CN113575946B

CN113575946B - 一种抑制糖分和脂肪吸收的组合物

Info

Publication number: CN113575946B
Application number: CN202110841979.5A
Authority: CN
Inventors: 徐旻珺; 黄晓敏; 陈朋
Original assignee: Sirio Pharma Co Ltd
Current assignee: Sirio Pharma Co Ltd
Priority date: 2021-07-26
Filing date: 2021-07-26
Publication date: 2024-06-14
Anticipated expiration: 2041-07-26
Also published as: CN113575946A

Abstract

本发明公开了一种抑制糖分和脂肪吸收的组合物，所述抑制糖分和脂肪吸收的组合物包括重量含量94％以下的含茶多酚的绿茶提取物、3％‑20％的含多酚的玫瑰花提取物和3％以上的含多酚及安石榴苷的石榴果提取物。本发明制备得到的抑制糖分和脂肪吸收的组合物能够实现对α‑淀粉酶和α‑葡萄糖苷酶的双重抑制，同时能抑制脂肪酶的活性，进一步达到减脂的功效。组合物能够显著改善单独含茶多酚的绿茶提取物的苦涩口感，改善食用者的服用体验，增强其长期服用的意愿。组合物成分和功效明确，适用范围广，无毒副作用，组合物制备操作简单，成本低，适用剂型广，便于生产应用。

Description

一种抑制糖分和脂肪吸收的组合物

技术领域

本发明属于涉及食品技术领域，尤其涉及一种抑制糖分和脂肪吸收的组合物。

背景技术

随着经济社会的发展，现代人的糖分和脂肪摄入量持续上升，能量的摄入远大于能量的消耗，加之平时运动量的减少，导致体内脂肪积累过多，导肥胖率持续上涨。肥胖会引起人体各种心脑血管疾病，明显降低生活质量。

奥利司是美国FDA批准的最常用减肥药物。它是一种有效的脂肪酶抑制剂，主要通过抑制胰脂肪酶的生物活性，使机体摄入的脂肪的吸收利用率降低，从而达到减肥降脂的效果。但奥利司也有一定的副作用，它会影响脂溶性维生素A和E的吸收。***(sibutramine)通过抑制中枢神经元对去甲肾上腺素和血清素的再摄取，抑制食欲，增加机体的饱腹感，同时能够增加中枢交感传出神经的兴奋度，使能量消耗增加，达到减轻体重的目的，但***也可引起心率加快、血压升高。芬特明((Phentermine)是一种有效减肥药，属安非他明类药物，它主要通过抑制食欲来达到减肥效果，但该药物也会影响机体中枢神经***及心血管***，导致服用者心跳加快、紧张、失眠等。市场上还有许多化学合成的减肥产品，但是这些产品的使用安全性面临着很大的问题。

随着我国社会经济的发展，人民健康饮食意识的提高，食品的营养和保健作用越来越受到人们的重视。面对全球愈发严重的肥胖症及其由肥胖引起的代谢性疾病的发病率的升高，探寻安全、有效的新的预防和治疗策略，对于干预肥胖相关的健康疾患，降低肥胖与肥胖并非症的发病率具有重要意义。

研究证实代谢综合征与不合理饮食的关系密切，通过膳食干预体内脂肪代谢成为最新的研究热点之一。因此，从食源性天然产物中寻找一种安全的减肥方法，开发具有体内脂肪代谢干预功能的功能因子，研究其应用在预防和治疗代谢综合征方面具有重要经济和社会价值。

功能食品是具有特定保健作用的一类特殊食品，符合食品的基本体质并具有相应功能。功能食品热潮为我国食品行业带来了新的发展机遇。寻找安全、有效的干预肥胖发生的天然物质是当前的研究热点。抑制糖分和脂肪吸收是天然产物干预肥胖发生的重要方面。

食物中摄取的脂肪被胃、胰和肠脂肪酶水解为单酸基甘油和游离脂肪酸(FFA)后在肠道中被吸收，在体内又重新被合成为脂肪，储存在机体皮下与内脏周围，造成脂肪过度堆积，导致肥胖。脂肪酶抑制剂能够有效地抑制脂肪酶对脂肪的催化分解作用，减少脂肪的吸收，达到预防和治疗肥胖的目的。天然产物中存在着许多安全、毒副作用小的脂肪酶抑制剂。

α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶是影响淀粉等碳水化合物消化和吸收的关键糖苷水解酶。碳水化合物摄入后，在小肠α-淀粉酶作用下水解为寡糖，进而在α-葡萄糖苷酶作用下水解为葡萄糖，引起血糖升高。因此，抑制这两种酶的活性，延缓碳水化合物消化及葡萄糖进入血液的速率，被认为是控制餐后高血糖的有效途径。目前常用的α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶活性抑制药物，如阿卡波糖、米格列醇等会引起人体肠胃胀气、腹泻和腹部、肝脏疾病，因此寻找副作用小的天然酶活抑制成分成为肥胖干预的研究热点之一。

发明内容

针对上述现有技术中的不足，本发明的目的在于提供一种抑制糖分和脂肪吸收的组合物；该抑制糖分和脂肪吸收的组合物包括重量含量94％以下的含茶多酚的绿茶提取物、3％-20％的含多酚的玫瑰花提取物和3％以上的含多酚及安石榴苷的石榴果提取物。

优选的，所述抑制糖分和脂肪吸收的组合物包括重量含量10％-94％的含茶多酚的绿茶提取物、3％-10％的含多酚的玫瑰花提取物和含多酚及安石榴苷的石榴果提取物3％-87％。

优选的，所述抑制糖分和脂肪吸收的组合物包括重量含量20％-94％的含茶多酚的绿茶提取物、3％-10％的含多酚的玫瑰花提取物和3％-77％的含多酚及安石榴苷的石榴果提取物。

优选的，所述抑制糖分和脂肪吸收的组合物包括重量含量30％-94％的含茶多酚的绿茶提取物、3％-10％的含多酚的玫瑰花提取物和3％-67％的含多酚及安石榴苷的石榴果提取物。

进一步的，所述抑制糖分和脂肪吸收的组合物还包括可用于药品、食品中的辅料或添加剂，所述辅料或添加剂为甜味剂、酸调节剂、填充剂、矫味剂、着色剂、抗氧化剂、增稠剂、稳定剂、乳化剂、抗结剂、助流剂、润滑剂中的一种或多种。

进一步的，所述含茶多酚的绿茶提取物的提取方法如下：

绿茶经粉碎、水或乙醇提取、浓缩、干燥，得含茶多酚的绿茶提取物。

进一步的，所述含多酚的玫瑰花提取物的提取方法如下：

玫瑰花经粉碎、水或乙醇提取、浓缩、干燥，得含多酚的玫瑰花提取物。

进一步的，所述含多酚及安石榴苷的石榴果提取物的提取方法如下：

石榴果经粉碎、水或乙醇提取、浓缩、干燥，得含多酚及安石榴苷的石榴果提取物。

进一步的，所述抑制糖分和脂肪吸收的组合物为口服制剂。

进一步的，所述口服制剂为粉剂、颗粒剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、片剂、软糖剂、口服溶液或乳剂。

相比于现有技术，本发明具有如下有益效果：

(1)现有控糖控脂产品中应用比较广泛的是白芸豆提取物，但是白芸豆提取物只能对α-淀粉酶有一定程度的抑制，而不能控制α-葡萄糖苷酶。α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶均可以对多糖进行分解，但单纯的抑制其中一种酶无法实现糖分吸收的完全控制。本发明通过含多酚的玫瑰花提取物、含多酚及安石榴苷的石榴果提取物和含茶多酚的绿茶提取物的科学配比能够实现对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的双重抑制。

(2)本发明制备得到的抑制糖分和脂肪吸收的组合物还能同时抑制脂肪酶的活性，进一步达到减脂的功效。

(3)本发明通过含多酚的玫瑰花提取物、含多酚及安石榴苷的石榴果提取物和含茶多酚的绿茶提取物的科学配比，能够显著改善单独含茶多酚的绿茶提取物的苦涩口感。改善食用者的服用体验，增强其长期服用的意愿。

(4)本发明制备得到的抑制糖分和脂肪吸收的组合物的成分和功效明确，适用范围广，无毒副作用，组合物制备操作简单，成本低，适用剂型广，便于生产应用。

附图说明

图1为α-淀粉酶活性抑制率柱状图。

图2为α-葡萄糖苷酶活性抑制率柱状图。

图3为胰脂肪酶活性抑制率柱状图。

图4为3T3-L1细胞脂肪堆积油红染色图。

图5为3T3-L1细胞油红染色后OD值。

具体实施方式

为了使本技术领域的人员更好地理解本发明中的技术方案，下面将结合本发明实施例和实施例中的附图对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。

含茶多酚的绿茶提取物的提取工艺。

详细步骤绿茶经粉碎、水或乙醇提取、浓缩、干燥，得含茶多酚的绿茶提取物

含多酚的玫瑰花提取物的提取工艺。

详细步骤玫瑰花经粉碎、水或乙醇提取、浓缩、干燥，得含多酚的玫瑰花提取物。

含多酚及安石榴苷的石榴果提取物的提取工艺。

详细步骤石榴果经粉碎、水或乙醇提取、浓缩、干燥，得含多酚及安石榴苷的石榴果提取物。

本实施例提供抑制糖分和脂肪吸收的组合物及其制备方法。

(1)抑制糖分和脂肪吸收的组合物的组成。

表1.抑制糖分和脂肪吸收的组合物的重量份组成

(2)抑制糖分和脂肪吸收的组合物的制备方法。

将各物质按照下表1所示重量份混合均匀，得抑制糖分和脂肪吸收的组合物。

α-淀粉酶活性测试：

(1)称取Na₂HPO₄ 15.63g和10.80g KH₂PO₄，加1000ml纯水溶解，用HCl调节pH至6.9，得0.2M PBS缓冲液。

(2)取适量α-淀粉酶，用PBS缓冲液制备5unit/mLα-淀粉酶溶液，溶解后置于37℃水浴中活化备用。

(3)精确称取可溶性淀粉1g，用少量PBS缓冲液调匀，倾入已沸PBS缓冲液，在加热煮沸至透明，冷却后PBS缓冲液至100mL。制得1％可溶性淀粉溶液。

(4)阿卡波糖溶液：取阿卡波糖片(拜唐平，50mg/片)，用研钵研磨，加入PBS缓冲液，制成1mg/mL阿卡波糖溶液，按所需浓度进行稀释。

(5)样品组：各实施例以及对比例所得组合物用PBS缓冲液溶解，制成10mg/mL的成分溶液。

(6)白芸豆溶液：白芸豆用PBS缓冲液溶解，制成10mg/ml的白芸豆溶液

(7)加样：

a.样品组：取各实施例以及对比例成分溶液50μL加至EP管，再加入50μLα-淀粉酶溶液。

阳性参照组：取阿卡波糖溶液50μL加至EP管，再加入50μLα-淀粉酶溶液。

白芸豆提取物参照组：取阿卡波糖溶液50μL加至EP管取白芸豆提取物组100份用PBS缓冲液溶解，制成10mg/mL的成分溶液，加至EP管，再加入50μLα-淀粉酶溶液。

阴性参照组：加入50μLPBS缓冲液至EP管，再加入50μLα-淀粉酶溶液。

空白参照组：加100μLPBS缓冲液至EP管。

b.所有管进行37℃下反应15min。

c.所有管加入400μL 1％可溶性淀粉溶液，在37℃水浴准确反应10min，之后立即沸水浴10min。

d.在所有管中加入1mL DNS显色剂，在沸水浴中反应5min，之后立即放于冷水中降至室温。

e.转移各管中反应液1mL，加入4mL纯水进行稀释，用分光光度计于540nm下测定吸光度值。

(8)数据分析

α-淀粉酶抑制率计算公式如下：

α-淀粉酶抑制率＝[(A阴性-A空白)-(A样品-A空白)]/(A阴性-A空白)×100％。

实验结果如图1所示，实施例1-9、对比例10-11制备得到的抑制糖分和脂肪吸收的组合物与阳性参照组阿卡波糖有相似的α-淀粉酶的抑制功能；实施例1-9制备得到的抑制糖分和脂肪吸收的组合物的α-淀粉酶的抑制率显著优于白芸豆提取物；实施例1-9制备得到的抑制糖分和脂肪吸收的组合物的α-淀粉酶的抑制率优于对比例10-11制备得到的抑制糖分和脂肪吸收的组合物，说明含茶多酚的绿茶提取物、含多酚的玫瑰花提取物、含多酚及安石榴苷的石榴果提取物三种成分按照一定比例复配之后对α-淀粉酶有更优异的抑制率。此外，含多酚及安石榴苷的石榴果提取物和含茶多酚的绿茶提取物占比越大，组合物对α-淀粉酶抑制效果越强。

α-葡萄糖苷酶活性测试：

(1)称取Na₂HPO₄ 12.24g和13.93g KH₂PO₄，加1000ml纯水溶解，用HCl调节pH至6.8，得0.2M PBS缓冲液。

(2)称取45mg PNPG溶于15mL纯水中，得10mM 4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷溶液。

(3)称取1.06g碳酸钠溶于纯水中，定容至100mL，得0.2M碳酸钠溶液。

(4)称取一定量的α-葡萄糖苷酶，用0.1M PBS缓冲液进行震荡溶解，得50U/mLα-葡萄糖苷酶，储存于-20℃冰箱中备用。使用时取0.1mL50U/mLα-葡萄糖苷酶，以0.1MPBS缓冲液定量至25mL，得0.2U/mLα-葡萄糖苷酶。

(5)取各实施例以及对比例所得组合物，加入PBS缓冲液,制成10mg/mL的成分溶液。

(6)取白芸豆提取物，加入PBS缓冲液,制成10mg/mL的成分溶液。

(7)加样

样品组：取25μL各实施例以及对比例成分溶液和25μL0.2U/mLα-葡萄糖苷酶于37℃下培养15分钟。

白芸豆提取物参照组：取白芸豆提取物组100份，加入PBS缓冲液，制成10mg/mL白芸豆溶液25uL，25μL0.2U/mLα-葡萄糖苷酶的成分溶液，于37℃下培养15分钟。

阴性参照组：加25μL 0.2M PBS缓冲液，25μL葡糖糖苷酶于37℃下培养15分钟。

空白参照组：加50μL 0.2M PBS缓冲液于37℃下培养10分钟。

所有组加入50μL 2.5mM PNPG，于37℃下反应20分钟，再加入100μL 0.2M碳酸钠溶液，混合均匀后，用酶标仪于405nm波长下测定吸光度值。

(8)数据分析

α-葡萄糖苷酶抑制率计算公式如下：

α-葡萄糖苷酶抑制率＝[(A阴性-A空白)-(A样品-A空白)]/(A阴性-A空白)×100％

实验结果如图2所示，实施例1-9制备得到的抑制糖分和脂肪吸收的组合物对α-葡萄糖苷酶的抑制率显著优于白芸豆提取物；实施例1-9制备得到的抑制糖分和脂肪吸收的组合物的α-葡萄糖苷酶抑制率优于对比例10-11制备得到的抑制糖分和脂肪吸收的组合物，说明含茶多酚的绿茶提取物、含多酚的玫瑰花提取物、含多酚及安石榴苷的石榴果提取物三种成分经过特定比例复配之后对α-葡萄糖苷酶有更优异的抑制率。

脂肪酶活性测定：

(1)称取41mg乙酸钠，溶于100ml蒸馏水，加1mL Triton X-100，得5mM乙酸钠溶液。称取80mg 4-硝基苯基十二酸酯溶于含1％Triton X-100的100ml5mM乙酸钠溶液，于65℃下搅拌15min使其混合均匀，获得pNP laurate溶液。

(2)称量4.8456gbase溶于200ml蒸馏水中，再滴加0.1M HCl,将pH调至8.2，再加入纯水，粗略定容至400mL，得0.1M Tris-HCl缓冲液。

(3)转移50μL胰脂肪酶至20mL容量瓶，加入0.1M Tris-HCl缓冲液，混合均匀，获得脂肪酶溶液。

(4)分别取各实施例以及对比例所得组合物，加入0.1M Tris-HCl缓冲液，制成10mg/mL的成分溶液。

(5)加样：

a.所有组先加入200μL Tris-HCl缓冲液

b.样品组：加入100μL各实施例以及对比例的成分溶液和100μL脂肪酶溶液加至EP管。

阳性参照组：0.05mg/mL 100μL的奥利司他溶液100uL，100μL脂肪酶溶液加至EP管。

阴性参照组：100μL Tris-HCl缓冲液，100μL脂肪酶溶液加至EP管。

空白参照组：200μL Tris-HCl缓冲液加至EP管

c.所有EP管置于37℃水浴中反应15min。

d.所有EP管加入200μL pNP laurate溶液于37℃下反应30min。

e.反应之后于将所有管置于95℃水浴中5min终止反应。降至室温后，所有管于6000rpm下离心3min。转移200μL上清液至96孔板中，于405nm波长下测定吸光度值。

(6)数据分析

胰脂肪酶抑制率计算公式如下：

胰脂肪酶抑制率＝[(A阴性-A空白)-(A样品-A空白)]/(A阴性-A空白)×100％实验结果如图3所示，实施例1-9制备得到的抑制糖分和脂肪吸收的组合物和奥利司他有相似的脂肪酶抑制效果；实施例1-9制备得到的抑制糖分和脂肪吸收的组合物的脂肪酶抑制率优于对比例10-11制备得到的抑制糖分和脂肪吸收的组合物，说明含茶多酚的绿茶提取物、含多酚的玫瑰花提取物、含多酚及安石榴苷的石榴果提取物三种成分按照特定比例复配之后对脂肪酶有更优异的抑制率。

3T3-L1测定脂肪堆积实验：

(1)3T3-L1细胞诱导分化

将3T3-L1前脂肪细胞接种于培养板，用含10％胎牛血清的高糖DMEM培养液在37℃、5％CO₂条件下培养，待细胞长满至80％～90％、用胰酶消化下细胞，制成细胞悬液(第0天)。

(2)加入诱导剂I培养2天。

诱导剂I配方：将3-异丁基-1-甲基黄嘌呤用乙醇配制成0.5mol/L，将***用乙醇配制成2.5mmol/L，将10mg胰岛素溶于1mL 0.01mol/L HCl中。

(3)加入诱导剂II培养2天。

诱导剂II配方：10％胎牛血清，0.5mmol/L 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤，1μmol/L***，5μg/mL胰岛素。

(4)分化第5天

将细胞分为空白组(培养基)、50μg/mL含多酚的玫瑰花提取物组、50μg/mL含多酚及安石榴苷的石榴果提取物组、50μg/mL含茶多酚的绿茶提取物组、50μg/mL组合物组(10％含多酚的玫瑰花提取物+45％含多酚及安石榴苷的石榴果提取物+45％茶多酚的绿茶提取物)、阳性参照组(氯化锂)。

同时，高糖DMEM培养48h，然后换含终质量浓度10μg/mL胰岛素的10％胎牛血清高糖DMEM培养液继续培养48h，每2d换液1次，第9天后结束实验。

(5)油红染色

处理后的细胞，弃去培养基并用冷PBS清洗细胞两遍；用4％多聚甲醛溶液固定细胞60min；固定好的细胞用油红O染液试剂盒进行染色；用60％的异丙醇清洗细胞3次除去未着色的油红O染液，显微镜下进行拍照观察。实验结果如图4所示，组合物组与空白组、含多酚的玫瑰花提取物组、含多酚及安石榴苷的石榴果提取物组和含茶多酚的绿茶提取物组相比，染色程度明显降低，与阳性对照几乎相当。

(6)数据分析

观察结束后，裂解液(含4％NP-40)裂解细胞并测定在490nm处OD值。实验结果如图5所示，根据油红染色OD值，组合物组与空白组、含多酚的玫瑰花提取物组、含多酚及安石榴苷的石榴果提取物组和含茶多酚的绿茶提取物组相比均明显减小，存在显著性差异(P＜0.05)。说明组合物以特定比例复配后可增强抑制脂肪堆积的效果。

最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对其限制，尽管参照上述实施例对本发明进行了详细的说明，所属领域的普通技术人员应当理解，技术人员阅读本申请说明书后依然可以对本发明的具体实施方式进行修改或者等同替换，但这些修改或变更均未脱离本发明申请待批权利要求保护范围之内。

Claims

1.一种抑制糖分和脂肪吸收的组合物，其特征在于，所述抑制糖分和脂肪吸收的组合物由如下原料组成：重量含量30%-94%的含茶多酚的绿茶提取物、3%-20%的含多酚的玫瑰花提取物和3%以上的含多酚及安石榴苷的石榴果提取物；

所述含多酚的玫瑰花提取物的提取方法如下：

玫瑰花经粉碎、乙醇提取、浓缩、干燥，得含多酚的玫瑰花提取物；

所述含多酚及安石榴苷的石榴果提取物的提取方法如下：

石榴果经粉碎、乙醇提取、浓缩、干燥，得含多酚及安石榴苷的石榴果提取物。

2.根据权利要求1所述的抑制糖分和脂肪吸收的组合物，其特征在于，所述抑制糖分和脂肪吸收的组合物由如下原料组成：重量含量30%-94%的含茶多酚的绿茶提取物、3%-10%的含多酚的玫瑰花提取物和含多酚及安石榴苷的石榴果提取物3%-87%。

3.根据权利要求1所述的抑制糖分和脂肪吸收的组合物，其特征在于，所述抑制糖分和脂肪吸收的组合物由如下原料组成：重量含量30%-94%的含茶多酚的绿茶提取物、3%-10%的含多酚的玫瑰花提取物和3%-77%的含多酚及安石榴苷的石榴果提取物。

4.根据权利要求1所述的抑制糖分和脂肪吸收的组合物，其特征在于，所述抑制糖分和脂肪吸收的组合物由如下原料组成：重量含量30%-94%的含茶多酚的绿茶提取物、3%-10%的含多酚的玫瑰花提取物和3%-67%的含多酚及安石榴苷的石榴果提取物。

5.根据权利要求1-4任一项所述的抑制糖分和脂肪吸收的组合物，其特征在于，所述抑制糖分和脂肪吸收的组合物还包括可用于药品、食品中的辅料或添加剂，所述辅料或添加剂为填充剂、矫味剂、着色剂、抗氧化剂、增稠剂、稳定剂、乳化剂、抗结剂、助流剂、润滑剂中的一种或多种。

6.根据权利要求1-4任一项所述的抑制糖分和脂肪吸收的组合物，其特征在于，所述抑制糖分和脂肪吸收的组合物还包括可用于药品、食品中的辅料或添加剂，所述辅料或添加剂为甜味剂、酸调节剂中的一种或多种。

7.根据权利要求1-4任一项所述的抑制糖分和脂肪吸收的组合物，其特征在于，所述含茶多酚的绿茶提取物的提取方法如下：

8.根据权利要求1-4任一项所述的抑制糖分和脂肪吸收的组合物，其特征在于，所述抑制糖分和脂肪吸收的组合物为口服制剂。

9.根据权利要求8所述的抑制糖分和脂肪吸收的组合物，其特征在于，所述口服制剂为粉剂、颗粒剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、片剂、软糖剂、口服溶液或乳剂。