CN113957138B

CN113957138B - 与罕见遗传病有关的突变基因及其应用

Info

Publication number: CN113957138B
Application number: CN202111382224.XA
Authority: CN
Inventors: 刘哲; 梁庆渊; 赵娜娜; 赖开生; 刘昕超; 高璇; 李方玉; 侯青; 惠汝太
Original assignee: Bosinor Beijing Medical Laboratory Co ltd
Current assignee: Bosinor Beijing Medical Laboratory Co ltd
Priority date: 2021-11-22
Filing date: 2021-11-22
Publication date: 2022-07-12
Anticipated expiration: 2041-11-22
Also published as: CN113957138A

Abstract

本发明涉及人类遗传学和内科心血管技术领域，具体涉及了与罕见遗传病有关的突变基因，与野生型NR3C2基因编码DNA的参考序列相比，突变基因的核苷酸序列为SEQ ID NO:3；在基因组位置chr4:149357409处，碱基T突变为碱基C；参考基因组版本是GRCh37。本发明还涉及上述突变基因在制备检测试剂盒中的应用。本发明提供的突变基因可以作为临床辅助诊断的生物标志物；检测该变异的携带者，为受试者提供优生优育指导和遗传咨询，减少患儿出生，对假性醛固酮减少症的早期诊断，或者辅助临床判断具有重要意义。

Description

与罕见遗传病有关的突变基因及其应用

技术领域

本发明涉及人类遗传学和内科心血管技术领域，尤其涉及与罕见遗传病有关的突变基因及其应用。

背景技术

假性醛固酮减少症(pseudohypoaldosteronism，PHA)是一种罕见的表现为盐皮质激素抵抗的遗传性疾病，又称Cheek-Perry综合征，由Cheek和Perry于1958年首次报道，是一种发生于婴儿期的结肠、汗腺、唾液腺等多器官失盐综合征。多在新生儿期发病，可于生后数小时出现症状，反复呕吐、腹泻，渴感减退或消失，生长发育落后(甚至白痴)为主要症状，其他表现为肾醛固酮抵抗，代谢性酸中毒，脱水，低钠血症，高钾血症，血清醛固酮升高，血浆肾素活性增加；有些病例则于限盐或应用醛固酮拮抗剂后才出现症状，并随年龄增长而自行缓解。

目前文献报道NR3C2基因、SCNN1G基因突变可引起假性醛固酮减少症，其中NR3C2基因编码盐皮质激素受体，介导醛固酮在限制性靶细胞内的水盐平衡调节。该蛋白作为一种配体依赖的转录因子，与盐皮质激素反应元件结合，使靶基因活化。

目前发现大量NR3C2基因突变位点，例如c.2581C>T、2578T>G、c.2471G>A等等，但是仍存在未知的NR3C2基因突变位点，进一步发现新的NR3C2基因的突变位点对于研究假性醛固酮减少症的发病机制，对假性醛固酮减少症的早期诊断，或者辅助临床判断具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是针对假性醛固酮减少症，提供一种与罕见遗传病有关的突变基因及其应用。

本发明提供的技术方案如下：

一、本发明提供与罕见遗传病有关的突变基因，与野生型NR3C2基因编码DNA的参考序列相比，突变基因的核苷酸序列为SEQ ID NO:3；在基因组位置chr4:149357409处，碱基T突变为碱基C；参考基因组版本是GRCh37。

二、本发明还提供了上述突变基因在制备检测试剂盒中的应用。

优选地，所述检测试剂盒包括引物SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2。

优选地，所述检测试剂盒还包括Taq DNA聚合酶和PCR缓冲液。

三、本发明的原理和有益效果在于：

本发明公开的突变基因可以作为临床辅助诊断的生物标志物，对假性醛固酮减少症的早期诊断，或者辅助临床判断具有重要意义；基于突变基因开发的检测试剂盒，可以检测出具有假性醛固酮减少症的患者，为受试者提供优生优育指导和遗传咨询，减少患儿出生。

附图说明

图1为实施例3的家系图；

图2为实施例3中先证者、先证者大哥、先证者母亲等人的Sanger测序图；

图3为实施例3家系中先证者父亲、先证者三哥等人的Sanger测序图。

具体实施方式

下面通过具体实施方式进一步详细说明：

实施例1-与罕见遗传病有关的突变基因

与罕见遗传病有关的突变基因，具体突变如下表1所示：

表1与罕见遗传病有关的突变基因的具体检测结果

基因

基因组位置

转录本号

碱基改变

氨基酸改变

参考基因组版本

外显子号

NR3C2

chr4:149357409

NM_000901

c.604T>C

p.Ser202Pro

GRCh37/hg19

Exon2

(1)在基因组位置chr4:149357363-chr2:149357412处，野生型NR3C2基因的序列为：

为野生型 NR3C2基因在基因组chr4:149357409处的碱基。

在基因组位置相应位置处，与罕见遗传病有关的突变基因的序列为：

为突变基因 NR3C2在基因组chr4:149357409处的碱基。

(2)转录本号为NM_000901时，野生型NR3C2基因编码DNA的参考序列为：

为野生型NR3C2基因编码DNA参考序列的第604位突变前碱基。

c.604T>C表示：与野生型NR3C2基因编码DNA的参考序列相比，突变基因NR3C2的第604 位点的碱基T突变为碱基C，具体核苷酸序列为SEQ ID NO:3。

(4)转录本号为NM_000901时，野生型NR3C2基因编码蛋白为：

为野生型NR3C2基因编码蛋白的第202位氨基酸丝氨酸(Ser,S)。

p.Ser202Pro表示：与野生型NR3C2基因编码蛋白的氨基酸序列相比，突变基因NR3C2编码蛋白的氨基酸第202位的丝氨酸(Ser,S)突变为脯氨酸(Pro,P)，具体氨基酸序列为SEQ ID NO:4。

(5)查询人群频率数据库发现NR3C2基因c.604T>C杂合错义变异(NR3C2:p.Ser202Pro het)为罕见变异(千人基因组：无，ESP6500：无，ExAC：无)。

采用多个生物信息预测软件(包括SIFT和Polyphen-2等)交叉预测，结果多为无害(SIFT为“D”， Polyphen-2为“B”，Mut ationTaster_pred为“N”，VEST3评分为“0.470”，其他为“2个T/2个N/1个 M/1个D”)，氨基酸由极性不带电荷的丝氨酸变为非极性的脯氨酸，提示该变异所致的氨基酸改变可能会对蛋白功能产生影响。查询数据库发现该位置的氨基酸在脊椎动物中保守性好。查询ClinVar、 HGMD数据库未发现该变异，文献检索未发现该变异与疾病相关的报导。根据现有证据：该变异为罕见变异、软件预测该变异可能会对蛋白功能产生影响、该位置氨基酸在脊椎动物中保守性好，但缺乏家系连锁及功能学证据支持，所以该变异为可疑致病变异。

实施例2-与罕见遗传病有关的突变基因的检测试剂盒

与罕见遗传病有关的突变基因的检测试剂盒，包括Taq DNA聚合酶、PCR缓冲液和引物等。具体引物如下：

上游引物(NR3C2-E2-PART-F1，SEQ ID NO:1)：5'TAAAACTGAGCTGGAATCTAAGGA 3'；

下游引物(NR3C2-E2-PART-R1，SEQ ID NO:2)：5'TTAATATTTGCAGGGCTAGACACA 3'；

长度：648bp。

利用本试剂盒筛选突变的致病基因NR3C2的具体步骤为：提取待测者DNA，然后使用经设计的引物组合(SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2)对NR3C2基因进行扩增，得到PCR产物，使用1.5％的琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，选用1000bp Marker作为参考，检测验证扩增产物为预期的大小，最后对PCR产物进行测序。从NCBI(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)数据库获得参考序列和测序结果进行比对，判断待测者NR3C2基因是否携带c.604T>C杂合错义变异，协助临床确诊假性醛固酮减少症。

实施例3-家系验证实验

本实施例采用家系连锁分析方法验证与罕见遗传病有关的突变基因的致病性。

具体地，选取一个家族性假性醛固酮减少症家系中的三代成员，该家系中的先证者(女，21岁) 临床被诊断为假性醛固酮减少症。

在先证者及其家属自愿签署知情同意书的前提下，寄送5-10mL全血样本，建立病历资料库，详细记录先证者病情、家系情况等资料。本研究已得到本单位伦理委员会批准。

先证者临床概况描述：

表2 先证者临床概况

采用实施例2提供的体外检测试剂盒对先证者及其家属的NR3C2基因进行基因检测，结果如图 1-图3所示，图1为实施例3的家系图；图2为实施例3中先证者、先证者大哥、先证者母亲等人的 Sanger测序图；图3为实施例3家系中先证者父亲、先证者三哥等人的Sanger测序图。

如图1-图3所示，家系中临床诊断出假性醛固酮减少症的先证者、先证者大哥、先证者二哥、先证者母亲等人均携带了突变的NR3C2基因，而未患有假性醛固酮减少症的家系成员均未携带突变的 NR3C2基因，由此验证可以说明突变的NR3C2基因对假性醛固酮减少症的致病性。

实施例4-针对家系外正常人的验证实验

采用实施例2的假性醛固酮减少症检测试剂盒，对1100例家系外正常人进行NR3C2基因检测，结果均未能检测到该突变。

实施例5-针对家系外家族遗传性假性醛固酮减少症患者的验证实验

在中国范围内，对患有假性醛固酮减少症、肥厚型心肌病、扩张型心肌病、长QT等单基因遗传病的患者中检测NR3C2基因，患者总共1500例，每种疾病的患病人数不等，结果显示，除实施例3 提供的家系外，仅在临床诊断患有假性醛固酮减少症的2例患者中检测到突变NR3C2基因。

本实验再次验证说明突变的NR3C2致病基因的会导致假性醛固酮减少症，支持临床诊断。

以上详细描述了本发明的较佳具体实施例。应当理解，本领域的普通技术人员无需创造性劳动就可以根据本发明的构思作出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术人员依本发明的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案，皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。

序列表

<110> 百世诺（北京）医学检验实验室有限公司

<120> 与罕见遗传病有关的突变基因及其应用

<160> 4

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 24

<212> DNA

<213> homo sapiens

<400> 1

taaaactgag ctggaatcta agga 24

<210> 2

<211> 24

<212> DNA

<213> homo sapiens

<400> 2

ttaatatttg cagggctaga caca 24

<210> 3

<211> 2955

<212> DNA

<213> homo sapiens

<400> 3

atggagacca aaggctacca cagtctccct gaaggtctag atatggaaag acggtggggt 60

caagtttctc aggctgtgga gcgttcttcc ctgggaccta cagagaggac cgatgagaat 120

aactacatgg agattgtcaa cgtaagctgt gtttccggtg ctattccaaa caacagtact 180

caaggaagca gcaaagaaaa acaagaacta ctcccttgcc ttcagcaaga caataatcgg 240

cctgggattt taacatctga tattaaaact gagctggaat ctaaggaact ttcagcaact 300

gtagctgagt ccatgggttt atatatggat tctgtaagag atgctgacta ttcctatgag 360

cagcagaacc aacaaggaag catgagtcca gctaagattt atcagaatgt tgaacagctg 420

gtgaaatttt acaaaggaaa tggccatcgt ccttccactc taagttgtgt gaacacgccc 480

ttgagatcat ttatgtctga ctctgggagc tccgtgaatg gtggcgtcat gcgcgccgtt 540

gttaaaagcc ctatcatgtg tcatgagaaa agcccgtctg tttgcagccc tctgaacatg 600

acaccttcgg tttgcagccc tgctggaatc aactctgtgt cctccaccac agccagcttt 660

ggcagttttc cagtgcacag cccaatcacc cagggaactc ctctgacatg ctcccctaat 720

gttgaaaatc gaggctccag gtcgcacagc cctgcacatg ctagcaatgt gggctctcct 780

ctctcaagtc cgttaagtag catgaaatcc tcaatttcca gccctccaag tcactgcagt 840

gtaaaatctc cagtctccag tcccaataat gtcactctga gatcctctgt gtctagccct 900

gcaaatatta acaactcaag gtgctctgtt tccagccctt cgaacactaa taacagatcc 960

acgctttcca gtccggcagc cagtactgtg ggatctatct gtagccctgt aaacaatgcc 1020

ttcagctaca ctgcttctgg cacctctgct ggatccagta cattgcggga tgtggttccc 1080

agtccagaca cgcaggagaa aggtgctcaa gaggtccctt ttcctaagac tgaggaagta 1140

gagagtgcca tctcaaatgg tgtgactggc cagcttaata ttgtccagta cataaaacca 1200

gaaccagatg gagcttttag cagctcatgt ctaggaggaa atagcaaaat aaattcggat 1260

tcttcattct cagtaccaat aaagcaagaa tcaaccaagc attcatgttc aggcacctct 1320

tttaaaggga atccaacagt aaacccgttt ccatttatgg atggctcgta tttttccttt 1380

atggatgata aagactatta ttccctatca ggaattttag gaccacctgt gcccggcttt 1440

gatggtaact gtgaaggcag cggattccca gtgggtatta aacaagaacc agatgatggg 1500

agctattacc cagaggccag catcccttcc tctgctattg ttggggtgaa ttcaggtgga 1560

cagtccttcc actacaggat tggtgctcaa ggtacaatat ctttatcacg atcggctaga 1620

gaccaatctt tccaacacct gagttccttt cctcctgtca atactttagt ggagtcatgg 1680

aaatcacacg gcgacctgtc gtctagaaga agtgatgggt atccggtctt agaatacatt 1740

ccagaaaatg tatcaagctc tactttacga agtgtttcta ctggatcttc aagaccttca 1800

aaaatatgtt tggtgtgtgg ggatgaggct tcaggatgcc attatggggt agtcacctgt 1860

ggcagctgca aagttttctt caaaagagca gtggaagggc aacacaacta tttatgtgct 1920

ggaagaaatg attgcatcat tgataagatt cgacgaaaga attgtcctgc ttgcagactt 1980

cagaaatgtc ttcaagctgg aatgaattta ggagcacgaa agtcaaagaa gttgggaaag 2040

ttaaaaggga ttcacgagga gcagccacag cagcagcagc ccccaccccc acccccaccc 2100

ccgcaaagcc cagaggaagg gacaacgtac atcgctcctg caaaagaacc ctcggtcaac 2160

acagcactgg ttcctcagct ctccacaatc tcacgagcgc tcacaccttc ccccgttatg 2220

gtccttgaaa acattgaacc tgaaattgta tatgcaggct atgacagctc aaaaccagat 2280

acagccgaaa atctgctctc cacgctcaac cgcttagcag gcaaacagat gatccaagtc 2340

gtgaagtggg caaaggtact tccaggattt aaaaacttgc ctcttgagga ccaaattacc 2400

ctaatccagt attcttggat gtgtctatca tcatttgcct tgagctggag atcgtacaaa 2460

catacgaaca gccaatttct ctattttgca ccagacctag tctttaatga agagaagatg 2520

catcagtctg ccatgtatga actatgccag gggatgcacc aaatcagcct tcagttcgtt 2580

cgactgcagc tcacctttga agaatacacc atcatgaaag ttttgctgct actaagcaca 2640

attccaaagg atggcctcaa aagccaggct gcatttgaag aaatgaggac aaattacatc 2700

aaagaactga ggaagatggt aactaagtgt cccaacaatt ctgggcagag ctggcagagg 2760

ttctaccaac tgaccaagct gctggactcc atgcatgacc tggtgagcga cctgctggaa 2820

ttctgcttct acaccttccg agagtcccat gcgctgaagg tagagttccc cgcaatgctg 2880

gtggagatca tcagcgacca gctgcccaag gtggagtcgg ggaacgccaa gccgctctac 2940

ttccaccgga agtga 2955

<210> 4

<211> 984

<212> PRT

<213> homo sapiens

<400> 4

Met Glu Thr Lys Gly Tyr His Ser Leu Pro Glu Gly Leu Asp Met Glu

1 5 10 15

Arg Arg Trp Gly Gln Val Ser Gln Ala Val Glu Arg Ser Ser Leu Gly

20 25 30

Pro Thr Glu Arg Thr Asp Glu Asn Asn Tyr Met Glu Ile Val Asn Val

35 40 45

Ser Cys Val Ser Gly Ala Ile Pro Asn Asn Ser Thr Gln Gly Ser Ser

50 55 60

Lys Glu Lys Gln Glu Leu Leu Pro Cys Leu Gln Gln Asp Asn Asn Arg

65 70 75 80

Pro Gly Ile Leu Thr Ser Asp Ile Lys Thr Glu Leu Glu Ser Lys Glu

85 90 95

Leu Ser Ala Thr Val Ala Glu Ser Met Gly Leu Tyr Met Asp Ser Val

100 105 110

Arg Asp Ala Asp Tyr Ser Tyr Glu Gln Gln Asn Gln Gln Gly Ser Met

115 120 125

Ser Pro Ala Lys Ile Tyr Gln Asn Val Glu Gln Leu Val Lys Phe Tyr

130 135 140

Lys Gly Asn Gly His Arg Pro Ser Thr Leu Ser Cys Val Asn Thr Pro

145 150 155 160

Leu Arg Ser Phe Met Ser Asp Ser Gly Ser Ser Val Asn Gly Gly Val

165 170 175

Met Arg Ala Val Val Lys Ser Pro Ile Met Cys His Glu Lys Ser Pro

180 185 190

Ser Val Cys Ser Pro Leu Asn Met Thr Pro Ser Val Cys Ser Pro Ala

195 200 205

Gly Ile Asn Ser Val Ser Ser Thr Thr Ala Ser Phe Gly Ser Phe Pro

210 215 220

Val His Ser Pro Ile Thr Gln Gly Thr Pro Leu Thr Cys Ser Pro Asn

225 230 235 240

Val Glu Asn Arg Gly Ser Arg Ser His Ser Pro Ala His Ala Ser Asn

245 250 255

Val Gly Ser Pro Leu Ser Ser Pro Leu Ser Ser Met Lys Ser Ser Ile

260 265 270

Ser Ser Pro Pro Ser His Cys Ser Val Lys Ser Pro Val Ser Ser Pro

275 280 285

Asn Asn Val Thr Leu Arg Ser Ser Val Ser Ser Pro Ala Asn Ile Asn

290 295 300

Asn Ser Arg Cys Ser Val Ser Ser Pro Ser Asn Thr Asn Asn Arg Ser

305 310 315 320

Thr Leu Ser Ser Pro Ala Ala Ser Thr Val Gly Ser Ile Cys Ser Pro

325 330 335

Val Asn Asn Ala Phe Ser Tyr Thr Ala Ser Gly Thr Ser Ala Gly Ser

340 345 350

Ser Thr Leu Arg Asp Val Val Pro Ser Pro Asp Thr Gln Glu Lys Gly

355 360 365

Ala Gln Glu Val Pro Phe Pro Lys Thr Glu Glu Val Glu Ser Ala Ile

370 375 380

Ser Asn Gly Val Thr Gly Gln Leu Asn Ile Val Gln Tyr Ile Lys Pro

385 390 395 400

Glu Pro Asp Gly Ala Phe Ser Ser Ser Cys Leu Gly Gly Asn Ser Lys

405 410 415

Ile Asn Ser Asp Ser Ser Phe Ser Val Pro Ile Lys Gln Glu Ser Thr

420 425 430

Lys His Ser Cys Ser Gly Thr Ser Phe Lys Gly Asn Pro Thr Val Asn

435 440 445

Pro Phe Pro Phe Met Asp Gly Ser Tyr Phe Ser Phe Met Asp Asp Lys

450 455 460

Asp Tyr Tyr Ser Leu Ser Gly Ile Leu Gly Pro Pro Val Pro Gly Phe

465 470 475 480

Asp Gly Asn Cys Glu Gly Ser Gly Phe Pro Val Gly Ile Lys Gln Glu

485 490 495

Pro Asp Asp Gly Ser Tyr Tyr Pro Glu Ala Ser Ile Pro Ser Ser Ala

500 505 510

Ile Val Gly Val Asn Ser Gly Gly Gln Ser Phe His Tyr Arg Ile Gly

515 520 525

Ala Gln Gly Thr Ile Ser Leu Ser Arg Ser Ala Arg Asp Gln Ser Phe

530 535 540

Gln His Leu Ser Ser Phe Pro Pro Val Asn Thr Leu Val Glu Ser Trp

545 550 555 560

Lys Ser His Gly Asp Leu Ser Ser Arg Arg Ser Asp Gly Tyr Pro Val

565 570 575

Leu Glu Tyr Ile Pro Glu Asn Val Ser Ser Ser Thr Leu Arg Ser Val

580 585 590

Ser Thr Gly Ser Ser Arg Pro Ser Lys Ile Cys Leu Val Cys Gly Asp

595 600 605

Glu Ala Ser Gly Cys His Tyr Gly Val Val Thr Cys Gly Ser Cys Lys

610 615 620

Val Phe Phe Lys Arg Ala Val Glu Gly Gln His Asn Tyr Leu Cys Ala

625 630 635 640

Gly Arg Asn Asp Cys Ile Ile Asp Lys Ile Arg Arg Lys Asn Cys Pro

645 650 655

Ala Cys Arg Leu Gln Lys Cys Leu Gln Ala Gly Met Asn Leu Gly Ala

660 665 670

Arg Lys Ser Lys Lys Leu Gly Lys Leu Lys Gly Ile His Glu Glu Gln

675 680 685

Pro Gln Gln Gln Gln Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Pro Gln Ser Pro

690 695 700

Glu Glu Gly Thr Thr Tyr Ile Ala Pro Ala Lys Glu Pro Ser Val Asn

705 710 715 720

Thr Ala Leu Val Pro Gln Leu Ser Thr Ile Ser Arg Ala Leu Thr Pro

725 730 735

Ser Pro Val Met Val Leu Glu Asn Ile Glu Pro Glu Ile Val Tyr Ala

740 745 750

Gly Tyr Asp Ser Ser Lys Pro Asp Thr Ala Glu Asn Leu Leu Ser Thr

755 760 765

Leu Asn Arg Leu Ala Gly Lys Gln Met Ile Gln Val Val Lys Trp Ala

770 775 780

Lys Val Leu Pro Gly Phe Lys Asn Leu Pro Leu Glu Asp Gln Ile Thr

785 790 795 800

Leu Ile Gln Tyr Ser Trp Met Cys Leu Ser Ser Phe Ala Leu Ser Trp

805 810 815

Arg Ser Tyr Lys His Thr Asn Ser Gln Phe Leu Tyr Phe Ala Pro Asp

820 825 830

Leu Val Phe Asn Glu Glu Lys Met His Gln Ser Ala Met Tyr Glu Leu

835 840 845

Cys Gln Gly Met His Gln Ile Ser Leu Gln Phe Val Arg Leu Gln Leu

850 855 860

Thr Phe Glu Glu Tyr Thr Ile Met Lys Val Leu Leu Leu Leu Ser Thr

865 870 875 880

Ile Pro Lys Asp Gly Leu Lys Ser Gln Ala Ala Phe Glu Glu Met Arg

885 890 895

Thr Asn Tyr Ile Lys Glu Leu Arg Lys Met Val Thr Lys Cys Pro Asn

900 905 910

Asn Ser Gly Gln Ser Trp Gln Arg Phe Tyr Gln Leu Thr Lys Leu Leu

915 920 925

Asp Ser Met His Asp Leu Val Ser Asp Leu Leu Glu Phe Cys Phe Tyr

930 935 940

Thr Phe Arg Glu Ser His Ala Leu Lys Val Glu Phe Pro Ala Met Leu

945 950 955 960

Val Glu Ile Ile Ser Asp Gln Leu Pro Lys Val Glu Ser Gly Asn Ala

965 970 975

Lys Pro Leu Tyr Phe His Arg Lys

980

Claims

1.与罕见遗传病有关的突变基因NR3C2，其特征在于，所述罕见遗传病为假性醛固酮减少症，突变基因NR3C2的核苷酸序列为SEQ ID NO:3，与野生型NR3C2基因编码DNA的参考序列相比，在基因组位置chr4:149357409处，碱基T突变为碱基C；参考基因组版本是GRCh37。

2.根据权利要求1所述的与罕见遗传病有关的突变基因NR3C2在制备检测假性醛固酮减少症的试剂盒中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述检测试剂盒包括引物SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述检测试剂盒还包括Taq DNA聚合酶和PCR缓冲液。