CN107412393B - 一种黄皮叶多酚提取物的制备方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种黄皮叶多酚提取物的制备方法，其包括以下步骤：采用乙醇‑水为溶剂进行超声提取，将提取液浓缩后使用大孔树脂纯化，得到洗脱液，将洗脱液真空浓缩、干燥即得。采用该制备方法制得的黄皮叶多酚提取物含量为34.22～35.42％，不仅提取率高，且杂质少，用于制备食品或保健品或药品时可以减少用量，在一定程度上减少毒副作用，有利于产品的安全性和有效性。药理试验证明，本发明制得的黄皮叶多酚提取物具有明显的抗糖尿病效果，对糖尿病并发的血脂紊乱具有较佳的调节改善作用，可用于制备抗糖尿病、降血糖、降血脂的食品或保健品或药品。
Description
技术领域
本发明属于天然药物技术领域，具体涉及一种黄皮叶多酚提取物的制备方法及其应用。
背景技术
黄皮Clausena lansium(lour.)skeels是芸香黄皮属植物，广泛分布于东半球热带、亚热带地区，共有25个种，我国有10个种，分布于长江以南各省，大部分集中于云南、广东、广西、海南及台湾等省区。黄皮在广东、广西常栽培，资源丰富。其叶性味属辛，苦，平，《本草求原》中记载黄皮叶有“解秽除垢，退黄肿”之功用。在民间百姓常用其叶煮水洗浴用于治疗疥癞，消风肿等。其花小，果为浆果，果肉味甜或偏酸，含多种化合物，本属植物主要含有咔唑类生物碱、酰胺类生物碱、单萜基香豆素、多酚类化合物以及挥发油类化合物，具有清除自由基、抗氧化活性、保肝解毒、促智、解疫挛、抗细胞凋亡、降血糖血脂、抑菌、抗肿瘤及抗HIV病毒等生物活性。
植物多酚是一类广泛存在于植物体内的多元酚化合物，在维管植物中的含量仅次于纤维素、半纤维素和木质素，广泛存在于植物的叶、果、皮、根中，具有潜在促进健康的作用。已有研究证明，黄皮叶中的多酚化合物包含有槲皮素、山奈酚、芦丁、没食子酸、绿原酸、咖啡酸等，这些都具有很好的抗氧化、降血糖、降血脂的作用，具有潜在的医药保健价值。已公开的从黄皮叶中提取有效成分的工艺主要侧重于对生物碱、挥发油和黄酮类的提取，如李玉珍等在“响应面分析法优化黄皮叶中生物碱的提取工艺研究，广州化工”对从黄皮叶中提取生物碱的工艺条件进行优化，具体为在超声波辅助条件下，采用响应面分析法，以超声时间(A)、料液比(B)、溶媒浓度(C)等为主要影响因素，确定了生物碱最佳取工艺条件：在超声时间为49min，料液比为1:14，溶媒浓度为5.67％的条件下，黄皮叶中生物总碱的提取率为0.3560％。另有公开号为：CN104027436A的中国专利申请“一种黄皮叶提取物的制备方法”，以低碳醇为提取剂，进行超声波提取制备黄皮叶提取物，制得的提取物中生物碱的含量为55％以上。又有公开号为：CN106038766A的中国专利申请“一种小黄皮叶挥发油的提取方法及其应用”，以循环萃取方式对黄皮叶进行挥发油萃取，再通过分离釜减压解析，制得的小黄皮叶挥发油外观色泽好，该方法具有萃取效率高、提取量高、环保无污染等优点。
而现有技术对于从黄皮叶中提取多酚物质的研究相对较少，主要侧重于多酚类化合物之一的黄酮类化合物的提取，如梁云贞等在“微波辅助提取山黄皮叶黄酮类物质的工艺研究，广东农业科学”中披露采用热乙醇浸提、微波处理的步骤对山黄皮叶进行黄酮类化合物提取，提取率为3.90％，优于常规提取法。
综上所述，目前对黄皮叶提取已做的研究主要涉及生物碱、挥发油和黄酮类等，而在多酚物质的提取纯化及其应用的研究鲜为少见。因此，从黄皮叶中提取制备具有降糖降脂作用的多酚提取物，不仅能为更加有效、科学地开发和利用黄皮叶提供新思路与方向，而且也为抗糖尿病药物或保健品的研究开发提供实验基础。
发明内容
为解决现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种黄皮叶多酚提取物的制备方法及其应用。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种黄皮叶多酚提取物的制备方法，其包括以下步骤：
(1)将黄皮叶洗净，在50～60℃低温烘干，粉碎，过40-50目筛，得到黄皮叶粉末；
(2)以乙醇-水为溶剂，将黄皮叶粉末在超声波内，超声提取一次；
(3)将步骤(2)中所得的提取液真空浓缩至原体积的1/4～1/5，3000r/min离心10～15 分钟，除去不溶物，得到黄皮叶多酚提取物浓缩液；
(4)将上述浓缩液上已处理的大孔树脂，进行吸附、洗脱，收集洗脱液；
(5)将上述洗脱液真空浓缩，然后进行真空干燥，即得到黄皮叶多酚提取物。
其中，所述步骤(2)中的乙醇-水是体积分数为20～50％的乙醇，优选为25～35％的乙醇；所述黄皮叶粉末与提取溶剂的比例为1:40～1:50(g/mL)；所述的超声条件为：超声功率为270～300W、提取温度为50～60℃、超声时间为50～60min。
进一步地，本发明采用的大孔树脂为苯乙烯型非极性或弱极性共聚体，优选为AB-8或 D-101，可有效提高黄皮总多酚的含量，大幅降低香豆素等杂质的含量。
具体地，上述对大孔树脂进行预处理的方法为：将大孔吸附树脂用95％乙醇浸泡24h，使树脂充分溶胀，再用95％乙醇清洗树脂至流出液体不呈白色浑浊，然后用去离子水洗至无醇味，备用。
进一步地，采用大孔树脂对浓缩液进行吸附、洗脱条件为：大孔树脂与生药量的质量比为：1:2～1:5，吸附时间为6～8小时，洗脱液依次为去离子水，10～40％乙醇溶液，洗脱速度为2～3mL/min，收集10～40％乙醇溶液的洗脱液，优选地，洗脱液依次为去离子水，30～40％乙醇溶液，洗脱速度为2～3mL/min，收集30～40％乙醇溶液的洗脱液。
具体地，上述对洗脱液进行真空浓缩的条件为：温度为50～60℃，真空度为0.05～0.1MPa，浓缩至原体积的1/5～1/6。
优选地，真空浓缩的温度为55～60℃，真空度为0.08～0.1MPa。
此外，本发明还请求保护根据上述的制备方法制得的黄皮叶多酚提取物以及所述的黄皮叶多酚提取物在制备抗糖尿病、降血糖、降血脂的食品或保健品或药品中的应用。
进一步地，在获得黄皮叶多酚提取物后，可用常规方法将其与药学上、食品学上或保健品上可接受的载体、赋形剂或稀释剂相混合，制成相应的制剂。这类载体包括(但并不限于)：盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其组合。
采用本发明提供的制备方法对黄皮叶进行多酚物质提取，得到黄皮叶多酚提取物含量为 34.22～35.42％，不仅提取率高，且杂质少，用于制备食品或保健品或药品时可以减少用量，在一定程度上减少毒副作用，有利于产品的安全性和有效性。药理试验表明，本发明制得的黄皮叶多酚提取物对链脲佐菌素(STZ)诱导的二型糖尿病大鼠的消瘦、多食、多饮和多尿的病理体征起到一定的控制和改善作用，对降低空腹血糖同样具有一定的作用。并且呈剂量依赖性地降低二型糖尿病大鼠的TC、TG和LDL-C值、升高HDL-C值，对血脂紊乱具有调节改善作用。
与现有技术相比，本发明的优势在于：
本发明以黄皮叶为原料，采用超声波有机溶剂法提取黄皮叶多酚成分，并用大孔树脂进行纯化，制备得到的黄皮叶提取物中多酚含量高，杂质少。药理试验证明，本发明制得的黄皮叶多酚提取物具有明显的抗糖尿病效果，对糖尿病并发的血脂紊乱具有较佳的调节改善作用。此外，本发明的制备方法简单、周期短，为黄皮叶的药用开发和黄皮叶的综合利用作出巨大贡献。
具体实施方式
以下通过具体实施方式进一步描述本发明，但本发明不仅仅限于以下实施例。
实施例1 黄皮叶多酚提取物的制备
称取100g黄皮叶在60℃下低温烘干，粉碎，过40目筛，得到黄皮叶粉末；在乙醇浓度为30％、提取超声功率为280W、提取温度为50℃、提取时间50min、料液比1:40(g/mL) 条件下提取，得到黄皮叶多酚提取液；将提取液真空浓缩至原体积的1/5，经3000r/min离心15分钟去除不溶于水的杂质，得到黄皮叶多酚提取物浓缩液；将浓缩液上已处理的大孔树脂AB-8进行吸附、洗脱，吸附时间为8小时，洗脱液依次为去离子水，30％乙醇溶液，洗脱速度为2mL/min，各洗至近无色，收集30％乙醇溶液的洗脱液，真空浓缩，55℃真空干燥，即得到黄皮叶多酚提取物，其含量为35.42％。
实施例2 黄皮叶多酚提取物的制备
称取100g黄皮叶在55℃下低温烘干，粉碎，过筛，得到黄皮叶粉末；在乙醇浓度为30％、提取超声功率为280W、提取温度为60℃、提取时间55min、料液比1:45(g/mL)条件下提取，得到黄皮叶多酚提取液；将提取液真空浓缩至原体积的1/5，经3000r/min离心15分钟去除不溶于水的杂质，得到黄皮叶多酚提取物浓缩液；将浓缩液上已处理的大孔树脂AB-8 进行吸附、洗脱，吸附时间为6小时，洗脱液依次为去离子水，30％乙醇溶液，洗脱速度为 2mL/min，各洗至近无色，收集30％乙醇溶液的洗脱液，真空浓缩，60℃真空干燥，即得到黄皮叶多酚提取物，其含量为34.42％。
实施例3 黄皮叶多酚提取物的制备
称取100g黄皮叶在60℃下低温烘干，粉碎，过筛，得到黄皮叶粉末；在乙醇浓度为30％、提取超声功率为280W、提取温度为60℃、提取时间55min、料液比1:45(g/mL)条件下提取，得到黄皮叶多酚提取液；将提取液真空浓缩至原体积的1/4，经3000r/min离心15分钟去除不溶于水的杂质，得到黄皮叶多酚提取物浓缩液；将浓缩液上已处理的大孔树脂D-101进行吸附、洗脱，吸附时间为6小时，洗脱液依次为去离子水，30％乙醇溶液，洗脱速度为3mL/min,各洗至近无色，收集30％乙醇溶液的洗脱液，真空浓缩，60℃真空干燥，即得到黄皮叶多酚提取物，其含量为34.22％。
试验例一、黄皮叶多酚提取物抗糖尿病、降血糖、降血脂的作用研究
(1)黄皮叶多酚提取物对链脲佐菌素(STZ)诱导的二型糖尿病大鼠血糖及生理特征的影响
选取体重为180～220g的Wistar雄性健康大鼠40只，随机选取5只为正常对照组，喂食普通饲料，其余的大鼠用高脂饲料喂养两周后，腹腔注射STZ 60mg/kg复制大鼠糖尿病模型。从模型大鼠中剔除个别空腹血糖值异常者，挑选出合格糖尿病大鼠20只，分为4组，每组5只，分被为：二甲双胍阳性对照组(100mg/kg)、模型对照组、黄皮叶多酚提取物高、低剂量组(100mg/kg,50mg/kg)，然后灌胃给药，每天1次，连续4周。正常组和模型对照组大鼠给予等量生理盐水。各组大鼠给药前称体重，给药后每天观察记录其精神活动、毛发改变、饮水量、进食量、大小便等一般生活状况，每周称量一次大鼠体重，比较给药前后体重变化情况，以实验前后4项指标表明药物对各组大鼠生长情况的影响，结果见表1-5。
表1 黄皮叶多酚提取物对二型糖尿病大鼠体重变化的影响
注：与模型对照组相比，*P<0.05；与正常组相比，#P<0.05。
表2 黄皮叶多酚提取物对二型糖尿病大鼠***量变化的影响
注：与模型对照组相比，*P<0.05；与正常组相比，#P<0.05。
表3 黄皮叶多酚提取物对二型糖尿病大鼠饮水量变化的影响
注：与模型对照组相比，*P<0.05；与正常组相比，#P<0.05。
表4 黄皮叶多酚提取物对二型糖尿病大鼠进食量变化的影响
注：与模型对照组相比，*P<0.05；与正常组相比，#P<0.05。
表5 黄皮叶多酚提取物对二型糖尿病大鼠空腹血糖变化的影响
由上表1-5可知，经过四周给药后，与模型对照组比较，黄皮叶多酚提取物高、低剂量组糖尿病大鼠生活状况有所改善，体重增加，进食量、饮水量、***量减少，空腹血糖值降低。结果表明，黄皮叶多酚提取物对对链脲佐菌素诱导的二型糖尿病大鼠的消瘦、多食、多饮和多尿的病理体征起到一定的控制和改善作用，且对降低空腹血糖具有一定的作用。
(2)黄皮叶多酚提取物对链脲佐菌素诱导的二型糖尿病大鼠血脂的调节作用影响
大鼠模型的建立、给药的方式、剂量及时间均同上(1)所述，在给药前和给药4周后取血按试剂盒所述方法测总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C) 和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-L)值，结果见表6。
表6 黄皮叶多酚提取物对二型糖尿病大鼠血脂的作用
注：与模型对照组相比，*P<0.05；**P<0.01。
由上表6可知，在给药前，各模型组的血脂值无明显区别；给药四周后，与模型对照组比较，低剂量、高剂量和阳性对照组的TC、TG和LDL-C值均有所降低，且具有显著性意义(P<0.05或P<0.01)，其中高剂量组较低剂量组的结果好，与阳性对照组的值接近；与模型对照组相比，低剂量、高剂量和阳性对照组的HDL-C值明显上升，具有显著性意义 (P<0.01)。结果表明，黄皮叶多酚提取物对二型糖尿病大鼠的血脂紊乱具有调节改善作用，且呈剂量依赖性。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (5)
1.一种黄皮叶多酚提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将黄皮叶洗净，在50℃低温烘干，粉碎，过40目筛，得到黄皮叶粉末；
(2)以乙醇-水为溶剂，将黄皮叶粉末在超声波内，超声提取一次；
(3)将步骤(2)中所得的提取液真空浓缩至原体积的1/5，3000r/min离心15分钟，除去不溶物，得到黄皮叶多酚提取物浓缩液；
(4)将上述浓缩液上已处理的大孔树脂，进行吸附、洗脱，收集洗脱液；
(5)将上述洗脱液真空浓缩，然后进行真空干燥，即得到黄皮叶多酚提取物；
所述步骤(2)中的乙醇-水是体积分数为30％的乙醇；
所述步骤(2)中黄皮叶粉末与提取溶剂的比例为1:40(g/mL)；
所述步骤(2)中的超声条件为：超声功率为280W、提取温度为50℃、超声时间为50min；
所述步骤(4)中的大孔树脂为AB-8。
2.根据权利要求1所述的黄皮叶多酚提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中的大孔树脂处理方法为：将大孔吸附树脂用95％乙醇浸泡24h，使树脂充分溶胀，再用95％乙醇清洗树脂至流出液体不呈白色浑浊，然后用去离子水洗至无醇味，备用。
3.根据权利要求1所述的黄皮叶多酚提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中的吸附、洗脱条件为：大孔树脂与生药量的质量比为：1:2～1:5，吸附时间为8小时，洗脱液依次为去离子水，30％乙醇溶液，洗脱速度为2mL/min，收集30％乙醇溶液的洗脱液。
4.根据权利要求1所述的黄皮叶多酚提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(5)中的真空浓缩的条件为：温度为55℃，真空度为0.05～0.1MPa，浓缩至原体积的1/5。
5.根据权利要求1-4任一所述的制备方法制得的黄皮叶多酚提取物。
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