CN114134088B - 一种南酸枣发酵物及其制备方法和应用 - Google Patents

一种南酸枣发酵物及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一种南酸枣发酵物及其制备方法和应用。本发明将冠突散囊菌、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母菌和黑曲霉复配得到复合菌剂对南酸枣进行发酵，使得到的南酸枣发酵物中多酚的质量百分含量达到2.45～3.76％，抗氧化活性清除DPPH自由基和ABTS+自由基分别提高了50.47％～84.05％和67.86％～103.57％，保湿率也得到了显著提升，可以增加皮肤弹性，具有抗氧化、抗衰老的功效，作为化妆品成分使用。

Description

一种南酸枣发酵物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一种南酸枣发酵物及其制备方法和应用。
背景技术
微生物发酵技术是利用微生物来发酵植物原料，本质为利用微生物代谢过程中产生的各种酶类来催化植物原料中的有效成分的一种生物转化反应。微生物具有强大的分解转化能力，通过在生长代谢过程中产生的纤维素酶、木质素酶和果胶酶等多种胞外酶，催化降解植物细胞壁，提高细胞膜通透性，增加植物中有效成分的溶出；此外，多种胞外酶还可以将大分子物质降解为易被吸收的小分子物质。并且微生物发酵技术还具有成本低、无溶剂残留、不易致敏等特点，成为当今研究和开发的热点，尤其是在化妆品原料开发领域应用非常广泛。
目前微生物发酵存在以下几个问题：(1)菌剂纯度不高，杂菌多，有效活菌数低，繁殖能力和产酶能力不稳定；(2)目前多采用单一菌种，或开放环境下发酵，因此产生的酶系比较单一，菌种的数量和质量不可控，产品的风味单调，产品存在不可控性；(3)采用自然发酵，受到环境因素影响大，发酵速度较慢。如何利用微生物实现植物发酵产物活性功能优化是微生物发酵技术行业亟待解决的问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种南酸枣发酵物及其制备方法和应用，增大南酸枣活性成分的含量，提高南酸枣的附加值，为抗氧化、抗衰老化妆品的研发奠定基础。
本发明提供了一种复合菌剂，包括如下质量份的组分：冠突散囊菌(Eurotiumcristatum)20～50份、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)20～40份、酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)10～40份和黑曲霉(Aspergillus niger)10～30份。
优选的，所述复合菌剂包括如下质量份的组分：冠突散囊菌30份、枯草芽孢杆菌30份、酿酒酵母菌30份和黑曲霉10份；
或者包括如下质量份的组分：冠突散囊菌40份、枯草芽孢杆菌30份、酿酒酵母菌15份和黑曲霉15份；
或者包括如下质量份的组分：冠突散囊菌25份、枯草芽孢杆菌25份、酿酒酵母菌25份和黑曲霉25份。
优选的，所述冠突散囊菌的活菌浓度为1×107cfu/mL；所述枯草芽孢杆菌的活菌浓度为1×108cfu/mL；所述酿酒酵母菌的活菌浓度为1×108cfu/mL；所述黑曲霉的活菌浓度为1×109cfu/mL。
本发明还提供了一种南酸枣发酵物的制备方法，包括如下步骤：
将南酸枣汁与所述复合菌剂混合，25～45℃发酵3～15d，发酵液中包含所述南酸枣发酵物。
优选的，所述南酸枣汁包括将新鲜南酸枣与水混合，打浆制得；所述新鲜南酸枣与水的质量比为1:1；所述复合菌剂与南酸枣汁的质量比为1～10:100。
优选的，所述发酵的相对湿度为50％～90％。
本发明还提供了所述制备方法得到的南酸枣发酵物，所述南酸枣发酵物中多酚的质量百分含量≥2.45％。
本发明还提供了所述南酸枣发酵物在制备化妆品中的应用。
优选的，所述南酸枣发酵物在化妆品中的添加量为2wt.％～40wt.％。
本发明还提供了一种抗氧化保湿霜，按照质量百分含量计，包括2％～40％南酸枣发酵物和余量辅料。
本发明提供了一种复合菌剂，包括如下质量份的组分：冠突散囊菌20～50份；枯草芽孢杆菌20～40份；酿酒酵母菌10～40份和黑曲霉10～30份。本发明冠突散囊菌在发酵过程中可分泌多种酶，显著提高多酚、黄酮、多糖等活性物质的含量，增强发酵产物的抗氧化活性；枯草芽孢杆菌可以产生降解多种复杂糖类的酶，从而降解果胶、纤维素等物质，同时还能合成多种维生素；酿酒酵母菌可以去除小分子多糖；黑曲霉能够分泌蛋白酶，降解大分子蛋白质，使其变成利于消化吸收的肽类和氨基酸。本发明将冠突散囊菌、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母菌和黑曲霉通过特定比例混合获得复合菌剂，能够大大提高发酵过程多酚、黄酮等活性成分的含量，同时还能产生氨基酸、维生素、微量元素等对皮肤有益的其它成分。
本发明利用复合菌剂发酵南酸枣，通过严格控制发酵条件，使得到的南酸枣发酵物中多酚的质量百分含量达到2.45％～3.76％，是南酸枣汁的1.83～2.81倍，抗氧化活性清除DPPH自由基和ABTS+自由基分别提高了50.47％～84.05％和67.86％～103.57％，保湿率也得到了显著提升，可以增加皮肤弹性，具有抗氧化、抗衰老的功效，作为化妆品成分使用。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为皮肤角质层含水量变化图；
图2为皮肤经皮水分流失变化图；
图3为皮肤弹性R2值。
具体实施方式
本发明提供了一种复合菌剂，包括如下质量份的组分：冠突散囊菌20～50份、枯草芽孢杆菌20～40份、酿酒酵母菌10～40份和黑曲霉10～30份。
在本发明中，按质量份数计，所述复合菌剂包括冠突散囊菌20～50份，优选为25～45份，进一步优选为30～40份。本发明在具体实施过程中，所述冠突散囊菌的质量份可以是20～50中的任意数值，例如20份、30份或40份。本发明所述冠突散囊菌的活菌浓度为1×107cfu/mL。本发明所述冠突散囊菌在发酵过程中可分泌多种酶，显著提高多酚、黄酮、多糖等活性物质的含量，从而极大增强发酵产物的抗氧化活性。
在本发明中，按质量份数计，所述复合菌剂包括枯草芽孢杆菌20～40份，优选为25～35份，进一步优选为28～30份。本发明在具体实施过程中，所述枯草芽孢杆菌的质量份可以是20～40中的任意数值，例如25份或30份。本发明所述枯草芽孢杆菌的1×108cfu/mL。本发明所述枯草芽孢杆菌可以产生降解多种复杂糖类的酶，从而降解果胶、纤维素等物质，同时还能合成多种维生素。
在本发明中，按质量份数计，所述复合菌剂包括酿酒酵母菌10～40份，优选为15～30份，进一步优选为20～25份。本发明在具体实施过程中，所述酿酒酵母菌的质量份可以是10～40中的任意数值，例如15份、25份或30份。本发明所述酿酒酵母菌的活菌浓度为1×108cfu/mL。本发明所述酿酒酵母菌可以去除小分子多糖。
在本发明中，按质量份数计，所述复合菌剂包括黑曲霉10～30份，优选为15～25份，进一步优选为18～20份。本发明在具体实施过程中，所述黑曲霉的质量份可以是10～30中的任意数值，例如10份、15份或25份。本发明所述黑曲霉的1×109cfu/mL。本发明所述黑曲霉能够分泌蛋白酶，降解大分子蛋白质，使其变成利于消化吸收的肽类和氨基酸。
本发明对冠突散囊菌、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母菌和黑曲霉的来源没有严格要求，可购买获得，并且不受生产厂家的限制，只要保证是冠突散囊菌、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母菌和黑曲霉即可。本发明在具体实施过程中，所述冠突散囊菌、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母菌和黑曲霉均来自实验室内自行鉴定保藏。
本发明通过将冠突散囊菌、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母菌和黑曲霉按照一定比例复配，获得复合菌剂，能够显著提高发酵过程多酚、黄酮等活性成分的产量，同时还能产生氨基酸、维生素、微量元素等对皮肤有益的其它成分。
本发明还提供了一种南酸枣发酵物的制备方法，包括如下步骤：
将南酸枣汁与所述复合菌剂混合，25～45℃发酵3～15d，发酵液中包含所述南酸枣发酵物。
本发明所述南酸枣汁优选包括将新鲜南酸枣与水混合，打浆制得。本发明所述新鲜南酸枣与水的质量比优选为1:1。本发明所述新鲜南酸枣优选为洗净和去核后的新鲜南酸枣。本发明洗净和去核方式没有严格要求，常规进行即可。本发明所述南酸枣汁中，含有质量浓度为1.34％的多酚。
得南酸枣汁后，本发明将南酸枣汁与所述复合菌剂混合，发酵得发酵液。本发明所述发酵液中包含南酸枣发酵物。本发明所述复合菌剂与南酸枣汁的质量比优选为1～10:100，进一步优选为2～9:100，更优选为3～8:100，最优选为5～6:100。本发明在具体实施过程中，所述复合菌剂与南酸枣汁的质量比可以是1～10:100中的任意数值，例如3:100、5:100或8:100。
在本发明中，所述发酵的温度优选为25～45℃，进一步优选为30～42℃，更优选为37～40℃；所述发酵的时间优选为3～15d，进一步优选为5～10d，更优选为7～8d；所述发酵的相对湿度优选为50～90％，进一步优选为60～80％，更优选为70％。
本发明将南酸枣汁与所述复合菌剂混合前，优选对所述南酸枣汁进行灭菌处理，得无菌南酸枣汁。本发明所述灭菌的温度优选为121℃；所述灭菌的时间优选为15～30min，进一步优选为18～28min，更优选为20～25min。本发明对所述灭菌的方式没有严格要求，使用常规的设备即可，如灭菌锅。
得发酵液后，本发明优选对发酵液进行分离处理，收集上清液，得南酸枣发酵物。本发明所述分离的方式优选为离心。本发明对所述离心的转速、时间和设备没有严格要求，保证得到发酵上清液即可。本发明得到的南酸枣发酵物为淡棕色透明液体，无毒、无刺激性、无腐蚀性，理化性质稳定，适用人群广，产品不含对人体皮肤有害的物质，属于绿色、安全、环保的化妆品用原料。
本发明利用所述复合菌剂发酵南酸枣汁，严格控制发酵的时间、温度和相对湿度，能够大大提高南酸枣多酚、黄酮等活性成分的含量，同时还能产生氨基酸、维生素、微量元素等对皮肤有益的其它成分。实施例结果表明，发酵得发酵液经分离处理后，得到的南酸枣发酵物中含有质量浓度为2.45％～3.76％的多酚，是南酸枣汁的1.83～2.81倍，抗氧化活性清除DPPH自由基和ABTS+自由基分别提高了50.47％～84.05％和67.86％～103.57％，保湿率也得到了显著提升。
本发明还提供了所述南酸枣发酵物在制备化妆品中的应用。在本发明中，所述南酸枣发酵物在化妆品中的添加量优选为2wt.％～40wt.％，进一步优选为5wt.％～35wt.％，更优选为10wt.％～30wt.％，最优选为15wt.％～25wt.％。本发明对所述化妆品的具体类型不作限定，可以是任意的化妆品类型，例如水、精华、凝胶、乳液、膏或霜。本发明实施例结果表明，以南酸枣发酵物为主要活性物制备得到的抗氧化保湿霜保湿效果显著，且同时可以明显增加皮肤弹性，具有抗氧化、抗衰老的功效。
本发明在制备水、精华、凝胶、乳液、膏或霜时，按照质量百分含量计，包括2％～40％南酸枣发酵物和余量辅料。本发明对辅料的具体种类和用量不作限定，根据需要常规选择即可。
本发明还提供了一种抗氧化保湿霜，按照质量百分含量计，包括16/18醇、硬脂酸甘油酯、辛酸/癸酸甘油三酯、环己硅氧烷、白油、乳木果油、卡波U-20、黄原胶、甘油、丙二醇、丁二醇、β-葡聚糖、尿囊素、尼泊金甲酯、香精和苯氧乙醇中的一种或多种。本发明对所述抗氧化保湿霜中每种辅料的添加量没有严格要求，满足质量百分百的需求即可。本发明实施例结果表明，本发明提供的抗氧化保湿霜可以增加皮肤弹性，具有抗氧化、抗衰老的功效。
为了进一步说明本发明，下面结合附图和实施例对本发明提供的技术方案进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
制备南酸枣发酵物
取新鲜南酸枣1kg洗净，去核，加1倍量去离子水打浆，得到南酸枣汁，并于121℃下高压灭菌20min，得到无菌南酸枣汁；在无菌南酸枣汁中接入5％质量比复合菌种，复合菌种中冠突散囊菌、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母菌、黑曲霉的质量组分比为30份(30g，活菌浓度为1×107cfu/mL)：30份(30g，1×108cfu/mL)：30份(30g，活菌浓度为1×108cfu/mL)：10份(10g，活菌浓度为1×109cfu/mL)。在30℃和相对湿度80％条件下培养发酵10天；发酵结束后，将混合发酵液离心，得到上清液，即为南酸枣发酵物。
实施例2
制备南酸枣发酵物
取新鲜南酸枣1kg洗净，去核，加1倍量去离子水打浆，得到南酸枣汁，并于121℃下高压灭菌15min，得到无菌南酸枣汁；在无菌南酸枣汁中接入3％质量比复合菌种，复合菌种中冠突散囊菌、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母菌、黑曲霉的质量组分比为40份(40g，活菌浓度为1×107cfu/mL)：30份(30g，1×108cfu/mL)：15份(15g，1×108cfu/mL)：15份(15g，活菌浓度为1×109cfu/mL)。在37℃和相对湿度60％条件下培养发酵5天；发酵结束后，将混合发酵液离心，得到上清液，即为南酸枣发酵物。
实施例3
制备南酸枣发酵物
取新鲜南酸枣1kg洗净，去核，加1倍量去离子水打浆，得到南酸枣汁，并于121℃下高压灭菌30min，得到无菌南酸枣汁；在无菌南酸枣汁中接入8％质量比复合菌种，复合菌种中冠突散囊菌、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母菌、黑曲霉的质量组分比为25份(25g，活菌浓度为1×107cfu/mL)：25份(25g，1×108cfu/mL)：25份(25g，1×108cfu/mL)：25份(25g，活菌浓度为1×109cfu/mL)。在42℃和相对湿度70％条件下培养发酵7天；发酵结束后，将混合发酵液离心，得到上清液，即为南酸枣发酵物。
对比例1
同实施例1，区别在于得到无菌南酸枣汁后不接入复合菌剂发酵，直接离心，取上清液，得南酸枣汁上清液。
对比例2
同实施例1，区别在于得到无菌南酸枣汁后接入5％质量比的冠突散囊菌。
对比例3
同实施例1，区别在于得到无菌南酸枣汁后接入5％质量比的枯草芽孢杆菌。
对比例4
同实施例1，区别在于得到无菌南酸枣汁后接入5％质量比的酿酒酵母菌。
对比例5
同实施例1，区别在于得到无菌南酸枣汁后接入5％质量比复合菌剂，复合菌种中冠突散囊菌和黑曲霉的质量组分比为30份(30g，活菌浓度为1×107cfu/mL)：10份(10g，活菌浓度为1×109cfu/mL)。
对比例6
同实施例1，区别在于得到无菌南酸枣汁后接入5％质量比复合菌剂，复合菌种中枯草芽孢杆菌和酿酒酵母菌的质量组分比为30份(30g，活菌浓度为1×108cfu/mL)：30份(30g，活菌浓度为1×108cfu/mL)。
对比例7
同实施例1，区别在于得到无菌南酸枣汁后接入5％质量比复合菌剂，复合菌种中冠突散囊菌、酿酒酵母菌、黑曲霉的质量组分比为30份(30g，活菌浓度为1×107cfu/mL)：30份(30g，活菌浓度为1×108cfu/mL)：10份(10g，活菌浓度为1×109cfu/mL)。
对比例8
同实施例1，区别在于得到无菌南酸枣汁后接入5％质量比复合菌剂，复合菌种中冠突散囊菌、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母菌的质量组分比为30份(30g，活菌浓度为1×107cfu/mL)：30份(30g，活菌浓度为1×108cfu/mL)：30份(30g，活菌浓度为1×108cfu/mL)。
测试例1
多酚含量测定
以没食子酸为标准品(购自北京中科质检生物技术有限公司)，采用酒石酸亚铁分光光度法，在波长540nm处测定吸光度(A)。具体的：用去离子水配制浓度为0.25mg/mL的没食子酸标准液，以没食子酸标准溶液的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，在540nm下测得的标准曲线回归方程为A＝27.13C+0.0027(r＝0.9993)，根据标准曲线对应得出实施例1～3和对比例2～8南酸枣发酵物和对比例1南酸枣汁中多酚的含量，结果如表1所示。
表1实施例1～3和对比例2～8南酸枣发酵物、对比例1南酸枣汁中的多酚含量
由表1可以看出，本发明制备得到的南酸枣发酵物中多酚的质量百分含量达到2.45％～3.76％，是南酸枣汁的1.83～2.81倍，本发明提供的复合菌剂相比其他菌剂能够显著增加多酚含量。
测试例2
抗氧化试验
(1)对DPPH自由基的清除能力：
DPPH乙醇溶液的配置：准确称取DPPH 20mg，加入无水乙醇溶解并定容于250mL容量瓶中，获得浓度为2.0×10-4mol/L的DPPH乙醇溶液；0～4℃下避光保存，现配现用，4h内有效。
准确量取1mL待测液、1mL无水乙醇分别与1mL DPPH乙醇溶液混匀，反应30min后，在517nm处测吸光度值(分别记为A1、A2)；量取1mL待测液与1mL无水乙醇混匀，反应30min后，在517nm处测吸光度值(记为A3)。根据公式计算待测液的DPPH清除率，结果如下表2。
清除率＝[1-(A1-A3)/A2]×100％
注：待测液为实施例1南酸枣发酵物、实施例2南酸枣发酵物、实施例3南酸枣发酵物、对比例1南酸枣汁、对比例2南酸枣发酵物、对比例3南酸枣发酵物、对比例4南酸枣发酵物、对比例5南酸枣发酵物、对比例6南酸枣发酵物、对比例7南酸枣发酵物、对比例8南酸枣发酵物或阳性样品VC(0.05mg/mL)
表2南酸枣发酵物和南酸枣汁的DPPH自由基的清除作用
由表2可以看出，对比例1南酸枣汁对DPPH自由基的清除率比阳性对照VC低，但是经过发酵得到的南酸枣发酵物，对DPPH自由基的清除率有了显著提升，不仅超过了阳性对照，而且相比南酸枣汁，其清除率的增长量为50.47％～84.05％。本发明使用的复合菌剂在南酸枣汁发酵过程中可以显著增加对DPPH自由基的清除率。
(2)对ABTS+自由基的清除能力：取5mL 7mmol/LABTS和88μL 140mmol/L过硫酸钾溶液混合得到储备液，静置过夜后用无水乙醇稀释，使其在734nm波长下的吸光度为0.7±0.02，为工作液。取40μL待测样品，加入4mL ABTS工作液，震荡混匀30s，反应6min后于734nm下测定吸光度，计算清除率，结果如下表3。
ABTS+自由基清除率＝(1-A样品/A工作液)×100％。
注：A样品为实施例1南酸枣发酵物、实施例2南酸枣发酵物、实施例3南酸枣发酵物、对比例1南酸枣汁、对比例2南酸枣发酵物、对比例3南酸枣发酵物、对比例4南酸枣发酵物、对比例5南酸枣发酵物、对比例6南酸枣发酵物、对比例7南酸枣发酵物、对比例8南酸枣发酵物或阳性样品VC(0.05mg/mL)。
表3南酸枣发酵物和南酸枣汁的ABTS+自由基的清除作用
由表3可以看出，对比例1南酸枣汁对ABTS+自由基的清除率比阳性对照VC低，但是经过发酵得到的南酸枣发酵物，对ABTS+自由基的清除率有了显著提升，不仅超过了阳性对照，而且相比南酸枣汁，其清除率的增长量为67.86％～103.57％。本发明使用的复合菌剂在南酸枣汁发酵过程中可以显著增加对ABTS+自由基的清除率。本发明使用的复合菌剂在南酸枣汁发酵过程中可以显著增加抗氧化活性。
测试例3
保湿效果试验
选用13个玻璃板(50*100mm)，分别贴上3M胶带，依次将100mg实施例1南酸枣发酵物、实施例2南酸枣发酵物、对比例1南酸枣汁、对比例2南酸枣发酵物、对比例3南酸枣发酵物、对比例4南酸枣发酵物、对比例5南酸枣发酵物、对比例6南酸枣发酵物、对比例7南酸枣发酵物、对比例8南酸枣发酵物、10％甘油(阳性对照)和蒸馏水(空白对照)均匀涂布在胶带上，准确称量胶带质量，以蒸馏水为对照，置于干燥器内(干燥器没放置醋酸钾饱和溶液来控制器皿内相对湿度为60％)，干燥4h和24h后，称重计算保湿率，结果如下表4。
保湿率＝M2/M1×100％
注：M1：干燥前样品重量；M2：干燥后样品重量。
表4南酸枣发酵产物、南酸枣汁的保湿率
由表4可以看出，经过发酵得到的南酸枣发酵物，相比对比例1南酸枣汁保湿率有了显著提升，增长量为39.32％～77.43％。本发明使用的复合菌剂在南酸枣汁发酵过程中可以显著保湿率。
实施例4
抗氧化保湿霜的制备
按质量百分含量备料：3.5％16/18醇，2.5％硬脂酸甘油酯、3.0％癸酸甘油三酯、5.0％环己硅氧烷、1％白油、1％乳木果油、0.15％卡波U-20、0.15％黄原胶、5％甘油、1％丙二醇、1％丁二醇、60.85％离子水、5％β-葡聚糖、0.1％尿囊素、0.1％尼泊金甲酯、10％实施例1南酸枣发酵物、0.15％香精和0.5％苯氧乙醇。
(具体的：3.5g 16/18醇，2.5g硬脂酸甘油酯、3.0g癸酸甘油三酯、5.0g环己硅氧烷、1.0g白油、1.0g乳木果油、0.15g卡波U-20、0.15g黄原胶、5.0g甘油、1.0g丙二醇、1.0g丁二醇、60.85g去离子水、5.0gβ-葡聚糖、0.1g尿囊素、0.1g尼泊金甲酯、10.0g实施例1南酸枣发酵物、0.15g香精和0.5g苯氧乙醇。)
将16/18醇，硬脂酸甘油酯、癸酸甘油三酯、环己硅氧烷、白油和乳木果油混合，加热熔融，得第一混合物；
将卡波U-20、黄原胶、甘油、丙二醇、丁二醇和离子水加热搅拌混合，卡波U-20充分溶解后加入β-葡聚糖、尿囊素和尼泊金甲酯，搅拌均匀，得第二混合物；
将第二混合物倒入第一混合物，搅拌后均质乳化；待温度降至50℃以下依次加入实施例1南酸枣发酵物、香精和苯氧乙醇，静置，冷却，灌装。
对比例9
空白抗氧化保湿霜的制备：同实施例4，区别在于不含有南酸发酵物，水的添加量为70.85％，其它都相同。
测试例4
抗氧化保湿霜效果评价
(1)保湿效果测试
受试者：15名年龄18～50岁身体健康志愿者，无皮肤病史及化妆品过敏史；面部测试区域皮肤角质层水分含量的基础值在15～45之间。试验前受试者需用特定提供的洁面乳清洁面部区域，在测试环境中等待至少20min，测试期间不得进食、饮水和进行剧烈的活动。
测试环境：温度(20±2)℃，相对湿度(50％±10％)。
测试方法：受试者用专用洁面乳清洁面部后，在测试环境中平衡20min，测定皮肤的水分含量、经皮水分流失量；样品(实施例4抗氧化保湿霜)及空白对照区(对比例8空白抗氧化保湿霜)按测试区域随机分布表分布于志愿者面部区域，每个区域大小为3.0cm×3.0cm，样品用量为(2.0±0.1)mg/cm2。在产品使用前、使用第7、14、21、28、35、42、49、56和63天，VapoMeter经皮水分流失测量仪(芬兰Delfin)和MoistureMeter SC皮肤角质层水合测量仪(芬兰Delfin)靠近受试者皮肤进行皮肤角质层水分含量、皮肤经皮水分流失测试，测试结果如图1和图2。
从图1水分含量数据趋势可以看出，受试者在使用本发明制得的抗氧化保湿霜后，皮肤角质层水分含量明显提高，并且随着时间推移，使用63天后，皮肤的水分值增加至57％，比未使用前水分含量增加了76％。而空白对照产品在连续使用63天后，皮肤的水分值增加至41％，仅比未使用前水分含量增加了约22％。本发明制得的抗氧化保湿霜保湿功效是对比例8空白抗氧化保湿霜的3倍。
从图2中TEWL变化可知，受试者在使用本发明制得的抗氧化保湿霜后，TEWL从最初的22左右降低至15左右，降低量达到33％；而使用空白对照后，TEWL降低量仅约10％。通过数据趋势线可知，本发明制得的抗氧化保湿霜可以显著降低TEWL值，明显增强皮肤的屏障功能。
测试例5
皮肤弹性测试
选取外眼角有皱纹人群(两侧皱纹等级为1～7之间，且左右两侧皱纹等级相同者)20名，年龄在30～60岁，男女比例各50％。受试部位前15天不能使用任何产品(化妆品、外用药品、内服保健品)。试验前，要求受试志愿者对面部进行清洗并在清洗后2h进入气候控制室(22±1℃，相对湿度50％)静坐20min以上，并保持放松状态。
试验中按随机表进行半边脸测试，一侧为样品，另一侧为对照，选取志愿者的左右眼角用ElastiMeter皮肤弹性测量仪(芬兰Delfin)进行皮肤弹性测试，测试三次取平均值作为左右眼角皮肤弹性数据。测试结束后，志愿者需按要求使用，一侧眼角涂抹样品(实施例4抗氧化保湿霜)，另一侧眼角涂抹对照品(对比例8空白抗氧化保湿霜)。连续使用63天，并要求试验者在试验的第7、14、21、28、35、42、49、56及63天进行回访，测定皮肤弹性R2值，结果见附图3。
从图3中可以明显看出，本发明制备的抗氧化保湿霜对眼角皮肤的作用非常显著，随着使用时间的增长，皮肤弹性R2值呈显著上升趋势，而空白对照对皮肤弹性R2值作用不明显。说明本发明制备的抗氧化保湿霜能够显著提升皮肤弹性，具有抗衰老功效。
本发明提供的复合菌剂使得到的南酸枣发酵物中多酚的质量百分含量达到2.45％～3.76％，抗氧化活性清除DPPH自由基和ABTS+自由基分别提高了50.47％～84.05％和67.86％～103.57％，保湿率也得到了显著提升，可以增加皮肤弹性，具有抗氧化、抗衰老的功效，作为化妆品成分使用。
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。

Claims (9)

1.一种南酸枣发酵物的制备方法，其特征在于，由如下步骤组成：
将新鲜南酸枣与水混合，打浆制得南酸枣汁；
将所述南酸枣汁与复合菌剂混合，25~45℃发酵3~15d，发酵液中包含所述南酸枣发酵物；
所述复合菌剂由如下质量份的组分组成：冠突散囊菌（Eurotium cristatum）20~50份、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）20~40份、酿酒酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）10~40份和黑曲霉（Aspergillus niger）10~30份。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述复合菌剂由如下质量份的组分组成：冠突散囊菌30份、枯草芽孢杆菌30份、酿酒酵母菌30份和黑曲霉10份；
或者由如下质量份的组分组成：冠突散囊菌40份、枯草芽孢杆菌30份、酿酒酵母菌15份和黑曲霉15份；
或者由如下质量份的组分组成：冠突散囊菌25份、枯草芽孢杆菌25份、酿酒酵母菌25份和黑曲霉25份。
3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述冠突散囊菌的活菌浓度为1×107cfu/mL；所述枯草芽孢杆菌的活菌浓度为1×108cfu/mL；所述酿酒酵母菌的活菌浓度为1×108cfu/mL；所述黑曲霉的活菌浓度为1×109cfu/mL。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述新鲜南酸枣与水的质量比为1:1；所述复合菌剂与南酸枣汁的质量比为1~10:100。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述发酵的相对湿度为50%~90%。
6.权利要求1~5任一项所述制备方法得到的南酸枣发酵物，其特征在于，所述南酸枣发酵物中多酚的质量百分含量≥2.45%。
7.权利要求6所述的南酸枣发酵物在制备化妆品中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述南酸枣发酵物在化妆品中的添加量为2wt.%~40wt.%。
9.一种抗氧化保湿霜，其特征在于，按照质量百分含量计，包括2%~40%权利要求6所述的南酸枣发酵物和余量辅料。
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