CN110713514A - 一种小麦小分子活性肽的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种小麦小分子活性肽的提取方法，该方法包括以下步骤：将小麦谷朊粉用粉碎机粉成粉末，加入氢氧化钠稀溶液中调浆，调节pH＝11，温度50℃,搅拌,离心取上层清液，加入酸性物质将PH值＝4.5，离心留下蛋白质沉淀，再融于水，100℃恒温加热后，降温到37℃，加入碱性物质PH调到7.0后不停搅拌液体，加入酶水解3h后停止，加入酸性物质将PH值调到4.0，使酶失去活性，溶液放入离心机中离心，取上清液经超滤膜分离过滤，活性炭脱臭脱色，利用定向酶切特定小肽分离技术得到小麦蛋白小分子多肽物质。本发明利用蛋白质含量高的小麦谷朊粉进行分离提取小麦蛋白小分子多肽物质，资源合理化利用降低成本，制备方法便捷且小分子多肽物质提取率与质量。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种小麦小分子活性肽的提取方法。
背景技术
小麦是小麦系植物的统称，是单子叶植物，是一种在世界各地广泛种植的禾本科植物，小麦的颖果是人类的主食之一，磨成面粉后可制作面包、馒头、饼干、面条等食物；发酵后可制成啤酒、酒精、白酒，或生质燃料。小麦富含淀粉、蛋白质、脂肪、矿物质、钙、铁、硫胺素、核黄素、烟酸、维生素A及维生素C等。小麦是三大谷物之一，几乎全作食用，仅约有六分之一作为饲料使用。两河流域是世界上最早栽培小麦的地区，中国是世界最早种植小麦的国家之一。
谷朊粉是是从小麦中提取出来的天然蛋白质，蛋白质含量高达75％～85％，是营养丰富的植物蛋白资源，具有粘性、弹性、延伸性、成膜性和吸脂性。谷朊粉是一种优良的面团改良剂，同时也是高档水产饲料的基础原料。目前国内还把谷朊粉作为一种高效的绿色面粉增筋剂，将其用于高筋粉、面包专用粉的生产，还是增加食品中植物蛋白质含量的有效方法。
近年来的研究发展，小麦蛋白质肽链中蕴含这生物活性肽，他们在蛋白质降解过程中释放出来。发挥着代谢调节的作业。小麦蛋白中谷氨酸含量约占蛋白总量的37.5％，且谷氨酸在蛋白质中的存在形式时谷氨酰胺，所以小麦蛋白非常适合用来制备富含谷氨酰胺的活性肽。现有的小麦活性肽的提取方法在提取时工艺复杂提取效率低，成本高，不利于工业化生产，所以需要一款工艺便捷，且制得的小麦活性肽提取效率和质量高的方法。
发明内容
本发明的目的是为了克服上述缺陷，提供了一种小麦小分子活性肽的提取方法。
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
一种小麦小分子活性肽的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1).小麦蛋白原料粉碎烘干：将小麦蛋白原料用粉碎机粉成粉末并且恒温2h；
(2).小麦蛋白原料溶解：将小麦蛋白原料加入氢氧化钠稀溶液中进行调浆处理，调节pH至11，温度50℃,搅拌1.5h,1500r/min的速度离心分离10min后取上层清液进行下一步分离；
(3).分离蛋白质：在上层清液中加入酸性物质将PH值调到4.5，1500r/min的速度离心分离10min后，去上层清液，留下蛋白质沉淀；
(4).酶解及灭酶：将蛋白质沉淀物融于水中，将其放入100℃恒温水浴锅中加热30min,继续将其降温到37℃，加入碱性物质将PH调到7.0后不停搅拌液体，加入酶水解3h后停止，溶液中继续加入酸性物质将PH值调到4.0，使酶失去活性，冷却；
(5).过滤分离：将溶液放入离心机中，以3000r/min离心20min，去下层沉淀，取上清液，经超滤膜分离得到过滤液；
(6).小麦蛋白小分子多肽物质提取：将过滤液经活性炭脱臭脱色后，利用定向酶切特定小肽分离技术得到小麦蛋白小分子多肽物质,最后高温灭菌。
根据本发明的制备方法，优选地，所述步骤(1)使用的小麦蛋白原料为谷朊粉。
根据本发明的制备方法，优选地，所述步骤(1)中氢氧化钠稀溶液与谷朊粉液料为1:10。
根据本发明的制备方法，优选地，所述步骤(3)中提到的酸性物质为柠檬酸。
根据本发明的制备方法，优选地，所述步骤(4)中的碱性物质为Na2SO3。
根据本发明的制备方法，优选地，所述步骤(4)中提到的酸性物质为柠檬酸。
根据本发明的制备方法，优选地，所述步骤(5)中的超滤膜为300Dalton的超滤膜。
根据本发明的制备方法，优选地，所述步骤(6)中高温灭菌温度在60℃以上。
本发明还提供一种小麦小分子活性肽，该小麦小分子活性肽采用上述方法制备得到。该方法制得的小麦小分子活性肽：
1.实现工艺简单，便捷工业化生产：本发明原料为谷朊粉蛋白质含量高，便于蛋白质的分离提取，同时第一步使用强碱性物质分离蛋白质效率高，提高了提取的工作效率。
2.实现提高小麦小分子活性肽质量的目的：本发明在从谷朊粉提取出蛋白质后经过300Dalton的超滤膜过滤来提高蛋白质质量，同时利用定向酶切特定小肽分离技术得到高质量的小麦蛋白小分子多肽物质。
3.实现提取效率高：本发明使用强碱性物质进行提取时提高提取时设置环境pH至11，温度50℃,搅拌1.5h，液料比例1:10提高蛋白质提取效率，最后采用定向酶切特定小肽分离技术高效定向的分离出小麦蛋白小分子多肽物质。
除了上面所描述的目的、特征和优点之外，本发明还有其它的目的、特征和优点。下面将对本发明作进一步详细的说明。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明一种小麦小分子活性肽的提取方法的温度与蛋白质提取率示意图。
图2是本发明一种小麦小分子活性肽的提取方法的Ph值与蛋白质提取率示意图。
图3是本发明一种小麦小分子活性肽的提取方法的液料比与蛋白质提取率示意图。
图4是本发明一种小麦小分子活性肽的提取方法的搅拌时间与蛋白质提取率示意图。
具体实施方式：
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
一种小麦小分子活性肽的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1).小麦蛋白原料粉碎烘干：将小麦蛋白原料用粉碎机粉成粉末并且恒温2h；
(2).小麦蛋白原料溶解：将小麦蛋白原料加入氢氧化钠稀溶液中进行调浆处理，调节pH至11，温度50℃,搅拌1.5h,1500r/min的速度离心分离10min后取上层清液进行下一步分离；
(3).分离蛋白质：在上层清液中加入酸性物质将PH值调到4.5，1500r/min的速度离心分离10min后，去上层清液，留下蛋白质沉淀；
(4).酶解及灭酶：将蛋白质沉淀物融于水中，将其放入100℃恒温水浴锅中加热30min,继续将其降温到37℃，加入碱性物质将PH调到7.0后不停搅拌液体，加入酶水解3h后停止，溶液中继续加入酸性物质将PH值调到4.0，使酶失去活性，冷却；
(5).过滤分离：将溶液放入离心机中，以3000r/min离心20min，去下层沉淀，取上清液，经超滤膜分离得到过滤液；
(6).小麦蛋白小分子多肽物质提取：将过滤液经活性炭脱臭脱色后，利用定向酶切特定小肽分离技术得到小麦蛋白小分子多肽物质,最后高温灭菌。
本发明中，所述步骤(1)使用的小麦蛋白原料为谷朊粉；所述步骤(1)中氢氧化钠稀溶液与谷朊粉液料为1:10；所述步骤(3)中提到的酸性物质为柠檬酸；所述步骤(4)中的碱性物质为Na2SO3；所述步骤(4)中提到的酸性物质为柠檬酸；所述步骤(5)中的超滤膜为300Dalton的超滤膜；所述步骤(6)中高温灭菌温度在60℃以上。
本发明，操作方便，原理简单，一种小麦小分子活性肽的提取方法是一种可以便捷小麦小分子活性肽提取方式，提高小麦小分子活性肽提取率和质量的制备方法。
小麦蛋白原料谷朊粉在氢氧化钠稀溶液中调制提取蛋白质时，提取提取条件为温度＝50℃、Ph值＝11.0，液料比10∶1，搅拌时间为1.5h。如图1温度与蛋白质提取率示意图所示，蛋白质提取效率不是随着温度越高提取效率越高的，在温度＝50℃时蛋白质提取率最高，往后急剧降低；如图2Ph值与蛋白质提取率示意图所示，蛋白质提取效率与Ph值正相关，但是在Ph值＝11.0时增长率达到最高，后续增长率降低趋于平缓；如图3液料比与蛋白质提取率示意图所示，蛋白质提取效率与液料比值正相关，但是在液料比为10∶1时增长率达到最高，后续增长率降低趋于平缓；如图4搅拌时间与蛋白质提取率示意图所示，搅拌时间为1.5h时蛋白质提取率增长率最高，后续趋于平缓且在2.0h后蛋白质提取率开始降低。综上所述在小麦蛋白原料谷朊粉中蛋白质提取时，提取提取条件为温度＝50℃、Ph值＝11.0，液料比10∶1，搅拌时间为1.5h。
在进行小麦蛋白小分子多肽物质提取时采用定向酶切特定小肽分离技术用限制性内切酶去切割DNA片断，由于酶具有专一性，固定识别一种特定的脱氧核苷酸序列，用特定的酶去切割相应的小麦蛋白小分子多肽物质的DNA片断，进而达到定向切割的目的，提高小麦蛋白小分子多肽物质提取质量。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种小麦小分子活性肽的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1).小麦蛋白原料粉碎烘干：将小麦蛋白原料用粉碎机粉成粉末并且恒温2h；
(2).小麦蛋白原料溶解：将小麦蛋白原料加入氢氧化钠稀溶液中进行调浆处理，调节pH至11，温度50℃,搅拌1.5h,1500r/min的速度离心分离10min后取上层清液进行下一步分离；
(3).分离蛋白质：在上层清液中加入酸性物质将PH值调到4.5，1500r/min的速度离心分离10min后，去上层清液，留下蛋白质沉淀；
(4).酶解及灭酶：将蛋白质沉淀物融于水中，将其放入100℃恒温水浴锅中加热30min,继续将其降温到37℃，加入碱性物质将PH调到7.0后不停搅拌液体，加入酶水解3h后停止，溶液中继续加入酸性物质将PH值调到4.0，使酶失去活性，冷却；
(5).过滤分离：将溶液放入离心机中，以3000r/min离心20min，去下层沉淀，取上清液，经超滤膜分离得到过滤液；
(6).小麦蛋白小分子多肽物质提取：将过滤液经活性炭脱臭脱色后，利用定向酶切特定小肽分离技术得到小麦蛋白小分子多肽物质,最后高温灭菌。
2.根据权利要求1所述的一种小麦小分子活性肽的提取方法，其特征在于：所述步骤(1)使用的小麦蛋白原料为谷朊粉。
3.根据权利要求1所述的一种小麦小分子活性肽的提取方法，其特征在于：所述步骤(1)中氢氧化钠稀溶液与谷朊粉液料为1:10。
4.根据权利要求1所述的一种小麦小分子活性肽的提取方法，其特征在于：所述步骤(3)中提到的酸性物质为柠檬酸。
5.根据权利要求1所述的一种小麦小分子活性肽的提取方法，其特征在于：所述步骤(4)中的碱性物质为Na2SO3。
6.根据权利要求1所述的一种小麦小分子活性肽的提取方法，其特征在于：所述步骤(4)中提到的酸性物质为柠檬酸。
7.根据权利要求1所述的一种小麦小分子活性肽的提取方法，其特征在于：所述步骤(5)中的超滤膜为300Dalton的超滤膜。
8.根据权利要求1所述的一种小麦小分子活性肽的提取方法，其特征在于：所述步骤(6)中高温灭菌温度在60℃以上。
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