CN114425074A - 一种抗病毒及增强免疫力效果的天然复合口服液及制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种抗病毒及增强免疫力效果的天然复合口服液及制备方法,其包括:大蒜素3‑5份,白菜提取物10‑15份,蒲公英提取物10‑20份,桔梗提取物3‑5份,金银花提取物10‑12份,山茱萸3‑5份,桑葚8‑10份,牛蒡子提取物0.5‑2.5份,鱼腥草提取物0.5‑1份,黄芪多糖3‑5份,姜黄提取物1‑2份,灵芝粉1‑2份,甘草提取物5‑10份,板蓝根5‑8份,葡萄糖3‑5份。本发明其采用天然植物提取物复配而成,可在杀灭各种病毒病原体的同时显著增强人体免疫力,且同时没有毒副作用。
Description
技术领域
本发明涉及生物制药领域,具体为一种抗病毒及增强免疫力效果的天然复合口服液及制备方法。
背景技术
近年来,各种病毒性疾病的病发率越来越高,如禽流感、甲型流感等,其严重危害人体健康。
目前临床上采用的抗病毒药物很多(尤其是西药),而且也都起到了一定的效果,但起到效果的同时具有较大的毒副作用。但众所周知,健康的人体对细菌和病毒都有天然的抵抗力,只有在人体器官出现功能失调的情况下,细菌或病毒才会轻易入侵而导致发病。因此,西医针对的仅仅是病原微生物本身,其不注重对机体本身免疫力的调节,仅以通过使用生物药或化学药杀灭该次感染的病原体即认为本次治疗成功,但如上所述,只要机体的免疫力仍然低下,就会不断有病原体侵袭。因此采用西药防治病毒病的方案只能是治标不治本。
因此,提供一种同时具有抗病毒及增强免疫力效果的生物制剂,以在杀灭病原微生物的前提下巩固机体体质,提高机体免疫力,以防止病毒再次侵袭是亟待解决的问题。
发明内容
针对现有技术的不足,本发明提供了一种抗病毒及增强免疫力效果的天然复合口服液及制备方法,其采用天然植物提取物复配而成,可在杀灭各种病毒病原体的同时显著增强人体免疫力,且同时没有毒副作用。
为解决上述技术问题,本发明提供的技术方案如下:
提供了一种抗病毒及增强免疫力效果的天然复合口服液,包括以下重量份的原料:大蒜素3-5份,白菜提取物10-15份,蒲公英提取物10-20份,桔梗提取物3-5份,金银花提取物10-12份,山茱萸3-5份,桑葚8-10份,牛蒡子提取物0.5-2.5份,鱼腥草提取物0.5-1份,黄芪多糖3-5份,姜黄提取物1-2份,灵芝粉1-2份,甘草提取物5-10份,板蓝根5-8份,葡萄糖3-5份。
还提供一种抗病毒及增强免疫力效果的天然复合口服液的制备方法,其包括:
S100、制备大蒜素、白菜提取物、蒲公英提取物、桔梗提取物、金银花提取物、牛蒡子提取物、鱼腥草提取物、姜黄提取物、甘草提取物以及黄芪多糖;
S200、按照权利要求1中的组分用量称取所述重量份的山茱萸、桑葚、板蓝根,并将三者全部粉碎过50目筛;再加入山茱萸、桑葚、板蓝根总重量2-3倍的水,然后加热至煮沸,煮沸状态持续1-2h后过滤,以获得滤液以及滤渣;
S300、于70-80℃条件下对所述滤渣进行干燥,且在干燥后的滤渣中加入其重量2-3 倍的体积分数为75%的乙醇,浸泡1-2h后加热至65℃-75℃,浸提1-2h;然后在8-10℃条件下静置24h,通过过滤分离获得粗提液和滤渣;
S400、在所述粗提液中加入如权利要求1所述组分用量的大蒜素、白菜提取物、蒲公英提取物、桔梗提取物、金银花提取物、牛蒡子提取物、鱼腥草提取物、姜黄提取物以及甘草提取物、黄芪多糖、灵芝粉以及葡萄糖,搅拌均匀后再将原料混合物置于减压浓缩罐中,于50-60℃条件下进行真空减压浓缩,以获得80℃时相对密度为1.05-1.10的浓缩液;
S500、在所述浓缩液中加入其重量2-2.5倍的蒸馏水,搅拌均匀后即得抗病毒及增强免疫力效果的天然复合口服液。
优选的,所述大蒜素的制备方法包括:
S1、将大蒜、洋葱去皮、洗净,并粉碎成粒径为80-100目,得原料浆液;
S2、在所述原料浆液中加入其重量3-4倍的、质量分数为8%的白砂糖溶液,以及接种所述原料浆液重量3-4%的活性干酵母,置于25±2℃的环境下恒温发酵24-36h,以得到发酵液;
S3、将发酵液的pH值调节至7.0-8.0,按所述发酵液重量的2.5-3%加入胰蛋白酶,充分搅拌,且搅拌的同时升温至50-52℃,保温25-30min后得到第一酶解液;
待第一酶解液降至20-22℃后,再调整其pH值至3.0-4.0,按第一酶解液重量的1-2%加入果胶酶,充分搅拌,且搅拌的同时升温至40-45℃,保温25-30min后得到第二酶解液;
待第二酶解液降至20-22℃后,再调整其pH值至4.0-5.0,按第二酶解液重量的1.5-2%加入纤维素酶,充分搅拌,且搅拌的同时升温至52-55℃,保温20-25min后得到第三酶解液;
S4、在所述第三酶解液中加入其重量5-6倍的无水乙醇进行超声提取,且超声功率为 110KW,超声提取温度为22-25℃,超声提取时间为25-35min;
S5、对完成超声提取的第三酶解液进行超临界CO2提纯,最后获得大蒜素粗品;
S6、在所述大蒜素粗品中加入其重量2-3倍的去离子水,搅拌均匀后过滤,所得滤液通过非极性大孔树脂饱和吸附,再用体积比为90%的甲醇水溶液洗脱,以得到大蒜素洗脱液;
以及S7、所述大蒜素洗脱液经过纳滤膜浓缩后得到浓缩液,再使用旋转蒸发仪对所述浓缩液进行干燥,以得到大蒜素成品。
优选的,所述步骤S1中,在粉碎前还包括:将去皮、洗净后的洋葱和大蒜浸入前处理液中浸泡12-18h;所述前处理液由质量分数3-4%的柠檬酸溶液和质量分数1-1.5%的乙酸溶液组成,且按体积比计,质量分数3-4%的柠檬酸溶液:质量分数1-1.5%的乙酸溶液=(1-2.5):1。
优选的,所述步骤S1中,按重量计,大蒜:洋葱=(3-4):1。
优选的,所述洗脱剂用量为柱体积的4.5-5倍量,洗脱速度为1.2-1.5BV/h。
优选的,所述白菜提取物的制备方法包括:
S1、取新鲜白菜,加入白菜重量2.5-3.5倍的去离子水,并在25℃下浸泡3-4h,取出再用去离子水冲洗2-3遍;再将冲洗后的白菜打碎磨浆,得到白菜浆液;
S2、在所述白菜浆液中加入其重量2.5-3.5%的果胶酶,于35-38℃下处理12-18h,其中每30min搅拌一次,处理完成后保温25-30min后得到第一酶解液;
待第一酶解液降至20-22℃后,再调整其pH值至3.0-4.5,按第一酶解液重量的2.5-3%加入果胶酶,于35-45℃下处理8-10h,其中每30min搅拌一次,处理完成后保温2.5-3h,以得到第二酶解液;
S3、在所述第二酶解液中按照第二酶解液重量的2-4%加入活性干酵母以及按照第二酶解液重量的0.0015-0.002%加入***钠,发酵36-48h,获得初次发酵液;
S4、在所述初次发酵液中按照初次发酵液重量的1.5-2%加入冰醋酸以及按照初次发酵液重量的0.001-0.002%加入***钠,发酵36-48h,获得二次发酵液;
S5、将所述二次发酵依次经过分离孔径为50-100nm的陶瓷膜、截留分子量为2000-5000Da的超滤膜以及截留分子量为300-500Da的纳滤膜,最后得到白菜粗提物;
S6、按照白菜粗提物体积的1/10加入0.4M醋酸钡,搅拌均匀静置30min,然后4000r/min离心10min后,收集上清液,即得到含有吲哚-3-甲醇的白菜提取物。
优选的,所述黄芪多糖的制备方法包括:
黄芪饮片干燥,粉碎后过40目筛,按1:10固液比加入去离子水,50℃搅拌浸泡3h。
同时进行辐照处理;
对上述辐照后的黄芪浆液分别按0.2mg/mL加入果胶酶、纤维素酶于30℃、300r/min 条件下进行酶解2h,保持30℃将酶解液加入超声逆流循环提取;所述超声逆流循环提取条件为400W,30min,循环3次;
对上述经超声逆流循环提取的酶解液进行减压抽滤,滤液中加入3倍体积的75%乙醇静置6h,随后以4000r/min、15min离心沉淀,以获得黄芪多糖提取物;
向黄芪多糖提取物中加入2倍体积的40%乙醇,150r/min磁力搅拌1h后,离心获得沉淀;随后再次向沉淀中加入5倍体积的60%乙醇,150r/min磁力搅拌1h减压抽滤,沉淀挥干后即获得纯度较高的黄芪多糖。
优选的,所述蒲公英提取物、桔梗提取物、金银花提取物、牛蒡子提取物、鱼腥草提取物、姜黄提取物以及甘草提取物的制备方法相同,均包括:
S1、在原料中加入所述原料重量3-4倍的去离子水,然后加热至煮沸,煮沸状态持续 1-2h后过滤,以获得第一滤液以及第一滤渣;
S2、对所述第一滤渣进行干燥,干燥后的第一滤渣中加入其重量2-3倍的体积分数为90%的乙醇,浸泡1-2h后加热至50℃-60℃,浸提1.5-2h,浸提过程中每30min搅拌一次,搅拌速率为100-150转/min;然后在6-9℃条件下静置24h,通过过滤分离获得第二滤液和第二滤渣;
S3、将第二滤渣置于发酵罐中,加入所述第二滤渣重量2-3倍的去离子水以及所述第二滤渣重量0.15-0.35倍的纤维素酶和0.1-0.2倍的果胶酶,调节pH为6.5-7,且调节至30-40℃进行发酵,发酵12-24h后过滤分离出第三滤液;
S4、合并所述第一滤液、第二滤液以及第三滤液,以得到粗提液;将所述粗提液以3-5BV/h的流速流过大孔吸附树脂;流经大孔吸附树脂排出的粗提液以2-4BV/h的流速依次流经阴、阳离子树脂柱;流经阴、阳离子树脂柱排出的粗提液以35-45mL/min的流速流经活性炭移动床,以得到精提液,再对精提液进行浓缩干燥,粉碎后得对应的提取物成品。
优选的,所述大孔吸附树脂为D-101型大孔树脂。
与现有技术相比,本发明中含有丰富的天然植物抗病毒杀菌组分,如大蒜素、白菜提取物中的吲哚-3-甲醇(I3C)、蒲公英提取物、金银花提取物、桔梗提取物、鱼腥草提取物、姜黄提取物、牛蒡子提取物、板蓝根等,同时搭配山茱萸、桑葚、黄芪多糖、灵芝调节机体肝肾功能,辅助清除机体内积累的毒素,以此提高人体免疫力。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
实施例1:
本实施例提供了一种抗病毒及增强免疫力效果的天然复合口服液,其包括以下重量份的原料:大蒜素3份,白菜提取物11份,蒲公英提取物10份,桔梗提取物3份,金银花提取物10份,山茱萸4份,桑葚8份,牛蒡子提取物0.5份,鱼腥草提取物0.5份,黄芪多糖4份,姜黄提取物1份,灵芝粉1份,甘草提取物6份,板蓝根5份,葡萄糖3份。
实施例2:
本实施例与实施例1的不同之处仅在于,本实施例中的抗病毒及增强免疫力效果的天然复合口服液由以下重量份的原料组成:大蒜素4份,白菜提取物15份,蒲公英提取物20份,桔梗提取物5份,金银花提取物12份,山茱萸5份,桑葚9份,牛蒡子提取物2.5 份,鱼腥草提取物1份,黄芪多糖5份,姜黄提取物2份,灵芝粉2份,甘草提取物9份,板蓝根8份,葡萄糖5份,蒸馏水420份。
实施例3:
本实施例与实施例1的不同之处仅在于,本实施例中的抗病毒及增强免疫力效果的天然复合口服液由以下重量份的原料组成:大蒜素4份,白菜提取物13份,蒲公英提取物15份,桔梗提取物4份,金银花提取物11份,山茱萸4份,桑葚9份,牛蒡子提取物1.5 份,鱼腥草提取物0.8份,黄芪多糖4份,姜黄提取物1.5份,灵芝粉1.5份,甘草提取物 7份,板蓝根6份,葡萄糖4份,蒸馏水410份。
实施例4:
本实施例提供了一种如实施例1至3任一项所述抗病毒及增强免疫力效果的天然复合口服液的制备方法,其包括如下步骤:
S100、制备如实施例1至3任一项所述的大蒜素、白菜提取物、蒲公英提取物、桔梗提取物、金银花提取物、牛蒡子提取物、鱼腥草提取物、姜黄提取物以及甘草提取物;
S200、按照实施例1至3任一项所述的组分用量称取所述重量份的山茱萸、桑葚、板蓝根,并将三者全部粉碎过50目筛;再加入山茱萸、桑葚、板蓝根总重量2倍的水,然后加热至煮沸,煮沸状态持续1h后过滤,以获得滤液以及滤渣;
S300、于70℃条件下对所述滤渣进行干燥,且在干燥后的滤渣中加入其重量2倍的体积分数为75%的乙醇,浸泡1h后加热至65℃,浸提1h;然后在8℃条件下静置24h,通过过滤分离获得粗提液和滤渣;
S400、在所述粗提液中加入实施例1至3任一项所述组分用量的大蒜素、白菜提取物、蒲公英提取物、桔梗提取物、金银花提取物、牛蒡子提取物、鱼腥草提取物、姜黄提取物以及甘草提取物、黄芪多糖、灵芝粉、葡萄糖,搅拌均匀后再将原料混合物置于减压浓缩罐中,于50℃条件下进行真空减压浓缩,以获得80℃时相对密度为1.05-1.10的浓缩液;
S500、在所述浓缩液中加入其重量2倍的蒸馏水,搅拌均匀后即得抗病毒及增强免疫力效果的天然复合口服液。
进一步的,所述大蒜素的制备方法包括:
S1、将大蒜、洋葱去皮、洗净,且按重量计,大蒜:洋葱=3:1;再将去皮、洗净后的大蒜、洋葱浸入前处理液中浸泡12h;所述前处理液由质量分数3%的柠檬酸溶液和质量分数1%的乙酸溶液组成,且按体积比计,质量分数3%的柠檬酸溶液:质量分数1%的乙酸溶液=1:1;干燥后再粉碎成粒径为80-100目,得原料浆液;由此可通过前处理液消除大蒜、洋葱在处理过程中产生的臭味,避免对环境造成污染;
S2、在所述原料浆液中刚加入其重量3倍的、质量分数为8%的白砂糖溶液,以及接种所述原料浆液重量3%的活性干酵母,置于25±2℃的环境下恒温发酵24h,以得到发酵液;
S3、将发酵液的pH值调节至7.0,按所述发酵液重量的2.5%加入胰蛋白酶,充分搅拌,且搅拌的同时升温至50℃,保温25min后得到第一酶解液;
待第一酶解液降至20℃后,再调整其pH值至3.0,按第一酶解液重量的1%加入果胶酶,充分搅拌,且搅拌的同时升温至40℃,保温25min后得到第二酶解液;
待第二酶解液降至20℃后,再调整其pH值至4.0,按第二酶解液重量的1.5%加入纤维素酶,充分搅拌,且搅拌的同时升温至52℃,保温20min后得到第三酶解液;
S4、在所述第三酶解液中加入其重量5倍的无水乙醇进行超声提取,且超声功率为110KW,超声提取温度为22℃,超声提取时间为25min;
S5、对完成超声提取的第三酶解液进行超临界CO2提纯,最后获得大蒜素粗品;
S6、在所述大蒜素粗品中加入其重量2倍的去离子水,搅拌均匀后过滤,所得滤液通过非极性大孔树脂饱和吸附,再用体积比为90%的甲醇水溶液洗脱,以得到大蒜素洗脱液;其中,所述非极性大孔树脂为D4020非极性大孔树脂,且所述洗脱剂用量为柱体积的4.5倍量,洗脱速度为1.2BV/h;
以及S7、所述大蒜素洗脱液经过纳滤膜浓缩后得到浓缩液,再使用旋转蒸发仪对所述浓缩液进行干燥,以得到大蒜素成品。
进一步的,所述白菜提取物的制备方法包括:
S1、取新鲜白菜,加入白菜重量2.5倍的去离子水,并在25℃下浸泡3h,取出再用去离子水冲洗2-3遍;再将冲洗后的白菜打碎磨浆,得到白菜浆液;
S2、在所述白菜浆液中加入其重量2.5%的果胶酶,于35℃下处理12h,其中每30min 搅拌一次,处理完成后保温25min后得到第一酶解液;
待第一酶解液降至20℃后,再调整其pH值至3.0,按第一酶解液重量的2.5%加入果胶酶,于35℃下处理8h,其中每30min搅拌一次,处理完成后保温2.5h,以得到第二酶解液;
S3、在所述第二酶解液中按照第二酶解液重量的2%加入活性干酵母以及按照第二酶解液重量的0.0015%加入***钠,发酵36h,获得初次发酵液;
S4、在所述初次发酵液中按照初次发酵液重量的1.5%加入冰醋酸以及按照初次发酵液重量的0.001%加入***钠,发酵36h,获得二次发酵液;
S5、将所述二次发酵依次经过分离孔径为50-100nm的陶瓷膜、截留分子量为2000-5000Da的超滤膜以及截留分子量为300-500Da的纳滤膜,最后得到白菜粗提物;
S6、按照白菜粗提物体积的1/10加入0.4M醋酸钡,搅拌均匀静置30min以沉降提取液中的部分蛋白质和悬浮杂质。然后4000r/min离心10min后,收集上清液,即得到含有吲哚-3- 甲醇的白菜提取物。
进一步的,所述黄芪多糖的制备方法包括:
S1、黄芪饮片干燥,粉碎后过40目筛,按1:10固液比加入去离子水,50℃搅拌浸泡3h。同时采用GJ-2工业电子加速器进行辐照处理,吸收剂量为15kGy;
S2、对上述辐照后的黄芪浆液分别按0.2mg/mL加入果胶酶、纤维素酶于30℃、300r/min 条件下进行酶解2h,保持30℃将酶解液加入超声逆流循环提取;所述超声逆流循环提取条件为400W,30min,循环3次;
S3、对上述经超声逆流循环提取的酶解液进行减压抽滤,滤液中加入3倍体积的75%乙醇静置6h,随后以4000r/min、15min离心沉淀,以获得黄芪多糖提取物;
S4、向黄芪多糖提取物中加入2倍体积的40%乙醇,150r/min磁力搅拌1h后,离心获得沉淀;随后再次向沉淀中加入5倍体积的60%乙醇,150r/min磁力搅拌1h减压抽滤,沉淀挥干后即获得纯度较高的黄芪多糖。
进一步的,所述蒲公英提取物、桔梗提取物、金银花提取物、牛蒡子提取物、鱼腥草提取物、姜黄提取物以及甘草提取物的制备方法相同,均包括:
S1、在原料(即蒲公英/桔梗/金银花/牛蒡子/鱼腥草/姜黄/甘草)中加入所述原料重量3 倍的去离子水,然后加热至煮沸,煮沸状态持续1-2h后过滤,以获得第一滤液以及第一滤渣;
S2、对所述第一滤渣进行干燥,干燥后的第一滤渣中加入其重量2倍的体积分数为90%的乙醇,浸泡1h后加热至50℃,浸提1.5h,浸提过程中每30min搅拌一次,搅拌速率为100转/min;然后在6-9℃条件下静置24h,通过过滤分离获得第二滤液和第二滤渣;
S3、将第二滤渣置于发酵罐中,加入所述第二滤渣重量2倍的去离子水以及所述第二滤渣重量0.15倍的纤维素酶和0.1倍的果胶酶,调节pH为6.5,且调节至30℃进行发酵,发酵12h后过滤分离出第三滤液;
S4、合并所述第一滤液、第二滤液以及第三滤液,以得到粗提液;将所述粗提液以3BV/h 的流速流过大孔吸附树脂,本实施例中的大孔吸附树脂为D-101型大孔树脂;流经大孔吸附树脂排出的粗提液以2BV/h的流速依次流经阴、阳离子树脂柱;流经阴、阳离子树脂柱排出的粗提液以35mL/min的流速流经活性炭移动床,以得到精提液,再对精提液进行浓缩干燥,粉碎后得对应的提取物成品。
实施例5:
本实施例与实施例4的不同之处仅在于,本实施例中所述抗病毒及增强免疫力效果的天然复合口服液的制备方法包括:
S100、制备如实施例1至3任一项所述的大蒜素、白菜提取物、蒲公英提取物、桔梗提取物、金银花提取物、牛蒡子提取物、鱼腥草提取物、姜黄提取物以及甘草提取物;
S200、按照实施例1至3任一项所述的组分用量称取所述重量份的山茱萸、桑葚、板蓝根,并将三者全部粉碎过50目筛;再加入山茱萸、桑葚、板蓝根总重量3倍的水,然后加热至煮沸,煮沸状态持续1h后过滤,以获得滤液以及滤渣;
S300、于80℃条件下对所述滤渣进行干燥,且在干燥后的滤渣中加入其重量3倍的体积分数为75%的乙醇,浸泡2h后加热至75℃,浸提2h;然后在10℃条件下静置24h,通过过滤分离获得粗提液和滤渣;
S400、在所述粗提液中加入实施例1至3任一项所述组分用量的大蒜素、白菜提取物、蒲公英提取物、桔梗提取物、金银花提取物、牛蒡子提取物、鱼腥草提取物、姜黄提取物以及甘草提取物、黄芪多糖、灵芝粉、葡萄糖,搅拌均匀后再将原料混合物置于减压浓缩罐中,于60℃条件下进行真空减压浓缩,以获得80℃时相对密度为1.05-1.10的浓缩液;优选的,所述黄芪多糖在使用前经过包埋处理,以增加其稳定性和活性;
S500、在所述浓缩液中加入其重量2.5倍的蒸馏水,搅拌均匀后即得抗病毒及增强免疫力效果的天然复合口服液。
进一步的,所述大蒜素的制备方法包括:
S1、将大蒜、洋葱去皮、洗净,且按重量计,大蒜:洋葱=4:1;再将去皮、洗净后的大蒜、洋葱浸入前处理液中浸泡12h;所述前处理液由质量分数4%的柠檬酸溶液和质量分数1.5%的乙酸溶液组成,且按体积比计,质量分数4%的柠檬酸溶液:质量分数1.5%的乙酸溶液=2.5:1;干燥后再粉碎成粒径为80-100目,得原料浆液;由此可通过前处理液消除大蒜、洋葱在处理过程中产生的臭味,避免对环境造成污染;
S2、在所述原料浆液中刚加入其重量4倍的、质量分数为8%的白砂糖溶液,以及接种所述原料浆液重量4%的活性干酵母,置于25±2℃的环境下恒温发酵36h,以得到发酵液;
S3、将发酵液的pH值调节至8.0,按所述发酵液重量的3%加入胰蛋白酶,充分搅拌,且搅拌的同时升温至52℃,保温30min后得到第一酶解液;
待第一酶解液降至22℃后,再调整其pH值至4.0,按第一酶解液重量的2%加入果胶酶,充分搅拌,且搅拌的同时升温至45℃,保温30min后得到第二酶解液;
待第二酶解液降至22℃后,再调整其pH值至5.0,按第二酶解液重量的2%加入纤维素酶,充分搅拌,且搅拌的同时升温至55℃,保温25min后得到第三酶解液;
S4、在所述第三酶解液中加入其重量6倍的无水乙醇进行超声提取,且超声功率为110KW,超声提取温度为25℃,超声提取时间为35min;
S5、对完成超声提取的第三酶解液进行超临界CO2提纯,最后获得大蒜素粗品;
S6、在所述大蒜素粗品中加入其重量3倍的去离子水,搅拌均匀后过滤,所得滤液通过非极性大孔树脂饱和吸附,再用体积比为90%的甲醇水溶液洗脱,以得到大蒜素洗脱液;其中,所述非极性大孔树脂为D4020非极性大孔树脂,且所述洗脱剂用量为柱体积的5倍量,洗脱速度为1.5BV/h;
以及S7、所述大蒜素洗脱液经过纳滤膜浓缩后得到浓缩液,再使用旋转蒸发仪对所述浓缩液进行干燥,以得到大蒜素成品。
进一步的,所述白菜提取物的制备方法包括:
S1、取新鲜白菜,加入白菜重量3.5倍的去离子水,并在25℃下浸泡4h,取出再用去离子水冲洗2-3遍;再将冲洗后的白菜打碎磨浆,得到白菜浆液;
S2、在所述白菜浆液中加入其重量3.5%的果胶酶,于38℃下处理18h,其中每30min 搅拌一次,处理完成后保温30min后得到第一酶解液;
待第一酶解液降至22℃后,再调整其pH值至4.5,按第一酶解液重量的3%加入果胶酶,于45℃下处理10h,其中每30min搅拌一次,处理完成后保温3h,以得到第二酶解液;
S3、在所述第二酶解液中按照第二酶解液重量的4%加入活性干酵母以及按照第二酶解液重量的0.002%加入***钠,发酵48h,获得初次发酵液;
S4、在所述初次发酵液中按照初次发酵液重量的2%加入冰醋酸以及按照初次发酵液重量的0.002%加入***钠,发酵48h,获得二次发酵液;
S5、将所述二次发酵依次经过分离孔径为50-100nm的陶瓷膜、截留分子量为2000-5000Da的超滤膜以及截留分子量为300-500Da的纳滤膜,最后得到白菜粗提物;
S6、按照白菜粗提物体积的1/9加入0.4M醋酸钡,搅拌均匀静置25min以沉降提取液中的部分蛋白质和悬浮杂质。然后4000r/min离心10min后,收集上清液,即得到含有吲哚-3- 甲醇的白菜提取物。
进一步的,所述黄芪多糖的制备方法包括:
S1、黄芪饮片干燥,粉碎后过40目筛,按1:9固液比加入去离子水,50℃搅拌浸泡3h。同时采用GJ-2工业电子加速器进行辐照处理,吸收剂量为15kGy;
S2、对上述辐照后的黄芪浆液分别按0.3mg/mL加入果胶酶、纤维素酶于30℃、300r/min 条件下进行酶解1.5h,保持30℃将酶解液加入超声逆流循环提取;所述超声逆流循环提取条件为400W,30min,循环3次;
S3、对上述经超声逆流循环提取的酶解液进行减压抽滤,滤液中加入4倍体积的75%乙醇静置5h,随后以4000r/min、15min离心沉淀,以获得黄芪多糖提取物;
S4、向黄芪多糖提取物中加入2倍体积的40%乙醇,150r/min磁力搅拌1h后,离心获得沉淀;随后再次向沉淀中加入5倍体积的60%乙醇,150r/min磁力搅拌1h减压抽滤,沉淀挥干后即获得纯度较高的黄芪多糖。
进一步的,所述蒲公英提取物、桔梗提取物、金银花提取物、牛蒡子提取物、鱼腥草提取物、姜黄提取物以及甘草提取物的制备方法相同,均包括:
S1、在原料中加入所述原料重量4倍的去离子水,然后加热至煮沸,煮沸状态持续1-2h 后过滤,以获得第一滤液以及第一滤渣;
S2、对所述第一滤渣进行干燥,干燥后的第一滤渣中加入其重量3倍的体积分数为90%的乙醇,浸泡2h后加热至60℃,浸提2h,浸提过程中每30min搅拌一次,搅拌速率为150转/min;然后在6-9℃条件下静置24h,通过过滤分离获得第二滤液和第二滤渣;
S3、将第二滤渣置于发酵罐中,加入所述第二滤渣重量3倍的去离子水以及所述第二滤渣重量0.35倍的纤维素酶和0.2倍的果胶酶,调节pH为7,且调节至40℃进行发酵,发酵24h后过滤分离出第三滤液;
S4、合并所述第一滤液、第二滤液以及第三滤液,以得到粗提液;将所述粗提液以5BV/h 的流速流过大孔吸附树脂,本实施例中的大孔吸附树脂为D-101型大孔树脂;流经大孔吸附树脂排出的粗提液以4BV/h的流速依次流经阴、阳离子树脂柱;流经阴、阳离子树脂柱排出的粗提液以45mL/min的流速流经活性炭移动床,以得到精提液,再对精提液进行浓缩干燥,粉碎后得对应的提取物成品。
实施例6:
本实施例与实施例4的不同之处仅在于,本实施例中所述抗病毒及增强免疫力效果的天然复合口服液的制备方法包括:
S100、制备如实施例1至3任一项所述的大蒜素、白菜提取物、蒲公英提取物、桔梗提取物、金银花提取物、牛蒡子提取物、鱼腥草提取物、姜黄提取物以及甘草提取物;
S200、按照实施例1至3任一项所述的组分用量称取所述重量份的山茱萸、桑葚、板蓝根,并将三者全部粉碎过50目筛;再加入山茱萸、桑葚、板蓝根总重量2.5倍的水,然后加热至煮沸,煮沸状态持续1.5后过滤,以获得滤液以及滤渣;
S300、于75℃条件下对所述滤渣进行干燥,且在干燥后的滤渣中加入其重量2.5倍的体积分数为75%的乙醇,浸泡2h后加热至70℃,浸提1.5h;然后在10℃条件下静置24h,通过过滤分离获得粗提液和滤渣;
S400、在所述粗提液中加入实施例1至3任一项所述组分用量的大蒜素、白菜提取物、蒲公英提取物、桔梗提取物、金银花提取物、牛蒡子提取物、鱼腥草提取物、姜黄提取物以及甘草提取物、黄芪多糖、灵芝粉、葡萄糖,搅拌均匀后再将原料混合物置于减压浓缩罐中,于55℃条件下进行真空减压浓缩,以获得80℃时相对密度为1.05-1.10的浓缩液;优选的,所述黄芪多糖在使用前经过包埋处理,以增加其稳定性和活性;
S500、在所述浓缩液中加入其重量2.2倍的蒸馏水,搅拌均匀后即得抗病毒及增强免疫力效果的天然复合口服液。
进一步的,所述大蒜素的制备方法包括:
S1、将大蒜、洋葱去皮、洗净,且按重量计,大蒜:洋葱=3.5:1;再将去皮、洗净后的大蒜、洋葱浸入前处理液中浸泡15h;所述前处理液由质量分数3.5%的柠檬酸溶液和质量分数1.7%的乙酸溶液组成,且按体积比计,质量分数3.5%的柠檬酸溶液:质量分数 1.7%的乙酸溶液=2.2:1;干燥后再粉碎成粒径为80-100目,得原料浆液;由此可通过前处理液消除大蒜、洋葱在处理过程中产生的臭味,避免对环境造成污染;
S2、在所述原料浆液中刚加入其重量3.5倍的、质量分数为8%的白砂糖溶液,以及接种所述原料浆液重量3.5%的活性干酵母,置于25±2℃的环境下恒温发酵30h,以得到发酵液;
S3、将发酵液的pH值调节至7.5,按所述发酵液重量的2.8%加入胰蛋白酶,充分搅拌,且搅拌的同时升温至51℃,保温28min后得到第一酶解液;
待第一酶解液降至21℃后,再调整其pH值至3.5,按第一酶解液重量的1.5%加入果胶酶,充分搅拌,且搅拌的同时升温至42℃,保温28min后得到第二酶解液;
待第二酶解液降至21℃后,再调整其pH值至4.5,按第二酶解液重量的1.8%加入纤维素酶,充分搅拌,且搅拌的同时升温至53℃,保温22min后得到第三酶解液;
S4、在所述第三酶解液中加入其重量5.5倍的无水乙醇进行超声提取,且超声功率为 110KW,超声提取温度为23℃,超声提取时间为30min;
S5、对完成超声提取的第三酶解液进行超临界CO2提纯,最后获得大蒜素粗品;
S6、在所述大蒜素粗品中加入其重量2.5倍的去离子水,搅拌均匀后过滤,所得滤液通过非极性大孔树脂饱和吸附,再用体积比为90%的甲醇水溶液洗脱,以得到大蒜素洗脱液;其中,所述非极性大孔树脂为D4020非极性大孔树脂,且所述洗脱剂用量为柱体积的5倍量,洗脱速度为1.3BV/h;
以及S7、所述大蒜素洗脱液经过纳滤膜浓缩后得到浓缩液,再使用旋转蒸发仪对所述浓缩液进行干燥,以得到大蒜素成品。
进一步的,所述白菜提取物的制备方法包括:
S1、取新鲜白菜,加入白菜重量3.0倍的去离子水,并在25℃下浸泡3.5h,取出再用去离子水冲洗2-3遍;再将冲洗后的白菜打碎磨浆,得到白菜浆液;
S2、在所述白菜浆液中加入其重量3.0%的果胶酶,于36℃下处理18h,其中每30min 搅拌一次,处理完成后保温28min后得到第一酶解液;
待第一酶解液降至21℃后,再调整其pH值至3.7,按第一酶解液重量的2.7%加入果胶酶,于30℃下处理9h,其中每30min搅拌一次,处理完成后保温2.5h,以得到第二酶解液;
S3、在所述第二酶解液中按照第二酶解液重量的3%加入活性干酵母以及按照第二酶解液重量的0.0017%加入***钠,发酵40h,获得初次发酵液;
S4、在所述初次发酵液中按照初次发酵液重量的1.7%加入冰醋酸以及按照初次发酵液重量的0.0015%加入***钠,发酵42h,获得二次发酵液;
S5、将所述二次发酵依次经过分离孔径为50-100nm的陶瓷膜、截留分子量为2000-5000Da的超滤膜以及截留分子量为300-500Da的纳滤膜,最后得到白菜粗提物;
S6、按照白菜粗提物体积的1/8加入0.4M醋酸钡,搅拌均匀静置20min以沉降提取液中的部分蛋白质和悬浮杂质。然后4000r/min离心10min后,收集上清液,即得到含有吲哚-3- 甲醇的白菜提取物。
进一步的,所述黄芪多糖的制备方法包括:
S1、黄芪饮片干燥,粉碎后过40目筛,按1:8固液比加入去离子水,50℃搅拌浸泡3h。同时采用GJ-2工业电子加速器进行辐照处理,吸收剂量为15kGy;
S2、对上述辐照后的黄芪浆液分别按0.4mg/mL加入果胶酶、纤维素酶于30℃、300r/min 条件下进行酶解2h,保持30℃将酶解液加入超声逆流循环提取;所述超声逆流循环提取条件为400W,30min,循环3次;
S3、对上述经超声逆流循环提取的酶解液进行减压抽滤,滤液中加入5倍体积的75%乙醇静置4h,随后以4000r/min、15min离心沉淀,以获得黄芪多糖提取物;
S4、向黄芪多糖提取物中加入2倍体积的40%乙醇,150r/min磁力搅拌1h后,离心获得沉淀;随后再次向沉淀中加入5倍体积的60%乙醇,150r/min磁力搅拌1h减压抽滤,沉淀挥干后即获得纯度较高的黄芪多糖。
进一步的,所述蒲公英提取物、桔梗提取物、金银花提取物、牛蒡子提取物、鱼腥草提取物、姜黄提取物以及甘草提取物的制备方法相同,均包括:
S1、在原料中加入所述原料重量3.5倍的去离子水,然后加热至煮沸,煮沸状态持续 1.5h后过滤,以获得第一滤液以及第一滤渣;
S2、对所述第一滤渣进行干燥,干燥后的第一滤渣中加入其重量2.5倍的体积分数为 90%的乙醇,浸泡2h后加热至55℃,浸提2h,浸提过程中每30min搅拌一次,搅拌速率为120转/min;然后在6-9℃条件下静置24h,通过过滤分离获得第二滤液和第二滤渣;
S3、将第二滤渣置于发酵罐中,加入所述第二滤渣重量2.5倍的去离子水以及所述第二滤渣重量0.25倍的纤维素酶和0.15倍的果胶酶,调节pH为6.7,且调节至35℃进行发酵,发酵18h后过滤分离出第三滤液;
S4、合并所述第一滤液、第二滤液以及第三滤液,以得到粗提液;将所述粗提液以5BV/h 的流速流过大孔吸附树脂,本实施例中的大孔吸附树脂为D-101型大孔树脂;流经大孔吸附树脂排出的粗提液以4BV/h的流速依次流经阴、阳离子树脂柱;流经阴、阳离子树脂柱排出的粗提液以40mL/min的流速流经活性炭移动床,以得到精提液,再对精提液进行浓缩干燥,粉碎后得对应的提取物成品。
<大蒜素检测结果>
对比例1:取新鲜大蒜,去皮洗净后用组织捣碎机捣成蒜泥,加去离子水搅拌均匀后得到大蒜浆液;调节大蒜浆液pH值为4-5后置于30-40℃水浴锅中酶解1-2h后冷冻干燥6h,得到处理液;往处理液中加入体积分数为90%的乙醇于30-40℃下萃取1h,离心取上清液过滤,其中处理液的质量与乙醇体积之比为1g:5mL;过滤后的上清液在温度为40℃,压力0.01MPa条件下,用旋转蒸发仪进行减压浓缩,得到提取的大蒜素。
实验组:通过本发明实施例4-6制备获得的大蒜素。
在对照组进行酶解和萃取过程中,以及在实验组进行酶解和超声提取的过程中,分别抽取三次样品检测蒜氨酸含量,以及检测最后获取的大蒜素含量,检测方法均为现有技术,在此不再赘述,检测结果如表1所示。
表1蒜氨酸、大蒜素含量
大蒜素是大蒜、洋葱等百合科植物破碎后,蒜氨酸在蒜氨酸酶催化作用下产生的一种具有生物活性的有机硫化物,其具有抗菌消炎、降血脂、降胆固醇、增强血管弹性及降低血压、调节血糖、防癌、增强免疫功能以及解毒保健等功能。本发明中采用充分发酵,多重酶解的方案来增加大蒜素前提物质--蒜氨酸的含量,具体的,如表1所示,本发明中蒜氨酸的含量相对对比例1提高约46%,进一步的,因为蒜氨酸的含量提高,结合超声和无水乙醇提取可极大提高最终大蒜素的含量,如本发明中大蒜素提取率、含量分别相对对比例1提高29%、51.9%,且用过抽滤、旋转蒸发等方式提高纯度,使得纯度相对对比例1 提高24%。
<白菜提取物检测结果>
对比例2:取白菜清洗后破碎,获得破碎液,按照破碎液重量的1.5-2.0%加入果胶酶和按照破碎液重量的1.0-1.5%加入纤维素酶,40-42℃保温4-5小时,每30min搅拌一次;用0.2μm滤膜过滤后获得白菜提取物。
实验组:通过本发明实施例4-6制备获得的白菜提取物。
检测最后获取的白菜提取物中吲哚-3-甲醇(I3C)的含量和有机硒含量,检测方法均为现有技术,在此不再赘述,检测结果如表2所示。
表2吲哚-3-甲醇(I3C)的含量和有机硒含量
本发明通过多种酶+活性干酵母对白菜充分酶解,并且添加冰醋酸促进芥子油苷水解,并通过加入醋酸钡以沉淀部分蛋白质和悬浮杂质,以形成丰富的I3C,由此可通过I3C实现增强人体体质,抗癌解毒的功能,同时,本发明在发酵过程中还添加有***钠,***钠既能促进发酵效率提高,又能促进醋酸发酵时芥子油苷转化效率,同时上述有机硒也不会导致人体中毒,并且也能提高人体的抵抗力,预防癌症以及促进排出体内的重金属与毒素。
<蒲公英提取物等检测结果>
通过本发明实施例4-6中的制备方法获取所述蒲公英提取物、桔梗提取物、金银花提取物、牛蒡子提取物、鱼腥草提取物、姜黄提取物及甘草提取物,并分别检测其各自的绿原酸、黄酮以及多糖含量,检测结果如表3所示。
表3绿原酸、黄酮以及多糖含量
本发明中通过在不同阶段采用不用的酶及酶解条件对原料(即蒲公英/桔梗/金银花/牛蒡子/鱼腥草/姜黄/甘草)细胞壁进行充分酶解,使细胞壁中的纤维素、果胶等成分破坏殆尽,进一步使得细胞壁结构被破坏,使其内容的有效成分(如绿原酸、黄酮以及多糖等)得以充分释放,同时采用离子交换技术对提取物进行纯化,进一步提高所述有效成分的含量,使其充分发挥抗病毒杀菌功效。
<黄芪多糖检测结果>
对比例3:黄芪饮片经干燥后粉碎,过20目筛,取10g黄芪粉末并按1:15加纯水, 40℃超声提取20min,经纱布或脱脂棉滤过后浓缩至20mL,加入3倍体积无水乙醇静置数小时,置冰箱中过夜沉淀,然后于离心机离心最后干燥,得到黄芪多糖。
实验组:通过本发明实施例4-6制备获得的黄芪多糖。
采用苯酚硫酸法检测最后获取的黄芪多糖含量并计算提取率,检测结果如表4所示。
表4黄芪多糖的含量和提取率
含量(%) | 提取率(%) | |
对比例3 | 42.53±3.49 | 9.37±1.14 |
实施例4 | 54.48±5.51 | 7.72±1.45 |
实施例5 | 56.36±3.34 | 7.85±1.22 |
实施例6 | 53.87±2.27 | 8.03±0.96 |
大量研究表明,黄芪多糖能促进机体的细胞免疫和体液免疫,并且能使免疫器官如脾增重,是黄芪中增强免疫力的活性成分。本发明通过辐照+酶解+超声逆流循环提取,其纤维素和多糖分子降解,提取过程中纤维素溶胀增大使黄芪多糖易于溶出,同时采用乙醇分级沉淀+醋酸钡沉淀对提取物进行纯化,进一步提高黄芪多糖的含量,使其充分发挥增强免疫力功效。
<小鼠生理指标检测结果>
选取SPF级小鼠120只,将小鼠随机分为:阳性对照组、病毒对照组及口服液(即本发明中的抗病毒及增强免疫力效果的天然复合口服液)高、中、低剂量组,在***轻度麻醉下,用稀释后的流感病毒液滴鼻感染,其中20只作为正常对照组。
在病毒攻击2h后采用灌胃给药的方式开始给药,其中正常对照组与病毒对照组仅供给同体积生理盐水;阳性对照组中,先将利巴韦林用蒸馏水稀释,按照70mg/kg给药;高、中、低剂量组中,分别按照低剂量组给药量1.5g/kg、中剂量组给药量2.5g/kg和高剂量组给药量4.0g/kg灌胃本发明中的抗病毒及增强免疫力效果的天然复合口服液。
每天一次,共给药1周。给药期间记录前后小鼠体质量变化、死亡率,并计算出肺指数,检测结果如表5所示。
表5小鼠生理指标检测
组别 | 小鼠数量(只) | 感染前体质量(g) | 给药1周后体质量(g) | 肺指数(mg/g) | 死亡率(%) |
正常对照组 | 20 | 20.75±1.52 | 26.51±2.43 | 6.17±0.62 | 0.0 |
病毒对照组 | 20 | 20.39±1.07 | 18.17±1.91<sup>**</sup> | 17.03±3.51<sup>**</sup> | 75.0 |
阳性对照组 | 20 | 20.76±1.21 | 24.93±3.11<sup>**</sup> | 7.17±1.92<sup>**</sup> | 0.0 |
低剂量组 | 20 | 20.35±1.37 | 22.06±2.75<sup>*</sup> | 9.82±2.44<sup>*</sup> | 10.0 |
中剂量组 | 20 | 20.51±1.42 | 24.12±3.29<sup>**</sup> | 9.76±2.53<sup>*</sup> | 0.0 |
高剂量组 | 20 | 20.92±1.12 | 25.27±2.59<sup>**</sup> | 8.27±2.32<sup>**</sup> | 0.0 |
由上述表5中可以看出,相对于病毒对照组而言,给药1周后,小鼠的体质量基本能恢复至正常水平,肺指数和死亡率相对病毒对照组显著降低(P<0.01),由此说明本发明中的口服液因为具备多种天然抗病毒成分,如大蒜素、I3C、黄酮、绿原酸以及多糖等,使得小鼠体内的病毒繁殖得以被有效抑制,同时山茱萸、桑葚、黄芪多糖、灵芝等具有养肝护肾,调理肝肾阴阳气化平衡,祛除动物体内积累毒素,清除自由基,快速修复肝脏,肾脏等功能,以及具有解除药物残留毒素、霉菌毒素及缓解病毒、细菌感染所致毒血症、菌血症、败血症等症状的功效,其同样有助于提高免疫力和机体恢复速度。
<抗甲型H1N1、RV14病毒效果检测>
在24孔板中培养50000个MDCK细胞,按照5TCID50/ml加入甲型H1N1/鼻病毒14 型(即RV14);在33℃,5%CO2温箱内孵育1h,Hanks液洗去病毒液,加入细胞维持液 (高剂量组:口服液100微升,中剂量组:稀释一倍的口服液100微升,低剂量组:稀释 4倍的口服液100微升,阳性对照组:40μg/mL病毒唑100微升),同时设置病毒对照组、细胞对照组,在33℃,5%CO2温箱内连续观察5d,观测结果如表6-7所示。其中“-“为无细胞病变,“****”为3/4以上细胞病变,“***”为1/2-3/4细胞病变,“**”为1/4-1/2 细胞病变,“*”1/2-3/4为细胞病变,“——”为延缓细胞病变。
表6口服液对甲型H1N1病毒抑制作用
表7口服液对RV14抑制作用
从表6-7中可以看出,通过本发明口服液处理后,细胞病变数量明显减少,说明小鼠体内的病毒繁殖得以被有效抑制(抑制率可达50%以上),原因在于本发明中的口服液因为具备多种天然抗病毒成分,如大蒜素、I3C、黄酮、绿原酸以及多糖等,由此可有效杀灭甲型H1N1/鼻病毒14型(即RV14),使得细胞恢复正常。
<抗菌水平检测>
1、选取金黄色葡萄球菌、副伤寒甲杆菌、副伤寒乙杆菌、鼠伤寒杆菌、肠炎杆菌作为待检测菌种,分为对照组以及口服液组,对照组采用与菌种对应的常规培养基,实验组采用与菌种对应的、且添加有质量分数为10%的本发明口服液的常规培养基,对照组、口服液组接种等量对应菌种,培养24h、48h时观察菌落结果,结果如表8所示,其中“+”代表菌落数量的相对多少,“+”越多则代表菌落数量相对越多,“-”代表无菌落。
表8各菌种菌落相对数量
从表8中可以看出,在培养期间,24h、48h时,口服液组的菌落数量均显著少于对照组,并且相对于对照组而言,实验组的菌落增长速度明显小于口服液组,多数从“-”增长到“+”,或仅从“+”增长到“++”,说明本发明中的口服液能够通过大蒜素、I3C以及其他一些抗菌成分有效抑菌,提高机体免疫力。
综上所述,与现有技术相比,本发明中含有丰富的天然植物抗病毒杀菌组分,如大蒜素、白菜提取物中的吲哚-3-甲醇(I3C)、蒲公英提取物、金银花提取物、桔梗提取物、鱼腥草提取物、姜黄提取物、牛蒡子提取物、板蓝根等,同时搭配山茱萸、桑葚、黄芪多糖、灵芝调节机体肝肾功能,辅助清除机体内积累的毒素,以此提高人体免疫力
需要说明的是,上述实施例1至6中的技术特征可进行任意组合,且组合而成的技术方案均属于本发明的保护范围。术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含,从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素,而且还包括没有明确列出的其他要素,或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下,由语句“包括一个……”限定的要素,并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例,对于本领域的普通技术人员而言,可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型,本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (10)
1.一种抗病毒及增强免疫力效果的天然复合口服液,其特征在于,包括以下重量份的原料:大蒜素3-5份,白菜提取物10-15份,蒲公英提取物10-20份,桔梗提取物3-5份,金银花提取物10-12份,山茱萸3-5份,桑葚8-10份,牛蒡子提取物0.5-2.5份,鱼腥草提取物0.5-1份,黄芪多糖3-5份,姜黄提取物1-2份,灵芝粉1-2份,甘草提取物5-10份,板蓝根5-8份,葡萄糖3-5份。
2.一种抗病毒及增强免疫力效果的天然复合口服液的制备方法,其特征在于,包括:
S100、制备大蒜素、白菜提取物、蒲公英提取物、桔梗提取物、金银花提取物、牛蒡子提取物、鱼腥草提取物、姜黄提取物、甘草提取物以及黄芪多糖;
S200、按照权利要求1中的组分用量称取所述重量份的山茱萸、桑葚、板蓝根,并将三者全部粉碎过50目筛;再加入山茱萸、桑葚、板蓝根总重量2-3倍的水,然后加热至煮沸,煮沸状态持续1-2h后过滤,以获得滤液以及滤渣;
S300、于70-80℃条件下对所述滤渣进行干燥,且在干燥后的滤渣中加入其重量2-3倍的体积分数为75%的乙醇,浸泡1-2h后加热至65℃-75℃,浸提1-2h;然后在8-10℃条件下静置24h,通过过滤分离获得粗提液和滤渣;
S400、在所述粗提液中加入如权利要求1所述组分用量的大蒜素、白菜提取物、蒲公英提取物、桔梗提取物、金银花提取物、牛蒡子提取物、鱼腥草提取物、姜黄提取物以及甘草提取物、黄芪多糖、灵芝粉以及葡萄糖,搅拌均匀后再将原料混合物置于减压浓缩罐中,于50-60℃条件下进行真空减压浓缩,以获得80℃时相对密度为1.05-1.10的浓缩液;
S500、在所述浓缩液中加入其重量2-2.5倍的蒸馏水,搅拌均匀后即得抗病毒及增强免疫力效果的天然复合口服液。
3.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述大蒜素的制备方法包括:
S1、将大蒜、洋葱去皮、洗净,并粉碎成粒径为80-100目,得原料浆液;
S2、在所述原料浆液中加入其重量3-4倍的、质量分数为8%的白砂糖溶液,以及接种所述原料浆液重量3-4%的活性干酵母,置于25±2℃的环境下恒温发酵24-36h,以得到发酵液;
S3、将发酵液的pH值调节至7.0-8.0,按所述发酵液重量的2.5-3%加入胰蛋白酶,充分搅拌,且搅拌的同时升温至50-52℃,保温25-30min后得到第一酶解液;
待第一酶解液降至20-22℃后,再调整其pH值至3.0-4.0,按第一酶解液重量的1-2%加入果胶酶,充分搅拌,且搅拌的同时升温至40-45℃,保温25-30min后得到第二酶解液;
待第二酶解液降至20-22℃后,再调整其pH值至4.0-5.0,按第二酶解液重量的1.5-2%加入纤维素酶,充分搅拌,且搅拌的同时升温至52-55℃,保温20-25min后得到第三酶解液;
S4、在所述第三酶解液中加入其重量5-6倍的无水乙醇进行超声提取,且超声功率为110KW,超声提取温度为22-25℃,超声提取时间为25-35min;
S5、对完成超声提取的第三酶解液进行超临界CO2提纯,最后获得大蒜素粗品;
S6、在所述大蒜素粗品中加入其重量2-3倍的去离子水,搅拌均匀后过滤,所得滤液通过非极性大孔树脂饱和吸附,再用体积比为90%的甲醇水溶液洗脱,以得到大蒜素洗脱液;
以及S7、所述大蒜素洗脱液经过纳滤膜浓缩后得到浓缩液,再使用旋转蒸发仪对所述浓缩液进行干燥,以得到大蒜素成品。
4.如权利要求3所述的制备方法,其特征在于,所述步骤S1中,在粉碎前还包括:将去皮、洗净后的洋葱和大蒜浸入前处理液中浸泡12-18h;所述前处理液由质量分数3-4%的柠檬酸溶液和质量分数1-1.5%的乙酸溶液组成,且按体积比计,质量分数3-4%的柠檬酸溶液:质量分数1-1.5%的乙酸溶液=(1-2.5):1。
5.如权利要求3所述的制备方法,其特征在于,所述步骤S1中,按重量计,大蒜:洋葱=(3-4):1。
6.如权利要求3所述的制备方法,其特征在于,所述洗脱剂用量为柱体积的4.5-5倍量,洗脱速度为1.2-1.5BV/h。
7.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述白菜提取物的制备方法包括:
S1、取新鲜白菜,加入白菜重量2.5-3.5倍的去离子水,并在25℃下浸泡3-4h,取出再用去离子水冲洗2-3遍;再将冲洗后的白菜打碎磨浆,得到白菜浆液;
S2、在所述白菜浆液中加入其重量2.5-3.5%的果胶酶,于35-38℃下处理12-18h,其中每30min搅拌一次,处理完成后保温25-30min后得到第一酶解液;
待第一酶解液降至20-22℃后,再调整其pH值至3.0-4.5,按第一酶解液重量的2.5-3%加入果胶酶,于35-45℃下处理8-10h,其中每30min搅拌一次,处理完成后保温2.5-3h,以得到第二酶解液;
S3、在所述第二酶解液中按照第二酶解液重量的2-4%加入活性干酵母以及按照第二酶解液重量的0.0015-0.002%加入***钠,发酵36-48h,获得初次发酵液;
S4、在所述初次发酵液中按照初次发酵液重量的1.5-2%加入冰醋酸以及按照初次发酵液重量的0.001-0.002%加入***钠,发酵36-48h,获得二次发酵液;
S5、将所述二次发酵依次经过分离孔径为50-100nm的陶瓷膜、截留分子量为2000-5000Da的超滤膜以及截留分子量为300-500Da的纳滤膜,最后得到白菜粗提物;
S6、按照白菜粗提物体积的1/10加入0.4M醋酸钡,搅拌均匀静置30min,然后4000r/min离心10min后,收集上清液,即得到含有吲哚-3-甲醇的白菜提取物。
8.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述黄芪多糖的制备方法包括:
黄芪饮片干燥,粉碎后过40目筛,按1:10固液比加入去离子水,50℃搅拌浸泡3h。同时进行辐照处理;
对上述辐照后的黄芪浆液分别按0.2mg/mL加入果胶酶、纤维素酶于30℃、300r/min条件下进行酶解2h,保持30℃将酶解液加入超声逆流循环提取;所述超声逆流循环提取条件为400W,30min,循环3次;
对上述经超声逆流循环提取的酶解液进行减压抽滤,滤液中加入3倍体积的75%乙醇静置6h,随后以4000r/min、15min离心沉淀,以获得黄芪多糖提取物;
向黄芪多糖提取物中加入2倍体积的40%乙醇,150r/min磁力搅拌1h后,离心获得沉淀;随后再次向沉淀中加入5倍体积的60%乙醇,150r/min磁力搅拌1h减压抽滤,沉淀挥干后即获得纯度较高的黄芪多糖。
9.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述蒲公英提取物、桔梗提取物、金银花提取物、牛蒡子提取物、鱼腥草提取物、姜黄提取物以及甘草提取物的制备方法相同,均包括:
S1、在原料中加入所述原料重量3-4倍的去离子水,然后加热至煮沸,煮沸状态持续1-2h后过滤,以获得第一滤液以及第一滤渣;
S2、对所述第一滤渣进行干燥,干燥后的第一滤渣中加入其重量2-3倍的体积分数为90%的乙醇,浸泡1-2h后加热至50℃-60℃,浸提1.5-2h,浸提过程中每30min搅拌一次,搅拌速率为100-150转/min;然后在6-9℃条件下静置24h,通过过滤分离获得第二滤液和第二滤渣;
S3、将第二滤渣置于发酵罐中,加入所述第二滤渣重量2-3倍的去离子水以及所述第二滤渣重量0.15-0.35倍的纤维素酶和0.1-0.2倍的果胶酶,调节pH为6.5-7,且调节至30-40℃进行发酵,发酵12-24h后过滤分离出第三滤液;
S4、合并所述第一滤液、第二滤液以及第三滤液,以得到粗提液;将所述粗提液以3-5BV/h的流速流过大孔吸附树脂;流经大孔吸附树脂排出的粗提液以2-4BV/h的流速依次流经阴、阳离子树脂柱;流经阴、阳离子树脂柱排出的粗提液以35-45mL/min的流速流经活性炭移动床,以得到精提液,再对精提液进行浓缩干燥,粉碎后得对应的提取物成品。
10.如权利要求9所述的制备方法,其特征在于,所述大孔吸附树脂为D-101型大孔树脂。
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