CN114316039B - 一种快速检测病毒的试剂盒及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种快速检测病毒的试剂盒及其制备方法。本发明一方面筛选了一种能特异性识别汉坦病毒NP蛋白的单克隆抗体，所述单克隆抗体的重链可变区和轻链可变区序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。将单克隆抗体联合制备的NP蛋白以及多克隆抗体制备两种胶体金检测试纸条(抗原检测或抗体检测)，所述的试纸条具有良好的特异性和灵敏度，且将两者联合使用，能够进一步提高检测的准确性，适于大规模推广使用。
Description
技术领域
本发明属于病毒疫病诊断技术领域，具体涉及一种快速检测病毒的试剂盒及其制备方法。
背景技术
汉坦病毒，又名肾综合征出血热病毒(HRSV)，最早于1978年从黑线姬鼠中分离成功。世界各地的汉坦病毒可分6个血清型，即姬鼠型、家鼠型或大鼠型、棕背型、田鼠型、黄颈姬鼠型和小鼠型或小家鼠型。黑线姬鼠等多种野生啮齿动物是病毒的天然寄主，它们无任何临床症状，但可通过***物和分泌物传染给人类。主要临床表现为，在4日左右的发热、头痛等前驱期症状后，出现以非心源性肺水肿和高病死率(52.4％～78.0％)为特征的急性呼吸衰竭，重症3～7日死亡，生存者则很快恢复，无后遗症。其发病机制主要是病毒的直接致病作用，肾脏是早期原发性损伤器官，病毒是肾损伤的直接因素。
汉坦病毒归属布尼亚病毒科，是一种有包膜分节段的负链RNA病毒，基因组包括L、M、S 3个片段，分别编码L聚合酶蛋白、G1和G2糖蛋白、核蛋白(NP)。其中NP是病毒的主要结构蛋白，免疫原性强，刺激机体产生的抗体滴度高、维持时间长，在抗病毒免疫中起重要作用，不同株、型的病毒NP氨基酸序列保守，均携带有T细胞和B细胞抗原决定簇，能诱导机体产生特异性体液免疫应答和细胞免疫应答，可直接与体外转录病毒的RNA及被感染细胞的细胞器结合，起着调节病毒复制的作用，常用作为HV感染后的诊断蛋白。
JiroArikawa等将杆状病毒表达的病毒核蛋白用于ELISA，可以用于汉坦病毒感染的血清学监测。重组核蛋白和N端缺失的核蛋白用于ELISA和IFA，提供了针对汉坦病毒感染的快速、敏感、安全的诊断方法。
发明内容
鉴于现有技术的不足，本发明的目的主要有2点，一是研究一种汉坦病毒核蛋白的单克隆抗体及其制备方法；二是研究一种使用本发明制备的NP蛋白和/或单克隆抗体制备汉坦病毒的检测方法及其试剂盒。为实现本发明的目的，本发明试根据以下技术方案来来实现的：
首先，本发明制备了一种针对汉坦病毒NP的单克隆抗体，所述的单克隆抗体的重链可变区和轻链可变区序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。
进一步，本发明对制备的单克隆进行进一步的序列分析，所述的单克隆抗体的重链可变区包含CDR1、CDR2、CDR3；所述CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6所示。所述的单克隆抗体的轻链可变区包含CDR1、CDR2、CDR3；所述CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9所示。
其次，本发明在制备的单克隆抗体的基础上，开发了一种检测汉坦病毒的试剂盒，所述的试剂盒包括有效量权利要求1所述的单克隆抗体。所述的试剂盒为胶体金检测试纸条，所述的试纸条包括多克隆抗体制备的乳胶垫、硝酸纤维素膜、吸水纸、PVC背板；所述的硝酸纤维素膜包含单克隆抗体制备的检测线、羊抗兔IgG制备的质控线。
再次，本发明还开发了一种汉坦病毒抗体检测试剂盒，所述的试剂盒包括有效量权利要求1所述的单克隆抗体和汉坦病毒NP蛋白。所述的试剂盒为胶体金检测试纸条，所述的试纸条包括汉坦病毒NP蛋白制备的乳胶垫、硝酸纤维素膜、吸水纸、PVC背板；所述的硝酸纤维素膜包含汉坦病毒NP蛋白制备的检测线、单克隆抗体制备的质控线。
再次，本发明将开发的两种试剂盒进行联合使用，得到了一种抗原-抗体双重检测汉坦病毒的试剂盒。联合检测试剂盒比单独检测具有更高的准确度。
最后，本发明还指出了一种所述的单克隆抗体在制备汉坦病毒检测试剂中的应用。该应用包括但不限于汉坦病毒的IFA检测、汉坦病毒的胶体金检测试纸条、汉坦病毒抗体检测试纸条。
本发明制备的NP蛋白，虽然为最基础的原核表达，但是该蛋白也适用于制备不同的汉坦病毒诊断试剂，如胶体金、化学发光等检测试剂盒。
本发明制备的单克隆抗体具有良好的特异性和灵敏度，适用于制备不同的汉坦病毒的检测试剂，该检测试剂不仅仅包含本发明所提到的胶体金检测试纸条，还可以为ELISA检测试剂盒、化学发光检测试剂盒，也可以应用于科研中的IFA、werstern blot等检测。
本发明制备的两个胶体金检测试纸条，可同时应用于汉坦病毒的抗原和抗体检测，其特异性强、灵敏度高、稳定性好、检测速度快，且联合检测的准确度更高，可用于汉坦病毒的早期筛查和现场筛查。
附图说明
图1纯化后的汉坦病毒核蛋白(NP)的SDS-PAGE图，其中1是Marker，2是纯化后的NP蛋白。
图2纯化后的两株单克隆抗体的SDS-PAGE图，其中1是Marker，2是纯化后的单克隆抗体。
图3IFA检测结果。
图4试纸条检测结果，其中1、2、3分别为腺病毒灭活病毒液、甲型流感灭活病毒液、乙型流感灭活病毒液。
图5试纸条检测结果，其中1、2、3分别为腺病毒病毒阳性血清(灭活后)、甲型流感病毒阳性血清(灭活后)、乙型流感病毒阳性血清(灭活后)。
具体实施方式
以下结合具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
实施例1：表达汉坦病毒核蛋白(NP)的原核表达载体的构建
将GenBank:AF159370.1的NP蛋白CDS序列的核苷酸序列进行密码子优化，将密码子优化后的NP蛋白的核苷酸序列(如SEQ ID NO.1所示)克隆到原核表达载体(PET28a)中，在C端增加6个His标签。该项工作委托华大基因完成。
实施例2：汉坦病毒核蛋白(NP)的表达和纯化
将诱导后表达NP蛋白的基因工程菌(PET28a-NP)在37℃220rpm振荡培养6h后收获菌体，用50mL规格离心管收集，以4℃,5000rpm的转速离心10min,并弃去上清保留菌体；把菌体重悬洗涤在20mL PBS溶液中，4℃12000rpm离心10min，弃去上清保留菌体；将菌体重悬于20mL洗涤液中，冰浴中超声破碎，超声频率40％，超声3s，停歇5s，超声8min；4℃，12000rpm离心10min，将菌体重悬于20ml含少量尿素的洗涤液中，4℃，12000rpm离心10min,弃上清液保留菌体。利用GE公司的镍柱HIS纯化***对重组蛋白进行纯化，纯化操作简述如下：将沉淀用20ml溶解液重悬，4℃12000rpm离心10min，将上清转另一离心管中；将1ml50％NI-NTA树脂悬浮加到4ml裂解液中，混匀，4℃摇床孵育过夜；将裂解液与NI-NTA树脂悬浮的混合物加入下端封闭的空柱后，收集流出液；加入含有尿素的复性液12ml，将其放置到摇床上冰浴孵育6h以复性目的蛋白，最后流去复性液；用含尿素的洗脱液洗脱3次(12ml、6ml、6ml)，第一次放入摇床4℃冰浴30min，其余两次放入摇床4℃冰浴15min，洗脱目的蛋白，收集洗脱液；将收集的洗脱液使用超滤管浓缩至3～5ml，并于PBS缓冲液透析换液，分装后置于-20℃保存备用。
取10μl纯化的NP蛋白使用SDS-PAGE蛋白凝胶进行电泳检验，在49kDa左右有一条清晰条带，纯度大于等于90％(图1)。使用BCA试剂盒检测蛋白含量，蛋白浓度为1.02mg/ml。
实施例3：表达NP蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞的制备、纯化
小鼠免疫：以纯化的NP蛋白作为免疫原，对8～10周龄雌性BALB/c小鼠进行免疫。免疫方法如下：首免，每只小鼠用100μgNP蛋白与等量FCA混合制成乳化剂，颈背部皮下多点和腹腔注射；二免，于首免后2周，将FCA换成FICA，剂量和方法同上；三免，于二免后2周进行，剂量和方法同二免。细胞融合前1周进行加强免疫，方法是腹腔注射100μg纯化的NP蛋白。
细胞融合：在小鼠加强免疫后3～5天进行细胞融合。细胞融合步骤简述如下：断颈处死阳性小鼠，无菌取其脾细胞，按脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞5:1的比例用PEG4000进行融合，静置1min后逐量加入RPMI 1640终止融合，室温1000rpm离心8min，弃上清，加入50ml含有HAT的20％新生牛血清的完全RPMI 1640，将融合好的细胞加到96孔板内，每孔100μl。将培养板置37℃、5％CO2培养箱中培养，15天后改用含HT的20％犊牛血清的完全RPMI 1640。
细胞株筛选：将筛选得到的阳性杂交瘤细胞进行亚克隆，亚克隆采用有限稀释法，将原始孔细胞用HT培养基稀释后重新分96孔细胞板，一个原始孔细胞分一块板子。亚克隆完成后注意观察每个孔的细胞个数及状态。取亚克隆后分泌抗体稳定并且尽可能是单个克隆的孔进行第二次亚克隆。经过三次亚克隆后原先是单克隆的亚克隆板子检测结果的阳性率应达到100％。获得了1株能够稳定分泌特异性针对NP蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
实施例4：NP蛋白单克隆抗体的制备与检测
腹水制备：8～10周龄的健康BALB/c小鼠腹腔注射液体石蜡，每只0.5ml，7日后腹腔注射106个杂交瘤细胞，7～10日后当小鼠腹部极度膨胀时抽取腹水，隔2日抽一次，将抽取的腹水在2～8℃下，以1000rpm离心10分钟，去除上层油脂和沉淀，上清分装(5ml/管)，-20℃或-70℃保存备用。
抗体纯化：为辛酸-硫酸铵沉淀法(具体参见：周玉等，小鼠腹水IgG类单克隆抗体纯化方法的研究。《黑龙江畜牧兽医》2006年第10期)，纯化后，使用SDS-PAGE对纯化后的抗体进行纯度检验，结果显示(图2)，单克隆抗体的SDS-PAGE纯度均大于90％；使用BCA试剂盒对纯化后的抗体进行浓度检测，检测结果分别为5.82mg/ml。
抗体效价测定：将纯化的NP蛋白用0.1μg/孔加入ELISA反应板中，4℃放置过夜。洗涤3次后，每孔加200μL封闭液，37℃放置1h，洗涤3次后。将制备的抗体用PBS进行10倍系列稀释，100μL/孔加到已封闭的ELISA板上，用PBS做空白对照；于37℃温箱中温育1h，洗涤3次后加入HRP标记的羊抗鼠(1:5000)的抗体，100μL/孔，于37℃温箱中温育0.5h，洗涤3次后加新鲜配制的底物溶液100μL/孔，37℃温箱中避光温育10min，再加入50μL/孔终止液，测定OD450，以P/N＞2.1为阳性判定标准(P为样品OD450值，N为空白对照OD450值)。检测结果(表1)显示，单克隆抗体的效价为107。
表1抗体效价测定结果
| 稀释倍数 | 103 | 104 | 105 | 106 | 107 | 108 | 109 |
| OD450值 | 1.443 | 1.354 | 0.765 | 0.454 | 0.201 | 0.054 | 0.061 |
| P/N值 | 21.54 | 20.21 | 11.42 | 6.78 | 3.00 | 0.81 | 0.91 |
注：空白对照OD450值为0.067。
单克隆抗体亚类鉴定：采用IsoStrip公司的鼠单克隆抗体分型金标试纸试剂盒进行鉴定，具体步骤按试剂盒的说明书操作。经检测，单克隆抗体亚类为IgG1。
单克隆抗体序列的测定：参见中国发明专利(202110793081.5)实施例7的方法对制备的单克隆抗体进行重链可变区和轻链可变区的测定。经检测和测序，单克隆抗体的重链可变区和轻链可变区的序列如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所示；对测定的序列进行分析，结果显示，单克隆抗体重链可变区3个CDR的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6所示；轻链可变区3个CDR的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQID NO.9所示。
实施例5：FITC标记单克隆抗体及其检测
具体试验方法参见发明专利201710054599.0，简述如下：将单克隆抗体浓缩到浓度为10mg/ml，调整pH至9.0，4℃保存待用；取1mg FITC溶于0.2ml DMSO中，缓慢滴加于抗体内，室温避光作用2h进行反应，反应后用葡聚糖凝胶Sephadex G25柱进行纯化。对纯化后的单克隆抗体应用含1％FBS的PBS进行1:100稀释，对汉坦病毒感染的鼠肺组织(经IFA、PCR和测序鉴定)进行IFA检测。结果显示(图3)，在荧光显微镜下可见在被感染的鼠肺组织中见到密集的绿色荧光颗粒，说明本发明制备的单克隆抗体具有良好的特异性和敏感性。
实施例6：胶体金检测试纸条(抗原)的制备及其检测
多克隆抗体的制备：使用本发明制备的NP蛋白，用ISA 201佐剂制备疫苗(抗原和佐剂等质量比乳化，100μg/ml)，背部多点注射新西兰大白兔，1ml/只；间隔2周后同等剂量和途径加强免疫一次；间隔2周后再以同等剂量加强免疫一次；三免后7日，采集兔血，3000rpm离心10min后分离血清，置于-20℃保存待用。将分离的血清用ProteinG预装柱纯化抗体，浓缩后用BCA检测抗体浓度，浓度为2.12mg/ml，用实施例4的抗体效价测定方法检测抗体效价，效价为105，分装后置于-20℃保存待用。
试纸条制备：取1ml羧基修饰的乳胶微球(上海辉质，400nm)，室温12000rpm离心30min，用0.1mol/L MES溶液清洗3次，加入5mmol/L EDC和2mmol/L NHS室温活化反应30min，活化后加入1mg制备的多克隆抗体，37℃温箱反应3h，加入2％BSA封闭，室温反应30min；标记好的多克隆抗体，12000rpm离心30min，用含1％BSA的PBS溶液重悬，均匀的铺在已处理好的的乳胶微球垫上，置37℃烘箱过夜，室温干燥保存备用。将羊抗兔IgG用PBS缓冲液稀释为0.5mg/ml，将单克隆抗体用PBS缓冲液稀释为1mg/ml，将羊抗兔IgG喷涂在质控线(C线)位置，将单克隆抗体喷涂在检测线(T线)位置，以制备硝酸纤维素膜，并置37℃烘箱过夜，室温干燥保存备用。将干燥后的硝酸纤维素膜与乳胶垫、吸水纸、PVC背板组装，裁切后得到检测用汉坦病毒的快速检测试纸条。检测时，将待检样品滴加于检测孔(约40μl)，立即加入等量的样品稀释液(PBS缓冲液)；加样完后将试纸条平放在桌面上，8～10分钟左右观察结果，若T线和C线均出现条带，判定为阳性；若C线出现条带，T线无条带，判定为阴性；若C线无条带，无论T线是否有条带均判定无效。
试纸条检测：用制备的试纸条检测，分别检测阴性参考品腺病毒灭活病毒液、甲型流感灭活病毒液、乙型流感灭活病毒液，检测结果(图4)显示，阴性参考品检测结果均为阴性。使用制备的试纸条对不同浓度的NP蛋白进行检测，结果显示(表2)，该试纸条的最低检测限能达到2ng/ml。
表2不同浓度NP蛋白检测结果
| NP蛋白浓度 | 8ng/ml | 4ng/ml | 2ng/ml | 1ng/ml |
| 检测结果 | + | + | + | - |
注：“+”表示检测结果为阳性，“-”表示检测结果为阴性。
实施例7：胶体金检测试纸条(抗体)的制备及其检测
在实施例5的基础上，将乳胶垫标记的多抗换成本发明制备的NP蛋白；将T线(检测线)也换成本发明制备的NP蛋白，C线(质控线)换成本发明制备的单克隆抗体；制备双抗原检测抗体的试纸条，其它制备过程、检测步骤以及检测结果判定均与实施例5相同。
试纸条检测：用制备的试纸条检测，分别检测阴性参考品腺病毒阳性血清(灭活后)、甲型流感病毒阳性血清(灭活后)、乙型流感病毒阳性血清(灭活后)，检测结果(图5)显示，阴性参考品检测结果均为阴性。使用制备的试纸条对不同稀释度的汉坦病毒阳性血清(灭活后)进行检测，结果显示(表3)，该试纸条的最低检测限能达到1:3200。
表3不同稀释度汉坦病毒阳性血清(灭活后)检测结果
| 稀释度 | 1:100 | 1:200 | 1:400 | 1:800 | 1:1600 | 1:3200 | 1:6400 |
| 检测结果 | + | + | + | + | + | + | - |
注：“+”表示检测结果为阳性，“-”表示检测结果为阴性。
实施例8：两个胶体金检测试纸条的联合检测
对收集的232份临床样本(其中阴性样本189份，阳性样本43份，且均为接种相关疫苗，来源于广东某医院检验科)进行检测，单独检测和联合检测(以其中至少一个为阳性判为阳性，两个都是阴性判为阴性)，结果显示(表4)，两个试纸条单独检测的阳性率均在90％以上，但是联合检测的阳性率为97.7％，较单独检测要高，因此，两个试纸条的联合应用可以进一步提高诊断的正确率。
表4临床样本检测结果
| 试纸条 | 阳性率 | 阴性率 |
| 试纸条(抗原检测) | 39/43＝90.1％ | 189/189＝100％ |
| 试纸条(抗体检测) | 40/43＝93％ | 189/189＝100％ |
| 试纸条(同时检测) | 42/43＝97.7％ | 189/189＝100％ |
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 陈卫国
<120> 一种快速检测病毒的试剂盒及其制备方法
<160> 9
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1287
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
atggcaacta tggaggaatt acagagagag atcaatgccc atgagggtca actggtgata 60
gccaggcaga aggtaagaga tgcagaaaaa cagtatgaaa aggatccaga tgagttaaat 120
aagagaacat taacagacag agaaggggtt gcagcatcca tccaggccaa gattgatgag 180
ttaaaaaggc agctagcaga taggattgca accggaaaga accttggaaa ggaacaggat 240
ccaacagggg ttgaacctgg agaccatctg aaggaaagat caatgcttag ctatgggaat 300
gtactggatt tgaaccatct ggatattgat gagtccacag gacagactgc agactggtta 360
agtattgtta tctatttgac atcctttgtt gtaccgatcc ttctgaaagc cctgtatatg 420
ctaacaacga gggggagaca aacaaccaaa gacatcaaag ggaccagaat tcggttcaag 480
gatgacagtt cttttgagga tgtcaatggg atccggaaac caaaacatct gtatgtatcc 540
ttgcccaatg ctcaatcaag catgaaggca gaagagatta cacctggtag gtacaggaca 600
gcaatctgtg gactctatcc tgcacagatc aaggccagac agatgattag cccagtcatg 660
agtgtaattg gtttcctggc actggctaaa gactggagtg accgaattga gcaatggctt 720
agtgaacctt gtaatctact tccagataca gcagcagtaa gcctccatgg aggccctgca 780
acaaacaggg actatctacg gcaaagacag gtggcactgg gtaatatgga aacaaaagag 840
tcaaaggcca tacgccaaca tgctgagact gcaggctgta gcatgatcga agatattgag 900
tcaccatcat cgatatgggt ctttgctgga gcacctgatc gctgtccacc aacatgcctg 960
tttattgcag ggattgctga acttggagca tttttttcta tcctccagga tatgcggaac 1020
acaattatgg cttcaaagac agtgggaaca tctgaagaga aattgcggaa aaaatcatca 1080
ttctatcaat cctatctcag gcgaacacaa tcaatgggaa tacaactgga ccagaggatt 1140
attgtgctct ttatggttgc ctgggggaaa gaggcagtgg acaatttcca cctaggggat 1200
gatatggatc ctgagttgcg aacactggca cagggtttga ttgatgttaa agcgaaggag 1260
atatccaacc aagagccttt gaaactc 1287
<210> 2
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Glu Val Asp Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Glu Asp
1 5 10 15
Phe Val Lys Leu Ser Cys Phe Ala Ser Gly Phe Arg Phe Ser His Tyr
20 25 30
Gly Asn Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Asp Glu Cys Phe Trp
35 40 45
Val Ala Thr Ile Gln Ser Ala Gly Thr Pro Thr His Tyr Pro Asp Ser
50 55 60
Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Asp Lys Asn Ala Leu
65 70 75 80
Tyr Leu Gln Ser Trp Glu Asp Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Asp
85 90 95
Cys Phe Glu Ala Arg Arg Ser Glu Phe Tyr Tyr Tyr Thr Asn Thr Ser
100 105 110
Tyr Tyr Ser Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Val Thr Thr Val Thr Val
115 120 125
Ser Ser Glu Ser Glu
130
<210> 3
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
Asp Val Val Leu Thr Glu Asp Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Trp Ser Glu Ser Val Asp Asn
20 25 30
Tyr Gly Phe Asp Gln Tyr Asn Thr Phe Gln Gln Tyr Glu Asp Gly Gln
35 40 45
Thr Val Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ile Ser Asn Arg Gly Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ala Arg Ile Ser Gly Ser Gly Ser Gly Glu Asp Asp Phe Ser Leu
65 70 75 80
Asn Ile His Pro Val Glu Glu Asp Asp Pro Ala Met Tyr Phe Cys Gln
85 90 95
Gln Thr Lys Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Cys Ser Ser Lys Leu Glu
100 105 110
Ile Lys Glu Ser Asp Glu
115
<210> 4
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
His Tyr Gly Asn Ser
1 5
<210> 5
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
Thr Ile Gln Ser Ala Gly Thr Pro Thr His Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 6
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
Thr Ser Tyr Tyr Ser Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 7
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
Arg Ala Trp Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr Gly Phe Asp Gln Tyr Asn
1 5 10 15
<210> 8
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
Ala Ile Ser Asn Arg Gly Ser
1 5
<210> 9
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
Gln Gln Thr Lys Glu Val Pro Trp Thr
1 5
Claims (7)
1.一种用于汉坦病毒检测的单克隆抗体，其特征在于，所述的单克隆抗体的重链可变区和轻链可变区序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。
2.一种检测汉坦病毒的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括有效量权利要求1所述的单克隆抗体。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒为胶体金检测试纸条，所述的试纸条包括多克隆抗体制备的乳胶垫、硝酸纤维素膜、吸水纸、PVC背板；所述的硝酸纤维素膜包含单克隆抗体制备的检测线、羊抗兔IgG制备的质控线。
4.一种汉坦病毒抗体检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括有效量权利要求1所述的单克隆抗体和汉坦病毒NP蛋白。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒为胶体金检测试纸条，所述的试纸条包括汉坦病毒NP蛋白制备的乳胶垫、硝酸纤维素膜、吸水纸、PVC背板；所述的硝酸纤维素膜包含汉坦病毒NP蛋白制备的检测线、单克隆抗体制备的质控线。
6.一种抗原-抗体双重检测汉坦病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求3所述的试剂盒和权利要求5所述的试剂盒。
7.一种如权利要求1所述的单克隆抗体在制备汉坦病毒检测试剂中的应用。
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2022
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