CN113832159A

CN113832159A - 突变的家族遗传性肺动脉高压致病基因bmpr2及其应用

Info

Publication number: CN113832159A
Application number: CN202111286927.2A
Authority: CN
Inventors: 刘哲; 梁庆渊; 赵娜娜; 赖开生; 刘昕超; 高璇; 李方玉; 侯青; 惠汝太
Original assignee: Bestnovo Beijing Medical Technology Co Ltd
Current assignee: Bestnovo Beijing Medical Technology Co Ltd
Priority date: 2021-11-02
Filing date: 2021-11-02
Publication date: 2021-12-24

Abstract

本发明涉及人类遗传学和内科心血管技术领域，具体涉及了突变的家族遗传性肺动脉高压致病基因BMPR2，与野生型BMPR2基因编码DNA的参考序列相比，所述突变的家族遗传性肺动脉高压致病基因BMPR2的核苷酸序列为SEQ ID NO:7；在基因组位置chr2:203242231处，缺失碱基C；参考基因组版本是GRCh37。本发明还涉及上述突变的家族遗传性肺动脉高压致病基因BMPR2在制备家族遗传性肺动脉高压检测试剂盒中的应用。本发明提供的突变的BMPR2基因可以作为临床辅助诊断的生物标志物；检测该变异的携带者，为受试者提供优生优育指导和遗传咨询，减少患儿出生，对肺动脉高压的早期诊断，或者辅助临床判断具有重要意义。

Description

突变的家族遗传性肺动脉高压致病基因BMPR2及其应用

技术领域

本发明涉及人类遗传学和内科心血管技术领域，尤其涉及突变的家族遗传性肺动脉高压致病基因BMPR2及其应用。

背景技术

肺动脉高压(Pulmonary arterial hypertension,PAH)是指由多种异源性疾病(病因)和不同发病机制所致肺血管结构或功能改变，引起肺血管阻力和肺动脉压力升高的临床和病理生理综合征，继而发展成右心衰竭甚至死亡。发病率低，但病程凶险、预后不良，主要临床表现为：肺动脉压力和阻力进行性升高，右心室工作复合增加、衰竭和死亡。

《中国肺动脉高压诊断和治疗指南2021》指出，PAH中以先天性心脏病(congenitalheart diseace，CHD)相关PAH、遗传性PAH(heritable pulmonary arterialhypertension，HPAH)、药物和毒物相关PAH(drug-induced pulmonary hypertension，DPAH)常见，其中HPAH均为单基因常染色体显性遗传，目前已知9个致病基因：BMPR2、BMP9、ALK1、Endoglin、SMAD9、BMPR1B、TBX4、CAV1和KCNK3，可解释50％～80％的HPAH和20％～50％的散发型IPAH患者的病因。

BMPR2是PAH最常见的致病基因，可解释75％的家族HPAH及25％的IPAH散发病例。中国人群中BMPR2突变比例在HPAH和IPAH分别为53％和15％。BMPR2BMPR2基因编码跨膜丝氨酸/苏氨酸激酶的骨形态发生蛋白(BMP)受体家族的一员，编码骨形成蛋白2型受体，在调控血管增殖中起到重要作用。与不携带突变的患者相比，携带BMPR2突变的IPAH/HPAH患者发病更早，临床表型更严重，预后更差。

目前仍有部分家族HPAH无法解释，从分子水平揭示与BMPR2基因相关的肺动脉高压的发病机制，能够为肺动脉高压的临床治疗提供理论依据，对肺动脉高压的早期诊断，或者辅助临床判断具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是针对家族遗传性肺动脉高压致病基因，提供一种突变的家族遗传性肺动脉高压致病基因BMPR2及其应用。

本发明提供的技术方案如下：

一、本发明提供突变的家族遗传性肺动脉高压致病基因BMPR2，与野生型BMPR2基因编码DNA的参考序列相比，所述突变的家族遗传性肺动脉高压致病基因BMPR2的核苷酸序列为SEQ ID NO:7；在基因组位置chr2:203242231处，缺失碱基C；参考基因组版本是GRCh37。

二、本发明还提供了上述突变的家族遗传性肺动脉高压致病基因BMPR2在制备家族遗传性肺动脉高压检测试剂盒中的应用。

优选地，所述家族遗传性肺动脉高压检测试剂盒包括用于扩增致病基因BMPR2的引物，引物的序列为SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6。

优选地，所述家族遗传性肺动脉高压检测试剂盒还包括Taq DNA聚合酶和PCR缓冲液。

三、本发明的原理和有益效果在于：

本发明公开的突变的BMPR2基因可以作为临床辅助诊断家族遗传性肺动脉高压的生物标志物，对家族遗传性肺动脉高压的早期诊断，或者辅助临床判断具有重要意义；基于突变的BMPR2基因开发的检测试剂盒，可以检测出突变的BMPR2基因的患者，为受试者提供优生优育指导和遗传咨询，减少患儿出生。

附图说明

图1为实施例3的家系图；

图2为家系中携带突变的BMPR2基因的先证者、先证者母亲等人的Sanger测序图；

图3为实施例3家系中先证者父亲的Sanger测序图。

具体实施方式

下面通过具体实施方式进一步详细说明：

实施例1-突变的家族遗传性肺动脉高压致病基因BMPR2

突变的家族遗传性肺动脉高压致病基因BMPR2，具体突变如下表1所示：

表1突变的家族遗传性肺动脉高压致病基因BMPR2

基因

基因组位置

转录本号

碱基改变

氨基酸改变

参考基因组版本

外显子号

BMPR2

chr2:203242231

NM_001204

c.36delC

p.Trp13GlyfsTer34

GRCh37/hg19

Exon1

(1)具体地，在基因组位置chr2:203242198-chr2:203242247处，野生型BMPR2基因的序列为SEQ ID NO：1：

为基因组位置chr2:203242231处突变前碱基；

在基因组位置chr2:203242198-chr2:203242246处，突变的BMPR2基因的序列为SEQ ID NO:2：ATGACTTCCTCGCTGCAGCGGCCCTGGCGGGTGCCTGGCTACCATGGAC；

即，本实施例提供的突变的家族遗传性肺动脉高压致病基因BMPR2，与野生型BMPR2基因编码DNA的参考序列相比，在基因组位置chr2:203242231处，缺失碱基C；参考基因组版本是GRCh37。

(2)具体地，野生型BMPR2基因编码DNA的参考序列为SEQ ID NO:3：

为野生型BMPR2基因编码DNA的参考序列的第36位突变前碱基。

c.36delC表示：与野生型BMPR2基因编码DNA的参考序列相比，突变基因在第36位点处缺失碱基C。突变的家族遗传性肺动脉高压致病基因BMPR2的核苷酸序列为SEQ ID NO:7：

ATGACTTCCTCGCTGCAGCGGCCCTGGCGGGTGCCTGGCTACCATGGACCATCCTGCTGGTCAGCACTGCGGCTGCTTCGCAGAATCAAGAACGGCTATGTGCGTTTAAAGATCCGTATCAGCAAGACCTTGGGATAGGTGAGAGTAGAATCTCTCATGAAAATGGGACAATATTATGCTCGAAAGGTAGCACCTGCTATGGCCTTTGGGAGAAATCAAAAGGGGACATAAATCTTGTAAAACAAGGATGTTGGTCTCACATTGGAGATCCCCAAGAGTGTCACTATGAAGAATGTGTAGTAACTACCACTCCTCCCTCAATTCAGAATGGAACATACCGTTTCTGCTGTTGTAGCACAGATTTATGTAATGTCAACTTTACTGAGAATTTTCCACCTCCTGACACAACACCACTCAGTCCACCTCATTCATTTAACCGAGATGAGACAATAATCATTGCTTTGGCATCAGTCTCTGTATTAGCTGTTTTGATAGTTGCCTTATGCTTTGGATACAGAATGTTGACAGGAGACCGTAAACAAGGTCTTCACAGTATGAACATGATGGAGGCAGCAGCATCCGAACCCTCTCTTGATCTAGATAATCTGAAACTGTTGGAGCTGATTGGCCGAGGTCGATATGGAGCAGTATATAAAGGCTCCTTGGATGAGCGTCCAGTTGCTGTAAAAGTGTTTTCCTTTGCAAACCGTCAGAATTTTATCAACGAAAAGAACATTTACAGAGTGCCTTTGATGGAACATGACAACATTGCCCGCTTTATAGTTGGAGATGAGAGAGTCACTGCAGATGGACGCATGGAATATTTGCTTGTGATGGAGTACTATCCCAATGGATCTTTATGCAAGTATTTAAGTCTCCACACAAGTGACTGGGTAAGCTCTTGCCGTCTTGCTCATTCTGTTACTAGAGGACTGGCTTATCTTCACACAGAATTACCACGAGGAGATCATTATAAACCTGCAATTTCCCATCGAGATTTAAACAGCAGAAATGTCCTAGTGAAAAATGATGGAACCTGTGTTATTAGTGACTTTGGACTGTCCATGAGGCTGACTGGAAATAGACTGGTGCGCCCAGGGGAGGAAGATAATGCAGCCATAAGCGAGGTTGGCACTATCAGATATATGGCACCAGAAGTGCTAGAAGGAGCTGTGAACTTGAGGGACTGTGAATCAGCTTTGAAACAAGTAGACATGTATGCTCTTGGACTAATCTATTGGGAGATATTTATGAGATGTACAGACCTCTTCCCAGGGGAATCCGTACCAGAGTACCAGATGGCTTTTCAGACAGAGGTTGGAAACCATCCCACTTTTGAGGATATGCAGGTTCTCGTGTCTAGGGAAAAACAGAGACCCAAGTTCCCAGAAGCCTGGAAAGAAAATAGCCTGGCAGTGAGGTCACTCAAGGAGACAATCGAAGACTGTTGGGACCAGGATGCAGAGGCTCGGCTTACTGCACAGTGTGCTGAGGAAAGGATGGCTGAACTTATGATGATTTGGGAAAGAAACAAATCTGTGAGCCCAACAGTCAATCCAATGTCTACTGCTATGCAGAATGAACGCAACCTGTCACATAATAGGCGTGTGCCAAAAATTGGTCCTTATCCAGATTATTCTTCCTCCTCATACATTGAAGACTCTATCCATCATACTGACAGCATCGTGAAGAATATTTCCTCTGAGCATTCTATGTCCAGCACACCTTTGACTATAGGGGAAAAAAACCGAAATTCAATTAACTATGAACGACAGCAAGCACAAGCTCGAATCCCCAGCCCTGAAACAAGTGTCACCAGCCTCTCCACCAACACAACAACCACAAACACCACAGGACTCACGCCAAGTACTGGCATGACTACTATATCTGAGATGCCATACCCAGATGAAACAAATCTGCATACCACAAATGTTGCACAGTCAATTGGGCCAACCCCTGTCTGCTTACAGCTGACAGAAGAAGACTTGGAAACCAACAAGCTAGACCCAAAAGAAGTTGATAAGAACCTCAAGGAAAGCTCTGATGAGAATCTCATGGAGCACTCTCTTAAACAGTTCAGTGGCCCAGACCCACTGAGCAGTACTAGTTCTAGCTTGCTTTACCCACTCATAAAACTTGCAGTAGAAGCAACTGGACAGCAGGACTTCACACAGACTGCAAATGGCCAAGCATGTTTGATTCCTGATGTTCTGCCTACTCAGATCTATCCTCTCCCCAAGCAGCAGAACCTTCCCAAGAGACCTACTAGTTTGCCTTTGAACACCAAAAATTCAACAAAAGAGCCCCGGCTAAAATTTGGCAGCAAGCACAAATCAAACTTGAAACAAGTCGAAACTGGAGTTGCCAAGATGAATACAATCAATGCAGCAGAACCTCATGTGGTGACAGTCACCATGAATGGTGTGGCAGGTAGAAACCACAGTGTTAACTCCCATGCTGCCACAACCCAATATGCCAATGGGACAGTACTATCTGGCCAAACAACCAACATAGTGACACATAGGGCCCAAGAAATGTTGCAGAATCAGTTTATTGGTGAGGACACCCGGCTGAATATTAATTCCAGTCCTGATGAGCATGAGCCTTTACTGAGACGAGAGCAACAAGCTGGCCATGATGAAGGTGTTCTGGATCGTCTTGTGGACAGGAGGGAACGGCCACTAGAAGGTGGCCGAACTAATTCCAATAACAACAACAGCAATCCATGTTCAGAACAAGATGTTCTTGCACAGGGTGTTCCAAGCACAGCAGCAGATCCTGGGCCATCAAAGCCCAGAAGAGCACAGAGGCCTAATTCTCTGGATCTTTCAGCCACAAATGTCCTGGATGGCAGCAGTATACAGATAGGTGAGTCAACACAAGATGGCAAATCAGGATCAGGTGAAAAGATCAAGAAACGTGTGAAAACTCCCTATTCTCTTAAGCGGTGGCGCCCCTCCACCTGGGTCATCTCCACTGAATCGCTGGACTGTGAAGTCAACAATAATGGCAGTAACAGGGCAGTTCATTCCAAATCCAGCACTGCTGTTTACCTTGCAGAAGGAGGCACTGCTACAACCATGGTGTCTAAAGATATAGGAATGAACTGTCTGTGA。

(3)具体地，野生型BMPR2基因编码蛋白为SEQ ID NO:4：

为突变前第13位色氨酸(Trp,W)。

p.Trp13GlyfsTer34表示：第13位的色氨酸(Trp,W)突变为甘氨酸(Gly,G)，并且其后的第33位出现终止密码子，可能会引起蛋白质的截短表达。

本领域普通技术人员已知，本发明所述的突变位点为单核苷酸多态性(SNP)位点，即基因组序列中单核苷酸发生改变，核苷酸序列的差异可以体现在DNA、RNA和蛋白质水平，本发明所提供的突变的家族遗传性肺动脉高压致病基因BMPR2优选体现在DNA水平和蛋白质水平。

(4)查询人群频率数据库发现BMPR2基因c.36delC杂合缺失变异(BMPR2:p.Trp13GlyfsTer34het)为罕见变异(千人基因组：无，ESP6500：无，ExAC：无)。该缺失变异使第13位非极性的色氨酸变为非极性的甘氨酸，其后蛋白移码表达，并使其后第33位氨基酸出现一终止密码子，可能会使蛋白截短表达。查询ClinVar、HGMD数据库未发现该变异，该位点下游的移码或无义变异多次被上报者评定为肺动脉高压的致病突变(ClinVar数据库)，文献检索未发现该变异与疾病相关的报导。根据现有证据：该变异为罕见变异、该变异可能会使蛋白截短表达、附近及下游的移码或无义变异多次被上报者评定为肺动脉高压的致病突变，所以结合临床诊断结果推定该变异为肺动脉高压的高度可疑致病突变。

实施例2-突变的家族遗传性肺动脉高压致病基因BMPR2体外检测试剂盒

本实施例提供的突变的家族遗传性肺动脉高压致病基因BMPR2体外检测试剂盒，包含目的片段的特异性扩增引物、DNA聚合酶和PCR缓冲液；

具体引物信息如下：

上游引物(BMPR2-E1F，SEQ ID NO:5)：5'CCTCTCATCAGCCATTTGTCC 3'；下游引物(BMPR2-E1R，SEQ ID NO:6)：5'AGTGGGGATAGGAAAATACACAA 3'；长度：433bp。

本试剂盒具体采用Sanger测序法，具体检测步骤为：按照实施例1的步骤提取待测者DNA，然后使用经设计的引物组合(SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6)对BMPR2基因进行扩增，得到PCR产物，使用1.5％的琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，选用1000bp Marker作为参考，检测验证扩增产物为预期的大小，最后对PCR产物进行测序。从NCBI(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)数据库获得参考序列和测序结果进行比对，判断待测者BMPR2基因是否携带c.36delC杂合错义变异，协助临床确诊待测者是否患有具有c.36delC BMPR2基因突变的患者。

采用本实施例提供的家族遗传性肺动脉高压检测试剂盒能够检测出c.36delC位点突变的BMPR2基因，可以用于体外检测和诊断诊断家族遗传性肺动脉高压致病基因，对家族遗传性肺动脉高压的早期诊断，或者辅助临床判断具有重要意义。

实施例3-家系验证

由于HPAH均为单基因常染色体显性遗传，因此本实施例采用家系连锁分析方法验证突变的家族遗传性肺动脉高压致病基因BMPR2的致病性。

具体地，选取一个家族遗传性肺动脉高压家系中的三代成员，该家系中的先证者在中国医学科学院阜外医院治疗，临床诊断患有家族遗传性肺动脉高压。

在先证者(男，9岁)及其家属自愿签署知情同意书的前提下，寄送5-10mL全血样本，建立病历资料库，详细记录先证者病情、家系情况等资料。本验证已得到本单位伦理委员会批准。

先证者病史：

表2先证者病史

采用实施例2提供的体外检测试剂盒对先证者及其家属的BMPR2基因进行基因检测，检测结果如图1-图3所示，图1为实施例3的家系图；图2为家系中携带突变的BMPR2基因的先证者、先证者母亲等人的Sanger测序图；图3为实施例3家系中先证者父亲的Sanger测序图。

如图1-图3所示，该家系中临床诊断出家族遗传性肺动脉高压的先证者、先证者母亲和先证者外公均携带了突变的BMPR2致病基因；而未患有家族遗传性肺动脉高压的先证者哥哥、先证者父亲和先证者外婆均未携带突变的BMPR2致病基因。

该家系验证说明了突变BMPR2致病基因对家族遗传性肺动脉高压的致病性，支持临床诊断。

实施例4-针对家系外正常人的验证实验

采用实施例2的突变的家族遗传性肺动脉高压致病基因BMPR2体外检测试剂盒，对1000例家系外正常人进行BMPR2基因c.36delC突变位点检测，结果均未能检测到该突变。

实施例5-针对家系外家族遗传性肺动脉高压患者的验证实验

在中国范围内，对患有家族遗传性肺动脉高压、肥厚型心肌病、扩张型心肌病、长QT等单基因常染色体显性遗传病的患者中检测BMPR2基因，患者总共2000例，每种疾病的患病人数不等，结果显示，除实施例3提供的家系外，仅在临床诊断患有家族遗传性肺动脉高压的2例患者中检测到具有c.36delC杂合错义变异的突变BMPR2基因。

本实验再次验证说明突变的BMPR2基因的c.36delC杂合错义变异会导致家族遗传性肺动脉高压，支持临床诊断。

以上详细描述了本发明的较佳具体实施例。应当理解，本领域的普通技术人员无需创造性劳动就可以根据本发明的构思作出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术人员依本发明的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案，皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。

序列表

<110> 百世诺（北京）医疗科技有限公司

<120> 突变的家族遗传性肺动脉高压致病基因BMPR2及其应用

<160> 7

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 50

<212> DNA

<213> homo sapiens

<400> 1

atgacttcct cgctgcagcg gccctggcgg gtgccctggc taccatggac 50

<210> 2

<211> 49

<212> DNA

<213> homo sapiens

<400> 2

atgacttcct cgctgcagcg gccctggcgg gtgcctggct accatggac 49

<210> 3

<211> 3117

<212> DNA

<213> homo sapiens

<400> 3

atgacttcct cgctgcagcg gccctggcgg gtgccctggc taccatggac catcctgctg 60

gtcagcactg cggctgcttc gcagaatcaa gaacggctat gtgcgtttaa agatccgtat 120

cagcaagacc ttgggatagg tgagagtaga atctctcatg aaaatgggac aatattatgc 180

tcgaaaggta gcacctgcta tggcctttgg gagaaatcaa aaggggacat aaatcttgta 240

aaacaaggat gttggtctca cattggagat ccccaagagt gtcactatga agaatgtgta 300

gtaactacca ctcctccctc aattcagaat ggaacatacc gtttctgctg ttgtagcaca 360

gatttatgta atgtcaactt tactgagaat tttccacctc ctgacacaac accactcagt 420

ccacctcatt catttaaccg agatgagaca ataatcattg ctttggcatc agtctctgta 480

ttagctgttt tgatagttgc cttatgcttt ggatacagaa tgttgacagg agaccgtaaa 540

caaggtcttc acagtatgaa catgatggag gcagcagcat ccgaaccctc tcttgatcta 600

gataatctga aactgttgga gctgattggc cgaggtcgat atggagcagt atataaaggc 660

tccttggatg agcgtccagt tgctgtaaaa gtgttttcct ttgcaaaccg tcagaatttt 720

atcaacgaaa agaacattta cagagtgcct ttgatggaac atgacaacat tgcccgcttt 780

atagttggag atgagagagt cactgcagat ggacgcatgg aatatttgct tgtgatggag 840

tactatccca atggatcttt atgcaagtat ttaagtctcc acacaagtga ctgggtaagc 900

tcttgccgtc ttgctcattc tgttactaga ggactggctt atcttcacac agaattacca 960

cgaggagatc attataaacc tgcaatttcc catcgagatt taaacagcag aaatgtccta 1020

gtgaaaaatg atggaacctg tgttattagt gactttggac tgtccatgag gctgactgga 1080

aatagactgg tgcgcccagg ggaggaagat aatgcagcca taagcgaggt tggcactatc 1140

agatatatgg caccagaagt gctagaagga gctgtgaact tgagggactg tgaatcagct 1200

ttgaaacaag tagacatgta tgctcttgga ctaatctatt gggagatatt tatgagatgt 1260

acagacctct tcccagggga atccgtacca gagtaccaga tggcttttca gacagaggtt 1320

ggaaaccatc ccacttttga ggatatgcag gttctcgtgt ctagggaaaa acagagaccc 1380

aagttcccag aagcctggaa agaaaatagc ctggcagtga ggtcactcaa ggagacaatc 1440

gaagactgtt gggaccagga tgcagaggct cggcttactg cacagtgtgc tgaggaaagg 1500

atggctgaac ttatgatgat ttgggaaaga aacaaatctg tgagcccaac agtcaatcca 1560

atgtctactg ctatgcagaa tgaacgcaac ctgtcacata ataggcgtgt gccaaaaatt 1620

ggtccttatc cagattattc ttcctcctca tacattgaag actctatcca tcatactgac 1680

agcatcgtga agaatatttc ctctgagcat tctatgtcca gcacaccttt gactataggg 1740

gaaaaaaacc gaaattcaat taactatgaa cgacagcaag cacaagctcg aatccccagc 1800

cctgaaacaa gtgtcaccag cctctccacc aacacaacaa ccacaaacac cacaggactc 1860

acgccaagta ctggcatgac tactatatct gagatgccat acccagatga aacaaatctg 1920

cataccacaa atgttgcaca gtcaattggg ccaacccctg tctgcttaca gctgacagaa 1980

gaagacttgg aaaccaacaa gctagaccca aaagaagttg ataagaacct caaggaaagc 2040

tctgatgaga atctcatgga gcactctctt aaacagttca gtggcccaga cccactgagc 2100

agtactagtt ctagcttgct ttacccactc ataaaacttg cagtagaagc aactggacag 2160

caggacttca cacagactgc aaatggccaa gcatgtttga ttcctgatgt tctgcctact 2220

cagatctatc ctctccccaa gcagcagaac cttcccaaga gacctactag tttgcctttg 2280

aacaccaaaa attcaacaaa agagccccgg ctaaaatttg gcagcaagca caaatcaaac 2340

ttgaaacaag tcgaaactgg agttgccaag atgaatacaa tcaatgcagc agaacctcat 2400

gtggtgacag tcaccatgaa tggtgtggca ggtagaaacc acagtgttaa ctcccatgct 2460

gccacaaccc aatatgccaa tgggacagta ctatctggcc aaacaaccaa catagtgaca 2520

catagggccc aagaaatgtt gcagaatcag tttattggtg aggacacccg gctgaatatt 2580

aattccagtc ctgatgagca tgagccttta ctgagacgag agcaacaagc tggccatgat 2640

gaaggtgttc tggatcgtct tgtggacagg agggaacggc cactagaagg tggccgaact 2700

aattccaata acaacaacag caatccatgt tcagaacaag atgttcttgc acagggtgtt 2760

ccaagcacag cagcagatcc tgggccatca aagcccagaa gagcacagag gcctaattct 2820

ctggatcttt cagccacaaa tgtcctggat ggcagcagta tacagatagg tgagtcaaca 2880

caagatggca aatcaggatc aggtgaaaag atcaagaaac gtgtgaaaac tccctattct 2940

cttaagcggt ggcgcccctc cacctgggtc atctccactg aatcgctgga ctgtgaagtc 3000

aacaataatg gcagtaacag ggcagttcat tccaaatcca gcactgctgt ttaccttgca 3060

gaaggaggca ctgctacaac catggtgtct aaagatatag gaatgaactg tctgtga 3117

<210> 4

<211> 1038

<212> PRT

<213> homo sapiens

<400> 4

Met Thr Ser Ser Leu Gln Arg Pro Trp Arg Val Pro Trp Leu Pro Trp

1 5 10 15

Thr Ile Leu Leu Val Ser Thr Ala Ala Ala Ser Gln Asn Gln Glu Arg

20 25 30

Leu Cys Ala Phe Lys Asp Pro Tyr Gln Gln Asp Leu Gly Ile Gly Glu

35 40 45

Ser Arg Ile Ser His Glu Asn Gly Thr Ile Leu Cys Ser Lys Gly Ser

50 55 60

Thr Cys Tyr Gly Leu Trp Glu Lys Ser Lys Gly Asp Ile Asn Leu Val

65 70 75 80

Lys Gln Gly Cys Trp Ser His Ile Gly Asp Pro Gln Glu Cys His Tyr

85 90 95

Glu Glu Cys Val Val Thr Thr Thr Pro Pro Ser Ile Gln Asn Gly Thr

100 105 110

Tyr Arg Phe Cys Cys Cys Ser Thr Asp Leu Cys Asn Val Asn Phe Thr

115 120 125

Glu Asn Phe Pro Pro Pro Asp Thr Thr Pro Leu Ser Pro Pro His Ser

130 135 140

Phe Asn Arg Asp Glu Thr Ile Ile Ile Ala Leu Ala Ser Val Ser Val

145 150 155 160

Leu Ala Val Leu Ile Val Ala Leu Cys Phe Gly Tyr Arg Met Leu Thr

165 170 175

Gly Asp Arg Lys Gln Gly Leu His Ser Met Asn Met Met Glu Ala Ala

180 185 190

Ala Ser Glu Pro Ser Leu Asp Leu Asp Asn Leu Lys Leu Leu Glu Leu

195 200 205

Ile Gly Arg Gly Arg Tyr Gly Ala Val Tyr Lys Gly Ser Leu Asp Glu

210 215 220

Arg Pro Val Ala Val Lys Val Phe Ser Phe Ala Asn Arg Gln Asn Phe

225 230 235 240

Ile Asn Glu Lys Asn Ile Tyr Arg Val Pro Leu Met Glu His Asp Asn

245 250 255

Ile Ala Arg Phe Ile Val Gly Asp Glu Arg Val Thr Ala Asp Gly Arg

260 265 270

Met Glu Tyr Leu Leu Val Met Glu Tyr Tyr Pro Asn Gly Ser Leu Cys

275 280 285

Lys Tyr Leu Ser Leu His Thr Ser Asp Trp Val Ser Ser Cys Arg Leu

290 295 300

Ala His Ser Val Thr Arg Gly Leu Ala Tyr Leu His Thr Glu Leu Pro

305 310 315 320

Arg Gly Asp His Tyr Lys Pro Ala Ile Ser His Arg Asp Leu Asn Ser

325 330 335

Arg Asn Val Leu Val Lys Asn Asp Gly Thr Cys Val Ile Ser Asp Phe

340 345 350

Gly Leu Ser Met Arg Leu Thr Gly Asn Arg Leu Val Arg Pro Gly Glu

355 360 365

Glu Asp Asn Ala Ala Ile Ser Glu Val Gly Thr Ile Arg Tyr Met Ala

370 375 380

Pro Glu Val Leu Glu Gly Ala Val Asn Leu Arg Asp Cys Glu Ser Ala

385 390 395 400

Leu Lys Gln Val Asp Met Tyr Ala Leu Gly Leu Ile Tyr Trp Glu Ile

405 410 415

Phe Met Arg Cys Thr Asp Leu Phe Pro Gly Glu Ser Val Pro Glu Tyr

420 425 430

Gln Met Ala Phe Gln Thr Glu Val Gly Asn His Pro Thr Phe Glu Asp

435 440 445

Met Gln Val Leu Val Ser Arg Glu Lys Gln Arg Pro Lys Phe Pro Glu

450 455 460

Ala Trp Lys Glu Asn Ser Leu Ala Val Arg Ser Leu Lys Glu Thr Ile

465 470 475 480

Glu Asp Cys Trp Asp Gln Asp Ala Glu Ala Arg Leu Thr Ala Gln Cys

485 490 495

Ala Glu Glu Arg Met Ala Glu Leu Met Met Ile Trp Glu Arg Asn Lys

500 505 510

Ser Val Ser Pro Thr Val Asn Pro Met Ser Thr Ala Met Gln Asn Glu

515 520 525

Arg Asn Leu Ser His Asn Arg Arg Val Pro Lys Ile Gly Pro Tyr Pro

530 535 540

Asp Tyr Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Glu Asp Ser Ile His His Thr Asp

545 550 555 560

Ser Ile Val Lys Asn Ile Ser Ser Glu His Ser Met Ser Ser Thr Pro

565 570 575

Leu Thr Ile Gly Glu Lys Asn Arg Asn Ser Ile Asn Tyr Glu Arg Gln

580 585 590

Gln Ala Gln Ala Arg Ile Pro Ser Pro Glu Thr Ser Val Thr Ser Leu

595 600 605

Ser Thr Asn Thr Thr Thr Thr Asn Thr Thr Gly Leu Thr Pro Ser Thr

610 615 620

Gly Met Thr Thr Ile Ser Glu Met Pro Tyr Pro Asp Glu Thr Asn Leu

625 630 635 640

His Thr Thr Asn Val Ala Gln Ser Ile Gly Pro Thr Pro Val Cys Leu

645 650 655

Gln Leu Thr Glu Glu Asp Leu Glu Thr Asn Lys Leu Asp Pro Lys Glu

660 665 670

Val Asp Lys Asn Leu Lys Glu Ser Ser Asp Glu Asn Leu Met Glu His

675 680 685

Ser Leu Lys Gln Phe Ser Gly Pro Asp Pro Leu Ser Ser Thr Ser Ser

690 695 700

Ser Leu Leu Tyr Pro Leu Ile Lys Leu Ala Val Glu Ala Thr Gly Gln

705 710 715 720

Gln Asp Phe Thr Gln Thr Ala Asn Gly Gln Ala Cys Leu Ile Pro Asp

725 730 735

Val Leu Pro Thr Gln Ile Tyr Pro Leu Pro Lys Gln Gln Asn Leu Pro

740 745 750

Lys Arg Pro Thr Ser Leu Pro Leu Asn Thr Lys Asn Ser Thr Lys Glu

755 760 765

Pro Arg Leu Lys Phe Gly Ser Lys His Lys Ser Asn Leu Lys Gln Val

770 775 780

Glu Thr Gly Val Ala Lys Met Asn Thr Ile Asn Ala Ala Glu Pro His

785 790 795 800

Val Val Thr Val Thr Met Asn Gly Val Ala Gly Arg Asn His Ser Val

805 810 815

Asn Ser His Ala Ala Thr Thr Gln Tyr Ala Asn Gly Thr Val Leu Ser

820 825 830

Gly Gln Thr Thr Asn Ile Val Thr His Arg Ala Gln Glu Met Leu Gln

835 840 845

Asn Gln Phe Ile Gly Glu Asp Thr Arg Leu Asn Ile Asn Ser Ser Pro

850 855 860

Asp Glu His Glu Pro Leu Leu Arg Arg Glu Gln Gln Ala Gly His Asp

865 870 875 880

Glu Gly Val Leu Asp Arg Leu Val Asp Arg Arg Glu Arg Pro Leu Glu

885 890 895

Gly Gly Arg Thr Asn Ser Asn Asn Asn Asn Ser Asn Pro Cys Ser Glu

900 905 910

Gln Asp Val Leu Ala Gln Gly Val Pro Ser Thr Ala Ala Asp Pro Gly

915 920 925

Pro Ser Lys Pro Arg Arg Ala Gln Arg Pro Asn Ser Leu Asp Leu Ser

930 935 940

Ala Thr Asn Val Leu Asp Gly Ser Ser Ile Gln Ile Gly Glu Ser Thr

945 950 955 960

Gln Asp Gly Lys Ser Gly Ser Gly Glu Lys Ile Lys Lys Arg Val Lys

965 970 975

Thr Pro Tyr Ser Leu Lys Arg Trp Arg Pro Ser Thr Trp Val Ile Ser

980 985 990

Thr Glu Ser Leu Asp Cys Glu Val Asn Asn Asn Gly Ser Asn Arg Ala

995 1000 1005

Val His Ser Lys Ser Ser Thr Ala Val Tyr Leu Ala Glu Gly Gly Thr

1010 1015 1020

Ala Thr Thr Met Val Ser Lys Asp Ile Gly Met Asn Cys Leu

1025 1030 1035

<210> 5

<211> 21

<212> DNA

<213> homo sapiens

<400> 5

cctctcatca gccatttgtc c 21

<210> 6

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<212> DNA

<213> homo sapiens

<400> 6

agtggggata ggaaaataca caa 23

<210> 7

<211> 3116

<212> DNA

<213> homo sapiens

<400> 7

atgacttcct cgctgcagcg gccctggcgg gtgcctggct accatggacc atcctgctgg 60

tcagcactgc ggctgcttcg cagaatcaag aacggctatg tgcgtttaaa gatccgtatc 120

agcaagacct tgggataggt gagagtagaa tctctcatga aaatgggaca atattatgct 180

cgaaaggtag cacctgctat ggcctttggg agaaatcaaa aggggacata aatcttgtaa 240

aacaaggatg ttggtctcac attggagatc cccaagagtg tcactatgaa gaatgtgtag 300

taactaccac tcctccctca attcagaatg gaacataccg tttctgctgt tgtagcacag 360

atttatgtaa tgtcaacttt actgagaatt ttccacctcc tgacacaaca ccactcagtc 420

cacctcattc atttaaccga gatgagacaa taatcattgc tttggcatca gtctctgtat 480

tagctgtttt gatagttgcc ttatgctttg gatacagaat gttgacagga gaccgtaaac 540

aaggtcttca cagtatgaac atgatggagg cagcagcatc cgaaccctct cttgatctag 600

ataatctgaa actgttggag ctgattggcc gaggtcgata tggagcagta tataaaggct 660

ccttggatga gcgtccagtt gctgtaaaag tgttttcctt tgcaaaccgt cagaatttta 720

tcaacgaaaa gaacatttac agagtgcctt tgatggaaca tgacaacatt gcccgcttta 780

tagttggaga tgagagagtc actgcagatg gacgcatgga atatttgctt gtgatggagt 840

actatcccaa tggatcttta tgcaagtatt taagtctcca cacaagtgac tgggtaagct 900

cttgccgtct tgctcattct gttactagag gactggctta tcttcacaca gaattaccac 960

gaggagatca ttataaacct gcaatttccc atcgagattt aaacagcaga aatgtcctag 1020

tgaaaaatga tggaacctgt gttattagtg actttggact gtccatgagg ctgactggaa 1080

atagactggt gcgcccaggg gaggaagata atgcagccat aagcgaggtt ggcactatca 1140

gatatatggc accagaagtg ctagaaggag ctgtgaactt gagggactgt gaatcagctt 1200

tgaaacaagt agacatgtat gctcttggac taatctattg ggagatattt atgagatgta 1260

cagacctctt cccaggggaa tccgtaccag agtaccagat ggcttttcag acagaggttg 1320

gaaaccatcc cacttttgag gatatgcagg ttctcgtgtc tagggaaaaa cagagaccca 1380

agttcccaga agcctggaaa gaaaatagcc tggcagtgag gtcactcaag gagacaatcg 1440

aagactgttg ggaccaggat gcagaggctc ggcttactgc acagtgtgct gaggaaagga 1500

tggctgaact tatgatgatt tgggaaagaa acaaatctgt gagcccaaca gtcaatccaa 1560

tgtctactgc tatgcagaat gaacgcaacc tgtcacataa taggcgtgtg ccaaaaattg 1620

gtccttatcc agattattct tcctcctcat acattgaaga ctctatccat catactgaca 1680

gcatcgtgaa gaatatttcc tctgagcatt ctatgtccag cacacctttg actatagggg 1740

aaaaaaaccg aaattcaatt aactatgaac gacagcaagc acaagctcga atccccagcc 1800

ctgaaacaag tgtcaccagc ctctccacca acacaacaac cacaaacacc acaggactca 1860

cgccaagtac tggcatgact actatatctg agatgccata cccagatgaa acaaatctgc 1920

ataccacaaa tgttgcacag tcaattgggc caacccctgt ctgcttacag ctgacagaag 1980

aagacttgga aaccaacaag ctagacccaa aagaagttga taagaacctc aaggaaagct 2040

ctgatgagaa tctcatggag cactctctta aacagttcag tggcccagac ccactgagca 2100

gtactagttc tagcttgctt tacccactca taaaacttgc agtagaagca actggacagc 2160

aggacttcac acagactgca aatggccaag catgtttgat tcctgatgtt ctgcctactc 2220

agatctatcc tctccccaag cagcagaacc ttcccaagag acctactagt ttgcctttga 2280

acaccaaaaa ttcaacaaaa gagccccggc taaaatttgg cagcaagcac aaatcaaact 2340

tgaaacaagt cgaaactgga gttgccaaga tgaatacaat caatgcagca gaacctcatg 2400

tggtgacagt caccatgaat ggtgtggcag gtagaaacca cagtgttaac tcccatgctg 2460

ccacaaccca atatgccaat gggacagtac tatctggcca aacaaccaac atagtgacac 2520

atagggccca agaaatgttg cagaatcagt ttattggtga ggacacccgg ctgaatatta 2580

attccagtcc tgatgagcat gagcctttac tgagacgaga gcaacaagct ggccatgatg 2640

aaggtgttct ggatcgtctt gtggacagga gggaacggcc actagaaggt ggccgaacta 2700

attccaataa caacaacagc aatccatgtt cagaacaaga tgttcttgca cagggtgttc 2760

caagcacagc agcagatcct gggccatcaa agcccagaag agcacagagg cctaattctc 2820

tggatctttc agccacaaat gtcctggatg gcagcagtat acagataggt gagtcaacac 2880

aagatggcaa atcaggatca ggtgaaaaga tcaagaaacg tgtgaaaact ccctattctc 2940

ttaagcggtg gcgcccctcc acctgggtca tctccactga atcgctggac tgtgaagtca 3000

acaataatgg cagtaacagg gcagttcatt ccaaatccag cactgctgtt taccttgcag 3060

aaggaggcac tgctacaacc atggtgtcta aagatatagg aatgaactgt ctgtga 3116

Claims

1.突变的家族遗传性肺动脉高压致病基因BMPR2，其特征在于，与野生型BMPR2基因编码DNA的参考序列相比，所述突变的家族遗传性肺动脉高压致病基因BMPR2的核苷酸序列为SEQ ID NO:7；在基因组位置chr2:203242231处，缺失碱基C；参考基因组版本是GRCh37。

2.根据权利要求1所述的突变的家族遗传性肺动脉高压致病基因BMPR2在制备家族遗传性肺动脉高压检测试剂盒中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述家族遗传性肺动脉高压检测试剂盒包括用于扩增致病基因BMPR2的引物，引物的序列为SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述家族遗传性肺动脉高压检测试剂盒还包括Taq DNA聚合酶和PCR缓冲液。