CN113718006A - 一种牡蛎肽的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本申请公开了一种牡蛎肽的提取方法，其包括以下步骤：(1)粉碎：取洗净干燥后的牡蛎壳和牡蛎肉，粉碎成牡蛎细粉；(2)分散：将牡蛎细粉、碳酸二氢钙、碳酸氢钠、微晶纤维素和水按质量比1:0.02～0.04:0.04～0.06:0.01～0.03:23～28混合，搅拌，分散均匀得到分散液；(3)酶解：向分散液中加入分解酶，使分散液酶解；(4)去重金属：向酶解后的分散液中加入EDTA二钠，搅拌反应25～35min；(5)过滤：将去金属后的分散液过滤，取滤液；(6)浓缩、干燥、包装；具有去重金属、提高蛋白回收率的优点。
Description
技术领域
本发明涉及一种牡蛎肽的提取方法。
背景技术
海洋食品牡蛎具有巨大的食用价值和药用价值，是世界上第一大养殖贝类，在我国浙江省等沿海地区都进行大规模养殖。浙江宁海一带被誉为“牡蛎之乡”，已有700年的牡蛎养殖史。牡蛎的营养价值极高，牡蛎中的蛋白质含量高达45％-57％，其氨基酸组成完善。根据世界粮农组织评定，牡蛎肉中必需氨基酸完全程度和质量比例优于人乳和牛乳。古人将牡蛎称为“水产品之最贵者”，古罗马人把它誉为“海中美味-圣鱼”，西方人称之为“神赐魔石”、“海中牛奶”，日本人则誉之为“根之源”。
由于海洋污染，现代海洋生物如牡蛎中存在相当的重金属，因此对牡蛎进行处理时需要考虑该技术问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种牡蛎肽的提取方法，具有除重金属的优点。
本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：
一种牡蛎肽的提取方法，包括以下步骤：
(1)粉碎：取洗净干燥后的牡蛎壳和牡蛎肉，粉碎成牡蛎细粉；
(2)分散：将牡蛎细粉、碳酸二氢钙、碳酸氢钠、微晶纤维素和水混合，搅拌，分散均匀得到分散液；牡蛎细粉、碳酸二氢钙、碳酸氢钠、微晶纤维素和水的投入质量比为1:0.02～0.04:0.04～0.06:0.01～0.03:23～28；
(3)酶解：向分散液中加入分解酶，使分散液酶解；
(4)去重金属：向酶解后的分散液中加入EDTA二钠，搅拌反应25～35min；
(5)过滤：将去金属后的分散液过滤，取滤液；
(6)浓缩、干燥、包装。
进一步的，步骤(3)中，分解酶包括中性蛋白酶和脂肪酶，酶解步包括以下两个部分：
①调节分散液的pH至6.8～7.2，升温至50～55℃，加入中性蛋白酶，搅拌使之酶解，酶解时间为5～7hr，酶解后升温至75～85℃并保温8～12min使酶失活；分散液和中性蛋白酶的质量比为100:0.2～0.4；
②调节分散液的pH至6.8～7.2，升温至38～42℃，加入脂肪酶，搅拌使之酶解，酶解时间为2～4hr，酶解后升温至85～95℃并保温4～5min使酶失活；分散液和脂肪酶的质量比为100:0.1～0.3。
进一步的，步骤(4)中，除了向分散液中加入EDTA二钠外，步骤(4)中还添加有微晶纤维素和乙酸乙酯；步骤(4)中，酶解后的分散液、EDTA二钠、微晶纤维素和乙酸乙酯的质量比为100:0.02～0.04:0.08～0.11:7～9。
进一步的，包括以下步骤：
(1)粉碎：取洗净干燥后的牡蛎壳和牡蛎肉，粉碎成牡蛎细粉；
(2)分散：将牡蛎细粉、碳酸二氢钙、碳酸氢钠、微晶纤维素和水混合，搅拌，分散均匀得到分散液；牡蛎细粉、碳酸二氢钙、碳酸氢钠、微晶纤维素和水的投入质量比为1:0.03:0.05:0.02:25；
(3)酶解：
①调节分散液的pH至7.0，升温至52℃，加入中性蛋白酶，搅拌使之酶解，酶解时间为6hr，酶解后升温至80℃并保温10min使酶失活；分散液和中性蛋白酶的质量比为100:0.3；
②调节分散液的pH至7.0，升温至40℃，加入脂肪酶，搅拌使之酶解，酶解时间为3hr，酶解后升温至90℃并保温5min使酶失活；分散液和脂肪酶的质量比为100:0.2；
(4)去重金属：向酶解后的分散液中加入EDTA二钠、微晶纤维素和乙酸乙酯，搅拌反应30min；步骤(4)中，酶解后的分散液、EDTA二钠、微晶纤维素和乙酸乙酯的质量比为100:0.03:0.10:8；
(5)过滤：将去金属后的分散液用0.5μm滤膜真空抽滤，取滤液；
(6)真空浓缩至固含量为50wt％，喷雾干燥，包装。
本发明技术效果主要体现在以下方面：
在处理牡蛎过程中利用EDTA二钠进行重金属处理，降低产品中重金属含量，提高食品安全性；在处理过程中由于重金属的存在，过程中的多肽和重金属存在螯合的可能性，从而导致产品中存在螯合的重金属，利用碳酸氢钙在碱性条件下和重金属的作用推动、并结合微晶纤维素对其分散和螯合的阻碍，从而减少重金属和多肽的螯合，使重金属处于游离态，以便其与EDTA二钠作用，提高重金属去除效果，也减少多肽的损失；
在牡蛎酶解后得到的酶解液中乳化稳定性较好，分离不理想，影响分离时间和产品质量，在本申请中通过脂肪酶酶解脂肪，破坏蛋白质和脂肪相互作用，降低乳液的稳定性，从而使得油水分离，并通过乙酸乙酯和微晶纤维素的作用，提高分离效果，加快工艺进程，提高蛋白回收率。
具体实施方式
实施例1：一种牡蛎肽的提取方法，包括以下步骤：
(1)粉碎：取洗净干燥后的牡蛎壳和牡蛎肉，粉碎成牡蛎细粉；
(2)分散：将牡蛎细粉、碳酸二氢钙、碳酸氢钠、微晶纤维素和水混合，搅拌，分散均匀得到分散液；牡蛎细粉、碳酸二氢钙、碳酸氢钠、微晶纤维素和水的投入质量比为1:0.03:0.05:0.02:25；
(3)酶解：
①调节分散液的pH至7.0，升温至52℃，加入中性蛋白酶，搅拌使之酶解，酶解时间为6hr，酶解后升温至80℃并保温10min使酶失活；分散液和中性蛋白酶的质量比为100:0.3；
②调节分散液的pH至7.0，升温至40℃，加入脂肪酶，搅拌使之酶解，酶解时间为3hr，酶解后升温至90℃并保温5min使酶失活；分散液和脂肪酶的质量比为100:0.2；
(4)去重金属：向酶解后的分散液中加入EDTA二钠、微晶纤维素和乙酸乙酯，搅拌反应30min；步骤(4)中，酶解后的分散液、EDTA二钠、微晶纤维素和乙酸乙酯的质量比为100:0.03:0.10:8；
(5)过滤：将去金属后的分散液用0.5μm滤膜真空抽滤，取滤液；
(6)真空浓缩至固含量为50wt％，喷雾干燥，包装。
实施例1牡蛎肽的分子量分布表如表1所示。
表1
| 分子量范围(Dalton) | 峰面积百分比(％，λ220nm) |
| M＞3000 | 0.15 |
| 2000＜M≤3000 | 0.44 |
| 1000＜M≤2000 | 2.03 |
| 180＜M≤1000 | 17.25 |
| M≤180 | 80.13 |
实施例2：步骤(2)对牡蛎肽提取方法的影响
测试对象：实施例1、对照组1-5。
对照组1：参照实施例1，与实施例1的区别在于，步骤(2)中牡蛎细粉、碳酸二氢钙、碳酸氢钠、微晶纤维素和水的投入质量比为1:0.02:0.04:0.01:25。
对照组2：参照实施例1，与实施例1的区别在于，步骤(2)中牡蛎细粉、碳酸二氢钙、碳酸氢钠、微晶纤维素和水的投入质量比为1:0.04:0.06:0.03:25。
对照组3：参照实施例1，与实施例1的区别在于，步骤(2)中牡蛎细粉中未添加碳酸二氢钙、碳酸氢钠或微晶纤维素，仅添加水且牡蛎细粉和水的投入质量比为1:25。
对照组4：参照实施例1，与实施例1的区别在于，步骤(2)中牡蛎细粉中未添加微晶纤维素，牡蛎细粉、碳酸二氢钙、碳酸氢钠和水的投入质量比为1:0.03:0.05:25。
对照组5：参照实施例1，与实施例1的区别在于，步骤(2)中牡蛎细粉、碳酸二氢钙、碳酸氢钠、微晶纤维素和水的投入质量比为1:0.06:0.08:0.05:25。
测试内容：分别对测试对象进行粗蛋白的测定以及铅、镉、铬这三类重金属总量的测定。
粗蛋白的测定：凯氏定氮法测定，标准为GB5009.5-2010。蛋白回收率(％)＝产品蛋白含量×100％/原料蛋白含量，产品蛋白含量即步骤(6)喷雾干燥后得到的产品中的蛋白含量，而原料蛋白含量则为步骤(1)获得的牡蛎细粉的蛋白含量。
重金属测定：参照GB15618-1995，测试对象为步骤(6)喷雾干燥后得到的产品。
测试结果如表2所示。表2显示：
(1)参看蛋白回收率数据，随步骤(2)中牡蛎细粉、碳酸二氢钙、碳酸氢钠、微晶纤维素中碳酸二氢钙、碳酸氢钠、微晶纤维素含量的增加，蛋白回收率呈现先增加后平缓再降低的趋势；牡蛎细粉、碳酸二氢钙、碳酸氢钠、微晶纤维素＝1:0.03:0.05:0.02、1:0.04:0.06:0.03时，蛋白回收率达85％以上；
(2)参看铅、镉、铬总量数据，随步骤(2)中牡蛎细粉、碳酸二氢钙、碳酸氢钠、微晶纤维素中碳酸二氢钙、碳酸氢钠、微晶纤维素含量的增加，铅、镉、铬总量呈现先降低后增加的趋势；牡蛎细粉、碳酸二氢钙、碳酸氢钠、微晶纤维素＝1:0.03:0.05:0.02时，铅、镉、铬总量为0。
表2
实施例3：步骤(3)和步骤(4)对牡蛎肽提取方法的影响
测试对象：实施例1、对照组6-9。
对照组6：参照实施例1，与实施例1的区别在于，步骤(3)酶解步仅包括以下一个部分：调节分散液的pH至7.0，升温至52℃，加入中性蛋白酶，搅拌使之酶解，酶解时间为6hr，酶解后升温至80℃并保温10min使酶失活；分散液和中性蛋白酶的质量比为100:0.3。
对照组7：参照实施例1，与实施例1的区别在于，步骤(4)中仅添加EDTA二钠，未添加微晶纤维素或乙酸乙酯。
对照组8：参照实施例1，与实施例1的区别在于，步骤(4)中仅添加EDTA二钠和微晶纤维素，未添加乙酸乙酯。
对照组9：参照实施例1，与实施例1的区别在于，步骤(4)中仅添加EDTA二钠和乙酸乙酯，未添加微晶纤维素。
测试内容：分别对测试对象进行抽真空过滤耗时的测定，即取1kg步骤(4)处理后的分散液，用0.5μm滤膜真空抽滤，抽滤压强为0.1MPa抽滤温度为25℃，从开始抽滤起计时，至滤液全滤过，记录总耗时。
粗蛋白的测定：凯氏定氮法测定，标准为GB5009.5-2010。蛋白回收率(％)＝产品蛋白含量×100％/原料蛋白含量，产品蛋白含量即步骤(6)喷雾干燥后得到的产品中的蛋白含量，而原料蛋白含量则为步骤(1)获得的牡蛎细粉的蛋白含量。
测试结果如表3所示。表3显示：相比在步骤(3)中未进行二步处理的对照组6，本申请的实施例1抽真空过滤耗时更快，蛋白回收率更高；相比在步骤(4)中未添加乙酸乙酯和/或微晶纤维素的对照组7-9，本申请的实施例1抽真空过滤耗时更快，蛋白回收率更高。
表3
| 抽真空过滤耗时(min) | 蛋白回收率(％) | |
| 实施例1 | 10 | 85.2 |
| 对照组6 | 92 | 63.0 |
| 对照组7 | 53 | 70.2 |
| 对照组8 | 88 | 68.1 |
| 对照组9 | 82 | 66.4 |
当然，以上只是本发明的典型实例，除此之外，本发明还可以有其它多种具体实施方式，凡采用等同替换或等效变换形成的技术方案，均落在本发明要求保护的范围之内。
Claims (4)
1.一种牡蛎肽的提取方法，其特征是，包括以下步骤：
(1)粉碎：取洗净干燥后的牡蛎壳和牡蛎肉，粉碎成牡蛎细粉；
(2)分散：将牡蛎细粉、碳酸二氢钙、碳酸氢钠、微晶纤维素和水混合，搅拌，分散均匀得到分散液；牡蛎细粉、碳酸二氢钙、碳酸氢钠、微晶纤维素和水的投入质量比为1:0.02～0.04:0.04～0.06:0.01～0.03:23～28；
(3)酶解：向分散液中加入分解酶，使分散液酶解；
(4)去重金属：向酶解后的分散液中加入EDTA二钠，搅拌反应25～35min；
(5)过滤：将去金属后的分散液过滤，取滤液；
(6)浓缩、干燥、包装。
2.根据权利要求1所述的一种牡蛎肽的提取方法，其特征是，步骤(3)中，分解酶包括中性蛋白酶和脂肪酶，酶解步包括以下两个部分：
①调节分散液的pH至6.8～7.2，升温至50～55℃，加入中性蛋白酶，搅拌使之酶解，酶解时间为5～7hr，酶解后升温至75～85℃并保温8～12min使酶失活；分散液和中性蛋白酶的质量比为100:0.2～0.4；
②调节分散液的pH至6.8～7.2，升温至38～42℃，加入脂肪酶，搅拌使之酶解，酶解时间为2～4hr，酶解后升温至85～95℃并保温4～5min使酶失活；分散液和脂肪酶的质量比为100:0.1～0.3。
3.根据权利要求2所述的一种牡蛎肽的提取方法，其特征是，步骤(4)中，除了向分散液中加入EDTA二钠外，步骤(4)中还添加有微晶纤维素和乙酸乙酯；步骤(4)中，酶解后的分散液、EDTA二钠、微晶纤维素和乙酸乙酯的质量比为100:0.02～0.04:0.08～0.11:7～9。
4.根据权利要求3所述的一种牡蛎肽的提取方法，其特征是，包括以下步骤：
(1)粉碎：取洗净干燥后的牡蛎壳和牡蛎肉，粉碎成牡蛎细粉；
(2)分散：将牡蛎细粉、碳酸二氢钙、碳酸氢钠、微晶纤维素和水混合，搅拌，分散均匀得到分散液；牡蛎细粉、碳酸二氢钙、碳酸氢钠、微晶纤维素和水的投入质量比为1:0.03:0.05:0.02:25；
(3)酶解：
①调节分散液的pH至7.0，升温至52℃，加入中性蛋白酶，搅拌使之酶解，酶解时间为6hr，酶解后升温至80℃并保温10min使酶失活；分散液和中性蛋白酶的质量比为100:0.3；
②调节分散液的pH至7.0，升温至40℃，加入脂肪酶，搅拌使之酶解，酶解时间为3hr，酶解后升温至90℃并保温5min使酶失活；分散液和脂肪酶的质量比为100:0.2；
(4)去重金属：向酶解后的分散液中加入EDTA二钠、微晶纤维素和乙酸乙酯，搅拌反应30min；步骤(4)中，酶解后的分散液、EDTA二钠、微晶纤维素和乙酸乙酯的质量比为100:0.03:0.10:8；
(5)过滤：将去金属后的分散液用0.5μm滤膜真空抽滤，取滤液；
(6)真空浓缩至固含量为50wt％，喷雾干燥，包装。
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