，微球表面修饰有官能团，修饰的官能团选自羧基、氨基或羟基。
10.根据权利要求1所述的肌酸激酶同工酶检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R2中的肌酸激酶同工酶抗体通过化学交联法包被至胶乳微球的表面，所用化学交联剂选自1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐、马来酰亚胺、碳化亚胺、巯基烟酰胺、异氰酸酯中的一种，交联缓冲液选自HEPES缓冲液、MOPS缓冲液、MES缓冲液、MOPSO缓冲液中的一种，pH在6.0-8.0之间。
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CN116593701A (zh) * 2023-07-19 2023-08-15 北京豪迈生物工程股份有限公司 一种含有生物阻断剂的肌酸激酶同工酶检测试剂盒

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