CN113718006A - 一种牡蛎肽的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本申请公开了一种牡蛎肽的提取方法,其包括以下步骤:(1)粉碎:取洗净干燥后的牡蛎壳和牡蛎肉,粉碎成牡蛎细粉;(2)分散:将牡蛎细粉、碳酸二氢钙、碳酸氢钠、微晶纤维素和水按质量比1:0.02~0.04:0.04~0.06:0.01~0.03:23~28混合,搅拌,分散均匀得到分散液;(3)酶解:向分散液中加入分解酶,使分散液酶解;(4)去重金属:向酶解后的分散液中加入EDTA二钠,搅拌反应25~35min;(5)过滤:将去金属后的分散液过滤,取滤液;(6)浓缩、干燥、包装;具有去重金属、提高蛋白回收率的优点。
Description
技术领域
本发明涉及一种牡蛎肽的提取方法。
背景技术
海洋食品牡蛎具有巨大的食用价值和药用价值,是世界上第一大养殖贝类,在我国浙江省等沿海地区都进行大规模养殖。浙江宁海一带被誉为“牡蛎之乡”,已有700年的牡蛎养殖史。牡蛎的营养价值极高,牡蛎中的蛋白质含量高达45%-57%,其氨基酸组成完善。根据世界粮农组织评定,牡蛎肉中必需氨基酸完全程度和质量比例优于人乳和牛乳。古人将牡蛎称为“水产品之最贵者”,古罗马人把它誉为“海中美味-圣鱼”,西方人称之为“神赐魔石”、“海中牛奶”,日本人则誉之为“根之源”。
由于海洋污染,现代海洋生物如牡蛎中存在相当的重金属,因此对牡蛎进行处理时需要考虑该技术问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种牡蛎肽的提取方法,具有除重金属的优点。
本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的:
一种牡蛎肽的提取方法,包括以下步骤:
(1)粉碎:取洗净干燥后的牡蛎壳和牡蛎肉,粉碎成牡蛎细粉;
(2)分散:将牡蛎细粉、碳酸二氢钙、碳酸氢钠、微晶纤维素和水混合,搅拌,分散均匀得到分散液;牡蛎细粉、碳酸二氢钙、碳酸氢钠、微晶纤维素和水的投入质量比为1:0.02~0.04:0.04~0.06:0.01~0.03:23~28;
(3)酶解:向分散液中加入分解酶,使分散液酶解;
(4)去重金属:向酶解后的分散液中加入EDTA二钠,搅拌反应25~35min;
(5)过滤:将去金属后的分散液过滤,取滤液;
(6)浓缩、干燥、包装。
进一步的,步骤(3)中,分解酶包括中性蛋白酶和脂肪酶,酶解步包括以下两个部分:
①调节分散液的pH至6.8~7.2,升温至50~55℃,加入中性蛋白酶,搅拌使之酶解,酶解时间为5~7hr,酶解后升温至75~85℃并保温8~12min使酶失活;分散液和中性蛋白酶的质量比为100:0.2~0.4;
②调节分散液的pH至6.8~7.2,升温至38~42℃,加入脂肪酶,搅拌使之酶解,酶解时间为2~4hr,酶解后升温至85~95℃并保温4~5min使酶失活;分散液和脂肪酶的质量比为100:0.1~0.3。
进一步的,步骤(4)中,除了向分散液中加入EDTA二钠外,步骤(4)中还添加有微晶纤维素和乙酸乙酯;步骤(4)中,酶解后的分散液、EDTA二钠、微晶纤维素和乙酸乙酯的质量比为100:0.02~0.04:0.08~0.11:7~9。
进一步的,包括以下步骤:
(1)粉碎:取洗净干燥后的牡蛎壳和牡蛎肉,粉碎成牡蛎细粉;
(2)分散:将牡蛎细粉、碳酸二氢钙、碳酸氢钠、微晶纤维素和水混合,搅拌,分散均匀得到分散液;牡蛎细粉、碳酸二氢钙、碳酸氢钠、微晶纤维素和水的投入质量比为1:0.03:0.05:0.02:25;
(3)酶解:
①调节分散液的pH至7.0,升温至52℃,加入中性蛋白酶,搅拌使之酶解,酶解时间为6hr,酶解后升温至80℃并保温10min使酶失活;分散液和中性蛋白酶的质量比为100:0.3;
②调节分散液的pH至7.0,升温至40℃,加入脂肪酶,搅拌使之酶解,酶解时间为3hr,酶解后升温至90℃并保温5min使酶失活;分散液和脂肪酶的质量比为100:0.2;
(4)去重金属:向酶解后的分散液中加入EDTA二钠、微晶纤维素和乙酸乙酯,搅拌反应30min;步骤(4)中,酶解后的分散液、EDTA二钠、微晶纤维素和乙酸乙酯的质量比为100:0.03:0.10:8;
(5)过滤:将去金属后的分散液用0.5μm滤膜真空抽滤,取滤液;
(6)真空浓缩至固含量为50wt%,喷雾干燥,包装。
本发明技术效果主要体现在以下方面:
在处理牡蛎过程中利用EDTA二钠进行重金属处理,降低产品中重金属含量,提高食品安全性;在处理过程中由于重金属的存在,过程中的多肽和重金属存在螯合的可能性,从而导致产品中存在螯合的重金属,利用碳酸氢钙在碱性条件下和重金属的作用推动、并结合微晶纤维素对其分散和螯合的阻碍,从而减少重金属和多肽的螯合,使重金属处于游离态,以便其与EDTA二钠作用,提高重金属去除效果,也减少多肽的损失;
在牡蛎酶解后得到的酶解液中乳化稳定性较好,分离不理想,影响分离时间和产品质量,在本申请中通过脂肪酶酶解脂肪,破坏蛋白质和脂肪相互作用,降低乳液的稳定性,从而使得油水分离,并通过乙酸乙酯和微晶纤维素的作用,提高分离效果,加快工艺进程,提高蛋白回收率。
具体实施方式
实施例1:一种牡蛎肽的提取方法,包括以下步骤:
(1)粉碎:取洗净干燥后的牡蛎壳和牡蛎肉,粉碎成牡蛎细粉;
(2)分散:将牡蛎细粉、碳酸二氢钙、碳酸氢钠、微晶纤维素和水混合,搅拌,分散均匀得到分散液;牡蛎细粉、碳酸二氢钙、碳酸氢钠、微晶纤维素和水的投入质量比为1:0.03:0.05:0.02:25;
(3)酶解:
①调节分散液的pH至7.0,升温至52℃,加入中性蛋白酶,搅拌使之酶解,酶解时间为6hr,酶解后升温至80℃并保温10min使酶失活;分散液和中性蛋白酶的质量比为100:0.3;
②调节分散液的pH至7.0,升温至40℃,加入脂肪酶,搅拌使之酶解,酶解时间为3hr,酶解后升温至90℃并保温5min使酶失活;分散液和脂肪酶的质量比为100:0.2;
(4)去重金属:向酶解后的分散液中加入EDTA二钠、微晶纤维素和乙酸乙酯,搅拌反应30min;步骤(4)中,酶解后的分散液、EDTA二钠、微晶纤维素和乙酸乙酯的质量比为100:0.03:0.10:8;
(5)过滤:将去金属后的分散液用0.5μm滤膜真空抽滤,取滤液;
(6)真空浓缩至固含量为50wt%,喷雾干燥,包装。
实施例1牡蛎肽的分子量分布表如表1所示。
表1
分子量范围(Dalton) | 峰面积百分比(%,λ220nm) |
M>3000 | 0.15 |
2000<M≤3000 | 0.44 |
1000<M≤2000 | 2.03 |
180<M≤1000 | 17.25 |
M≤180 | 80.13 |
实施例2:步骤(2)对牡蛎肽提取方法的影响
测试对象:实施例1、对照组1-5。
对照组1:参照实施例1,与实施例1的区别在于,步骤(2)中牡蛎细粉、碳酸二氢钙、碳酸氢钠、微晶纤维素和水的投入质量比为1:0.02:0.04:0.01:25。
对照组2:参照实施例1,与实施例1的区别在于,步骤(2)中牡蛎细粉、碳酸二氢钙、碳酸氢钠、微晶纤维素和水的投入质量比为1:0.04:0.06:0.03:25。
对照组3:参照实施例1,与实施例1的区别在于,步骤(2)中牡蛎细粉中未添加碳酸二氢钙、碳酸氢钠或微晶纤维素,仅添加水且牡蛎细粉和水的投入质量比为1:25。
对照组4:参照实施例1,与实施例1的区别在于,步骤(2)中牡蛎细粉中未添加微晶纤维素,牡蛎细粉、碳酸二氢钙、碳酸氢钠和水的投入质量比为1:0.03:0.05:25。
对照组5:参照实施例1,与实施例1的区别在于,步骤(2)中牡蛎细粉、碳酸二氢钙、碳酸氢钠、微晶纤维素和水的投入质量比为1:0.06:0.08:0.05:25。
测试内容:分别对测试对象进行粗蛋白的测定以及铅、镉、铬这三类重金属总量的测定。
粗蛋白的测定:凯氏定氮法测定,标准为GB5009.5-2010。蛋白回收率(%)=产品蛋白含量×100%/原料蛋白含量,产品蛋白含量即步骤(6)喷雾干燥后得到的产品中的蛋白含量,而原料蛋白含量则为步骤(1)获得的牡蛎细粉的蛋白含量。
重金属测定:参照GB15618-1995,测试对象为步骤(6)喷雾干燥后得到的产品。
测试结果如表2所示。表2显示:
(1)参看蛋白回收率数据,随步骤(2)中牡蛎细粉、碳酸二氢钙、碳酸氢钠、微晶纤维素中碳酸二氢钙、碳酸氢钠、微晶纤维素含量的增加,蛋白回收率呈现先增加后平缓再降低的趋势;牡蛎细粉、碳酸二氢钙、碳酸氢钠、微晶纤维素=1:0.03:0.05:0.02、1:0.04:0.06:0.03时,蛋白回收率达85%以上;
(2)参看铅、镉、铬总量数据,随步骤(2)中牡蛎细粉、碳酸二氢钙、碳酸氢钠、微晶纤维素中碳酸二氢钙、碳酸氢钠、微晶纤维素含量的增加,铅、镉、铬总量呈现先降低后增加的趋势;牡蛎细粉、碳酸二氢钙、碳酸氢钠、微晶纤维素=1:0.03:0.05:0.02时,铅、镉、铬总量为0。
表2
实施例3:步骤(3)和步骤(4)对牡蛎肽提取方法的影响
测试对象:实施例1、对照组6-9。
对照组6:参照实施例1,与实施例1的区别在于,步骤(3)酶解步仅包括以下一个部分:调节分散液的pH至7.0,升温至52℃,加入中性蛋白酶,搅拌使之酶解,酶解时间为6hr,酶解后升温至80℃并保温10min使酶失活;分散液和中性蛋白酶的质量比为100:0.3。
对照组7:参照实施例1,与实施例1的区别在于,步骤(4)中仅添加EDTA二钠,未添加微晶纤维素或乙酸乙酯。
对照组8:参照实施例1,与实施例1的区别在于,步骤(4)中仅添加EDTA二钠和微晶纤维素,未添加乙酸乙酯。
对照组9:参照实施例1,与实施例1的区别在于,步骤(4)中仅添加EDTA二钠和乙酸乙酯,未添加微晶纤维素。
测试内容:分别对测试对象进行抽真空过滤耗时的测定,即取1kg步骤(4)处理后的分散液,用0.5μm滤膜真空抽滤,抽滤压强为0.1MPa抽滤温度为25℃,从开始抽滤起计时,至滤液全滤过,记录总耗时。
粗蛋白的测定:凯氏定氮法测定,标准为GB5009.5-2010。蛋白回收率(%)=产品蛋白含量×100%/原料蛋白含量,产品蛋白含量即步骤(6)喷雾干燥后得到的产品中的蛋白含量,而原料蛋白含量则为步骤(1)获得的牡蛎细粉的蛋白含量。
测试结果如表3所示。表3显示:相比在步骤(3)中未进行二步处理的对照组6,本申请的实施例1抽真空过滤耗时更快,蛋白回收率更高;相比在步骤(4)中未添加乙酸乙酯和/或微晶纤维素的对照组7-9,本申请的实施例1抽真空过滤耗时更快,蛋白回收率更高。
表3
抽真空过滤耗时(min) | 蛋白回收率(%) | |
实施例1 | 10 | 85.2 |
对照组6 | 92 | 63.0 |
对照组7 | 53 | 70.2 |
对照组8 | 88 | 68.1 |
对照组9 | 82 | 66.4 |
当然,以上只是本发明的典型实例,除此之外,本发明还可以有其它多种具体实施方式,凡采用等同替换或等效变换形成的技术方案,均落在本发明要求保护的范围之内。
Claims (4)
1.一种牡蛎肽的提取方法,其特征是,包括以下步骤:
(1)粉碎:取洗净干燥后的牡蛎壳和牡蛎肉,粉碎成牡蛎细粉;
(2)分散:将牡蛎细粉、碳酸二氢钙、碳酸氢钠、微晶纤维素和水混合,搅拌,分散均匀得到分散液;牡蛎细粉、碳酸二氢钙、碳酸氢钠、微晶纤维素和水的投入质量比为1:0.02~0.04:0.04~0.06:0.01~0.03:23~28;
(3)酶解:向分散液中加入分解酶,使分散液酶解;
(4)去重金属:向酶解后的分散液中加入EDTA二钠,搅拌反应25~35min;
(5)过滤:将去金属后的分散液过滤,取滤液;
(6)浓缩、干燥、包装。
2.根据权利要求1所述的一种牡蛎肽的提取方法,其特征是,步骤(3)中,分解酶包括中性蛋白酶和脂肪酶,酶解步包括以下两个部分:
①调节分散液的pH至6.8~7.2,升温至50~55℃,加入中性蛋白酶,搅拌使之酶解,酶解时间为5~7hr,酶解后升温至75~85℃并保温8~12min使酶失活;分散液和中性蛋白酶的质量比为100:0.2~0.4;
②调节分散液的pH至6.8~7.2,升温至38~42℃,加入脂肪酶,搅拌使之酶解,酶解时间为2~4hr,酶解后升温至85~95℃并保温4~5min使酶失活;分散液和脂肪酶的质量比为100:0.1~0.3。
3.根据权利要求2所述的一种牡蛎肽的提取方法,其特征是,步骤(4)中,除了向分散液中加入EDTA二钠外,步骤(4)中还添加有微晶纤维素和乙酸乙酯;步骤(4)中,酶解后的分散液、EDTA二钠、微晶纤维素和乙酸乙酯的质量比为100:0.02~0.04:0.08~0.11:7~9。
4.根据权利要求3所述的一种牡蛎肽的提取方法,其特征是,包括以下步骤:
(1)粉碎:取洗净干燥后的牡蛎壳和牡蛎肉,粉碎成牡蛎细粉;
(2)分散:将牡蛎细粉、碳酸二氢钙、碳酸氢钠、微晶纤维素和水混合,搅拌,分散均匀得到分散液;牡蛎细粉、碳酸二氢钙、碳酸氢钠、微晶纤维素和水的投入质量比为1:0.03:0.05:0.02:25;
(3)酶解:
①调节分散液的pH至7.0,升温至52℃,加入中性蛋白酶,搅拌使之酶解,酶解时间为6hr,酶解后升温至80℃并保温10min使酶失活;分散液和中性蛋白酶的质量比为100:0.3;
②调节分散液的pH至7.0,升温至40℃,加入脂肪酶,搅拌使之酶解,酶解时间为3hr,酶解后升温至90℃并保温5min使酶失活;分散液和脂肪酶的质量比为100:0.2;
(4)去重金属:向酶解后的分散液中加入EDTA二钠、微晶纤维素和乙酸乙酯,搅拌反应30min;步骤(4)中,酶解后的分散液、EDTA二钠、微晶纤维素和乙酸乙酯的质量比为100:0.03:0.10:8;
(5)过滤:将去金属后的分散液用0.5μm滤膜真空抽滤,取滤液;
(6)真空浓缩至固含量为50wt%,喷雾干燥,包装。
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