CN113480534A - 苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物及其应用 - Google Patents

苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种苯并咪唑或氮杂苯并咪唑‑6‑羧酸类化合物及其应用，所述苯并咪唑或氮杂苯并咪唑‑6‑羧酸类化合物具有式(I)所示结构。该苯并咪唑或氮杂苯并咪唑‑6‑羧酸类化合物可以有效激活GLP‑1R下游信号通路，提高cAMP的表达，从而达到促进胰岛素分泌，治疗糖尿病及其并发症的作用，有较大的应用价值。

Description

苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物及其应用
技术领域
本发明涉及化学医药技术领域，具体涉及一种苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物及其应用。
背景技术
2型糖尿病(T2DM)及其并发症已成为严重威胁人类健康的慢性非传染性疾病，发病人数呈逐年上升趋势，胰岛β细胞功能障碍和胰岛素抵抗是T2DM的重要发病机制(N EnglJ Med,2007.356:213-215)。目前糖尿病治疗药物主要包括胰岛素及其类似物、二肽基肽酶-4抑制剂(DPP-4i)、胰高血糖素样肽-1受体激动剂(GLP-1RA)、钠-葡萄糖协同转运蛋白-2抑制剂(SGLT-2i)、二甲双胍、α-糖苷酶抑制剂、磺脲类药物(SU)、噻唑烷二酮类药物(TZDs)、格列奈类药物等(Biomed Pharmacother,2020.131:110708)。GLP-1RA具有血糖依赖性强效降糖、不增加低血糖风险、降低体重、轻度降压等优点，而且大部分药物还被证实了心血管获益，近几年市场份额增速明显(Cell Metab,2018.27:740-756)。越来越多的临床实验证实GLP-1 RA在非酒精性脂肪肝炎(NASH)(Adv Exp Med Biol,2021.1307:417-440)、改善心血管预后(Diabetes Metab Syndr,2021.15:837-843)、阿尔兹海默病(Diabetes,2014.63:2262-72)、保护肾脏及改善糖尿病肾病结局上(N Engl J Med,2021.384:e42)具有显著作用。
胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1R)主要表达于小肠、胰腺、心血管、脑和唾液腺等组织中(Endocrinology,2014.155:1280-1290)，属于7次跨膜的G蛋白偶联受体(GPCR)B家族成员，其由肠道L细胞分泌的胰高血糖素样肽-1(GLP-1)激活后，通过提高细胞内环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)水平诱发电压门控型Ca2+通道开放，进而促进胰岛β细胞增殖与分化等作用来调控血糖(J Mol Biol,2020.432:1347-1366)。
目前，已有多个注射肽类GLP-1RA批准用于治疗T2DM，如利拉鲁肽、艾赛那肽、度拉糖肽、索马鲁肽、聚二乙醇洛塞那肽等等，其中利拉鲁肽因在降低体重方面的作用，其也被批准用于治疗肥胖症(Mol Metab,2021.46:101102；ACS Pharmacol Transl Sci,2019.2:468-484)。2020年9月，美国FDA正式批准了全球首个口服GLP-1降糖药索马鲁肽上市，用于饮食、运动结合改善II型糖尿病患者的血糖控制。由于索马鲁肽为多肽类药物，通过将索马鲁肽与小分子吸收增强剂SNAC结合形成口服配方，与SNAC的结合使得索马鲁肽能够在胃部完成吸收，并且SNAC的部分溶解能够在胃内局部形成相对高的pH环境，从而提高索马鲁肽的溶解度，减少胃内肽酶的降解作用。主要缺点是其口服生物利用度极低(仅0.4％-1％)，成本明显增加，主要不良反应中胃肠道反应，恶心发生率约为15～20％(AnnPharmacotherapy,2019,54:478-485)。小分子GLP-1R激动剂由于可以克服肽类药物的口服吸收障碍，同时其更容易透过血脑屏障，并作用于下丘脑弓状核中的GLP-1R而降低食欲，最终在降低血糖的同时，可能会起到更优的减轻体重的效果(J Clin Invest,2014.124:4223-4226)。
目前，小分子口服GLP-1R激动剂主要包括OWL833(Proc NatlAcad Sci U S A,2020.117:29959-29967)，PF-06882961(Proc Natl Acad Sci U S A,2020.117:29959-29967)及TTP273(Nature,2020.577:432-436)。PF-06882961的一期临床结果表明，其在2型糖尿病患者降糖和减重效果作用显著。在患有2型糖尿病的患者中，联合二甲双胍，每天2次给药PF-06882961，治疗28天时，120mg剂量降低HBA1c达1.2％，减重达7.9kg(ClinicalTrials.gov Identifier:NCT03538743)。
发明内容
基于整个2型糖尿病发病率很高，且目前没有有效的口服小分子药物获批对其进行治疗，本发明提供一类新的苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物，可以有效激活GLP-1R下游信号通路，提高cAMP的表达，从而达到促进胰岛素分泌，治疗糖尿病及其并发症的作用，有较大的应用价值。
具体地，本发明提供了式(I)所示的苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体：
Figure BDA0003178251760000021
其中：
R1和R2分别独立选自：H，卤素，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基；
R3和R4分别独立选自：H，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基；或者R3和R4相连组成3-8元碳环或3-8元杂环；
R5选自：3-8元杂环基取代的C1-C4烷基，5-10元杂芳基取代的C1-C4烷基，C1-C6烷氧基取代的C1-C4烷基；其中，所述R5中的3-8元杂环基和5-10元杂芳基可以独立任选的被一个或多个R10取代；
R6和R7分别独立选自：H，C1-C6烷基；或者R6和R7一起形成G，G选自＝O；
各R8和R9分别独立选自：H，卤素，C1-C6烷基，C2-C6烯基，C2-C6炔基，C3-C8环烷基，C3-C8环烷基甲基，卤素取代的C1-C6烷基，羟基取代的C1-C6烷基，C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基，氨基取代的C1-C6烷基,C1-C6烷基胺基取代的C1-C6烷基，芳基，杂芳基，硝基，氰基，-OR，-N(R)2，-SR，-C(O)OR，-C(O)N(R)2，-C(O)R，-S(O)R，-S(O)2R，-S(O)2N(R)2，-N(R)C(O)R；
R选自：H，C1-C6烷基，C2-C6烯基，C2-C6炔基，C3-C8环烷基，C3-C8环烷基甲基，卤素取代的C1-C6烷基，羟基取代的C1-C6烷基，C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基，氨基取代的C1-C6烷基,C1-C6烷基胺基取代的C1-C6烷基；
n选自：0，1或2；
p选自：1或2；
m选自：1，2或3；
W选自：O，S，NR10；
W1选自：O，S；
Q选自：C，CH，N；
X选自：N，CR10；
Y选自：N，CR11；
R10选自：H，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基；
R11选自：H，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基；或者R11和R6相连组成5-8元杂环；
Q与相邻C之间的虚线表示所述Q与相邻C之间的化学键可选单键或双键。
在其中一些实施例中，所述苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物具有如下式(II)或者式(III)所示结构：
Figure BDA0003178251760000031
Figure BDA0003178251760000041
在其中一些实施例中，所述苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物具有如下式(IV)或者式(V)所示结构：
Figure BDA0003178251760000042
在其中一些实施例中，所述苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物具有如下式(VI)或者式(VII)所示结构：
Figure BDA0003178251760000043
Figure BDA0003178251760000051
在其中一些实施例中，W为O，R6和R7分别独立选自：H，C1-C6烷基。
在其中一些实施例中，W1为O。
在其中一些实施例中，Q选自：C，CH。
在其中一些实施例中，X选自：N，CH。
在其中一些实施例中，R1和R2分别独立选自：H，卤素，C1-C3烷基，C1-C3烷氧基。
在其中一些实施例中，R3和R4分别独立选自：H，C1-C3烷基，C1-C3烷氧基。
在其中一些实施例中，R5选自：3-4元杂环基取代的C1-C4烷基，5-6元杂芳基取代的C1-C4烷基，C1-C3烷氧基取代的C1-C4烷基；其中，所述R5中的3-4元杂环基和5-6元杂芳基可以独立任选的被一个或多个R10取代。
在其中一些实施例中，R5选自：3-4元杂环基取代的甲基，3-4元杂环基取代的乙基，5-6元杂芳基取代的甲基，5-6元杂芳基取代的乙基；其中，所述R5中的3-4元杂环基和5-6元杂芳基可以独立任选的被一个或多个R10取代，R10选自：H、C1-C3烷基。
在其中一些实施例中，R5选自：氧杂环丁烷取代的甲基，氧杂环丁烷取代的乙基，乙基咪唑取代的甲基，乙基咪唑取代的乙基。
在其中一些实施例中，R6和R7分别独立选自：H，C1-C3烷基。
在其中一些实施例中，各R8和R9分别独立选自：H，卤素，氰基，C1-C3烷基，卤素取代的C1-C3烷基。
在其中一些实施例中，各R8分别独立选自：H，卤素，C1-C3烷基；各R9分别独立选自：H，卤素，氰基，C1-C3烷基，三氟甲基。
在其中一些实施例中，各R8分别独立选自：H、Cl、F、甲基；各R9分别独立选自：氰基、Cl、甲基。
在其中一些实施例中，所述的苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物选自如下化合物：
Figure BDA0003178251760000061
Figure BDA0003178251760000071
Figure BDA0003178251760000081
本发明还提供了上述的苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体的应用。
具体技术方案如下：
上述的苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体在制备GLP-1R激动剂中的应用。
上述的苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体在制备用于预防和/或治疗与GLP-1R下游信号通路相关的疾病和/或症状的药物中的应用。
其中，与GLP-1R下游信号通路相关的疾病和/或症状选自但不限于：糖尿病，糖尿病视网膜病变，糖尿病性脑血管病变，糖尿病性神经病变，胰岛素抵抗，高血糖症，糖尿病性肾病，高血压，白内障，骨质疏松症，高尿酸血症以及糖尿病引起的感染、肥胖症、代谢综合征、血脂异常、非酒精性脂肪肝病、非酒精性脂肪性肝炎、纤维化、心脏病、中风、肝硬化、肝癌、代谢性酸中毒、酮病、心血管不适、癫痫、动脉粥样硬化、帕金森氏病和阿尔兹海默病等。
上述的苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体在制备促进胰岛素分泌的药物中的应用。
上述的苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体在制备降血糖的药物中的应用。
上述的苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体在制备预防和/或治疗糖尿病的药物中的应用。
其中，所述糖尿病选自但不限于：1型糖尿病(T1DM)、2型糖尿病(T2DM)、妊娠糖尿病及其他特殊类型糖尿病(特发性T1D、早发型T2DM、青年人的成年型糖尿病、青少年发作的非典型糖尿病、营养不良相关性糖尿病、成人隐匿性自身免疫性糖尿病等。
本发明还提供了一种预防和/或治疗糖尿病及其并发症的药物组合物。
具体技术方案如下：
一种预防和/或治疗糖尿病及其并发症的药物组合物，包括活性成分以及药学上可接受的辅料和/或载体，所述活性成分包括有上述的苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体。
本发明提供的新的并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体，可以有效激活GLP-1R下游信号通路，提高cAMP的表达，从而达到促进胰岛素分泌，治疗糖尿病及其并发症的作用，有较大的应用价值。
附图说明
图1为化合物1、2、3、4和化合物6的大鼠灌胃给药(20mg/kg)的平均药时曲线图。
图2为化合物PF-06882961、12、16、46和化合物58的大鼠灌胃给药(20mg/kg)的平均药时曲线图。
图3为化合物12和化合物16在小鼠葡萄糖耐量试验的血糖曲线。
图4为化合物12和化合物16在小鼠葡萄糖耐量试验的AUC(0-2h)。
图5为化合物6和化合物16在小鼠葡萄糖耐量试验的血糖曲线。
图6化合物6和化合物16在小鼠葡萄糖耐量试验的AUC(0-2h)。
图7化合物3、化合物16和化合物58在小鼠葡萄糖耐量试验的血糖曲线。
图8化合物3、化合物16和化合物58在小鼠葡萄糖耐量试验的AUC(0-2h)。
具体实施方式
本发明所述化合物中，当任何变量(例如R等)在任何组分中出现超过一次，则其每次出现的定义独立于其它每次出现的定义。同样，允许取代基及变量的组合，只要这种组合使化合物稳定。自取代基划入环***的线表示所指的键可连接到任何能取代的环原子上。如果环***为多环，其意味着这种键仅连接到邻近环的任何适当的碳原子上。要理解本领域普通技术人员可选择本发明化合物的取代基及取代型式而提供化学上稳定的并可通过本领域技术和下列提出的方法自可容易获得的原料容易的合成的化合物。如果取代基自身被超过一个基团取代，应理解这些基团可在相同碳原子上或不同碳原子上，只要使结构稳定。
本文所用术语“烷基”意指包括具有特定碳原子数目的支链的和直链的饱和脂肪烃基。例如，“C1-C6烷基”中“C1-C6”的定义包括以直链或支链排列的具有1、2、3、4、5或6个碳原子的基团。例如，“C1-C6烷基”具体包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、戊基、己基。
术语“烷氧基”指烷基与氧直接连接的基团，即具有-O-烷基结构的基团，如-OCH3、-OCH2CH3、-OCH2CH2CH3、-O-CH2CH(CH3)2、-OCH2CH2CH2CH3、-O-CH(CH3)2等。
术语“环烷基”或者“碳环”指具有特定碳原子数目的单环饱和脂肪烃基。例如“环烷基”包括环丙基、环丁基、环戊基或环己基等。
术语“杂环基”或者“杂环”为饱和或部分不饱和的单环或多环环状取代基，其中一个或多个环原子选自N、O或S(O)m(其中m是0-2的整数)的杂原子，其余环原子为碳，例如：吗啉基、哌啶基、四氢吡咯基、吡咯烷基、二氢咪唑基、二氢异噁唑基、二氢异噻唑基、二氢噁二唑基、二氢噁唑基、二氢吡嗪基、二氢吡唑基、二氢吡啶基、二氢嘧啶基、二氢吡咯基、二氢四唑基、二氢噻二唑基、二氢噻唑基、二氢噻吩基、二氢***基、二氢氮杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基等，及其N-氧化物，杂环取代基的连接可通过碳原子或通过杂原子实现。
术语“杂芳基”指含有1个或多个选自O、N或S的杂原子的芳香环，本发明范围内的杂芳基包括但不限于：喹啉基、吡唑基、吡咯基、噻吩基、呋喃基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、三氮唑基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、哒嗪基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并恶唑、吲哚基等；“杂芳基”也理解为包括任何含有氮的杂芳基的N-氧化物衍生物。
术语“取代的”是指用指定取代基的基团置换特定结构中的氢基。
正如本领域技术人员所理解的，本文中所用“卤素”(“halo”)或“卤”意指氯、氟、溴和碘。
除非另有定义，烷基、环烷基、芳基、杂芳基和杂环烷基取代基可为未被取代的或取代的。例如，C1-C6烷基可被一个、两个或三个选自OH、卤素、烷氧基、二烷基氨基或杂环基例如吗啉基、哌啶基等的取代基取代。
本发明包括式(Ⅰ)、式(ⅠI)、式(ⅠII)、式(IV)、式(V)、式(VI)或者式(VII)化合物的游离形式，也包括其药学上可接受的盐及立体异构体。可通过常规化学方法自含有碱性部分或酸性部分的本发明化合物合成本发明的药学上可接受的盐。通常，通过离子交换色谱或通过游离碱和化学计算量或过量的所需盐形式的无机或有机酸在适当溶剂或多种溶剂的组合中反应制备碱性化合物的盐。类似的，通过和适当的无机或有机碱反应形成酸性化合物的盐。
因此，本发明化合物的药学上可接受的盐包括通过碱性本发明化合物和无机或有机酸反应形成的本发明化合物的常规无毒盐。例如，常规的无毒盐包括得自无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等的盐，也包括自有机酸例如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、扑酸、马来酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、对氨基苯磺酸、2一乙酰氧基一苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙烷二磺酸、草酸、羟乙基磺酸、三氟乙酸等制备的盐。
如果本发明化合物为酸性的，则适当的“药学上可接受的盐”指通过药学上可接受的无毒碱包括无机碱及有机碱制备的盐.得自无机碱的盐包括铝盐、铵盐、钙盐、铜盐、铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、锰盐、亚锰盐、钾盐、钠盐、锌盐等。特别优选铵盐、钙盐、镁盐、钾盐和钠盐。得自药学上可接受的有机无毒碱的盐，所述碱包括伯胺、仲胺和叔胺的盐，取代的胺包括天然存在的取代胺、环状胺及碱性离子交换树脂例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N,N'－二苄基乙二胺、二乙胺、2一二乙基氨基乙醇、2一二甲基氨基乙醇、氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N一乙基吗啉、N一乙基哌啶、葡萄糖胺、氨基葡萄糖、组氨酸、羟钴胺、异丙基胺、赖氨酸、甲基葡萄糖胺、吗啉、哌嗪,哌啶、呱咤、多胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨基丁三醇等。
Berg等，“Pharmaceutical Salts，”J.Pharm.Sci.’1977：66：1－19更详细描述了上文所述药学上可接受的盐及其它典型的药学上可接受的盐的制备。
由于在生理条件下化合物中脱质子化的酸性部分例如羧基可为阴离子的，而这种带有的电荷然后可被内部带有阳离子的质子化了的或烷基化的碱性部分例如四价氮原子平衡抵消，所以应注意本发明化合物是潜在的内盐或两性离子。
在一个实施方案中，本发明提供了一种利用具有式(Ⅰ)、式(ⅠI)、式(ⅠII)、式(IV)、式(V)、式(VI)或者式(VII)所示结构的化合物及其药学可接受的盐或者立体异构体治疗人或其它哺乳动物与GLP-1R下游信号通路相关的疾病和/或症状。
其中，所述与GLP-1R下游信号通路相关的疾病和/或症状可以选自但不限于：1型糖尿病(T1DM)，2型糖尿病(T2DM)，妊娠糖尿病及其他特殊类型糖尿病(特发性T1D、早发型T2DM、青年人的成年型糖尿病、青少年发作的非典型糖尿病、营养不良相关性糖尿病、成人隐匿性自身免疫性糖尿病等)，糖尿病视网膜病变，糖尿病性脑血管病变，糖尿病性神经病变，胰岛素抵抗，高血糖症，糖尿病性肾病，高血压，白内障，骨质疏松症，高尿酸血症以及糖尿病引起的多种感染、肥胖症、代谢综合征、血脂异常、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、纤维化、心脏病、中风、肝硬化、肝癌、代谢性酸中毒、酮病、心血管不适、癫痫和动脉粥样硬化、帕金森氏病和阿尔兹海默等疾病。
联合用药：式(Ⅰ)、式(ⅠI)、式(ⅠII)、式(IV)、式(V)、式(VI)或者式(VII)化合物可以与已知的治疗或改进相似病状的其它药物联用。联合给药时，原来药物的给药方式&剂量保持不变，而同时或随后服用式式(Ⅰ)、式(ⅠI)、式(ⅠII)、式(IV)、式(V)、式(VI)或者式(VII)化合物。当式(Ⅰ)、式(ⅠI)、式(ⅠII)、式(IV)、式(V)、式(VI)或者式(VII)化合物与其它一种或几种药物同时服用时，优选使用同时含有一种或几种已知药物和式(Ⅰ)、式(ⅠI)、式(ⅠII)、式(IV)、式(V)、式(VI)或者式(VII)化合物的药用组合物。药物联用也包括在重叠的时间段服用式(Ⅰ)、式(ⅠI)、式(ⅠII)、式(IV)、式(V)、式(VI)或者式(VII)化合物与其它一种或几种已知药物。当式(Ⅰ)、式(ⅠI)、式(ⅠII)、式(IV)、式(V)、式(VI)或者式(VII)化合物与其它一种或几种药物进行药物联用时，式(Ⅰ)、式(ⅠI)、式(ⅠII)、式(IV)、式(V)、式(VI)或者式(VII)化合物或已知药物的剂量可能比它们单独用药时的剂量较低。
可以与式(Ⅰ)、式(ⅠI)、式(ⅠII)、式(IV)、式(V)、式(VI)或者式(VII)化合物进行药物联用的药物或活性成分包括但不局限于以下治疗糖尿病的药物：双胍类(如二甲双胍)、磺酰脲类(醋酸己脲、氯磺丙脲、甲苯磺丁脲、妥拉磺脲、氨磺丁脲、格列本脲、格列齐特、格列吡嗪、格列喹酮、格列波脲、格列派特以及格列美脲)、噻唑烷二酮类(如曲格列酮、罗格列酮、吡格列酮、环格列酮)、美格列脲类(例如那格列奈、瑞格列奈、米格列奈)、二肽基肽酶4抑制剂(西格列汀、维格列汀、沙格列汀、阿格列汀、利格列汀、吉格列汀和替格列汀)、钠-葡萄糖连接转运蛋白2抑制剂(坎格列净、达格列净、恩格列净、依格列净、鲁格列净以及托格列净)、钠-葡萄糖连接转运蛋白1/2抑制剂、GPR40激动剂、GIPR激动剂、GIP/GLP-1双重受体激动剂、α葡萄糖苷酶抑制剂、胰岛素或胰岛素类似物。
可以与式(Ⅰ)、式(ⅠI)、式(ⅠII)、式(IV)、式(V)、式(VI)或者式(VII)化合物进行药物联用的药物或活性成分包括但不局限于以下治疗肥胖的药物：肽YY或其类似物、神经肽Y受体2型激动剂、黑素皮质素受体4激动剂、胰岛淀粉样多肽、GIPR激动剂、磷酸二酯酶、AMP激活的蛋白激酶、神经肽Y5受体拮抗剂、GPR40激动剂、GIP/GLP-1双重受体激动剂、环丙甲羟二羟***酮(纳曲酮)/安非他酮、氯卡色林、芬特明/托吡酯、奥利司他、利拉鲁肽。
可以与式(Ⅰ)、式(ⅠI)、式(ⅠII)、式(IV)、式(V)、式(VI)或者式(VII)化合物进行药物联用的药物或活性成分包括但不局限于以下治疗NASH的药物：法尼酯X受体激动剂、PPARα/δ激动剂、成纤维细胞生长因子19/21类似物、甲状腺激素受体β激动剂、钠-葡萄糖协同转运蛋白(SGLT)-1/2抑制剂、乙酰辅酶A羧化酶抑制剂、趋化因子受体-2/5抑制剂、抗凋亡信号调节激酶1抑制剂、ATP结合转运蛋白1激动剂、5-脂肪氧化酶抑制剂、血管黏附蛋白1抑制剂。
合成方法：除在文献中已知的或在实验程序中例证的标准方法外，可采用如下合成方案(方案1-10)中的方法制备本发明化合物。结合下述的合成方案，能够对本发明中所述的化合物以及合成方法进行更好的理解。所述的合成方案描述了可以用于制备本发明中所述的化合物的方法，所述的方法仅仅是为说明目的的说明性方案描述，并不构成对本发明所具有的范围的限制。
Figure BDA0003178251760000141
方案1
Figure BDA0003178251760000151
方案2
Figure BDA0003178251760000161
方案3
Figure BDA0003178251760000162
方案4
Figure BDA0003178251760000171
方案5
Figure BDA0003178251760000172
方案6
Figure BDA0003178251760000181
方案7
Figure BDA0003178251760000182
方案8
Figure BDA0003178251760000191
方案9
Figure BDA0003178251760000201
方案10
以下为具体实施例。
实施例1：4-(6-氯吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(中间体0104-1)的制备(按照方案一线路制备)
步骤1a:1-(叔丁基)4-甲基4-(6-氯吡啶-2-基)哌啶-1,4-二羧酸酯(化合物0102-1)的制备：在氮气保护下，向N-叔丁氧羰基-4-哌啶甲酸甲酯(3.00克，12.33毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(40毫升)溶液中滴加双(三甲基硅基)氨基锂的四氢呋喃溶液(1.0摩尔/升，25毫升，24.66毫摩尔，2.0当量)。将混合物在0℃下搅拌1.5小时，然后滴加2，6-二氯吡啶(2.00克，13.51毫摩尔，1.1当量)的四氢呋喃溶液(5毫升)。将混合物升温至室温，并搅拌2.5小时。用饱和氯化铵水溶液(10毫升)淬灭反应，并用水(70毫升)和乙酸乙酯(160毫升)分液。有机层用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产品1-(叔丁基)4-甲基4-(6-氯吡啶-2-基)哌啶-1,4-二羧酸酯(4.49克，产率：103％)。该产品不需要进一步纯化直接用于下一步。
步骤1b:1-(叔丁氧羰基)-4-(6-氯吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸(化合物0103-1)的制备：在43℃下，将粗产品1-(叔丁基)4-甲基4-将(6-氯吡啶-2-基)哌啶-1,4-二羧酸酯(0102-1)(4.49g)溶解于甲醇(12毫升)中，在20分钟内滴加4摩尔/升的氢氧化钠水溶液(9毫升)。将混合物升温至50℃并搅拌35分钟。将混合物冷却至室温，在冰水浴中用6摩尔/升的盐酸水溶液(6毫升)将pH调节至
Figure BDA0003178251760000211
2，此后形成固体沉淀。将浆液用水(10毫升)稀释并搅拌40分钟，然后通过过滤收集固体，固体用水洗涤，真空下干燥以得到白色固体1-(叔丁氧羰基)-4-(6-氯吡啶-2-基)哌啶-4-羧酸(3.85克，产率：89.0％)。LCMS(ESI)：m/z＝341(M+H)+.
步骤1c:4-(6-氯吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(化合物0104-1)的制备：氮气保护下，将1-(叔丁氧基羰基)-4-(6-氯吡啶-的2-基)哌啶-4-羧酸(0103-1)(3.85克，11.32毫摩尔)的1,2-二氯乙烷(30毫升)溶液加热至82℃并搅拌过夜。冷却至室温后，减压除去溶剂。用柱色谱法(PE/EA＝10/1)纯化粗产物，得到白色固体状的4-(6-氯吡啶-2--2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.61g，收率：48.0％)。LCMS(ESI)：m/z＝297(M+H)+.
实施例2：(S)-2-(氯甲基)-3-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯(中间体0116-1)的制备(按照方案一线路制备)
步骤2a:6-氯-5-硝基吡啶-2-羧酸(化合物0106-1)的制备:室温下，往2-氯-6-甲基-3-硝基吡啶(0105-1)(5.0克，29.1毫摩尔，1.0当量)的浓硫酸(20毫升)溶液分批加入三氧化铬(8.6克，87.3毫摩尔，3.0当量)。混合物60℃下搅拌过夜。冷却到室温后，混合物倒入冰水中，然后将固体过滤和真空干燥得到灰色固体6-氯-5-硝基吡啶-2-羧酸(4.15克，收率：71％)。LCMS(ESI)：m/z＝201(M-H)-.
步骤2b：6-氯-5-硝基吡啶-2-羧酸甲酯(化合物0107-1)的制备:氮气保护，0℃下，往6-氯-5-硝基吡啶-2-羧酸(0106-1)(4.0克，19.8毫摩尔，1.0当量)和N,N-二甲基甲酰胺(2滴)的二氯甲烷(60毫升)混合物加入草酰氯(5.0克，39.6毫摩尔，2.0当量)。混合物室温搅拌1小时。加入甲醇(4毫升)，混合物在室温搅拌10分钟。加入水，混合物分液。浓缩有机层，残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝20/1到5/1)得到白色固体6-氯-5-硝基吡啶-2-羧酸甲酯(4.2克，收率：97.7％)。LCMS(ESI)：m/z＝217(M+H)+.
步骤2c：(S)-2-((苄氧基)甲基)氧杂环丁烷(化合物0109)的制备:氮气保护，室温下，往叔丁醇钾(13.6克，122.0毫摩尔，2.0当量)的叔丁醇(180毫升)混合物中加入三甲基碘化亚砜(26.8克，122.0毫摩尔，2.0当量)。混合物在60℃下搅拌30分钟。加入(S)-2-((苄氧基)甲基)环氧乙烷(0108)(10.0克，61.0毫摩尔，1.0当量)，混合物80℃下搅拌2小时。冷却到室温后，混合物过滤，然后将滤液水洗、浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝20/1到10/1)得到无色油状液体(S)-2-((苄氧基)甲基)氧杂环丁烷(4.1克，收率：38％)。
步骤2d：(S)-2-羟甲基氧杂环丁烷(化合物0110)的制备:氢气条件下，(S)-2-((苄氧基)甲基)氧杂环丁烷(0109)(9.2克，51.7毫摩尔，1.0当量)和Pd/C(1.8克，10％质量比)的甲醇(100毫升)溶液室温下搅拌过夜。混合物过滤，滤液真空浓缩得到无色液体(S)-2-羟甲基氧杂环丁烷(5.0克，收率：111％)。
步骤2e：(S)-氧杂环丁烷-2-基甲基甲磺酸酯(化合物0111)的制备:氮气保护，0℃下，往(S)-2-羟甲基氧杂环丁烷(0110)(5.0克，56.8毫摩尔，1.0当量)和三乙胺(217.2克，170.4毫摩尔，3.0当量)的二氯甲烷(80毫升)混合物中滴加甲磺酰氯(9.1克，79.5毫摩尔，1.4当量)。混合物室温下搅拌3小时。混合物用水洗、真空浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝5/1到1/1)得到无色油状液体(S)-氧杂环丁烷-2-基甲基甲磺酸酯(5.8克，收率：61.7％)。
步骤2f：(S)-氧杂环丁烷-2-基甲胺(化合物0113)的制备:(S)-氧杂环丁烷-2-基甲基甲磺酸酯(0111)(5.8克，35毫摩尔，1.0当量)，叠氮化钠(2.7克，42毫摩尔，1.2当量)和碘化钾(1.2克，7.0毫摩尔，0.2当量)的N,N-二甲基甲酰胺(80毫升)溶液在60℃下搅拌过夜。冷却到室温后，加入甲基叔丁基醚，混合物用水洗。有机层浓缩，残留物溶于四氢呋喃，加入Pd/C(600毫克，10％质量比)。氢气条件下，混合物在室温下搅拌过夜。混合物过滤，滤液真空浓缩得到无色油状物(S)-氧杂环丁烷-2-基甲胺，该产品不需要进一步纯化直接用于下一步。
步骤2g：(S)-5-硝基-6-((氧杂环丁烷-2-基甲基)氨基)吡啶-2-羧酸甲酯(化合物0114-1)的制备:6-氯-5-硝基吡啶-2-羧酸甲酯(0107-1)(1.2克，5.6毫摩尔，1.0当量)，N,N-二异丙基乙胺(2.2克，16.8毫摩尔，3.0当量)和(S)-氧杂环丁烷-2-基甲胺(0113)(1.0克，11.2毫摩尔，2.0当量)的N,N-二甲基甲酰胺(30毫升)混合物在室温下搅拌过夜。加入乙酸乙酯和水，混合物分液，有机层用饱和食盐水洗、浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝8/1到2/1)得到黄色固体(S)-5-硝基-6-((氧杂环丁烷-2-基甲基)氨基)吡啶-2-羧酸甲酯(1.0克，收率：80.6％)。LCMS(ESI)：m/z＝268(M+H)+.
步骤2h：(S)-5-氨基-6-((氧杂环丁烷-2-基甲基)氨基)吡啶-2-羧酸甲酯(化合物0115-1)的制备:氢气条件下，(S)-5-硝基-6-((氧杂环丁烷-2-基甲基)氨基)吡啶-2-羧酸甲酯(0114-1)(1.0克，3.7毫摩尔，1.0当量)和Pd/C(100毫克，10％质量比)的甲醇(30毫升)混合物在室温下搅拌过夜。混合物过滤，滤液真空浓缩，得到黄色固体(S)-5-氨基-6-((氧杂环丁烷-2-基甲基)氨基)吡啶-2-羧酸甲酯(800毫克，收率：90.1％)。LCMS(ESI)：m/z＝238(M+H)+.
步骤2i：(S)-2-(氯甲基)-3-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯(化合物0116-1)的制备:氮气保护条件下，(S)-5-氨基-6-((氧杂环丁烷-2-基甲基)氨基)吡啶-2-羧酸甲酯(0115-1)(800毫克，3.4毫摩尔，1.0当量)和2-氯乙酸酐(872毫克，5.1毫摩尔，1.5当量)的四氢呋喃(50毫升)混合物在70℃搅拌过夜。冷却到室温后，加入碳酸钠水溶液和乙酸乙酯，混合物分液。有机层用饱和食盐水洗、真空浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂为：二氯甲烷/甲醇＝200/1到100/1)得到黄色固体(S)-2-(氯甲基)-3-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯(1.0克，收率：100％)。LCMS(ESI)：m/z＝296(M+H)+.
实施例3：(S)-2-(氯甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(中间体0116-3)的制备(按照方案一线路制备)
步骤3a:(S)-4-硝基-3-((氧杂环丁烷-2-基甲基)氨基)苯甲酸甲酯(化合物0114-3)的制备：氮气保护条件下，3-氟-4-硝基苯甲酸甲酯(0107-3)(6.23克，31.30毫摩尔，1.0当量)、(S)-氧杂环丁烷-2-基甲胺(0113)(3.00克，34.44毫摩尔，1.1当量)和碳酸钾(8.97克，64.87毫摩尔，2.0当量)的N,N-二甲基甲酰胺混合物(60毫升)在室温下搅拌3小时。反应用水(90毫升)淬灭，加入乙酸乙酯(80毫升)萃取。有机层用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，滤液减压浓缩。用柱色谱法(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝5/1)纯化粗产物，得到白色固体(S)-4-硝基-3-((氧杂环丁烷-2-基甲基)氨基)苯甲酸甲酯(6.61克，产率：79.4％)。LCMS(ESI)：m/z＝267(M+H)+.
步骤3b：(S)-4-氨基-3-((氧杂环丁烷-2-基甲基)氨基)苯甲酸甲酯(化合物0115-3)的制备:氢气条件下，(S)-4-硝基-3-((氧杂环丁烷-2-基甲基)氨基)苯甲酸甲酯(0114-3)(6.61克，24.84毫摩尔，1.0当量)和钯碳(661毫克，10％质量比)的四氢呋喃(80毫升)混合物在室温搅拌4小时。将反应液过滤，滤液真空浓缩得到苍白色固体(S)-4-氨基-3-((氧杂环丁烷-2-基甲基)氨基)苯甲酸甲酯(5.88克，收率：100.2％)。LCMS(ESI)：m/z＝237(M+H)+.
步骤3c：(S)-2-(氯甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(化合物0116-3)的制备：在干燥条件下，将(S)-4-氨基-3-((氧杂环丁烷-2-基甲基)氨基)苯甲酸甲酯(0115-3)(5.88克，24.89毫摩尔，1.0当量)、2-氯-1,1,1-三甲氧基乙烷(4.62克，29.86毫摩尔，1.2当量)和一水合对甲苯磺酸(514毫克，2.99毫摩尔，0.12当量)的四氢呋喃(60毫升)溶液加热至45℃并搅拌过夜。冷却至室温后，反应液加水(40毫升)稀释并用乙酸乙酯(60毫升)稀释。用柱色谱法(二氯甲烷/甲醇＝50/1)纯化粗产物，得到白色固体(S)-2-(氯甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(6.54克，收率：74.5％)。LCMS(ESI)：m/z＝295(M+H)+.
实施例4：(S)-2-((4-(6-((4-氰基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-3-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸(化合物1)的制备(按照方案二线路制备)
步骤4a：7-(羟甲基)苯并呋喃-4-腈(化合物0201-1)的制备：
Figure BDA0003178251760000241
氮气保护条件下，将5-溴-2-甲基苯酚(2.0克，10.7毫摩尔，1.0当量)，2-溴-1,1-二乙氧基乙烷(2.5克，12.8毫摩尔，1.2当量)，碳酸钾(3.0克，21.4毫摩尔，2.0当量)和碘化钾(0.2克，10％质量比)的N,N-二甲基甲酰胺的混合物在120℃下搅拌过夜。冷却到室温后，反应用水淬灭，并用乙酸乙酯萃取。有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产品4-溴-2-(2,2-二乙氧基乙氧基)-1-甲基苯(2.88克，产率：88.9％)。该产品不需要进一步纯化直接用于下一步。
氮气保护条件下，将上述得到的4-溴-2-(2,2-二乙氧基乙氧基)-1-甲基苯(2.9克，9.55毫摩尔，1.0当量)和多聚磷酸(8.0克，23.75毫摩尔，2.5当量)的二氯乙烷混合物回流过夜。冷却到室温后，反应用水(40毫升)淬灭，并用乙酸乙酯(50毫升)萃取。有机层用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂为：石油醚)得到黄色油状4-溴-7-甲基苯并呋喃(1.61克，产率：80.5％)。LCMS(ESI)：m/z＝211(M+H)+.
氮气保护条件下，将上述得到的4-溴-7-甲基苯并呋喃(800毫克，3.8毫摩尔，1.0当量)和氰化亚铜(1.7克，19.0毫摩尔，5.0当量)的N,N-二甲基甲酰胺(15毫升)混合物在120℃搅拌过夜。冷却至室温后，将反应液通过硅藻土过滤，并用乙酸乙酯(15毫升)洗涤。将滤液用水(30毫升)稀释，并用乙酸乙酯(30毫升)萃取。有机层用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。粗品用柱色谱法(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝10/1)纯化粗产物，得到白色固体状的7-甲基苯并呋喃-4-腈(305毫克，收率：51.3％)。LCMS(ESI)：m/z＝158(M+H)+.
氮气保护条件下，将上述得到的7-甲基苯并呋喃-4-腈(305毫克，1.94毫摩尔，1.0当量)、N-溴代琥珀酰亚胺(416毫克，2.33毫摩尔，1.2当量)和偶氮二异丁腈(65毫克，0.39毫摩尔，0.2当量)的二氯乙烷(10毫升)混合物在72℃搅拌过夜。冷却至室温后，减压除去溶剂。残留物用水(20毫升)稀释，并用石油醚/乙酸乙酯＝2/1(30毫升)萃取。有机层用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。粗品经柱色谱法(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝10/1)纯化，得到白色固体7-(溴甲基)苯并呋喃-4-腈(377毫克，收率：82.0％)。LCMS(ESI)：m/z＝236(M+H)+.
将上述得到的7-(溴甲基)苯并呋喃-4-腈(326毫克，1.38毫摩尔，1.0当量)和乙酸钾(1.35克，13.76毫摩尔，10.0当量)的N,N-二甲基甲酰胺的混合物(10毫升)在室温下搅拌3小时。反应用水(20毫升)淬灭，并用乙酸乙酯(30毫升)萃取。有机层用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产品乙酸(4-氰基苯并呋喃-7-基)甲基酯(190毫克，产率：64.2％)。该产品不需要进一步纯化直接用于下一步。
在上述得到的乙酸(4-氰基苯并呋喃-7-基)甲基酯(168毫克，0.78毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(5毫升)溶液中加入甲醇钠的甲醇溶液(5.4摩尔/升，282毫克，1.56毫摩尔，2.0当量)。混合物在室温下搅拌1小时。反应液用1摩尔/升的盐酸调节pH约至6，然后形成固体沉淀物。浆液用水(15毫升)稀释，并用乙酸乙酯(20毫升)萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。残留物用柱色谱法(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝4/1)纯化，得到黄色固体7-(羟甲基)苯并呋喃-4-腈(135毫克，收率：100.0％)。LCMS(ESI)：m/z＝174(M+H)+.
步骤4b：4-(6-((4-氰基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(化合物0202-1)的制备：氮气保护条件下，将4-(6-氯吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0104-1)(125毫克，0.44毫摩尔，1.0当量)，7-(羟甲基)苯并呋喃-4-腈(0201-1)(106毫克，0.61毫摩尔，1.4当量)、碳酸铯(400毫克，1.22毫摩尔，2.0当量)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(58毫克，0.12毫摩尔，0.2当量)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(57毫克，0.06毫摩尔，0.1当量)的甲苯(10毫升)的混合物在125℃下回流过夜。冷却至室温后，将反应液通过硅藻土过滤，固体用乙酸乙酯(15毫升)洗涤。将滤液用水(20毫升)稀释，并用乙酸乙酯(20毫升)萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。用柱色谱法(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝10/1)纯化粗产物，得到白色固体4-(6-((4-氰基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(165毫克，产率：86.8％)。LCMS(ESI)：m/z＝434(M+H)+.
步骤4c：7-(((6-(哌啶-4-基)吡啶基-2-基)氧基)甲基)苯并呋喃-4-腈对甲苯磺酸盐(化合物0203-1)的制备：将4-(6-((4-氰基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0202-1)(165毫克，0.38毫摩尔，1.0当量)和一水合对甲苯磺酸(197毫克，1.14毫摩尔，3.0当量)的乙酸乙酯(15毫升)混合物在60℃下搅拌过夜。冷却至室温后，将反应溶液过滤，将滤饼用乙酸乙酯洗涤并真空干燥，得到白色固体7-(((6-(哌啶-4-基)吡啶基-2-基)氧基)甲基)苯并呋喃-4-腈对甲苯磺酸盐(150毫克,收率:90.9％).LCMS(ESI)：m/z＝343(M+H)+.
步骤4d：(S)-2-((4-(6-((4-氰基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-3-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯(化合物0204-1)的制备:将7-(((6-(哌啶-4-基)吡啶基-2-基)氧基)甲基)苯并呋喃-4-腈对甲苯磺酸盐(0203-1)(150毫克，0.29毫摩尔，1.2当量)、(S)-2-(氯甲基)-3-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯(0116-1)(72毫克，0.24毫摩尔，1.0当量)和碳酸钾(115毫克，0.83毫摩尔，4.0当量)的乙腈(5毫升)溶液在60℃的条件下搅拌4小时。在冷却至室温后，加水，加二氯甲烷萃取。有机相用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。残留物用硅胶薄层层析制备板纯化(洗脱剂为：乙酸乙酯)得白色固体(S)-2-((4-(6-((4-氰基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-3-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯(132毫克，收率：75.9％)。LCMS(ESI)：m/z＝593(M+H)+.
步骤4e：(S)-2-((4-(6-((4-氰基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-3-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸(化合物1)的制备:将(S)-2-((4-(6-((4-氰基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-3-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯(0204-1)(132毫克，0.22毫摩尔，1.0当量)和一水合氢氧化锂(11毫克，0.25毫摩尔，1.1当量)的乙腈/水＝5/1(6毫升)混合物在40℃下搅拌过夜。混合物冷却到室温后，用1摩尔/升的盐酸调节pH约至6，然后形成固体沉淀物。浆液用水(12毫升)稀释，搅拌4小时，然后通过过滤收集固体。固体用水洗涤，然后在真空下干燥。将固体溶解在二氯甲烷/甲醇＝1/2(5毫升)中，然后过滤，将滤液用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将残留物真空干燥得到白色固体(S)-2-((4-(6-((4-氰基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-3-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸(97毫克，收率：75.2％)。LCMS(ESI)：m/z＝579(M+H)+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ13.04(s,1H),8.33(d,J＝2.2Hz,1H),8.14(d,J＝8.2Hz,1H),7.99(d,J＝8.2Hz,1H),7.77(d,J＝7.7Hz,1H),7.68–7.61(m,1H),7.55(d,J＝7.8Hz,1H),7.19(d,J＝2.2Hz,1H),6.87(d,J＝7.3Hz,1H),6.72(d,J＝8.1Hz,1H),5.72(s,2H),5.24–5.15(m,1H),4.84(dd,J＝14.6,6.4Hz,1H),4.72(dd,J＝14.6,4.3Hz,1H),4.53–4.46(m,1H),4.37(dt,J＝8.9,6.0Hz,1H),3.94(dd,J＝32.0,13.7Hz,2H),2.97–2.87(m,2H),2.73–2.63(m,1H),2.56(ddd,J＝16.8,8.5,4.7Hz,1H),2.47(d,J＝7.1Hz,1H),2.22(tt,J＝16.1,8.1Hz,2H),1.73(d,J＝10.1Hz,4H).
实施例5：(S)-2-((6-((4-氰基苯并呋喃-7-基)甲氧基)-3'，6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-3-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸(化合物2)的制备(按照方案三线路制备)
步骤5a：6-氯-3'，6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯(化合物0302-2)的制备:氮气保护下，将2-溴-6-氯吡啶(0301-2)(2.00克，10.39毫摩尔，1.0当量)，N-叔丁氧羰基-1,2,5,6-四氢吡啶-4-硼酸频哪醇酯(3.21克，10.39毫摩尔，1.0当量)，碳酸钠(2.20克，20.78毫摩尔，2.0当量)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)(761毫克，1.04毫摩尔，0.1当量)的二氧六环/水＝10/1(30毫升)的混合物在90℃下搅拌过夜。冷却至室温后，将反应液通过硅藻土过滤，并用乙酸乙酯(30毫升)洗涤。将滤液用水(30毫升)稀释，并用乙酸乙酯(20毫升)萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。用柱色谱法(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝10/1)纯化粗产物，得到白色固体6-氯-3'，6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯(2.51克，产率：81.9％)。LCMS(ESI)：m/z＝295(M+H)+.
步骤5b：6-((4-氰基苯并呋喃-7-基)甲氧基)-3'，6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯(化合物0303-2)的制备：氮气保护条件下，将6-氯-3'，6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯(0302-2)(491毫克，1.67毫摩尔，1.2当量)，7-(羟甲基)苯并呋喃-4-腈(0201-1)(241毫克，1.39毫摩尔，1.0当量)、碳酸铯(906毫克，2.78毫摩尔，2.0当量)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(130毫克，0.28毫摩尔，0.2当量)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(127毫克，0.14毫摩尔，0.1当量)的甲苯(10毫升)的混合物在125℃下回流过夜。冷却至室温后，将反应液通过硅藻土过滤，固体用乙酸乙酯(15毫升)洗涤。将滤液用水(20毫升)稀释，并用乙酸乙酯(20毫升)萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。用柱色谱法(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝10/1)纯化粗产物，得到白色固体6-((4-氰基苯并呋喃-7-基)甲氧基)-3'，6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯(462毫克，产率：76.9％)。LCMS(ESI)：m/z＝432(M+H)+.
步骤5c：7-(((1'，2'，3'，6'-四氢-[2,4'-联吡啶]]-6-基)氧基)甲基)苯并呋喃-4-腈盐酸盐(化合物0304-2)的制备：将6-((4-氰基苯并呋喃-7-基)甲氧基)-3'，6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯(0303-2)(462毫克，1.07毫摩尔，1.0当量)溶于盐酸二氧六环溶液(4摩尔/升，5毫升)中，反应液在室温下搅拌过夜。然后将反应溶液过滤，将滤饼用乙酸乙酯洗涤并真空干燥，得到白色固体7-(((1'，2'，3'，6'-四氢-[2,4'-联吡啶]]-6-基)氧基)甲基)苯并呋喃-4-腈盐酸盐(400毫克,收率:100.0％)。LCMS(ESI)：m/z＝332(M+H)+.
步骤5d：(S)-2-((6-((4-氰基苯并呋喃-7-基)甲氧基)-3'，6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-3-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯(化合物0305-2)的制备:将7-(((1'，2'，3'，6'-四氢-[2,4'-联吡啶]]-6-基)氧基)甲基)苯并呋喃-4-腈盐酸盐(0304-2)(200毫克，0.54毫摩尔，1.0当量)、(S)-2-(氯甲基)-3-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯(0116-1)(160毫克，0.54毫摩尔，1.0当量)和碳酸钾(298毫克，2.16毫摩尔，4.0当量)的乙腈(5毫升)的混合物在60℃下搅拌4小时。将反应混合物冷却至室温后加水，加二氯甲烷萃取。有机相用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。残留物用硅胶薄层层析制备板纯化(洗脱剂为：乙酸乙酯)得白色固体(S)-2-((6-((4-氰基苯并呋喃-7-基)甲氧基)-3'，6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-3-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯(212毫克，收率：66.7％)。LCMS(ESI)：m/z＝590(M+H)+.
步骤5e：(S)-2-((6-((4-氰基苯并呋喃-7-基)甲氧基)-3'，6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-3-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸(化合物2)的制备:将(S)-2-((6-((4-氰基苯并呋喃-7-基)甲氧基)-3'，6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-3-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯(0305-2)(70毫克，0.12毫摩尔，1.0当量)和一水合氢氧化锂(25毫克，0.48毫摩尔，4.0当量)的乙腈/水＝5/1(3毫升)混合物在40℃下搅拌过夜。混合物冷却到室温后，用1摩尔/升的盐酸调节pH约至6，然后形成固体沉淀物。浆液用水(12毫升)稀释，搅拌4小时。然后通过过滤收集固体，固体用水洗涤，然后在真空下干燥。将固体溶解在二氯甲烷/甲醇＝1/2(5毫升)中，然后过滤。将滤液用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。真空干燥得到白色固体(S)-2-((6-((4-氰基苯并呋喃-7-基)甲氧基)-3'，6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-3-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸(47毫克，收率：69.1％)。LCMS(ESI)：m/z＝576(M+H)+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.32(s,1H),8.05(d,J＝8.0Hz,1H),7.96(d,J＝8.0Hz,1H),7.78(d,J＝7.5Hz,1H),7.69(t,J＝7.7Hz,1H),7.54(d,J＝7.6Hz,1H),7.20(s,1H),7.07(d,J＝7.2Hz,1H),6.77(d,J＝8.1Hz,1H),6.63(s,1H),5.74(s,2H),4.99(s,1H),4.83(dd,J＝14.3,7.4Hz,1H),4.65(d,J＝14.0Hz,1H),4.42(d,J＝6.9Hz,1H),4.33(d,J＝7.2Hz,1H),4.16(d,J＝13.5Hz,1H),3.91(d,J＝13.4Hz,1H),3.20(s,2H),2.71(s,2H),2.51(s,1H),2.44(s,2H),2.29(s,1H).
实施例6：(S)-2-((4-(6-((4-氰基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物3)的制备(按照方案二线路制备)
步骤6a：(S)-2-((4-(6-((4-氰基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(化合物0204-3)的制备:将7-(((6-(哌啶-4-基)吡啶基-2-基)氧基)甲基)苯并呋喃-4-腈对甲苯磺酸盐(0203-1)(105毫克，0.24毫摩尔，1.2当量)、(S)-2-(氯甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0116-3)(60毫克，0.20毫摩尔，1.0当量)和碳酸钾(111毫克，0.81毫摩尔，4.0当量)的乙腈(5毫升)的混合物在60℃下搅拌4小时。将反应混合物冷却至室温后加水，加二氯甲烷萃取。有机相用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。残留物用硅胶薄层层析制备板纯化(洗脱剂为：乙酸乙酯)得白色固体(S)-2-((4-(6-((4-氰基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(78毫克，收率：65.5％)。LCMS(ESI)：m/z＝592(M+H)+.
步骤6b：(S)-2-((4-(6-((4-氰基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物3)的制备:将(S)-2-((4-(6-((4-氰基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0204-3)(78毫克，0.13毫摩尔，1.0当量)和一水合氢氧化锂(11毫克，0.26毫摩尔，2.0当量)的乙腈/水＝5/1(3毫升)的混合物在40℃下搅拌过夜。混合物冷却到室温后，用1摩尔/升的盐酸调节pH约至6，然后形成固体沉淀物。浆液用水(12毫升)稀释，搅拌4小时，然后通过过滤收集固体，固体用水洗涤，然后在真空下干燥。将固体溶解在二氯甲烷/甲醇＝1/2(5毫升)中，然后过滤。将滤液用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将残留物真空干燥得到白色固体(S)-2-((4-(6-((4-氰基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(54毫克，收率：71.1％)。LCMS(ESI)：m/z＝578(M+H)+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.65(s,1H),8.28(d,J＝22.1Hz,2H),7.80(dd,J＝28.6,7.5Hz,2H),7.64(d,J＝7.0Hz,2H),7.54(d,J＝7.4Hz,1H),7.18(s,1H),6.87(d,J＝6.9Hz,1H),6.72(d,J＝7.9Hz,1H),5.72(s,2H),5.10(s,1H),4.76(s,1H),4.64(d,J＝14.4Hz,1H),4.45(d,J＝5.8Hz,1H),4.36(s,1H),3.95(d,J＝12.5Hz,1H),3.79(d,J＝11.9Hz,1H),2.97(d,J＝8.7Hz,1H),2.84(s,1H),2.68(s,1H),2.57(s,1H),2.42(s,1H),2.21(d,J＝29.3Hz,2H),1.72(d,J＝12.1Hz,4H).
实施例7：(S)-2-((6-((4-氰基苯并呋喃-7-基)甲氧基)-3'，6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物4)的制备(按照方案三线路制备)
步骤7a：(S)-2-((6-((4-氰基苯并呋喃-7-基)甲氧基)-3'，6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(化合物0305-4)的制备:将7-(((1'，2'，3'，6'-四氢-[2,4'-联吡啶]]-6-基)氧基)甲基)苯并呋喃-4-腈盐酸盐(0304-2)(100毫克，0.27毫摩尔，1.0当量)、(S)-2-(氯甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0116-3)(80毫克，0.27毫摩尔，1.0当量)和碳酸钾(149毫克，1.08毫摩尔，3.0当量)的乙腈(5毫升)的混合物在60℃下搅拌4小时。将反应混合物冷却至室温后加水，加二氯甲烷萃取。有机相用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。残留物用硅胶薄层层析制备板纯化(洗脱剂为：乙酸乙酯)得白色固体(S)-2-((6-((4-氰基苯并呋喃-7-基)甲氧基)-3'，6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(97毫克，收率：60.9％)。LCMS(ESI)：m/z＝590(M+H)+.
步骤7b：(S)-2-((6-((4-氰基苯并呋喃-7-基)甲氧基)-3'，6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物4)的制备:(S)-2-((6-((4-氰基苯并呋喃-7-基)甲氧基)-3'，6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0305-4)(97毫克，0.16毫摩尔，1.0当量)和一水合氢氧化锂(25毫克，0.48毫摩尔，3.0当量)的乙腈/水＝5/1(3毫升)混合物在40℃下搅拌过夜。混合物冷却到室温后，用1摩尔/升的盐酸调节pH约至6，然后形成固体沉淀物。用水(12毫升)稀释浆液，搅拌4小时，然后通过过滤收集固体，固体用水洗涤，然后在真空下干燥。将固体溶解在二氯甲烷/甲醇＝1/2(5毫升)中，然后过滤，将滤液用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。真空干燥得到白色固体(S)-2-((6-((4-氰基苯并呋喃-7-基)甲氧基)-3'，6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(68毫克，收率：76.6％)。LCMS(ESI)：m/z＝576(M+H)+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.67(s,1H),8.32(s,1H),8.25(s,1H),7.79(dd,J＝18.0,8.0Hz,2H),7.74–7.61(m,2H),7.55(d,J＝7.7Hz,1H),7.21(s,1H),7.08(d,J＝7.4Hz,1H),6.78(d,J＝8.1Hz,1H),6.62(s,1H),5.74(s,2H),5.05(d,J＝5.3Hz,1H),4.79(dd,J＝15.2,7.3Hz,1H),4.64(d,J＝13.4Hz,1H),4.46(dd,J＝13.8,7.3Hz,1H),4.35(dd,J＝14.6,5.9Hz,1H),4.05(d,J＝13.5Hz,1H),3.91(d,J＝13.5Hz,1H),3.22–3.15(m,2H),2.77–2.60(m,3H),2.46–2.31(m,3H).
实施例8：(S)-2-((4-(6-((4-氰基-2-甲基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物5)的制备(按照方案二线路制备)
步骤8a：7-(羟甲基)-2-甲基苯并呋喃-4-腈(化合物0201-5)的制备：
Figure BDA0003178251760000301
氮气保护下，4-溴-2-羟基苯甲酸甲酯(1.0克，4.33毫摩尔，1.0当量)，3-溴丙炔(618毫克，5.19毫摩尔，1.2当量)，和碳酸钾(896毫克，6.49毫摩尔，1.5当量)的N,N-二甲基甲酰胺的混合物在50℃下搅拌5小时。反应用水淬灭，并用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥。将有机相减压浓缩。残留物用N,N-二乙基苯胺(5毫升)溶解。往混合物中加入氟化铯(855毫克，5.63毫摩尔，1.3当量)。混合物在220℃下搅拌3小时。冷却到室温后，反应用水淬灭，并用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝100/1-10/1)得到黄色固体4-溴-2-甲基苯并呋喃-7-羧酸甲酯(563毫克，产率：48.53％)。LCMS(ESI)：m/z＝269(M+H)+.
氮气保护条件下，将上述得到的4-溴-2-甲基苯并呋喃-7-羧酸甲酯(500毫克，1.86毫摩尔，1.0当量),四三苯基膦钯(215毫克，0.186毫摩尔，0.1当量)和氰化锌(326毫克，2.79毫摩尔，1.5当量)的N,N-二甲基甲酰胺(5毫升)溶液在90℃下搅拌过夜。冷却至室温后，反应用水淬灭，并用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩。残留物用硅胶柱层析(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝100/1-10/1)纯化，得到黄色固体4-氰基-2-甲基苯并呋喃-7-羧酸甲酯(290毫克，收率：72.68％)。LCMS(ESI)：m/z＝216(M+H)+.
在氮气保护和冰浴下，往四氢锂铝(62毫克，1.618毫摩尔，1.2当量)的四氢呋喃混合物中加入上述得到的4-氰基-2-甲基苯并呋喃-7-羧酸甲酯(290毫克，1.348毫摩尔，1.0当量)。混合物在冰浴下搅拌1小时。反应用水淬灭。混合物用无水硫酸钠干燥并过滤。将滤液减压浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝100/1-2/1)得到黄色固体7-(羟甲基)-2-甲基苯并呋喃-4-腈(248毫克，产率：98.41％)。LCMS(ESI)：m/z＝188(M+H)+.
步骤8b：4-(6-((4-氰基-2-甲基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(化合物0202-5)的制备：氮气保护条件下，4-(6-氯吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0104-1)(220毫克，0.74毫摩尔，1.0当量)，7-(羟甲基)-2-甲基苯并呋喃-4-腈(0201-5)(166毫克，0.88毫摩尔，1.2当量)、碳酸铯(481毫克，1.48毫摩尔，2.0当量)，2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(138毫克，0.296毫摩尔，0.4当量)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(135毫克，0.148毫摩尔，0.2当量)的甲苯(10毫升)的混合物在125℃下搅拌过夜。冷却至室温后，将反应液通过硅藻土过滤，固体用乙酸乙酯洗涤。将滤液减压浓缩。残留物用硅胶柱层析(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝100/1-10/1)纯化粗产物，得到黄色油状物4-(6-((4-氰基-2-甲基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(237毫克，产率：71.60％)。LCMS(ESI)：m/z＝448(M+H)+.
步骤8c：2-甲基-7-(((6-(哌啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苯并呋喃-4-甲腈盐酸盐(化合物0203-5)的制备：将4-(6-((4-氰基-2-甲基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0202-5)(248毫克，0.55毫摩尔，1.0当量)和盐酸的二氧六环溶液(4M，1毫升)的二氧六环(4毫升)溶液在室温下搅拌过夜。混合物减压浓缩，得到2-甲基-7-(((6-(哌啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苯并呋喃-4-甲腈盐酸盐(105毫克,粗品)，该产品不需要进一步纯化直接用于下一步。LCMS(ESI)：m/z＝348(M+H)+.
步骤8d：(S)-2-((4-(6-((4-氰基-2-甲基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(化合物0204-5)的制备:2-甲基-7-(((6-(哌啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苯并呋喃-4-甲腈盐酸盐(0203-5)(98毫克，0.255毫摩尔，1.5当量)，(S)-2-(氯甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0116-3)(50毫克，0.17毫摩尔，1.0当量)和碳酸钾(140毫克，1.01毫摩尔，4.0当量)的乙腈(5毫升)溶液在60℃的条件下搅拌16小时。将反应混合物冷却至室温后加水，加乙酸乙酯萃取。有机相用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。残留物用硅胶薄层层析制备板纯化(洗脱剂为：乙酸乙酯)得黄色固体(S)-2-((4-(6-((4-氰基-2-甲基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(70毫克，收率：68.03％)。LCMS(ESI)：m/z＝606(M+H)+.
步骤8e：(S)-2-((4-(6-((4-氰基-2-甲基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物5)的制备:(S)-2-((4-(6-((4-氰基-2-甲基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0204-5)(27.6毫克，0.045毫摩尔，1.0当量)和一水合氢氧化锂(4毫克，0.09毫摩尔，2.0当量)的乙腈/水＝5/1(6毫升)混合物在40℃下搅拌过夜。混合物冷却到室温，并减压浓缩。残留物的pH值用1摩尔/升的盐酸调节至6，然后形成固体沉淀。混合物过滤。残留物用水洗。残留物用厚制备薄层硅胶色谱法纯化(洗脱剂为：二氯甲烷/甲醇＝10/1)，得到黄色固体(S)-2-((4-(6-((4-氰基-2-甲基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(21.6毫克，收率：80.12％)。LCMS(ESI)：m/z＝592(M+H)+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.69(s,1H),8.26(s,1H),7.81(dd,J＝8.4,1.3Hz,1H),7.73–7.59(m,3H),7.44(d,J＝7.8Hz,1H),6.87(d,J＝7.3Hz,1H),6.83(d,J＝1.0Hz,1H),6.72(d,J＝8.1Hz,1H),5.68(s,2H),5.10(ddd,J＝14.5,7.2,2.8Hz,1H),4.77(dd,J＝15.2,7.1Hz,1H),4.64(dd,J＝15.2,2.6Hz,1H),4.46(dt,J＝13.8,7.0Hz,1H),4.36(dt,J＝9.0,5.9Hz,1H),3.93(d,J＝13.6Hz,1H),3.77(d,J＝13.5Hz,1H),2.97(d,J＝11.1Hz,1H),2.84(d,J＝11.2Hz,1H),2.74–2.65(m,1H),2.59–2.54(m,1H),2.48(d,J＝0.8Hz,3H),2.43(ddd,J＝11.1,9.0,5.6Hz,1H),2.19(dt,J＝32.3,10.5Hz,2H),1.80–1.60(m,4H).
实施例9：(S)-2-((4-(6-((2-氯-4-氰基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物6)的制备(按照方案二线路制备)
步骤9a：4-(6-((2-氯-4-氰基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(化合物0202-6)的制备：在氮气保护和-70℃下，往4-(6-((4-氰基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0202-1)(180毫克，0.416毫摩尔，1当量)的10毫升四氢呋喃溶液中滴加二异丙基氨基锂(0.42毫升，2摩尔/升四氢呋喃，0.843毫摩尔，2当量)。混合物在-70℃下搅拌1小时。将六氯乙烷(98.5毫克，0.416毫摩尔，1当量)的四氢呋喃(1毫升)溶液加入到混合物中。混合物在-70℃下搅拌1小时。反应用氯化铵淬灭。混合物用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤和硫酸钠干燥。将混合物减压浓缩。残留物用硅胶薄层层析制备板纯化(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝5/1)得到透明油状物4-(6-((2-氯-4-氰基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(54毫克，产率：27.74％)。LCMS(ESI)：m/z＝468(M+H)+.
步骤9b：2-氯-7-(((6-(哌啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苯并呋喃-4-腈4-甲基苯磺酸盐(化合物0203-6)的制备：在4-(6-((2-氯-4-氰基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0202-6)(54毫克，0.115毫摩尔，1.0当量)的乙酸乙酯(10毫升)溶液中加入对甲苯磺酸一水合物(59毫克，0.346毫摩尔，3.0当量)。混合物在60℃下搅拌过夜。混合物减压浓缩得到粗产品2-氯-7-(((6-(哌啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苯并呋喃-4-腈4-甲基苯磺酸盐(93毫克，粗品)。该产品不需要进一步纯化直接用于下一步。
步骤9c：(S)-2-((4-(6-((2-氯-4-氰基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(化合物0204-6)的制备:将2-氯-7-(((6-(哌啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苯并呋喃-4-腈4-甲基苯磺酸盐(0203-6)(93毫克，0.173毫摩尔，1.5当量)，(S)-2-(氯甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0116-3)(34毫克，0.115毫摩尔，1.0当量)和碳酸钾(63.6毫克，0.461毫摩尔，4.0当量)的乙腈(10毫升)混合物在60℃下搅拌16小时。将反应混合物冷却至室温后加水，加乙酸乙酯萃取。有机相用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。残留物用硅胶薄层层析制备板纯化(洗脱剂为：乙酸乙酯)得白色固体(S)-2-((4-(6-((2-氯-4-氰基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(60毫克，收率：83.34％)。LCMS(ESI)：m/z＝626(M+H)+.
步骤9d：(S)-2-((4-(6-((2-氯-4-氰基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物6)的制备:将(S)-2-((4-(6-((2-氯-4-氰基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0204-6)(60毫克，0.096毫摩尔，1.0当量)和一水合氢氧化锂(12毫克，0.288毫摩尔，3当量)的四氢呋喃/水＝5/1(6毫升)混合物在40℃下搅拌过夜。混合物冷却到室温，并减压浓缩。残留物的pH值用1摩尔/升的稀硫酸调节至6，之后形成固体沉淀。混合物过滤。残留物用硅胶薄层层析制备板纯化(洗脱剂为：二氯甲烷/甲醇＝10/1)得白色固体(S)-2-((4-(6-((2-氯-4-氰基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(32.7毫克，收率：55.66％)。LCMS(ESI)：m/z＝612(M+H)+.熔点：125～130℃；1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.70(s,1H),8.27(d,J＝0.7Hz,1H),7.87–7.76(m,2H),7.70–7.60(m,2H),7.55(d,J＝7.9Hz,1H),7.36(s,1H),6.87(d,J＝7.3Hz,1H),6.73(d,J＝8.1Hz,1H),5.68(s,2H),5.10(qd,J＝7.2,2.8Hz,1H),4.78(dd,J＝15.2,7.2Hz,1H),4.65(dd,J＝15.2,2.7Hz,1H),4.47(dt,J＝13.8,7.0Hz,1H),4.36(dt,J＝9.0,5.9Hz,1H),3.93(d,J＝13.5Hz,1H),3.78(d,J＝13.5Hz,1H),2.96(d,J＝10.8Hz,1H),2.84(d,J＝11.0Hz,1H),2.74–2.65(m,1H),2.59–2.53(m,1H),2.43(ddd,J＝11.1,8.9,5.6Hz,1H),2.18(dt,J＝29.7,11.0Hz,2H),1.77–1.54(m,4H).
实施例10：(S)-2-((4-(6-((4-氰基苯并[b]噻吩-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物8)的制备(按照方案二线路制备)
步骤10a：7-(羟甲基)苯并[b]噻吩-4-腈(化合物0201-8)的制备：
Figure BDA0003178251760000341
将2-氨基-4-溴苯甲酸甲酯(2.3克，10.0毫摩尔，1.0当量)加入到稀盐酸(2毫升浓盐酸和8毫升水)。混合物在80℃下搅拌15分钟，然后冷却到0℃。亚硝酸钠(828毫克，12毫摩尔，1.2当量)溶解于8毫升水，滴加到上述混合物中，混合物在0℃下搅拌2小时。将乙基黄原酸钾(2.72克，17毫摩尔，1.7当量)加入到8毫升水中，在65℃下搅拌。将上述所得重氮盐混合物在20分钟内加到该混合物中，混合物在65℃下搅拌2小时。加入二氯甲烷萃取，用水和饱和食盐水洗。有机相用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。将残留物加入到氢氧化钾(5.6克，100毫摩尔，10.0当量)的10毫升乙醇溶液中，混合物在室温下搅拌1小时。混合物减压浓缩，加入水。通过加入浓盐酸调节水相pH值到1。加入乙酸乙酯萃取，用饱和食盐水洗。有机相经无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，得到3-溴丙炔(619毫克，5.2毫摩尔，1.3当量)和碳酸钾(884毫克，6.4毫摩尔，1.6当量)的N,N-二甲基甲酰胺混合物置于50℃下搅拌3小时。冷却到室温后，反应用水淬灭，并用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩，得到红色油状物4-溴-2-巯基苯甲酸(2.19克，粗品)，该产品不需要进一步纯化直接用于下一步。MS(ES-):m/z＝231(M-H)-.
将上述得到的4-溴-2-巯基苯甲酸(2.19克，9.48毫摩尔，1.0当量)溶解于50毫升甲醇中，在0℃下滴加二氯亚砜(3.38克，28.44毫摩尔，3.0当量)。混合物在75℃下搅拌3小时。混合物减压浓缩，加入乙酸乙酯萃取。有机相经水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩得到黄色油状物4-溴-2-巯基苯甲酸甲酯(2.23克，粗品)，该产品不需要进一步纯化直接用于下一步。MS(ES-):m/z＝245(M-H)-。
将上述得到的4-溴-2-巯基苯甲酸甲酯(2.23克，9.03毫摩尔，1.0当量)，2-溴-1,1-二乙氧基乙烷(2.13克，10.84毫摩尔，1.2当量)和碳酸钾(2.49克，18.03毫摩尔，2.0当量)的35毫升N,N-二甲基甲酰胺混合物在70℃下搅拌3小时。冷却到室温后，反应用水淬灭，并用乙酸乙酯萃取。有机相用食饱和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥。有机相真空浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝30/1到10/1)得到黄色油状物4-溴-2-((2,2-二乙氧基乙基)硫基)苯甲酸甲酯(1.46克，收率：44.5％)。
将上述得到的4-溴-2-((2,2-二乙氧基乙基)硫基)苯甲酸甲酯(1.26克，3.47毫摩尔，1.0当量)和1.29克多聚磷酸的甲苯混合物置于120℃下搅拌过夜。冷却到室温后，加入水，用乙酸乙酯和是有名混合物通过加入浓盐酸进行酸化，加入乙酸乙酯和石油醚的混合溶剂萃取混合物。有机相用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩，残留物用硅胶柱层析(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝100/1到50/1)得到红色固体4-溴苯并[b]噻吩-7-羧酸甲酯(849毫克，收率：90.6％)。
将上述得到的4-溴苯并[b]噻吩-7-羧酸甲酯(800毫克，2.96摩尔，1.0当量)溶解于25毫升乙醇，混合物在45℃下搅拌。加入硼氢化钠(1.14克，30毫摩尔，10当量)，混合物搅拌过夜。混合物减压浓缩，加入乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝20/1到5/1)得到黄色固体(4-溴苯并[b]噻吩-7-基)甲醇(470毫克，收率：65.6％)。LCMS(ESI)：m/z＝225(M+H-H2O)+.
在氮气保护下，将上述得到的(4-溴苯并[b]噻吩-7-基)甲醇(440毫克，1.82毫摩尔，1.0当量)和氰化亚铜(1.63克，18.2毫摩尔，10.0当量)的N-甲基吡咯烷酮(15毫升)混合物置于190℃下搅拌8小时。冷却到室温后，混合物用乙酸乙酯稀释。混合物经硅藻土过滤，滤液用饱和食盐水洗，然后用无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝10/1到4/1)，得到7-(羟甲基)苯并[b]噻吩-4-腈(125毫克，收率：36.3％)。LCMS(ESI)：m/z＝172(M+H-H2O)+.
步骤10b：4-(6-((4-氰基苯并[b]噻吩-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(化合物0202-8)的制备：氮气保护下，4-(6-氯吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0104-1)(138毫克，0.46毫摩尔，1.0当量)、7-(羟甲基)苯并[b]噻吩-4-腈(0201-8)(105毫克，0.56毫摩尔，1.2当量)、碳酸铯(378毫克，1.16毫摩尔，2.5当量)，2-双环已基膦-2',6'-二异丙氧基联苯(33毫克，0.07毫摩尔，0.15当量)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(38毫克，0.042毫摩尔，0.09当量)的甲苯(50毫升)的混合物在125℃下回流过夜。冷却至室温后，将反应液通过硅藻土过滤，固体用乙酸乙酯洗涤。将滤液减压浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝10/1到6/1)，得到黄色固体4-(6-((4-氰基苯并[b]噻吩-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(192毫克，收率：92.3％)。LCMS(ESI)：m/z＝450(M+H)+.
步骤10c：7-(((6-(哌啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苯并[b]噻吩-4-甲腈盐酸盐(化合物0203-8)的制备：向4-(6-((4-氰基苯并[b]噻吩-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0202-8)(192毫克，0.43毫摩尔，1.0当量)在5毫升二氧六环的混合物中加入1毫升4M氯化氢的二氧六环溶液。混合物在室温下搅拌过夜。混合物减压浓缩至干，得到白色固体7-(((6-(哌啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苯并[b]噻吩-4-甲腈盐酸盐(240毫克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z＝350(M+H)+.
步骤10d：(S)-2-((4-(6-((4-氰基苯并[b]噻吩-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(化合物0204-8)的制备：将7-(((6-(哌啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苯并[b]噻吩-4-甲腈盐酸盐(0203-8)(240毫克，0.43毫摩尔，2.5当量)加入到5毫升N-甲基吡咯烷酮中，再加入N,N-二异丙基乙胺(175毫克，1.36毫摩尔，8.0当量)。混合物在室温下搅拌5分钟。加入(S)-2-(氯甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0116-3)(50毫克，0.17毫摩尔，1.0当量)，然后混合物在60℃下搅拌过夜。混合物用乙酸乙酯稀释，用水和饱和食盐水洗。有机相减压浓缩，残留物经制备薄层色谱纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝20/1)，得到黄色固体(S)-2-((4-(6-((4-氰基苯并[b]噻吩-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(89毫克，收率：86.1％)。m/z＝608(M+H)+.
步骤10e：(S)-2-((4-(6-((4-氰基苯并[b]噻吩-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物8)的制备:(S)-2-((4-(6-((4-氰基苯并[b]噻吩-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0204-8)(80毫克，0.13毫摩尔，1.0当量)和一水合氢氧化锂(44毫克，1.05毫摩尔，8.0当量)在5毫升乙腈和1毫升水的混合溶剂中的混合物在40℃下搅拌过夜。混合物冷却到室温，并减压浓缩。加入稀硫酸调节残留物的pH值至6，加入乙酸乙酯萃取，用饱和食盐水洗。有机相经过无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用制备薄层色谱纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1)得到黄色固体(S)-2-((4-(6-((4-氰基苯并[b]噻吩-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(49毫克，收率：62.0％)。LCMS(ESI)：m/z＝594(M+H)+,熔点：124～126℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.73(s,1H),8.28(s,1H),8.12(d,J＝5.5Hz,1H),7.94(d,J＝7.6Hz,1H),7.81(dd,J＝8.4,1.0Hz,1H),7.71–7.55(m,4H),6.88(d,J＝7.3Hz,1H),6.75(d,J＝8.2Hz,1H),5.71(s,2H),5.10(qd,J＝7.2,2.8Hz,1H),4.79(dd,J＝15.2,7.1Hz,1H),4.66(dd,J＝15.2,2.4Hz,1H),4.46(dd,J＝13.7,7.6Hz,1H),4.36(dt,J＝9.0,5.9Hz,1H),3.94(d,J＝13.6Hz,1H),3.80(s,1H),2.95(d,J＝10.7Hz,1H),2.83(d,J＝10.8Hz,1H),2.75–2.65(m,1H),2.56(t,J＝11.5Hz,1H),2.47–2.38(m,1H),2.28–2.10(m,2H),1.75–1.55(m,4H).
实施例11：(S)-2-((4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物12)的制备(按照方案二线路制备)
步骤11a：(4-氯苯并呋喃-7-基)甲醇(化合物0201-12)的制备：
Figure BDA0003178251760000371
氮气保护条件下，5-氯-2-甲基苯酚(2.0克，14.03毫摩尔，1.0当量)，2-溴-1,1-二乙氧基乙烷(3.31克，16.83毫摩尔，1.2当量)，和碳酸钾(2.9克，21.04毫摩尔，1.5当量)的N,N-二甲基甲酰胺混合物在120℃下搅拌过夜。冷却到室温后，反应用水淬灭，并用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥。有机相真空浓缩，得到4-氯-2-(2,2-二乙氧基乙氧基)-1-甲基苯(4克，粗品)。该产品不需要进一步纯化直接用于下一步。
氮气保护条件下，将上述得到的4-氯-2-(2,2-二乙氧基乙氧基)-1-甲基苯(4.18克，14.03毫摩尔，1.0当量)和多聚磷酸(7.09克，21.04毫摩尔，1.5当量)的二氯乙烷混合物回流过夜。冷却到室温后，反应用水淬灭，并用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂为：石油醚)得到透明油状物4-氯-7-甲基苯并呋喃(1.98克，产率：84.98％)。
氮气保护条件下，将上述得到的4-氯-7-甲基苯并呋喃(1.98克，11.93毫摩尔，1.0当量)、N-溴代琥珀酰亚胺(2.54克，14.31毫摩尔，1.2当量)和偶氮二异丁腈(391毫克，2.38毫摩尔，0.2当量)的二氯乙烷(10毫升)溶液在72℃下搅拌过夜。冷却至室温后，减压除去溶剂。残留物用水稀释，并用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，并用无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩，残留物用硅胶柱层析(洗脱剂为：石油醚)纯化，得到黄色油状物7-(溴甲基)-4-氯苯并呋喃(2.54克，收率：87.28％)。
上述得到的7-(溴甲基)-4-氯苯并呋喃(2.54克，10.37毫摩尔，1.0当量)和醋酸钾(10.16克，103.7毫摩尔，10.0当量)的N,N-二甲基甲酰胺混合物(20毫升)在室温下搅拌3小时。反应用水淬灭，用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，并用无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩得到乙酸(4-氯苯并呋喃-7-基)甲基酯(2.29克，粗品)，该产品不需要进一步纯化直接用于下一步。
往上述得到的乙酸(4-氯苯并呋喃-7-基)甲基酯(2.29克，10.22毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(10毫升)溶液中加入的甲醇钠的甲醇溶液(5.4摩尔/升，3.8毫升，20.44毫摩尔，2.0当量)。混合物在常温下搅拌1小时。反应用水淬灭，用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，并用无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩，残留物用硅胶柱层析(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝200/1-4/1)纯化，得到(4-氯苯并呋喃-7-基)甲醇(1.3克，收率：69.89％)为黄色固体。LCMS(ESI)：m/z＝183(M+H)+.
步骤11b：4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯tert-butyl(化合物0202-12)的制备：氮气保护条件下，4-(6-氯吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0104-1)(160毫克，0.548毫摩尔，1当量)，(4-氯苯并呋喃-7-基)甲醇(0201-12)(120毫克，0.66毫摩尔，1.2当量)、碳酸铯(356毫克，1.096毫摩尔，2.0当量)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(76毫克，0.131毫摩尔，0.2当量)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(60毫克，0.065毫摩尔，0.1当量)的甲苯(10毫升)的混合物在125℃下搅拌过夜。冷却至室温后，将反应液通过硅藻土过滤，固体用乙酸乙酯洗涤。将滤液减压浓缩。残留物用硅胶柱层析(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝100/1-10/1)纯化粗产物，得到黄色油状物4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(235毫克，产率：98.74％)。LCMS(ESI)：m/z＝443(M+H)+.
步骤11c：2-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)-6-(哌啶-4-基)吡啶盐酸盐(化合物0203-12)的制备：向4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0202-12)(235毫克，0.53毫摩尔，1.0当量)和氯化氢的二氧六环溶液(4M，1毫升)的混合物中加入二氧六环(2毫升)，混合物在室温下搅拌过夜。混合物过滤。残留物用二氧六环洗涤。残留物干燥，得到黄色固体2-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)-6-(哌啶-4-基)吡啶盐酸盐(142毫克,收率:70.64％).LCMS(ESI)：m/z＝343(M+H)+.
步骤11d：(S)-2-((4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(化合物0204-12)的制备:2-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)-6-(哌啶-4-基)吡啶盐酸盐(0203-12)(142毫克，0.374毫摩尔，1.5当量)，(S)-2-(氯甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0116-3)(73毫克，0.249毫摩尔，1.0当量)和N,N-二异丙基乙胺(161毫克，1.248毫摩尔，4.0当量)的N-甲基吡咯烷酮(5毫升)溶液在60℃下搅拌16小时。将反应混合物冷却至室温后加水，加乙酸乙酯萃取。有机相用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。残留物用硅胶薄层层析制备板纯化(洗脱剂为：乙酸乙酯)得黄色固体(S)-2-((4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(115毫克，收率：77.18％)。LCMS(ESI)：m/z＝601(M+H)+.
步骤11e：(S)-2-((4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物12)的制备:(S)-2-((4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0204-12)(115毫克，0.19毫摩尔，1.0当量)和一水合氢氧化锂(16毫克，0.38毫摩尔，2.0当量)的乙腈/水＝5/1(6毫升)混合物在40℃下搅拌过夜。混合物冷却到室温，并减压浓缩。残留物的pH值用1摩尔/升的盐酸调节至6，然后形成固体沉淀物。混合物过滤。残留物用水洗。混合物用甲醇打浆得到白色固体(S)-2-((4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(88毫克，收率：78.57％)。LCMS(ESI)：m/z＝587(M+H)+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.74(s,1H),8.29(s,1H),8.15(d,J＝2.2Hz,1H),7.82(s,1H),7.75–7.60(m,2H),7.44(d,J＝7.9Hz,1H),7.34(d,J＝8.0Hz,1H),7.03(d,J＝2.1Hz,1H),6.88(d,J＝7.1Hz,1H),6.69(d,J＝7.9Hz,1H),5.63(s,2H),5.10(d,J＝5.6Hz,1H),4.80(dd,J＝15.3,7.2Hz,1H),4.72–4.63(m,1H),4.46(dd,J＝13.7,7.4Hz,1H),4.36(dt,J＝9.0,5.9Hz,1H),3.95(s,1H),3.78(d,J＝10.6Hz,1H),2.93(d,J＝71.7Hz,2H),2.76–2.56(m,2H),2.42(s,1H),2.34–2.03(m,2H),1.80(s,4H).
实施例12：(S)-2-((4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-3-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸(化合物14)的制备(按照方案二线路制备)
步骤12a：(S)-2-((4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-3-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯(化合物0204-14)的制备:将2-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)-6-(哌啶-4-基)吡啶盐酸盐(0203-12)(139毫克，0.366毫摩尔，1.5当量)，(S)-2-(氯甲基)-3-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯(0116-1)(72毫克，0.244毫摩尔，1.0当量)和N,N-二异丙基乙胺(126毫克，0.976毫摩尔，4.0当量)的N-甲基吡咯烷酮(5毫升)溶液在60℃下搅拌16小时。将反应混合物冷却至室温后加水，加乙酸乙酯萃取。有机相用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。残留物用硅胶薄层层析制备板纯化(洗脱剂为：乙酸乙酯)得黄色固体(S)-2-((4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-3-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯(70毫克，收率：47.62％)。LCMS(ESI)：m/z＝602(M+H)+.
步骤12b：(S)-2-((4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-3-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸(化合物14)的制备:将(S)-2-((4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-3-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯(0204-14)(70毫克，0.116毫摩尔，1.0当量)和一水合氢氧化锂(10毫克，0.232毫摩尔，2.0当量)的乙腈/水＝5/1(6毫升)混合物在40℃下搅拌过夜。混合物冷却到室温，并减压浓缩。残留物的pH值用1摩尔/升的盐酸调节至6，之后形成固体沉淀。混合物过滤。残留物用水洗。残留物用硅胶薄层层析制备板纯化(洗脱剂为：二氯甲烷/甲醇＝10/1)得到黄色固体(S)-2-((4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-3-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸(30毫克，收率：44.12％)。LCMS(ESI)：m/z＝588(M+H)+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.99(s,1H),8.39–7.93(m,3H),7.61(d,J＝6.7Hz,1H),7.41(s,1H),7.32(d,J＝6.9Hz,1H),7.01(s,1H),6.87(s,1H),6.67(d,J＝7.7Hz,1H),5.61(s,2H),5.29(d,J＝93.9Hz,1H),4.80(d,J＝53.8Hz,2H),4.42(d,J＝50.8Hz,2H),3.89(d,J＝105.4Hz,2H),2.97(s,2H),2.75–2.51(m,3H),2.31(d,J＝53.9Hz,2H),1.77(d,J＝15.7Hz,4H).
实施例13：(S)-2-((4-(6-((2,4-二氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物15)的制备(按照方案二线路制备)
步骤13a：4-(6-((2,4-二氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(化合物0202-15)的制备：在氮气保护和-70℃下，往4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0202-12)(200毫克，0.452毫摩尔，1当量)的10毫升四氢呋喃溶液中加入二异丙基氨基锂(0.45毫升，2摩尔/升四氢呋喃，0.905毫摩尔，2当量)。混合物在-70℃下搅拌1小时。往混合物中加入六氯乙烷(107毫克，0.452毫摩尔，1当量)的四氢呋喃(1毫升)。混合物在-70℃下搅拌1小时。反应用氯化铵淬灭。混合物用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤和硫酸钠干燥。将混合物减压浓缩。残留物用硅胶柱层析(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝100/1-10/1)纯化，得到透明油状物4-(6-((2,4-二氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(180毫克，产率：83.72％)。LCMS(ESI)：m/z＝477(M+H)+.
步骤13b：2-((2,4-二氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)-6-(哌啶-4-基)吡啶4-甲基苯磺酸盐(化合物0203-15)的制备：将4-(6-((2,4-二氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0202-15)(180毫克，0.377毫摩尔，1.0当量)和对甲苯磺酸(195毫克，1.132毫摩尔，3.0当量)的乙酸乙酯(15毫升)溶液在60℃下搅拌过夜。混合物冷却至室温。混合物过滤。残留物用乙酸乙酯洗涤。残留物干燥，得到白色固体2-((2,4-二氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)-6-(哌啶-4-基)吡啶4-甲基苯磺酸盐(253毫克,粗品).LCMS(ESI)：m/z＝377(M+H)+.
步骤13c：(S)-2-((4-(6-((2,4-二氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(化合物0204-15)的制备:2-((2,4-二氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)-6-(哌啶-4-基)吡啶4-甲基苯磺酸盐(0203-15)(206毫克，0.377毫摩尔，1.2当量)，(S)-2-(氯甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0116-3)(92毫克，0.314毫摩尔，1.0当量)和碳酸钾(173毫克，1.256毫摩尔，4.0当量)的乙腈(5毫升)溶液在60℃的下搅拌16小时。将反应混合物冷却至室温后加水，加乙酸乙酯萃取。有机相用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。残留物用硅胶薄层层析制备板纯化(洗脱剂为：乙酸乙酯)，得到白色固体(S)-2-((4-(6-((2,4-二氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(180毫克，收率：90.9％)。LCMS(ESI)：m/z＝635(M+H)+.
步骤13d：(S)-2-((4-(6-((2,4-二氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物15)的制备:将(S)-2-((4-(6-((2,4-二氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0204-15)(64毫克，0.1毫摩尔，1.0当量)和一水合氢氧化锂(13毫克，0.3毫摩尔，3.0当量)的乙腈/水＝5/1(6毫升)混合物在40℃下搅拌过夜。混合物冷却到室温，并减压浓缩。残留物的pH值用1摩尔/升的硫酸调节至6，之后形成固体沉淀。混合物过滤。残留物用水洗。残留物用硅胶薄层层析制备板纯化(洗脱剂为：二氯甲烷/甲醇＝10/1)，得到白色固体(S)-2-((4-(6-((2,4-二氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(55毫克，收率：88.71％)。LCMS(ESI)：m/z＝621(M+H)+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.67(s,1H),8.26(s,1H),7.80(d,J＝8.2Hz,1H),7.63(dd,J＝12.7,8.1Hz,2H),7.44(d,J＝8.0Hz,1H),7.37(d,J＝8.1Hz,1H),7.15(s,1H),6.86(d,J＝7.2Hz,1H),6.68(d,J＝8.1Hz,1H),5.59(s,2H),5.11(d,J＝5.0Hz,1H),4.79(dd,J＝15.2,7.0Hz,1H),4.65(d,J＝14.0Hz,1H),4.46(dd,J＝13.5,7.1Hz,1H),4.41–4.31(m,1H),3.94(d,J＝13.5Hz,1H),3.78(d,J＝13.5Hz,1H),2.99(d,J＝10.4Hz,1H),2.85(d,J＝10.7Hz,1H),2.76–2.66(m,1H),2.58(s,1H),2.45(d,J＝8.9Hz,1H),2.20(dt,J＝21.7,10.4Hz,2H),1.83–1.64(m,4H).
实施例14：(S)-2-((4-(6-((4-氯-2-氟苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物16)的制备(按照方案二线路制备)
步骤14a：4-(6-((4-氯-2-氟苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(化合物0202-16)的制备：在氮气保护和-70℃下，往4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0202-12)(500毫克，1.13毫摩尔，1当量)的10毫升四氢呋喃溶液中加入二异丙基氨基锂(1.13毫升，2摩尔/升四氢呋喃，2.26毫摩尔，2当量)。混合物在-70℃下搅拌1小时。往混合物中加入N-氟代双苯磺酰胺(356毫克，1.13毫摩尔，1当量)的四氢呋喃(1毫升)。混合物在-70℃下搅拌1小时。反应用氯化铵淬灭。混合物用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤和硫酸钠干燥。将混合物减压浓缩。残留物用硅胶柱层析(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝100/1-10/1)纯化，得到透明油状物4-(6-((4-氯-2-氟苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(200毫克，产率：38.38％)。LCMS(ESI)：m/z＝461(M+H)+.
步骤14b：2-((4-氯-2-氟苯并呋喃-7-基)甲氧基)-6-(哌啶-4-基)吡啶4-甲基苯磺酸盐(化合物0203-16)的制备：将4-(6-((4-氯-2-氟苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0202-16)(200毫克，0.43毫摩尔，1.0当量)和对甲苯磺酸(224毫克，1.3毫摩尔，3.0当量)的乙酸乙酯(15毫升)溶液在60℃下搅拌过夜。混合物冷却至室温。混合物过滤。残留物用乙酸乙酯洗涤。残留物干燥，得到白色固体2-((4-氯-2-氟苯并呋喃-7-基)甲氧基)-6-(哌啶-4-基)吡啶4-甲基苯磺酸盐(208毫克,粗品).LCMS(ESI)：m/z＝361(M+H)+.
步骤14c：(S)-2-((4-(6-((4-氯-2-氟苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(化合物0204-16)的制备:2-((4-氯-2-氟苯并呋喃-7-基)甲氧基)-6-(哌啶-4-基)吡啶4-甲基苯磺酸盐(0203-16)(104毫克，0.203毫摩尔，1.2当量)，(S)-2-(氯甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0116-3)(50毫克，0.169毫摩尔，1.0当量)和碳酸钾(93毫克，0.676毫摩尔，4.0当量)的乙腈(5毫升)溶液在60℃的下搅拌16小时。将反应混合物冷却至室温后加水，加乙酸乙酯萃取。有机相用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。残留物用硅胶薄层层析制备板纯化(洗脱剂为：乙酸乙酯)，得到白色固体(S)-2-((4-(6-((4-氯-2-氟苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(76毫克，收率：72.38％)。LCMS(ESI)：m/z＝619(M+H)+.
步骤14d：(S)-2-((4-(6-((4-氯-2-氟苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物16)的制备:(S)-2-((4-(6-((4-氯-2-氟苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0204-16)(76毫克，0.123毫摩尔，1.0当量)和一水合氢氧化锂(15毫克，0.369毫摩尔，3.0当量)的乙腈/水＝5/1(6毫升)混合物在40℃下搅拌过夜。混合物冷却到室温，并减压浓缩。残留物的pH值用1摩尔/升的硫酸调节至6，之后形成固体沉淀。混合物过滤。残留物用水洗。残留物用硅胶薄层层析制备板纯化(洗脱剂为：二氯甲烷/甲醇＝10/1)，得到黄色固体(S)-2-((4-(6-((4-氯-2-氟苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(54毫克，收率：72.97％)。LCMS(ESI)：m/z＝605(M+H)+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.64(s,1H),8.26(d,J＝0.8Hz,1H),7.80(dd,J＝8.4,1.5Hz,1H),7.68–7.57(m,2H),7.42(d,J＝8.2Hz,1H),7.38(d,J＝8.2Hz,1H),6.86(d,J＝7.3Hz,1H),6.68(d,J＝8.2Hz,1H),6.49(d,J＝6.4Hz,1H),5.56(s,2H),5.11(qd,J＝7.2,2.7Hz,1H),4.79(dd,J＝15.2,7.2Hz,1H),4.65(dd,J＝15.2,2.7Hz,1H),4.47(dt,J＝13.7,7.0Hz,1H),4.37(dt,J＝9.0,5.9Hz,1H),4.00–3.89(m,1H),3.78(d,J＝13.5Hz,1H),2.99(d,J＝11.2Hz,1H),2.85(d,J＝11.3Hz,1H),2.74–2.66(m,1H),2.62–2.54(m,1H),2.43(ddd,J＝11.1,8.9,5.6Hz,1H),2.28–2.11(m,2H),1.84–1.60(m,4H).
实施例15：(S)-2-((4-(6-((4-氯-2-甲基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物17)的制备(按照方案二线路制备)
步骤15a：(4-氯-2-甲基苯并呋喃-7-基)甲醇(化合物0201-17)的制备：
Figure BDA0003178251760000431
氮气保护条件下，4-氯-2-羟基苯甲酸甲酯(1.87克，10.0毫摩尔，1.0当量)，3-溴丙炔(1.42克，12毫摩尔，1.2当量)，和碳酸钾(2.1克，15毫摩尔，1.5当量)的N,N-二甲基甲酰胺混合物在50℃下搅拌5小时。反应用水淬灭，并用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩。残留物用N,N-二乙基苯胺(15毫升)溶解。往混合物中加入氟化铯(2.67克，17.63毫摩尔，1.3当量)。混合物在220℃下搅拌3小时。冷却到室温后，反应用水淬灭，残留物的pH值用2摩尔/升的盐酸调节至6，并用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝10/1)得到黄色固体4-氯-2-甲基苯并呋喃-7-羧酸甲酯(1.34克，产率：59.56％)。LCMS(ESI)：m/z＝225(M+H)+.
氮气保护条件下，将上述得到的4-氯-2-甲基苯并呋喃-7-羧酸甲酯(1.34克，5.98毫摩尔，1.0当量)，硼氢化钠(4.55克，119.64毫摩尔，20当量)的甲醇(13毫升)溶液在室温下搅拌3小时。反应用水淬灭，并用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩。残留物用硅胶柱层析(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝10/1)纯化，得到黄色固体(4-氯-2-甲基苯并呋喃-7-基)甲醇(1.1克，收率：93.86％)。LCMS(ESI)：m/z＝196(M+H)+.
步骤15b：4-(6-((4-氯-2-甲基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(化合物0202-17)的制备：氮气保护条件下，4-(6-氯吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0104-1)(137毫克，0.46摩尔，1.0当量)，(4-氯-2-甲基苯并呋喃-7-基)甲醇(0201-17)(100毫克，0.51毫摩尔，1.1当量)、碳酸铯(333毫克，1.02毫摩尔，2.0当量)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(59毫克，0.05毫摩尔，0.1当量)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(47毫克，0.148毫摩尔，0.2当量)的甲苯(10毫升)的混合物在125℃下回流过夜。冷却至室温后，将反应液通过硅藻土过滤，固体用乙酸乙酯洗涤。将滤液减压浓缩。残留物用硅胶柱层析(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝10/1)纯化粗产物，得到黄色油状物4-(6-((4-氯-2-甲基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(145毫克，产率：69.13％)。LCMS(ESI)：m/z＝456(M+H)+.
步骤15c：2-((4-氯-2-甲基苯并呋喃-7-基)甲氧基)-6-(哌啶-4-基)吡啶4-甲基苯磺酸盐(化合物0203-17)的制备：将4-(6-((4-氯-2-甲基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0202-17)(145毫克，0.31毫摩尔，1.0当量)和对甲苯磺酸(159毫克，0.93毫摩尔，3.0当量)的乙酸乙酯(10毫升)溶液在60℃下搅拌过夜。混合物用水洗涤，残留物的pH用2摩尔/升的氢氧化钠溶液调节酯至8，并用乙酸乙酯萃取。有机相用无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到2-((4-氯-2-甲基苯并呋喃-7-基)甲氧基)-6-(哌啶-4-基)吡啶4-甲基苯磺酸盐(92毫克,粗品)，该产品不需要进一步纯化直接用于下一步。LCMS(ESI)：m/z＝357(M+H)+.
步骤15d：(S)-2-((4-(6-((4-氯-2-甲基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(化合物0204-17)的制备:将2-((4-氯-2-甲基苯并呋喃-7-基)甲氧基)-6-(哌啶-4-基)吡啶4-甲基苯磺酸盐(0203-17)(90毫克，0.24毫摩尔，1.2当量)，(S)-2-(氯甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0116-3)(60毫克，0.20毫摩尔，1.0当量)和碳酸钾(110毫克，0.80毫摩尔，4.0当量)的乙腈(5毫升)溶液在60℃的条件下搅拌16小时。在冷却至室温后，混合物用水稀释，并用乙酸乙酯萃取。有机相用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。残留物用硅胶薄层层析制备板纯化(洗脱剂为：乙酸乙酯/石油醚＝2/1)得白色固体(S)-2-((4-(6-((4-氯-2-甲基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(100毫克，收率：81.30％)。LCMS(ESI)：m/z＝615(M+H)+.
步骤15e：(S)-2-((4-(6-((4-氯-2-甲基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物17)的制备:(S)-2-((4-(6-((4-氯-2-甲基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0204-17)(100毫克，0.16毫摩尔，1.0当量)和一水合氢氧化锂(21毫克，0.49毫摩尔，3.0当量)的乙腈/水＝5/1(12毫升)混合物在40℃下搅拌过夜。混合物冷却到室温，并减压浓缩。残留物的pH值用1摩尔/升的盐酸调节至6，之后形成固体沉淀。混合物过滤，残留物用水洗。残留物用厚制备薄层硅胶色谱法纯化(洗脱剂为：二氯甲烷/甲醇＝10/1)，得到黄色固体(S)-2-((4-(6-((4-氯-2-甲基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(56毫克，收率：58.24％)。LCMS(ESI)：m/z＝601(M+H)+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.67(s,1H),8.27(s,1H),7.80(s,1H),7.64(d,J＝7.2Hz,2H),7.33(d,J＝7.8Hz,1H),7.26(d,J＝8.0Hz,1H),6.87(d,J＝7.0Hz,1H),6.67(d,J＝13.6Hz,2H),5.59(s,2H),5.10(s,1H),4.78(s,1H),4.66(d,J＝14.2Hz,1H),4.46(dd,J＝13.7,7.5Hz,1H),4.36(dt,J＝8.9,5.9Hz,1H),3.94(s,1H),3.79(s,1H),2.99(s,1H),2.86(s,1H),2.70(dt,J＝16.1,8.0Hz,1H),2.62(d,J＝18.8Hz,1H),2.40(d,J＝42.1Hz,4H),2.21(d,J＝33.5Hz,2H),1.76(s,4H).
实施例16：(S)-2-((4-(6-(4-氯-2-甲基苯并呋喃-7-甲酰氨基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物20)的制备(按照方案二线路制备)
步骤16a：4-(6-(4-氯-2-甲基苯并呋喃-7-甲酰氨基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(化合物0202-20)的制备：
Figure BDA0003178251760000451
往4-氯-2-甲基苯并呋喃-7-羧酸甲酯(885毫克，3.95毫摩尔，1当量)的10毫升四氢呋喃溶液中加入2N氢氧化钠溶液(5毫升)。混合物在40℃下搅拌16小时。反应冷却至室温。混合物的pH用2N盐酸调节至1，之后形成固体沉淀。混合物过滤。残留物用水洗。残留物干燥得到黄色固体4-氯-2-甲基苯并呋喃-7-羧酸(700毫克，产率：84.03％)。LCMS(ESI)：m/z＝211(M+H)+.
氮气保护条件下，将6-溴吡啶-2-胺(519毫克，3毫摩尔，1.0当量)，4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(1113毫克，3.6毫摩尔，1.2当量)，碳酸钠(636毫克，6毫摩尔，2.0当量)和双三苯基膦二氯化钯(210毫克，0.3毫摩尔，0.1当量)的甲苯/乙醇/水(10/5/5毫升)的混合物在110℃下搅拌16小时。冷却至室温后，将反应液用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗，和硫酸钠干燥。混合物减压浓缩。残留物用硅胶柱层析(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝100/1-2/1)纯化，得到黄色油状物6-氨基-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯(600毫克，产率：72.46％)。LCMS(ESI)：m/z＝276(M+H)+.
将6-氨基-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯(600毫克，2.18毫摩尔，1.0当量)和钯碳(60毫克，Wt％＝10％)的甲醇(15毫升)溶液在室温下搅拌5小时。混合物过滤。残留物用甲醇洗涤。残留物减压浓缩得到白色固体4-(6-氨基吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(553毫克,粗品).LCMS(ESI)：m/z＝278(M+H)+.
在氮气保护和冰浴下，往4-氯-2-甲基苯并呋喃-7-羧酸(100毫克，0.476毫摩尔，1当量)的二氯甲烷/四氢呋喃/N,N-二甲基甲酰胺(10/5/0.01毫升)溶液中滴加入草酰氯(181毫克，1.428毫摩尔，3当量)。混合物在室温下搅拌5小时。混合物减压浓缩。残留物溶解于5毫升的二氯甲烷。往溶液里加入4-(6-氨基吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(131毫克，0.476毫摩尔，1当量)和三乙胺(144毫克，1.428毫摩尔，3当量)。混合物在室温下搅拌3小时。反应用水淬灭。混合物用二氯甲烷萃取。有机相用饱和食盐水洗涤和硫酸钠干燥。将混合物减压浓缩。残留物用硅胶柱层析(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝100/1-2/1)纯化，得到白色固体4-(6-(4-氯-2-甲基苯并呋喃-7-甲酰氨基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(143毫克，产率：64.41％)。LCMS(ESI)：m/z＝470(M+H)+.
步骤16b:4-氯-2-甲基-N-(6-(哌啶-4-基)吡啶-2-基)苯并呋喃-7-甲酰胺4-甲基苯磺酸盐(化合物0203-20)的制备：将4-(6-(4-氯-2-甲基苯并呋喃-7-甲酰氨基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(化合物0202-20)(143毫克，0.305毫摩尔，1.0当量)和对甲苯磺酸(158毫克，0.915毫摩尔，3.0当量)的乙酸乙酯(5毫升)溶液在60℃下搅拌过夜。混合物冷却至室温。混合物过滤。残留物用乙酸乙酯洗涤。残留物干燥，得到白色固体4-氯-2-甲基-N-(6-(哌啶-4-基)吡啶-2-基)苯并呋喃-7-甲酰胺4-甲基苯磺酸盐(200毫克,粗品).LCMS(ESI)：m/z＝370(M+H)+.
步骤16c:(S)-2-((4-(6-(4-氯-2-甲基苯并呋喃-7-甲酰氨基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(化合物0204-20)的制备:4-氯-2-甲基-N-(6-(哌啶-4-基)吡啶-2-基)苯并呋喃-7-甲酰胺4-甲基苯磺酸盐(0203-20)(106毫克，0.203毫摩尔，1.2当量)，(S)-2-(氯甲基)-1-(氧杂环丁-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0116-3)(50毫克，0.169毫摩尔，1.0当量)和碳酸钾(93毫克，0.676毫摩尔，4.0当量)的乙腈(5毫升)溶液在60℃下搅拌16小时。将反应混合物冷却至室温后加水，加乙酸乙酯萃取。有机相用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。残留物用硅胶薄层层析制备板纯化(洗脱剂为：乙酸乙酯)，得到白色固体(S)-2-((4-(6-(4-氯-2-甲基苯并呋喃-7-甲酰氨基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(70毫克，收率：66.03％)。LCMS(ESI)：m/z＝628(M+H)+.
步骤16d:(S)-2-((4-(6-(4-氯-2-甲基苯并呋喃-7-甲酰氨基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物20)的制备:将(S)-2-((4-(6-(4-氯-2-甲基苯并呋喃-7-甲酰氨基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0204-20)(70毫克，0.11毫摩尔，1.0当量)和一水合氢氧化锂(14毫克，0.33毫摩尔，3.0当量)的乙腈/水＝5/1(6毫升)混合物在40℃下搅拌过夜。混合物冷却到室温，并减压浓缩。残留物的pH值用1摩尔/升的硫酸调节至6，之后形成固体沉淀。混合物过滤。残留物用水洗。残留物用硅胶薄层层析制备板纯化(洗脱剂为：二氯甲烷/甲醇＝10/1)，得到白色固体(S)-2-((4-(6-(4-氯-2-甲基苯并呋喃-7-甲酰氨基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(48毫克，收率：70.03％)。LCMS(ESI)：m/z＝614(M+H)+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.57(s,1H),10.33(s,1H),8.26(d,J＝0.8Hz,1H),8.04(d,J＝8.2Hz,1H),7.79(dd,J＝8.7,7.2Hz,2H),7.72(d,J＝8.2Hz,1H),7.64(d,J＝8.4Hz,1H),7.42(d,J＝8.2Hz,1H),7.09(d,J＝7.5Hz,1H),6.79(d,J＝1.0Hz,1H),5.09(ddd,J＝14.4,7.2,2.8Hz,1H),4.82(dd,J＝15.2,7.2Hz,1H),4.67(dd,J＝15.2,2.7Hz,1H),4.49(dd,J＝13.6,7.7Hz,1H),4.37(dt,J＝9.0,5.9Hz,1H),3.95(d,J＝13.5Hz,1H),3.81(d,J＝13.5Hz,1H),3.01(d,J＝11.2Hz,1H),2.89(d,J＝11.2Hz,1H),2.78–2.62(m,2H),2.55(s,3H),2.42(ddd,J＝15.9,11.1,7.0Hz,1H),2.23(dt,J＝29.5,10.7Hz,2H),1.86(t,J＝13.5Hz,2H),1.81–1.67(m,2H).
实施例17：2-((4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(2-甲氧基乙基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物23)的制备(按照方案一和二线路制备)
步骤17a：3-((2-甲氧基乙基)氨基)-4-硝基苯甲酸甲酯(化合物0118-23)的制备:往3-氟-4-硝基苯甲酸甲酯(0107-23)(1.0克，5.02毫摩尔，1.0当量)和N,N-二异丙基乙胺(1.34毫升，7.53毫摩尔，1.5当量)在四氢呋喃(15毫升)的混合物中加入2-甲氧基乙胺(0.45克，6.03毫摩尔，1.2当量)。混合物加热到55℃反应过夜。减压除去溶剂。残余物用水(30毫升)稀释。水层用乙酸乙酯(30毫升×4)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(30毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到黄色固体3-((2-甲氧基乙基)氨基)-4-硝基苯甲酸甲酯(1.17克，产率：91％)。LCMS(ESI)：m/z 255[M+1]+；TLC：Rf0.5(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)。
步骤17b：4-氨基-3-((2-甲氧基乙基)氨基)苯甲酸甲酯(化合物0119-23)的制备:往3-((2-甲氧基乙基)氨基)-4-硝基苯甲酸甲酯(0118-23)(1.17克，4.61毫摩尔，1.0当量)在甲醇(30毫升)的混合物中加入钯碳(0.22g)。混合物在氢气球压力下室温搅拌3.5小时。混合物过滤。滤液在减压下浓缩，得到白色固体4-氨基-3-((2-甲氧基乙基)氨基)苯甲酸甲酯(1.03克，产率：100％)。LCMS(ESI)：m/z 225[M+1]+；TLC：Rf0.3(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)。
步骤17c：2-(氯甲基)-1-(2-甲氧基乙基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(化合物0120-23)的制备:往4-氨基-3-((2-甲氧基乙基)氨基)苯甲酸甲酯(0119-23)(1.03克，4.60毫摩尔，1.0当量)和对甲苯磺酸一水合物(17.5毫克，0.09毫摩尔，0.02当量)在四氢呋喃(20毫升)的混合物中加入2-氯-1,1,1-三甲氧基乙烷(0.78克，5.06毫摩尔，1.1当量)。混合物加热到45℃反应过夜。减压除去溶剂。残余物在硅胶上进行柱色谱分离(石油醚∶乙酸乙酯5∶1)，得到白色固体2-(氯甲基)-1-(2-甲氧基乙基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(1.25克，产率：93％)。LCMS(ESI)：m/z 283[M+1]+；TLC：Rf0.5(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)。
步骤17d：2-((4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(2-甲氧基乙基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(化合物0205-23)的制备:往2-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)-6-(哌啶-4-基)吡啶对甲苯磺酸盐(0203-12)(90毫克，0.18毫摩尔，1.1当量)和2-(氯甲基)-1-(2-甲氧基乙基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0120-23)(45毫克，0.16毫摩尔，1.0当量)在乙腈(6毫升)的混合物中加入碳酸钾(66毫克，0.48毫摩尔，3.0当量)。混合物加热到60℃反应过夜。减压除去溶剂。残余物通过制备薄层色谱(石油醚：乙酸乙酯1：1)纯化，得到白色固体2-((4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(2-甲氧基乙基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(69毫克，收率：74％)。LCMS(ESI)：m/z 589[M+1]+；TLC：Rf0.5(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)。
步骤17e：2-((4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(2-甲氧基乙基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物23)的制备:往2-((4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(2-甲氧基乙基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0205-23)(69毫克，0.12毫摩尔，1.0当量)在四氢呋喃(6毫升)和水(3毫升)的混合物中加入氢氧化锂一水合物(15毫克，0.36毫摩尔，3.0当量)。混合物加热到40℃反应过夜。混合物用水(15毫升)稀释。加入1N稀盐酸溶液调节pH＝5，然后水层用乙酸乙酯(20毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过制备薄层色谱(二氯甲烷∶甲醇＝10∶1)纯化，得到白色固体2-((4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(2-甲氧基乙基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(52毫克，收率：78％)。LCMS(ESI)：m/z 575[M+1]+；TLC：Rf0.5(二氯甲烷：甲醇＝10：1)；熔点：123-126℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.75(s,1H),8.24–8.11(m,2H),7.81(d,J＝8.2Hz,1H),7.62(t,J＝7.8Hz,2H),7.42(d,J＝8.0Hz,1H),7.33(d,J＝8.0Hz,1H),7.02(d,J＝2.1Hz,1H),6.86(d,J＝7.3Hz,1H),6.67(d,J＝8.2Hz,1H),5.61(s,2H),4.60(s,2H),3.84(s,2H),3.75(t,J＝5.0Hz,2H),3.21(s,3H),2.92(d,J＝10.8Hz,2H),2.61(dd,J＝19.2,7.7Hz,1H),2.21(t,J＝10.7Hz,2H),1.75(dd,J＝33.6,10.7Hz,4H).
实施例18：(S)-2-((4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-((四氢呋喃-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物24)的制备(按照方案一和二线路制备)
步骤18a：(S)-4-硝基-3-((四氢呋喃-2-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯(化合物0118-24)的制备：氮气保护下，将3-氟-4-硝基苯甲酸甲酯(0107-23)(894.8毫克，4.4937毫摩尔，1.0当量)，(S)-(四氢呋喃-2-基)甲胺(500毫克，4.9431毫摩尔，1.1当量)和碳酸钾(1242毫克，8.987毫摩尔，2.0当量)的N,N-二甲基甲酰胺混合物(10毫升)溶液在常温下搅拌3小时。反应用水淬灭，加入乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，并用无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩，残留物用硅胶柱层析(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝5/1)纯化，得到(S)-4-硝基-3-((四氢呋喃-2-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯(1120毫克，收率：88.96％)为黄色固体。LCMS(ESI)：m/z＝281(M+H)+.
步骤18b：(S)-4-氨基-3-(((四氢呋喃-2-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯(化合物0119-24)的制备：氢气下，(S)-4-硝基-3-((四氢呋喃-2-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯(0118-24)(1120毫克，3.996毫摩尔，1.0当量)和钯/碳(112毫克，10％质量比)的四氢呋喃混合物(13毫升)在室温下搅拌过夜。将反应液过滤，滤液减压浓缩得到黄色油状物(S)-4-氨基-3-(((四氢呋喃-2-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯(1090毫克，产率109％)。该产品不需要进一步纯化直接用于下一步。
步骤18c：((S)-2-(氯甲基)-1-((四氢呋喃-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(化合物0120-24)的制备：在氮气下，(S)-4-氨基-3-(((四氢呋喃-2-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯(0119-24)(1090毫克，4.35毫摩尔，1.0当量)，2-氯-1,1,1-三甲氧基乙烷(807毫克，5.55毫摩尔，1.2单量)和一水合对甲苯磺酸(89.889毫克，0.522毫摩尔，0.12单量)的四氢呋喃(10毫升)溶液加热至45℃并搅拌过夜。冷却至室温后，反应用水淬灭，用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，并用无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩，得到(S)-2-(氯甲基)-1-((四氢呋喃-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(609.5毫克，收率：45.44％)为黄色固体。LCMS(ESI)：m/z＝309(M+H)+.
步骤18d：(S)-2-((4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-((四氢呋喃-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯的制备(化合物0205-24)的制备：将2-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)-6-(哌啶-4-基)吡啶4-甲基苯磺酸盐(化合物0203-12)(96.82毫克，0.1948毫摩尔，1.2当量)和碳酸钾(89.5896毫克，0.6492毫摩尔，4.0当量)在乙腈(5毫升)中的混合物在60℃下搅拌至pH 7～8，然后将(S)-2-(氯甲基)-1-((四氢呋喃-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0120-24)(50毫克，0.1623毫摩尔，1.0当量)加入到混合物中搅拌过夜。冷却至室温后，将反应液加水淬灭，用乙酸乙酯萃取。有机相用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。残留物用硅胶薄层层析制备板纯化(洗脱剂：乙酸乙酯)得黄色固体化合物(S)-2-((4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-((四氢呋喃-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(79.8毫克，产率79.94)。LCMS(ESI)：m/z＝616(M+H)+.
步骤18e：(S)-2-((4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-((四氢呋喃-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物24)的制备：(S)-2-((4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-((四氢呋喃-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0205-24)(79.8毫克，0.1298毫摩尔，1.0当量)和一水合氢氧化锂(10.98毫克，0.1298毫摩尔，10单量)的乙腈/水＝5/1(6毫升)混合物在40℃搅拌过夜。然后将混合物冷却至室温，通过加入1.0M H2SO4将酸碱℃调节至约6，之后形成固体沉淀。混合物过滤。残留物用水洗。混合物用甲醇打浆得到黄色固体(S)-2-(4-(6-(4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-((四氢呋喃-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(49.8毫克，产率63.86％).LCMS(ESI)：m/z＝602(M+H)+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.72(s,1H),8.21(s,1H),8.14(d,J＝2.2Hz,1H),7.81(d,J＝8.4Hz,1H),7.62(dd,J＝14.0,6.4Hz,2H),7.42(d,J＝8.0Hz,1H),7.33(d,J＝8.0Hz,1H),7.02(d,J＝2.2Hz,1H),6.86(d,J＝7.3Hz,1H),6.67(d,J＝8.2Hz,1H),5.61(s,2H),4.55(d,J＝13.6Hz,1H),4.44(dd,J＝14.6,8.1Hz,1H),4.32–4.23(m,1H),3.99(d,J＝13.6Hz,1H),3.77(dt,J＝22.8,10.4Hz,2H),3.60(dd,J＝14.0,7.3Hz,1H),3.01(d,J＝11.2Hz,1H),2.85(d,J＝10.8Hz,1H),2.61(td,J＝11.2,5.6Hz,1H),2.27(t,J＝10.7Hz,1H),2.17(t,J＝10.6Hz,1H),2.11–2.01(m,1H),1.76(dd,J＝15.5,8.4Hz,5H),1.71–1.61(m,2H).
实施例19：2-((4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-((1-乙基-1H-咪唑-5-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物25)的制备(按照方案一和二线路制备)
步骤19a：4-氨基-3-(((1-乙基-1H-咪唑-5-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯(化合物0119-25)的制备：
Figure BDA0003178251760000501
1-乙基-1H-咪唑-5-羧酸(500毫克，3.6毫摩尔，1.0当量)的氯化亚砜(5毫升)溶液回流两个小时。冷却到室温后，真空下旋出溶剂，残留物溶于(6毫升)四氢呋喃，0℃下，滴加0.4摩尔每升的氨二氧六环溶液(1毫升)。滴加完后，混合物搅拌30分钟。加入碳酸钾(1克)，混合物搅拌30分钟。混合物过滤，滤液真空浓缩，得到白色固体1-乙基-1H-咪唑-5-甲酰胺(500毫克，收率：100％)。LCMS(ESI)：m/z＝140(M-H)+.
往1-乙基-1H-咪唑-5-甲酰胺(500毫克，3.6毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(10毫升)溶液加入10摩尔每升的硼烷二甲硫醚溶液(0.72毫升，7.2毫摩尔，2.0当量)。混合物室温搅拌3小时。加入甲醇(2毫升)，混合物搅拌30分钟。混合物真空浓缩，加入5摩尔每升的盐酸甲醇(5毫升)，混合物搅拌10分钟。混合物真空浓缩得到白色固体(1-乙基-1H-咪唑-5-)甲胺盐酸盐(550毫克，收率：94.8％)。LCMS(ESI)：m/z＝126(M+H)+.
将3-氟-4-硝基苯甲酸甲酯(367毫克，1.85毫摩尔，1.0当量)，碳酸钾(511克，3.70毫摩尔，2.0当量)和(1-乙基-1H-咪唑-5-)甲胺盐酸盐(300毫克，1.85毫摩尔，1.0当量)的N-甲基吡咯烷酮(10毫升)混合物室温下搅拌过夜。加入乙酸乙酯和水，混合物分液，有机层用饱和食盐水洗、浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂为：二氯甲烷/甲醇＝100/1到30/1)得到黄色固体3-(((1-乙基-1H-咪唑-5-基)甲基)氨基)-4-硝基苯甲酸甲酯(340毫克，收率：60.5％)。LCMS(ESI)：m/z＝305(M+H)+.
氢气条件下，将3-(((1-乙基-1H-咪唑-5-基)甲基)氨基)-4-硝基苯甲酸甲酯(340毫克，1.1毫摩尔，1.0当量)和Pd/C(34毫克，10％质量比)的甲醇(6毫升)混合物室温下搅拌过夜。混合物过滤，滤液真空浓缩，得到白色固体4-氨基-3-(((1-乙基-1H-咪唑-5-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯(300毫克，收率：98.0％)。LCMS(ESI)：m/z＝275(M+H)+.
步骤19b：2-((4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-((1-乙基-1H-咪唑-5-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(化合物0205-25)的制备：
2-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)-6-(哌啶-4-基)吡啶4-甲基苯磺酸盐(0203-12)(231毫克，0.45毫摩尔，1.5当量)，2-溴乙酸乙酯(50毫克，0.30毫摩尔，1.0当量)和碳酸钾(165毫克，1.20毫摩尔，4.0当量)在N,N-二甲基甲酰胺(10毫升)溶液中60℃下搅拌16小时。将反应混合物冷却至室温后加水，加乙酸乙酯萃取。有机相用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱层析(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝20/1-1/1)纯化得白色固体2-(4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)乙酸乙酯(120毫克，收率：93.24％)。LCMS(ESI)：m/z＝429(M+H)+.
在2-(4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)乙酸乙酯(120毫克，0.28毫摩尔，1.0当量)的甲醇/四氢呋喃＝2/1(9毫升)溶液中加入氢氧化钠的水溶液(2摩尔/升，5毫升)。混合物在常温下搅拌3小时。混合物的pH值用1摩尔/升的稀盐酸调节至7，之后形成固体沉淀。混合物用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，并用无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩得到粗产品2-(4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)乙酸(120毫克，粗品)。该产品不需要进一步纯化直接用于下一步。
在2-(4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)乙酸(120毫克，0.30毫摩尔，1.0当量)的N,N-二甲基甲酰胺(10毫升)溶液中加入4-氨基-3-(((1-乙基-1H-咪唑-5-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯(0119-25)(73毫克，0.27毫摩尔，0.9当量)和N,N-二异丙基乙胺(109毫克，0.84毫摩尔，2.8当量)。2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(136.8毫克，0.36毫摩尔，1.2当量)最后才加入到反应中。混合物在室温下搅拌过夜。反应用水淬灭，用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，并用无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩，残留物用硅胶薄层层析制备板纯化(洗脱剂为：二氯甲烷/甲醇＝15/1)得到黄色油状物4-(2-(4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)乙酰氨基)-3-((((1-乙基-1H-咪唑)-5-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯(50毫克，产率：28.19％)。LCMS(ESI)：m/z＝657(M+H)+.
4-(2-(4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)乙酰氨基)-3-((((1-乙基-1H-咪唑)-5-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯在醋酸(10毫升)溶液中55℃下搅拌16小时。冷却至室温后，溶剂减压旋干。残留物用水稀释，并用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，并用无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩，残留物用硅胶薄层层析制备板纯化(洗脱剂为：二氯甲烷/甲醇＝10/1)得黄色固体甲基2-((4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-((1-乙基-1H-咪唑-5-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(34毫克，收率：69.96％)。LCMS(ESI)：m/z＝639(M+H)+.
步骤19c：2-((4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-((1-乙基-1H-咪唑-5-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物25)的制备:甲基2-((4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-((1-乙基-1H-咪唑-5-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0205-25)(34毫克，0.053毫摩尔，1.0当量)和一水合氢氧化锂(6.7毫克，0.16毫摩尔，3当量)的乙腈/水＝5/1(6毫升)混合物在40℃下搅拌过夜。混合物冷却到室温，并减压浓缩。残留物的pH值用1摩尔/升的稀硫酸调节至6，之后形成固体沉淀。混合物过滤。残留物用硅胶薄层层析制备板纯化(洗脱剂为：二氯甲烷/甲醇＝10/1)得黄色固体2-((4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-((1-乙基-1H-咪唑-5-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(18.3毫克，收率：55.25％)。LCMS(ESI)：m/z＝625(M+H)+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.69(s,1H),8.15(d,J＝1.9Hz,1H),8.06(s,1H),7.81(d,J＝8.3Hz,1H),7.76–7.55(m,3H),7.42(d,J＝8.0Hz,1H),7.34(d,J＝7.9Hz,1H),7.03(d,J＝1.9Hz,1H),6.81(d,J＝7.2Hz,1H),6.67(t,J＝7.1Hz,1H),6.46(s,1H),5.73(s,2H),5.61(s,2H),3.98(q,J＝7.2Hz,2H),3.81(s,2H),2.87(d,J＝10.8Hz,2H),2.53(d,J＝11.4Hz,1H),2.15(t,J＝11.1Hz,2H),1.72(d,J＝11.8Hz,2H),1.60–1.42(m,2H),1.14(t,J＝7.2Hz,3H).
实施例20：(S)-2-((4-(6-((4-氟苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物28)的制备(按照方案二线路制备)
步骤20a：(4-氟苯并呋喃-7-基)甲醇(化合物0201-28)的制备：
Figure BDA0003178251760000521
氮气保护条件下，将5-氟-2-甲基苯酚(3.0克，23.8毫摩尔，1.0当量)，2-溴-1,1-二乙氧基乙烷(5.63克，28.5毫摩尔，1.2当量)，碳酸钾(4.92克，35.7毫摩尔，1.5当量)和碘化钾(0.3克，10％质量比)的N,N-二甲基甲酰胺混合物在120℃下搅拌过夜。冷却到室温后，反应用水淬灭，加入乙酸乙酯萃取。有机层用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产品2-(2,2-二乙氧基乙氧基)-4-氟-1-甲基苯(5.3克，产率：92.0％)。该产品不需要进一步纯化直接用于下一步。
氮气保护条件下，将上述得到的2-(2,2-二乙氧基乙氧基)-4-氟-1-甲基苯(1.0克，4.13毫摩尔，1.0当量)，和多聚磷酸(3.5克，10.3毫摩尔，2.5当量)的1,2-二氯乙烷(20毫升)的混合物回流过夜。冷却到室温后，反应用水(40毫升)淬灭，并用乙酸乙酯(50毫升)萃取。有机层用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂为：石油醚)得到黄色油状4-氟-7-甲基苯并呋喃(300毫克，产率：49.0％)。LCMS(ESI)：m/z＝151(M+H)+.
氮气保护条件下，将上述得到的4-氟-7-甲基苯并呋喃(300毫克，2.00毫摩尔，1.0当量)、N-溴代琥珀酰亚胺(415毫克，2.40毫摩尔，1.2当量)和偶氮二异丁腈(66毫克，0.4毫摩尔，0.2当量)的1,2-二氯乙烷(10毫升)混合物在72℃搅拌过夜。冷却至室温后，减压除去溶剂。残留物用水(20毫升)稀释，并用石油醚/乙酸乙酯＝2/1(30毫升)萃取。有机层用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。用柱色谱法(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝10/1)纯化粗产物，得到白色固体7-(溴甲基)-4-氟苯并呋喃(400毫克，收率：87.3％)。LCMS(ESI)：m/z＝229(M+H)+.
将上述得到的7-(溴甲基)-4-氟苯并呋喃(400毫克，1.73毫摩尔，1.0当量)和醋酸钾(1.67克，17.3毫摩尔，10.0当量)的N,N-二甲基甲酰胺(15毫升)的混合物在室温下搅拌3小时。反应用水(20毫升)淬灭，加入乙酸乙酯(30毫升)萃取。有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗产品乙酸(4-氟苯并呋喃-7-基)甲基酯(500毫克粗品)。该产品不需要进一步纯化直接用于下一步。
往上述得到的乙酸(4-氟苯并呋喃-7-基)甲基酯(500毫克，2.42毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(10毫升)溶液中加入的甲醇钠的甲醇溶液(5.4摩尔/升，0.7毫升，3.64毫摩尔，1.5当量)。混合物在常温下搅拌1小时。反应用1摩尔/升的盐酸调节pH约至6，然后形成固体沉淀物。浆液用水(15毫升)稀释，并用乙酸乙酯(20毫升)萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。残留物用柱色谱法(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝4/1)纯化，得到黄色固体(4-氟苯并呋喃-7-基)甲醇(195毫克，收率：67.9％)。LCMS(ESI)：m/z＝167(M+H)+.
步骤20b：4-(6-((4-氟苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(化合物0202-28)的制备：氮气保护条件下，将4-(6-氯吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0104-1)(195毫克，0.66毫摩尔，1.0当量)，(4-氟苯并呋喃-7-基)甲醇(0201-28)(132毫克，0.79毫摩尔，1.2当量)、碳酸铯(430毫克，1.32毫摩尔，2.0当量)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(61毫克，0.132毫摩尔，0.2当量)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(55毫克，0.06毫摩尔，0.1当量)的甲苯(10毫升)的混合物在120℃下回流过夜。冷却至室温后，将反应液通过硅藻土过滤，固体用乙酸乙酯(15毫升)洗涤。将滤液用水(20毫升)稀释，并用乙酸乙酯(20毫升)萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。用柱色谱法(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝10/1)纯化粗产物，得到白色固体4-(6-((4-氟苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(230毫克，产率：82.1％)。LCMS(ESI)：m/z＝427(M+H)+.
步骤20c：2-((4-氟苯并呋喃-7-基)甲氧基)-6-(哌啶-4-基)吡啶盐酸盐(化合物0203-28)的制备：将4-(6-((4-氟苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0202-28)(110毫克，0.258毫摩尔，1.0当量)加入盐酸二氧六环(15毫升)溶液在室温下搅拌30分钟。将反应溶液减压浓缩得到白色固体2-((4-氟苯并呋喃-7-基)甲氧基)-6-(哌啶-4-基)吡啶盐酸盐(84毫克粗品).LCMS(ESI)：m/z＝327(M+H)+.
步骤20d：(S)-2-((4-(6-((4-氟苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(化合物0204-28)的制备:将2-((4-氟苯并呋喃-7-基)甲氧基)-6-(哌啶-4-基)吡啶盐酸盐(0203-28)(84毫克，0.257毫摩尔，1.2当量)、(S)-2-(氯甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(化合物0116-3)(60毫克，0.21毫摩尔，1.0当量)和N,N-二异丙基乙胺(0.5毫升)的N-甲基吡咯烷酮(5毫升)的混合物在60℃下搅拌4小时。将反应混合物冷却至室温后加水，加乙酸乙酯萃取。有机相用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。残留物用硅胶薄层层析制备板纯化(洗脱剂为：乙酸乙酯)得白色固体(S)-2-((4-(6-((4-氟苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(99毫克，收率：80.4％)。LCMS(ESI)：m/z＝585(M+H)+.
步骤20e：(S)-2-((4-(6-((4-氟苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物28)的制备:将(S)-2-((4-(6-((4-氟苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0204-28)(99毫克，0.184毫摩尔，1.0当量)和一水合氢氧化锂(24毫克，0.553毫摩尔，3.0当量)的乙腈/水＝5/1(6毫升)混合物在40℃下搅拌过夜。混合物冷却到室温后，用1摩尔/升的盐酸调节pH约至6，然后形成固体沉淀物。浆液用水(12毫升)稀释，搅拌4小时，然后通过过滤收集固体。固体用水洗涤，然后在真空下干燥。将固体溶解在二氯甲烷/甲醇＝1/2(5毫升)中，然后过滤，将滤液用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。残留物真空干燥得到得到白色固体(S)-2-((4-(6-((4-氟苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(42毫克，收率：40.0％)。LCMS(ESI)：m/z＝571(M+H)+.熔点：131～143℃；1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.71(s,1H),8.27(s,1H),8.08(s,1H),7.80(d,J＝8.3Hz,1H),7.70–7.56(m,2H),7.44(dd,J＝7.8,5.5Hz,1H),7.08(dd,J＝8.9,5.5Hz,2H),6.86(d,J＝7.2Hz,1H),6.66(d,J＝8.1Hz,1H),5.60(s,2H),5.11(d,J＝5.2Hz,1H),4.79(dd,J＝15.1,7.1Hz,1H),4.66(d,J＝13.7Hz,1H),4.46(dd,J＝13.6,7.2Hz,1H),4.37(dd,J＝14.3,5.8Hz,1H),3.95(d,J＝13.5Hz,1H),3.78(d,J＝13.5Hz,1H),3.00(d,J＝10.5Hz,1H),2.86(d,J＝10.7Hz,1H),2.70(dt,J＝16.0,7.8Hz,1H),2.61(t,J＝11.5Hz,1H),2.44(t,J＝13.0Hz,1H),2.22(dt,J＝21.6,10.6Hz,2H),1.86–1.65(m,4H).
实施例21：(S)-2-((4-(6-((4-甲基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物30)的制备(按照方案二线路制备)
步骤21a：(4-甲基苯并呋喃-7-基)甲醇(化合物0201-30)的制备：
Figure BDA0003178251760000551
将2-羟基-4-甲基苯甲酸甲酯(831毫克，5.0毫摩尔，1.0当量)，2-溴-1,1-二乙氧基乙烷(1.48克，7.5毫摩尔，1.5当量)和碳酸钾(1.73克，12.5毫摩尔，2.5当量)的N,N-二甲基甲酰胺混合物置于120℃下搅拌过夜。冷却到室温后，反应用水淬灭，并用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩，得到黄色油状物2-(2,2-二乙氧基乙氧基)-4-甲基苯甲酸甲酯(4克，粗品)，该产品不需要进一步纯化直接用于下一步。
将上述得到的2-(2,2-二乙氧基乙氧基)-4-甲基苯甲酸甲酯(1.72克，5.0毫摩尔，1.0当量)和多聚磷酸(300毫克，0.88毫摩尔，0.18当量)的甲苯混合物回流过夜。冷却到室温后，反应用水淬灭，并用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝50/1)得到无色油状物4-甲基苯并呋喃-7-羧酸甲酯(496毫克，收率：52.2％)。
氮气保护下，将上述得到的4-甲基苯并呋喃-7-羧酸甲酯(430毫克，2.26毫摩尔，1.0当量)溶解于无水四氢呋喃中.混合物冷却至0℃。加入氢化铝锂(129毫克，3.39毫摩尔，1.5当量)，混合物搅拌1.5小时。在0℃下依次加入0.13毫升水，0.13毫升15％氢氧化钠水溶液和0.39毫升水。混合物搅拌15分钟。加入1.6克无水硫酸钠，然后混合物在室温下搅拌0.5小时。混合物经减压过滤。滤液减压浓缩得到黄色固体(4-甲基苯并呋喃-7-基)甲醇(391毫克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z＝145(M+H-H2O)+.
步骤21b：(S)-2-((4-(6-氯吡啶-2-基)哌啶1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(化合物0204-20)的制备：向4-(6-氯吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0104-1)(200毫克，0.67毫摩尔，1.0当量)在4毫升二氧六环的混合物中加入1.5毫升4M氯化氢的二氧六环溶液。混合物在室温下搅拌过夜。混合物减压浓缩至干。残留物加入到5毫升N-甲基吡咯烷酮中，再加入N,N-二异丙基乙胺(432毫克，3.35毫摩尔，5.0当量)。混合物在室温下搅拌5分钟。加入(S)-2-(氯甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(化合物0116-3)(180毫克，0.61毫摩尔，0.9当量)，然后混合物在60℃下搅拌过夜。混合物用乙酸乙酯稀释，用水和饱和食盐水洗。有机相减压浓缩，残留物经硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝5/1到1/1)得到黄色固体(S)-2-((4-(6-氯吡啶-2-基)哌啶1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(245毫克，收率：80.3％)。LCMS(ESI)：m/z＝455(M+H)+.氮气保护下，将上述得到的(S)-2-((4-(6-氯吡啶-2-基)哌啶1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(120毫克，0.264毫摩尔，1.0当量)、(4-甲基苯并呋喃-7-基)甲醇(0201-30)(52毫克，0.317毫摩尔，1.2当量)、碳酸铯(215毫克，0.66毫摩尔，2.5当量)，2-双环已基膦-2',6'-二异丙氧基联苯(12毫克，0.026毫摩尔，0.1当量)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(60毫克，0.013毫摩尔，0.05当量)的甲苯(20毫升)的混合物在125℃下回流过夜。冷却至室温后，将反应液通过硅藻土过滤，固体用乙酸乙酯洗涤。将滤液减压浓缩。残留物用制备薄层色谱纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝33/1)得到黄色固体(S)-2-((4-(6-((4-甲基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(68毫克，收率：44.4％)。LCMS(ESI)：m/z＝581(M+H)+.
步骤21c：(S)-2-((4-(6-((4-甲基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物30)的制备:(S)-2-((4-(6-((4-甲基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0204-30)(68毫克，0.12毫摩尔，1.0当量)和一水合氢氧化锂(10毫克，0.23毫摩尔，2.0当量)在5毫升乙腈和1毫升水的混合溶剂中的混合物在40℃下搅拌过夜。混合物冷却到室温，并减压浓缩。残留物的pH值用稀硫酸调节至6，之后形成固体沉淀。混合物过滤。残留物用水洗。混合物用制备薄层色谱纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝15/1)得到黄色固体(S)-2-((4-(6-((4-甲基苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(45毫克，收率：67.1％)。LCMS(ESI)：m/z＝567(M+H)+,熔点：105～107℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.70(s,1H),8.28(s,1H),7.98(d,J＝2.2Hz,1H),7.81(d,J＝8.1Hz,1H),7.73–7.56(m,2H),7.31(d,J＝7.4Hz,1H),7.03(t,J＝4.5Hz,2H),6.86(d,J＝7.2Hz,1H),6.65(d,J＝8.1Hz,1H),5.59(s,2H),5.11(d,J＝5.2Hz,1H),4.79(dd,J＝15.3,7.2Hz,1H),4.66(dd,J＝15.2,2.6Hz,1H),4.46(dd,J＝13.7,7.6Hz,1H),4.36(dt,J＝9.0,5.9Hz,1H),3.96(s,1H),3.79(s,1H),3.03(s,1H),2.87(s,1H),2.76–2.56(m,2H),2.45(d,J＝16.4Hz,4H),2.20(dd,J＝29.0,21.6Hz,2H),1.79(d,J＝30.1Hz,4H).
实施例22：(S)-2-((4-(6-((2-甲基-4-(三氟甲基)苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物31)的制备(按照方案二线路制备)
步骤22a：(2-甲基-4-(三氟甲基)苯并呋喃-7-基)甲醇(化合物0201-31)的制备：
Figure BDA0003178251760000571
将2-溴-5-(三氟甲基)苯酚(964毫克，4.0毫摩尔，1.0当量)，3-溴丙炔(619毫克，5.2毫摩尔，1.3当量)和碳酸钾(884毫克，6.4毫摩尔，1.6当量)的N,N-二甲基甲酰胺混合物在50℃下搅拌3小时。冷却到室温后，反应用水淬灭，并用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩，得到1-溴-2-(丙-2-炔-1-基氧基)-4-(三氟甲基)苯(920毫克，收率：82.1％)，该产品不需要进一步纯化直接用于下一步。
在氮气保护下，将上述得到的1-溴-2-(丙-2-炔-1-基氧基)-4-(三氟甲基)苯(920毫克，3.3毫摩尔，1.0当量)和氟化铯(752毫克，4.95毫摩尔，14.5当量)的N,N-二乙基苯胺混合物置于220℃下搅拌5小时。冷却到室温后，混合物加入浓盐酸进行酸化，加入乙酸乙酯和石油醚的混合物溶剂萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩，残留物用硅胶柱层析(洗脱剂：石油醚)纯化，得到7-溴-2-甲基-4-(三氟甲基)苯并呋喃(650毫克，收率：70.6％)。
将上述得到的7-溴-2-甲基-4-(三氟甲基)苯并呋喃(580毫克，2.08毫摩尔，1.0当量)、1,3-二(二苯基膦)丙烷(172毫克，0.42毫摩尔，0.2当量)，醋酸钯(95毫克，0.42毫摩尔，0.2当量)和三乙胺(2.1克，20.8毫摩尔，10.0当量)在25毫升甲醇和5毫升N,N-二甲基甲酰胺混合溶剂中的混合物加入到加压反应釜。反应釜中充入0.3兆帕的一氧化碳，在80℃下搅拌过夜。冷却到室温后，反应用水淬灭，并用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝50/1到20/1)得到黄色固体2-甲基-4-(三氟甲基)苯并呋喃-7-羧酸甲酯(521毫克，收率：97.1％)。
氮气保护下，将上述得到的2-甲基-4-(三氟甲基)苯并呋喃-7-羧酸甲酯(521毫克，2.0摩尔，1.0当量)溶解于无水四氢呋喃中.混合物冷却至0℃。加入氢化铝锂(116毫克，3.0毫摩尔，1.5当量)，混合物搅拌1.5小时。在0℃下依次加入0.12毫升水，0.12毫升15％氢氧化钠水溶液和0.36毫升水。混合物搅拌15分钟。加入1.5克无水硫酸钠，然后混合物在室温下搅拌0.5小时。混合物经减压过滤。滤液减压浓缩得到黄色油状物(2-甲基-4-(三氟甲基)苯并呋喃-7-基)甲醇(507毫克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z＝175(M+H-H2O)+.
步骤22b：4-(6-((2-甲基-4-(三氟甲基)苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(化合物0202-31)的制备：氮气保护下，将4-(6-氯吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0104-1)(150毫克，0.51毫摩尔，1.0当量)、(2-甲基-4-(三氟甲基)苯并呋喃-7-基)甲醇(0201-31)(140毫克，0.61毫摩尔，1.2当量)、碳酸铯(416毫克，1.28毫摩尔，2.5当量)，2-双环已基膦-2',6'-二异丙氧基联苯(36毫克，0.077毫摩尔，0.15当量)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(42毫克，0.046毫摩尔，0.09当量)的甲苯(50毫升)的混合物在125℃下回流过夜。冷却至室温后，将反应液通过硅藻土过滤，固体用乙酸乙酯洗涤。将滤液减压浓缩。残留物用制备硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝20/1到6/1)，得到黄色固体4-(6-((2-甲基-4-(三氟甲基)苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(220毫克，收率：88.0％)。LCMS(ESI)：m/z＝491(M+H)+.
步骤22c：2-((2-甲基-4-(三氟甲基)苯并呋喃-7-基)甲氧基)-6-(哌啶-4-基)吡啶盐酸盐(化合物0203-31)的制备：向4-(6-((2-甲基-4-(三氟甲基)苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0202-31)(220毫克，0.45毫摩尔，1.0当量)在5毫升二氧六环的混合物中加入1毫升4M氯化氢的二氧六环溶液。混合物在室温下搅拌过夜。混合物减压浓缩至干，得到白色固体2-((2-甲基-4-(三氟甲基)苯并呋喃-7-基)甲氧基)-6-(哌啶-4-基)吡啶盐酸盐(250毫克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z＝391(M+H)+.
步骤22d：(S)-2-((4-(6-((2-甲基-4-(三氟甲基)苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(化合物0204-31)的制备：将2-((2-甲基-4-(三氟甲基)苯并呋喃-7-基)甲氧基)-6-(哌啶-4-基)吡啶盐酸盐(0203-21)(250毫克，0.45毫摩尔，2.6当量)加入到10毫升N-甲基吡咯烷酮中，再加入N,N-二异丙基乙胺(171毫克，1.25毫摩尔，7.3当量)。混合物在室温下搅拌5分钟。加入(S)-2-(氯甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0116-3)(50毫克，0.17毫摩尔，1.0当量)，然后混合物在60℃下搅拌过夜。混合物用乙酸乙酯稀释，用水和饱和食盐水洗。有机相减压浓缩，残留物经制备薄层色谱纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝2/1)，得到黄色固体(S)-2-((4-(6-((2-甲基-4-(三氟甲基)苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(74毫克，收率：67.2％)。m/z＝649(M+H)+.
步骤22e：(S)-2-((4-(6-((2-甲基-4-(三氟甲基)苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物31)的制备:(S)-2-((4-(6-((2-甲基-4-(三氟甲基)苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0204-31)(74毫克，0.11毫摩尔，1.0当量)和一水合氢氧化锂(12毫克，0.8毫摩尔，2.5当量)在5毫升乙腈和1毫升水的混合溶剂中的混合物在40℃下搅拌过夜。混合物冷却到室温，并减压浓缩。加入稀硫酸调节残留物的pH值至6，加入乙酸乙酯萃取，用饱和食盐水洗。有机相经过无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用制备薄层色谱纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1)得到黄色固体(S)-2-((4-(6-((2-甲基-4-(三氟甲基)苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(55毫克，收率：75.3％)。LCMS(ESI)：m/z＝635(M+H)+,熔点：126～128℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.72(s,1H),8.27(s,1H),7.81(dd,J＝8.4,1.4Hz,1H),7.64(t,J＝7.8Hz,2H),7.54(d,J＝7.9Hz,1H),7.47(d,J＝7.8Hz,1H),6.87(d,J＝7.3Hz,1H),6.78–6.67(m,2H),5.68(s,2H),5.10(qd,J＝7.2,2.8Hz,1H),4.78(dd,J＝15.2,7.2Hz,1H),4.64(dd,J＝15.2,2.6Hz,1H),4.45(dt,J＝13.9,7.0Hz,1H),4.35(dt,J＝9.0,5.9Hz,1H),3.95(d,J＝13.6Hz,1H),3.78(d,J＝13.6Hz,1H),2.98(d,J＝10.6Hz,1H),2.85(d,J＝10.9Hz,1H),2.73–2.64(m,1H),2.62–2.54(m,1H),2.49–2.39(m,4H),2.21(dt,J＝21.7,10.6Hz,2H),1.81–1.62(m,4H).
实施例23：(S)-2-((4-(6-((5-氟苯并呋喃-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物32)的制备(按照方案四线路制备)
步骤23a：(5-氟苯并呋喃-6-基)甲醇(化合物0401-32)的制备：
Figure BDA0003178251760000591
氮气保护下，向2-氟-5-羟基苯甲酸甲酯(2.0克，11.76毫摩尔，1.0当量)的乙酸(20毫升)的溶液中加入N-碘代丁二酰亚胺(2.9克，12.94毫摩尔，1.1当量)，混合物在室温下搅拌过夜。将反应液倒入水中，并搅拌30分钟。将混合物过滤，然后滤饼用水洗涤并减压干燥得到白色固体2-氟-5-羟基-4-碘苯甲酸甲酯(2.7克，收率：77.59％)。LCMS(ESI)：m/z＝297(M+H)+.
氮气保护下，向上述得到的2-氟-5-羟基-4-碘苯甲酸甲酯(2.7克，9.12毫摩尔，1.0当量)，三乙胺(2.76克，27.36毫摩尔，3.0当量)，碘化亚铜(26毫克，0.137毫摩尔，0.02当量)和二(三苯基膦)二氯化钯(192毫克，0.274毫摩尔，0.03当量)的四氢呋喃(20毫升)的溶液中加入三甲基乙炔基硅烷(1.79克，18.24毫摩尔，2.0当量)，混合物在70℃下搅拌过夜。冷却到室温后，减压除去溶剂，加入甲醇(20毫升)，二异丙基乙胺(3.5克，27.36毫摩尔，3.0当量)和碘化亚铜(1.7克，9.12毫摩尔，1.0当量)。将混合物回流2小时。冷却到室温后，将混合物倒入水中。加入PE/EA＝2/1的溶液进行萃取，将有机层减压浓缩。加入四氢呋喃(20毫升)和四丁基氟化铵三水合物(1.19克,4.56毫摩尔，0.5当量)，混合物回流1小时。冷却到室温后，混合物用水洗，并减压浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝100/1到20/1)得到黄色固体5-氟苯并呋喃-6-羧酸甲酯(1克，收率：55.87％)。LCMS(ESI)：m/z＝195(M+H)+.
氮气保护条件下，在5-氟苯并呋喃-6-羧酸甲酯(241毫克，1.24毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(20毫升)溶液中加入四氢锂铝(94.3毫克，2.48毫摩尔，2当量)。混合物在常温下搅拌3小时。反应用水淬灭，用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，并用无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝20/1到5/1)得到黄色固体(5-氟苯并呋喃-6-基)甲醇(200毫克，收率：97.08％)。LCMS(ESI)：m/z＝167(M+H)+.
步骤23b：4-(6-((5-氟苯并呋喃-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(化合物0402-32)的制备：氮气保护条件下，4-(6-氯吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0104-1)(297毫克，1.0毫摩尔，1.0当量)，(5-氟苯并呋喃-6-基)甲醇(0401-32(200毫克，1.2毫摩尔，1.2当量)、碳酸铯(652毫克，2.0毫摩尔，2.0当量)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(46.7毫克，0.1毫摩尔，0.1当量)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(45.8毫克，0.05毫摩尔，0.05当量)的甲苯(10毫升)的混合物在125℃下回流过夜。冷却至室温后，将反应液通过硅藻土过滤，固体用乙酸乙酯洗涤。将滤液减压浓缩。残留物用硅胶柱层析(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝20/1-5/1)纯化粗产物，得到黄色油状物4-(6-((5-氟苯并呋喃-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(250毫克，产率：58.55％)。LCMS(ESI)：m/z＝427(M+H)+.
步骤23c：2-((5-氟苯并呋喃-6-基)甲氧基)-6-(哌啶-4-基)吡啶4-甲基苯磺酸盐(化合物0403-32)的制备：在4-(6-((5-氟苯并呋喃-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0402-32)(250毫克，0.587毫摩尔，1.0当量)的乙酸乙酯(10毫升)溶液中加入对甲苯磺酸一水合物(303毫克，1.76毫摩尔，3当量)。混合物在60℃下搅拌过夜。混合物过滤。残留物用乙酸乙酯洗涤。残留物干燥，得到白色固体2-((5-氟苯并呋喃-6-基)甲氧基)-6-(哌啶-4-基)吡啶4-甲基苯磺酸盐(254毫克,收率:86.99％).LCMS(ESI)：m/z＝327(M+H)+.
步骤23d：(S)-2-((4-(6-((5-氟苯并呋喃-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(化合物0404-32)的制备:将2-((5-氟苯并呋喃-6-基)甲氧基)-6-(哌啶-4-基)吡啶4-甲基苯磺酸盐(0403-32)(203毫克，0.407毫摩尔，1.5当量)，(S)-2-(氯甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0116-3)(80毫克，0.27毫摩尔，1.0当量)和碳酸钾(149毫克，1.08毫摩尔，4.0当量)的乙腈(10毫升)溶液在60℃的条件下搅拌16小时。将反应混合物冷却至室温后加水，加乙酸乙酯萃取。有机相用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。残留物用硅胶薄层层析制备板纯化(洗脱剂为：乙酸乙酯)得白色油状物(S)-2-((4-(6-((5-氟苯并呋喃-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(100毫克，收率：63.29％)。LCMS(ESI)：m/z＝585(M+H)+.
步骤23e：(S)-2-((4-(6-((5-氟苯并呋喃-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物32)的制备:(S)-2-((4-(6-((5-氟苯并呋喃-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0404-32)(100毫克，0.17毫摩尔，1.0当量)和一水合氢氧化锂(11毫克，0.26毫摩尔，1.5当量)的乙腈/水＝5/1(6毫升)混合物在40℃下搅拌过夜。混合物冷却到室温，并减压浓缩。残留物的pH值用1摩尔/升的盐酸调节至6，之后形成固体沉淀。混合物过滤。残留物用水洗并减压干燥得白色固体(S)-2-((4-(6-((5-氟苯并呋喃-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(70毫克，收率：72.16％)。LCMS(ESI)：m/z＝571(M+H)+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.25(s,1H),8.01(d,J＝2.2Hz,1H),7.80(dd,J＝8.4,1.4Hz,1H),7.76(d,J＝5.7Hz,1H),7.62(dd,J＝12.2,4.8Hz,2H),7.49(d,J＝9.9Hz,1H),6.94(dd,J＝2.1,0.8Hz,1H),6.86(d,J＝7.3Hz,1H),6.67(d,J＝8.1Hz,1H),5.46(s,2H),5.11(qd,J＝7.3,2.8Hz,1H),4.80(dd,J＝15.2,7.2Hz,1H),4.66(dd,J＝15.2,2.6Hz,1H),4.46(dt,J＝13.9,7.0Hz,1H),4.37(dt,J＝9.0,5.9Hz,1H),3.95(d,J＝13.5Hz,1H),3.78(d,J＝13.5Hz,1H),3.00(d,J＝11.2Hz,1H),2.86(d,J＝11.3Hz,1H),2.74–2.66(m,1H),2.62(tt,J＝11.4,4.0Hz,1H),2.48–2.40(m,1H),2.29–2.22(m,1H),2.22–2.14(m,1H),1.85–1.69(m,4H).
实施例24：(S)-2-((4-(6-((6-氟苯并呋喃-5-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-3-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸(化合物33)的制备(按照方案五线路制备)
步骤24a：(6-氟苯并呋喃-5-基)甲醇(化合物0501-33)的制备：
Figure BDA0003178251760000611
向2-氟-4-羟基苯甲醛(5.0克，35.7毫摩尔，1.0当量)的浓硫酸(30毫升)溶液中加入N-碘代丁二酰亚胺(8.84克，39.3毫摩尔，1.1当量)，混合物在室温下搅拌3小时。将反应液倒入冰水中并搅拌1小时。将混合物过滤，然后滤饼用水洗涤并减压干燥得到粗产品2-氟-4-羟基-5-碘代苯甲醛(5.6克，粗品)，该产品不需要进一步纯化直接用于下一步。
氮气保护下，向上述得到的2-氟-4-羟基-5-碘代苯甲醛(5.6克，20.8毫摩尔，1.0当量)，三乙胺(6.3克，62.4毫摩尔，3.0当量)，碘化亚铜(59.3毫克，0.31毫摩尔，0.02当量)和二(三苯基膦)二氯化钯(438毫克，0.62毫摩尔，0.03当量)的四氢呋喃(50毫升)的溶液中加入三甲基乙炔基硅烷(4.08克，41.6毫摩尔，2.0当量)，混合物在70℃下搅拌过夜。冷却到室温后，减压除去溶剂，加入甲醇(150毫升)，二异丙基乙胺(8.06克，62.4毫摩尔，3.0当量)和碘化亚铜(4.0克，20.8毫摩尔，1.0当量)。将混合物回流2小时。冷却到室温后，将混合物倒入水中。加入PE/EA＝2/1的溶液进行萃取，将有机层减压浓缩。加入四氢呋喃(50毫升)和四丁基氟化铵三水合物(2.7克，10.4毫摩尔，0.5当量)，混合物回流1小时。冷却到室温后，混合物用水洗，并减压浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝100/1到20/1)得到黄色固体6-氟苯并呋喃-5-甲醛(2.1克，收率：61.19％)。LCMS(ESI)：m/z＝165(M+H)+.
在6-氟苯并呋喃-5-甲醛(1克，6.10毫摩尔，1.0当量)的甲醇(25毫升)溶液中加入硼氢化钠(277毫克，7.32毫摩尔，1.2当量)。混合物在常温下搅拌1小时。反应用水淬灭，用乙酸乙酯萃取。有机相用食饱和盐水洗涤，并用无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩得到(6-氟苯并呋喃-5-基)甲醇(947毫克，收率：93.58％)为黄色固体。LCMS(ESI)：m/z＝167(M+H)+.
步骤24b：4-(6-((6-氟苯并呋喃-5-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(化合物0502-33)的制备：氮气保护条件下，4-(6-氯吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0104-1)(350毫克，1.18毫摩尔，1.0当量)，(6-氟苯并呋喃-5-基)甲醇(0501-33)(235毫克，1.416毫摩尔，1.2当量)、碳酸铯(769毫克，2.36毫摩尔，2.0当量)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(55毫克，0.118毫摩尔，0.1当量)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(54毫克，0.059毫摩尔，0.05当量)的甲苯(10毫升)的混合物在125℃下回流过夜。冷却至室温后，将反应液通过硅藻土过滤，固体用乙酸乙酯洗涤。将滤液减压浓缩。残留物用硅胶柱层析(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝10/1-5/1)纯化粗产物，得到黄色油状物4-(6-((6-氟苯并呋喃-5-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(450毫克，产率：89.64％)。LCMS(ESI)：m/z＝427(M+H)+.
步骤24c：2-((6-氟苯并呋喃-5-基)甲氧基)-6-(哌啶-4-基)吡啶4-甲基苯磺酸盐(化合物0503-33)的制备：在4-(6-((6-氟苯并呋喃-5-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0502-33)(450毫克，1.06毫摩尔，1.0当量)的乙酸乙酯(10毫升)溶液中加入对甲苯磺酸一水合物(546毫克，3.17毫摩尔，3当量)。混合物在60℃下搅拌过夜。混合物过滤。残留物用乙酸乙酯洗涤。残留物干燥，得到白色固体2-((6-氟苯并呋喃-5-基)甲氧基)-6-(哌啶-4-基)吡啶4-甲基苯磺酸盐(510毫克,收率:96.59％).LCMS(ESI)：m/z＝327(M+H)+.
步骤24d：(S)-2-((4-(6-((6-氟苯并呋喃-5-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-3-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯(化合物0504-33)的制备:将2-((6-氟苯并呋喃-5-基)甲氧基)-6-(哌啶-4-基)吡啶4-甲基苯磺酸盐(0503-33)(127毫克，0.255毫摩尔，1.5当量)，(S)-2-(氯甲基)-3-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯(0116-1)(50毫克，0.17毫摩尔，1.0当量)和碳酸钾(94毫克，0.68毫摩尔，4.0当量)的乙腈(10毫升)溶液在60℃下搅拌16小时。将反应混合物冷却至室温后加水，加乙酸乙酯萃取。有机相用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。残留物用硅胶薄层层析制备板纯化(洗脱剂为：乙酸乙酯)得白色固体(S)-2-((4-(6-((6-氟苯并呋喃-5-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-3-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯(66毫克，收率：66.37％)。LCMS(ESI)：m/z＝586(M+H)+.
步骤24e：(S)-2-((4-(6-((6-氟苯并呋喃-5-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-3-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸(化合物33)的制备:(S)-2-((4-(6-((6-氟苯并呋喃-5-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-3-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯)0504-33)(66毫克，0.11毫摩尔，1.0当量)和一水合氢氧化锂(5毫克，0.12毫摩尔，1.1当量)的乙腈/水＝5/1(6毫升)混合物在40℃下搅拌过夜。混合物冷却到室温，并减压浓缩。残留物的pH值用1摩尔/升的盐酸调节至6，之后形成固体沉淀。混合物过滤。残留物用水洗并减压干燥得白色固体(S)-2-((4-(6-((6-氟苯并呋喃-5-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-3-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸(40毫克，收率：63.49％)。LCMS(ESI)：m/z＝572(M+H)+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.04(d,J＝8.1Hz,1H),7.97(dd,J＝14.1,5.2Hz,2H),7.81(d,J＝7.3Hz,1H),7.66–7.53(m,2H),6.97–6.91(m,1H),6.86(d,J＝7.3Hz,1H),6.65(d,J＝8.2Hz,1H),5.44(s,2H),5.03(d,J＝4.6Hz,1H),4.87(dd,J＝14.7,7.4Hz,1H),4.69(dd,J＝14.7,3.0Hz,1H),4.41(dd,J＝14.0,7.1Hz,1H),4.32(dt,J＝12.2,6.1Hz,1H),4.05(d,J＝13.6Hz,1H),3.82(d,J＝13.6Hz,1H),3.00(d,J＝11.2Hz,1H),2.87(d,J＝11.2Hz,1H),2.61(td,J＝11.0,5.5Hz,1H),2.50(s,1H),2.37–2.16(m,3H),1.88–1.66(m,4H).
实施例25：(S)-2-((4-(6-((7-氟苯并呋喃-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物44)的制备(按照方案六线路制备)
步骤25a：(7-氟苯并呋喃-6-基)甲醇(化合物0601-44)的制备
Figure BDA0003178251760000631
氮气保护条件下，2-氟-3-甲基苯酚(2.5克，19.84毫摩尔，1.0当量)，2-溴-1,1-二乙氧基乙烷(4.69克，23.81毫摩尔，1.2当量)，碳酸钾(4.11克，21.4毫摩尔，1.5当量)的N,N-二甲基甲酰胺(50毫升)混合物在120℃下搅拌过夜。冷却到室温后，反应液加水稀释，用乙酸乙酯萃取。有机层用饱和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝10/1至5/1)纯化得到黄色油状产物1-(2,2-二乙氧基乙氧基)-2-氟-3-甲基苯(4.78克，产率：99.6％)。
氮气保护条件下，向多聚磷酸(15.89克，47.00毫摩尔，2.5当量)的甲苯(100毫升)溶液中加入1-(2,2-二乙氧基乙氧基)-2-氟-3-甲基苯(4.55克，18.80毫摩尔，1.0当量)，混合物在120℃下搅拌过夜。冷却到室温后，反应液加水稀释，用乙酸乙酯萃取。有机层干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚)得到黄色油状产物7-氟-6-甲基苯并呋喃(2.08克，产率：70.2％)。
氮气保护条件下，7-氟-6-甲基苯并呋喃(2.0克，13.33毫摩尔，1.0当量)、N-溴代丁二酰亚胺(2.85克，15.99毫摩尔，1.2当量)和偶氮二异丁腈(437毫克，2.67毫摩尔，0.2当量)的1,2-二氯乙烷(25毫升)溶液在72℃下搅拌过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(洗脱剂：石油醚)纯化，得到白色固体产物6-(溴甲基)-7-氟苯并呋喃(2.13克，收率：69.8％)。
6-(溴甲基)-7-氟苯并呋喃(2.03克，8.86毫摩尔，1.0当量)和醋酸钾(8.7克，88.6毫摩尔，10.0当量)的N,N-二甲基甲酰胺混合物(40毫升)在室温下搅拌3小时。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物不经过进一步纯化，直接用于下一步。
氮气保护下，向乙酸(7-氟苯并呋喃-6-基)甲基酯(1.87克，8.99毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃溶液中加入甲醇钠的甲醇溶液(5.4摩尔/升，3.33毫升，17.98毫摩尔，2.0当量)，混合物搅拌在室温下搅拌1.0小时。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝15/1至5/1)纯化，得到黄色固体产物(7-氟苯并呋喃-6-基)甲醇(1.2克，收率：80.4％)。
步骤25b：4-(6-((7-氟苯并呋喃-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(化合物0602-44)的制备:氮气保护下，4-(6-氯吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0104-1)(178.8毫克，0.602毫摩尔，1.0当量)，(7-氟苯并呋喃-6-基)甲醇(0601-44)(120毫克，0.722毫摩尔，1.2当量)、碳酸铯(391毫克，1.2毫摩尔，2.0当量)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(56毫克，0.12毫摩尔，0.2当量)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(55毫克，0.06毫摩尔，0.1当量)的甲苯(10毫升)混合物在120℃下搅拌过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝20/1至10/1)纯化，得到黄色固体产物4-(6-((7-氟苯并呋喃-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(254毫克，收率：98.8％)。LCMS(ESI)：m/z＝427[M+1]+.
步骤25c：2-((7-氟苯并呋喃-6-基)甲氧基)-6-(哌啶-4-基)吡啶4-甲基苯磺酸盐(化合物0603-44)的制备：在4-(6-((7-氟苯并呋喃-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0602-44)(254毫克，0.596毫摩尔，1.0当量)的乙酸乙酯(10毫升)溶液加入一水合对甲苯磺酸(206毫克，1.19毫摩尔，2.0当量)，混合物在60℃下搅拌过夜。反应液减压浓缩，残留物不经过进一步纯化，直接用于下一步。LCMS(ESI)：m/z＝327(M+H)+.
步骤25d：(S)-2-((4-(6-((7-氟苯并呋喃-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(化合物0604-44)的制备:2-((7-氟苯并呋喃-6-基)甲氧基)-6-(哌啶-4-基)吡啶4-甲基苯磺酸盐(0603-44)(72毫克，0.22毫摩尔，1.3当量)、(S)-2-(氯甲基)-3-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0116-3)(50毫克，0.169毫摩尔，1.0当量)和碳酸钾(93.5毫克，0.678毫摩尔，4.0当量)的乙腈(10毫升)溶液在60℃的条件下搅拌过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用制备薄层色谱(二氯甲烷/甲醇＝16/1)纯化，得到白色固体产物(S)-2-((4-(6-((7-氟苯并呋喃-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(89毫克，收率：90.3％)。LCMS(ESI)：m/z＝584(M+H)+.
步骤25e：(S)-2-((4-(6-((7-氟苯并呋喃-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物44)的制备:(S)-2-((4-(6-((7-氟苯并呋喃-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0704-44)(89毫克，0.147毫摩尔，1.0当量)和一水合氢氧化锂(16.3毫克，0.388毫摩尔，2.5当量)的乙腈/水＝5/1(12毫升)混合物在40℃下搅拌过夜。反应液用2摩尔/升的盐酸调节pH至6，用乙酸乙酯萃取，所得有机相经干燥，减压浓缩得到白色固体(S)-2-((4-(6-((7-氟苯并呋喃-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(76毫克，收率：87.7％)。LCMS(ESI)：m/z＝571(M+H)+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.88(s,1H),8.36(s,1H),8.10(d,J＝1.6Hz,1H),7.89(d,J＝8.3Hz,1H),7.79(d,J＝8.2Hz,1H),7.68(t,J＝7.7Hz,1H),7.53–7.41(m,2H),7.12–7.04(m,1H),6.92(d,J＝5.6Hz,1H),6.72(d,J＝8.2Hz,1H),5.54(s,2H),5.05(d,J＝5.9Hz,1H),4.84(dd,J＝15.4,6.9Hz,2H),4.70(d,J＝14.6Hz,1H),4.49(dd,J＝13.5,7.2Hz,1H),4.35(dd,J＝14.7,5.9Hz,1H),3.81(s,2H),3.35(s,3H),2.96(s,1H),2.71(dt,J＝16.3,8.0Hz,1H),2.35(d,J＝7.8Hz,1H),2.29–2.01(m,4H).
实施例26：(S)-2-((6-((4-氰基-3-甲基苯并呋喃-7-基)甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物46)的制备(按照方案三线路制备)
步骤26a：7-(羟甲基)-3-甲基苯并呋喃-4-腈(化合物0201-46)的制备：
Figure BDA0003178251760000661
氮气保护条件下，4-溴-2-羟基苯甲酸甲酯(1.0克，4.33毫摩尔，1.0当量)，1-溴丙-2-酮(711毫克，5.19毫摩尔，1.2当量)，和碳酸钾(896毫克，6.49毫摩尔，1.5当量)的N,N-二甲基甲酰胺混合物在室温下搅拌1小时。反应用水淬灭，然后有固体析出。混合物过滤。残留物用水洗，干燥得到粗产品4-溴-2-(2-氧代丙氧基)苯甲酸甲酯(1克，粗品)。该产品不需要进一步纯化直接用于下一步。LCMS(ESI)：m/z＝287(M+H)+.
氮气保护条件下，4-溴-2-(2-氧代丙氧基)苯甲酸甲酯(1克，3.48毫摩尔，1.0当量)，和多聚磷酸(1.76克，5.23毫摩尔，1.5当量)的二氯乙烷混合物回流过夜。冷却到室温后，反应用水淬灭，并用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂为：石油醚)得到黄色固体4-溴-3-甲基苯并呋喃-7-羧酸甲酯(357毫克，产率：38.26％)。LCMS(ESI)：m/z＝269(M+H)+.
氮气保护条件下，4-溴-3-甲基苯并呋喃-7-羧酸甲酯(320毫克，1.19毫摩尔，1.0当量)，四三苯基膦钯(137毫克，0.12毫摩尔，0.1当量)和氰化锌(208毫克，1.78毫摩尔，1.5当量)的N,N-二甲基甲酰胺(5毫升)溶液在90℃下搅拌过夜。冷却至室温后，反应用水淬灭，并用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩。残留物用硅胶柱层析(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝100/1-10/1)纯化，得到黄色固体4-氰基-3-甲基苯并呋喃-7-羧酸甲酯(242毫克，收率：95.01％)。LCMS(ESI)：m/z＝216(M+H)+.
在氮气保护和冰浴条件下，往四氢锂铝(55毫克，1.44毫摩尔，1.2当量)的四氢呋喃混合物中加入4-氰基-3-甲基苯并呋喃-7-羧酸甲酯(259毫克，1.2毫摩尔，1.0当量)。混合物在冰浴下搅拌1小时。反应用水淬灭。混合物用无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝100/1-2/1)得到黄色固体7-(羟甲基)-3-甲基苯并呋喃-4-腈(135毫克，产率：60％)。LCMS(ESI)：m/z＝188(M+H)+.
步骤26b：6-((4-氰基-3-甲基苯并呋喃-7-基)甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯(化合物0303-46)的制备：氮气保护条件下，6-氯-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯(0302-2)(174毫克，0.59毫摩尔，1.2当量)，7-(羟甲基)-3-甲基苯并呋喃-4-腈(0201-46)(92毫克，0.492毫摩尔，1.0当量)、碳酸铯(320毫克，0.984毫摩尔，2.0当量)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(92毫克，0.197毫摩尔，0.4当量)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(89毫克，0.098毫摩尔，0.2当量)的甲苯(10毫升)的混合物在125℃下回流过夜。冷却至室温后，将反应液通过硅藻土过滤，固体用乙酸乙酯洗涤。将滤液减压浓缩。残留物用硅胶柱层析(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝100/1-10/1)纯化粗产物，得到黄色油状物6-((4-氰基-3-甲基苯并呋喃-7-基)甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯(123毫克，产率：56.16％)。LCMS(ESI)：m/z＝446(M+H)+.
步骤26c：3-甲基-7-(((1'，2'，3'，6'-四氢-[2,4'-联吡啶]]-6-基)氧基)甲基)苯并呋喃-4-甲腈盐酸盐(化合物0304-46)的制备：将6-((4-氰基-3-甲基苯并呋喃-7-基)甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯(0303-46)(123毫克，0.276毫摩尔，1.0当量)和盐酸的二氧六环溶液(4M，1毫升)的二氧六环(4毫升)溶液在室温下搅拌过夜。混合物减压浓缩，得到粗品3-甲基-7-(((1'，2'，3'，6'-四氢-[2,4'-联吡啶]]-6-基)氧基)甲基)苯并呋喃-4-甲腈盐酸盐(105毫克，粗品)。该产品不需要进一步纯化直接用于下一步。LCMS(ESI)：m/z＝346(M+H)+.
步骤26d：(S)-2-((6-((4-氰基-3-甲基苯并呋喃-7-基)甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(化合物0305-46)的制备:3-甲基-7-(((1'，2'，3'，6'-四氢-[2,4'-联吡啶]]-6-基)氧基)甲基)苯并呋喃-4-甲腈盐酸盐(0304-46)(105毫克，0.276毫摩尔，1.5当量),(S)-2-(氯甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0116-3)(54毫克，0.184毫摩尔，1.0当量)和N,N-二异丙基乙胺(95毫克，0.736毫摩尔，4.0当量)的N-甲基吡咯烷酮(5毫升)溶液在60℃下搅拌16小时。在冷却至室温后加水，加乙酸乙酯萃取。有机相用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。残留物用硅胶薄层层析制备板纯化(洗脱剂为：乙酸乙酯)得黄色固体(S)-2-((6-((4-氰基-3-甲基苯并呋喃-7-基)甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(80毫克，收率：72.26％)。LCMS(ESI)：m/z＝604(M+H)+.
步骤26e：(S)-2-((6-((4-氰基-3-甲基苯并呋喃-7-基)甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物46)的制备:将(S)-2-((6-((4-氰基-3-甲基苯并呋喃-7-基)甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0305-46)(80毫克，0.13毫摩尔，1.0当量)和一水合氢氧化锂(11毫克，0.26毫摩尔，2.0当量)的乙腈/水＝5/1(6毫升)混合物在40℃下搅拌过夜。混合物冷却到室温，并减压浓缩。残留物的pH值用1摩尔/升的盐酸调节至6，然后形成固体沉淀物。混合物过滤。残留物用水洗。混合物用甲醇打浆得到黄色固体(S)-2-((6-((4-氰基-3-甲基苯并呋喃-7-基)甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(66毫克，收率：78.14％)。LCMS(ESI)：m/z＝590(M+H)+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.25(s,1H),8.05(s,1H),7.82(d,J＝8.4Hz,1H),7.76–7.60(m,3H),7.50(d,J＝7.8Hz,1H),7.06(d,J＝7.5Hz,1H),6.76(d,J＝8.2Hz,1H),6.61(s,1H),5.70(s,2H),5.05(qd,J＝7.2,2.8Hz,1H),4.78(dd,J＝15.2,7.2Hz,1H),4.63(d,J＝13.0Hz,1H),4.46(dd,J＝13.7,7.5Hz,1H),4.35(dt,J＝8.9,5.9Hz,1H),4.05(d,J＝13.6Hz,1H),3.91(d,J＝13.5Hz,1H),3.19(d,J＝12.6Hz,2H),2.65(ddd,J＝17.7,14.8,12.1Hz,3H),2.45–2.31(m,6H).
实施例27：(S)-2-((4-(6-((7-氰基苯并呋喃-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物47)的制备(按照方案七线路制备)
步骤27a：4-(羟甲基)苯并呋喃-7-腈(化合物0701-47)的制备：
Figure BDA0003178251760000681
氮气保护条件下，4-甲基苯并呋喃-7-腈(960毫克，6.11毫摩尔，1.0当量)、N-溴代琥珀酰亚胺(1300毫克，7.33毫摩尔，1.2当量)和偶氮二异丁腈(200毫克，1.22毫摩尔，0.2当量)的二氯乙烷(10毫升)溶液在72℃下搅拌过夜。冷却至室温后，减压除去溶剂。残留物用水稀释，并用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，并用无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩，残留物用硅胶柱层析(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝200/1-10/1)纯化，得到4-(溴甲基)苯并呋喃-7-腈(968毫克，收率：67.22％)为白色固体。LCMS(ESI)：m/z＝236(M+H)+.
4-(溴甲基)苯并呋喃-7-腈(968毫克，4.1毫摩尔，1.0当量)和醋酸钾(4克，41毫摩尔，10.0当量)的N,N-二甲基甲酰胺混合物(10毫升)在室温下搅拌3小时。反应用水淬灭，用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，并用无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩得到粗产品乙酸(7-氰基苯并呋喃-4-基)甲基酯(766毫克，粗品)。该产品不需要进一步纯化直接用于下一步。
在乙酸(7-氰基苯并呋喃-4-基)甲基酯(766毫克，3.56毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(5毫升)溶液中加入的甲醇钠的甲醇溶液(5.4摩尔/升，1.32毫升，7.12毫摩尔，2.0当量)。混合物在常温下搅拌1小时。反应用水淬灭，用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，并用无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩，残留物用硅胶柱层析(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝200/1-2/1)纯化，得到4-(羟甲基)苯并呋喃-7-腈(968毫克，收率：66.23％)为黄色固体。LCMS(ESI)：m/z＝174(M+H)+.
步骤27b：4-(6-((7-氰基苯并呋喃-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(化合物0702-47)的制备：氮气保护条件下，4-(6-氯吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0104-1)(178毫克，0.6毫摩尔，1.2当量)，4-(羟甲基)苯并呋喃-7-腈(0701-47(87毫克，0.5毫摩尔，1.0当量)、碳酸铯(325毫克，1毫摩尔，2.0当量)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(93毫克，0.2毫摩尔，0.4当量)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(91毫克，0.1毫摩尔，0.2当量)的甲苯(10毫升)的混合物在125℃下搅拌过夜。冷却至室温后，将反应液通过硅藻土过滤，固体用乙酸乙酯洗涤。将滤液减压浓缩。残留物用硅胶柱层析(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝100/1-10/1)纯化粗产物，得到黄色油状物4-(6-((7-氰基苯并呋喃-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(94毫克，产率：43.32％)。LCMS(ESI)：m/z＝434(M+H)+.
步骤27c：4-(((6-(哌啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苯并呋喃-7-甲腈盐酸盐(化合物0703-47)的制备：将4-(6-((7-氰基苯并呋喃-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0702-47)(94毫克，0.217毫摩尔，1.0当量)和盐酸的二氧六环溶液(4M，1毫升)的二氧六环(4毫升)的混合物在室温下搅拌过夜。混合物减压浓缩，得到粗品4-(((6-(哌啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苯并呋喃-7-甲腈盐酸盐(100毫克,粗品).该产品不需要进一步纯化直接用于下一步。LCMS(ESI)：m/z＝334(M+H)+.
步骤27d：(S)-2-((4-(6-((7-氰基苯并呋喃-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(化合物0704-47)的制备:4-(((6-(哌啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苯并呋喃-7-甲腈盐酸盐(0703-47)(80毫克，0.217毫摩尔，1.3当量),(S)-2-(氯甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0116-3)(50毫克，0.17毫摩尔，1.0当量)和N,N-二异丙基乙胺(88毫克，0.68毫摩尔，4.0当量)的N-甲基吡咯烷酮(5毫升)溶液在60℃下搅拌16小时。在冷却至室温后加水，加乙酸乙酯萃取。有机相用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。残留物用硅胶薄层层析制备板纯化(洗脱剂为：乙酸乙酯)得黄色固体(S)-2-((4-(6-((7-氰基苯并呋喃-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(40毫克，收率：40％)。LCMS(ESI)：m/z＝592(M+H)+.
步骤27e：(S)-2-((4-(6-((7-氰基苯并呋喃-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物47)的制备:(S)-2-((4-(6-((7-氰基苯并呋喃-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0704-47)(40毫克，0.068毫摩尔，1.0当量)和一水合氢氧化锂(6毫克，0.136毫摩尔，2.0当量)的乙腈/水＝5/1(6毫升)混合物在40℃下搅拌过夜。混合物冷却到室温，并减压浓缩。残留物的pH值用1摩尔/升的盐酸调节至6，然后形成固体沉淀物。混合物过滤。残留物用水洗。混合物用甲醇打浆并过滤得到白色固体(S)-2-((4-(6-((7-氰基苯并呋喃-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(33毫克，收率：84.61％)。LCMS(ESI)：m/z＝578(M+H)+.1HNMR(500MHz,DMSO)δ8.26(d,J＝1.0Hz,1H),8.22(d,J＝2.2Hz,1H),7.84–7.77(m,2H),7.64(dd,J＝8.0,6.9Hz,2H),7.47(d,J＝7.8Hz,1H),7.28(d,J＝2.2Hz,1H),6.87(d,J＝7.3Hz,1H),6.73(d,J＝8.1Hz,1H),5.69(s,2H),5.10(ddd,J＝14.5,7.2,2.8Hz,1H),4.78(dd,J＝15.2,7.2Hz,1H),4.65(dd,J＝15.2,2.8Hz,1H),4.46(td,J＝7.8,5.9Hz,1H),4.36(dt,J＝9.0,5.9Hz,1H),3.93(d,J＝13.5Hz,1H),3.77(d,J＝13.5Hz,1H),2.96(d,J＝11.4Hz,1H),2.83(d,J＝11.3Hz,1H),2.73–2.64(m,1H),2.56(tt,J＝11.8,3.7Hz,1H),2.46–2.38(m,1H),2.18(ddd,J＝31.6,11.8,9.6Hz,2H),1.74(t,J＝13.5Hz,2H),1.70–1.56(m,2H).
实施例28：(S)-2-((4-(6-((4-氰基萘-1-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物49)的制备(按照方案八线路制备)
步骤28a：4-(羟甲基)-1-萘腈(化合物0801-49)的制备：
Figure BDA0003178251760000701
氮气保护下，1-溴-4-甲基萘(1.5克，6.78毫摩尔，1.0当量)和氰化亚铜(1.2克，13.57毫摩尔，2当量)的N,N-二甲基甲酰胺(20毫升)混合溶液在120℃下搅拌过夜。冷却至室温后，反应用水淬灭，用乙酸乙酯萃取。将混合物通过硅藻土过滤，固体用乙酸乙酯洗涤。有机相用饱和食盐水洗涤，并用无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩，残留物用硅胶柱层析(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝15/1-10/1)纯化，得到4-甲基-1-萘腈(889毫克，收率：78.53％)为黄色固体。LCMS(ESI)：m/z＝168(M+H)+
氮气保护下，4-甲基-1-萘腈(400毫克，2.4毫摩尔，1.0当量)、N-溴代琥珀酰亚胺(511毫克，2.87毫摩尔，1.2当量)和偶氮二异丁腈(78.6毫克，0.479毫摩尔，0.2当量)的二氯乙烷(10毫升)溶液在72℃下搅拌过夜。冷却至室温后，减压除去溶剂。残留物用水稀释，并用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，并用无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩得到粗产品4-(溴甲基)-1-萘腈(678毫克，粗品)。该产品不需要进一步纯化直接用于下一步。
4-(溴甲基)-1-萘腈(678毫克，2.76毫摩尔，1.0当量)和醋酸钾(2.7克，27.6毫摩尔，10.0当量)的N,N-二甲基甲酰胺混合物(10毫升)在室温下搅拌3小时。反应用水淬灭，用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，并用无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩得到粗产品乙酸(4-氰基萘-1-基)甲基酯(823毫克，粗品)。该产品不需要进一步纯化直接用于下一步。
在乙酸(4-氰基萘-1-基)甲基酯(823毫克，3.65毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(5毫升)溶液中加入的甲醇钠的甲醇溶液(5.4摩尔/升，1.35毫升，7.31毫摩尔，2.0当量)。混合物在常温下搅拌1小时。反应用水淬灭，用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，并用无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩，残留物用硅胶柱层析(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝20/1-2/1)纯化，得到4-(羟甲基)-1-萘腈(300毫克，收率：44.91％)为黄色固体。LCMS(ESI)：m/z＝184(M+H)+.
步骤28b：4-(6-((4-氰基萘-1-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(化合物0802-49)的制备：氮气保护条件下，4-(6-氯吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0104-1)(202毫克，0.68毫摩尔，1当量)，4-(羟甲基)-1-萘腈(0801-49)(150毫克，0.82毫摩尔，1.2当量)、碳酸铯(443.36毫克，1.36毫摩尔，2.0当量)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(32毫克，0.068毫摩尔，0.1当量)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(31毫克，0.034毫摩尔，0.05当量)的甲苯(10毫升)的混合物在125℃下搅拌过夜。冷却至室温后，将反应液通过硅藻土过滤，固体用乙酸乙酯洗涤。将滤液减压浓缩。残留物用硅胶柱层析(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝100/1-8/1)纯化粗产物，得到黄色油状物4-(6-((4-氰基萘-1-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(272毫克，产率：90.37％)。LCMS(ESI)：m/z＝444(M+H)+.
步骤28c：4-(((6-(哌啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)-1-萘甲腈盐酸盐(化合物0803-49)的制备：将4-(6-((4-氰基萘-1-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0802-49)(272毫克，0.614毫摩尔，1.0当量)和盐酸的二氧六环溶液(4M，5毫升)在室温下搅拌过夜。混合物过滤。残留物用二氧六环洗涤。残留物干燥，得到黄色固体4-(((6-(哌啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)-1-萘甲腈盐酸盐(215毫克,收率:92.28％).LCMS(ESI)：m/z＝344(M+H)+.
步骤28d：(S)-2-(((4-(6-((4-氰基萘-1-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(化合物0804-49)的制备:4-(((6-(哌啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)-1-萘甲腈盐酸盐(0803-49)(96毫克，0.254毫摩尔，1.5当量)，(S)-2-(氯甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0116-3)(50毫克，0.17毫摩尔，1.0当量)和碳酸钾(93.5毫克，0.678毫摩尔，4.0当量)的乙腈(5毫升)溶液在60℃下搅拌16小时。将反应混合物冷却至室温后加水，加乙酸乙酯萃取。有机相用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。残留物用硅胶薄层层析制备板纯化(洗脱剂为：乙酸乙酯)得白色固体(S)-2-(((4-(6-((4-氰基萘-1-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(50毫克，收率：49.02％)。LCMS(ESI)：m/z＝602(M+H)+.
步骤28e：(S)-2-((4-(6-((4-氰基萘-1-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物49)的制备:(S)-2-(((4-(6-((4-氰基萘-1-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0804-49)(50毫克，0.083毫摩尔，1.0当量)和一水合氢氧化锂(7毫克，0.17毫摩尔，2.0当量)的乙腈/水＝5/1(6毫升)混合物在40℃下搅拌过夜。混合物冷却到室温，并减压浓缩。残留物的pH值用1摩尔/升的盐酸调节至6，之后形成固体沉淀。混合物过滤。残留物用水洗并减压干燥得到白色固体(S)-2-((4-(6-((4-氰基萘-1-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(35毫克，收率：71.75％)。LCMS(ESI)：m/z＝588(M+H)+.1HNMR(500MHz,DMSO)δ12.68(s,1H),8.30(d,J＝8.3Hz,2H),8.17(t,J＝7.0Hz,2H),7.81(ddd,J＝15.3,14.3,7.0Hz,4H),7.67(d,J＝7.1Hz,2H),6.91(d,J＝6.7Hz,1H),6.74(d,J＝7.8Hz,1H),5.93(s,2H),5.07(d,J＝5.1Hz,1H),4.78(dd,J＝15.1,6.7Hz,1H),4.64(d,J＝14.8Hz,1H),4.44(d,J＝6.3Hz,1H),4.33(dt,J＝9.0,5.9Hz,1H),3.94(s,1H),3.77(s,1H),2.97(s,1H),2.85(s,1H),2.74–2.55(m,2H),2.44–2.31(m,1H),2.18(s,2H),1.91(d,J＝102.8Hz,4H).
实施例29：(S)-2-((4-(6-((4-氰基-6-氟苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物53)的制备(按照方案二线路制备)
步骤29a：6-氟-7-(羟甲基)苯并呋喃-4-腈(化合物0201-53)的制备：
Figure BDA0003178251760000721
氮气保护下，向4-溴-2,6-二氟苯甲酸甲酯(2.5克，9.96毫摩尔，1.0当量)的甲醇溶液中加入甲醇钠的甲醇溶液(5.4摩尔/升，5.5毫升，29.88毫摩尔，3.0当量)，混合物搅拌在室温下搅拌16.0小时。反应液加水稀释，用2摩尔/升盐酸调pH＝5并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝10/1至5/1)纯化，得到无色油状产物4-溴-2-氟-6-甲氧基苯甲酸甲酯(2.5克，收率：96.2％)。
氮气保护下，向4-溴-2-氟-6-甲氧基苯甲酸甲酯(2.4克，9.12毫摩尔，1.0当量)的二氯甲烷(120毫升)溶液中加入三溴化硼(3.4克，13.69毫摩尔，1.5当量)，混合物搅拌在0℃下搅拌1.5小时。反应液加甲醇淬灭，加水稀释并用二氯甲烷萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(展开剂：二氯甲烷)纯化，得到白色固体产物4-溴-2-氟-6-羟基苯甲酸甲酯(2.03克，收率：89.4％)。LCMS(ESI)：m/z＝247[M+1]-。
氮气保护条件下，4-溴-2-氟-6-羟基苯甲酸甲酯(1.5克，6.02毫摩尔，1.0当量)，2-溴-1,1-二乙氧基乙烷(1.42克，7.23毫摩尔，1.2当量)，碳酸钾(1.25克，9.03毫摩尔，1.5当量)的N,N-二甲基甲酰胺(15毫升)混合物在120℃下搅拌过夜。冷却到室温后，反应液加水稀释，用乙酸乙酯萃取。有机层用饱和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝10/1至8/1)纯化得到黄色油状产物4-溴-2-(2,2-二乙氧基乙氧基)-6-氟苯甲酸酯(2.15克，产率：98.2％)。
氮气保护条件下，向多聚磷酸(4.98克，14.73毫摩尔，2.5当量)的甲苯(80毫升)溶液加入4-溴-2-(2,2-二乙氧基乙氧基)-6-氟苯甲酸酯(2.15克，5毫摩尔，1.0当量)，混合物在120℃下搅拌过夜。冷却到室温后，反应液加水稀释，用乙酸乙酯萃取。有机层干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚)得到黄色油状产物4-溴-6-氟苯并呋喃-7-羧酸甲酯(1.34克，产率：83.4％)。LCMS(ESI)：m/z＝273[M+1]+。
氮气保护条件下，0℃下，向4-溴-6-氟苯并呋喃-7-羧酸甲酯(950毫克，3.48毫摩尔，1.0当量)的甲醇(30毫升)溶液中加入硼氢化钠(2.6克，69.60毫摩尔，20.0当量)，混合物在室温下搅拌3.0小时。反应液加水淬灭并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝10/1至2/1)纯化，得到黄色固体产物(4-溴-6-氟苯并呋喃-7-基)甲醇(850毫克，收率：99.6％)。
氮气保护条件下，向(4-溴-6-氟苯并呋喃-7-基)甲醇(630毫克，2.57毫摩尔，1.0当量)的N-甲基吡咯烷酮(20毫升)溶液加入氰化亚铜(2.3克，25.71毫摩尔，10.0当量)在190℃下搅拌8小时。冷却到室温后，反应液加水稀释，用乙酸乙酯萃取。有机层干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝10/1至2/1)得到白色固体产物6-氟-7-(羟甲基)苯并呋喃-4-腈(92毫克，产率：18.8％)。
步骤29b：4-(6-((4-氰基-6-氟苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(化合物0202-53)的制备：氮气保护下，4-(6-氯吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0104-1)(143毫克，0.482毫摩尔，1.0当量)，6-氟-7-(羟甲基)苯并呋喃-4-腈(0201-53)(92毫克，0.482毫摩尔，1.0当量)、碳酸铯(314毫克，0.964毫摩尔，2.0当量)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(45毫克，0.0964毫摩尔，0.2当量)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(44毫克，0.0482毫摩尔，0.1当量)的甲苯(10毫升)混合物在120℃下搅拌过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝10/1至5/1)纯化，得到黄色固体产物4-(6-((4-氰基-6-氟苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(180毫克，收率：82.6％)。LCMS(ESI)：m/z＝452[M+1]+.
步骤29c：6-氟-7-(((6-(哌啶-4-基)吡啶基-2-基)氧基)甲基]苯并呋喃-4-甲腈盐酸盐(化合物0203-53)的制备：在4-(6-(((4-氰基-6-氟苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0202-53)(180毫克，0.40毫摩尔，1.0当量)的二氧六环(4毫升)溶液中加入盐酸-二氧六环溶液(4摩尔溶液，1毫升)，混合物在室温下搅拌过夜。反应液减压浓缩，残留物不经过进一步纯化，直接用于下一步。LCMS(ESI)：m/z＝352(M+H)+.
步骤29d：(S)-2-(((4-(6-((4-氰基-6-氟苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶基-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(化合物0204-53)的制备:6-氟-7-(((6-(哌啶-4-基)吡啶基-2-基)氧基)甲基]苯并呋喃-4-甲腈盐酸盐(0203-53)(77毫克，0.220毫摩尔，1.3当量)、(S)-2-(氯甲基)-3-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0116-3)(50毫克，0.169毫摩尔，1.0当量)和碳酸钾(93.5毫克，0.678毫摩尔，4.0当量)的乙腈(10毫升)溶液在60℃的条件下搅拌过夜。反应液加水稀释并用乙酸乙酯萃取，将有机相干燥并减压浓缩。残留物用制备薄层色谱(二氯甲烷/甲醇＝16/1)纯化，得到黄色固体产物(S)-2-((4-(6-((4-氰基-6-氟苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶基-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(55毫克，收率：53.4％)。LCMS(ESI)：m/z＝610(M+H)+.
步骤29e：(S)-2-((4-(6-((4-氰基-6-氟苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物53)的制备:(S)-2-((4-(6-((4-氰基-6-氟苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶基-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0204-53)(55毫克，0.09毫摩尔，1.0当量)和一水合氢氧化锂(5.7毫克，0.135毫摩尔，1.5当量)的乙腈/水＝5/1(6毫升)混合物在42℃下搅拌过夜。反应液用2摩尔/升的盐酸调节pH至6，用乙酸乙酯萃取，所得有机相经干燥，减压浓缩得到白色固体(S)-2-((4-(6-((4-氰基-6-氟苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(39毫克，收率：72.8％)。LCMS(ESI)：m/z＝596(M+H)+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.71(s,1H),8.35(d,J＝2.1Hz,1H),8.26(s,1H),7.89(d,J＝10.0Hz,1H),7.81(d,J＝8.4Hz,1H),7.62(dd,J＝16.8,8.9Hz,2H),7.20(d,J＝2.1Hz,1H),6.87(d,J＝7.3Hz,1H),6.66(d,J＝8.2Hz,1H),5.69(s,2H),5.12(dd,J＝7.1,2.5Hz,1H),4.80(dd,J＝15.1,7.1Hz,1H),4.67(d,J＝12.9Hz,1H),4.47(dd,J＝13.7,7.6Hz,1H),4.37(dt,J＝9.0,5.9Hz,1H),3.95(d,J＝13.6Hz,1H),3.80(d,J＝13.6Hz,1H),2.99(d,J＝10.9Hz,1H),2.86(d,J＝11.0Hz,1H),2.76–2.68(m,1H),2.56(t,J＝11.5Hz,1H),2.44(dd,J＝18.8,8.1Hz,1H),2.20(dt,J＝21.1,10.4Hz,2H),1.78–1.59(m,4H).
实施例30：(S)-2-((4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物54)的制备(按照方案九线路制备)
步骤30a：2-溴-6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶(化合物0901-54)的制备:氮气保护下，往(4-氯苯并呋喃-7-基)甲醇(0201-12)(230毫克，1.26毫摩尔，1.0当量)在四氢呋喃的混合物中在10-15℃加入六甲基二硅基胺基钾(1摩尔/升，3.78毫摩尔，3.0eq)，混合物在15℃下搅拌1小时。将2-溴-6-氟吡啶用四氢呋喃溶解，滴加入到反应体系中。混合物在15℃下搅拌1小时。混合物加水淬灭，用乙酸乙酯萃取。有机相用无水硫酸钠干燥并减压浓缩，残留物用硅胶柱层析(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝10/1)纯化粗产物，得到黄色固体2-溴-6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶(140毫克，产率：32.87％)。LCMS(ESI)：m/z＝338(M+H)+.
步骤30b：4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(化合物0902-54)的制备：氮气保护下，2-溴-6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶(0901-54)(150毫克，0.44毫摩尔，1.0当量)，1-叔丁氧羰基哌嗪(92毫克，0.49毫摩尔，1.1当量)、碳酸铯(290毫克，0.89毫摩尔，2.0当量)、1,1'-联萘-2,2'-双二苯膦(31毫克，0.05毫摩尔，0.1当量)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(28毫克，0.03毫摩尔，0.05当量)的甲苯(15毫升)的混合物在125℃下搅拌过夜。冷却至室温后，将反应液通过硅藻土过滤，固体用乙酸乙酯洗涤。将滤液减压浓缩。残留物用硅胶柱层析(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝10/1)纯化粗产物，得到黄色油状液体4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(71毫克，产率：36.43％)。LCMS(ESI)：m/z＝443(M+H)+.
步骤30c：1-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌嗪盐酸盐(化合物0903-54)的制备：将4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0902-54)(71毫克，0.16毫摩尔，1.0当量)和盐酸的乙酸乙酯溶液(2M，4毫升)的甲醇(4毫升)溶液在40℃下搅拌2小时。混合物减压浓缩，得到粗品1-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌嗪盐酸盐(55毫克,粗品).该产品不需要进一步纯化直接用于下一步。LCMS(ESI)：m/z＝343(M+H)+.
步骤30d：(S)-2-((4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(化合物0904-54)的制备:1-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌嗪盐酸盐(0903-54)(55毫克，0.16毫摩尔，1.2当量)，(S)-2-(氯甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0116-3)(40毫克，0.13毫摩尔，1.0当量)和N,N-二异丙基乙胺(1毫升)的N-甲基吡咯烷酮(10毫升)溶液在60℃的下搅拌过夜。将反不混合物冷却至室温后加水，加乙酸乙酯萃取。有机相用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。残留物用硅胶薄层层析制备板纯化(洗脱剂为：乙酸乙酯：石油醚＝3/1)得黄色油状液体(S)-2-((4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(85毫克，收率：100％)。LCMS(ESI)：m/z＝603(M+H)+.
步骤30e：(S)-2-((4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物54)的制备:(S)-2-((4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0904-58)(85毫克，0.14毫摩尔，1.0当量)和一水合氢氧化锂(18毫克，0.43毫摩尔，3.0当量)的乙腈/水＝5/1(12毫升)混合物在40℃下搅拌过夜。混合物冷却到室温，并减压浓缩。混合物用水洗涤，残留物pH值用1摩尔/升的盐酸调节至6。残留物加乙酸乙酯萃取并减压浓缩。粗产品用硅胶薄层层析制备板纯化(洗脱剂为：二氯甲烷：甲醇＝10/1)，得到黄色固体(S)-2-((4-(6-((4-氯苯并呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(71毫克，收率：86.25％)。LCMS(ESI)：m/z＝588(M+H)+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.14(d,J＝2.2Hz,1H),8.09(s,1H),7.81(d,J＝8.3Hz,1H),7.49–7.42(m,2H),7.38(d,J＝8.0Hz,1H),7.33(d,J＝8.0Hz,1H),7.03(d,J＝2.2Hz,1H),6.31(d,J＝8.1Hz,1H),6.09(d,J＝7.8Hz,1H),5.55(s,2H),5.15–5.08(m,1H),4.71(dd,J＝15.2,7.0Hz,1H),4.59(dd,J＝15.3,3.1Hz,1H),4.49(dd,J＝13.3,8.0Hz,1H),4.37(dt,J＝9.0,5.9Hz,1H),3.92(d,J＝13.5Hz,1H),3.77(d,J＝13.4Hz,1H),3.43(dd,J＝12.0,7.3Hz,4H),3.29–3.24(m,4H),2.73–2.65(m,1H),2.47–2.41(m,1H).
实施例31：(S)-2-((6-(2-(4-氯苯并呋喃-7-基)乙氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物55)的制备(按照方案三线路制备)
步骤31a：2-(4-氯苯并呋喃-7-基)乙烷-1-醇(化合物0201-55)的制备：
Figure BDA0003178251760000761
氮气保护下，往7-(溴甲基)-4-氯苯并呋喃(1克，4.08毫摩尔，1.0当量)和碳酸钾(1.12克，8.16毫摩尔，2当量)的四氢呋喃(10毫升)溶液中加入三甲基硅氰(808毫克，8.16毫摩尔，2当量)。混合物在90℃下搅拌4小时。反应冷却至室温。反应用水淬灭，用乙酸乙酯萃取。有机相用食饱和盐水洗涤，并用无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩。残留物用硅胶柱层析(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝50/1-10/1)纯化，得到黄色油状物2-(4-氯苯并呋喃-7-基)乙腈(880毫克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z＝192(M+H)+.
往2-(4-氯苯并呋喃-7-基)乙腈(880毫克，6.24毫摩尔，1.0当量)的乙醇/水(10/10毫升)溶液中加入氢氧化钾(1.74克，31.2毫摩尔，5当量)。混合物在90℃下搅拌16小时。反应冷却至室温。混合物的pH值用2N盐酸调节至1，之后形成固体沉淀。混合物过滤。残留物用水洗涤和干燥，得到黄色固体2-(4-氯苯并呋喃-7-基)乙酸(510毫克，产率：38.75％)。LCMS(ESI)：m/z＝211(M+H)+.
氮气保护下，在0到10℃之间，往2-(4-氯苯并呋喃-7-基)乙酸(510毫克，2.43毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(10毫升)溶液中滴加硼烷(0.64毫升，10摩尔/升的二甲硫醚，6.375毫摩尔，2.5当量)。混合物在室温下搅拌1小时。反应用甲醇淬灭，并用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，并用无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩。残留物用硅胶柱层析(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝20/1-5/1)纯化粗产物，得到透明油状物2-(4-氯苯并呋喃-7-基)乙烷-1-醇(397毫克，产率：41.18％)。LCMS(ESI)：m/z＝197(M+H)+.
步骤31b：6-((2-(4-氯苯并呋喃-7-基)乙氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯(化合物0303-55)的制备：氮气保护下，在0到10℃之间，在2-(4-氯苯并呋喃-7-基)乙烷-1-醇(0201-55)(338毫克，1.724毫摩尔，1.0当量)的四氢呋喃(20毫升)溶液中加入六甲基二硅基胺基钾(3.5毫升，1摩尔/升的四氢呋喃，3.448毫摩尔，2当量)。混合物在10℃下搅拌45分钟。2-溴-6-氟吡啶(0301-2)(303毫克，1.724毫摩尔，1当量)在10℃时分批加入到反应混合物中，混合物在室温下搅拌1小时。反应用水淬灭，用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，并用无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩。残留物用硅胶柱层析(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝200/1-20/1)纯化，得到黄色固体2-溴-6-(2-(4-氯苯并呋喃-7-基)乙氧基)吡啶(383毫克，产率：63.09％)。LCMS(ESI)：m/z＝352(M+H)+.氮气保护下，上述得到的2-溴-6-(2-(4-氯苯并呋喃-7-基)乙氧基)吡啶(272毫克，0.77毫摩尔，1.05当量)，4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(226毫克，0.73毫摩尔，1当量)，碳酸钠(155毫克，1.46毫摩尔，2.0当量)，二(三苯基膦)二氯化钯(51毫克，0.073毫摩尔，0.1当量)的N,N-二甲基甲酰胺/水＝10/1(11毫升)混合物在92℃下搅拌过夜。在冷却至室温后加水，加乙酸乙酯萃取。有机相用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。残留物用硅胶柱层析(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝20/1-10/1)纯化，得到透明油状物6-((2-(4-氯苯并呋喃-7-基)乙氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯(123毫克，收率：37.05％)。LCMS(ESI)：m/z＝455(M+H)+.
步骤31c：6-((2-(4-氯苯并呋喃-7-基)乙氧基)-1',2',3',6'-四氢-2,4'-联吡啶4-甲基苯磺酸盐(化合物0304-55)的制备：往6-((2-(4-氯苯并呋喃-7-基)乙氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯(0303-55)(100毫克，0.22毫摩尔，1.0当量)的乙酸乙酯(5毫升)溶液中加入对甲苯磺酸一水合物(114毫克，0.66毫摩尔，3当量)。混合物在60℃下搅拌过夜。混合物冷却至室温。混合物减压浓缩。残留物不纯化直接用于下一步(103毫克,粗品)。LCMS(ESI)：m/z＝355(M+H)+.
步骤31d：(S)-2-((6-(2-(4-氯苯并呋喃-7-基)乙氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(化合物0305-55)的制备:将6-((2-(4-氯苯并呋喃-7-基)乙氧基)-1',2',3',6'-四氢-2,4'-联吡啶4-甲基苯磺酸盐(0304-55)(103毫克，0.203毫摩尔，1.2当量)，(S)-2-(氯甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0116-3)(50毫克，0.17毫摩尔，1.0当量)和碳酸钾(94毫克，0.68毫摩尔，4.0当量)的乙腈(10毫升)溶液在60℃的条件下搅拌16小时。将反应混合物冷却至室温后加水，加乙酸乙酯萃取。有机相用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。残留物用硅胶薄层层析制备板纯化(洗脱剂为：乙酸乙酯)得黄色油状物(S)-2-((6-(2-(4-氯苯并呋喃-7-基)乙氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(69毫克，收率：66.34％)。LCMS(ESI)：m/z＝613(M+H)+.
步骤31e：(S)-2-((6-(2-(4-氯苯并呋喃-7-基)乙氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物55)的制备:(S)-2-((6-(2-(4-氯苯并呋喃-7-基)乙氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0604-55)(69毫克，0.11毫摩尔，1.0当量)和一水合氢氧化锂(14毫克，0.33毫摩尔，3当量)的乙腈/水＝5/1(6毫升)混合物在40℃下搅拌过夜。混合物冷却到室温，并减压浓缩。残留物的pH值用1摩尔/升的盐酸调节至6，之后形成固体沉淀。混合物过滤。残留物用水洗。残留物用硅胶薄层层析制备板纯化(洗脱剂为：二氯甲烷/甲醇＝10/1)得到黄色固体(S)-2-((6-(2-(4-氯苯并呋喃-7-基)乙氧基)-3'，6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(27毫克，收率：40.29％)。LCMS(ESI)：m/z＝599(M+H)+.1HNMR(500MHz,DMSO)δ12.72(s,1H),8.25(s,1H),8.08(d,J＝2.2Hz,1H),7.81(dd,J＝8.4,1.4Hz,1H),7.70–7.60(m,2H),7.25(q,J＝8.0Hz,2H),7.03(d,J＝7.4Hz,1H),6.98(d,J＝2.2Hz,1H),6.70(s,1H),6.59(d,J＝8.2Hz,1H),5.06(ddd,J＝14.4,7.3,2.8Hz,1H),4.79(dd,J＝15.2,7.3Hz,1H),4.70–4.55(m,3H),4.46(dd,J＝13.6,7.7Hz,1H),4.35(dt,J＝9.0,5.9Hz,1H),4.07(d,J＝13.6Hz,1H),3.92(d,J＝13.5Hz,1H),3.27–3.21(m,2H),2.80–2.69(m,2H),2.65(ddd,J＝16.2,8.7,5.4Hz,1H),2.51(s,2H),2.44–2.34(m,1H).
实施例32：2-((4-(2-(4-氯苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-((((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-甲酸(化合物56)的制备(按照方案十线路制备)
步骤32a：4-(2,3-二羟基苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(化合物1003-56)的制备:
Figure BDA0003178251760000781
0℃下往3-溴邻苯二酚(1.2克，6.35毫摩尔，1.0当量)和N,N-二异丙基乙胺(2.82毫升，15.87毫摩尔，2.5当量)在二氯甲烷(20毫升)的混合物中逐滴加入2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯(2.65克，15.87毫摩尔，2.5当量)。混合物升到室温并搅拌2小时。减压除去溶剂。残余物在硅胶上进行柱色谱分离(石油醚：乙酸乙酯30：1)，得到无色油状物(((((3-溴-1,2-亚苯基)双(氧基))双(亚甲基))双(氧基))双(乙烷-2，1-二基))双(三甲基硅烷)(2.27克，收率：79％)。TLC：Rf0.5(石油醚:乙酸乙酯＝30:1)。
往(((((3-溴-1,2-亚苯基)双(氧基))双(亚甲基)双(氧基))双(乙烷-2,1-二基))双(三甲基硅烷)(2.27克，5.04毫摩尔，1.0当量)，[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(221毫克，0.302毫摩尔，0.06当量)和碳酸钠(1.60克，15.12毫摩尔，3.0当量)在二氧六环(30毫升)和水(7.5毫升)的混合物中加入4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(1.87克，6.05毫摩尔，1.2当量)。混合物在氮气氛围下加热至85℃并搅拌16小时。减压下除去溶剂。残余物在硅胶上进行柱色谱分离(石油醚∶乙酸乙酯30∶1)，得到淡黄色油状物4-(2,3-双((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲氧基)苯基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(2.37克，产率：85％)。LCMS(ESI)：m/z 552[M+1]+；TLC：Rf0.5(石油醚:乙酸乙酯＝10:1).
往4-(2,3-双((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲氧基)苯基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(1.0克，1.81毫摩尔，1.0当量)在甲醇(15毫升)的混合物中加入钯碳(0.2g)。混合物在氢气球压力下室温搅拌过夜。混合物过滤。滤液在减压下浓缩。残余物在硅胶上进行柱色谱分离(石油醚∶乙酸乙酯30∶1)，得到白色固体4-(2,3-双((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲氧基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.48克，产率：48％)。LCMS(ESI)：m/z554[M+1]+；TLC：Rf0.5(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)。
4-(2,3-双((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲氧基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.1克，1.99毫摩尔，1.0当量)在氯化氢甲醇溶液(4M溶液，15毫升)的混合物在室温下搅拌过夜。减压除去溶剂并在真空下干燥，得到白色固体4-(2,3-二羟基苯基)哌啶盐酸盐(601毫克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z 194[M+1]+；TLC：Rf0.3(二氯甲烷:甲醇＝10:1)。
往4-(2,3-二羟基苯基)哌啶盐酸盐(454毫克，1.99毫摩尔，1.0当量)和碳酸氢钠(502毫克，5.97毫摩尔，3.0当量)在甲醇(6毫升)中的混合物中加入二碳酸二叔丁酯(456毫克，2.09毫摩尔，1.05当量)。混合物在室温下搅拌3小时。减压除去溶剂。残余物经硅胶柱色谱纯化(二氯甲烷∶甲醇30∶1)，得到灰色固体4-(2，3-二羟基苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(583毫克，收率：100％)。LCMS(ESI)：m/z 294[M+1]+；TLC：Rf0.5(二氯甲烷:甲醇＝10:1)。
步骤32b：4-(2-(4-氯苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环-4-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(化合物1004-56)的制备:往4-(2,3-二羟基苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1003-56)(0.25克，0.85毫摩尔，1.0当量)，十二羰基三钌(27毫克，0.043毫摩尔，0.05当量)和碳酸氢钠(72毫克，0.85毫摩尔，1.0当量)在甲苯(10毫升)的混合物中加入4-氯-7-乙炔基苯并呋喃(化合物1101-57)(150毫克，0.85毫摩尔，1.0当量)。混合物在氮气氛围下加热到120℃并搅拌过夜。减压除去溶剂。残余物在硅胶上进行柱色谱分离(石油醚：乙酸乙酯30：1)，得到淡黄色油状物4-(2-(4-氯苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环-4-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(70毫克，收率：18％)。LCMS(ESI)：m/z 470[M+1]+；TLC：Rf0.5(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)。
步骤32c：4-(2-(4-氯苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环-4-基)哌啶盐酸盐(化合物1005-56)的制备:4-(2-(4-氯苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环-4-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1004-56)(70毫克，0.15毫摩尔，1.0当量)在氯化氢二氧六环溶液(4M溶液，1.5毫升)的混合物在室温下搅拌1小时。减压除去溶剂并在真空下干燥，得到白色固体4-(2-(4-氯苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环-4-基)哌啶盐酸盐(61毫克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z 370[M+1]+；TLC：Rf0.3(二氯甲烷:甲醇＝10:1)。
步骤32d：2-((4-(2-(4-氯苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(化合物1006-56)的制备:往4-(2-(4-氯苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环-4-基)哌啶盐酸盐(1005-56)(61毫克，0.15毫摩尔，1.0当量)和(S)-2-(氯甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-甲酸甲酯(0116-3)(44毫克，0.15毫摩尔，1.0当量)在乙腈(5毫升)的混合物中加入碳酸钾(51毫克，0.37毫摩尔，2.5当量)。混合物在60℃加热过夜。减压除去溶剂。残余物在硅胶上进行柱色谱分离(石油醚：乙酸乙酯3：1)，得到白色固体2-((4-(2-(4-氯苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(81毫克，收率：87％)。LCMS(ESI)：m/z 628[M+1]+；TLC：Rf0.5(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)。
步骤32e：2-((4-(2-(4-氯苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物56)的制备:往2-((4-(2-(4-氯苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(1006-56)(81毫克，0.13毫摩尔，1.0当量)在四氢呋喃(5毫升)和水(2毫升)的混合物中加入氢氧化锂一水合物(16毫克，0.39毫摩尔，3.0当量)。混合物在40℃加热过夜。混合物用水(15毫升)稀释。加入1N稀盐酸溶液调节pH＝5然后水层用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(15毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过制备薄层色谱(乙酸乙酯∶甲醇＝10∶1)纯化，得到白色固体2-((4-(2-(4-氯苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(53毫克，收率：66％)。LCMS(ESI)：m/z 614[M+1]+；TLC：Rf0.5(乙酸乙酯：甲醇＝10：1)；熔点：165-167℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.70(s,1H),8.27(d,J＝2.1Hz,1H),8.21(d,J＝6.3Hz,1H),7.80(d,J＝8.5Hz,1H),7.64(d,J＝8.4Hz,1H),7.44(dd,J＝8.1,2.9Hz,1H),7.37(d,J＝8.1Hz,1H),7.06(s,1H),6.75(dd,J＝16.6,4.4Hz,3H),5.17–5.03(m,1H),4.78(dd,J＝15.1,7.2Hz,1H),4.65(d,J＝15.7Hz,1H),4.44(dt,J＝13.0,7.6Hz,1H),4.41–4.32(m,1H),3.96(dd,J＝13.5,3.6Hz,1H),3.78(d,J＝13.5Hz,1H),3.01(s,1H),2.86(d,J＝10.5Hz,1H),2.67(dd,J＝23.9,16.3Hz,2H),2.44(s,1H),2.26(s,1H),2.16(s,4H),1.82–1.67(m,4H).
实施例33：2-((4-(2-(4-氯苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环-4-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲基)-1-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物57)的制备(按照方案十线路制备)
步骤33a：4-氯-7-乙炔基苯并呋喃(化合物1001-57)的制备:
Figure BDA0003178251760000811
2-溴-5-氯苯酚(5.0克，24.1毫摩尔，1.0当量)，2-溴-1,1-二乙氧基乙烷(5.7克，28.9毫摩尔，1.2当量)和碳酸钾(6.7克，48.2毫摩尔，2.0当量)的N,N-二甲基甲酰胺(70毫升)溶液120℃搅拌过夜。冷却到室温后，混合物倒入水中，加入乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗、浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝200/1到100/1)得到黄色油状物1-溴-4-氯-2-(2,2-二乙氧基乙氧基)苯(8.0克，收率：102％)。
氮气保护下，1-溴-4-氯-2-(2,2-二乙氧基乙氧基)苯(8.0克，19.8毫摩尔，1.0当量)和多聚磷酸(12.5克，37.1毫摩尔，1.5当量)的二氯乙烷(150毫升)溶液在72℃下搅拌过夜。冷却到室温后，加入水，混合物搅拌30分钟。分液后，有机层用饱和食盐水洗、浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂为：石油醚)得到无色液体7-溴-4-氯苯并呋喃(4.2克，收率：73.7％)。
氮气保护下，7-溴-4-氯苯并呋喃(2.0克，8.6毫摩尔，1.0当量)，二三苯基膦二氯化钯(303毫克，0.43毫摩尔，0.05当量)，碘化亚铜(41毫克，0.215毫摩尔，0.025当量)，三甲基硅乙炔(4.2克，43.0毫摩尔，5.0当量)和三乙胺(15毫升)的四氢呋喃(20毫升)混合物在90℃下搅拌过夜。冷却到室温后，混合物过滤，滤液浓缩。残留物溶于乙酸乙酯，加入碳酸钾(1.0克)，混合物室温下搅拌2小时。加入水，混合物分液。有机层浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂为：石油醚)得到黄色固体4-氯-7-乙炔基苯并呋喃(1.4克，收率：92.1％)。
步骤33b：4-溴-2-(4-氯苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环(化合物1002-57)的制备:氮气保护下，4-氯-7-乙炔基苯并呋喃(1001-57)(1.3克，7.4毫摩尔，1.0当量)，3-溴-1,2-苯二酚(1.5克，8.1毫摩尔，1.1当量)，碳酸氢钠(622毫克，7.4毫摩尔，1.0当量)和十二羰基钌(236毫克，0.37毫摩尔，0.05当量)的甲苯(50毫升)混合物在120℃下搅拌过夜。冷却到室温后，混合物过滤，滤液真空浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂为：石油醚)得到黄色固体4-溴-2-(4-氯苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环(0.66克，收率：24.4％)。
步骤33c：4-(2-(4-氯苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环-4-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(化合物1004-57)的制备:氮气保护条件下，4-溴-2-(4-氯苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环(1002-57)(660毫克，1.8毫摩尔，1.0当量)，4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(612克，1.98毫摩尔，1.1当量)，[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(132毫克，0.18毫摩尔，0.1当量)和碳酸钠(572毫克，5.4毫摩尔，3.0当量)的二氧六环/水＝10/1(11毫升)混合物在90℃下搅拌过夜。冷却到室温后，加入水和乙酸乙酯。混合物分液，有机层真空浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝200/1到30/1)得到黄色固体4-(2-(4-氯苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环-4-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(680毫克，收率：80.5％)。LCMS(ESI)：m/z＝468(M+H)+.
步骤33d：4-(2-(4-氯苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环-4-基)-1,2,3,6-四氢吡啶盐酸盐(化合物1005-57)的制备:4-(2-(4-氯苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环-4-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(1004-57)(100毫克，0.21毫摩尔，1.0当量)的4摩尔每升盐酸二氧六环(4毫升)溶液在室温下搅拌过夜。真空下旋出溶剂得到黄色固体4-(2-(4-氯苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环-4-基)-1,2,3,6-四氢吡啶盐酸盐，该产品不需要进一步纯化直接用于下一步。
步骤33e：2-((4-(2-(4-氯苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环-4-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲基)-1-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(化合物1006-57)的制备:将4-(2-(4-氯苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环-4-基)-1,2,3,6-四氢吡啶盐酸盐(1005-57)(80克，0.2毫摩尔，1.0当量)，(S)-2-(氯甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0116-3)(35克，0.12毫摩尔，0.6当量)和碳酸钾(138毫克，1.0毫摩尔，5.0当量)的乙腈(6毫升)溶液在60℃下搅拌过夜。冷却到室温后，加入乙酸乙酯和水，混合物分液。有机层浓缩，残留物用硅胶薄层层析制备板纯化(洗脱剂为：乙酸乙酯/甲醇＝30/1)得白色固体2-((4-(2-(4-氯苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环-4-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲基)-1-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(55毫克，收率：44.4％)。LCMS(ESI)：m/z＝626(M+H)+.
步骤33f：2-((4-(2-(4-氯苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环-4-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲基)-1-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物57)的制备:2-((4-(2-(4-氯苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环-4-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲基)-1-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(1006-57)(55毫克，0.09毫摩尔，1.0当量)和一水合氢氧化锂(19毫克，0.45毫摩尔，5.0当量)的乙腈/水＝5/1(6毫升)混合物在40℃下搅拌过夜。冷却到室温后，加入水，加入1.0摩尔每升的盐酸调节pH＝6-7。加入二氯甲烷萃取，有机层真空浓缩。残留物用硅胶薄层层析制备板纯化(洗脱剂为：二氯甲烷/甲醇＝12/1)得白色固体2-((4-(2-(4-氯苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环-4-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲基)-1-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(40毫克，收率：74.1％)。LCMS(ESI)：m/z＝612(M+H)+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.53(s,1H),8.25(s,1H),8.21(d,J＝2.2Hz,1H),7.82(d,J＝8.4Hz,1H),7.65(d,J＝8.1Hz,1H),7.43(d,J＝8.1Hz,1H),7.36(d,J＝8.1Hz,1H),7.06(d,J＝2.2Hz,1H),6.90–6.79(m,3H),6.39(d,J＝3.5Hz,1H),5.11–5.02(m,1H),4.83–4.74(m,1H),4.64(d,J＝13.1Hz,1H),4.49–4.40(m,1H),4.34(tt,J＝11.8,5.9Hz,1H),4.06(d,J＝13.7Hz,1H),3.92(d,J＝13.6Hz,1H),3.25–3.19(m,2H),2.75(s,2H),2.65(dd,J＝17.6,8.4Hz,1H),2.54(s,1H),2.47–2.35(m,2H),2.15(s,3H).
实施例34：2-((4-(2-(4-氯苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环-4-基)哌啶-1-基)甲基)-3-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸(化合物58)(按照方案十线路制备)
步骤34a：2-((4-(2-(4-氯苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环-4-基)哌啶-1-基)甲基)-3-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯(化合物1006-58)的制备:往4-(2-(4-氯苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环-4-基)哌啶盐酸盐(1005-56)(33毫克，0.08毫摩尔，1.0当量)和(S)-2-(氯甲基)-3-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-甲酸甲酯(0116-1)(24毫克，0.08毫摩尔，1.0当量)在乙腈(4毫升)的混合物中加入碳酸钾(28毫克，0.20毫摩尔，2.5当量)。混合物在60℃加热过夜。减压除去溶剂。残余物通过制备薄层色谱(乙酸乙酯：甲醇60：1)纯化，得到淡黄色固体2-((4-(2-(4-氯苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环-4-基)哌啶-1-基)甲基)-3-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯(29毫克，收率：57％)。LCMS(ESI)：m/z 629[M+1]+；TLC：Rf0.5(二氯甲烷:甲醇＝30:1)。
步骤34b：2-((4-(2-(4-氯苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环-4-基)哌啶-1-基)甲基)-3-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸(化合物58)的制备:往2-((4-(2-(4-氯苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环-4-基)哌啶-1-基)甲基)-3-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯(1006-58)(29毫克，0.05毫摩尔，1.0当量)在四氢呋喃(4毫升)和水(2毫升)的混合物中加入氢氧化锂一水合物(6毫克，0.15毫摩尔，3.0当量)。混合物在40℃加热过夜。混合物用水(15毫升)稀释。加入1N稀盐酸溶液调节pH＝5然后水层用乙酸乙酯(20毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过制备薄层色谱(二氯甲烷∶甲醇＝6∶1)纯化，得到白色固体2-((4-(2-(4-氯苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环-4-基)哌啶-1-基)甲基)-3-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸(18毫克，收率：64％)。LCMS(ESI)：m/z 615[M+1]+；TLC：Rf0.5(二氯甲烷：甲醇＝6：1)；熔点：129-132℃。1HNMR(500MHz,DMSO)δ8.22(s,1H),8.08(s,1H),7.99(d,J＝7.5Hz,1H),7.44(d,J＝8.0Hz,1H),7.37(d,J＝8.0Hz,1H),7.06(s,1H),6.76(d,J＝11.1Hz,3H),5.19(s,1H),4.82(s,1H),4.72(s,1H),4.45(s,1H),4.36(s,1H),3.98(s,1H),3.87(d,J＝13.9Hz,1H),2.99(s,1H),2.90(s,1H),2.67(s,2H),2.52(s,1H),2.24(dd,J＝26.5,14.2Hz,2H),2.17(d,J＝12.3Hz,3H),1.87–1.63(m,4H).
实施例35：2-((4-(2-(4-氰基苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物61)的制备(按照方案十线路制备)
步骤35a：7-乙炔基苯并呋喃-4-腈(化合物1001-61)的制备：
Figure BDA0003178251760000841
将7-(羟甲基)苯并呋喃-4-腈(441毫克，2.55毫摩尔，1.0当量)和二氧化锰(3.33克，38.26毫摩尔，15.0当量)的二氯甲烷(10毫升)混合物在室温下搅拌过夜。反应液通过硅藻土过滤，并用二氯甲烷(15毫升)洗涤。滤液减压浓缩得到粗产品。粗产品用硅胶柱层析纯化(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝10/1)得到白色固体7-甲酰基苯并呋喃-4-腈(288毫克，产率：65.7％)。LCMS(ESI)：m/z＝172(M+H)+.
氮气保护条件下，将7-甲酰基苯并呋喃-4-腈(251毫克，1.47毫摩尔，1.0当量)，(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(338毫克，1.76毫摩尔，1.2当量)和碳酸钾(405毫克，2.94毫摩尔，2.0当量)的甲醇(6毫升)混合物搅拌过夜。反应用水淬灭，并用乙酸乙酯萃取。有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩。残留物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝10/1)得到白色固体7-乙炔基苯并呋喃-4-腈(228毫克，产率：92.3％)。LCMS(ESI)：m/z＝168(M+H)+.
步骤35b：4-(2-(4-氰基苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环-4-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(化合物1004-61)的制备：氮气保护条件下，7-乙炔基苯并呋喃-4-腈(1001-61)(228毫克，1.37毫摩尔，1.0当量)，4-(2,3-二羟基苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1003-56)(442毫克，1.51毫摩尔，1.1当量)、碳酸氢钠(115毫克，1.37毫摩尔，1.0当量)和十二羰基三钌(44毫克，0.07毫摩尔，0.05当量)的甲苯(6毫升)混合物在120℃下回流过夜。冷却至室温后，将反应液通过硅藻土过滤，并用乙酸乙酯(12毫升)洗涤。将滤液用水(15毫升)稀释，并用乙酸乙酯(10毫升)萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。用柱色谱法(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝10/1)纯化粗产物，得到白色固体4-(2-(4-氰基苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环-4-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(80毫克，产率：12.7％)。LCMS(ESI)：m/z＝461(M+H)+.
步骤35c：7-(2-甲基-4-(哌啶-4-基)苯并[d][1,3]二氧杂戊环-2-基)苯并呋喃-4-腈盐酸盐(化合物1005-61)的制备：往4-(2-(4-氰基苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环-4-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1004-61)(80毫克，0.17毫摩尔，1.0当量)的二氧六环(2毫升)溶液加入氯化氢的二氧六环溶液(4.0摩尔/升,4毫升)，混合物在室温下搅拌过夜。减压除去溶剂得到粗产品7-(2-甲基-4-(哌啶-4-基)苯并[d][1,3]二氧杂戊环-2-基)苯并呋喃-4-腈盐酸盐。该产品不需要进一步纯化直接用于下一步。LCMS(ESI)：m/z＝361(M+H)+.
步骤35d：2-((4-(2-(4-氰基苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(化合物1006-61)的制备:将7-(2-甲基-4-(哌啶-4-基)苯并[d][1,3]二氧杂戊环-2-基)苯并呋喃-4-腈盐酸盐(1005-61)(80毫克，假定为0.17毫摩尔，1.0当量)、(S)-2-(氯甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0116-3)(52毫克，0.17毫摩尔，1.0当量)和碳酸钾(96毫克，0.70毫摩尔，4.0当量)的乙腈(5毫升)的混合物在60℃下搅拌4小时。将反应混合物冷却至室温后加水，加乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。残留物用硅胶薄层层析制备板纯化(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝1/10)得白色固体2-((4-(2-(4-氰基苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(50毫克，收率：46.7％)。LCMS(ESI)：m/z＝619(M+H)+.
步骤35e：2-((4-(2-(4-氰基苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物61)的制备:将2-((4-(2-(4-氰基苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(1006-61)(50毫克，0.08毫摩尔，1.0当量)和一水合氢氧化锂(7毫克，0.16毫摩尔，2.0当量)的乙腈/水＝5/1(3毫升)混合物在40℃下搅拌过夜。混合物冷却到室温后，用1摩尔/升的盐酸调节pH约至6，然后形成固体沉淀物。浆液用水(12毫升)稀释，搅拌4小时，然后通过过滤收集固体。固体用水洗涤，然后在真空下干燥。将固体溶解在二氯甲烷/甲醇＝1/2(5毫升)中，然后过滤，将滤液用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。残留物真空干燥得到白色固体2-((4-(2-(4-氰基苯并呋喃-7-基)-2-甲基苯并[d][1,3]二氧杂戊环-4-基)哌啶-1-基)甲基)-1-(((S)-氧杂环丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(40毫克，收率：81.6％)。LCMS(ESI)：m/z＝605(M+H)+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.72(s,1H),8.38(dd,J＝7.9,2.2Hz,1H),8.27(d,J＝3.0Hz,1H),7.82(t,J＝7.9Hz,2H),7.64(d,J＝8.3Hz,1H),7.59(dd,J＝7.9,2.9Hz,1H),7.24(t,J＝2.1Hz,1H),6.79(dd,J＝6.6,3.4Hz,2H),6.77–6.73(m,1H),5.12(tt,J＝12.1,3.6Hz,1H),4.78(dd,J＝14.6,6.6Hz,1H),4.65(dd,J＝12.5,4.7Hz,1H),4.50–4.42(m,1H),4.37(td,J＝12.2,6.1Hz,1H),3.96(dd,J＝13.5,4.7Hz,1H),3.79(d,J＝13.6Hz,1H),3.02(d,J＝9.2Hz,1H),2.87(d,J＝8.9Hz,1H),2.68(dt,J＝18.9,6.5Hz,2H),2.53(d,J＝8.0Hz,1H),2.48–2.42(m,1H),2.25(d,J＝10.9Hz,1H),1.74(dd,J＝29.5,15.3Hz,4H).
实施例36生物活性试验
本发明所用的对照化合物为PF-06882961，结构如下：
Figure BDA0003178251760000861
并且，本发明还合成了以下4个对照化合物：
Figure BDA0003178251760000862
其合成方法如下：
1.(S)-2-((6-(苯并[d][1,3]二氧杂戊环-5-基甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物24067)的制备
步骤1-1：2-(苯并[d][1,3]二氧杂戊环-5-基甲氧基)-6-溴吡啶的制备：
Figure BDA0003178251760000871
在氮气保护下，将(苯并[d][1,3]二氧杂戊环-5-基)甲醇(304毫克，2.0毫摩尔，1.0当量)加入到无水四氢呋喃(10毫升)中，冷却至0℃。将1M六甲基二硅基氨基钾的四氢呋喃溶液(4.0毫升，4.0毫摩尔，2.0当量)滴加到混合物中，在0℃下搅拌一小时。将2-溴-6-氟吡啶(388毫克，2.2毫摩尔，1.1当量)的四氢呋喃溶液滴加到上述混合物中，在室温下搅拌一小时。加入氯化铵水溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取。有机相经过水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩，经过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝20/1)得到白色固体2-(苯并[d][1,3]二氧杂戊环-5-基甲氧基)-6-溴吡啶(600毫克，收率：97.4％)。LCMS(ESI)：m/z＝308(M+H)+.
步骤1-2：6-(苯并[d][1,3]二氧杂戊环-5-基甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯的制备：
Figure BDA0003178251760000872
在氮气保护下，将2-(苯并[d][1,3]二氧杂戊环-5-基甲氧基)-6-溴吡啶(600毫克，1.95毫摩尔，1.0当量)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(723毫克，2.34毫摩尔，1.2当量)、二氯二(三苯基膦)钯(69毫克，0.098毫摩尔，0.05当量)和碳酸钠(414毫克，3.9毫摩尔，2.0当量)加入到甲苯(20毫升)、乙醇(10毫升)和水(10毫升)的混合溶剂中，在110℃下搅拌反应两小时。用乙酸乙酯萃取，经水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，有机相减压浓缩，经过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝10/1到3/1)得到无水油状物6-(苯并[d][1,3]二氧杂戊环-5-基甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯(815毫克，收率：96％)。LCMS(ESI)：m/z＝411(M+H)+。
步骤1-3：(S)-2-((6-(苯并[d][1,3]二氧杂戊环-5-基甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯的制备：
Figure BDA0003178251760000881
在室温下，将6-(苯并[d][1,3]二氧杂戊环-5-基甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯(200毫克，0.49毫摩尔，1.8当量)溶解于5毫升二氧六环中，加入1毫升4M氯化氢的二氧六环溶液，混合物在室温下搅拌50分钟。混合物经过减压浓缩至干，所得残留物加入到5毫升N-甲基吡咯烷酮。加入1毫升二异丙基乙胺和(S)-2-(氯甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(80毫克，0.27毫摩尔，1.0当量)，混合物在60℃下搅拌过夜。加入乙酸乙酯，用水和饱和食盐水洗，经过无水硫酸钠干燥，有机相减压浓缩，经制备薄层色谱纯化(展开剂：石油醚/乙酸乙酯＝1/1)得到黄色固体(S)-2-((6-(苯并[d][1,3]二氧杂戊环-5-基甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(46毫克，收率：29.8％)。LCMS(ESI)：m/z＝569(M+H)+。
步骤1-4:(S)-2-((6-(苯并[d][1,3]二氧杂戊环-5-基甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物24067)的制备：
Figure BDA0003178251760000882
将(S)-2-((6-(苯并[d][1,3]二氧杂戊环-5-基甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(46毫克，0.081毫摩尔，1.0当量)和一水合氢氧化锂(11毫克，0.243毫摩尔，3.0当量)加入到5毫升乙腈和1毫升水的混合溶剂中，混合物在40℃下搅拌过夜。混合物冷却到室温，并减压浓缩。加入稀硫酸调节残留物的pH值至6，加入乙酸乙酯萃取，用饱和食盐水洗。有机相经过无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用制备薄层色谱纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝15/1)得到黄色固体(S)-2-((6-(苯并[d][1,3]二氧杂戊环-5-基甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(22毫克，收率：48.8％)。LCMS(ESI)：m/z＝555(M+H)+,熔点：144～146℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.71(s,1H),8.26(s,1H),7.81(d,J＝8.4Hz,1H),7.65(dd,J＝8.0,5.8Hz,2H),7.06(d,J＝7.5Hz,1H),7.00(s,1H),6.93(d,J＝8.0Hz,1H),6.87(d,J＝7.9Hz,1H),6.75(s,1H),6.68(d,J＝8.2Hz,1H),5.99(s,2H),5.26(s,2H),5.06(dt,J＝7.2,4.8Hz,1H),4.80(dd,J＝15.2,7.2Hz,1H),4.66(dd,J＝15.2,2.3Hz,1H),4.47(dd,J＝13.7,7.6Hz,1H),4.36(dt,J＝8.9,5.9Hz,1H),4.07(d,J＝13.5Hz,1H),3.93(d,J＝13.5Hz,1H),3.21(d,J＝17.6Hz,2H),2.81–2.71(m,2H),2.66(dt,J＝16.3,7.7Hz,1H),2.54(s,2H),2.44–2.34(m,1H).
2.(S)-2-((6-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂戊环-5-基甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物24068)的制备
步骤2-1：2-溴-6-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂戊环-5-基甲氧基)吡啶的制备：
Figure BDA0003178251760000891
在氮气保护下，将2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂戊环-5-基甲醇(376毫克，2.0毫摩尔，1.0当量)加入到无水四氢呋喃(10毫升)中，冷却至0℃。将1M六甲基二硅基氨基钾的四氢呋喃溶液(4.0毫升，4.0毫摩尔，2.0当量)滴加到混合物中，在0℃下搅拌一小时。将2-溴-6-氟吡啶(388毫克，2.2毫摩尔，1.1当量)的四氢呋喃溶液滴加到上述混合物中，在室温下搅拌一小时。加入氯化铵水溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取。有机相经过水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩，经过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝20/1)得到无色固体2-溴-6-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂戊环-5-基甲氧基)吡啶(626毫克，收率：90.9％)。LCMS(ESI)：m/z＝344(M+H)+.
步骤2-2：6-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂戊环-5-基甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯的制备：
Figure BDA0003178251760000892
在氮气保护下，将2-溴-6-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂戊环-5-基甲氧基)吡啶(626毫克，1.82毫摩尔，1.0当量)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(675毫克，2.18毫摩尔，1.2当量)、二氯二(三苯基膦)钯(64毫克，0.09毫摩尔，0.05当量)和碳酸钠(386毫克，3.64毫摩尔，2.0当量)加入到甲苯(20毫升)、乙醇(10毫升)和水(10毫升)的混合溶剂中，在110℃下搅拌反应两小时。用乙酸乙酯萃取，经水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，有机相减压浓缩，经过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝10/1到3/1)得到黄色固体6-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂戊环-5-基甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯(800毫克，收率：98.4％)。LCMS(ESI)：m/z＝447(M+H)+。
步骤2-3：(S)-2-((6-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂戊环-5-基甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯的制备：
Figure BDA0003178251760000901
在室温下，将6-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂戊环-5-基甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯(300毫克，0.67毫摩尔，3.3当量)溶解于5毫升二氧六环中，加入1毫升4M氯化氢的二氧六环溶液，混合物在室温下搅拌60分钟。混合物经过减压浓缩至干，所得残留物加入到5毫升N-甲基吡咯烷酮。加入1毫升二异丙基乙胺和(S)-2-(氯甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(60毫克，0.20毫摩尔，1.0当量)，混合物在60℃下搅拌过夜。加入乙酸乙酯，用水和饱和食盐水洗，经过无水硫酸钠干燥，有机相减压浓缩，经制备薄层色谱纯化(展开剂：乙酸乙酯)得到黄色油状物(S)-2-((6-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂戊环-5-基甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(57毫克，收率：46.3％)。LCMS(ESI)：m/z＝605(M+H)+。
步骤2-4：(S)-2-((6-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂戊环-5-基甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物24068)的制备：
Figure BDA0003178251760000902
将(S)-2-((6-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂戊环-5-基甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(57毫克，0.094毫摩尔，1.0当量)和一水合氢氧化锂(12毫克，0.284毫摩尔，3.0当量)加入到5毫升乙腈和1毫升水的混合溶剂中，混合物在40℃下搅拌过夜。混合物冷却到室温，并减压浓缩。加入稀硫酸调节残留物的pH值至6，加入乙酸乙酯萃取，用饱和食盐水洗。有机相经过无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用制备薄层色谱纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝12/1)得到黄色固体(S)-2-((6-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧杂戊环-5-基甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(36毫克，收率：64.8％)。LCMS(ESI)：m/z＝591(M+H)+,熔点：102～104℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.69(s,1H),8.26(s,1H),7.81(d,J＝8.4Hz,1H),7.67(dd,J＝12.3,7.9Hz,2H),7.49(s,1H),7.38(d,J＝8.2Hz,1H),7.30(d,J＝8.2Hz,1H),7.07(d,J＝7.4Hz,1H),6.78–6.68(m,2H),5.36(s,2H),5.07(d,J＝7.1Hz,1H),4.80(dd,J＝15.1,7.2Hz,1H),4.65(d,J＝14.8Hz,1H),4.46(dd,J＝13.9,6.9Hz,1H),4.36(dd,J＝14.2,6.2Hz,1H),4.07(d,J＝13.5Hz,1H),3.93(d,J＝13.5Hz,1H),3.21(d,J＝17.1Hz,2H),2.75(s,2H),2.66(dd,J＝17.6,7.9Hz,1H),2.52(s,2H),2.39(dd,J＝17.6,8.5Hz,1H).
3.(S)-2-((6-((1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物24069)的制备
步骤3-1：(1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)甲醇的制备：
Figure BDA0003178251760000911
在氮气保护下，将1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(300毫克，1.7毫摩尔，1.0当量)加入到无水四氢呋喃(10毫升)中，冷却至0℃。将氢化锂铝(260毫克，6.8毫摩尔，4.0当量)加入到混合物中，在室温下搅拌三小时。在冰浴下，依次滴加0.26毫升水、0.26毫升15％氢氧化钠水溶液和0.78毫升水，升至室温，加入无水硫酸钠搅拌，抽滤，滤液减压浓缩，经过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝20/1)得到白色固体(1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)甲醇(126毫克，收率：45.6％)。LCMS(ESI)：m/z＝163(M+H)+.
步骤3-2：6-(((6-溴吡啶-2-基)氧基)甲基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑的制备：
Figure BDA0003178251760000912
在氮气保护下，将(1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)甲醇(159毫克，1.0毫摩尔，1.0当量)加入到无水四氢呋喃(10毫升)中，冷却至0℃。将1M六甲基二硅基氨基钾的四氢呋喃溶液(2.0毫升，2.0毫摩尔，2.0当量)滴加到混合物中，在0℃下搅拌一小时。将2-溴-6-氟吡啶(194毫克，1.1毫摩尔，1.1当量)的四氢呋喃溶液滴加到上述混合物中，在室温下搅拌一小时。加入氯化铵水溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取。有机相经过水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩，经过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝20/1)得到白色固体6-(((6-溴吡啶-2-基)氧基)甲基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑(288毫克，收率：91.1％)。LCMS(ESI)：m/z＝318(M+H)+.
步骤3-3：6-(1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯的制备：
Figure BDA0003178251760000921
在氮气保护下，将6-(((6-溴吡啶-2-基)氧基)甲基)-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑(288毫克，0.91毫摩尔，1.0当量)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(337毫克，1.09毫摩尔，1.2当量)、二氯二(三苯基膦)钯(32毫克，0.046毫摩尔，0.05当量)和碳酸钠(193毫克，1.82毫摩尔，2.0当量)加入到甲苯(10毫升)、乙醇(5毫升)和水(5毫升)的混合溶剂中，在110℃下搅拌反应两小时。用乙酸乙酯萃取，经水和饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，有机相减压浓缩，经过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝33/1)得到黄色固体6-(1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯(374毫克，收率：97.3％)。LCMS(ESI)：m/z＝421(M+H)+。
步骤3-4：(S)-2-((6-(1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯的制备：
Figure BDA0003178251760000922
在室温下，将6-(1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯(187毫克，0.45毫摩尔，2.25当量)溶解于5毫升二氧六环中，加入1毫升4M氯化氢的二氧六环溶液，混合物在室温下搅拌60分钟。混合物经过减压浓缩至干，所得残留物加入到5毫升N-甲基吡咯烷酮。加入1毫升二异丙基乙胺和(S)-2-(氯甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(60毫克，0.20毫摩尔，1.0当量)，混合物在60℃下搅拌过夜。加入乙酸乙酯，用水和饱和食盐水洗，经过无水硫酸钠干燥，有机相减压浓缩，经制备薄层色谱纯化(展开剂：二氯甲烷/甲醇＝15/1)得到黄色油状物(S)-2-((6-(1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(67毫克，收率：57.8％)。LCMS(ESI)：m/z＝579(M+H)+。
步骤3-5:(S)-2-((6-((1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物24069)的制备：
Figure BDA0003178251760000931
将(S)-2-((6-(1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-5-基甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(67毫克，0.116毫摩尔，1.0当量)和一水合氢氧化锂(19毫克，0.46毫摩尔，4.0当量)加入到5毫升乙腈和1毫升水的混合溶剂中，混合物在40℃下搅拌过夜。混合物冷却到室温，并减压浓缩。加入稀硫酸调节残留物的pH值至6，加入乙酸乙酯萃取，用饱和食盐水洗。有机相经过无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用制备薄层色谱纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝12/1)得到黄色固体(S)-2-((6-((1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(41毫克，收率：62.5％)。LCMS(ESI)：m/z＝565(M+H)+,熔点：135～137℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.61(s,1H),8.26(s,1H),8.17(s,1H),7.82(dd,J＝8.4,1.5Hz,1H),7.70–7.64(m,3H),7.62(d,J＝8.2Hz,1H),7.31(dd,J＝8.3,1.3Hz,1H),7.06(d,J＝7.4Hz,1H),6.78(s,1H),6.71(d,J＝8.2Hz,1H),5.49(s,2H),5.07(ddd,J＝14.5,7.3,2.8Hz,1H),4.80(dd,J＝15.3,7.3Hz,1H),4.66(dd,J＝15.2,2.7Hz,1H),4.47(dt,J＝14.0,7.1Hz,1H),4.36(dt,J＝9.0,5.9Hz,1H),4.08(d,J＝13.5Hz,1H),3.97–3.90(m,1H),3.81(s,3H),3.26(d,J＝12.6Hz,2H),2.80–2.74(m,2H),2.70–2.62(m,1H),2.60–2.53(m,2H),2.45–2.38(m,1H).
4.(S)-2-((6-((2，3-二氢苯并[b][1，4]二氧杂环己烯-6-基)甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物24070)的制备步骤4-1：6-氯-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯的制备：
Figure BDA0003178251760000932
氮气保护条件下，将2-溴-6-氯吡啶(1.0克，5.20毫摩尔，1.0当量),4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(1.6克，5.20毫摩尔，1.0当量)，1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯和碳酸钠加入到二氧六环与水(10:1)的混合溶剂(11毫升)中，在90℃搅拌过夜。反应液冷却至室温，然后用水淬灭，加入乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，并用无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩，残留物用硅胶柱层析(洗脱剂为：石油醚/乙酸乙酯＝10/1)纯化，得到黄色固体6-氯-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯(3.26克，收率：214％)。LCMS(ESI)：m/z＝295(M+H)+.
步骤4-2：6-氯-1',2',3',6'-四氢-2,4'-联吡啶对甲苯磺酸盐的制备：
Figure BDA0003178251760000941
6-氯-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯(2.94毫克，9.99毫摩尔，1.0当量)和对甲苯磺酸(4.3克，24.97毫摩尔，2.5单量)的乙酸乙酯混合物(50毫升)在60℃下搅拌30分钟。将反应液过滤，滤饼得到白色固体6-氯-1',2',3',6'-四氢-2,4'-联吡啶对甲苯磺酸盐(232毫克，产率12％)。该产品不需要进一步纯化直接用于下一步。
步骤4-3：(S)-2-((6-氯-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯的制备：
Figure BDA0003178251760000942
将6-氯-1',2',3',6'-四氢-2,4'-联吡啶对甲苯磺酸盐(232毫克，0.634毫摩尔，1.2当量)和碳酸钾(291毫克，2.11毫摩尔，4.0单量)的乙腈(10毫升)混合物加热至60℃，直到pH到7～8，然后将(S)-2-(氯甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(150毫克，0.528毫摩尔，1.0单量)加入到混合物并搅拌过夜。冷却至室温后，反应用水淬灭，用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，并用无水硫酸钠干燥。将有机相减压浓缩，得到(S)-2-((6-氯-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(188.5毫克，收率：81.74％)为黄色固体。LCMS(ESI)：m/z＝453.9(M+H)+.
步骤4-4：(S)-2-((6-((2，3-二氢苯并[b][1，4]二氧杂环己烯-6-基)甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯的制备：
Figure BDA0003178251760000943
将(S)-2-((6-氯-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(188.5毫克，0.417毫摩尔，1.0当量)，(2，3-二氢苯并[b][1，4]二氧杂环己烯-6-基)甲醇(83.1毫克，0.500毫摩尔，1.2当量)，三(二亚苄基丙酮)二钯(19.23毫克，0.021毫摩尔，0.05当量)，2-双环已基膦-2',6'-二异丙氧基联苯(19.46毫克，0.0417毫摩尔，0.1当量)和碳酸铯(382.86毫克，1.175毫摩尔，2.5当量)的甲苯(70毫升)的混合物在120℃下搅拌过夜。冷却至室温后，将反应液过滤并将滤液减压浓缩。残留物用硅胶薄层层析制备板纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝1/2)得黄色固体化合物(S)-2-((6-((2，3-二氢苯并[b][1，4]二氧杂环己烯-6-基)甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(20毫克，产率8.44％)。LCMS(ESI)：m/z＝583.6(M+H)+.
步骤4-5：(S)-2-((6-((2，3-二氢苯并[b][1，4]二氧杂环己烯-6-基)甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(化合物24070)的制备：
Figure BDA0003178251760000951
将(S)-2-((6-((2，3-二氢苯并[b][1，4]二氧杂环己烯-6-基)甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(20毫克，0.034毫摩尔，1.0当量)和一水合氢氧化锂(2.85毫克，0.068毫摩尔，2.0单量)的乙腈/水＝5/1(6毫升)的混合物在40℃搅拌过夜。然后将混合物冷却至室温，通过加入1.0M硫酸将pH调节至约6，之后形成固体沉淀。将混合物过滤。残留物用水洗。混合物用甲醇打浆得到黄色固体(S)-2-((6-((2，3-二氢苯并[b][1，4]二氧杂环己烯-6-基)甲氧基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧杂环丁烷-2-基甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(18毫克，产率92.4％)。LCMS(ESI)：m/z＝569(M+H)+.1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.67(s,1H),8.26(s,1H),7.81(dd,J＝8.4,1.2Hz,1H),7.65(t,J＝8.2Hz,2H),7.05(d,J＝7.5Hz,1H),6.92(d,J＝1.8Hz,1H),6.89(dd,J＝8.2,1.9Hz,1H),6.81(d,J＝8.2Hz,1H),6.74(s,1H),6.67(d,J＝8.2Hz,1H),5.24(s,2H),5.07(qd,J＝7.2,2.8Hz,1H),4.80(dd,J＝15.2,7.3Hz,1H),4.65(dd,J＝15.2,2.6Hz,1H),4.47(dd,J＝13.6,7.7Hz,1H),4.36(dt,J＝8.9,5.9Hz,1H),4.20(s,4H),4.07(d,J＝13.5Hz,1H),3.93(d,J＝13.5Hz,1H),3.23(s,2H),2.79–2.72(m,2H),2.66(ddd,J＝8.8,8.2,5.5Hz,1H),2.54(s,2H),2.40(ddd,J＝16.1,11.2,7.1Hz,1H).
一、hGLP-1R 293Ta细胞株中环磷酸腺苷(cAMP)水平测定
1.实验材料
Figure BDA0003178251760000952
Figure BDA0003178251760000961
2.实验原理
Cisbio公司的环磷酸腺苷检测试剂盒是一种竞争性免疫分析方法，旨在测量细胞内环磷酸腺苷的积累。该原理基于
Figure BDA0003178251760000962
技术，细胞产生的天然环磷酸腺苷或未标记的环磷酸腺苷(标准曲线)与d2标记的环磷酸腺苷(红色受体)竞争结合单克隆环磷酸腺苷Europium Cryptate标记抗体(Europium供体)。特定信号与标准品或样品中的环磷酸腺苷浓度成反比。
对于所有其他HTRF分析，荧光比(665nm/620nm)的计算消除了任何可能的光物理干扰，这意味着该分析不受实验培养基条件(例如培养基，血清，生物素，有色化合物等)的影响。
3.实验准备
1)hGLP-1R 293Ta稳转细胞株构建：
a)委托苏州金唯智生物科技有限公司合成hGLP-1R全长序列，并与慢病毒载体pLEX-MCS进行连接。
b)将连接hGLP-1R序列的慢病毒质粒pLEX-MCS分别转染293Ta细胞产生慢病毒；
c)用慢病毒感染293Ta细胞，用嘌呤霉素进行筛选从而得到含hGLP-1R序列的293Ta稳转细胞系。
2)试剂准备：
a)配制环磷酸腺苷检测试剂(试剂需要置于室温30min)
Figure BDA0003178251760000963
b)3-异丁基-1-甲基黄嘌呤：3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(500mM)用DMSO稀释到50mM，分装20ul每管，4℃保存。20ul加2ml刺激Buffer 1稀释为0.5mM使用。
4.细胞实验
1)化合物稀释:2mM母液用DMSO稀释到200nM(40X)，然后取2ul加38ul刺激Buffer1(含3-异丁基-1-甲基黄嘌呤0.5mM)稀释到10nM(2X)，反应体系终浓度为5nM。用刺激Buffer 1(含3-异丁基-1-甲基黄嘌呤0.5mM)依次5倍稀释，共8个浓度点。
2)消化离心收集hGLP-1R 293Ta细胞，加入DMEM培养基(含10％FBS)吹打重悬细胞，用Scepter自动细胞计数仪(Millipore#PHCC00000)计数。调整细胞数为1X106cells/ml，96孔微孔白板每孔加入5ul(即每孔5000个细胞)。
3)向96孔中加入5ul稀释好的8个浓度梯度2X化合物，另在一孔中加入5ul刺激Buffer 1(含3-异丁基-1-甲基黄嘌呤0.5mM)作为对照。盖上盖子，37℃培养30min。
4)取50ul环磷酸腺苷-d2和50ulAnti-环磷酸腺苷Eu-Cryptate分别加入200ul裂解&检测Buffer 1配置工作液。96孔板每孔加入5ul环磷酸腺苷-d2工作液，然后加入5ulAnti-环磷酸腺苷Eu-Cryptate工作液。混匀，用封板膜封好96孔板，室温孵育2小时。
5)取下封板膜，用帝肯INFINITE F NANO+酶标仪读取HTRF信号。用公式Ratio＝Signal 665nm/Signal 620nm*10000计算每个单孔的受体和供体激发信号的比率。以HTRF信号比率以及对应的化合物浓度，用GraphPad Prism软件处理数据，通过S形剂量-反应曲线拟合计算EC50值。测试结果如表1所示。
表1.测定化合物对hGLP-1R 293Ta细胞环磷酸腺苷水平影响
Figure BDA0003178251760000971
Figure BDA0003178251760000981
从上表中可以看出，本发明的化合物可激活hGLP-1R 293Ta细胞中cAMP水平，且比对照化合物PF-06882961、24067、24068、24069和24070的活性更高。
二、药代动力学(PK)实验
1.实验方法
雄性SD大鼠，体重180-320克，试验前禁食过夜。待测化合物溶解在30％磺丁基-β-环糊精(SBE-β-CD)中，以20mg/kg单次灌胃给药。给药后15分钟、30分钟和1、2、4、6、8及24小时尾端断口取血，每时间点约0.3ml，置于含K2-EDTA的离心管中，离心处理(2000g，10分钟，4℃)取血浆，储存在-70℃至-80℃的超低温冰箱中。50μL的血浆样品用135μL乙腈(含内标0.5μg/mL)涡旋混合进行蛋白沉淀，离心，取上清进行LC-MS/MS分析。
2.实验结果
本发明提供的苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物各化合物在大鼠经口服给药后，吸收良好，血液暴露量较高，结果见图1、2和表2。本发明的苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物的Tmax为0.5-2.67小时，Cmax为180-2553.33ng/ml，AUC0-24h为934.28-9583.02ng/ml*h。Cmax是指最大血药浓度，T1/2为半衰期，AUC0-24是指0-24小时时间-浓度曲线下面积，AUC0-inf是指0-Inf时间-浓度曲线下面积。
表2.大鼠灌胃给药(20mg/kg)药代动力学参数
Figure BDA0003178251760000982
Figure BDA0003178251760000991
三、药效学实验
1.实验方法
基因工程hGLP1R小鼠，雄性，7周，购于百奥赛图江苏基因生物技术有限公司。实验动物均饲养于水平流独立通风笼具内，温度在20-26℃，相对湿度在40-70％RH，换气次数为15-30次/小时、空气洁净度为7级、昼夜明暗交替时间为12h/12h；持续供给钴60放射灭菌鼠全价颗粒饲料(广东省医学实验动物中心，大、小鼠维持饲料)，不限量自由摄取；饮用自来水(高压蒸汽灭菌后使用)，不间断供水，自由摄取。饲养笼具是透明的聚醚酰亚胺笼盒(苏州艾可林净化设备有限公司，水平流小鼠笼盒)，无病原微生物；垫料是玉米芯(广东省医学实验动物中心，高压蒸汽灭菌后使用)，每笼2-5只动物，笼卡上标明IACUC批准号、实验编号、实验开始时间、课题负责人、实验人员、动物来源、组别和动物编号等。本试验的动物使用方法经由广州必贝特医药技术有限公司IACUC批准。
hGLP1R小鼠口服葡萄糖耐量试验：动物禁食过夜，不禁水，口服单次给溶媒或相应的化合物，给溶媒或化合物前测血糖(相当于-60min血糖值)，给溶媒或化合物60分钟后口服给葡萄糖(2g/kg)，给葡萄糖前测血糖(相当于0min血糖值)，给葡萄糖后15min、30min、60min、90min、120min测血糖值。溶媒为40％PEG400+60％MCT(0.5％MC/0.1％Tween80)水溶液，化合物剂量分别为0.3mg/kg(n＝2-4)，1mg/kg(n＝2-4)。
2.实验结果
如图3和图4所示，化合物12和化合物16与PF-06882961在同剂量(1mg/kg)单次口服给药时，从血糖曲线和血糖AUC(0-2h)来看，化合物12与PF-06882961的降糖效果相当；化合物16的降糖效果优于PF-06882961。
如图5和图6所示，化合物6和化合物16与PF-06882961在同剂量(0.3mg/kg)单次口服给药时，从血糖曲线和血糖AUC(0-2h)来看，化合物6比PF-06882961的降糖效果略好；化合物16的降糖效果明显优于PF-06882961。
如图7和图8所示，化合物3、化合物16和化合物58在同剂量(0.3mg/kg)单次口服给药时，从血糖曲线和血糖AUC(0-2h)来看，化合物16的降糖效果表现最好。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对以下实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (26)

1.式(I)所示的苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体：
Figure FDA0003178251750000011
其中：
R1和R2分别独立选自：H，卤素，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基；
R3和R4分别独立选自：H，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基；或者R3和R4相连组成3-8元碳环或3-8元杂环；
R5选自：3-8元杂环基取代的C1-C4烷基，5-10元杂芳基取代的C1-C4烷基，C1-C6烷氧基取代的C1-C4烷基；其中，所述R5中的3-8元杂环基和5-10元杂芳基可以独立任选的被一个或多个R10取代；
R6和R7分别独立选自：H，C1-C6烷基；或者R6和R7一起形成G，G选自＝O；
各R8和R9分别独立选自：H，卤素，C1-C6烷基，C2-C6烯基，C2-C6炔基，C3-C8环烷基，C3-C8环烷基甲基，卤素取代的C1-C6烷基，羟基取代的C1-C6烷基，C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基，氨基取代的C1-C6烷基,C1-C6烷基胺基取代的C1-C6烷基，芳基，杂芳基，硝基，氰基，-OR，-N(R)2，-SR，-C(O)OR，-C(O)N(R)2，-C(O)R，-S(O)R，-S(O)2R，-S(O)2N(R)2，-N(R)C(O)R；
R选自：H，C1-C6烷基，C2-C6烯基，C2-C6炔基，C3-C8环烷基，C3-C8环烷基甲基，卤素取代的C1-C6烷基，羟基取代的C1-C6烷基，C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基，氨基取代的C1-C6烷基,C1-C6烷基胺基取代的C1-C6烷基；
n选自：0，1或2；
p选自：1或2；
m选自：1，2或3；
W选自：O，S，NR10；
W1选自：O，S；
Q选自：C，CH，N；
X选自：N，CR10；
Y选自：N，CR11；
R10选自：H，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基；
R11选自：H，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基；或者R11和R6相连组成5-8元杂环；
Q与相邻C之间的虚线表示所述Q与相邻C之间的化学键可选单键或双键。
2.根据权利要求1所述的苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体，其特征在于，具有如下式(II)或者式(III)所示结构：
Figure FDA0003178251750000021
3.根据权利要求1所述的苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体，其特征在于，具有如下式(IV)或者式(V)所示结构：
Figure FDA0003178251750000022
4.根据权利要求1所述的苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体，其特征在于，具有如下式(VI)或者式(VII)所示结构：
Figure FDA0003178251750000031
5.根据权利要求1所述的苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体，其特征在于，W为O，R6和R7分别独立选自：H，C1-C6烷基。
6.根据权利要求1-5任一项所述的苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体，其特征在于，W1为O。
7.根据权利要求1-5任一项所述的苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体，其特征在于，Q选自：C，CH。
8.根据权利要求1-5任一项所述的苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体，其特征在于，X选自：N，CH。
9.根据权利要求1-5任一项所述的苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体，其特征在于，R1和R2分别独立选自：H，卤素，C1-C3烷基，C1-C3烷氧基。
10.根据权利要求1-5任一项所述的苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体，其特征在于，R3和R4分别独立选自：H，C1-C3烷基，C1-C3烷氧基。
11.根据权利要求1-5任一项所述的苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体，其特征在于，R5选自：3-4元杂环基取代的C1-C4烷基，5-6元杂芳基取代的C1-C4烷基，C1-C3烷氧基取代的C1-C4烷基；其中，所述R5中的3-4元杂环基和5-6元杂芳基可以独立任选的被一个或多个R10取代。
12.根据权利要求11所述的苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体，其特征在于，R5选自：3-4元杂环基取代的甲基，3-4元杂环基取代的乙基，5-6元杂芳基取代的甲基，5-6元杂芳基取代的乙基；其中，所述R5中的3-4元杂环基和5-6元杂芳基可以独立任选的被一个或多个R10取代，R10选自：H、C1-C3烷基。
13.根据权利要求12所述的苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体，其特征在于，R5选自：氧杂环丁烷取代的甲基，氧杂环丁烷取代的乙基，乙基咪唑取代的甲基，乙基咪唑取代的乙基。
14.根据权利要求1-5任一项所述的苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体，其特征在于，R6和R7分别独立选自：H，C1-C3烷基。
15.根据权利要求1-5任一项所述的苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体，其特征在于，各R8和R9分别独立选自：H，卤素，氰基，C1-C3烷基，卤素取代的C1-C3烷基。
16.根据权利要求15所述的苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体，其特征在于，各R8分别独立选自：H，卤素，C1-C3烷基；各R9分别独立选自：H，卤素，氰基，C1-C3烷基，三氟甲基。
17.根据权利要求16所述的苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体，其特征在于，各R8分别独立选自：H、Cl、F、甲基；各R9分别独立选自：氰基、Cl、甲基。
18.根据权利要求1所述的苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体，其特征在于，选自如下化合物：
Figure FDA0003178251750000041
Figure FDA0003178251750000051
Figure FDA0003178251750000061
19.权利要求1-18任一项所述的苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体在制备GLP-1R激动剂中的应用。
20.权利要求1-18任一项所述的苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体在制备用于预防和/或治疗与GLP-1R下游信号通路相关的疾病和/或症状的药物中的应用。
21.根据权利要求20所述的应用，其特征在于，与GLP-1R下游信号通路相关的疾病和/或症状选自：糖尿病，糖尿病视网膜病变，糖尿病性脑血管病变，糖尿病性神经病变，胰岛素抵抗，高血糖症，糖尿病性肾病，高血压，白内障，骨质疏松症，高尿酸血症以及糖尿病引起的感染、肥胖症、代谢综合征、血脂异常、非酒精性脂肪肝病、非酒精性脂肪性肝炎、纤维化、心脏病、中风、肝硬化、肝癌、代谢性酸中毒、酮病、心血管不适、癫痫、动脉粥样硬化、帕金森氏病和阿尔兹海默病。
22.权利要求1-18任一项所述的苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体在制备促进胰岛素分泌的药物中的应用。
23.权利要求1-18任一项所述的苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体在制备降血糖的药物中的应用。
24.权利要求1-18任一项所述的苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体在制备预防和/或治疗糖尿病的药物中的应用。
25.根据权利要求24所述的应用，其特征在于，所述糖尿病为1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病、特发性1型糖尿病、早发型2型糖尿病、青年人的成年型糖尿病、青少年发作的非典型糖尿病、营养不良相关性糖尿病、成人隐匿性自身免疫性糖尿病。
26.一种预防和/或治疗糖尿病及其并发症的药物组合物，其特征在于，包括活性成分以及药学上可接受的辅料和/或载体，所述活性成分包括有权利要求1-18任一项所述的苯并咪唑或氮杂苯并咪唑-6-羧酸类化合物或者其药学上可接受的盐或者其立体异构体。
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Applicant after: Guangzhou bebet Pharmaceutical Co.,Ltd.

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