CN114480222B - 一株克里本类芽孢杆菌航天突变体及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一株克里本类芽孢杆菌航天突变体及其应用，本发明提供一株克里本类芽孢杆菌航天诱变突变株△PS04‑17，该菌株于2022年3月17日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为：GDMCC NO:62233。本发明研究表明，突变株△PS04‑17发生了较大幅度正向变异，该突变株△PS04‑17的抑菌效果显著优于野生型PS04菌株，具有更广谱的抑菌性；其菌株的生长活力也强于野生型PS04菌株，还具有较野生型菌株更好的耐盐碱能力，能缓解番茄盐碱胁迫，促进番茄在盐碱胁迫下生长，为土壤盐碱化的微生物修复提供了重要的菌株资源。

Description

一株克里本类芽孢杆菌航天突变体及其应用

技术领域

本发明属于微生物技术领域。更具体地，涉及一株克里本类芽孢杆菌航天突变体及其应用。

背景技术

土壤盐碱化问题是一项世界性难题，在我国干旱半干旱地区分布尤其严重，且表现出盐碱地分布范围广、盐渍化程度高、盐碱地种类复杂多样等特点。盐碱地上生长的植物难以从土壤中吸收水分，从而造成植物根系生长困难。在农业生产中就会造成耕地单位面积粮食产量低，甚至不能收获的情况。如今，环境污染日益严重、淡水资源等重要资源的短缺的压力下，盐碱地的开发对生态环境以及粮食作物的安全是非常有必要的。

目前土壤盐碱化改良的方法主要有物理改良、化学改良、生物改良三大方法。其中，生物改良技术与传统的土壤改良技术相比，具有高效、清洁又安全的优点，近年来得到了广泛推广和应用。生物改良的技术措施包括耐盐植物品种的选育，种植以及微生物的利用。有研究人员将微生物菌剂应用于盐碱地土壤后，种植木薯后发现木薯产量和淀粉积累能够明显提升。也有研究发现微生物菌肥对盐碱地燕麦生理特性及土壤速效养分的影响，发现施加微生物菌肥后，燕麦生长良好，土壤中的速效养分显著提高。因此运用微生物土壤修复，可以维持盐碱地的生态平衡，有良好的应用前景和经济价值。

随着当今科学技术的发展，近些年来，航空航天技术发展迅猛，利用返回式卫星或宇宙飞船将生物材料搭载到宇宙空间，利用太空的特殊环境：长期处于微重力状态(10^-3-10^-6g)、强辐射、超真空和超洁净等环境条件下，与地面有很大的差异，在这些因素的作用下，对生物材料进行诱变，再返回地面，进而选育新材料、培育新品种的生物育种技术称作航天诱变。航天诱变可导致菌种产生有利变异，但由于变异具有随机性，之后还需要一定条件的筛选才可获得性状优异的菌种。

现有技术中已经有报道，微生物菌株利用航天诱变技术，搭载中国神舟八号飞船来筛选性状优良的诱变菌株，如厚垣普可尼亚菌(Pochonia chamydosporia)、淡紫拟青霉(Paecilomyces lilacinus)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)以及球孢白僵菌(Beauveria bassiana)等，航天诱变的变异率高，变异类型丰富，为选育生物防治优良菌株提供了新途径，为选育优良菌株提供了更多的机会。而目前鲜有报道关于克里本类芽孢杆菌(Paenibacillus kribbensis)的优良菌株选育和研究，为了提供更多的优良菌株资源，有必要采用更加科技先进的航空航天技术来选育更多的优良菌株。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有上述问题的缺陷和不足，提供一株克里本类芽孢杆菌航天突变体及其应用。

本发明的第一个目的是提供一株克里本类芽孢杆菌航天诱变突变株△PS04-17。

本发明的第二个目的是提供所述△PS04-17菌株的应用。

本发明的第三个目的是提供一种改良土壤盐碱化的微生物土壤修复剂。

本发明的第四个目的是提供一种改良土壤盐碱化的方法。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

本发明将克里本类芽孢杆菌(Paenibacillus kribbensis)野生型菌株PS04分为两份，一份留在地面常规保存用作对照样品；另一份于2020年3月在海南文昌发射基地搭载升空，经过一系列太空条件诱变于5月获得克里本类芽孢杆菌野生型菌株PS04的突变体库。以克里本类芽孢杆菌野生型菌株PS04为对照，比较航天诱变菌株在抑菌效果、表型、生长速度、耐盐碱能力等方面的变异性，以筛选获得在抑菌效果和耐盐碱能力上有显著提高的突变株。

本发明首先通过平板对峙筛选出抑菌效果好于野生型的突变株，并将筛选出的突变株分别接种在含10％NaCl的平板进行筛选，最终筛选得到生长能力最强的菌株△PS04-17，以该菌株△PS04-17进行后续研究。

本发明将克里本类芽孢杆菌航天诱变菌株与原始菌株在不同条件下的表型进行对比，在LB平板上与△PS04-17相比PS04菌落表面覆盖有大量多糖，菌落粘性较大。在查式液体培养基中可观察到PS04菌液偏白，菌液粘性较大；△PS04-17菌液偏黄，菌液粘性较PS04较弱。通过电镜观察比较PS04与△PS04-17的形态大小，可见△PS04-17菌体(1.04μm-3.33μm*0.29μm-0.64μm)较PS04菌体(2.59μm-6.72μm*0.34μm-0.50μm)短小。

本发明对航天诱变突变株和原始菌株的生长能力进行比较，将两者分别在含盐碱的梯度平板中涂布，在75mmol/L混合盐碱条件下，PS04完全不能生长，而△PS04-17菌株仍能正常生长，菌落数量仅有所减少。将两者分别在含有高浓度混合盐碱的查式液体培养基进行发酵，结果发现，△PS04-17菌株在125mmol/L和150mmol/L的条件下均能生长，而PS04完全不能生长，说明突变菌株△PS04-17耐盐碱的能力显著提高。表明突变体△PS04-17的耐盐碱能力显著高于野生型。

本发明进一步进行番茄盆栽实验，发现突变株△PS04-17对植株具有显著促生作用，并且可以显著缓解盐碱对植株生长的抑制作用。

从总体上看克里本类芽孢杆菌(Paenibacillus kribbensis)经航天诱变后，筛选得到的突变株△PS04-17在抑菌效果、生长能力、耐盐碱能力上都发生了显著的正向变异。是一株具有优异突变性状的菌株，在改良土壤盐碱化问题中具有广泛的应用前景。克里本类芽孢杆菌(Paenibacillus kribbensis)突变菌株△PS04-17菌株已于2022年3月17日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏编号为：GDMCC NO:62233，保藏单位：广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址：广东省先烈中路100号大院59号楼5楼。

因此，本发明提供所述航天诱变突变株△PS04-17在土壤修复或制备微生物土壤修复剂中的应用。

优选地，所述土壤修复为改良土壤盐碱化。

本发明提供一种改良土壤盐碱化的微生物土壤修复剂，含所述航天诱变突变株△PS04-17菌株和/或菌液。

优选地，所述菌液为发酵液。

优选地，所述发酵液的发酵条件为：以1～10％的接种量将△PS04-17种子液接种于发酵培养基中，于25～30℃，150～200rpm，发酵3～4天。

本发明提供一种改良土壤盐碱化的方法，采用所述突变株△PS04-17或所述微生物土壤修复剂，进行稀释后，用稀释液进行处理土壤。

本发明提供所述航天诱变突变株△PS04-17在促进植物生长或在制备植物促生剂中的应用。

优选地，所述促进植物生长为促进番茄植株生长。

本发明提供航天诱变突变株△PS04-17在盐碱胁迫下促进植物生长或在制备植物耐盐碱促生剂中的应用。

本发明还提供航天诱变突变株△PS04-17在抑制病原菌或制备病原菌杀菌剂中的应用。

优选地，所述病原菌为大豆炭疽病菌(Colletotrichum truncatum)、冬瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.cucurmerimum)、香蕉枯萎病菌(Fusarium oxysporumf.sp.cubense)、甘蓝黑斑病菌(Alternaria oleracea)、水稻纹枯病菌(Rhizoctoniasolani AG1-IA)中的一种或多种。

本领域所属技术人员可按照文献中所公开的各种方法制备得到△PS04-17发酵液；例如，采用二级培养方法，即：种子培养和液体发酵培养，制备得到发酵液。其中，在液体发酵培养时，可以采用发酵罐发酵或采用摇瓶培养的方式进行发酵培养。其中，所述的液体发酵培养基的组成成分包括碳源和氮源；所述的碳源为蔗糖或可溶性淀粉。所述的氮源包括但不限于硝酸钠、氯化铵或蛋白胨中的任一种或多种。

本发明具有以下有益效果：

本发明对克里本类芽孢杆菌PS04菌株进行航天诱变，筛选得到的突变株△PS04-17是一株具有优异突变性状的菌株，该突变株△PS04-17的抑菌效果显著优于野生型PS04菌株，具有更广谱的抑菌性；其菌株的生长活力也强于野生型PS04菌株，还具有更好的耐盐碱能力，能缓解番茄盐碱胁迫，促进番茄在盐碱胁迫下生长。采用△PS04-17菌株可以用于土壤的修复，处理盐碱地土壤，以消除植物受到的胁迫，对盐碱地的修复和利用具有重要的应用意义。

附图说明

图1为复筛效果图，A为野生型，B为突变体；

图2为30个航天诱变突变体抑菌半径；

图3为菌株在LB平板上的生长形态(左侧为PS04在LB平板上的生长形态，右侧为△PS04-17在LB平板上的生长形态)；

图4为菌株在察氏液体培养基中的生长状态(左侧为PS04在察氏液体培养基中的生长状态，右侧为△PS04-17在察氏液体培养基中的生长状态)；

图5为菌株在电镜下的形态(左侧为PS04在电镜下的形态，右侧为△PS04-17在电镜下的形态)；

图6为PS04与△PS04-17对部分病原菌抑菌效果对比(A:大豆炭疽病菌B:冬瓜枯萎病菌C:香蕉枯萎病菌D:甘蓝黑斑病菌)；

图7为△PS04-17菌株对大豆炭疽病菌、冬瓜枯萎病菌、甘蓝黑斑病菌、香蕉枯萎病菌、水稻纹枯病菌的抑菌圈半径；

图8为△PS04-17菌株在一定浓度梯度盐碱培养基上的生长情况(上：△PS04-17下：PS04；自左向右浓度分别为25mmol/L、50mmol/L、75mmol/L、100mmol/L)；

图9为△PS04-17菌株在察氏液体培养基中的生长曲线；

图10为△PS04-17菌株在中高浓度含盐碱察氏液体培养基中的生长曲线；

图11为△PS04-17菌株在察氏液体培养基中生长情况；

图12为番茄耐盐碱盆栽生长效果图(自左向右第一盆为对照组，仅施用清水；第二盆为盐碱处理组，施用75mmol/L的盐碱溶液；第三盆为突变菌株组，加入△PS04-17菌液并施用清水；第四盆为盐碱+突变菌株组，加入△PS04-17菌液并施用75mmol/L的盐碱溶液)；

图13为番茄耐盐碱盆栽株高实验结果(A:对照组B:盐碱处理组C:突变菌株组D:盐碱+突变菌株组)。

具体实施方式

以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。

除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。

LB固体培养基：其成分为胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，氯化钠5g/L，琼脂粉17g/L。

改良查式液体培养基：其成分为硝酸钠20.0g/L，磷酸二氢钾0.7g/L，磷酸氢二钾0.3g/L，氯化钾0.5g/L，硫酸镁0.5g/L，硫酸亚铁0.01g/L，蔗糖30.0g/L，pH值7.0～7.2。

大豆炭疽病菌(Colletotrichum truncatum)、冬瓜枯萎病菌(Fusariumoxysporum f.sp.cucurmerimum)、香蕉枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.cubense)、甘蓝黑斑病菌(Ahernaria oleracea)、水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani AG1-IA)以上病菌由华南农业大学热带亚热带真菌研究室提供。

实施例1航天诱变突变体的筛选

1、试验方法

(1)供试菌株：

采用克里本类芽孢杆菌(Paenibacillus kribbensis)PS04，保藏编号：CGMCCNo.7996，保藏时间：2013年8月13日，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。供试菌株克里本类芽孢杆菌PS04经航天搭载诱变返地后，突变体库由本实验室-80℃保存，备用。

(2)航天搭载条件：

以克里本类芽孢杆菌PS04为出发菌株，于2020年3月在海南文昌发射基地搭载升空，经过常压下在轨飞行67个小时；大椭圆轨道，高度范围324～7970Km，近地点324Km，远地点7970Km，期间穿越范爱伦辐射带；倾角42.5；轨舱内搭载物位置的温度20℃±5℃等条件的诱变，于5月获得克里本类芽孢杆菌PS04的突变体库。

(3)突变体的筛选：

3.1航天诱变突变体的初筛

取100μL突变体库菌液涂布在LB平板上，在28℃下培养3d，待长出单菌落。用灭菌的牙签蘸取单菌落接种到新的LB平板，记录突变体菌株编号。以立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani AG1-IA)为指示菌，用对峙培养法逐个筛选比野生菌株抑菌效果更好的突变体菌株。将立枯丝核菌AG1-IA菌块(8mm直径)接种在PDA平板中心，在菌落四周垂直方向距离菌落2.5cm的位置用灭菌牙签分别接4个细菌菌落，分别是一个野生型和三个突变体。以只接种立枯丝核菌AG1-IA为对照。将平板倒置，在28℃中黑暗培养2天，挑取抑菌带大于野生型的突变体菌株作为候选的突变体菌株，用于下一步实验。

将初筛得到的突变体菌株分别接种于LB液体培养基，在28℃，200r/min的环境下，培养48h后获得发酵液，加入50％的甘油后低温保存菌种。

3.2航天诱变突变体的复筛

将初筛得到的30个突变体菌株分别接种于新的LB平板，在28℃的环境下，培养3d，接着用对峙实验进行复筛。将立枯丝核菌AG1-IA菌块(8mm直径)接种在PDA平板中心，在菌落四周垂直方向距离菌落2.5cm的位置用灭菌牙签分别接4个突变体菌落。以接种野生型菌落为对照。将平板倒置培养，在28℃中黑暗培养2天后测量抑菌圈半径。筛选抑菌率正向突变菌株，将每个菌株摇菌保存。

(4)航天诱变突变体耐盐碱能力评估：

以克里本类芽孢杆菌野生型菌株PS04为对照，将野生型和初筛得到的30个突变体菌株按编号顺序用灭菌牙签分别接种到含盐(10％NaCl)的平板上，在28℃的环境下培养48h，比较野生型与突变体菌落的生长情况。

2、试验结果

(1)高抑菌率突变菌株的复筛结果：

突变体菌株对立枯丝核菌AG1-IA的对峙结果如图1所示，初筛获得的突变体菌株抑菌效果较为稳定，野生型的抑菌圈半径为0.8㎝，突变体的抑菌圈半径为1.1㎝，突变体的抑菌效果显著好于野生型。不同突变株的抑菌半径结果如图2所示，其中有26个突变体抑菌圈半径较野生型显著增加(p<0.05)，其中抑菌圈半径大于1.2cm的有11个菌株，编号分别为2、4、5、6、7、14、17、21、25、28、30号突变体。

(2)突变体在含药平板上的生长情况：

克里本类芽孢杆菌野生型菌株PS04在含10％NaCl(pH9.0)的平板上均不能生长。突变体在10％NaCl(pH9.0)平板的生长情况为：突变体12、13、17、27号的生长能力最强，其余相对较弱。部分航天诱变菌株在含盐平板上的生长情况如表1所示，本研究发现突变体菌株17号(下称△PS04-17菌株)具有较好的耐盐能力，选择作为后续的研究对象。

表1部分航天诱变菌株在含药平板上的生长情况

注：“-”表示不生长；“+”表示生长能力

实验例2突变菌株△PS04-17的鉴定

1、试验方法

将实施例1中筛选出的克里本类芽孢杆菌△PS04-17置于改良查式液体培养基中，28℃摇床中培养48h后，使用OMEGA Bacterial DNA Kit提取DNA，并进行PCR扩增，PCR扩增引物为1492R(5'-TACCTTGTTACGACTT-3')和27F(5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3')。PCR反应体系为：PCR预混液25μL，引物各1μL，DNA 1μL，无菌水22μL。PCR反应程序为：94℃5min；94℃45s，65℃45s，72℃90s(35个循环)；72℃，10min。反应结束后PCR产物放置于4℃待电泳检测。

PCR产物用质量分数1％的琼脂糖凝胶进行电泳，在凝胶电泳成像仪中观察电泳条带，拍照记录。将PCR产物送生工生物公司测序，得到△PS04-17菌株的ITS序列。将获得的序列进行Blast，并提交在NCBI(www.ncbi.nlm.nih.gov)的核酸数据库中。

2、试验结果

经测序结果表明该突变菌株△PS04-17仍为克里本类芽孢杆菌(Paenibacilluskribbensis)。该序列已经提交NCBI获得△PS04-17的GenBank登录号：SUB10959124序列OM278265.1。克里本类芽孢杆菌(Paenibacillus kribbensis)突变菌株△PS04-17菌株已于2022年3月17日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏编号为：GDMCC NO:62233，保藏单位：广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址：广东省先烈中路100号大院59号楼5楼。

实验例3ΔPS04-17菌株的表型分析

1、菌株形态比较

LB平板上的生长形态：分别取100μL的PS04和△PS04-17菌液在LB平板上涂布，涂布完成后分别将平板倒置放于28℃培养箱中培养48h后观察。

察氏液体培养基中的生长形态：取100ml察氏液体培养基，用接种环在含有PS04、△PS04-17的平板上刮取菌体，置于28℃摇床中培养。

2、电镜下的菌体形态

单细胞收集样品，分别取上述察氏液体培养基里的菌液，离心收集后黄豆般大小菌体。使用1.5mL离心管，轻微并短暂离心培养液后收集细胞，加入新鲜缓冲液，低温5000rpm/min离心5min，弃上清。滴加新鲜磷酸缓冲液重悬15min，低温5000rpm/min，离心5min，弃上清，重复2遍。样品加入戊二醛固定液后重悬，4℃固定过夜后进行电镜扫描。观察野生型与突变体电镜下的菌体形态。

3、实验结果

克里本类芽孢杆菌PS04菌株与突变菌株△PS04-17在LB平板上的形态比较如图3所示，与△PS04-17相比PS04菌落表面覆盖有大量多糖，菌落粘性较大。在察氏液体培养基中的生长形态下，如图4所示，观察到PS04菌液偏白，菌液粘性较大；△PS04-17菌液偏黄，菌液粘性较PS04较小。在电镜下的菌体形态如图5所示，通过电镜观察PS04与△PS04-17的形态大小，可见△PS04-17菌体(1.04μm-3.33μm*0.29μm-0.64μm)较PS04菌体(2.59μm-6.72μm*0.34μm-0.50μm)短小。

实验例4△PS04-17的广谱抑菌效果

1、实验方法

将病原菌：大豆炭疽病菌(Colletotrichum truncatum)、冬瓜枯萎病菌(Fusariumoxysporum f.sp.cucurmerimum)、香蕉枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.cubense)、甘蓝黑斑病菌(Alternaria oleracea)、水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani AG1-IA)等菌块(8mm直径)接种在PDA平板中心，在菌落两侧垂直方向距离菌落2cm的位置用移液枪分别接种5μL菌液，分别接种一个野生型和一个突变体。以只接种病原菌为对照，将平板倒置，在28℃中暗培养3d后测量抑菌圈的半径。

2、实验结果

PS04与△PS04-17菌株对病原菌抑菌效果如图6所示，结果表明△PS04-17对大豆炭疽病菌、香蕉枯萎病菌、水稻纹枯病菌的抑菌效果明显好于△PS04，不同病原菌的抑菌圈半径如图7所示，△PS04-17对冬瓜枯萎病菌、甘蓝黑斑病菌的也具有较好的抑菌效果。

实验例6△PS04-17耐盐碱能力的测定

1、实验方法

含盐碱查氏培养基配制方法：加入3.5g液体察氏培养基粉末，加入50mL去离子水拿到灭菌锅灭菌。按照1:9:9:1摩尔比将NaCl、Na₂SO₄、NaHCO₃和Na₂CO₃混合并加入50mL去离子水溶解制成盐碱溶液。将盐碱溶液用0.45μm的细菌过滤器过滤到灭完菌的50mL察氏培养基中，定容至100mL。

菌株耐盐碱的浓度筛选：将野生型和突变体菌株涂板活化，挑取单菌落摇菌2d。取1mL菌液加到100mL改良察氏培养基，摇3d，获得菌液。测量菌液吸光度，加改良察氏培养基稀释至OD＝1.0。在每5ml改良察氏平板中按一定梯度加入不同浓度的盐碱，分别取50μL野生型和突变体菌株菌液(按上述的方法制备的)涂布在改良察氏平板上(设置25、50、75、100、125、150、200mmol/L 7个浓度)于28℃下进行培养，观察其生长情况。

菌株在125mmol/L和150mmol/L盐碱浓度下生长曲线的绘制：取1mL突变体发酵液滴入含125mmol/L和150mmol/L盐碱(1:9:9:1摩尔比将NaCl、Na₂SO₄、NaHCO₃和Na₂CO₃混合)改良察氏培养基100mL，按同样操作处理野生型。以不添加盐碱的培养基为空白对照在30℃，180r/min条件下每间隔48h用分光光度计测定600nm的OD值。按测定的OD值绘制生长曲线图。

2、实验结果

菌株在含盐碱的梯度平板上的生长情况如图8所示，△PS04-17菌液在不同浓度25mmol/L、50mmol/L、75mmol/L、100mmol/L的含盐碱察氏培养基中，在25mmol/L时，PS04与△PS04-17生长状况均较良好；50mmol/L时，PS04仅能生长出零星菌落，△PS04-17菌落较多；75mmol/L时，PS04完全不能生长，△PS04-17菌落数量有所减少，但仍能生长；100mmol/L时，PS04和△PS04-17菌不能生长。

菌株在含盐碱液体培养基中的生长曲线如图9所示，结果发现突变体菌株△PS04-17的OD值比野生型菌株增长更快，表明△PS04-17的生长活力比野生型强。菌株在中高盐碱的浓度下生长曲线如图10所示，在高浓度的野生型菌株的OD值呈一平线，说明PS04菌株在此中高盐碱的浓度下均不能很好生长。而△PS04-17菌株在125mmol/L及150mmol/L下呈指数增长，且150mmol/L条件下的生长趋势比125mmol/L还要好。菌株在含盐碱液体培养基中的生长8天状态如图11所示，其中，PS04的菌液偏白色较透明，粘性较小；而△PS04-17(菌液偏黄色较浑浊，粘性较较大。综上可知突变体△PS04-17的耐盐碱能力显著高于野生型菌株。

实验例7通过盆栽实验评估△PS04-17菌株对土壤盐碱胁迫的修复能力

1、实验方法

利用盆栽实验评估突变体菌株ΔPS04-17的发酵液对番茄的耐盐碱能力。根据前期实验结果，确定75mmol/L作为番茄盐害胁迫的浓度，将四株等高的番茄幼株分组移植，记录原始高度，进行分组实验。实验分为：A对照组(仅浇湿无菌水)、B处理组1(仅浇湿300mL75mmol/L盐碱溶液)、C处理组2(仅浇湿300mL稀释100倍的菌液)、D处理组3(浇湿300mL75mmol/L盐碱溶液和300mL稀释100倍的菌液)。每隔7天给各组植株浇适量的水，培养一个月时间后观察植物生长情况并记录数据。

2、实验结果

番茄盆栽盐碱实验结果如图12所示，经过△PS04-17菌液处理后的番茄植株长势明显优于盐碱处理下的植株；番茄盆栽盐碱处理后植株的株高变化如图13所示，结果表明A对照组的番茄正常生长，株高从40cm增长到52cm，而在B组75mmol/L盐碱处理下的番茄植株株高从40cm增加到45cm，在盐碱处理下番茄的生长受到抑制；在C组单独使用△PS04-17菌液对植进行处理后，番茄株高从40cm高增长到83cm，处理后明显促进番茄生长；而D组在75mmol/L盐碱胁迫下并采用△PS04-17菌液菌液处理后，番茄的株高从40cm增长到78cm，其生长是显著优于仅在盐碱胁迫下的B组和正常生长的A组，表明施用△PS04-17菌液可以缓解盐碱对植株生长的抑制作用并能促进植株生长，而单独施用△PS04-17菌液也可以促进番茄植株生长。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1. 一株克里本类芽孢杆菌（Paenibacillus kribbensis）航天诱变突变株△PS04-17，其特征在于，该菌株于2022年3月17日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为：GDMCC NO: 62233。

2.权利要求1所述航天诱变突变株△PS04-17在土壤修复或制备微生物土壤修复剂中的应用，其特征在于，所述土壤修复为改良土壤盐碱化。

3.一种改良土壤盐碱化的微生物土壤修复剂，其特征在于，含权利要求1所述突变株△PS04-17菌株和/或菌液。

4.根据权利要求3所述微生物土壤修复剂，其特征在于，所述菌液为发酵液。

5. 根据权利要求4所述微生物土壤修复剂，其特征在于，所述发酵液的发酵条件为：以1～10%的接种量将△PS04-17菌液接种于发酵培养基中，于25～30℃，150～200 rpm，发酵3～4天。

6.一种改良土壤盐碱化的方法，其特征在于，采用权利要求1所述突变株△PS04-17或权利要求3～5任一所述微生物土壤修复剂，进行稀释后，用稀释液进行处理土壤。

7.权利要求1所航天诱变突变株△PS04-17在促进植物生长或在制备植物促生剂中的应用，其特征在于，所述植物为番茄。

8.权利要求1所述航天诱变突变株△PS04-17在盐碱胁迫下促进植物生长或在制备植物耐盐碱促生剂中的应用，其特征在于，所述植物为番茄。

9. 权利要求1所述航天诱变突变株△PS04-17在非疾病诊断治疗为目的抑制病原菌或制备病原菌杀菌剂中的应用，其特征在于，所述病原菌为Colletotrichum truncatum、Fusariumoxysporum f. sp. cucurmerimum、Fusarium oxysporum f.sp. cubense、Alternaria oleracea、Rhizoctonia solani AG1-IA中的一种或多种。

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