TW202306569A - 苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物及其應用 - Google Patents

苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物及其應用 Download PDF

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Abstract

本發明公開了一種苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物及其應用，所述苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物具有式（I）所示結構。該苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物可以有效啟動GLP-1R下游信號通路，提高cAMP的表達，從而達到促進胰島素分泌，治療糖尿病及其併發症的作用，有較大的應用價值。

Description

苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物及其應用
本發明涉及化學醫藥技術領域，具體涉及一種苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物及其應用。
2型糖尿病(T2DM)及其併發症已成為嚴重威脅人類健康的慢性非傳染性疾病，發病人數呈逐年上升趨勢，胰島β細胞功能障礙和胰島素抵抗是T2DM的重要發病機制(N Engl J Med, 2007. 356: 213-215)。目前糖尿病治療藥物主要包括胰島素及其類似物、二肽基肽酶-4抑制劑（DPP-4i）、胰高血糖素樣肽-1受體激動劑（GLP-1 RA）、鈉-葡萄糖協同轉運蛋白-2抑制劑（SGLT-2i）、二甲雙胍、α-糖苷酶抑制劑、磺脲類藥物（SU）、噻唑烷二酮類藥物（TZDs）、格列奈類藥物等(Biomed Pharmacother, 2020. 131: 110708)。GLP-1 RA具有血糖依賴性強效降糖、不增加低血糖風險、降低體重、輕度降壓等優點，而且大部分藥物還被證實了心血管獲益，近幾年市場份額增速明顯(Cell Metab, 2018. 27: 740-756)。越來越多的臨床實驗證實GLP-1 RA在非酒精性脂肪肝炎（NASH）(Adv Exp Med Biol, 2021. 1307: 417-440)、改善心血管預後(Diabetes Metab Syndr, 2021. 15: 837-843)、阿爾茲海默病(Diabetes, 2014. 63: 2262-72)、保護腎臟及改善糖尿病腎病結局上(N Engl J Med, 2021. 384: e42)具有顯著作用。
胰高血糖素樣肽-1受體（GLP-1R）主要表達於小腸、胰腺、心血管、腦和唾液腺等組織中(Endocrinology, 2014. 155: 1280-1290)，屬於7次跨膜的G蛋白偶聯受體（GPCR）B家族成員，其由腸道L細胞分泌的胰高血糖素樣肽-1（GLP-1）啟動後，通過提高細胞內環磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate, cAMP) 水準誘發電壓門控型Ca 2+通道開放，進而促進胰島β細胞增殖與分化等作用來調控血糖(J Mol Biol, 2020. 432: 1347-1366)。
目前，已有多個注射肽類GLP-1 RA批准用於治療T2DM，如利拉魯肽、艾賽那肽、度拉糖肽、索馬魯肽、聚二乙醇洛塞那肽等等，其中利拉魯肽因在降低體重方面的作用，其也被批准用於治療肥胖症(Mol Metab, 2021. 46: 101102; ACS Pharmacol Transl Sci, 2019. 2:  468-484)。2020年9 月，美國 FDA 正式批准了全球首個口服 GLP-1降糖藥索馬魯肽上市，用於飲食、運動結合改善 II 型糖尿病患者的血糖控制。由於索馬魯肽為多肽類藥物，通過將索馬魯肽與小分子吸收增強劑SNAC結合形成口服配方，與SNAC的結合使得索馬魯肽能夠在胃部完成吸收，並且SNAC的部分溶解能夠在胃內局部形成相對高的 pH 環境，從而提高索馬魯肽的溶解度，減少胃內肽酶的降解作用。主要缺點是其口服生物利用度極低（僅0.4%-1%)，成本明顯增加，主要不良反應中胃腸道反應，噁心發生率約為15~20%（Ann Pharmacotherapy, 2019, 54: 478-485）。小分子GLP-1R激動劑由於可以克服肽類藥物的口服吸收障礙，同時其更容易透過血腦屏障，並作用於下丘腦弓狀核中的GLP-1R而降低食欲，最終在降低血糖的同時，可能會起到更優的減輕體重的效果(J Clin Invest, 2014. 124: 4223-4226)。
目前，小分子口服GLP-1R激動劑主要包括OWL833(Proc Natl Acad Sci U S A, 2020. 117: 29959-29967)，PF-06882961(Proc Natl Acad Sci U S A, 2020. 117: 29959-29967)及TTP273(Nature, 2020. 577: 432-436)。PF-06882961的一期臨床結果表明，其在2型糖尿病患者降糖和減重效果作用顯著。在患有2型糖尿病的患者中，聯合二甲雙胍，每天2次給藥PF-06882961，治療28天時，120mg劑量降低HBA1c達1.2%，減重達7.9kg(ClinicalTrials.gov Identifier: NCT03538743)。
基於整個2型糖尿病發病率很高，且目前沒有有效的口服小分子藥物獲批對其進行治療，本發明提供一類新的苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物，可以有效啟動GLP-1R下游信號通路，提高cAMP的表達，從而達到促進胰島素分泌，治療糖尿病及其併發症的作用，有較大的應用價值。
具體地，本發明提供了式（I）所示的苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物或者其藥學上可接受的鹽或者其立體異構體：
Figure 02_image001
（I） 其中： R 1和R 2分別獨立選自：H，鹵素，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基； R 3和R 4分別獨立選自：H，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基；或者R 3和R 4相連組成3-8元碳環或3-8元雜環； R 5選自：3-8元雜環基取代的C1-C4烷基，5-10元雜芳基取代的C1-C4烷基，C1-C6烷氧基取代的C1-C4烷基；其中，所述R 5中的3-8元雜環基和5-10元雜芳基可以獨立任選的被一個或多個R 10取代； R 6和R 7分別獨立選自：H，C1-C6烷基；或者R 6和R 7一起形成G，G選自=O； 各R 8和R 9分別獨立選自：H，鹵素，C1-C6烷基，C2-C6烯基，C2-C6炔基，C3-C8環烷基，C3-C8環烷基甲基，鹵素取代的C1-C6烷基，羥基取代的C1-C6烷基，C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基，胺基取代的C1-C6烷基, C1-C6烷基胺基取代的C1-C6烷基，芳基，雜芳基，硝基，氰基，-OR，-N(R) 2，-SR，-C(O)OR，-C(O)N(R) 2，-C(O)R，-S(O)R，-S(O) 2R，-S(O) 2N(R) 2，-N(R)C(O)R； R選自：H， C1-C6烷基，C2-C6烯基，C2-C6炔基，C3-C8環烷基，C3-C8環烷基甲基，鹵素取代的C1-C6烷基，羥基取代的C1-C6烷基，C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基，胺基取代的C1-C6烷基, C1-C6烷基胺基取代的C1-C6烷基； n選自：0，1或2； p選自：1或2； m選自：1，2或3； W選自：O，S，NR 10； W 1選自：O，S； Q選自：C，CH，N； X選自：N，CR 10； Y選自：N，CR 11； R 10選自：H，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基； R 11選自：H，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基；或者R 11和R 6相連組成5-8元雜環； Q與相鄰C之間的虛線表示所述Q與相鄰C之間的化學鍵可選單鍵或雙鍵。
在其中一些實施例中，所述苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物具有如下式（II）或者式（III）所示結構：
Figure 02_image003
（II）
Figure 02_image005
（III）。
在其中一些實施例中，所述苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物具有如下式（IV）或者式（V）所示結構：
Figure 02_image007
（IV）
Figure 02_image009
（V）。
在其中一些實施例中，所述苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物具有如下式（VI）或者式（VII）所示結構：
Figure 02_image011
（VI）
Figure 02_image013
（VII）。
在其中一些實施例中，W為O，R 6和R 7分別獨立選自：H，C1-C6烷基。
在其中一些實施例中，W 1為O。
在其中一些實施例中，Q選自：C，CH。
在其中一些實施例中，X選自：N，CH。
在其中一些實施例中，R 1和R 2分別獨立選自：H，鹵素，C1-C3烷基，C1-C3烷氧基。
在其中一些實施例中，R 3和R 4分別獨立選自：H，C1-C3烷基，C1-C3烷氧基。
在其中一些實施例中，R 5選自：3-4元雜環基取代的C1-C4烷基，5-6元雜芳基取代的C1-C4烷基，C1-C3烷氧基取代的C1-C4烷基；其中，所述R 5中的3-4元雜環基和5-6元雜芳基可以獨立任選的被一個或多個R 10取代。
在其中一些實施例中，R 5選自：3-4元雜環基取代的甲基，3-4元雜環基取代的乙基，5-6元雜芳基取代的甲基，5-6元雜芳基取代的乙基；其中，所述R 5中的3-4元雜環基和5-6元雜芳基可以獨立任選的被一個或多個R 10取代，R 10選自：H、C1-C3烷基。
在其中一些實施例中，R 5選自：氧雜環丁烷取代的甲基，氧雜環丁烷取代的乙基，乙基咪唑取代的甲基，乙基咪唑取代的乙基。
在其中一些實施例中，R 6和R 7分別獨立選自：H，C1-C3烷基。
在其中一些實施例中，各R 8和R 9分別獨立選自：H，鹵素，氰基，C1-C3烷基，鹵素取代的C1-C3烷基。
在其中一些實施例中，各R 8分別獨立選自：H，鹵素，C1-C3烷基；各R 9分別獨立選自：H，鹵素，氰基，C1-C3烷基，三氟甲基。
在其中一些實施例中，各R 8分別獨立選自：H、Cl、F、甲基；各R 9分別獨立選自：氰基、Cl、甲基。
在其中一些實施例中，所述的苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物選自如下化合物：
Figure 02_image015
化合物1
Figure 02_image017
化合物2
Figure 02_image019
化合物3
Figure 02_image021
化合物4
Figure 02_image023
化合物5
Figure 02_image025
化合物6
Figure 02_image027
化合物7
Figure 02_image029
化合物8
Figure 02_image031
化合物9
Figure 02_image033
化合物10
Figure 02_image035
化合物11
Figure 02_image037
化合物12
Figure 02_image039
化合物13
Figure 02_image041
化合物14
Figure 02_image043
化合物15
Figure 02_image045
化合物16
Figure 02_image047
化合物17
Figure 02_image049
化合物18
Figure 02_image051
化合物19
Figure 02_image053
化合物20
Figure 02_image055
化合物21
Figure 02_image057
化合物22
Figure 02_image059
化合物23
Figure 02_image061
化合物24
Figure 02_image063
化合物25
Figure 02_image065
化合物26
Figure 02_image067
化合物27
Figure 02_image069
化合物28
Figure 02_image071
化合物29
Figure 02_image073
化合物30
Figure 02_image075
化合物31
Figure 02_image077
化合物32
Figure 02_image079
化合物33
Figure 02_image081
化合物34
Figure 02_image083
化合物35
Figure 02_image085
化合物36
Figure 02_image087
化合物37
Figure 02_image089
化合物38
Figure 02_image091
化合物39
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化合物40
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化合物41
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化合物42
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化合物43
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化合物44
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化合物45
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   化合物46
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化合物47
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化合物48
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化合物49
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化合物50
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化合物51
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化合物52
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化合物53
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化合物54
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化合物55
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化合物56
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化合物57
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化合物58
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化合物59
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化合物60
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化合物61
Figure 02_image137
化合物62
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化合物63
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化合物64
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化合物65
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化合物66。
本發明還提供了上述的苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物或者其藥學上可接受的鹽或者其立體異構體的應用。
具體技術方案如下：
上述的苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物或者其藥學上可接受的鹽或者其立體異構體在製備GLP-1R激動劑中的應用。
上述的苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物或者其藥學上可接受的鹽或者其立體異構體在製備用於預防和/或治療與GLP-1R下游信號通路相關的疾病和/或症狀的藥物中的應用。
其中，與GLP-1R下游信號通路相關的疾病和/或症狀選自但不限於：糖尿病，糖尿病視網膜病變，糖尿病性腦血管病變，糖尿病性神經病變，胰島素抵抗，高血糖症，糖尿病性腎病，高血壓，白內障，骨質疏鬆症，高尿酸血症以及糖尿病引起的感染、肥胖症、代謝綜合征、血脂異常、非酒精性脂肪肝病、非酒精性脂肪性肝炎、纖維化、心臟病、中風、肝硬化、肝癌、代謝性酸中毒、酮病、心血管不適、癲癇、動脈粥樣硬化、帕金森氏病和阿爾茲海默病等。
上述的苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物或者其藥學上可接受的鹽或者其立體異構體在製備促進胰島素分泌的藥物中的應用。
上述的苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物或者其藥學上可接受的鹽或者其立體異構體在製備降血糖的藥物中的應用。
上述的苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物或者其藥學上可接受的鹽或者其立體異構體在製備預防和/或治療糖尿病的藥物中的應用。
其中，所述糖尿病選自但不限於：1型糖尿病(T1DM)、2型糖尿病(T2DM)、妊娠糖尿病及其他特殊類型糖尿病（特發性T1D、早髮型T2DM、青年人的成年型糖尿病、青少年發作的非典型糖尿病、營養不良相關性糖尿病、成人隱匿性自身免疫性糖尿病等。
本發明還提供了一種預防和/或治療糖尿病及其併發症的藥物組合物。
具體技術方案如下：
一種預防和/或治療糖尿病及其併發症的藥物組合物，包括活性成分以及藥學上可接受的輔料和/或載體，所述活性成分包括有上述的苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物或者其藥學上可接受的鹽或者其立體異構體。
本發明提供的新的並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物或者其藥學上可接受的鹽或者其立體異構體，可以有效啟動GLP-1R下游信號通路，提高cAMP的表達，從而達到促進胰島素分泌，治療糖尿病及其併發症的作用，有較大的應用價值。
本發明所述化合物中，當任何變數（例如R等）在任何組分中出現超過一次，則其每次出現的定義獨立於其他每次出現的定義。同樣，允許取代基及變數的組合，只要這種組合使化合物穩定。自取代基劃入環系統的線表示所指的鍵可連接到任何能取代的環原子上。如果環系統為多環，其意味著這種鍵僅連接到鄰近環的任何適當的碳原子上。要理解本領域普通技術人員可選擇本發明化合物的取代基及取代型式而提供化學上穩定的並可通過本領域技術和下列提出的方法自可容易獲得的原料容易的合成的化合物。如果取代基自身被超過一個基團取代，應理解這些基團可在相同碳原子上或不同碳原子上，只要使結構穩定。
本文所用術語“烷基”意指包括具有特定碳原子數目的支鏈的和直鏈的飽和脂肪烴基。例如，“C1-C6烷基”中“C1-C6”的定義包括以直鏈或支鏈排列的具有1、2、3、4、5或6個碳原子的基團。例如，“C1-C6烷基”具體包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基、異丁基、戊基、己基。
術語“烷氧基”指烷基與氧直接連接的基團，即具有-O-烷基結構的基團，如-OCH 3、-OCH 2CH 3、-OCH 2CH 2CH 3、-O-CH 2CH(CH 3) 2、-OCH 2CH 2CH 2CH 3、-O-CH(CH 3) 2等。
術語“環烷基”或者“碳環”指具有特定碳原子數目的單環飽和脂肪烴基。例如“環烷基”包括環丙基、環丁基、環戊基或環己基等。
術語“雜環基”或者“雜環”為飽和或部分不飽和的單環或多環環狀取代基，其中一個或多個環原子選自N、O或S(O)m（其中m是0-2的整數）的雜原子，其餘環原子為碳，例如：嗎啉基、呱啶基、四氫吡咯基、吡咯烷基、二氫咪唑基、二氫異噁唑基、二氫異噻唑基、二氫噁二唑基、二氫噁唑基、二氫吡嗪基、二氫吡唑基、二氫吡啶基、二氫嘧啶基、二氫吡咯基、二氫四唑基、二氫噻二唑基、二氫噻唑基、二氫噻吩基、二氫***基、二氫氮雜環丁烷基、四氫呋喃基、四氫噻吩基等，及其N-氧化物，雜環取代基的連接可通過碳原子或通過雜原子實現。
術語“雜芳基”指含有1個或多個選自O、N或S的雜原子的芳香環，本發明範圍內的雜芳基包括但不限於：喹啉基、吡唑基、吡咯基、噻吩基、呋喃基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、三氮唑基、咪唑基、噁唑基、異噁唑基、噠嗪基、苯並呋喃基、苯並噻吩基、苯並惡唑、吲哚基等；“雜芳基”也理解為包括任何含有氮的雜芳基的N-氧化物衍生物。
術語“取代的”是指用指定取代基的基團置換特定結構中的氫基。
正如本領域技術人員所理解的，本文中所用“鹵素”（“halo”）或“鹵”意指氯、氟、溴和碘。
除非另有定義，烷基、環烷基、芳基、雜芳基和雜環烷基取代基可為未被取代的或取代的。例如，C1 - C6 烷基可被一個、兩個或三個選自OH 、鹵素、烷氧基、二烷基胺基或雜環基例如嗎啉基、呱啶基等的取代基取代。
本發明包括式（Ⅰ）、式（II）、式（III）、式（IV）、式（V）、式（VI）或者式（VII）化合物的游離形式，也包括其藥學上可接受的鹽及立體異構體。可通過常規化學方法自含有鹼性部分或酸性部分的本發明化合物合成本發明的藥學上可接受的鹽。通常，通過離子交換色譜或通過游離堿和化學計算量或過量的所需鹽形式的無機或有機酸在適當溶劑或多種溶劑的組合中反應製備鹼性化合物的鹽。類似的，通過和適當的無機或有機堿反應形成酸性化合物的鹽。
因此，本發明化合物的藥學上可接受的鹽包括通過鹼性本發明化合物和無機或有機酸反應形成的本發明化合物的常規無毒鹽。例如，常規的無毒鹽包括得自無機酸例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、胺基磺酸、磷酸、硝酸等的鹽，也包括自有機酸例如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、撲酸、馬來酸、羥基馬來酸、苯乙酸、穀胺酸、苯甲酸、水楊酸、對胺基苯磺酸、2-乙醯氧基一苯甲酸、富馬酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙烷二磺酸、草酸、羥乙基磺酸、三氟乙酸等製備的鹽。
如果本發明化合物為酸性的，則適當的“藥學上可接受的鹽”指通過藥學上可接受的無毒堿包括無機堿及有機堿製備的鹽．得自無機堿的鹽包括鋁鹽、銨鹽、鈣鹽、銅鹽、鐵鹽、亞鐵鹽、鋰鹽、鎂鹽、錳鹽、亞錳鹽、鉀鹽、鈉鹽、鋅鹽等。特別優選銨鹽、鈣鹽、鎂鹽、鉀鹽和鈉鹽。得自藥學上可接受的有機無毒堿的鹽，所述堿包括伯胺、仲胺和叔胺的鹽，取代的胺包括天然存在的取代胺、環狀胺及鹼性離子交換樹脂例如精胺酸、甜菜堿、咖啡因、膽鹼、N , N '-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙基胺基乙醇、2-二甲基胺基乙醇、胺基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基嗎啉、N-乙基呱啶、葡萄糖胺、胺基葡萄糖、組胺酸、羥鈷胺、異丙基胺、賴胺酸、甲基葡萄糖胺、嗎啉、哌𠯤，呱啶、呱吒、多胺樹脂、普魯卡因、嘌呤、可哥堿、三乙胺、三甲胺、三丙胺、胺基丁三醇等。
Berg 等，“Pharmaceutical Salts，” J. Pharm. Sci.’1977：66：1－19 更詳細描述了上文所述藥學上可接受的鹽及其它典型的藥學上可接受的鹽的製備。
由於在生理條件下化合物中脫質子化的酸性部分例如羧基可為陰離子的，而這種帶有的電荷然後可被內部帶有陽離子的質子化了的或烷基化的鹼性部分例如四價氮原子平衡抵消，所以應注意本發明化合物是潛在的內鹽或兩性離子。
在一個實施方案中，本發明提供了一種利用具有式（Ⅰ）、式（II）、式（III）、式（IV）、式（V）、式（VI）或者式（VII）所示結構的化合物及其藥學可接受的鹽或者立體異構體治療人或其他哺乳動物與GLP-1R下游信號通路相關的疾病和/或症狀。
其中，所述與GLP-1R下游信號通路相關的疾病和/或症狀可以選自但不限於：1型糖尿病(T1DM)，2型糖尿病(T2DM)，妊娠糖尿病及其他特殊類型糖尿病（特發性T1D、早髮型T2DM、青年人的成年型糖尿病、青少年發作的非典型糖尿病、營養不良相關性糖尿病、成人隱匿性自身免疫性糖尿病等），糖尿病視網膜病變，糖尿病性腦血管病變，糖尿病性神經病變，胰島素抵抗，高血糖症，糖尿病性腎病，高血壓，白內障，骨質疏鬆症，高尿酸血症以及糖尿病引起的多種感染、肥胖症、代謝綜合征、血脂異常、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、纖維化、心臟病、中風、肝硬化、肝癌、代謝性酸中毒、酮病、心血管不適、癲癇和動脈粥樣硬化、帕金森氏病和阿爾茲海默等疾病。
聯合用藥：式（Ⅰ）、式（ⅠI）、式（ⅠII）、式（IV）、式（V）、式（VI）或者式（VII）化合物可以與已知的治療或改進相似病狀的其他藥物聯用。聯合給藥時，原來藥物的給藥方式＆劑量保持不變，而同時或隨後服用式式（Ⅰ）、式（ⅠI）、式（ⅠII）、式（IV）、式（V）、式（VI）或者式（VII）化合物。當式（Ⅰ）、式（ⅠI）、式（ⅠII）、式（IV）、式（V）、式（VI）或者式（VII）化合物與其它一種或幾種藥物同時服用時，優選使用同時含有一種或幾種已知藥物和式（Ⅰ）、式（ⅠI）、式（ⅠII）、式（IV）、式（V）、式（VI）或者式（VII）化合物的藥用組合物。藥物聯用也包括在重疊的時間段服用式（Ⅰ）、式（ⅠI）、式（ⅠII）、式（IV）、式（V）、式（VI）或者式（VII）化合物與其它一種或幾種已知藥物。當式（Ⅰ）、式（ⅠI）、式（ⅠII）、式（IV）、式（V）、式（VI）或者式（VII）化合物與其它一種或幾種藥物進行藥物聯用時，式（Ⅰ）、式（ⅠI）、式（ⅠII）、式（IV）、式（V）、式（VI）或者式（VII）化合物或已知藥物的劑量可能比它們單獨用藥時的劑量較低。
可以與式（Ⅰ）、式（ⅠI）、式（ⅠII）、式（IV）、式（V）、式（VI）或者式（VII）化合物進行藥物聯用的藥物或活性成分包括但不局限於以下治療糖尿病的藥物：雙胍類（如二甲雙胍）、磺醯脲類（醋酸己脲、氯磺丙脲、甲苯磺丁脲、妥拉磺脲、胺磺丁脲、格列本脲、格列齊特、格列吡嗪、格列喹酮、格列波脲、格列派特以及格列美脲）、噻唑烷二酮類（如曲格列酮、羅格列酮、吡格列酮、環格列酮）、美格列脲類（例如那格列奈、瑞格列奈、米格列奈）、二肽基肽酶4抑制劑（西格列汀、維格列汀、沙格列汀、阿格列汀、利格列汀、吉格列汀和替格列汀）、鈉-葡萄糖連接轉運蛋白2抑制劑（坎格列淨、達格列淨、恩格列淨、依格列淨、魯格列淨以及托格列淨）、鈉-葡萄糖連接轉運蛋白1/2抑制劑、GPR40激動劑、GIPR激動劑、GIP/GLP-1雙重受體激動劑、α葡萄糖苷酶抑制劑、胰島素或胰島素類似物。
可以與式（Ⅰ）、式（ⅠI）、式（ⅠII）、式（IV）、式（V）、式（VI）或者式（VII）化合物進行藥物聯用的藥物或活性成分包括但不局限於以下治療肥胖的藥物：肽YY或其類似物、神經肽Y受體2型激動劑、黑素皮質素受體4激動劑、胰島澱粉樣多肽、GIPR激動劑、磷酸二酯酶、AMP啟動的蛋白激酶、神經肽Y5受體拮抗劑、GPR40激動劑、GIP/GLP-1雙重受體激動劑、環丙甲羥二羥嗎啡酮（納曲酮）/安非他酮、氯卡色林、芬特明/托吡酯、奧利司他、利拉魯肽。
可以與式（Ⅰ）、式（ⅠI）、式（ⅠII）、式（IV）、式（V）、式（VI）或者式（VII）化合物進行藥物聯用的藥物或活性成分包括但不局限於以下治療NASH的藥物：法尼酯X受體激動劑、PPARα/δ激動劑、成纖維細胞生長因數19/21類似物、甲狀腺激素受體β激動劑、鈉-葡萄糖協同轉運蛋白（SGLT）-1/2抑制劑、乙醯輔酶A羧化酶抑制劑、趨化因數受體-2/5抑制劑、抗凋亡信號調節激酶1抑制劑、ATP結合轉運蛋白1激動劑、5-脂肪氧化酶抑制劑、血管黏附蛋白1抑制劑。
合成方法：除在文獻中已知的或在實驗程式中例證的標準方法外，可採用如下合成方案（方案1-10）中的方法製備本發明化合物。結合下述的合成方案，能夠對本發明中所述的化合物以及合成方法進行更好的理解。所述的合成方案描述了可以用於製備本發明中所述的化合物的方法，所述的方法僅僅是為說明目的的說明性方案描述，並不構成對本發明所具有的範圍的限制。
方案1
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方案2
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方案3
Figure 02_image151
方案4
Figure 02_image153
方案5
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方案6
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方案7
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方案8
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方案9
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方案10
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以下為具體實施例。
實施例 1 ： 4- （ 6- 氯吡啶 -2- 基）呱啶 -1- 羧酸叔丁酯 （中間體 0104-1 ）的製備 ( 按照方案一線路製備）
步驟 1a: 1-(叔丁基) 4-甲基4-(6-氯吡啶-2-基)呱啶-1,4-二羧酸酯 (化合物0102-1)的製備：在氮氣保護下，向N-叔丁氧羰基-4-呱啶甲酸甲酯(3.00克，12.33毫摩爾，1.0當量)的四氫呋喃(40毫升)溶液中滴加雙(三甲基矽基)胺基鋰的四氫呋喃溶液(1.0摩爾/升，25毫升，24.66毫摩爾，2.0當量)。將混合物在0℃下攪拌1.5小時，然後滴加2，6-二氯吡啶(2.00克，13.51毫摩爾，1.1當量)的四氫呋喃溶液(5毫升)。將混合物升溫至室溫，並攪拌2.5小時。用飽和氯化銨水溶液(10毫升)淬滅反應，並用水(70毫升)和乙酸乙酯(160毫升)分液。有機層用飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到粗產品1-(叔丁基) 4-甲基4-(6-氯吡啶-2-基)呱啶-1,4-二羧酸酯(4.49克，產率：103％)。該產品不需要進一步純化直接用於下一步。
步驟 1b: 1-（叔丁氧羰基）-4-（6-氯吡啶-2-基）呱啶-4-羧酸（化合物0103-1）的製備：在43℃下，將粗產品1-（叔丁基）4-甲基4-將（6-氯吡啶-2-基）呱啶-1,4-二羧酸酯（0102-1）（4.49 g）溶解於甲醇（12毫升）中，在20分鐘內滴加4 摩爾/升的氫氧化鈉水溶液（9毫升）。將混合物升溫至50℃並攪拌35分鐘。將混合物冷卻至室溫，在冰水浴中用6 摩爾/升的鹽酸水溶液（6毫升）將pH調節至〜2，此後形成固體沉澱。將漿液用水（10毫升）稀釋並攪拌40分鐘，然後通過過濾收集固體，固體用水洗滌，真空下乾燥以得到白色固體1-（叔丁氧羰基）-4-（6-氯吡啶-2-基）呱啶-4-羧酸（3.85克，產率：89.0％）。LCMS(ESI)：m/z=341 (M+H) +。
步驟1c: 4-（6-氯吡啶-2-基）呱啶-1-羧酸叔丁酯 （化合物0104-1）的製備：氮氣保護下，將1-（叔丁氧基羰基）-4-（6-氯吡啶-的2-基）呱啶-4-羧酸（0103-1）（3.85克，11.32 毫摩爾）的1,2-二氯乙烷(30毫升)溶液加熱至82 ℃並攪拌過夜。冷卻至室溫後，減壓除去溶劑。用柱色譜法（PE / EA ＝ 10/1）純化粗產物，得到白色固體狀的4-（6-氯吡啶-2--2-基）呱啶-1-羧酸叔丁酯（1.61g，收率：48.0％）。LCMS(ESI)：m/z=297 (M+H) +。
實施例 2 ： (S)-2-( 氯甲基 )-3-( 氧雜環丁烷 -2- 基甲基 )-3H- 咪唑並 [4,5-b] 吡啶 -5- 羧酸甲酯 ( 中間體 0116-1) 的製備 ( 按照方案一線路製備）
步驟2a: 6-氯-5-硝基吡啶-2-羧酸 (化合物0106-1)的製備: 室溫下，往2-氯-6-甲基-3-硝基吡啶（0105-1）(5.0克，29.1毫摩爾，1.0當量)的濃硫酸(20毫升)溶液分批加入三氧化鉻(8.6克，87.3毫摩爾，3.0當量)。混合物60℃下攪拌過夜。冷卻到室溫後，混合物倒入冰水中，然後將固體過濾和真空乾燥得到灰色固體6-氯-5-硝基吡啶-2-羧酸 (4.15克，收率：71%)。LCMS(ESI)：m/z=201 (M-H) -.
步驟2b：6-氯-5-硝基吡啶-2-羧酸甲酯 (化合物0107-1)的製備: 氮氣保護，0℃下，往6-氯-5-硝基吡啶-2-羧酸（0106-1）(4.0克，19.8毫摩爾，1.0當量)和N,N-二甲基甲醯胺(2滴)的二氯甲烷(60毫升)混合物加入草醯氯(5.0克，39.6毫摩爾，2.0當量)。混合物室溫攪拌1小時。加入甲醇(4毫升)，混合物在室溫攪拌10分鐘。加入水，混合物分液。濃縮有機層，殘留物用矽膠柱層析純化(洗脫劑為：石油醚/乙酸乙酯=20/1到5/1)得到白色固體6-氯-5-硝基吡啶-2-羧酸甲酯(4.2克，收率：97.7%)。LCMS(ESI)：m/z=217 (M+H) +。
步驟2c：(S)-2-((苄氧基)甲基)氧雜環丁烷 (化合物0109)的製備: 氮氣保護，室溫下，往叔丁醇鉀(13.6克，122.0毫摩爾，2.0當量)的叔丁醇(180毫升) 混合物中加入三甲基碘化亞碸(26.8克，122.0毫摩爾，2.0當量)。混合物在60℃下攪拌30分鐘。加入(S)-2-((苄氧基)甲基)環氧乙烷（0108）(10.0克，61.0毫摩爾，1.0當量)，混合物80℃下攪拌2小時。冷卻到室溫後，混合物過濾，然後將濾液水洗、濃縮。殘留物用矽膠柱層析純化(洗脫劑為：石油醚/乙酸乙酯=20/1到10/1)得到無色油狀液體(S)-2-((苄氧基)甲基)氧雜環丁烷(4.1克，收率：38%)。
步驟2d：(S)-2-羥甲基氧雜環丁烷 (化合物0110)的製備:氫氣條件下，(S)-2-((苄氧基)甲基)氧雜環丁烷（0109）(9.2克，51.7毫摩爾，1.0當量)和Pd/C(1.8克，10%品質比)的甲醇(100毫升)溶液室溫下攪拌過夜。混合物過濾，濾液真空濃縮得到無色液體(S)-2-羥甲基氧雜環丁烷(5.0克，收率：111%)。
步驟2c：(S)-氧雜環丁烷-2-基甲基甲磺酸酯 (化合物0111)的製備: 氮氣保護，0℃下，往(S)-2-羥甲基氧雜環丁烷（0110）(5.0克，56.8毫摩爾，1.0當量)和三乙胺(217.2克，170.4毫摩爾，3.0當量)的二氯甲烷(80毫升)混合物中滴加甲磺醯氯(9.1克，79.5毫摩爾，1.4當量)。混合物室溫下攪拌3小時。混合物用水洗、真空濃縮。殘留物用矽膠柱層析純化(洗脫劑為：石油醚/乙酸乙酯=5/1到1/1)得到無色油狀液體(S)-氧雜環丁烷-2-基甲基甲磺酸酯(5.8克，收率：61.7%)。
步驟2d：(S)-氧雜環丁烷-2-基甲胺 (化合物0113)的製備: (S)-氧雜環丁烷-2-基甲基甲磺酸酯（0111）(5.8克，35毫摩爾，1.0當量)，疊氮化鈉(2.7克，42毫摩爾，1.2當量)和碘化鉀(1.2克，7.0毫摩爾，0.2當量)的N,N-二甲基甲醯胺(80毫升)溶液在60℃下攪拌過夜。冷卻到室溫後，加入甲基叔丁基醚，混合物用水洗。有機層濃縮，殘留物溶於四氫呋喃，加入Pd/C(600毫克，10%品質比)。氫氣條件下，混合物在室溫下攪拌過夜。混合物過濾，濾液真空濃縮得到無色油狀物(S)-氧雜環丁烷-2-基甲胺，該產品不需要進一步純化直接用於下一步。
步驟2e：(S)-5-硝基-6-((氧雜環丁烷-2-基甲基)胺基)吡啶-2-羧酸甲酯 (化合物0114-1)的製備: 6-氯-5-硝基吡啶-2-羧酸甲酯（0107-1）(1.2克，5.6毫摩爾，1.0當量)，N,N-二異丙基乙胺(2.2克，16.8毫摩爾，3.0當量)和(S)-氧雜環丁烷-2-基甲胺（0113）(1.0克，11.2毫摩爾，2.0當量)的N,N-二甲基甲醯胺(30毫升)混合物在室溫下攪拌過夜。加入乙酸乙酯和水，混合物分液，有機層用飽和食鹽水洗、濃縮。殘留物用矽膠柱層析純化(洗脫劑為：石油醚/乙酸乙酯=8/1到2/1)得到黃色固體(S)-5-硝基-6-((氧雜環丁烷-2-基甲基)胺基)吡啶-2-羧酸甲酯(1.0克，收率：80.6%)。LCMS(ESI)：m/z=268 (M+H) +。
步驟2f：(S)-5-胺基-6-((氧雜環丁烷-2-基甲基)胺基)吡啶-2-羧酸甲酯 (化合物0115-1)的製備: 氫氣條件下，(S)-5-硝基-6-((氧雜環丁烷-2-基甲基)胺基)吡啶-2-羧酸甲酯（0114-1）(1.0克，3.7毫摩爾，1.0當量)和Pd/C(100毫克，10%品質比)的甲醇(30毫升)混合物在室溫下攪拌過夜。混合物過濾，濾液真空濃縮，得到黃色固體(S)-5-胺基-6-((氧雜環丁烷-2-基甲基)胺基)吡啶-2-羧酸甲酯(800毫克，收率：90.1%)。LCMS(ESI)：m/z=238 (M+H) +。
步驟2g：(S)-2-(氯甲基)-3-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑並[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯 (化合物0116-1)的製備: 氮氣保護條件下，(S)-5-胺基-6-((氧雜環丁烷-2-基甲基)胺基)吡啶-2-羧酸甲酯（0115-1）(800毫克，3.4毫摩爾，1.0當量)和2-氯乙酸酐(872毫克，5.1毫摩爾，1.5當量)的四氫呋喃 (50毫升)混合物在70℃攪拌過夜。冷卻到室溫後，加入碳酸鈉水溶液和乙酸乙酯，混合物分液。有機層用飽和食鹽水洗、真空濃縮。殘留物用矽膠柱層析純化(洗脫劑為：二氯甲烷/甲醇=200/1到100/1)得到黃色固體(S)-2-(氯甲基)-3-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑並[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯(1.0克，收率：100%)。LCMS(ESI)：m/z=296 (M+H) +。
實施例 3 ： (S)-2-( 氯甲基 )-1-( 氧雜環丁烷 -2- 基甲基 )-1H- 苯並 [d] 咪唑 -6- 羧酸甲酯 ( 中間體 0116-3) 的製備 ( 按照方案一線路製備）
步驟3a: (S)-4-硝基-3-((氧雜環丁烷-2-基甲基)胺基)苯甲酸甲酯 (化合物0114-3)的製備：氮氣保護條件下，3-氟-4-硝基苯甲酸甲酯（0107-3）(6.23克，31.30毫摩爾，1.0當量)、(S)-氧雜環丁烷-2-基甲胺（0113）(3.00克，34.44毫摩爾，1.1當量)和碳酸鉀 (8.97克，64.87毫摩爾，2.0當量)的N,N-二甲基甲醯胺混合物(60毫升)在室溫下攪拌3小時。反應用水(90毫升)淬滅，加入乙酸乙酯(80毫升)萃取。有機層用飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，濾液減壓濃縮。用柱色譜法(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝ 5/1)純化粗產物，得到白色固體(S)-4-硝基-3-((氧雜環丁烷-2-基甲基)胺基)苯甲酸甲酯(6.61克，產率：79.4％)。LCMS(ESI)：m/z=267 (M+H) +。
步驟3b：(S)-4-胺基-3-((氧雜環丁烷-2-基甲基)胺基)苯甲酸甲酯 (化合物0115-3)的製備: 氫氣條件下，(S)-4-硝基-3-((氧雜環丁烷-2-基甲基)胺基)苯甲酸甲酯（0114-3）(6.61克，24.84毫摩爾，1.0當量)和鈀碳(661毫克，10%品質比)的四氫呋喃(80毫升)混合物在室溫攪拌4小時。將反應液過濾，濾液真空濃縮得到蒼白色固體(S)-4-胺基-3-((氧雜環丁烷-2-基甲基)胺基)苯甲酸甲酯(5.88克，收率：100.2%)。LCMS(ESI)：m/z=237(M+H) +。
步驟3c：(S)-2-(氯甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯 (化合物0116-3)的製備：在乾燥條件下，將(S)-4-胺基-3-((氧雜環丁烷-2-基甲基)胺基)苯甲酸甲酯（0115-3）(5.88克，24.89毫摩爾，1.0當量)、2-氯-1,1,1-三甲氧基乙烷(4.62克，29.86毫摩爾，1.2當量)和一水合對甲苯磺酸(514毫克，2.99毫摩爾，0.12當量)的四氫呋喃(60毫升)溶液加熱至45 ℃並攪拌過夜。冷卻至室溫後，反應液加水(40毫升)稀釋並用乙酸乙酯(60毫升)稀釋。用柱色譜法(二氯甲烷/甲醇=50/1)純化粗產物，得到白色固體(S)-2-(氯甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯(6.54克，收率：74.5％)。LCMS(ESI)：m/z=295 (M+H) +。
實施例 4 ： (S)-2-((4-(6-((4- 氰基苯並呋喃 -7- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶 -2- 基 ) 呱啶 -1- 基 ) 甲基 )-3-( 氧雜環丁烷 -2- 基甲基 )-3H- 咪唑並 [4,5-b] 吡啶 -5- 羧酸 ( 化合物 1) 的製備 ( 按照方案二線路製備）
步驟4a：7-(羥甲基)苯並呋喃-4-腈 (化合物0201-1)的製備：
Figure 02_image167
氮氣保護條件下，將5-溴-2-甲基苯酚(2.0克，10.7毫摩爾，1.0當量)，2-溴-1,1-二乙氧基乙烷(2.5克，12.8毫摩爾，1.2當量)，碳酸鉀(3.0克，21.4毫摩爾，2.0當量)和碘化鉀(0.2克，10%品質比)的N,N-二甲基甲醯胺的混合物在120℃下攪拌過夜。冷卻到室溫後，反應用水淬滅，並用乙酸乙酯萃取。有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到粗產品4-溴-2-(2,2-二乙氧基乙氧基)-1-甲基苯(2.88克，產率：88.9％)。該產品不需要進一步純化直接用於下一步。
氮氣保護條件下，將上述得到的4-溴-2-(2,2-二乙氧基乙氧基)-1-甲基苯(2.9克，9.55毫摩爾，1.0當量)和多聚磷酸(8.0克，23.75毫摩爾，2.5當量)的二氯乙烷混合物回流過夜。冷卻到室溫後，反應用水(40毫升)淬滅，並用乙酸乙酯(50毫升)萃取。有機層用飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析純化(洗脫劑為：石油醚)得到黃色油狀4-溴-7-甲基苯並呋喃(1.61克，產率：80.5％)。LCMS(ESI)：m/z=211 (M+H) +。
氮氣保護條件下，將上述得到的4-溴-7-甲基苯並呋喃(800毫克，3.8毫摩爾，1.0當量)和氰化亞銅(1.7克，19.0毫摩爾，5.0當量)的N,N-二甲基甲醯胺(15毫升)混合物在120 ℃攪拌過夜。冷卻至室溫後，將反應液通過矽藻土過濾，並用乙酸乙酯(15毫升)洗滌。將濾液用水(30毫升)稀釋，並用乙酸乙酯(30毫升)萃取。有機層用飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，並減壓濃縮。粗品用柱色譜法(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝ 10/1)純化粗產物，得到白色固體狀的7-甲基苯並呋喃-4-腈(305毫克，收率：51.3％)。LCMS(ESI)：m/z=158 (M+H) +。
氮氣保護條件下，將上述得到的7-甲基苯並呋喃-4-腈 (305毫克，1.94毫摩爾，1.0當量)、N-溴代琥珀醯亞胺(416毫克，2.33毫摩爾，1.2當量)和偶氮二異丁腈(65毫克，0.39毫摩爾，0.2當量)的二氯乙烷(10毫升)混合物在72 ℃攪拌過夜。冷卻至室溫後，減壓除去溶劑。殘留物用水(20毫升)稀釋，並用石油醚/乙酸乙酯=2/1(30毫升)萃取。有機層用飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，並減壓濃縮。粗品經柱色譜法(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝ 10/1)純化，得到白色固體7-(溴甲基)苯並呋喃-4-腈(377毫克，收率：82.0％)。LCMS(ESI)：m/z=236 (M+H) +。
將上述得到的7-(溴甲基)苯並呋喃-4-腈(326毫克，1.38毫摩爾，1.0當量)和乙酸鉀 (1.35克，13.76毫摩爾，10.0當量)的N,N-二甲基甲醯胺的混合物(10毫升)在室溫下攪拌3小時。反應用水(20毫升)淬滅，並用乙酸乙酯(30毫升)萃取。有機層用飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到粗產品乙酸(4-氰基苯並呋喃-7-基)甲基酯(190毫克，產率：64.2％)。該產品不需要進一步純化直接用於下一步。
在上述得到的乙酸(4-氰基苯並呋喃-7-基)甲基酯 (168毫克，0.78毫摩爾，1.0當量)的四氫呋喃(5毫升)溶液中加入甲醇鈉的甲醇溶液(5.4 摩爾/升，282毫克，1.56毫摩爾，2.0當量)。混合物在室溫下攪拌1小時。反應液用1摩爾/升的鹽酸調節pH約至6，然後形成固體沉澱物。漿液用水(15毫升)稀釋，並用乙酸乙酯 (20毫升)萃取。有機層用無水硫酸鈉乾燥，並減壓濃縮。殘留物用柱色譜法(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝ 4/1)純化，得到黃色固體7-(羥甲基)苯並呋喃-4-腈(135毫克，收率：100.0％)。LCMS(ESI)：m/z=174 (M+H) +。
步驟4b：4-(6-((4-氰基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯(化合物0202-1)的製備：氮氣保護條件下，將4-(6-氯吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯 （0104-1）(125毫克，0.44毫摩爾，1.0當量)，7-(羥甲基)苯並呋喃-4-腈（0201-1）(106毫克，0.61毫摩爾，1.4當量)、碳酸銫(400毫克，1.22毫摩爾，2.0當量)、2-二環己基磷-2',6'-二異丙氧基-1,1'-聯苯(58毫克，0.12毫摩爾，0.2當量)和三(二亞苄基丙酮)二鈀(0) (57毫克，0.06毫摩爾，0.1當量)的甲苯(10毫升)的混合物在125℃下回流過夜。冷卻至室溫後，將反應液通過矽藻土過濾，固體用乙酸乙酯(15毫升)洗滌。將濾液用水(20毫升)稀釋，並用乙酸乙酯(20毫升)萃取。有機層用無水硫酸鈉乾燥，並減壓濃縮。用柱色譜法(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝ 10/1)純化粗產物，得到白色固體4-(6-((4-氰基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯 (165毫克，產率：86.8％)。LCMS(ESI)：m/z=434 (M+H) +。
步驟4c：7-(((6-(呱啶-4-基)吡啶基-2-基)氧基)甲基)苯並呋喃-4-腈 對甲苯磺酸鹽 (化合物0203-1)的製備：將4-(6-((4-氰基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯 （0202-1）(165毫克，0.38毫摩爾，1.0當量)和一水合對甲苯磺酸(197毫克，1.14毫摩爾，3.0當量)的乙酸乙酯(15毫升)混合物在60℃下攪拌過夜。冷卻至室溫後，將反應溶液過濾，將濾餅用乙酸乙酯洗滌並真空乾燥，得到白色固體7-(((6-(呱啶-4-基)吡啶基-2-基)氧基)甲基)苯並呋喃-4-腈對甲苯磺酸鹽(150毫克, 收率: 90.9%). LCMS(ESI)：m/z=343 (M+H) +。
步驟4d： (S)-2-((4-(6-((4-氰基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-3-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑並[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯 (化合物0204-1)的製備:將 7-(((6-(呱啶-4-基)吡啶基-2-基)氧基)甲基)苯並呋喃-4-腈對甲苯磺酸鹽（0203-1） (150毫克，0.29毫摩爾，1.2當量)、(S)-2-(氯甲基)-3-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑並[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯（0116-1）(72毫克，0.24毫摩爾，1.0當量)和碳酸鉀(115毫克，0.83毫摩爾，4.0當量)的乙腈(5毫升)溶液在60℃的條件下攪拌4小時。在冷卻至室溫後，加水，加二氯甲烷萃取。有機相用無水硫酸鈉乾燥並減壓濃縮。殘留物用矽膠薄層層析製備板純化(洗脫劑為：乙酸乙酯)得白色固體(S)-2-((4-(6-((4-氰基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-3-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑並[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯(132毫克，收率：75.9%)。LCMS(ESI)：m/z=593 (M+H) +。
步驟4e：(S)-2-((4-(6-((4-氰基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-3-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑並[4,5-b]吡啶-5-羧酸 (化合物1) 的製備:將 (S)-2-((4-(6-((4-氰基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-3-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑並[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯（0204-1）(132毫克，0.22毫摩爾，1.0當量)和一水合氫氧化鋰(11毫克，0.25毫摩爾，1.1當量)的乙腈/水=5/1(6毫升)混合物在40℃下攪拌過夜。混合物冷卻到室溫後，用1摩爾/升的鹽酸調節pH約至6，然後形成固體沉澱物。漿液用水(12毫升)稀釋，攪拌4小時，然後通過過濾收集固體。固體用水洗滌，然後在真空下乾燥。將固體溶解在二氯甲烷 / 甲醇 ＝ 1/2(5毫升)中，然後過濾，將濾液用無水硫酸鈉乾燥並減壓濃縮。將殘留物真空乾燥得到白色固體(S)-2-((4-(6-((4-氰基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-3-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑並[4,5-b]吡啶-5-羧酸(97毫克，收率：75.2%)。LCMS(ESI)：m/z=579 (M+H) +。 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 13.04 (s, 1H), 8.33 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 8.14 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.99 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.77 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 7.68 – 7.61 (m, 1H), 7.55 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.19 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 6.87 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 6.72 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 5.72 (s, 2H), 5.24 – 5.15 (m, 1H), 4.84 (dd, J= 14.6, 6.4 Hz, 1H), 4.72 (dd, J= 14.6, 4.3 Hz, 1H), 4.53 – 4.46 (m, 1H), 4.37 (dt, J= 8.9, 6.0 Hz, 1H), 3.94 (dd, J= 32.0, 13.7 Hz, 2H), 2.97 – 2.87 (m, 2H), 2.73 – 2.63 (m, 1H), 2.56 (ddd, J= 16.8, 8.5, 4.7 Hz, 1H), 2.47 (d, J= 7.1 Hz, 1H), 2.22 (tt, J= 16.1, 8.1 Hz, 2H), 1.73 (d, J= 10.1 Hz, 4H)。
實施例 5 ： (S)-2-((6-((4- 氰基苯並呋喃 -7- 基 ) 甲氧基 )-3' ， 6'- 二氫 -[2,4'- 聯吡啶 ]-1'(2'H)- 基 ) 甲基 )-3-( 氧雜環丁烷 -2- 基甲基 )-3H- 咪唑並 [4,5-b] 吡啶 -5- 羧酸 ( 化合物 2) 的製備 ( 按照方案三線路製備）
步驟5a：6-氯-3'，6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯 (化合物0302-2)的製備: 氮氣保護下，將2-溴-6-氯吡啶（0301-2）(2.00克，10.39毫摩爾，1.0當量)，N-叔丁氧羰基-1,2,5,6-四氫吡啶-4-硼酸頻哪醇酯(3.21克，10.39毫摩爾，1.0當量)，碳酸鈉(2.20克，20.78毫摩爾，2.0當量)和[1,1'-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀(II) (761毫克，1.04毫摩爾，0.1當量)的二氧六環/水=10/1(30毫升) 的混合物在90℃下攪拌過夜。冷卻至室溫後，將反應液通過矽藻土過濾，並用乙酸乙酯(30毫升)洗滌。將濾液用水(30毫升)稀釋，並用乙酸乙酯(20毫升)萃取。有機層用無水硫酸鈉乾燥，並減壓濃縮。用柱色譜法(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝ 10/1)純化粗產物，得到白色固體6-氯-3'，6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯(2.51克，產率：81.9％)。LCMS(ESI)：m/z=295 (M+H) +。
步驟5b：6-((4-氰基苯並呋喃-7-基)甲氧基)-3'，6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯 (化合物0303-2)的製備：氮氣保護條件下，將6-氯-3'，6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯（0302-2）(491毫克，1.67毫摩爾，1.2當量)，7-(羥甲基)苯並呋喃-4-腈（0201-1）(241毫克，1.39毫摩爾，1.0當量)、碳酸銫(906毫克，2.78毫摩爾，2.0當量)、2-二環己基磷-2',6'-二異丙氧基-1,1'-聯苯(130毫克，0.28毫摩爾，0.2當量)和三(二亞苄基丙酮)二鈀(0) (127毫克，0.14毫摩爾，0.1當量)的甲苯(10毫升)的混合物在125℃下回流過夜。冷卻至室溫後，將反應液通過矽藻土過濾，固體用乙酸乙酯(15毫升)洗滌。將濾液用水(20毫升)稀釋，並用乙酸乙酯(20毫升)萃取。有機層用無水硫酸鈉乾燥，並減壓濃縮。用柱色譜法(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝ 10/1)純化粗產物，得到白色固體6-((4-氰基苯並呋喃-7-基)甲氧基)-3'，6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯(462毫克，產率：76.9％)。LCMS(ESI)：m/z=432 (M+H) +。
步驟5c：7-(((1'，2'，3'，6'-四氫-[2,4'-聯吡啶]]-6-基)氧基)甲基)苯並呋喃-4-腈 鹽酸鹽 (化合物0304-2)的製備：將6-((4-氰基苯並呋喃-7-基)甲氧基)-3'，6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯（0303-2）(462毫克，1.07毫摩爾，1.0當量)溶於鹽酸二氧六環溶液(4摩爾/升，5毫升)中，反應液在室溫下攪拌過夜。然後將反應溶液過濾，將濾餅用乙酸乙酯洗滌並真空乾燥，得到白色固體7-(((1'，2'，3'，6'-四氫-[2,4'-聯吡啶]]-6-基)氧基)甲基)苯並呋喃-4-腈鹽酸鹽(400毫克, 收率: 100.0%)。LCMS(ESI)：m/z=332 (M+H) +。
步驟5d：(S)-2-((6-((4-氰基苯並呋喃-7-基)甲氧基)-3'，6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-3-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑並[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯 (化合物0305-2)的製備: 將7-(((1'，2'，3'，6'-四氫-[2,4'-聯吡啶]]-6-基)氧基)甲基)苯並呋喃-4-腈鹽酸鹽（0304-2） (200毫克，0.54毫摩爾，1.0當量)、(S)-2-(氯甲基)-3-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑並[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯（0116-1）(160毫克，0.54毫摩爾，1.0當量)和碳酸鉀(298毫克，2.16毫摩爾，4.0當量)的乙腈(5毫升)的混合物在60℃下攪拌4小時。將反應混合物冷卻至室溫後加水，加二氯甲烷萃取。有機相用無水硫酸鈉乾燥並減壓濃縮。殘留物用矽膠薄層層析製備板純化(洗脫劑為：乙酸乙酯)得白色固體(S)-2-((6-((4-氰基苯並呋喃-7-基)甲氧基)-3'，6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-3-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑並[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯(212毫克，收率：66.7%)。LCMS(ESI)：m/z=590 (M+H) +。
步驟5e：(S)-2-((6-((4-氰基苯並呋喃-7-基)甲氧基)-3'，6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2'H)-基) 甲基)-3-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑並[4,5-b]吡啶-5-羧酸 (化合物2)的製備: 將(S)-2-((6-((4-氰基苯並呋喃-7-基)甲氧基)-3'，6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-3-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑並[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯（0305-2）(70毫克，0.12毫摩爾，1.0當量)和一水合氫氧化鋰(25毫克，0.48毫摩爾，4.0當量)的乙腈/水=5/1(3毫升)混合物在40℃下攪拌過夜。混合物冷卻到室溫後，用1摩爾/升的鹽酸調節pH約至6，然後形成固體沉澱物。漿液用水(12毫升)稀釋，攪拌4小時。然後通過過濾收集固體，固體用水洗滌，然後在真空下乾燥。將固體溶解在二氯甲烷 / 甲醇 ＝ 1/2(5毫升)中，然後過濾。將濾液用無水硫酸鈉乾燥並減壓濃縮。真空乾燥得到白色固體(S)-2-((6-((4-氰基苯並呋喃-7-基)甲氧基)-3'，6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2'H)-基) 甲基)-3-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑並[4,5-b]吡啶-5-羧酸(47毫克，收率：69.1%)。LCMS(ESI)：m/z=576 (M+H) +。 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8.32 (s, 1H), 8.05 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.96 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.78 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 7.69 (t, J= 7.7 Hz, 1H), 7.54 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.20 (s, 1H), 7.07 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 6.77 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 6.63 (s, 1H), 5.74 (s, 2H), 4.99 (s, 1H), 4.83 (dd, J= 14.3, 7.4 Hz, 1H), 4.65 (d, J= 14.0 Hz, 1H), 4.42 (d, J= 6.9 Hz, 1H), 4.33 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 4.16 (d, J= 13.5 Hz, 1H), 3.91 (d, J= 13.4 Hz, 1H), 3.20 (s, 2H), 2.71 (s, 2H), 2.51 (s, 1H), 2.44 (s, 2H), 2.29 (s, 1H).
實施例 6 ： (S)-2-((4-(6-((4- 氰基苯並呋喃 -7- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶 -2- 基 ) 呱啶 -1- 基 ) 甲基 )-1-( 氧雜環丁烷 -2- 基甲基 )-1H- 苯並 [d] 咪唑 -6- 羧酸 ( 化合物 3) 的製備 ( 按照方案二線路製備）
步驟6a：(S)-2-((4-(6-((4-氰基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯 (化合物0204-3)的製備: 將7-(((6-(呱啶-4-基)吡啶基-2-基)氧基)甲基)苯並呋喃-4-腈對甲苯磺酸鹽（0203-1） (105毫克，0.24毫摩爾，1.2當量)、(S)-2-(氯甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（0116-3）(60毫克，0.20毫摩爾，1.0當量)和碳酸鉀(111毫克，0.81毫摩爾，4.0當量)的乙腈(5毫升)的混合物在60℃下攪拌4小時。將反應混合物冷卻至室溫後加水，加二氯甲烷萃取。有機相用無水硫酸鈉乾燥並減壓濃縮。殘留物用矽膠薄層層析製備板純化(洗脫劑為：乙酸乙酯)得白色固體(S)-2-((4-(6-((4-氰基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯(78毫克，收率：65.5%)。LCMS(ESI)：m/z=592 (M+H) +。
步驟6b：(S)-2-((4-(6-((4-氰基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸 (化合物3)的製備: 將(S)-2-((4-(6-((4-氰基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（0204-3）(78毫克，0.13毫摩爾，1.0當量)和一水合氫氧化鋰(11毫克，0.26毫摩爾，2.0當量)的乙腈/水=5/1(3毫升)的混合物在40℃下攪拌過夜。混合物冷卻到室溫後，用1摩爾/升的鹽酸調節pH約至6，然後形成固體沉澱物。漿液用水(12毫升)稀釋，攪拌4小時，然後通過過濾收集固體，固體用水洗滌，然後在真空下乾燥。將固體溶解在二氯甲烷 / 甲醇 ＝ 1/2(5毫升)中，然後過濾。將濾液用無水硫酸鈉乾燥並減壓濃縮。將殘留物真空乾燥得到白色固體(S)-2-((4-(6-((4-氰基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸(54毫克，收率：71.1%)。LCMS(ESI)：m/z=578 (M+H) +。 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.65 (s, 1H), 8.28 (d, J= 22.1 Hz, 2H), 7.80 (dd, J= 28.6, 7.5 Hz, 2H), 7.64 (d, J= 7.0 Hz, 2H), 7.54 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 7.18 (s, 1H), 6.87 (d, J= 6.9 Hz, 1H), 6.72 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 5.72 (s, 2H), 5.10 (s, 1H), 4.76 (s, 1H), 4.64 (d, J= 14.4 Hz, 1H), 4.45 (d, J= 5.8 Hz, 1H), 4.36 (s, 1H), 3.95 (d, J= 12.5 Hz, 1H), 3.79 (d, J= 11.9 Hz, 1H), 2.97 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 2.84 (s, 1H), 2.68 (s, 1H), 2.57 (s, 1H), 2.42 (s, 1H), 2.21 (d, J= 29.3 Hz, 2H), 1.72 (d, J= 12.1 Hz, 4H).
實施例 7 ： (S)-2-((6-((4- 氰基苯並呋喃 -7- 基 ) 甲氧基 )-3' ， 6'- 二氫 -[2,4'- 聯吡啶 ]-1'(2'H)- 基 ) 甲基 )-1-( 氧雜環丁烷 -2- 基甲基 )-1H- 苯並 [d] 咪唑 -6- 羧酸 ( 化合物 4) 的製備 ( 按照方案三線路製備）
步驟7a：(S)-2-((6-((4-氰基苯並呋喃-7-基)甲氧基)-3'，6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯 (化合物0305-4 )的製備: 將7-(((1'，2'，3'，6'-四氫-[2,4'-聯吡啶]]-6-基)氧基)甲基)苯並呋喃-4-腈鹽酸鹽（0304-2）(100毫克，0.27毫摩爾，1.0當量)、(S)-2-(氯甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（0116-3）(80毫克，0.27毫摩爾，1.0當量)和碳酸鉀(149毫克，1.08毫摩爾，3.0當量)的乙腈(5毫升)的混合物在60℃下攪拌4小時。將反應混合物冷卻至室溫後加水，加二氯甲烷萃取。有機相用無水硫酸鈉乾燥並減壓濃縮。殘留物用矽膠薄層層析製備板純化(洗脫劑為：乙酸乙酯)得白色固體(S)-2-((6-((4-氰基苯並呋喃-7-基)甲氧基)-3'，6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯(97毫克，收率：60.9%)。LCMS(ESI)：m/z=590 (M+H) +。
步驟7b：(S)-2-((6-((4-氰基苯並呋喃-7-基)甲氧基)-3'，6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2'H)-基) 甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸 (化合物4)的製備: (S)-2-((6-((4-氰基苯並呋喃-7-基)甲氧基)-3'，6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（0305-4）(97毫克，0.16毫摩爾，1.0當量)和一水合氫氧化鋰(25毫克，0.48毫摩爾，3.0當量)的乙腈/水=5/1(3毫升)混合物在40℃下攪拌過夜。混合物冷卻到室溫後，用1摩爾/升的鹽酸調節pH約至6，然後形成固體沉澱物。用水(12毫升)稀釋漿液，攪拌4小時，然後通過過濾收集固體，固體用水洗滌，然後在真空下乾燥。將固體溶解在二氯甲烷 / 甲醇 ＝ 1/2(5毫升)中，然後過濾，將濾液用無水硫酸鈉乾燥並減壓濃縮。真空乾燥得到白色固體(S)-2-((6-((4-氰基苯並呋喃-7-基)甲氧基)-3'，6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2'H)-基) 甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸(68毫克，收率：76.6%)。LCMS(ESI)：m/z=576 (M+H) +。 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.67 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.79 (dd, J= 18.0, 8.0 Hz, 2H), 7.74 – 7.61 (m, 2H), 7.55 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 7.21 (s, 1H), 7.08 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 6.78 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 6.62 (s, 1H), 5.74 (s, 2H), 5.05 (d, J= 5.3 Hz, 1H), 4.79 (dd, J= 15.2, 7.3 Hz, 1H), 4.64 (d, J= 13.4 Hz, 1H), 4.46 (dd, J= 13.8, 7.3 Hz, 1H), 4.35 (dd, J= 14.6, 5.9 Hz, 1H), 4.05 (d, J= 13.5 Hz, 1H), 3.91 (d, J= 13.5 Hz, 1H), 3.22 – 3.15 (m, 2H), 2.77 – 2.60 (m, 3H), 2.46 – 2.31 (m, 3H)。
實施例 8 ： (S)-2-((4-(6-((4- 氰基 -2- 甲基苯並呋喃 -7- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶 -2- 基 ) 呱啶 -1- 基 ) 甲基 )-1-( 氧雜環丁烷 -2- 基甲基 )-1H- 苯並 [d] 咪唑 -6- 羧酸 ( 化合物 5) 的製備 ( 按照方案二線路製備）
步驟8a：7-(羥甲基)-2-甲基苯並呋喃-4-腈(化合物0201-5)的製備：
Figure 02_image169
氮氣保護下，4-溴-2-羥基苯甲酸甲酯 (1.0克，4.33毫摩爾，1.0當量)，3-溴丙炔 (618毫克，5.19毫摩爾，1.2當量)，和碳酸鉀(896毫克，6.49毫摩爾，1.5當量)的N,N-二甲基甲醯胺的混合物在50℃下攪拌5小時。反應用水淬滅，並用乙酸乙酯萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥。將有機相減壓濃縮。殘留物用 N,N-二乙基苯胺 (5毫升)溶解。往混合物中加入氟化銫 (855 毫克，5.63毫摩爾，1.3當量)。混合物在220℃下攪拌3小時。冷卻到室溫後，反應用水淬滅，並用乙酸乙酯萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析純化(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝ 100/1-10/1)得到黃色固體4-溴-2-甲基苯並呋喃-7-羧酸甲酯 (563毫克，產率：48.53％)。LCMS(ESI)：m/z=269 (M+H) +。
氮氣保護條件下，將上述得到的4-溴-2-甲基苯並呋喃-7-羧酸甲酯 (500毫克，1.86毫摩爾，1.0當量), 四三苯基膦鈀 (215毫克，0.186毫摩爾，0.1當量)和氰化鋅 (326毫克，2.79 毫摩爾，1.5當量)的N,N-二甲基甲醯胺(5毫升)溶液在90 ℃下攪拌過夜。冷卻至室溫後，反應用水淬滅，並用乙酸乙酯萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝ 100/1-10/1)純化，得到黃色固體4-氰基-2-甲基苯並呋喃-7-羧酸甲酯 (290毫克，收率：72.68％)。LCMS(ESI)：m/z=216 (M+H) +。
在氮氣保護和冰浴下，往四氫鋰鋁 (62毫克，1.618毫摩爾，1.2當量)的四氫呋喃混合物中加入上述得到的4-氰基-2-甲基苯並呋喃-7-羧酸甲酯 (290毫克，1.348毫摩爾，1.0當量)。混合物在冰浴下攪拌1小時。反應用水淬滅。混合物用無水硫酸鈉乾燥並過濾。將濾液減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析純化(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝ 100/1-2/1)得到黃色固體7-(羥甲基)-2-甲基苯並呋喃-4-腈 (248毫克，產率：98.41％)。LCMS(ESI)：m/z=188 (M+H) +。
步驟8b：4-(6-((4-氰基-2-甲基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯  (化合物0202-5)的製備：氮氣保護條件下，4-(6-氯吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯 (0104-1) (220毫克，0.74毫摩爾，1.0當量)，7-(羥甲基)-2-甲基苯並呋喃-4-腈 (0201-5) (166毫克，0.88毫摩爾，1.2當量)、碳酸銫(481毫克，1.48毫摩爾，2.0當量)，2-二環己基磷-2',6'-二異丙氧基-1,1'-聯苯(138毫克，0.296毫摩爾，0.4當量)和三(二亞苄基丙酮)二鈀(0) (135毫克，0.148毫摩爾，0.2當量)的甲苯(10毫升)的混合物在125℃下攪拌過夜。冷卻至室溫後，將反應液通過矽藻土過濾，固體用乙酸乙酯洗滌。將濾液減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝100/1-10/1)純化粗產物，得到黃色油狀物4-(6-((4-氰基-2-甲基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯 (237毫克，產率：71.60％)。LCMS(ESI)：m/z=448 (M+H) +。
步驟8c：2-甲基-7-(((6-(呱啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苯並呋喃-4-甲腈鹽酸鹽 (化合物0203-5)的製備：將4-(6-((4-氰基-2-甲基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯(0202-5)(248毫克，0.55毫摩爾，1.0當量)和鹽酸的二氧六環溶液(4M，1毫升)的二氧六環(4毫升)溶液在室溫下攪拌過夜。混合物減壓濃縮，得到2-甲基-7-(((6-(呱啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苯並呋喃-4-甲腈鹽酸鹽 (105毫克, 粗品)，該產品不需要進一步純化直接用於下一步。LCMS(ESI)：m/z=348 (M+H) +。
步驟8d：(S)-2-((4-(6-((4-氰基-2-甲基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯 (化合物0204-5 )的製備: 2-甲基-7-(((6-(呱啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苯並呋喃-4-甲腈鹽酸鹽（0203-5）(98毫克，0.255毫摩爾，1.5當量)，(S)-2-(氯甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（0116-3） (50毫克，0.17毫摩爾，1.0當量)和碳酸鉀 (140毫克，1.01毫摩爾，4.0當量)的乙腈(5毫升)溶液在60℃的條件下攪拌16小時。將反應混合物冷卻至室溫後加水，加乙酸乙酯萃取。有機相用無水硫酸鈉乾燥並減壓濃縮。殘留物用矽膠薄層層析製備板純化(洗脫劑為：乙酸乙酯)得黃色固體(S)-2-((4-(6-((4-氰基-2-甲基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯 (70毫克，收率：68.03%)。LCMS(ESI)：m/z=606 (M+H) +。
步驟8e：(S)-2-((4-(6-((4-氰基-2-甲基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸 (化合物5)的製備: (S)-2-((4-(6-((4-氰基-2-甲基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0204-5) (27.6毫克，0.045毫摩爾，1.0當量)和一水合氫氧化鋰(4毫克，0.09毫摩爾，2.0當量)的乙腈/水=5/1(6毫升)混合物在40℃下攪拌過夜。混合物冷卻到室溫，並減壓濃縮。殘留物的pH值用1摩爾/升的鹽酸調節至6，然後形成固體沉澱。混合物過濾。殘留物用水洗。殘留物用厚製備薄層矽膠色譜法純化(洗脫劑為：二氯甲烷/甲醇=10/1)，得到黃色固體(S)-2-((4-(6-((4-氰基-2-甲基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸 (21.6毫克，收率：80.12%)。LCMS(ESI)：m/z=592 (M+H) +。 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.69 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.81 (dd, J= 8.4, 1.3 Hz, 1H), 7.73 – 7.59 (m, 3H), 7.44 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 6.87 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 6.83 (d, J= 1.0 Hz, 1H), 6.72 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 5.68 (s, 2H), 5.10 (ddd, J= 14.5, 7.2, 2.8 Hz, 1H), 4.77 (dd, J= 15.2, 7.1 Hz, 1H), 4.64 (dd, J= 15.2, 2.6 Hz, 1H), 4.46 (dt, J= 13.8, 7.0 Hz, 1H), 4.36 (dt, J= 9.0, 5.9 Hz, 1H), 3.93 (d, J= 13.6 Hz, 1H), 3.77 (d, J= 13.5 Hz, 1H), 2.97 (d, J= 11.1 Hz, 1H), 2.84 (d, J= 11.2 Hz, 1H), 2.74 – 2.65 (m, 1H), 2.59 – 2.54 (m, 1H), 2.48 (d, J= 0.8 Hz, 3H), 2.43 (ddd, J= 11.1, 9.0, 5.6 Hz, 1H), 2.19 (dt, J= 32.3, 10.5 Hz, 2H), 1.80 – 1.60 (m, 4H).
實施例 9 ： (S)-2 -((4-(6 -((2- 氯 -4- 氰基苯並呋喃 -7- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶 -2- 基 ) 呱啶 -1- 基 ) 甲基 )-1-( 氧雜環丁烷 -2- 基甲基 )-1H- 苯並 [d] 咪唑 -6- 羧酸 ( 化合物 6) 的製備 ( 按照方案二線路製備）
步驟9a：4-(6-((2-氯-4-氰基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯 (化合物0202-6)的製備：在氮氣保護和-70℃下，往4-(6-((4-氰基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯（0202-1）(180毫克，0.416毫摩爾，1當量)的10毫升四氫呋喃溶液中滴加二異丙基胺基鋰 (0.42毫升，2摩爾/升四氫呋喃，0.843毫摩爾，2當量)。混合物在-70℃下攪拌1小時。將六氯乙烷(98.5毫克，0.416毫摩爾，1當量)的四氫呋喃(1毫升)溶液加入到混合物中。混合物在-70℃下攪拌1小時。反應用氯化銨淬滅。混合物用乙酸乙酯萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌和硫酸鈉乾燥。將混合物減壓濃縮。殘留物用矽膠薄層層析製備板純化(洗脫劑為：石油醚/乙酸乙酯=5/1)得到透明油狀物4-(6 -((2-氯-4-氰基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯(54毫克，產率：27.74％)。LCMS(ESI)：m/z=468 (M+H) +。
步驟9b：2-氯-7 -(((6-(呱啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苯並呋喃-4-腈4-甲基苯磺酸鹽 (化合物0203-6)的製備：在4-(6-((2-氯-4-氰基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯（0202-6）(54毫克，0.115毫摩爾，1.0當量)的乙酸乙酯(10毫升)溶液中加入對甲苯磺酸一水合物(59毫克，0.346毫摩爾，3.0當量)。混合物在60℃下攪拌過夜。混合物減壓濃縮得到粗產品2-氯-7 -(((6-(呱啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苯並呋喃-4-腈4-甲基苯磺酸鹽(93毫克，粗品)。該產品不需要進一步純化直接用於下一步。
步驟9c：(S)-2-((4-(6-((2-氯-4-氰基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯 (化合物0204-6)的製備: 將2-氯-7-(((6-(呱啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苯並呋喃-4-腈4-甲基苯磺酸鹽（0203-6）(93毫克，0.173毫摩爾，1.5當量)，(S)-2-(氯甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（0116-3）(34毫克，0.115毫摩爾，1.0當量)和碳酸鉀(63.6毫克，0.461毫摩爾，4.0當量)的乙腈(10毫升)混合物在60℃下攪拌16小時。將反應混合物冷卻至室溫後加水，加乙酸乙酯萃取。有機相用無水硫酸鈉乾燥並減壓濃縮。殘留物用矽膠薄層層析製備板純化(洗脫劑為：乙酸乙酯)得白色固體(S)-2-((4-(6-((2-氯-4-氰基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯(60毫克，收率：83.34%)。LCMS(ESI)：m/z=626 (M+H) +。
步驟9d：(S)-2 -((4-(6 -((2-氯-4-氰基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸 (化合物6)的製備:將 (S)-2-((4-(6-((2-氯-4-氰基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（0204-6）(60毫克，0.096毫摩爾，1.0當量)和一水合氫氧化鋰(12毫克，0.288毫摩爾，3當量)的四氫呋喃/水=5/1(6毫升)混合物在40℃下攪拌過夜。混合物冷卻到室溫，並減壓濃縮。殘留物的pH值用1摩爾/升的稀硫酸調節至6，之後形成固體沉澱。混合物過濾。殘留物用矽膠薄層層析製備板純化(洗脫劑為：二氯甲烷/甲醇＝10/1)得白色固體(S)-2 -((4-(6 -((2-氯-4-氰基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸(32.7毫克，收率：55.66%)。LCMS(ESI)：m/z=612 (M+H) +。 熔點：125~130℃; 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.70 (s, 1H), 8.27 (d, J= 0.7 Hz, 1H), 7.87 – 7.76 (m, 2H), 7.70 – 7.60 (m, 2H), 7.55 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 7.36 (s, 1H), 6.87 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 6.73 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 5.68 (s, 2H), 5.10 (qd, J= 7.2, 2.8 Hz, 1H), 4.78 (dd, J= 15.2, 7.2 Hz, 1H), 4.65 (dd, J= 15.2, 2.7 Hz, 1H), 4.47 (dt, J= 13.8, 7.0 Hz, 1H), 4.36 (dt, J= 9.0, 5.9 Hz, 1H), 3.93 (d, J= 13.5 Hz, 1H), 3.78 (d, J= 13.5 Hz, 1H), 2.96 (d, J= 10.8 Hz, 1H), 2.84 (d, J= 11.0 Hz, 1H), 2.74 – 2.65 (m, 1H), 2.59 – 2.53 (m, 1H), 2.43 (ddd, J= 11.1, 8.9, 5.6 Hz, 1H), 2.18 (dt, J= 29.7, 11.0 Hz, 2H), 1.77 – 1.54 (m, 4H).
實施例 10 ： ( S)-2-((4-(6-((4- 氰基苯並 [ b] 噻吩 -7- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶 -2- 基 ) 呱啶 -1- 基 ) 甲基 )-1-( 氧雜環丁烷 -2- 基甲基 )-1 H- 苯並 [ d] 咪唑 -6- 羧酸 ( 化合物 8) 的製備 ( 按照方案二線路製備）
步驟10a：7-(羥甲基)苯並[ b]噻吩-4-腈 (化合物0201-8)的製備：
Figure 02_image171
將2-胺基-4-溴苯甲酸甲酯（2.3克，10.0毫摩爾，1.0當量）加入到稀鹽酸（2毫升濃鹽酸和8毫升水）。混合物在80℃下攪拌15分鐘，然後冷卻到0℃。亞硝酸鈉（828毫克，12毫摩爾，1.2當量）溶解於8毫升水，滴加到上述混合物中，混合物在0℃下攪拌2小時。將乙基黃原酸鉀（2.72克，17毫摩爾，1.7當量）加入到8毫升水中，在65℃下攪拌。將上述所得重氮鹽混合物在20分鐘內加到該混合物中，混合物在65℃下攪拌2小時。加入二氯甲烷萃取，用水和飽和食鹽水洗。有機相用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮。將殘留物加入到氫氧化鉀（5.6克，100毫摩爾，10.0當量）的10毫升乙醇溶液中，混合物在室溫下攪拌1小時。混合物減壓濃縮，加入水。通過加入濃鹽酸調節水相pH值到1。加入乙酸乙酯萃取，用飽和食鹽水洗。有機相經無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮至幹，得到3-溴丙炔（619毫克，5.2毫摩爾，1.3當量）和碳酸鉀（884毫克，6.4毫摩爾，1.6當量）的N,N-二甲基甲醯胺混合物置於50℃下攪拌3小時。冷卻到室溫後，反應用水淬滅，並用乙酸乙酯萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮，得到紅色油狀物4-溴-2-巰基苯甲酸（2.19克，粗品），該產品不需要進一步純化直接用於下一步。MS (ES -): m/z=231(M-H) -.
將上述得到的4-溴-2-巰基苯甲酸（2.19克，9.48毫摩爾，1.0當量）溶解於50毫升甲醇中，在0℃下滴加二氯亞碸（3.38克，28.44毫摩爾，3.0當量）。混合物在75℃下攪拌3小時。混合物減壓濃縮，加入乙酸乙酯萃取。有機相經水和飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮得到黃色油狀物4-溴-2-巰基苯甲酸甲酯（2.23克，粗品），該產品不需要進一步純化直接用於下一步。MS (ES -): m/z=245(M-H) -。
將上述得到的4-溴-2-巰基苯甲酸甲酯（2.23克，9.03毫摩爾，1.0當量），2-溴-1,1-二乙氧基乙烷（2.13克，10.84毫摩爾，1.2當量）和碳酸鉀（2.49克，18.03毫摩爾，2.0當量）的35毫升N,N-二甲基甲醯胺混合物在70 ℃下攪拌3小時。冷卻到室溫後，反應用水淬滅，並用乙酸乙酯萃取。有機相用食飽和鹽水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥。有機相真空濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=30/1到10/1）得到黃色油狀物4-溴-2-((2,2-二乙氧基乙基)硫基)苯甲酸甲酯（1.46克，收率：44.5%）。
將上述得到的4-溴-2-((2,2-二乙氧基乙基)硫基)苯甲酸甲酯（1.26克，3.47毫摩爾，1.0當量）和1.29克多聚磷酸的甲苯混合物置於120℃下攪拌過夜。冷卻到室溫後，加入水，用乙酸乙酯和是有名混合物通過加入濃鹽酸進行酸化，加入乙酸乙酯和石油醚的混合溶劑萃取混合物。有機相用飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=100/1 到50/1）得到紅色固體4-溴苯並[ b]噻吩-7-羧酸甲酯（849毫克，收率：90.6%）。
將上述得到的4-溴苯並[ b]噻吩-7-羧酸甲酯（800毫克，2.96摩爾，1.0當量）溶解於25毫升乙醇，混合物在45℃下攪拌。加入硼氫化鈉（1.14克，30毫摩爾，10當量），混合物攪拌過夜。混合物減壓濃縮，加入乙酸乙酯萃取。有機相用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=20/1到5/1）得到黃色固體(4-溴苯並[ b]噻吩-7-基)甲醇（470毫克，收率：65.6%）。LCMS(ESI)：m /z=225(M+H-H 2O) +.
在氮氣保護下，將上述得到的(4-溴苯並[ b]噻吩-7-基)甲醇（440毫克，1.82毫摩爾，1.0當量）和氰化亞銅（1.63克，18.2毫摩爾，10.0當量）的N-甲基吡咯烷酮（15毫升）混合物置於190℃下攪拌8小時。冷卻到室溫後，混合物用乙酸乙酯稀釋。混合物經矽藻土過濾，濾液用飽和食鹽水洗，然後用無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=10/1到4/1），得到7-(羥甲基)苯並[ b]噻吩-4-腈（125毫克，收率：36.3%）。LCMS(ESI)：m /z=172(M+H-H 2O) +.
步驟10b：4-(6-((4-氰基苯並[ b]噻吩-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯 (化合物0202-8)的製備：氮氣保護下，4-(6-氯吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯（0104-1）（138毫克，0.46毫摩爾，1.0當量）、7-(羥甲基)苯並[ b]噻吩-4-腈（0201-8）（105毫克，0.56毫摩爾，1.2當量）、碳酸銫（378毫克，1.16毫摩爾，2.5當量），2-雙環已基膦-2',6'-二異丙氧基聯苯（33毫克，0.07毫摩爾，0.15當量）和三(二亞苄基丙酮)二鈀(0) （38毫克，0.042毫摩爾，0.09當量）的甲苯（50毫升）的混合物在125 ℃下回流過夜。冷卻至室溫後，將反應液通過矽藻土過濾，固體用乙酸乙酯洗滌。將濾液減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=10/1到6/1），得到黃色固體4-(6-((4-氰基苯並[ b]噻吩-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯（192毫克，收率：92.3％)。LCMS(ESI)：m /z=450 (M+H) +。
步驟10c：7-(((6-(呱啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苯並[ b]噻吩-4-甲腈鹽酸鹽 (化合物0203-8)的製備：向4-(6-((4-氰基苯並[ b]噻吩-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯（0202-8）（192毫克，0.43毫摩爾，1.0當量）在5毫升二氧六環的混合物中加入1毫升4M氯化氫的二氧六環溶液。混合物在室溫下攪拌過夜。混合物減壓濃縮至幹，得到白色固體7-(((6-(呱啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苯並[ b]噻吩-4-甲腈鹽酸鹽（240毫克，粗品）。LCMS(ESI)：m /z=350(M+H) +。
步驟10d：( S)-2-((4-(6-((4-氰基苯並[ b]噻吩-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d]咪唑-6-羧酸甲酯 (化合物0204-8)的製備：將7-(((6-(呱啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苯並[ b]噻吩-4-甲腈鹽酸鹽（0203-8）（240毫克，0.43毫摩爾，2.5當量）加入到5毫升 N-甲基吡咯烷酮中，再加入 N,N-二異丙基乙胺（175毫克，1.36毫摩爾，8.0當量）。混合物在室溫下攪拌5分鐘。加入( S)-2-(氯甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d]咪唑-6-羧酸甲酯（0116-3）（50 毫克，0.17毫摩爾，1.0當量），然後混合物在60℃下攪拌過夜。混合物用乙酸乙酯稀釋，用水和飽和食鹽水洗。有機相減壓濃縮，殘留物經製備薄層色譜純化（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇=20/1），得到黃色固體( S)-2-((4-(6-((4-氰基苯並[ b]噻吩-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d]咪唑-6-羧酸甲酯（89毫克，收率：86.1%）。 m/z=608(M+H) +。
步驟10e：( S)-2-((4-(6-((4-氰基苯並[ b]噻吩-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d]咪唑-6-羧酸 (化合物8)的製備: ( S)-2-((4-(6-((4-氰基苯並[ b]噻吩-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d]咪唑-6-羧酸甲酯（0204-8）（80毫克，0.13毫摩爾，1.0當量）和一水合氫氧化鋰（44毫克，1.05毫摩爾，8.0當量）在5毫升乙腈和1毫升水的混合溶劑中的混合物在40℃下攪拌過夜。混合物冷卻到室溫，並減壓濃縮。加入稀硫酸調節殘留物的pH值至6，加入乙酸乙酯萃取，用飽和食鹽水洗。有機相經過無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物用製備薄層色譜純化（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇=10/1）得到黃色固體( S)-2-((4-(6-((4-氰基苯並[ b]噻吩-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d]咪唑-6-羧酸（49毫克，收率：62.0%)。LCMS(ESI)：m /z=594 (M+H) +, 熔點：124~126℃。 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.73 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.12 (d, J= 5.5 Hz, 1H), 7.94 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.81 (dd, J= 8.4, 1.0 Hz, 1H), 7.71 – 7.55 (m, 4H), 6.88 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 6.75 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 5.71 (s, 2H), 5.10 (qd, J= 7.2, 2.8 Hz, 1H), 4.79 (dd, J= 15.2, 7.1 Hz, 1H), 4.66 (dd, J= 15.2, 2.4 Hz, 1H), 4.46 (dd, J= 13.7, 7.6 Hz, 1H), 4.36 (dt, J= 9.0, 5.9 Hz, 1H), 3.94 (d, J= 13.6 Hz, 1H), 3.80 (s, 1H), 2.95 (d, J= 10.7 Hz, 1H), 2.83 (d, J= 10.8 Hz, 1H), 2.75 – 2.65 (m, 1H), 2.56 (t, J= 11.5 Hz, 1H), 2.47 – 2.38 (m, 1H), 2.28 – 2.10 (m, 2H), 1.75 – 1.55 (m, 4H).
實施例 11 ： (S)-2-((4-(6-((4- 氯苯並呋喃 -7- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶 -2- 基 ) 呱啶 -1- 基 ) 甲基 )-1-( 氧雜環丁烷 -2- 基甲基 )-1H- 苯並 [d] 咪唑 -6- 羧酸 ( 化合物 12) 的製備 ( 按照方案二線路製備）
步驟11a：(4-氯苯並呋喃-7-基)甲醇 (化合物0201-12)的製備：
Figure 02_image173
氮氣保護條件下，5-氯-2-甲基苯酚(2.0克，14.03毫摩爾，1.0當量)，2-溴-1,1-二乙氧基乙烷(3.31克，16.83毫摩爾，1.2當量)，和碳酸鉀(2.9克，21.04毫摩爾，1.5當量)的N,N-二甲基甲醯胺混合物在120℃下攪拌過夜。冷卻到室溫後，反應用水淬滅，並用乙酸乙酯萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥。有機相真空濃縮，得到4-氯-2-(2,2-二乙氧基乙氧基)-1-甲基苯(4克，粗品)。該產品不需要進一步純化直接用於下一步。
氮氣保護條件下，將上述得到的4-氯-2-(2,2-二乙氧基乙氧基)-1-甲基苯(4.18克，14.03毫摩爾，1.0當量)和多聚磷酸(7.09克，21.04毫摩爾，1.5當量)的二氯乙烷混合物回流過夜。冷卻到室溫後，反應用水淬滅，並用乙酸乙酯萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析純化(洗脫劑為：石油醚)得到透明油狀物4-氯-7-甲基苯並呋喃(1.98克，產率：84.98％)。
氮氣保護條件下，將上述得到的4-氯-7-甲基苯並呋喃 (1.98克，11.93毫摩爾，1.0當量) 、N-溴代琥珀醯亞胺(2.54克，14.31毫摩爾，1.2當量)和偶氮二異丁腈(391毫克，2.38毫摩爾，0.2當量)的二氯乙烷(10毫升)溶液在72℃下攪拌過夜。冷卻至室溫後，減壓除去溶劑。殘留物用水稀釋，並用乙酸乙酯萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌，並用無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析(洗脫劑為：石油醚 )純化，得到黃色油狀物7-(溴甲基)-4-氯苯並呋喃(2.54克，收率：87.28％)。
上述得到的7-(溴甲基)-4-氯苯並呋喃(2.54克，10.37毫摩爾，1.0當量)和醋酸鉀 (10.16克，103.7毫摩爾，10.0當量)的N,N-二甲基甲醯胺混合物(20毫升)在室溫下攪拌3小時。反應用水淬滅，用乙酸乙酯萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌，並用無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮得到乙酸(4-氯苯並呋喃-7-基)甲基酯(2.29克，粗品)，該產品不需要進一步純化直接用於下一步。
往上述得到的乙酸(4-氯苯並呋喃-7-基)甲基酯 (2.29克，10.22毫摩爾，1.0當量)的四氫呋喃(10毫升)溶液中加入的甲醇鈉的甲醇溶液(5.4 摩爾/升，3.8毫升，20.44毫摩爾，2.0當量)。混合物在常溫下攪拌1小時。反應用水淬滅，用乙酸乙酯萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌，並用無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝200/1-4/1)純化，得到(4-氯苯並呋喃-7-基)甲醇 (1.3克，收率：69.89％)為黃色固體。LCMS(ESI)：m/z=183 (M+H) +。
步驟11b：4-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯 tert-butyl (化合物0202-12)的製備：氮氣保護條件下，4-(6-氯吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯  （0104-1）(160毫克，0.548毫摩爾，1當量)，(4-氯苯並呋喃-7-基)甲醇（0201-12）(120毫克，0.66毫摩爾，1.2當量)、碳酸銫(356毫克，1.096毫摩爾，2.0當量)，4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(76毫克，0.131毫摩爾，0.2當量)和三(二亞苄基丙酮)二鈀(0) (60毫克，0.065毫摩爾，0.1當量)的甲苯(10毫升)的混合物在125℃下攪拌過夜。冷卻至室溫後，將反應液通過矽藻土過濾，固體用乙酸乙酯洗滌。將濾液減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝100/1-10/1)純化粗產物，得到黃色油狀物4-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯 (235毫克，產率：98.74％)。LCMS(ESI)：m/z=443 (M+H) +。
步驟11c：2-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶鹽酸鹽 (化合物0203-12)的製備：向4-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯 （0202-12）(235毫克，0.53毫摩爾，1.0當量)和氯化氫的二氧六環溶液(4M，1毫升)的混合物中加入二氧六環(2毫升)，混合物在室溫下攪拌過夜。混合物過濾。殘留物用二氧六環洗滌。殘留物乾燥，得到黃色固體2-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶鹽酸鹽 (142毫克, 收率: 70.64%). LCMS(ESI)：m/z=343 (M+H) +。
步驟11d：(S)-2-((4-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯 (化合物0204-12 )的製備: 2-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶鹽酸鹽（0203-12） (142毫克，0.374毫摩爾，1.5當量)，(S)-2-(氯甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（0116-3）(73毫克，0.249毫摩爾，1.0當量)和N,N-二異丙基乙胺 (161毫克，1.248毫摩爾，4.0當量)的N-甲基吡咯烷酮 (5毫升)溶液在60℃下攪拌16小時。將反應混合物冷卻至室溫後加水，加乙酸乙酯萃取。有機相用無水硫酸鈉乾燥並減壓濃縮。殘留物用矽膠薄層層析製備板純化(洗脫劑為：乙酸乙酯)得黃色固體(S)-2-((4-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯 (115毫克，收率：77.18%)。LCMS(ESI)：m/z=601 (M+H) +。
步驟11e：(S)-2-((4-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸 (化合物12)的製備: (S)-2-((4-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（0204-12）(115毫克，0.19毫摩爾，1.0當量)和一水合氫氧化鋰(16毫克，0.38毫摩爾，2.0當量)的乙腈/水=5/1(6毫升)混合物在40℃下攪拌過夜。混合物冷卻到室溫，並減壓濃縮。殘留物的pH值用1摩爾/升的鹽酸調節至6，然後形成固體沉澱物。混合物過濾。殘留物用水洗。混合物用甲醇打漿得到白色固體(S)-2-((4-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸 (88毫克，收率：78.57%)。LCMS(ESI)：m/z=587 (M+H) +。 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.74 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.15 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.75 – 7.60 (m, 2H), 7.44 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 7.34 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.03 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 6.88 (d, J= 7.1 Hz, 1H), 6.69 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 5.63 (s, 2H), 5.10 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 4.80 (dd, J= 15.3, 7.2 Hz, 1H), 4.72 – 4.63 (m, 1H), 4.46 (dd, J= 13.7, 7.4 Hz, 1H), 4.36 (dt, J= 9.0, 5.9 Hz, 1H), 3.95 (s, 1H), 3.78 (d, J= 10.6 Hz, 1H), 2.93 (d, J= 71.7 Hz, 2H), 2.76 – 2.56 (m, 2H), 2.42 (s, 1H), 2.34 – 2.03 (m, 2H), 1.80 (s, 4H).
實施例 12 ： (S)-2-((4-(6-((4- 氯苯並呋喃 -7- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶 -2- 基 ) 呱啶 -1- 基 ) 甲基 )-3-( 氧雜環丁烷 -2- 基甲基 )-3H- 咪唑並 [4,5-b] 吡啶 -5- 羧酸 ( 化合物 14) 的製備 ( 按照方案二線路製備）
步驟12a：(S)-2-((4-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-3-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑並[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯 (化合物0204-14)的製備: 將2-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶鹽酸鹽（0203-12） (139毫克，0.366毫摩爾，1.5當量)，(S)-2-(氯甲基)-3-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑並[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯（0116-1）(72毫克，0.244毫摩爾，1.0當量)和N,N-二異丙基乙胺 (126毫克，0.976毫摩爾，4.0當量)的N-甲基吡咯烷酮 (5毫升)溶液在60℃下攪拌16小時。將反應混合物冷卻至室溫後加水，加乙酸乙酯萃取。有機相用無水硫酸鈉乾燥並減壓濃縮。殘留物用矽膠薄層層析製備板純化(洗脫劑為：乙酸乙酯)得黃色固體(S)-2-((4-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-3-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑並[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯 (70毫克，收率：47.62%)。LCMS(ESI)：m/z=602 (M+H) +。
步驟12b：(S)-2-((4-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-3-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑並[4,5-b]吡啶-5-羧酸 (化合物14)的製備:將 (S)-2-((4-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-3-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑並[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯（0204-14） (70毫克，0.116毫摩爾，1.0當量)和一水合氫氧化鋰(10毫克，0.232毫摩爾，2.0當量)的乙腈/水=5/1(6毫升)混合物在40℃下攪拌過夜。混合物冷卻到室溫，並減壓濃縮。殘留物的pH值用1摩爾/升的鹽酸調節至6，之後形成固體沉澱。混合物過濾。殘留物用水洗。殘留物用矽膠薄層層析製備板純化(洗脫劑為：二氯甲烷/甲醇=10/1)得到黃色固體(S)-2-((4-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-3-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑並[4,5-b]吡啶-5-羧酸 (30毫克，收率：44.12%)。LCMS(ESI)：m/z=588 (M+H) +。 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.99 (s, 1H), 8.39 – 7.93 (m, 3H), 7.61 (d, J= 6.7 Hz, 1H), 7.41 (s, 1H), 7.32 (d, J= 6.9 Hz, 1H), 7.01 (s, 1H), 6.87 (s, 1H), 6.67 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 5.61 (s, 2H), 5.29 (d, J= 93.9 Hz, 1H), 4.80 (d, J= 53.8 Hz, 2H), 4.42 (d, J= 50.8 Hz, 2H), 3.89 (d, J= 105.4 Hz, 2H), 2.97 (s, 2H), 2.75 – 2.51 (m, 3H), 2.31 (d, J= 53.9 Hz, 2H), 1.77 (d, J= 15.7 Hz, 4H).
實施例 13 ： (S)-2-((4-(6-((2,4- 二氯苯並呋喃 -7- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶 -2- 基 ) 呱啶 -1- 基 ) 甲基 )-1-( 氧雜環丁烷 -2- 基甲基 )-1H- 苯並 [d] 咪唑 -6- 羧酸 ( 化合物 15) 的製備 ( 按照方案二線路製備）
步驟13a：4-(6-((2,4-二氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯 (化合物0202-15)的製備：在氮氣保護和-70℃下，往4-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯 （0202-12）(200毫克，0.452毫摩爾，1當量)的10毫升四氫呋喃溶液中加入二異丙基胺基鋰 (0.45毫升，2摩爾/升四氫呋喃，0.905毫摩爾，2當量)。混合物在-70℃下攪拌1小時。往混合物中加入六氯乙烷(107毫克，0.452毫摩爾，1當量)的四氫呋喃(1毫升)。混合物在-70℃下攪拌1小時。反應用氯化銨淬滅。混合物用乙酸乙酯萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌和硫酸鈉乾燥。將混合物減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝100/1-10/1)純化，得到透明油狀物4-(6-((2,4-二氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯(180毫克，產率：83.72％)。LCMS(ESI)：m/z=477 (M+H) +。
步驟13b：2-((2,4-二氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶4-甲基苯磺酸鹽 (化合物0203-15)的製備：將4-(6-((2,4-二氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯（0202-15）(180毫克，0.377毫摩爾，1.0當量)和對甲苯磺酸(195毫克，1.132毫摩爾，3.0當量)的乙酸乙酯(15毫升)溶液在60℃下攪拌過夜。混合物冷卻至室溫。混合物過濾。殘留物用乙酸乙酯洗滌。殘留物乾燥，得到白色固體2-((2,4-二氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶4-甲基苯磺酸鹽 (253毫克, 粗品). LCMS(ESI)：m/z=377 (M+H) +。
步驟13c：(S)-2-((4-(6-((2,4-二氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯 (化合物0204-15 )的製備: 2-((2,4-二氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶4-甲基苯磺酸鹽（0203-15）(206毫克，0.377毫摩爾，1.2當量)，(S)-2-(氯甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（0116-3）(92毫克，0.314毫摩爾，1.0當量)和碳酸鉀 (173毫克，1.256毫摩爾，4.0當量)的乙腈 (5毫升)溶液在60℃的下攪拌16小時。將反應混合物冷卻至室溫後加水，加乙酸乙酯萃取。有機相用無水硫酸鈉乾燥並減壓濃縮。殘留物用矽膠薄層層析製備板純化(洗脫劑為：乙酸乙酯)，得到白色固體(S)-2-((4-(6-((2,4-二氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯 (180毫克，收率：90.9%)。LCMS(ESI)：m/z=635 (M+H) +。
步驟13d：(S)-2-((4-(6-((2,4-二氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸 (化合物15)的製備: 將 (S)-2-((4-(6-((2,4-二氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（0204-15）(64毫克，0.1毫摩爾，1.0當量)和一水合氫氧化鋰(13毫克，0.3毫摩爾，3.0當量)的乙腈/水=5/1(6毫升)混合物在40℃下攪拌過夜。混合物冷卻到室溫，並減壓濃縮。殘留物的pH值用1摩爾/升的硫酸調節至6，之後形成固體沉澱。混合物過濾。殘留物用水洗。殘留物用矽膠薄層層析製備板純化(洗脫劑為：二氯甲烷/甲醇=10/1)，得到白色固體(S)-2-((4-(6-((2,4-二氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸 (55毫克，收率：88.71%)。LCMS(ESI)：m/z=621 (M+H) +。 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.67 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.80 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.63 (dd, J= 12.7, 8.1 Hz, 2H), 7.44 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.37 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.15 (s, 1H), 6.86 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 6.68 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 5.59 (s, 2H), 5.11 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 4.79 (dd, J= 15.2, 7.0 Hz, 1H), 4.65 (d, J= 14.0 Hz, 1H), 4.46 (dd, J= 13.5, 7.1 Hz, 1H), 4.41 – 4.31 (m, 1H), 3.94 (d, J= 13.5 Hz, 1H), 3.78 (d, J= 13.5 Hz, 1H), 2.99 (d, J= 10.4 Hz, 1H), 2.85 (d, J= 10.7 Hz, 1H), 2.76 – 2.66 (m, 1H), 2.58 (s, 1H), 2.45 (d, J= 8.9 Hz, 1H), 2.20 (dt, J= 21.7, 10.4 Hz, 2H), 1.83 – 1.64 (m, 4H).
實施例 14 ： (S)-2-((4-(6-((4- 氯 -2- 氟苯並呋喃 -7- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶 -2- 基 ) 呱啶 -1- 基 ) 甲基 )-1-( 氧雜環丁烷 -2- 基甲基 )-1H- 苯並 [d] 咪唑 -6- 羧酸 ( 化合物 16) 的製備 ( 按照方案二線路製備）
步驟14a：4-(6-((4-氯-2-氟苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯 (化合物0202-16)的製備：在氮氣保護和-70℃下，往4-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯 （0202-12）(500毫克，1.13毫摩爾，1當量)的10毫升四氫呋喃溶液中加入二異丙基胺基鋰 (1.13毫升，2摩爾/升四氫呋喃，2.26毫摩爾，2當量)。混合物在-70℃下攪拌1小時。往混合物中加入N-氟代雙苯磺醯胺(356毫克，1.13毫摩爾，1當量)的四氫呋喃(1毫升)。混合物在-70℃下攪拌1小時。反應用氯化銨淬滅。混合物用乙酸乙酯萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌和硫酸鈉乾燥。將混合物減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝100/1-10/1)純化，得到透明油狀物4-(6-((4-氯-2-氟苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯(200毫克，產率：38.38％)。LCMS(ESI)：m/z=461 (M+H) +。
步驟14b：2-((4-氯-2-氟苯並呋喃-7-基)甲氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶4-甲基苯磺酸鹽 (化合物0203-16)的製備：將4-(6-((4-氯-2-氟苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯（0202-16）(200毫克，0.43毫摩爾，1.0當量)和對甲苯磺酸(224毫克，1.3毫摩爾，3.0當量)的乙酸乙酯(15毫升)溶液在60℃下攪拌過夜。混合物冷卻至室溫。混合物過濾。殘留物用乙酸乙酯洗滌。殘留物乾燥，得到白色固體2-((4-氯-2-氟苯並呋喃-7-基)甲氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶4-甲基苯磺酸鹽 (208毫克, 粗品). LCMS(ESI)：m/z=361 (M+H) +。
步驟14c：(S)-2-((4-(6-((4-氯-2-氟苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯 (化合物0204-16)的製備: 2-((4-氯-2-氟苯並呋喃-7-基)甲氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶4-甲基苯磺酸鹽（0203-16）(104毫克，0.203毫摩爾，1.2當量)，(S)-2-(氯甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（0116-3）(50毫克，0.169毫摩爾，1.0當量)和碳酸鉀 (93毫克，0.676毫摩爾，4.0當量)的乙腈 (5毫升)溶液在60℃的下攪拌16小時。將反應混合物冷卻至室溫後加水，加乙酸乙酯萃取。有機相用無水硫酸鈉乾燥並減壓濃縮。殘留物用矽膠薄層層析製備板純化(洗脫劑為：乙酸乙酯)，得到白色固體(S)-2-((4-(6-((4-氯-2-氟苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯 (76毫克，收率：72.38%)。LCMS(ESI)：m/z=619 (M+H) +。
步驟14d：(S)-2-((4-(6-((4-氯-2-氟苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸 (化合物16)的製備: (S)-2-((4-(6-((4-氯-2-氟苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0204-16) (76毫克，0.123毫摩爾，1.0當量)和一水合氫氧化鋰(15毫克，0.369毫摩爾，3.0當量)的乙腈/水=5/1(6毫升)混合物在40℃下攪拌過夜。混合物冷卻到室溫，並減壓濃縮。殘留物的pH值用1摩爾/升的硫酸調節至6，之後形成固體沉澱。混合物過濾。殘留物用水洗。殘留物用矽膠薄層層析製備板純化(洗脫劑為：二氯甲烷/甲醇=10/1)，得到黃色固體(S)-2-((4-(6-((4-氯-2-氟苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸 (54毫克，收率：72.97%)。LCMS(ESI)：m/z=605 (M+H) +。 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.64 (s, 1H), 8.26 (d, J= 0.8 Hz, 1H), 7.80 (dd, J= 8.4, 1.5 Hz, 1H), 7.68 – 7.57 (m, 2H), 7.42 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.38 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 6.86 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 6.68 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 6.49 (d, J= 6.4 Hz, 1H), 5.56 (s, 2H), 5.11 (qd, J= 7.2, 2.7 Hz, 1H), 4.79 (dd, J= 15.2, 7.2 Hz, 1H), 4.65 (dd, J= 15.2, 2.7 Hz, 1H), 4.47 (dt, J= 13.7, 7.0 Hz, 1H), 4.37 (dt, J= 9.0, 5.9 Hz, 1H), 4.00 – 3.89 (m, 1H), 3.78 (d, J= 13.5 Hz, 1H), 2.99 (d, J= 11.2 Hz, 1H), 2.85 (d, J= 11.3 Hz, 1H), 2.74 – 2.66 (m, 1H), 2.62 – 2.54 (m, 1H), 2.43 (ddd, J= 11.1, 8.9, 5.6 Hz, 1H), 2.28 – 2.11 (m, 2H), 1.84 – 1.60 (m, 4H).
實施例 15 ： (S)-2-((4-(6-((4- 氯 -2- 甲基苯並呋喃 -7- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶 -2- 基 ) 呱啶 -1- 基 ) 甲基 )-1-( 氧雜環丁烷 -2- 基甲基 )-1H- 苯並 [d] 咪唑 -6- 羧酸 ( 化合物 17) 的製備 ( 按照方案二線路製備）
步驟15a：(4-氯-2-甲基苯並呋喃-7-基)甲醇 (化合物0201-17)的製備：
Figure 02_image175
氮氣保護條件下，4-氯-2-羥基苯甲酸甲酯(1.87克，10.0 毫摩爾，1.0當量)，3-溴丙炔 (1.42克，12毫摩爾，1.2當量)，和碳酸鉀(2.1克，15毫摩爾，1.5當量)的N,N-二甲基甲醯胺混合物在50 ℃下攪拌5小時。反應用水淬滅，並用乙酸乙酯萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮。殘留物用 N,N-二乙基苯胺 (15毫升)溶解。往混合物中加入氟化銫 (2.67克，17.63毫摩爾，1.3當量）。混合物在220℃下攪拌3小時。冷卻到室溫後，反應用水淬滅，殘留物的pH值用2摩爾/升的鹽酸調節至6，並用乙酸乙酯萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析純化(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝ 10/1)得到黃色固體4-氯-2-甲基苯並呋喃-7-羧酸甲酯(1.34克，產率：59.56％)。LCMS(ESI)：m/z=225 (M+H) +。
氮氣保護條件下，將上述得到的4-氯-2-甲基苯並呋喃-7-羧酸甲酯(1.34克，5.98毫摩爾，1.0當量)，硼氫化鈉 (4.55克，119.64毫摩爾，20當量)的甲醇 (13毫升)溶液在室溫下攪拌3小時。反應用水淬滅，並用乙酸乙酯萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝ 10/1)純化，得到黃色固體(4-氯-2-甲基苯並呋喃-7-基)甲醇(1.1克，收率：93.86％)。LCMS(ESI)：m/z=196 (M+H) +。
步驟15b：4-(6-((4-氯-2-甲基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯 (化合物0202-17)的製備：氮氣保護條件下，4-(6-氯吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯 （0104-1）(137毫克，0.46摩爾，1.0當量)，(4-氯-2-甲基苯並呋喃-7-基)甲醇（0201-17）(100毫克，0.51毫摩爾，1.1當量)、碳酸銫(333毫克，1.02毫摩爾，2.0當量)，4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(59毫克，0.05毫摩爾，0.1當量)和三(二亞苄基丙酮)二鈀(0) (47毫克，0.148毫摩爾，0.2當量)的甲苯(10毫升)的混合物在125℃下回流過夜。冷卻至室溫後，將反應液通過矽藻土過濾，固體用乙酸乙酯洗滌。將濾液減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝10/1)純化粗產物，得到黃色油狀物4-(6-((4-氯-2-甲基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯(145毫克，產率：69.13％)。LCMS(ESI)：m/z=456 (M+H) +。
步驟15c：2-((4-氯-2-甲基苯並呋喃-7-基)甲氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶4-甲基苯磺酸鹽 (化合物0203-17)的製備：將4-(6-((4-氯-2-甲基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯（0202-17）(145毫克，0.31毫摩爾，1.0當量)和對甲苯磺酸(159毫克，0.93毫摩爾，3.0當量)的乙酸乙酯(10毫升)溶液在60℃下攪拌過夜。混合物用水洗滌，殘留物的pH用2摩爾/升的氫氧化鈉溶液調節酯至8，並用乙酸乙酯萃取。有機相用無水硫酸鈉乾燥並減壓濃縮，得到2-((4-氯-2-甲基苯並呋喃-7-基)甲氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶4-甲基苯磺酸鹽(92毫克, 粗品)，該產品不需要進一步純化直接用於下一步。LCMS(ESI)：m/z=357 (M+H) +。
步驟15d：(S)-2-((4-(6-((4-氯-2-甲基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯 (化合物0204-17)的製備: 將2-((4-氯-2-甲基苯並呋喃-7-基)甲氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶 4-甲基苯磺酸鹽（0203-17）(90毫克，0.24毫摩爾，1.2當量)，(S)-2-(氯甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（0116-3）(60毫克，0.20毫摩爾，1.0當量)和碳酸鉀 (110毫克，0.80毫摩爾，4.0當量)的乙腈(5毫升)溶液在60℃的條件下攪拌16小時。在冷卻至室溫後，混合物用水稀釋，並用乙酸乙酯萃取。有機相用無水硫酸鈉乾燥並減壓濃縮。殘留物用矽膠薄層層析製備板純化(洗脫劑為：乙酸乙酯/石油醚=2/1)得白色固體(S)-2-((4-(6-((4-氯-2-甲基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯 (100毫克，收率：81.30%)。LCMS(ESI)：m/z=615 (M+H) +。
步驟15e：(S)-2-((4-(6-((4-氯-2-甲基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸 (化合物17)的製備: (S)-2-((4-(6-((4-氯-2-甲基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0204-17) (100毫克，0.16毫摩爾，1.0當量)和一水合氫氧化鋰(21毫克，0.49毫摩爾，3.0當量)的乙腈/水=5/1(12毫升)混合物在40℃下攪拌過夜。混合物冷卻到室溫，並減壓濃縮。殘留物的pH值用1摩爾/升的鹽酸調節至6，之後形成固體沉澱。混合物過濾，殘留物用水洗。殘留物用厚製備薄層矽膠色譜法純化(洗脫劑為：二氯甲烷/甲醇=10/1)，得到黃色固體(S)-2-((4-(6-((4-氯-2-甲基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸 (56毫克，收率：58.24%)。LCMS(ESI)：m/z=601 (M+H) +。 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.67 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.64 (d, J= 7.2 Hz, 2H), 7.33 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.26 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 6.87 (d, J= 7.0 Hz, 1H), 6.67 (d, J= 13.6 Hz, 2H), 5.59 (s, 2H), 5.10 (s, 1H), 4.78 (s, 1H), 4.66 (d, J= 14.2 Hz, 1H), 4.46 (dd, J= 13.7, 7.5 Hz, 1H), 4.36 (dt, J= 8.9, 5.9 Hz, 1H), 3.94 (s, 1H), 3.79 (s, 1H), 2.99 (s, 1H), 2.86 (s, 1H), 2.70 (dt, J= 16.1, 8.0 Hz, 1H), 2.62 (d, J= 18.8 Hz, 1H), 2.40 (d, J= 42.1 Hz, 4H), 2.21 (d, J= 33.5 Hz, 2H), 1.76 (s, 4H).
實施例 16 ： (S)-2-((4-(6-(4- 氯 -2- 甲基苯並呋喃 -7- 甲醯胺基 ) 吡啶 -2- 基 ) 呱啶 -1- 基 ) 甲基 )-1-( 氧雜環丁烷 -2- 基甲基 )-1H- 苯並 [d] 咪唑 -6- 羧酸（化合物 20 ）的製備 ( 按照方案二線路製備）
步驟16a：4-(6-(4-氯-2-甲基苯並呋喃-7-甲醯胺基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯(化合物0202-20)的製備：
Figure 02_image177
往4-氯-2-甲基苯並呋喃-7-羧酸甲酯 (885毫克，3.95毫摩爾，1當量)的10毫升四氫呋喃溶液中加入2N 氫氧化鈉溶液 (5毫升)。混合物在40℃下攪拌16小時。反應冷卻至室溫。混合物的pH用2N 鹽酸調節至1，之後形成固體沉澱。混合物過濾。殘留物用水洗。殘留物乾燥得到黃色固體4-氯-2-甲基苯並呋喃-7-羧酸(700毫克，產率：84.03％)。LCMS(ESI)：m/z=211 (M+H) +。
氮氣保護條件下，將6-溴吡啶-2-胺 (519毫克，3毫摩爾，1.0當量)，4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷-2-基)-3,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯 (1113毫克，3.6毫摩爾，1.2當量)，碳酸鈉(636毫克，6毫摩爾，2.0當量)和雙三苯基膦二氯化鈀 (210毫克，0.3毫摩爾，0.1當量)的甲苯/乙醇/水(10/5/5 毫升)的混合物在110℃下攪拌16小時。冷卻至室溫後，將反應液用乙酸乙酯萃取。有機相用飽和食鹽水洗，和硫酸鈉乾燥。混合物減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝100/1-2/1)純化，得到黃色油狀物6-胺基-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯(600毫克，產率：72.46％)。LCMS(ESI)：m/z=276 (M+H) +。
將6-胺基-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯(600毫克，2.18毫摩爾，1.0當量)和鈀碳 (60毫克，Wt%=10%)的甲醇(15毫升)溶液在室溫下攪拌5小時。混合物過濾。殘留物用甲醇洗滌。殘留物減壓濃縮得到白色固體4-(6-胺基吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯 (553毫克, 粗品). LCMS(ESI)：m/z=278 (M+H) +。
在氮氣保護和冰浴下，往4-氯-2-甲基苯並呋喃-7-羧酸 (100毫克，0.476毫摩爾，1當量)的二氯甲烷/四氫呋喃/N,N-二甲基甲醯胺(10/5/0.01毫升)溶液中滴加入草醯氯 (181毫克，1.428毫摩爾，3當量)。混合物在室溫下攪拌5小時。混合物減壓濃縮。殘留物溶解於5毫升的二氯甲烷。往溶液裏加入4-(6-胺基吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯 (131毫克，0.476毫摩爾，1當量)和三乙胺 (144毫克，1.428毫摩爾，3當量)。混合物在室溫下攪拌3小時。反應用水淬滅。混合物用二氯甲烷萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌和硫酸鈉乾燥。將混合物減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝100/1-2/1)純化，得到白色固體4-(6-(4-氯-2-甲基苯並呋喃-7-甲醯胺基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯(143毫克，產率：64.41％)。LCMS(ESI)：m/z=470 (M+H) +。
步驟16b:4-氯-2-甲基-N-(6-(呱啶-4-基)吡啶-2-基)苯並呋喃-7-甲醯胺4-甲基苯磺酸鹽 (化合物0203-20)的製備：將4-(6-(4-氯-2-甲基苯並呋喃-7-甲醯胺基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯(化合物0202-20)(143毫克，0.305毫摩爾，1.0當量)和對甲苯磺酸(158毫克，0.915毫摩爾，3.0當量)的乙酸乙酯(5毫升)溶液在60℃下攪拌過夜。混合物冷卻至室溫。 混合物過濾。殘留物用乙酸乙酯洗滌。殘留物乾燥，得到白色固體4-氯-2-甲基-N-(6-(呱啶-4-基)吡啶-2-基)苯並呋喃-7-甲醯胺4-甲基苯磺酸鹽(200毫克, 粗品). LCMS(ESI)：m/z=370 (M+H) +。
步驟16c:(S)-2-((4-(6-(4-氯-2-甲基苯並呋喃-7-甲醯胺基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯(化合物0204-20 )的製備: 4-氯-2-甲基-N-(6-(呱啶-4-基)吡啶-2-基)苯並呋喃-7-甲醯胺4-甲基苯磺酸鹽（0203-20）(106毫克，0.203毫摩爾，1.2當量)，(S)-2-(氯甲基)-1-(氧雜環丁-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（0116-3）(50毫克，0.169毫摩爾，1.0當量)和碳酸鉀 (93毫克，0.676毫摩爾，4.0當量)的乙腈 (5毫升)溶液在60℃下攪拌16小時。將反應混合物冷卻至室溫後加水，加乙酸乙酯萃取。有機相用無水硫酸鈉乾燥並減壓濃縮。殘留物用矽膠薄層層析製備板純化(洗脫劑為：乙酸乙酯)，得到白色固體(S)-2-((4-(6-(4-氯-2-甲基苯並呋喃-7-甲醯胺基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯 (70毫克，收率：66.03%)。LCMS(ESI)：m/z=628 (M+H) +。
步驟16d:(S)-2-((4-(6-(4-氯-2-甲基苯並呋喃-7-甲醯胺基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸 (化合物20)的製備: 將(S)-2-((4-(6-(4-氯-2-甲基苯並呋喃-7-甲醯胺基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（0204-20）(70毫克，0.11毫摩爾，1.0當量)和一水合氫氧化鋰(14毫克，0.33毫摩爾，3.0當量)的乙腈/水=5/1(6毫升)混合物在40℃下攪拌過夜。混合物冷卻到室溫，並減壓濃縮。殘留物的pH值用1摩爾/升的硫酸調節至6，之後形成固體沉澱。混合物過濾。殘留物用水洗。殘留物用矽膠薄層層析製備板純化(洗脫劑為：二氯甲烷/甲醇=10/1)，得到白色固體(S)-2-((4-(6-(4-氯-2-甲基苯並呋喃-7-甲醯胺基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸 (48毫克，收率：70.03%)。LCMS(ESI)：m/z=614 (M+H) +。 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.57 (s, 1H), 10.33 (s, 1H), 8.26 (d, J= 0.8 Hz, 1H), 8.04 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.79 (dd, J= 8.7, 7.2 Hz, 2H), 7.72 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.64 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.42 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.09 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 6.79 (d, J= 1.0 Hz, 1H), 5.09 (ddd, J= 14.4, 7.2, 2.8 Hz, 1H), 4.82 (dd, J= 15.2, 7.2 Hz, 1H), 4.67 (dd, J= 15.2, 2.7 Hz, 1H), 4.49 (dd, J= 13.6, 7.7 Hz, 1H), 4.37 (dt, J= 9.0, 5.9 Hz, 1H), 3.95 (d, J= 13.5 Hz, 1H), 3.81 (d, J= 13.5 Hz, 1H), 3.01 (d, J= 11.2 Hz, 1H), 2.89 (d, J= 11.2 Hz, 1H), 2.78 – 2.62 (m, 2H), 2.55 (s, 3H), 2.42 (ddd, J= 15.9, 11.1, 7.0 Hz, 1H), 2.23 (dt, J= 29.5, 10.7 Hz, 2H), 1.86 (t, J= 13.5 Hz, 2H), 1.81 – 1.67 (m, 2H).
實施例 17 ： 2-((4-(6-((4- 氯苯並呋喃 -7- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶 -2- 基 ) 呱啶 -1- 基 ) 甲基 )-1-(2- 甲氧基乙基 )-1H- 苯並 [d] 咪唑 -6- 羧酸（化合物 23 ）的製備 ( 按照方案一和二線路製備）
步驟17a：3-((2-甲氧基乙基)胺基)-4-硝基苯甲酸甲酯（化合物0118-23）的製備: 往3-氟-4-硝基苯甲酸甲酯（0107-23）（1.0克，5.02毫摩爾，1.0 當量）和N,N-二異丙基乙胺（1.34毫升，7.53毫摩爾，1.5當量）在四氫呋喃（15毫升）的混合物中加入2-甲氧基乙胺（0.45克，6.03毫摩爾，1.2當量）。混合物加熱到55℃反應過夜。減壓除去溶劑。殘餘物用水（30毫升）稀釋。水層用乙酸乙酯（30毫升×4）萃取。合併的有機層用飽和食鹽水（30毫升×1）洗滌，經無水硫酸鈉乾燥並濃縮，得到黃色固體3-((2-甲氧基乙基)胺基)-4-硝基苯甲酸甲酯（1.17克，產率：91％）。LCMS(ESI)： m/z255[M+1] +；TLC：Rf 0.5（石油醚:乙酸乙酯 = 5:1）。
步驟17b：4-胺基-3-((2-甲氧基乙基)胺基)苯甲酸甲酯（化合物0119-23）的製備: 往3-((2-甲氧基乙基)胺基)-4-硝基苯甲酸甲酯（0118-23）（1.17克，4.61毫摩爾，1.0當量）在甲醇（30毫升）的混合物中加入鈀碳（0.22 g）。混合物在氫氣球壓力下室溫攪拌3.5小時。混合物過濾。濾液在減壓下濃縮，得到白色固體4-胺基-3-((2-甲氧基乙基)胺基)苯甲酸甲酯（1.03克，產率：100％）。LCMS(ESI)： m/z225[M+1] +；TLC：Rf 0.3（石油醚:乙酸乙酯 = 5:1）。
步驟17c：2-(氯甲基)-1-(2-甲氧基乙基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（化合物0120-23）的製備:往4-胺基-3-((2-甲氧基乙基)胺基)苯甲酸甲酯（0119-23）（1.03克，4.60毫摩爾，1.0 當量）和對甲苯磺酸一水合物（17.5毫克，0.09毫摩爾，0.02當量）在四氫呋喃（20毫升）的混合物中加入2-氯-1,1,1-三甲氧基乙烷（0.78克，5.06毫摩爾，1.1當量）。混合物加熱到45℃反應過夜。減壓除去溶劑。殘餘物在矽膠上進行柱色譜分離（石油醚:乙酸乙酯 5:1），得到白色固體2-(氯甲基)-1-(2-甲氧基乙基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（1.25克，產率：93％）。LCMS(ESI)： m/z283[M+1] +；TLC：Rf 0.5（石油醚:乙酸乙酯 = 2:1）。
步驟17d：2 -（（4-（6 -（（4-氯苯並呋喃-7-基）甲氧基）吡啶-2-基）呱啶-1-基）甲基）-1-（2-甲氧基乙基）-1H-苯並[d ]咪唑-6-羧酸甲酯（化合物0205-23）的製備: 往2-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶對甲苯磺酸鹽（0203-12）（90毫克，0.18毫摩爾，1.1 當量）和2-(氯甲基)-1-(2-甲氧基乙基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（0120-23）（45毫克，0.16毫摩爾，1.0當量）在乙腈（6毫升）的混合物中加入碳酸鉀（66毫克，0.48毫摩爾，3.0當量）。混合物加熱到60℃反應過夜。減壓除去溶劑。殘餘物通過製備薄層色譜（石油醚：乙酸乙酯 1：1）純化，得到白色固體2 -（（4-（6 -（（4-氯苯並呋喃-7-基）甲氧基）吡啶-2-基）呱啶-1-基）甲基）-1-（2-甲氧基乙基）-1H-苯並[d ]咪唑-6-羧酸甲酯（69毫克，收率：74％）。LCMS(ESI)： m/z589[M+1] +；TLC：Rf 0.5（石油醚：乙酸乙酯 = 1：1）。
步驟17e：2-((4-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(2-甲氧基乙基)-1H-苯並[d] 咪唑-6-羧酸（化合物23）的製備: 往2 -（（4-（6 -（（4-氯苯並呋喃-7-基）甲氧基）吡啶-2-基）呱啶-1-基）甲基）-1-（2-甲氧基乙基）-1H-苯並[d ]咪唑-6-羧酸甲酯（0205-23）（69毫克，0.12毫摩爾，1.0當量）在四氫呋喃（6毫升）和水（3毫升）的混合物中加入氫氧化鋰一水合物（15毫克，0.36毫摩爾，3.0當量）。混合物加熱到40℃反應過夜。混合物用水（15毫升）稀釋。加入1N 稀鹽酸溶液調節pH = 5，然後水層用乙酸乙酯（20毫升×3）萃取。合併的有機層用飽和食鹽水（20毫升×1）洗滌，經無水硫酸鈉乾燥並濃縮。殘餘物通過製備薄層色譜（二氯甲烷：甲醇=10：1）純化，得到白色固體2-((4-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(2-甲氧基乙基)-1H-苯並[d] 咪唑-6-羧酸（52毫克，收率：78％）。LCMS（ESI）： m/z575[M+1] +；TLC：Rf 0.5（二氯甲烷：甲醇=10：1）；熔點： 123-126℃。 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.75 (s, 1H), 8.24 – 8.11 (m, 2H), 7.81 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.62 (t, J= 7.8 Hz, 2H), 7.42 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.33 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.02 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 6.86 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 6.67 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 5.61 (s, 2H), 4.60 (s, 2H), 3.84 (s, 2H), 3.75 (t, J= 5.0 Hz, 2H), 3.21 (s, 3H), 2.92 (d, J= 10.8 Hz, 2H), 2.61 (dd, J= 19.2, 7.7 Hz, 1H), 2.21 (t, J= 10.7 Hz, 2H), 1.75 (dd, J= 33.6, 10.7 Hz, 4H).
實施例 18 ： (S)-2-((4-(6-((4- 氯苯並呋喃 -7- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶 -2- 基 ) 呱啶 -1- 基 ) 甲基 )-1-(( 四氫呋喃 -2- 基 ) 甲基 )-1H- 苯並 [d] 咪唑 -6- 羧酸 ( 化合物 24) 的製備 ( 按照方案一和二線路製備）
步驟18a：(S)-4-硝基-3-((四氫呋喃-2-基)甲基)胺基)苯甲酸甲酯 (化合物0118-24)的製備：氮氣保護下，將3-氟-4-硝基苯甲酸甲酯（0107-23）(894.8毫克，4.4937毫摩爾，1.0當量) ， (S)-(四氫呋喃-2-基)甲胺 (500毫克，4.9431毫摩爾，1.1當量)和碳酸鉀(1242毫克，8.987毫摩爾，2.0當量)的N,N-二甲基甲醯胺混合物(10毫升)溶液在常溫下攪拌3小時。反應用水淬滅，加入乙酸乙酯萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌，並用無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝5/1)純化，得到(S)-4-硝基-3-((四氫呋喃-2-基)甲基)胺基)苯甲酸甲酯(1120毫克，收率：88.96％)為黃色固體。LCMS(ESI)：m/z=281 (M+H) +。
步驟18b：(S)-4-胺基-3-(((四氫呋喃-2-基)甲基)胺基)苯甲酸甲酯 (化合物0119-24)的製備：氫氣下，(S)-4-硝基-3-((四氫呋喃-2-基)甲基)胺基)苯甲酸甲酯(0118-24)(1120毫克，3.996毫摩爾，1.0當量)和鈀 /碳 (112毫克，10%品質比)的四氫呋喃混合物(13毫升)在室溫下攪拌過夜。將反應液過濾，濾液減壓濃縮得到黃色油狀物(S)-4-胺基-3-(((四氫呋喃-2-基)甲基)胺基)苯甲酸甲酯(1090毫克，產率109%)。該產品不需要進一步純化直接用於下一步。
步驟18c：((S)-2-(氯甲基)-1-((四氫呋喃-2-基)甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯 (化合物0120-24)的製備：在氮氣下，(S)-4-胺基-3-(((四氫呋喃-2-基)甲基)胺基)苯甲酸甲酯（0119-24）(1090毫克，4.35毫摩爾，1.0當量)，2-氯-1,1,1-三甲氧基乙烷(807毫克，5.55毫摩爾，1.2單量)和一水合對甲苯磺酸（89.889毫克，0.522毫摩爾，0.12單量）的四氫呋喃(10毫升)溶液加熱至45℃並攪拌過夜。冷卻至室溫後，反應用水淬滅，用乙酸乙酯萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌，並用無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮，得到(S)-2-(氯甲基)-1-((四氫呋喃-2-基)甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯(609.5毫克，收率：45.44％)為黃色固體。LCMS(ESI)：m/z=309 (M+H) +。
步驟18d：(S)-2-((4-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-((四氫呋喃-2-基)甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯的製備 (化合物0205-24)的製備：將2-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶4-甲基苯磺酸鹽（化合物0203-12）(96.82毫克，0.1948毫摩爾，1.2當量)和碳酸鉀(89.5896 毫克，0.6492毫摩爾，4.0當量)在乙腈 (5毫升)中的混合物在60℃下攪拌至pH 7~8，然後將(S)-2-(氯甲基)-1-((四氫呋喃-2-基)甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（0120-24）(50毫克，0.1623毫摩爾，1.0當量)加入到混合物中攪拌過夜。冷卻至室溫後，將反應液加水淬滅，用乙酸乙酯萃取。有機相用無水硫酸鈉乾燥並減壓濃縮。殘留物用矽膠薄層層析製備板純化（洗脫劑：乙酸乙酯）得黃色固體化合物(S)-2-((4-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-((四氫呋喃-2-基)甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯(79.8毫克，產率79.94)。LCMS(ESI)：m/z=616 (M+H) +。
步驟18e：(S)-2-((4-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-((四氫呋喃-2-基)甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸(化合物24)的製備：(S)-2-((4-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-((四氫呋喃-2-基)甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（0205-24）(79.8毫克，0.1298毫摩爾，1.0當量)和一水合氫氧化鋰（10.98毫克，0.1298毫摩爾，10單量）的乙腈/水=5/1（6毫升）混合物在40℃攪拌過夜。然後將混合物冷卻至室溫，通過加入1.0 M H2SO4將酸堿℃調節至約6，之後形成固體沉澱。混合物過濾。殘留物用水洗。混合物用甲醇打漿得到黃色固體(S)-2-(4-(6-(4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-((四氫呋喃-2-基)甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸(49.8毫克，產率63.86%). LCMS(ESI)：m/z=602 (M+H) +。 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.72 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.14 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 7.81 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.62 (dd, J= 14.0, 6.4 Hz, 2H), 7.42 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.33 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.02 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 6.86 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 6.67 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 5.61 (s, 2H), 4.55 (d, J= 13.6 Hz, 1H), 4.44 (dd, J= 14.6, 8.1 Hz, 1H), 4.32 – 4.23 (m, 1H), 3.99 (d, J= 13.6 Hz, 1H), 3.77 (dt, J= 22.8, 10.4 Hz, 2H), 3.60 (dd, J= 14.0, 7.3 Hz, 1H), 3.01 (d, J= 11.2 Hz, 1H), 2.85 (d, J= 10.8 Hz, 1H), 2.61 (td, J= 11.2, 5.6 Hz, 1H), 2.27 (t, J= 10.7 Hz, 1H), 2.17 (t, J= 10.6 Hz, 1H), 2.11 – 2.01 (m, 1H), 1.76 (dd, J= 15.5, 8.4 Hz, 5H), 1.71 – 1.61 (m, 2H).
實施例 19 ： 2-((4-(6-((4- 氯苯並呋喃 -7- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶 -2- 基 ) 呱啶 -1- 基 ) 甲基 )-1-((1- 乙基 -1H- 咪唑 -5- 基 ) 甲基 )-1H- 苯並 [d] 咪唑 -6- 羧酸 ( 化合物 25) 的製備 ( 按照方案一和二線路製備）
步驟19a：4-胺基-3-(((1-乙基-1H-咪唑-5-基)甲基)胺基)苯甲酸甲酯(化合物0119-25)的製備：
Figure 02_image179
1-乙基-1H-咪唑-5-羧酸(500毫克，3.6毫摩爾，1.0當量)的氯化亞碸(5毫升)溶液回流兩個小時。冷卻到室溫後，真空下旋出溶劑，殘留物溶於(6毫升)四氫呋喃，0℃下，滴加0.4摩爾每升的氨二氧六環溶液(1毫升)。滴加完後，混合物攪拌30分鐘。加入碳酸鉀(1克)，混合物攪拌30分鐘。混合物過濾，濾液真空濃縮，得到白色固體1-乙基-1H-咪唑-5-甲醯胺(500毫克，收率：100%)。LCMS(ESI)：m/z=140 (M-H) +.
往1-乙基-1H-咪唑-5-甲醯胺(500毫克，3.6毫摩爾，1.0當量)的四氫呋喃(10毫升)溶液加入10摩爾每升的硼烷二甲硫醚溶液(0.72毫升，7.2毫摩爾，2.0當量)。混合物室溫攪拌3小時。加入甲醇(2毫升)，混合物攪拌30分鐘。混合物真空濃縮，加入5摩爾每升的鹽酸甲醇(5毫升)，混合物攪拌10分鐘。混合物真空濃縮得到白色固體(1-乙基-1H-咪唑-5-)甲胺鹽酸鹽(550毫克，收率：94.8%)。LCMS(ESI)：m/z=126 (M+H) +。
將3-氟-4-硝基苯甲酸甲酯(367毫克，1.85毫摩爾，1.0當量)，碳酸鉀(511克，3.70毫摩爾，2.0當量)和(1-乙基-1H-咪唑-5-)甲胺鹽酸鹽(300毫克，1.85毫摩爾，1.0當量)的N-甲基吡咯烷酮(10毫升)混合物室溫下攪拌過夜。加入乙酸乙酯和水，混合物分液，有機層用飽和食鹽水洗、濃縮。殘留物用矽膠柱層析純化(洗脫劑為：二氯甲烷/甲醇=100/1到30/1)得到黃色固體3-(((1-乙基-1H-咪唑-5-基)甲基)胺基)-4-硝基苯甲酸甲酯(340毫克，收率：60.5%)。LCMS(ESI)：m/z=305 (M+H) +。
氫氣條件下，將3-(((1-乙基-1H-咪唑-5-基)甲基)胺基)-4-硝基苯甲酸甲酯(340毫克，1.1毫摩爾，1.0當量)和Pd/C(34毫克，10%品質比)的甲醇(6毫升)混合物室溫下攪拌過夜。混合物過濾，濾液真空濃縮，得到白色固體4-胺基-3-(((1-乙基-1H-咪唑-5-基)甲基)胺基)苯甲酸甲酯(300毫克，收率：98.0%)。LCMS(ESI)：m/z=275 (M+H) +。
步驟19b：2-((4-(6 -((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-((1-乙基-1H-咪唑-5-基)甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯(化合物0205-25)的製備：
2-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶4-甲基苯磺酸鹽（0203-12）(231毫克，0.45毫摩爾，1.5當量)，2-溴乙酸乙酯(50毫克，0.30毫摩爾，1.0當量)和碳酸鉀(165毫克，1.20毫摩爾，4.0當量)在N,N-二甲基甲醯胺(10毫升)溶液中60℃下攪拌16小時。將反應混合物冷卻至室溫後加水，加乙酸乙酯萃取。有機相用無水硫酸鈉乾燥並減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝20/1-1/1)純化得白色固體2-(4-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙酸乙酯(120毫克，收率：93.24%)。LCMS(ESI)：m/z=429 (M+H) +。
在2-(4-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙酸乙酯(120毫克，0.28毫摩爾，1.0當量)的甲醇/四氫呋喃=2/1(9毫升)溶液中加入氫氧化鈉的水溶液(2 摩爾/升，5毫升)。混合物在常溫下攪拌3小時。混合物的pH值用1摩爾/升的稀鹽酸調節至7，之後形成固體沉澱。混合物用乙酸乙酯萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌，並用無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮得到粗產品2-(4-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙酸(120毫克，粗品)。該產品不需要進一步純化直接用於下一步。
在2-(4-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙酸(120毫克，0.30毫摩爾，1.0當量)的N,N-二甲基甲醯胺(10毫升)溶液中加入4-胺基-3-(((1-乙基-1H-咪唑-5-基)甲基)胺基)苯甲酸甲酯(0119-25)(73毫克，0.27毫摩爾，0.9當量) 和N,N-二異丙基乙胺(109毫克，0.84毫摩爾，2.8當量)。2-(7-氮雜苯並三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(136.8毫克，0.36毫摩爾，1.2當量)最後才加入到反應中。混合物在室溫下攪拌過夜。反應用水淬滅，用乙酸乙酯萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌，並用無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮，殘留物用矽膠薄層層析製備板純化(洗脫劑為：二氯甲烷/甲醇=15/1)得到黃色油狀物4-(2-(4-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙醯胺基)-3-((((1-乙基-1H-咪唑) -5-基)甲基)胺基)苯甲酸甲酯(50毫克，產率：28.19％)。LCMS(ESI)：m/z=657 (M+H) +。
4-(2-(4-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙醯胺基)-3-((((1-乙基-1H-咪唑) -5-基)甲基)胺基)苯甲酸甲酯在醋酸(10毫升)溶液中55℃下攪拌16小時。冷卻至室溫後，溶劑減壓旋幹。殘留物用水稀釋，並用乙酸乙酯萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌，並用無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮，殘留物用矽膠薄層層析製備板純化(洗脫劑為：二氯甲烷/甲醇=10/1)得黃色固體甲基2-((4-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-((1-乙基-1H-咪唑-5-基)甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯(34毫克，收率：69.96%)。LCMS(ESI)：m/z=639 (M+H) +。
步驟19c：2-((4-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-((1-乙基-1H-咪唑-5-基)甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸(化合物25)的製備: 甲基2-((4-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-((1-乙基-1H-咪唑-5-基)甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0205-25)(34毫克，0.053毫摩爾，1.0當量)和一水合氫氧化鋰(6.7毫克，0.16毫摩爾，3當量)的乙腈/水=5/1(6毫升)混合物在40℃下攪拌過夜。混合物冷卻到室溫，並減壓濃縮。殘留物的pH值用1摩爾/升的稀硫酸調節至6，之後形成固體沉澱。混合物過濾。殘留物用矽膠薄層層析製備板純化(洗脫劑為：二氯甲烷/甲醇＝10/1)得黃色固體2-((4-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-((1-乙基-1H-咪唑-5-基)甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸(18.3毫克，收率：55.25%)。LCMS(ESI)：m/z=625 (M+H) +。 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.69 (s, 1H), 8.15 (d, J= 1.9 Hz, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.81 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.76 – 7.55 (m, 3H), 7.42 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.34 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 7.03 (d, J= 1.9 Hz, 1H), 6.81 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 6.67 (t, J= 7.1 Hz, 1H), 6.46 (s, 1H), 5.73 (s, 2H), 5.61 (s, 2H), 3.98 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 3.81 (s, 2H), 2.87 (d, J= 10.8 Hz, 2H), 2.53 (d, J= 11.4 Hz, 1H), 2.15 (t, J= 11.1 Hz, 2H), 1.72 (d, J= 11.8 Hz, 2H), 1.60 – 1.42 (m, 2H), 1.14 (t, J= 7.2 Hz, 3H).
實施例 20 ： (S)-2-((4-(6-((4- 氟苯並呋喃 -7- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶 -2- 基 ) 呱啶 -1- 基 ) 甲基 )-1-( 氧雜環丁烷 -2- 基甲基 )-1H- 苯並 [d] 咪唑 -6- 羧酸 ( 化合物 28) 的製備 ( 按照方案二線路製備）
步驟20a：(4-氟苯並呋喃-7-基)甲醇 (化合物0201-28)的製備：
Figure 02_image181
氮氣保護條件下，將5-氟-2-甲基苯酚(3.0克，23.8毫摩爾，1.0當量)，2-溴-1,1-二乙氧基乙烷(5.63克，28.5毫摩爾，1.2當量)，碳酸鉀(4.92克，35.7毫摩爾，1.5當量)和碘化鉀(0.3克，10%品質比)的N,N-二甲基甲醯胺混合物在120℃下攪拌過夜。冷卻到室溫後，反應用水淬滅，加入乙酸乙酯萃取。有機層用飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到粗產品2-(2,2-二乙氧基乙氧基)-4-氟-1-甲基苯(5.3克，產率：92.0％)。該產品不需要進一步純化直接用於下一步。
氮氣保護條件下，將上述得到的2-(2,2-二乙氧基乙氧基)-4-氟-1-甲基苯(1.0克，4.13毫摩爾，1.0當量)，和多聚磷酸(3.5克，10.3毫摩爾，2.5當量)的1,2-二氯乙烷(20毫升)的混合物回流過夜。冷卻到室溫後，反應用水(40毫升)淬滅，並用乙酸乙酯(50毫升)萃取。有機層用飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析純化(洗脫劑為：石油醚)得到黃色油狀4-氟-7-甲基苯並呋喃(300毫克，產率：49.0％)。LCMS(ESI)：m/z=151 (M+H) +。
氮氣保護條件下，將上述得到的4-氟-7-甲基苯並呋喃(300毫克，2.00毫摩爾，1.0當量) 、N-溴代琥珀醯亞胺(415毫克，2.40毫摩爾，1.2當量)和偶氮二異丁腈(66毫克，0.4毫摩爾，0.2當量)的1,2-二氯乙烷(10毫升)混合物在72 ℃攪拌過夜。冷卻至室溫後，減壓除去溶劑。殘留物用水(20毫升)稀釋，並用石油醚/乙酸乙酯=2/1(30毫升)萃取。有機層用飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，並減壓濃縮。用柱色譜法(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝ 10/1)純化粗產物，得到白色固體7-(溴甲基)-4-氟苯並呋喃(400毫克，收率：87.3％)。LCMS(ESI)：m/z=229 (M+H) +。
將上述得到的7-(溴甲基)-4-氟苯並呋喃(400毫克，1.73毫摩爾，1.0當量)和醋酸鉀 (1.67克，17.3毫摩爾，10.0當量)的N,N-二甲基甲醯胺(15毫升)的混合物在室溫下攪拌3小時。反應用水(20毫升)淬滅，加入乙酸乙酯(30毫升)萃取。有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到粗產品乙酸(4-氟苯並呋喃-7-基)甲基酯(500毫克粗品)。該產品不需要進一步純化直接用於下一步。
往上述得到的乙酸(4-氟苯並呋喃-7-基)甲基酯(500毫克，2.42毫摩爾，1.0當量)的四氫呋喃(10毫升)溶液中加入的甲醇鈉的甲醇溶液(5.4 摩爾/升，0.7毫升，3.64毫摩爾，1.5當量)。混合物在常溫下攪拌1小時。反應用1摩爾/升的鹽酸調節pH約至6，然後形成固體沉澱物。漿液用水(15毫升)稀釋，並用乙酸乙酯 (20毫升)萃取。有機層用無水硫酸鈉乾燥，並減壓濃縮。殘留物用柱色譜法(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝ 4/1)純化，得到黃色固體(4-氟苯並呋喃-7-基)甲醇(195毫克，收率：67.9％)。LCMS(ESI)：m/z=167 (M+H) +。
步驟20b：4-(6 -((4-氟苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯 (化合物0202-28)的製備：氮氣保護條件下，將4-(6-氯吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯（0104-1）(195毫克，0.66毫摩爾，1.0當量)，(4-氟苯並呋喃-7-基)甲醇（0201-28）(132毫克，0.79毫摩爾，1.2當量)、碳酸銫(430毫克，1.32毫摩爾，2.0當量)、2-二環己基磷-2',6'-二異丙氧基-1,1'-聯苯(61毫克，0.132毫摩爾，0.2當量)和三(二亞苄基丙酮)二鈀(0) (55毫克，0.06毫摩爾，0.1當量)的甲苯(10毫升)的混合物在120℃下回流過夜。冷卻至室溫後，將反應液通過矽藻土過濾，固體用乙酸乙酯(15毫升)洗滌。將濾液用水(20毫升)稀釋，並用乙酸乙酯(20毫升)萃取。有機層用無水硫酸鈉乾燥，並減壓濃縮。用柱色譜法(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝ 10/1)純化粗產物，得到白色固體4-(6 -((4-氟苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯(230毫克，產率：82.1％)。LCMS(ESI)：m/z=427 (M+H) +。
步驟20c：2-((4-氟苯並呋喃-7-基)甲氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶鹽酸鹽 (化合物0203-28)的製備：將4-(6 -((4-氟苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯（0202-28）(110毫克，0.258毫摩爾，1.0當量)加入鹽酸二氧六環(15毫升)溶液在室溫下攪拌30分鐘。將反應溶液減壓濃縮得到白色固體2 -((4-氟苯並呋喃-7-基)甲氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶鹽酸鹽(84毫克粗品). LCMS(ESI)：m/z=327 (M+H) +。
步驟20d：(S)-2-((4-(6 -((4-氟苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯 (化合物0204-28 )的製備: 將2-((4-氟苯並呋喃-7-基)甲氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶鹽酸鹽（0203-28） (84毫克，0.257毫摩爾，1.2當量)、(S)-2-(氯甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（化合物0116-3）(60毫克，0.21毫摩爾，1.0當量)和N,N-二異丙基乙胺(0.5毫升)的N-甲基吡咯烷酮(5毫升)的混合物在60℃下攪拌4小時。將反應混合物冷卻至室溫後加水，加乙酸乙酯萃取。有機相用無水硫酸鈉乾燥並減壓濃縮。殘留物用矽膠薄層層析製備板純化(洗脫劑為：乙酸乙酯)得白色固體(S)-2 -((4-(6 -((4-氟苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯(99毫克，收率：80.4%)。LCMS(ESI)：m/z=585 (M+H) +。
步驟20e：(S)-2-((4-(6-((4-氟苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸 (化合物28)的製備: 將(S)-2 -((4-(6-((4-氟苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（0204-28）(99毫克，0.184毫摩爾，1.0當量)和一水合氫氧化鋰(24毫克，0.553毫摩爾，3.0當量)的乙腈/水=5/1(6毫升)混合物在40℃下攪拌過夜。混合物冷卻到室溫後，用1摩爾/升的鹽酸調節pH約至6，然後形成固體沉澱物。漿液用水(12毫升)稀釋，攪拌4小時，然後通過過濾收集固體。固體用水洗滌，然後在真空下乾燥。將固體溶解在二氯甲烷 / 甲醇 ＝ 1/2(5毫升)中，然後過濾，將濾液用無水硫酸鈉乾燥並減壓濃縮。殘留物真空乾燥得到得到白色固體(S)-2-((4-(6-((4-氟苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸(42毫克，收率：40.0%)。LCMS(ESI)：m/z=571 (M+H) +。 熔點：131~143 ℃； 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.71 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.80 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.70 – 7.56 (m, 2H), 7.44 (dd, J= 7.8, 5.5 Hz, 1H), 7.08 (dd, J= 8.9, 5.5 Hz, 2H), 6.86 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 6.66 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 5.60 (s, 2H), 5.11 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 4.79 (dd, J= 15.1, 7.1 Hz, 1H), 4.66 (d, J= 13.7 Hz, 1H), 4.46 (dd, J= 13.6, 7.2 Hz, 1H), 4.37 (dd, J= 14.3, 5.8 Hz, 1H), 3.95 (d, J= 13.5 Hz, 1H), 3.78 (d, J= 13.5 Hz, 1H), 3.00 (d, J= 10.5 Hz, 1H), 2.86 (d, J= 10.7 Hz, 1H), 2.70 (dt, J= 16.0, 7.8 Hz, 1H), 2.61 (t, J= 11.5 Hz, 1H), 2.44 (t, J= 13.0 Hz, 1H), 2.22 (dt, J= 21.6, 10.6 Hz, 2H), 1.86 – 1.65 (m, 4H).
實施例 21 ： ( S)-2-((4-(6-((4- 甲基苯並呋喃 -7- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶 -2- 基 ) 呱啶 -1- 基 ) 甲基 )-1-( 氧雜環丁烷 -2- 基甲基 )-1 H- 苯並 [ d] 咪唑 -6- 羧酸 ( 化合物 30) 的製備 ( 按照方案二線路製備）
步驟21a：(4-甲基苯並呋喃-7-基)甲醇 (化合物0201-30)的製備：
Figure 02_image183
將2-羥基-4-甲基苯甲酸甲酯（831毫克，5.0毫摩爾，1.0當量），2-溴-1,1-二乙氧基乙烷（1.48克，7.5毫摩爾，1.5當量）和碳酸鉀（1.73克，12.5毫摩爾，2.5當量）的N,N-二甲基甲醯胺混合物置於120℃下攪拌過夜。冷卻到室溫後，反應用水淬滅，並用乙酸乙酯萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮，得到黃色油狀物2-(2,2-二乙氧基乙氧基)-4-甲基苯甲酸甲酯（4克，粗品），該產品不需要進一步純化直接用於下一步。
將上述得到的2-(2,2-二乙氧基乙氧基)-4-甲基苯甲酸甲酯（1.72克，5.0毫摩爾，1.0當量）和多聚磷酸（300毫克， 0.88毫摩爾，0.18當量）的甲苯混合物回流過夜。冷卻到室溫後，反應用水淬滅，並用乙酸乙酯萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=50/1）得到無色油狀物4-甲基苯並呋喃-7-羧酸甲酯（496毫克，收率：52.2％)。
氮氣保護下，將上述得到的4-甲基苯並呋喃-7-羧酸甲酯(430毫克，2.26毫摩爾，1.0當量)溶解於無水四氫呋喃中.混合物冷卻至0℃。加入氫化鋁鋰（129毫克，3.39毫摩爾，1.5當量），混合物攪拌1.5小時。在0℃下依次加入0.13毫升水，0.13毫升15%氫氧化鈉水溶液和0.39毫升水。混合物攪拌15分鐘。加入1.6克無水硫酸鈉，然後混合物在室溫下攪拌0.5小時。混合物經減壓過濾。濾液減壓濃縮得到黃色固體(4-甲基苯並呋喃-7-基)甲醇（391毫克，粗品）。LCMS(ESI)：m /z=145(M+H-H 2O) +.
步驟21b：( S)-2-((4-(6-氯吡啶-2-基)呱啶1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d]咪唑-6-羧酸甲酯 (化合物0204-20)的製備：向4-(6-氯吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯（0104-1）（200毫克，0.67毫摩爾，1.0當量）在4毫升二氧六環的混合物中加入1.5毫升4M氯化氫的二氧六環溶液。混合物在室溫下攪拌過夜。混合物減壓濃縮至幹。殘留物加入到5毫升 N-甲基吡咯烷酮中，再加入 N,N-二異丙基乙胺（432毫克，3.35毫摩爾，5.0當量）。混合物在室溫下攪拌5分鐘。加入( S)-2-(氯甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d]咪唑-6-羧酸甲酯（化合物0116-3）（180 毫克，0.61毫摩爾，0.9當量），然後混合物在60℃下攪拌過夜。混合物用乙酸乙酯稀釋，用水和飽和食鹽水洗。有機相減壓濃縮，殘留物經矽膠柱層析純化（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=5/1到1/1）得到黃色固體( S)-2-((4-(6-氯吡啶-2-基)呱啶1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d]咪唑-6-羧酸甲酯（245毫克，收率：80.3%）。LCMS(ESI)：m /z=455(M+H) +。 氮氣保護下，將上述得到的( S)-2-((4-(6-氯吡啶-2-基)呱啶1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d]咪唑-6-羧酸甲酯（120毫克，0.264毫摩爾，1.0當量）、(4-甲基苯並呋喃-7-基)甲醇（0201-30）（52毫克，0.317毫摩爾，1.2當量）、碳酸銫（215毫克，0.66毫摩爾，2.5當量），2-雙環已基膦-2',6'-二異丙氧基聯苯（12毫克，0.026毫摩爾，0.1當量）和三(二亞苄基丙酮)二鈀(0) （60毫克，0.013毫摩爾，0.05當量）的甲苯（20毫升）的混合物在125℃下回流過夜。冷卻至室溫後，將反應液通過矽藻土過濾，固體用乙酸乙酯洗滌。將濾液減壓濃縮。殘留物用製備薄層色譜純化（洗脫劑：二氯甲烷 / 甲醇＝33/1）得到黃色固體( S)-2-((4-(6-((4-甲基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d]咪唑-6-羧酸甲酯（68毫克，收率：44.4％)。LCMS(ESI)：m /z=581 (M+H) +。
步驟21c：( S)-2-((4-(6-((4-甲基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d]咪唑-6-羧酸 (化合物30)的製備: ( S)-2-((4-(6-((4-甲基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d]咪唑-6-羧酸甲酯（0204-30）（68毫克，0.12毫摩爾，1.0當量）和一水合氫氧化鋰（10毫克，0.23毫摩爾，2.0當量）在5毫升乙腈和1毫升水的混合溶劑中的混合物在40℃下攪拌過夜。混合物冷卻到室溫，並減壓濃縮。殘留物的pH值用稀硫酸調節至6，之後形成固體沉澱。混合物過濾。殘留物用水洗。混合物用製備薄層色譜純化（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇=15/1）得到黃色固體( S)-2-((4-(6-((4-甲基苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d]咪唑-6-羧酸（45毫克，收率：67.1%)。LCMS(ESI)：m /z=567 (M+H) +, 熔點：105~107℃。 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.70 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.98 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 7.81 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.73 – 7.56 (m, 2H), 7.31 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 7.03 (t, J= 4.5 Hz, 2H), 6.86 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 6.65 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 5.59 (s, 2H), 5.11 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 4.79 (dd, J= 15.3, 7.2 Hz, 1H), 4.66 (dd, J= 15.2, 2.6 Hz, 1H), 4.46 (dd, J= 13.7, 7.6 Hz, 1H), 4.36 (dt, J= 9.0, 5.9 Hz, 1H), 3.96 (s, 1H), 3.79 (s, 1H), 3.03 (s, 1H), 2.87 (s, 1H), 2.76 – 2.56 (m, 2H), 2.45 (d, J= 16.4 Hz, 4H), 2.20 (dd, J= 29.0, 21.6 Hz, 2H), 1.79 (d, J= 30.1 Hz, 4H).
實施例 22 ： ( S)-2-((4-(6-((2- 甲基 -4-( 三氟甲基 ) 苯並呋喃 -7- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶 -2- 基 ) 呱啶 -1- 基 ) 甲基 )-1-( 氧雜環丁烷 -2- 基甲基 )-1 H- 苯並 [ d] 咪唑 -6- 羧酸 ( 化合物 31) 的製備 ( 按照方案二線路製備）
步驟22a：(2-甲基-4-(三氟甲基)苯並呋喃-7-基)甲醇 (化合物0201-31)的製備：
Figure 02_image185
將2-溴-5-(三氟甲基)苯酚（964毫克，4.0毫摩爾，1.0當量），3-溴丙炔（619毫克，5.2毫摩爾，1.3當量）和碳酸鉀（884毫克，6.4毫摩爾，1.6當量）的N,N-二甲基甲醯胺混合物在50℃下攪拌3小時。冷卻到室溫後，反應用水淬滅，並用乙酸乙酯萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮，得到 1-溴-2-(丙-2-炔-1-基氧基)-4-(三氟甲基)苯（920毫克，收率：82.1%），該產品不需要進一步純化直接用於下一步。
在氮氣保護下，將上述得到的 1-溴-2-(丙-2-炔-1-基氧基)-4-(三氟甲基)苯（920毫克，3.3毫摩爾，1.0當量）和氟化銫（752毫克，4.95毫摩爾，14.5當量）的N,N-二乙基苯胺混合物置於220℃下攪拌5小時。冷卻到室溫後，混合物加入濃鹽酸進行酸化，加入乙酸乙酯和石油醚的混合物溶劑萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析（洗脫劑：石油醚）純化，得到7-溴-2-甲基-4-(三氟甲基)苯並呋喃（650毫克，收率：70.6%）。
將上述得到的7-溴-2-甲基-4-(三氟甲基)苯並呋喃（580毫克，2.08毫摩爾，1.0當量）、1,3-二(二苯基膦)丙烷（172毫克，0.42毫摩爾，0.2當量），醋酸鈀（95毫克，0.42毫摩爾，0.2當量）和三乙胺（2.1克，20.8毫摩爾，10.0當量）在25毫升甲醇和5毫升N,N-二甲基甲醯胺混合溶劑中的混合物加入到加壓反應釜。反應釜中充入0.3兆帕的一氧化碳，在80℃下攪拌過夜。冷卻到室溫後，反應用水淬滅，並用乙酸乙酯萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=50/1到20/1）得到黃色固體2-甲基-4-(三氟甲基)苯並呋喃-7-羧酸甲酯（521毫克，收率：97.1％)。
氮氣保護下，將上述得到的2-甲基-4-(三氟甲基)苯並呋喃-7-羧酸甲酯(521毫克，2.0摩爾，1.0當量)溶解於無水四氫呋喃中.混合物冷卻至0℃。加入氫化鋁鋰（116毫克，3.0毫摩爾，1.5當量），混合物攪拌1.5小時。在0℃下依次加入0.12毫升水，0.12毫升15%氫氧化鈉水溶液和0.36毫升水。混合物攪拌15分鐘。加入1.5克無水硫酸鈉，然後混合物在室溫下攪拌0.5小時。混合物經減壓過濾。濾液減壓濃縮得到黃色油狀物(2-甲基-4-(三氟甲基)苯並呋喃-7-基)甲醇（507毫克，粗品）。LCMS(ESI)：m /z=175(M+H-H 2O) +.
步驟22b：4-(6-((2-甲基-4-(三氟甲基)苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯 (化合物0202-31)的製備：氮氣保護下，將4-(6-氯吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯（0104-1）（150毫克，0.51毫摩爾，1.0當量）、(2-甲基-4-(三氟甲基)苯並呋喃-7-基)甲醇（0201-31）（140毫克，0.61毫摩爾，1.2當量）、碳酸銫（416毫克，1.28毫摩爾，2.5當量），2-雙環已基膦-2',6'-二異丙氧基聯苯（36毫克，0.077毫摩爾，0.15當量）和三(二亞苄基丙酮)二鈀(0) （42毫克，0.046毫摩爾，0.09當量）的甲苯（50毫升）的混合物在125 ℃下回流過夜。冷卻至室溫後，將反應液通過矽藻土過濾，固體用乙酸乙酯洗滌。將濾液減壓濃縮。殘留物用製備矽膠柱層析純化（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=20/1到6/1），得到黃色固體4-(6-((2-甲基-4-(三氟甲基)苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯（220毫克，收率：88.0％)。LCMS(ESI)：m /z=491 (M+H) +。
步驟22c：2-((2-甲基-4-(三氟甲基)苯並呋喃-7-基)甲氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶鹽酸鹽 (化合物0203-31)的製備：向4-(6-((2-甲基-4-(三氟甲基)苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯（0202-31）（220毫克，0.45毫摩爾，1.0當量）在5毫升二氧六環的混合物中加入1毫升4M氯化氫的二氧六環溶液。混合物在室溫下攪拌過夜。混合物減壓濃縮至幹，得到白色固體2-((2-甲基-4-(三氟甲基)苯並呋喃-7-基)甲氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶鹽酸鹽（250毫克，粗品）。LCMS(ESI)：m /z=391(M+H) +。
步驟22d：( S)-2-((4-(6-((2-甲基-4-(三氟甲基)苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d]咪唑-6-羧酸甲酯 (化合物0204-31)的製備：將2-((2-甲基-4-(三氟甲基)苯並呋喃-7-基)甲氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶鹽酸鹽（0203-21）（250毫克，0.45毫摩爾，2.6當量）加入到10毫升 N-甲基吡咯烷酮中，再加入 N,N-二異丙基乙胺（171毫克，1.25毫摩爾，7.3當量）。混合物在室溫下攪拌5分鐘。加入( S)-2-(氯甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d]咪唑-6-羧酸甲酯（0116-3）（50 毫克，0.17毫摩爾，1.0當量），然後混合物在60℃下攪拌過夜。混合物用乙酸乙酯稀釋，用水和飽和食鹽水洗。有機相減壓濃縮，殘留物經製備薄層色譜純化（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=2/1），得到黃色固體( S)-2-((4-(6-((2-甲基-4-(三氟甲基)苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d]咪唑-6-羧酸甲酯（74毫克，收率：67.2%）。 m/z=649(M+H) +。
步驟22e：( S)-2-((4-(6-((2-甲基-4-(三氟甲基)苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d]咪唑-6-羧酸 (化合物31)的製備: ( S)-2-((4-(6-((2-甲基-4-(三氟甲基)苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d]咪唑-6-羧酸甲酯（0204-31）（74毫克，0.11毫摩爾，1.0當量）和一水合氫氧化鋰（12毫克，0.8毫摩爾，2.5當量）在5毫升乙腈和1毫升水的混合溶劑中的混合物在40℃下攪拌過夜。混合物冷卻到室溫，並減壓濃縮。加入稀硫酸調節殘留物的pH值至6，加入乙酸乙酯萃取，用飽和食鹽水洗。有機相經過無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物用製備薄層色譜純化（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇=10/1）得到黃色固體( S)-2-((4-(6-((2-甲基-4-(三氟甲基)苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d]咪唑-6-羧酸（55毫克，收率：75.3%)。LCMS(ESI)：m /z=635 (M+H) +, 熔點：126~128℃。 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.72 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.81 (dd, J= 8.4, 1.4 Hz, 1H), 7.64 (t, J= 7.8 Hz, 2H), 7.54 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 7.47 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 6.87 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 6.78 – 6.67 (m, 2H), 5.68 (s, 2H), 5.10 (qd, J= 7.2, 2.8 Hz, 1H), 4.78 (dd, J= 15.2, 7.2 Hz, 1H), 4.64 (dd, J= 15.2, 2.6 Hz, 1H), 4.45 (dt, J= 13.9, 7.0 Hz, 1H), 4.35 (dt, J= 9.0, 5.9 Hz, 1H), 3.95 (d, J= 13.6 Hz, 1H), 3.78 (d, J= 13.6 Hz, 1H), 2.98 (d, J= 10.6 Hz, 1H), 2.85 (d, J= 10.9 Hz, 1H), 2.73 – 2.64 (m, 1H), 2.62 – 2.54 (m, 1H), 2.49 – 2.39 (m, 4H), 2.21 (dt, J= 21.7, 10.6 Hz, 2H), 1.81 – 1.62 (m, 4H).
實施例 23 ： (S)-2-((4-(6-((5- 氟苯並呋喃 -6- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶 -2- 基 ) 呱啶 -1- 基 ) 甲基 )-1-( 氧雜環丁烷 -2- 基甲基 )-1H- 苯並 [d] 咪唑 -6- 羧酸 ( 化合物 32) 的製備 ( 按照方案四線路製備）
步驟23a：(5-氟苯並呋喃-6-基)甲醇 (化合物0401-32)的製備：
Figure 02_image187
氮氣保護下，向2-氟-5-羥基苯甲酸甲酯(2.0克，11.76毫摩爾，1.0當量)的乙酸(20毫升)的溶液中加入N-碘代丁二醯亞胺(2.9克，12.94毫摩爾，1.1當量)，混合物在室溫下攪拌過夜。將反應液倒入水中，並攪拌30分鐘。將混合物過濾，然後濾餅用水洗滌並減壓乾燥得到白色固體2-氟-5-羥基-4-碘苯甲酸甲酯(2.7克，收率：77.59%)。LCMS(ESI)：m/z=297 (M+H) +。
氮氣保護下，向上述得到的2-氟-5-羥基-4-碘苯甲酸甲酯(2.7克，9.12毫摩爾，1.0當量)，三乙胺 (2.76克，27.36毫摩爾，3.0當量)，碘化亞銅 (26毫克，0.137毫摩爾，0.02當量)和二(三苯基膦)二氯化鈀(192 毫克，0.274毫摩爾，0.03當量)的四氫呋喃(20毫升)的溶液中加入三甲基乙炔基矽烷(1.79克，18.24毫摩爾，2.0當量)，混合物在70℃下攪拌過夜。冷卻到室溫後，減壓除去溶劑，加入甲醇(20毫升)，二異丙基乙胺(3.5克，27.36毫摩爾，3.0當量)和碘化亞銅(1.7克，9.12毫摩爾，1.0當量)。將混合物回流2小時。冷卻到室溫後，將混合物倒入水中。加入PE / EA = 2/1的溶液進行萃取，將有機層減壓濃縮。加入四氫呋喃(20毫升)和四丁基氟化銨三水合物(1.19克,4.56毫摩爾，0.5當量)，混合物回流1小時。冷卻到室溫後，混合物用水洗，並減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析純化(洗脫劑為：石油醚/乙酸乙酯=100/1到20/1)得到黃色固體5-氟苯並呋喃-6-羧酸甲酯(1克，收率：55.87%)。LCMS(ESI)：m/z=195 (M+H) +。
氮氣保護條件下，在5-氟苯並呋喃-6-羧酸甲酯(241毫克，1.24毫摩爾，1.0當量)的四氫呋喃(20毫升)溶液中加入四氫鋰鋁(94.3毫克，2.48毫摩爾， 2當量)。混合物在常溫下攪拌3小時。反應用水淬滅，用乙酸乙酯萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌，並用無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析純化(洗脫劑為：石油醚/乙酸乙酯=20/1到5/1)得到黃色固體(5-氟苯並呋喃-6-基)甲醇   (200毫克，收率：97.08％)。LCMS(ESI)：m/z=167 (M+H) +。
步驟23b：4-(6-((5-氟苯並呋喃-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯 (化合物0402-32)的製備：氮氣保護條件下，4-(6-氯吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯 （0104-1）(297毫克，1.0毫摩爾，1.0當量)，(5-氟苯並呋喃-6-基)甲醇（0401-32(200毫克，1.2毫摩爾，1.2當量)、碳酸銫(652毫克，2.0毫摩爾，2.0當量)、2-二環己基磷-2',6'-二異丙氧基-1,1'-聯苯(46.7毫克，0.1毫摩爾，0.1當量)和三(二亞苄基丙酮)二鈀(0) (45.8毫克，0.05毫摩爾，0.05當量)的甲苯(10毫升)的混合物在125℃下回流過夜。冷卻至室溫後，將反應液通過矽藻土過濾，固體用乙酸乙酯洗滌。將濾液減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝20/1-5/1)純化粗產物，得到黃色油狀物4-(6-((5-氟苯並呋喃-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯 (250毫克，產率：58.55％)。LCMS(ESI)：m/z=427 (M+H) +。
步驟23c：2-((5-氟苯並呋喃-6-基)甲氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶4-甲基苯磺酸鹽 (化合物0403-32)的製備：在4-(6-((5-氟苯並呋喃-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯 （0402-32）(250毫克，0.587毫摩爾，1.0當量)的乙酸乙酯(10毫升)溶液中加入對甲苯磺酸一水合物(303毫克，1.76毫摩爾，3當量)。混合物在60℃下攪拌過夜。混合物過濾。殘留物用乙酸乙酯洗滌。殘留物乾燥，得到白色固體2-((5-氟苯並呋喃-6-基)甲氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶4-甲基苯磺酸鹽(254毫克, 收率: 86.99%). LCMS(ESI)：m/z=327 (M+H) +。
步驟23d：(S)-2-((4-(6-((5-氟苯並呋喃-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯 (化合物0404-32 )的製備: 將2-((5-氟苯並呋喃-6-基)甲氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶4-甲基苯磺酸鹽（0403-32）(203毫克，0.407毫摩爾，1.5當量)，(S)-2-(氯甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（0116-3）(80毫克，0.27毫摩爾，1.0當量)和碳酸鉀(149毫克，1.08毫摩爾，4.0當量)的乙腈(10毫升)溶液在60℃的條件下攪拌16小時。將反應混合物冷卻至室溫後加水，加乙酸乙酯萃取。有機相用無水硫酸鈉乾燥並減壓濃縮。殘留物用矽膠薄層層析製備板純化(洗脫劑為：乙酸乙酯)得白色油狀物(S)-2-((4-(6-((5-氟苯並呋喃-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯(100毫克，收率：63.29%)。LCMS(ESI)：m/z=585 (M+H) +。
步驟23e：(S)-2-((4-(6-((5-氟苯並呋喃-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸(化合物32)的製備: (S)-2-((4-(6-((5-氟苯並呋喃-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯(0404-32 )(100毫克，0.17毫摩爾，1.0當量)和一水合氫氧化鋰(11毫克，0.26毫摩爾，1.5當量)的乙腈/水=5/1(6毫升)混合物在40℃下攪拌過夜。混合物冷卻到室溫，並減壓濃縮。殘留物的pH值用1摩爾/升的鹽酸調節至6，之後形成固體沉澱。混合物過濾。殘留物用水洗並減壓乾燥得白色固體(S)-2-((4-(6-((5-氟苯並呋喃-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸(70毫克，收率：72.16%)。LCMS(ESI)：m/z=571 (M+H) +。1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8.25 (s, 1H), 8.01 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.80 (dd, J = 8.4, 1.4 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 7.62 (dd, J = 12.2, 4.8 Hz, 2H), 7.49 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 6.94 (dd, J = 2.1, 0.8 Hz, 1H), 6.86 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 6.67 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 5.46 (s, 2H), 5.11 (qd, J = 7.3, 2.8 Hz, 1H), 4.80 (dd, J = 15.2, 7.2 Hz, 1H), 4.66 (dd, J = 15.2, 2.6 Hz, 1H), 4.46 (dt, J = 13.9, 7.0 Hz, 1H), 4.37 (dt, J = 9.0, 5.9 Hz, 1H), 3.95 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 3.78 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 3.00 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 2.86 (d, J = 11.3 Hz, 1H), 2.74 – 2.66 (m, 1H), 2.62 (tt, J = 11.4, 4.0 Hz, 1H), 2.48 – 2.40 (m, 1H), 2.29 – 2.22 (m, 1H), 2.22 – 2.14 (m, 1H), 1.85 – 1.69 (m, 4H).
實施例 24 ： (S)-2-((4-(6-((6- 氟苯並呋喃 -5- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶 -2- 基 ) 呱啶 -1- 基 ) 甲基 )-3-( 氧雜環丁烷 -2- 基甲基 )-3H- 咪唑並 [4,5-b] 吡啶 -5- 羧酸 ( 化合物 33) 的製備 ( 按照方案五線路製備）
步驟24a：(6-氟苯並呋喃-5-基)甲醇(化合物0501-33)的製備：
Figure 02_image189
向2-氟-4-羥基苯甲醛(5.0克，35.7毫摩爾，1.0當量)的濃硫酸(30毫升)溶液中加入N-碘代丁二醯亞胺(8.84克，39.3毫摩爾，1.1當量)，混合物在室溫下攪拌3小時。將反應液倒入冰水中並攪拌1小時。將混合物過濾，然後濾餅用水洗滌並減壓乾燥得到粗產品2-氟-4-羥基-5-碘代苯甲醛 (5.6克，粗品)，該產品不需要進一步純化直接用於下一步。
氮氣保護下，向上述得到的2-氟-4-羥基-5-碘代苯甲醛(5.6克，20.8毫摩爾，1.0當量)，三乙胺 (6.3克，62.4毫摩爾，3.0當量)，碘化亞銅 (59.3毫克，0.31毫摩爾，0.02當量)和二(三苯基膦)二氯化鈀(438 毫克，0.62毫摩爾，0.03當量)的四氫呋喃(50毫升)的溶液中加入三甲基乙炔基矽烷(4.08克，41.6毫摩爾，2.0當量)，混合物在70℃下攪拌過夜。冷卻到室溫後，減壓除去溶劑，加入甲醇(150毫升)，二異丙基乙胺(8.06克，62.4毫摩爾，3.0當量)和碘化亞銅(4.0克，20.8毫摩爾，1.0當量)。將混合物回流2小時。冷卻到室溫後，將混合物倒入水中。加入PE / EA = 2/1的溶液進行萃取，將有機層減壓濃縮。加入四氫呋喃(50毫升)和四丁基氟化銨三水合物(2.7克，10.4毫摩爾，0.5當量)，混合物回流1小時。冷卻到室溫後，混合物用水洗，並減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析純化(洗脫劑為：石油醚/乙酸乙酯=100/1到20/1)得到黃色固體6-氟苯並呋喃-5-甲醛(2.1克，收率：61.19%)。LCMS(ESI)：m/z=165 (M+H) +。
在6-氟苯並呋喃-5-甲醛(1克，6.10毫摩爾，1.0當量)的甲醇(25毫升)溶液中加入硼氫化鈉(277毫克，7.32毫摩爾，1.2當量)。混合物在常溫下攪拌1小時。反應用水淬滅，用乙酸乙酯萃取。有機相用食飽和鹽水洗滌，並用無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮得到(6-氟苯並呋喃-5-基)甲醇 (947毫克，收率：93.58％)為黃色固體。LCMS(ESI)：m/z=167 (M+H) +。
步驟24b：4-(6 -((6-氟苯並呋喃-5-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯 (化合物0502-33)的製備：氮氣保護條件下，4-(6-氯吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯 （0104-1）(350毫克，1.18毫摩爾，1.0當量)，(6-氟苯並呋喃-5-基)甲醇（0501-33）(235毫克，1.416毫摩爾，1.2當量)、碳酸銫(769毫克，2.36毫摩爾，2.0當量)、2-二環己基磷-2',6'-二異丙氧基-1,1'-聯苯(55毫克，0.118毫摩爾，0.1當量)和三(二亞苄基丙酮)二鈀(0) (54毫克，0.059毫摩爾，0.05當量)的甲苯(10毫升)的混合物在125℃下回流過夜。冷卻至室溫後，將反應液通過矽藻土過濾，固體用乙酸乙酯洗滌。將濾液減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝10/1-5/1)純化粗產物，得到黃色油狀物4-(6 -((6-氟苯並呋喃-5-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯(450毫克，產率：89.64％)。LCMS(ESI)：m/z=427 (M+H) +。
步驟24c：2-((6-氟苯並呋喃-5-基)甲氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶4-甲基苯磺酸鹽 (化合物0503-33)的製備：在4-(6-((6-氟苯並呋喃-5-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯（0502-33）(450毫克，1.06毫摩爾，1.0當量)的乙酸乙酯(10毫升)溶液中加入對甲苯磺酸一水合物(546毫克，3.17毫摩爾，3當量)。混合物在60℃下攪拌過夜。混合物過濾。殘留物用乙酸乙酯洗滌。殘留物乾燥，得到白色固體2-((6-氟苯並呋喃-5-基)甲氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶4-甲基苯磺酸鹽(510毫克, 收率: 96.59%). LCMS(ESI)：m/z=327 (M+H) +。
步驟24d：(S)-2-((4-(6-((6-氟苯並呋喃-5-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-3-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑並[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯 (化合物0504-33)的製備: 將2-((6-氟苯並呋喃-5-基)甲氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶4-甲基苯磺酸鹽（0503-33）(127毫克，0.255毫摩爾，1.5當量)，(S)-2-(氯甲基)-3-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑並[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯（0116-1）(50毫克，0.17毫摩爾，1.0當量)和碳酸鉀(94毫克，0.68毫摩爾，4.0當量)的乙腈(10毫升)溶液在60℃下攪拌16小時。將反應混合物冷卻至室溫後加水，加乙酸乙酯萃取。有機相用無水硫酸鈉乾燥並減壓濃縮。殘留物用矽膠薄層層析製備板純化(洗脫劑為：乙酸乙酯)得白色固體(S)-2-((4-(6-((6-氟苯並呋喃-5-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-3-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑並[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯(66毫克，收率：66.37%)。LCMS(ESI)：m/z=586 (M+H) +。
步驟24e：(S)-2-((4-(6-((6-氟苯並呋喃-5-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-3-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑並[4,5-b]吡啶-5-羧酸 (化合物33)的製備: (S)-2-((4-(6-((6-氟苯並呋喃-5-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-3-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑並[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯)0504-33)(66毫克，0.11毫摩爾，1.0當量)和一水合氫氧化鋰(5毫克，0.12毫摩爾，1.1當量)的乙腈/水=5/1(6毫升)混合物在40℃下攪拌過夜。混合物冷卻到室溫，並減壓濃縮。殘留物的pH值用1摩爾/升的鹽酸調節至6，之後形成固體沉澱。混合物過濾。殘留物用水洗並減壓乾燥得白色固體(S)-2-((4-(6-((6-氟苯並呋喃-5-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-3-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-3H-咪唑並[4,5-b]吡啶-5-羧酸(40毫克，收率：63.49%)。LCMS(ESI)：m/z=572 (M+H) +。 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8.04 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.97 (dd, J= 14.1, 5.2 Hz, 2H), 7.81 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 7.66 – 7.53 (m, 2H), 6.97 – 6.91 (m, 1H), 6.86 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 6.65 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 5.44 (s, 2H), 5.03 (d, J= 4.6 Hz, 1H), 4.87 (dd, J= 14.7, 7.4 Hz, 1H), 4.69 (dd, J= 14.7, 3.0 Hz, 1H), 4.41 (dd, J= 14.0, 7.1 Hz, 1H), 4.32 (dt, J= 12.2, 6.1 Hz, 1H), 4.05 (d, J= 13.6 Hz, 1H), 3.82 (d, J= 13.6 Hz, 1H), 3.00 (d, J= 11.2 Hz, 1H), 2.87 (d, J= 11.2 Hz, 1H), 2.61 (td, J= 11.0, 5.5 Hz, 1H), 2.50 (s, 1H), 2.37 – 2.16 (m, 3H), 1.88 – 1.66 (m, 4H).
實施例 25 ：（ S ） -2- （（ 4- （ 6- （（ 7- 氟苯並呋喃 -6- 基）甲氧基）吡啶 -2- 基）呱啶 -1- 基）甲基） -1- （氧雜環丁烷 -2- 基甲基） -1H- 苯並 [d] 咪唑 -6- 羧酸 ( 化合物 44) 的製備 ( 按照方案六線路製備）
步驟25a：（7-氟苯並呋喃-6-基）甲醇（化合物0601-44）的製備
Figure 02_image191
氮氣保護條件下，2-氟-3-甲基苯酚(2.5克，19.84毫摩爾，1.0當量)，2-溴-1,1-二乙氧基乙烷(4.69克，23.81毫摩爾，1.2當量)，碳酸鉀(4.11克，21.4毫摩爾，1.5當量)的N,N-二甲基甲醯胺(50毫升)混合物在120℃下攪拌過夜。冷卻到室溫後，反應液加水稀釋，用乙酸乙酯萃取。有機層用飽和鹽水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，並減壓濃縮。殘留物用矽膠柱（石油醚/乙酸乙酯=10/1至5/1）純化得到黃色油狀產物1-（2,2-二乙氧基乙氧基）-2-氟-3-甲基苯(4.78克，產率：99.6％)。
氮氣保護條件下，向多聚磷酸(15.89克，47.00毫摩爾，2.5當量)的甲苯（100毫升）溶液中加入1-（2,2-二乙氧基乙氧基）-2-氟-3-甲基苯 (4.55克，18.80毫摩爾，1.0當量)，混合物在120℃下攪拌過夜。冷卻到室溫後，反應液加水稀釋，用乙酸乙酯萃取。有機層乾燥並減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：石油醚)得到黃色油狀產物7-氟-6-甲基苯並呋喃(2.08克，產率：70.2％)。
氮氣保護條件下，7-氟-6-甲基苯並呋喃(2.0克，13.33毫摩爾，1.0當量) 、N-溴代丁二醯亞胺(2.85克，15.99毫摩爾，1.2當量)和偶氮二異丁腈(437毫克，2.67毫摩爾，0.2當量)的1,2-二氯乙烷(25毫升)溶液在72 ℃下攪拌過夜。反應液加水稀釋並用乙酸乙酯萃取，將有機相干燥並減壓濃縮。殘留物用矽膠柱（洗脫劑：石油醚）純化，得到白色固體產物6-（溴甲基）-7-氟苯並呋喃（2.13克，收率：69.8％）。
6-（溴甲基）-7-氟苯並呋喃(2.03克，8.86毫摩爾，1.0當量)和醋酸鉀 (8.7克，88.6毫摩爾，10.0當量)的N,N-二甲基甲醯胺混合物(40毫升)在室溫下攪拌3小時。反應液加水稀釋並用乙酸乙酯萃取，將有機相干燥並減壓濃縮。殘留物不經過進一步純化，直接用於下一步。
氮氣保護下，向乙酸（7-氟苯並呋喃-6-基）甲基酯（1.87克，8.99毫摩爾，1.0當量）的四氫呋喃溶液中加入甲醇鈉的甲醇溶液（5.4摩爾/升，3.33毫升，17.98毫摩爾，2.0當量），混合物攪拌在室溫下攪拌1.0小時。反應液加水稀釋並用乙酸乙酯萃取，將有機相干燥並減壓濃縮。殘留物用矽膠柱（石油醚/乙酸乙酯=15/1至5/1）純化，得到黃色固體產物（7-氟苯並呋喃-6-基）甲醇（1.2克，收率：80.4％）。
步驟25b：4-（6-（（7-氟苯並呋喃-6-基）甲氧基）吡啶-2-基）呱啶-1-羧酸叔丁酯 （化合物0602-44）的製備: 氮氣保護下，4-(6-氯吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯 (0104-1)(178.8毫克，0.602毫摩爾，1.0當量)，（7-氟苯並呋喃-6-基）甲醇(0601-44) (120毫克，0.722毫摩爾，1.2當量)、碳酸銫(391毫克，1.2毫摩爾，2.0當量)、2-二環己基磷-2',6'-二異丙氧基-1,1'-聯苯(56毫克，0.12毫摩爾，0.2當量)和三(二亞苄基丙酮)二鈀(0) (55毫克，0.06毫摩爾，0.1當量)的甲苯(10毫升)混合物在120℃下攪拌過夜。反應液加水稀釋並用乙酸乙酯萃取，將有機相干燥並減壓濃縮。殘留物用矽膠柱（石油醚/乙酸乙酯=20/1至10/1）純化，得到黃色固體產物4-（6-（（7-氟苯並呋喃-6-基）甲氧基）吡啶-2-基）呱啶-1-羧酸叔丁酯 （254毫克，收率：98.8％）。LCMS(ESI)：m/z =427[M+1]+.
步驟25c：2-（（7-氟苯並呋喃-6-基）甲氧基）-6-（呱啶-4-基）吡啶4-甲基苯磺酸鹽 (化合物0603-44)的製備 ：在4-（6-（（7-氟苯並呋喃-6-基）甲氧基）吡啶-2-基）呱啶-1-羧酸叔丁酯 (0602-44) (254毫克，0.596毫摩爾，1.0當量) 的乙酸乙酯(10毫升)溶液加入一水合對甲苯磺酸(206毫克，1.19毫摩爾，2.0當量)，混合物在60℃下攪拌過夜。反應液減壓濃縮，殘留物不經過進一步純化，直接用於下一步。LCMS(ESI)：m/z=327 (M+H) +。
步驟25d：（S）-2-（（4-（6-（（7-氟苯並呋喃-6-基）甲氧基）吡啶-2-基）呱啶-1-基）甲基）-1-（氧雜環丁烷-2-基甲基）-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯 (化合物 0604-44 )的製備: 2-（（7-氟苯並呋喃-6-基）甲氧基）-6-（呱啶-4-基）吡啶4-甲基苯磺酸鹽（0603-44） (72毫克，0.22毫摩爾，1.3當量)、(S)-2-(氯甲基)-3-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（0116-3）(50毫克，0.169毫摩爾，1.0當量)和碳酸鉀(93.5毫克，0.678毫摩爾，4.0當量)的乙腈(10毫升)溶液在60℃的條件下攪拌過夜。反應液加水稀釋並用乙酸乙酯萃取，將有機相干燥並減壓濃縮。殘留物用製備薄層色譜（二氯甲烷/甲醇=16/1）純化，得到白色固體產物（S）-2-（（4-（6-（（7-氟苯並呋喃-6-基）甲氧基）吡啶-2-基）呱啶-1-基）甲基）-1-（氧雜環丁烷-2-基甲基）-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯(89毫克，收率：90.3%)。LCMS(ESI)：m/z=584 (M+H) +。
步驟25e：（S）-2-（（4-（6-（（7-氟苯並呋喃-6-基）甲氧基）吡啶-2-基）呱啶-1-基）甲基）-1-（氧雜環丁烷-2-基甲基）-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸 (化合物44)的製備: （S）-2-（（4-（6-（（7-氟苯並呋喃-6-基）甲氧基）吡啶-2-基）呱啶-1-基）甲基）-1-（氧雜環丁烷-2-基甲基）-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（0704-44）(89毫克，0.147毫摩爾，1.0當量)和一水合氫氧化鋰(16.3毫克，0.388毫摩爾，2.5當量)的乙腈/水=5/1(12毫升)混合物在40℃下攪拌過夜。反應液用2摩爾/升的鹽酸調節pH至6，用乙酸乙酯萃取，所得有機相經乾燥，減壓濃縮得到白色固體（S）-2-（（4-（6-（（7-氟苯並呋喃-6-基）甲氧基）吡啶-2-基）呱啶-1-基）甲基）-1-（氧雜環丁烷-2-基甲基）-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸(76毫克，收率：87.7%)。LCMS(ESI)：m/z=571 (M+H) +。 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.88 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.10 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.89 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.79 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.68 (t, J= 7.7 Hz, 1H), 7.53 – 7.41 (m, 2H), 7.12 – 7.04 (m, 1H), 6.92 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 6.72 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 5.54 (s, 2H), 5.05 (d, J= 5.9 Hz, 1H), 4.84 (dd, J= 15.4, 6.9 Hz, 2H), 4.70 (d, J= 14.6 Hz, 1H), 4.49 (dd, J= 13.5, 7.2 Hz, 1H), 4.35 (dd, J= 14.7, 5.9 Hz, 1H), 3.81 (s, 2H), 3.35 (s, 3H), 2.96 (s, 1H), 2.71 (dt, J= 16.3, 8.0 Hz, 1H), 2.35 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 2.29 – 2.01 (m, 4H).
實施例 26 ： (S)-2-((6-((4- 氰基 -3- 甲基苯並呋喃 -7- 基 ) 甲氧基 )-3',6'- 二氫 -[2,4'- 聯吡啶 ]-1'(2'H)- 基 ) 甲基 )-1-( 氧雜環丁烷 -2- 基甲基 )-1H- 苯並 [d] 咪唑 -6- 羧酸 ( 化合物 46) 的製備 ( 按照方案三線路製備）
步驟26a：7-(羥甲基)-3-甲基苯並呋喃-4-腈 (化合物0201-46)的製備：
Figure 02_image193
氮氣保護條件下，4-溴-2-羥基苯甲酸甲酯 (1.0克，4.33毫摩爾，1.0當量)，1-溴丙-2-酮 (711毫克，5.19毫摩爾，1.2當量)，和碳酸鉀(896毫克，6.49毫摩爾，1.5當量)的N,N-二甲基甲醯胺混合物在室溫下攪拌1小時。反應用水淬滅，然後有固體析出。混合物過濾。殘留物用水洗，乾燥得到粗產品4-溴-2-(2-側氧丙氧基)苯甲酸甲酯 (1克，粗品)。該產品不需要進一步純化直接用於下一步。LCMS(ESI)：m/z=287 (M+H) +。
氮氣保護條件下，4-溴-2-(2-側氧丙氧基)苯甲酸甲酯 (1克，3.48毫摩爾，1.0當量)，和多聚磷酸(1.76克，5.23毫摩爾，1.5當量)的二氯乙烷混合物回流過夜。冷卻到室溫後，反應用水淬滅，並用乙酸乙酯萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析純化(洗脫劑為：石油醚)得到黃色固體4-溴-3-甲基苯並呋喃-7-羧酸甲酯 (357毫克，產率：38.26％)。LCMS(ESI)：m/z=269 (M+H) +。
氮氣保護條件下，4-溴-3-甲基苯並呋喃-7-羧酸甲酯 (320毫克，1.19毫摩爾，1.0當量)，四三苯基膦鈀 (137毫克，0.12毫摩爾，0.1當量)和氰化鋅 (208毫克，1.78 毫摩爾，1.5當量)的N,N-二甲基甲醯胺(5毫升)溶液在90 ℃下攪拌過夜。冷卻至室溫後，反應用水淬滅，並用乙酸乙酯萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝ 100/1-10/1)純化，得到黃色固體4-氰基-3-甲基苯並呋喃-7-羧酸甲酯 (242毫克，收率：95.01％)。LCMS(ESI)：m/z=216 (M+H) +。
在氮氣保護和冰浴條件下，往四氫鋰鋁 (55毫克，1.44毫摩爾，1.2當量)的四氫呋喃混合物中加入4-氰基-3-甲基苯並呋喃-7-羧酸甲酯 (259毫克，1.2毫摩爾，1.0當量)。混合物在冰浴下攪拌1小時。反應用水淬滅。混合物用無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析純化(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝ 100/1-2/1)得到黃色固體7-(羥甲基)-3-甲基苯並呋喃-4-腈 (135毫克，產率：60％)。LCMS(ESI)：m/z=188 (M+H) +。
步驟26b：6-((4-氰基-3-甲基苯並呋喃-7-基)甲氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯 (化合物0303-46)的製備：氮氣保護條件下，6-氯-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯（0302-2） (174毫克，0.59毫摩爾，1.2當量)，7-(羥甲基)-3-甲基苯並呋喃-4-腈 （0201-46）(92毫克，0.492毫摩爾，1.0當量)、碳酸銫(320毫克，0.984毫摩爾，2.0當量)、2-二環己基磷-2',6'-二異丙氧基-1,1'-聯苯(92毫克，0.197毫摩爾，0.4當量)和三(二亞苄基丙酮)二鈀(0) (89毫克，0.098毫摩爾，0.2當量)的甲苯(10毫升)的混合物在125℃下回流過夜。冷卻至室溫後，將反應液通過矽藻土過濾，固體用乙酸乙酯洗滌。將濾液減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝100/1-10/1)純化粗產物，得到黃色油狀物6-((4-氰基-3-甲基苯並呋喃-7-基)甲氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯(123毫克，產率：56.16％)。LCMS(ESI)：m/z=446 (M+H) +。
步驟26c：3-甲基-7-(((1'，2'，3'，6'-四氫-[2,4'-聯吡啶]]-6-基)氧基)甲基)苯並呋喃-4-甲腈鹽酸鹽(化合物0304-46)的製備：將6-((4-氰基-3-甲基苯並呋喃-7-基)甲氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯（0303-46）(123毫克，0.276毫摩爾，1.0當量)和鹽酸的二氧六環溶液(4M，1毫升)的二氧六環(4毫升)溶液在室溫下攪拌過夜。混合物減壓濃縮，得到粗品3-甲基-7-(((1'，2'，3'，6'-四氫-[2,4'-聯吡啶]]-6-基)氧基)甲基)苯並呋喃-4-甲腈鹽酸鹽 (105毫克，粗品)。該產品不需要進一步純化直接用於下一步。LCMS(ESI)：m/z=346 (M+H) +。
步驟26d：(S)-2-((6-((4-氰基-3-甲基苯並呋喃-7-基)甲氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2' H)-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯    (化合物0305-46)的製備: 3-甲基-7-(((1'，2'，3'，6'-四氫-[2,4'-聯吡啶]]-6-基)氧基)甲基)苯並呋喃-4-甲腈鹽酸鹽（0304-46）(105毫克，0.276毫摩爾，1.5當量), (S)-2-(氯甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（0116-3）(54毫克，0.184毫摩爾，1.0當量)和N,N-二異丙基乙胺 (95毫克，0.736毫摩爾，4.0當量)的N-甲基吡咯烷酮(5毫升)溶液在60℃下攪拌16小時。在冷卻至室溫後加水，加乙酸乙酯萃取。有機相用無水硫酸鈉乾燥並減壓濃縮。殘留物用矽膠薄層層析製備板純化(洗脫劑為：乙酸乙酯)得黃色固體(S)-2-((6-((4-氰基-3-甲基苯並呋喃-7-基)甲氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2' H)-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯 (80毫克，收率：72.26%)。LCMS(ESI)：m/z=604 (M+H) +。
步驟26e：(S)-2-((6-((4-氰基-3-甲基苯並呋喃-7-基)甲氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸 (化合物46)的製備: 將(S)-2-((6-((4-氰基-3-甲基苯並呋喃-7-基)甲氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2' H)-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（0305-46） (80毫克，0.13毫摩爾，1.0當量)和一水合氫氧化鋰(11毫克，0.26毫摩爾，2.0當量)的乙腈/水=5/1(6毫升)混合物在40℃下攪拌過夜。混合物冷卻到室溫，並減壓濃縮。殘留物的pH值用1摩爾/升的鹽酸調節至6，然後形成固體沉澱物。混合物過濾。殘留物用水洗。混合物用甲醇打漿得到黃色固體(S)-2-((6-((4-氰基-3-甲基苯並呋喃-7-基)甲氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸 (66毫克，收率：78.14%)。LCMS(ESI)：m/z=590 (M+H) +。 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8.25 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.82 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.76 – 7.60 (m, 3H), 7.50 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.06 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 6.76 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 6.61 (s, 1H), 5.70 (s, 2H), 5.05 (qd, J= 7.2, 2.8 Hz, 1H), 4.78 (dd, J= 15.2, 7.2 Hz, 1H), 4.63 (d, J= 13.0 Hz, 1H), 4.46 (dd, J= 13.7, 7.5 Hz, 1H), 4.35 (dt, J= 8.9, 5.9 Hz, 1H), 4.05 (d, J= 13.6 Hz, 1H), 3.91 (d, J= 13.5 Hz, 1H), 3.19 (d, J= 12.6 Hz, 2H), 2.65 (ddd, J= 17.7, 14.8, 12.1 Hz, 3H), 2.45 – 2.31 (m, 6H).
實施例 27 ： (S)-2-((4-(6-((7- 氰基苯並呋喃 -4- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶 -2- 基 ) 呱啶 -1- 基 ) 甲基 )-1-( 氧雜環丁烷 -2- 基甲基 )-1H- 苯並 [d] 咪唑 -6- 羧酸 ( 化合物 47) 的製備 ( 按照方案七線路製備）
步驟27a：4-(羥甲基)苯並呋喃-7-腈 (化合物0701-47)的製備：
Figure 02_image195
氮氣保護條件下，4-甲基苯並呋喃-7-腈 (960毫克，6.11毫摩爾，1.0當量) 、N-溴代琥珀醯亞胺(1300毫克，7.33毫摩爾，1.2當量)和偶氮二異丁腈(200毫克，1.22毫摩爾，0.2當量)的二氯乙烷(10毫升)溶液在72℃下攪拌過夜。冷卻至室溫後，減壓除去溶劑。殘留物用水稀釋，並用乙酸乙酯萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌，並用無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝200/1-10/1)純化，得到4-(溴甲基)苯並呋喃-7-腈(968毫克，收率：67.22％)為白色固體。LCMS(ESI)：m/z=236 (M+H) +。
4-(溴甲基)苯並呋喃-7-腈(968毫克，4.1毫摩爾，1.0當量)和醋酸鉀 (4克，41毫摩爾，10.0當量)的N,N-二甲基甲醯胺混合物(10毫升)在室溫下攪拌3小時。反應用水淬滅，用乙酸乙酯萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌，並用無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮得到粗產品乙酸(7-氰基苯並呋喃-4-基)甲基酯(766毫克，粗品)。該產品不需要進一步純化直接用於下一步。
在乙酸(7-氰基苯並呋喃-4-基)甲基酯(766毫克，3.56毫摩爾，1.0當量)的四氫呋喃(5毫升)溶液中加入的甲醇鈉的甲醇溶液(5.4 摩爾/升，1.32毫升，7.12毫摩爾，2.0當量)。混合物在常溫下攪拌1小時。反應用水淬滅，用乙酸乙酯萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌，並用無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝200/1-2/1)純化，得到4-(羥甲基)苯並呋喃-7-腈(968毫克，收率：66.23％)為黃色固體。LCMS(ESI)：m/z=174 (M+H) +。
步驟27b：4-(6-((7-氰基苯並呋喃-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯 (化合物0702-47)的製備：氮氣保護條件下，4-(6-氯吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯 （0104-1） (178毫克，0.6毫摩爾，1.2當量)，4-(羥甲基)苯並呋喃-7-腈（0701-47 (87毫克，0.5毫摩爾，1.0當量)、碳酸銫(325毫克，1毫摩爾，2.0當量)、2-二環己基磷-2',6'-二異丙氧基-1,1'-聯苯(93毫克，0.2毫摩爾，0.4當量)和三(二亞苄基丙酮)二鈀(0) (91毫克，0.1毫摩爾，0.2當量)的甲苯(10毫升)的混合物在125℃下攪拌過夜。冷卻至室溫後，將反應液通過矽藻土過濾，固體用乙酸乙酯洗滌。將濾液減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝100/1-10/1)純化粗產物，得到黃色油狀物 4-(6-((7-氰基苯並呋喃-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯 (94毫克，產率：43.32％)。LCMS(ESI)：m/z=434 (M+H) +。
步驟27c：4-(((6-(呱啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苯並呋喃-7-甲腈鹽酸鹽 (化合物0703-47)的製備：將 4-(6-((7-氰基苯並呋喃-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯  （0702-47）(94毫克，0.217毫摩爾，1.0當量)和鹽酸的二氧六環溶液(4M，1毫升)的二氧六環(4毫升)的混合物在室溫下攪拌過夜。混合物減壓濃縮，得到粗品4-(((6-(呱啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苯並呋喃-7-甲腈鹽酸鹽 (100毫克, 粗品). 該產品不需要進一步純化直接用於下一步。LCMS(ESI)：m/z=334 (M+H) +。
步驟27d：(S)-2-((4-(6-((7-氰基苯並呋喃-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯 (化合物0704-47)的製備: 4-(((6-(呱啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苯並呋喃-7-甲腈鹽酸鹽（0703-47） (80毫克，0.217毫摩爾，1.3當量), (S)-2-(氯甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（0116-3）(50毫克，0.17毫摩爾，1.0當量)和N,N-二異丙基乙胺(88毫克，0.68毫摩爾，4.0當量)的N-甲基吡咯烷酮(5毫升)溶液在60℃下攪拌16小時。在冷卻至室溫後加水，加乙酸乙酯萃取。有機相用無水硫酸鈉乾燥並減壓濃縮。殘留物用矽膠薄層層析製備板純化(洗脫劑為：乙酸乙酯)得黃色固體(S)-2-((4-(6-((7-氰基苯並呋喃-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯 (40毫克，收率：40%)。LCMS(ESI)：m/z=592 (M+H) +。
步驟27e：(S)-2-((4-(6-((7-氰基苯並呋喃-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸 (化合物47)的製備: (S)-2-((4-(6-((7-氰基苯並呋喃-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（0704-47）(40毫克，0.068毫摩爾，1.0當量)和一水合氫氧化鋰(6毫克，0.136毫摩爾，2.0當量)的乙腈/水=5/1(6毫升)混合物在40℃下攪拌過夜。混合物冷卻到室溫，並減壓濃縮。殘留物的pH值用1摩爾/升的鹽酸調節至6，然後形成固體沉澱物。混合物過濾。殘留物用水洗。混合物用甲醇打漿並過濾得到白色固體(S)-2-((4-(6-((7-氰基苯並呋喃-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸(33毫克，收率：84.61%)。LCMS(ESI)：m/z=578 (M+H) +。 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8.26 (d, J= 1.0 Hz, 1H), 8.22 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 7.84 – 7.77 (m, 2H), 7.64 (dd, J= 8.0, 6.9 Hz, 2H), 7.47 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.28 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 6.87 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 6.73 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 5.69 (s, 2H), 5.10 (ddd, J= 14.5, 7.2, 2.8 Hz, 1H), 4.78 (dd, J= 15.2, 7.2 Hz, 1H), 4.65 (dd, J= 15.2, 2.8 Hz, 1H), 4.46 (td, J= 7.8, 5.9 Hz, 1H), 4.36 (dt, J= 9.0, 5.9 Hz, 1H), 3.93 (d, J= 13.5 Hz, 1H), 3.77 (d, J= 13.5 Hz, 1H), 2.96 (d, J= 11.4 Hz, 1H), 2.83 (d, J= 11.3 Hz, 1H), 2.73 – 2.64 (m, 1H), 2.56 (tt, J= 11.8, 3.7 Hz, 1H), 2.46 – 2.38 (m, 1H), 2.18 (ddd, J= 31.6, 11.8, 9.6 Hz, 2H), 1.74 (t, J= 13.5 Hz, 2H), 1.70 – 1.56 (m, 2H).
實施例 28 ： (S)-2-((4-(6-((4- 氰基萘 -1- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶 -2- 基 ) 呱啶 -1- 基 ) 甲基 )-1-( 氧雜環丁烷 -2- 基甲基 )-1H- 苯並 [d] 咪唑 -6- 羧酸 ( 化合物 49) 的製備 ( 按照方案八線路製備）
步驟28a：4-(羥甲基)-1-萘腈 (化合物0801-49)的製備：
Figure 02_image197
氮氣保護下，1-溴-4-甲基萘(1.5克，6.78毫摩爾，1.0當量)和氰化亞銅(1.2克，13.57毫摩爾，2當量)的N,N-二甲基甲醯胺 (20毫升)混合溶液在120℃下攪拌過夜。冷卻至室溫後，反應用水淬滅，用乙酸乙酯萃取。將混合物通過矽藻土過濾，固體用乙酸乙酯洗滌。有機相用飽和食鹽水洗滌，並用無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝15/1-10/1)純化，得到4-甲基-1-萘腈(889毫克，收率：78.53％)為黃色固體。LCMS(ESI)：m/z=168 (M+H)+
氮氣保護下，4-甲基-1-萘腈(400毫克，2.4毫摩爾，1.0當量) 、N-溴代琥珀醯亞胺(511毫克，2.87毫摩爾，1.2當量)和偶氮二異丁腈(78.6毫克，0.479毫摩爾，0.2當量)的二氯乙烷(10毫升)溶液在72℃下攪拌過夜。冷卻至室溫後，減壓除去溶劑。殘留物用水稀釋，並用乙酸乙酯萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌，並用無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮得到粗產品4-(溴甲基)-1-萘腈(678毫克，粗品)。該產品不需要進一步純化直接用於下一步。
4-(溴甲基)-1-萘腈(678毫克，2.76毫摩爾，1.0當量)和醋酸鉀 (2.7克，27.6毫摩爾，10.0當量)的N,N-二甲基甲醯胺混合物(10毫升)在室溫下攪拌3小時。反應用水淬滅，用乙酸乙酯萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌，並用無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮得到粗產品乙酸(4-氰基萘-1-基)甲基酯(823毫克，粗品)。該產品不需要進一步純化直接用於下一步。
在乙酸(4-氰基萘-1-基)甲基酯(823毫克，3.65毫摩爾，1.0當量)的四氫呋喃(5毫升)溶液中加入的甲醇鈉的甲醇溶液(5.4 摩爾/升，1.35毫升，7.31毫摩爾，2.0當量)。混合物在常溫下攪拌1小時。反應用水淬滅，用乙酸乙酯萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌，並用無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝20/1-2/1)純化，得到4-(羥甲基)-1-萘腈(300毫克，收率：44.91％)為黃色固體。LCMS(ESI)：m/z=184 (M+H) +。
步驟28b：4-(6-((4-氰基萘-1-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯  (化合物0802-49)的製備：氮氣保護條件下，4-(6-氯吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯 （0104-1）(202毫克，0.68毫摩爾，1當量)，4-(羥甲基)-1-萘腈（0801-49）(150毫克，0.82毫摩爾，1.2當量)、碳酸銫(443.36毫克，1.36毫摩爾，2.0當量)、2-二環己基磷-2',6'-二異丙氧基-1,1'-聯苯(32毫克，0.068毫摩爾，0.1當量)和三(二亞苄基丙酮)二鈀(0) (31毫克，0.034毫摩爾，0.05當量)的甲苯(10毫升)的混合物在125℃下攪拌過夜。冷卻至室溫後，將反應液通過矽藻土過濾，固體用乙酸乙酯洗滌。將濾液減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝100/1-8/1)純化粗產物，得到黃色油狀物4-(6-((4-氰基萘-1-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯 (272毫克，產率：90.37％)。LCMS(ESI)：m/z=444 (M+H) +。
步驟28c：4-(((6-(呱啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)-1-萘甲腈鹽酸鹽 (化合物0803-49)的製備：將4-(6-((4-氰基萘-1-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯 （0802-49）(272毫克，0.614毫摩爾，1.0當量)和鹽酸的二氧六環溶液(4M，5毫升)在室溫下攪拌過夜。混合物過濾。殘留物用二氧六環洗滌。殘留物乾燥，得到黃色固體4-(((6-(呱啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)-1-萘甲腈鹽酸鹽(215毫克, 收率: 92.28%). LCMS(ESI)：m/z=344 (M+H) +。
步驟28d：(S)-2-(((4-(6-((4-氰基萘-1-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯 (化合物0804-49)的製備: 4 -(((6-(呱啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)-1-萘甲腈鹽酸鹽 （0803-49）(96毫克，0.254毫摩爾，1.5當量)，(S)-2-(氯甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（0116-3）(50毫克，0.17毫摩爾，1.0當量)和碳酸鉀(93.5毫克，0.678毫摩爾，4.0當量)的乙腈(5毫升)溶液在60℃下攪拌16小時。將反應混合物冷卻至室溫後加水，加乙酸乙酯萃取。有機相用無水硫酸鈉乾燥並減壓濃縮。殘留物用矽膠薄層層析製備板純化(洗脫劑為：乙酸乙酯)得白色固體(S)-2-(((4-(6-((4-氰基萘-1-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯 (50毫克，收率：49.02%)。LCMS(ESI)：m/z=602 (M+H) +。
步驟28e：(S)-2-((4-(6-((4-氰基萘-1-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸 (化合物49)的製備: (S)-2-(((4-(6-((4-氰基萘-1-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（0804-49）(50毫克，0.083毫摩爾，1.0當量)和一水合氫氧化鋰(7毫克，0.17毫摩爾，2.0當量)的乙腈/水=5/1(6毫升)混合物在40℃下攪拌過夜。混合物冷卻到室溫，並減壓濃縮。殘留物的pH值用1摩爾/升的鹽酸調節至6，之後形成固體沉澱。混合物過濾。殘留物用水洗並減壓乾燥得到白色固體(S)-2-((4-(6-((4-氰基萘-1-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸(35毫克，收率：71.75%)。LCMS(ESI)：m/z=588 (M+H) +。 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.68 (s, 1H), 8.30 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 8.17 (t, J= 7.0 Hz, 2H), 7.81 (ddd, J= 15.3, 14.3, 7.0 Hz, 4H), 7.67 (d, J= 7.1 Hz, 2H), 6.91 (d, J= 6.7 Hz, 1H), 6.74 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 5.93 (s, 2H), 5.07 (d, J= 5.1 Hz, 1H), 4.78 (dd, J= 15.1, 6.7 Hz, 1H), 4.64 (d, J= 14.8 Hz, 1H), 4.44 (d, J= 6.3 Hz, 1H), 4.33 (dt, J= 9.0, 5.9 Hz, 1H), 3.94 (s, 1H), 3.77 (s, 1H), 2.97 (s, 1H), 2.85 (s, 1H), 2.74 – 2.55 (m, 2H), 2.44 – 2.31 (m, 1H), 2.18 (s, 2H), 1.91 (d, J= 102.8 Hz, 4H).
實施例 29 ：（ S ） -2- （（ 4- （ 6- （（ 4- 氰基 -6- 氟苯並呋喃 -7- 基）甲氧基）吡啶 -2- 基）呱啶 -1- 基）甲基） -1- （氧雜環丁烷 -2- 基甲基） -1H- 苯並 [d] 咪唑 -6- 羧酸 ( 化合物 53) 的製備 ( 按照方案二線路製備）
步驟29a：6-氟-7-（羥甲基）苯並呋喃-4-腈 (化合物0201-53)的製備：
Figure 02_image199
氮氣保護下，向4-溴-2,6-二氟苯甲酸甲酯（2.5克，9.96毫摩爾，1.0當量）的甲醇溶液中加入甲醇鈉的甲醇溶液（5.4摩爾/升，5.5毫升，29.88毫摩爾，3.0當量），混合物攪拌在室溫下攪拌16.0小時。反應液加水稀釋，用2摩爾/升鹽酸調pH =5並用乙酸乙酯萃取，將有機相干燥並減壓濃縮。殘留物用矽膠柱（石油醚/乙酸乙酯=10/1至5/1）純化，得到無色油狀產物4-溴-2-氟-6-甲氧基苯甲酸甲酯（2.5 克，收率：96.2％）。
氮氣保護下，向4-溴-2-氟-6-甲氧基苯甲酸甲酯（2.4克，9.12毫摩爾，1.0當量）的二氯甲烷（120毫升）溶液中加入三溴化硼（3.4克，13.69毫摩爾，1.5當量），混合物攪拌在0℃下攪拌1.5小時。反應液加甲醇淬滅，加水稀釋並用二氯甲烷萃取，將有機相干燥並減壓濃縮。殘留物用矽膠柱（展開劑：二氯甲烷）純化，得到白色固體產物4-溴-2-氟-6-羥基苯甲酸甲酯（2.03克，收率：89.4％）。LCMS（ESI）：m/z =247[M+1] -。
氮氣保護條件下，4-溴-2-氟-6-羥基苯甲酸甲酯(1.5克，6.02毫摩爾，1.0當量)，2-溴-1,1-二乙氧基乙烷(1.42克，7.23毫摩爾，1.2當量)，碳酸鉀(1.25克，9.03毫摩爾，1.5當量)的N,N-二甲基甲醯胺(15毫升)混合物在120℃下攪拌過夜。冷卻到室溫後，反應液加水稀釋，用乙酸乙酯萃取。有機層用飽和鹽水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，並減壓濃縮。殘留物用矽膠柱（石油醚/乙酸乙酯=10/1至8/1）純化得到黃色油狀產物4-溴-2-（2,2-二乙氧基乙氧基）-6-氟苯甲酸酯(2.15克，產率：98.2％)。
氮氣保護條件下，向多聚磷酸(4.98克，14.73毫摩爾，2.5當量)的甲苯（80毫升）溶液加入4-溴-2-（2,2-二乙氧基乙氧基）-6-氟苯甲酸酯(2.15克，5毫摩爾，1.0當量)，混合物在120℃下攪拌過夜。冷卻到室溫後，反應液加水稀釋，用乙酸乙酯萃取。有機層乾燥並減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：石油醚)得到黃色油狀產物4-溴-6-氟苯並呋喃-7-羧酸甲酯(1.34克，產率：83.4％)。LCMS（ESI）：m/z =273[M+1] +。
氮氣保護條件下，0℃下，向4-溴-6-氟苯並呋喃-7-羧酸甲酯(950毫克，3.48毫摩爾，1.0當量)的甲醇（30毫升）溶液中加入硼氫化鈉(2.6克，69.60毫摩爾，20.0當量)，混合物在室溫下攪拌3.0小時。反應液加水淬滅並用乙酸乙酯萃取，將有機相干燥並減壓濃縮。殘留物用矽膠柱（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=10/1至2/1）純化，得到黃色固體產物（4-溴-6-氟苯並呋喃-7-基）甲醇（850毫克，收率：99.6％）。
氮氣保護條件下，向（4-溴-6-氟苯並呋喃-7-基）甲醇(630毫克，2.57毫摩爾，1.0當量) 的N-甲基吡咯烷酮(20毫升)溶液加入氰化亞銅 (2.3克，25.71毫摩爾，10.0當量)在190℃下攪拌8小時。冷卻到室溫後，反應液加水稀釋，用乙酸乙酯萃取。有機層乾燥並減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=10/1至2/1)得到白色固體產物6-氟-7-（羥甲基）苯並呋喃-4-腈(92 毫克，產率：18.8％)。
步驟29b：4-（6-（（4-氰基-6-氟苯並呋喃-7-基）甲氧基）吡啶-2-基）呱啶-1-羧酸叔丁酯 （化合物0202-53）的製備：氮氣保護下，4-(6-氯吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯 （0104-1）(143毫克，0.482毫摩爾，1.0當量)，6-氟-7-（羥甲基）苯並呋喃-4-腈（0201-53）(92毫克，0.482毫摩爾，1.0當量)、碳酸銫(314毫克，0.964毫摩爾，2.0當量)、2-二環己基磷-2',6'-二異丙氧基-1,1'-聯苯(45毫克，0.0964毫摩爾，0.2當量)和三(二亞苄基丙酮)二鈀(0) (44毫克，0.0482毫摩爾，0.1當量)的甲苯(10毫升)混合物在120℃下攪拌過夜。反應液加水稀釋並用乙酸乙酯萃取，將有機相干燥並減壓濃縮。殘留物用矽膠柱（石油醚/乙酸乙酯=10/1至5/1）純化，得到黃色固體產物4-（6-（（4-氰基-6-氟苯並呋喃-7-基）甲氧基）吡啶-2-基）呱啶-1-羧酸叔丁酯 （180毫克，收率：82.6％）。LCMS(ESI)：m/z =452[M+1]+.
步驟29c：6-氟-7-（（（6-（呱啶-4-基）吡啶基-2-基）氧基）甲基]苯並呋喃-4-甲腈鹽酸鹽 (化合物0203-53)的製備 ：在4-（6-（（（4-氰基-6-氟苯並呋喃-7-基）甲氧基）吡啶-2-基）呱啶-1-羧酸叔丁酯 （0202-53）(180毫克，0.40毫摩爾，1.0當量) 的二氧六環(4毫升)溶液中加入鹽酸-二氧六環溶液(4摩爾溶液，1毫升)，混合物在室溫下攪拌過夜。反應液減壓濃縮，殘留物不經過進一步純化，直接用於下一步。LCMS(ESI)：m/z=352 (M+H) +。
步驟29d：（S）-2-（（（4-（6-（（4-氰基-6-氟苯並呋喃-7-基）甲氧基）吡啶基-2-基）呱啶-1-基）甲基）-1-（氧雜環丁烷-2-基甲基）-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯 (化合物0204-53 )的製備: 6-氟-7-（（（6-（呱啶-4-基）吡啶基-2-基）氧基）甲基]苯並呋喃-4-甲腈鹽酸鹽（0203-53）(77毫克，0.220毫摩爾，1.3當量)、(S)-2-(氯甲基)-3-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（0116-3）(50毫克，0.169毫摩爾，1.0當量)和碳酸鉀(93.5毫克，0.678毫摩爾，4.0當量)的乙腈(10毫升)溶液在60℃的條件下攪拌過夜。反應液加水稀釋並用乙酸乙酯萃取，將有機相干燥並減壓濃縮。殘留物用製備薄層色譜（二氯甲烷/甲醇=16/1）純化，得到黃色固體產物（S）-2-（（4-（6-（（4-氰基-6-氟苯並呋喃-7-基）甲氧基）吡啶基-2-基）呱啶-1-基）甲基）-1-（氧雜環丁烷-2-基甲基）-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯(55毫克，收率：53.4%)。LCMS(ESI)：m/z=610 (M+H) +。
步驟29e：（S）-2-（（4-（6-（（4-氰基-6-氟苯並呋喃-7-基）甲氧基）吡啶-2-基）呱啶-1-基）甲基）-1-（氧雜環丁烷-2-基甲基）-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸 (化合物53)的製備:（S）-2-（（4-（6-（（4-氰基-6-氟苯並呋喃-7-基）甲氧基）吡啶基-2-基）呱啶-1-基）甲基）-1-（氧雜環丁烷-2-基甲基）-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（0204-53）(55毫克，0.09毫摩爾，1.0當量)和一水合氫氧化鋰(5.7毫克，0.135毫摩爾，1.5當量)的乙腈/水=5/1(6毫升)混合物在42℃下攪拌過夜。反應液用2摩爾/升的鹽酸調節pH至6，用乙酸乙酯萃取，所得有機相經乾燥，減壓濃縮得到白色固體（S）-2-（（4-（6-（（4-氰基-6-氟苯並呋喃-7-基）甲氧基）吡啶-2-基）呱啶-1-基）甲基）-1-（氧雜環丁烷-2-基甲基）-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸(39毫克，收率：72.8%)。LCMS(ESI)：m/z=596(M+H) +。 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.71 (s, 1H), 8.35 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.89 (d, J= 10.0 Hz, 1H), 7.81 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.62 (dd, J= 16.8, 8.9 Hz, 2H), 7.20 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 6.87 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 6.66 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 5.69 (s, 2H), 5.12 (dd, J= 7.1, 2.5 Hz, 1H), 4.80 (dd, J= 15.1, 7.1 Hz, 1H), 4.67 (d, J= 12.9 Hz, 1H), 4.47 (dd, J= 13.7, 7.6 Hz, 1H), 4.37 (dt, J= 9.0, 5.9 Hz, 1H), 3.95 (d, J= 13.6 Hz, 1H), 3.80 (d, J= 13.6 Hz, 1H), 2.99 (d, J= 10.9 Hz, 1H), 2.86 (d, J= 11.0 Hz, 1H), 2.76 – 2.68 (m, 1H), 2.56 (t, J= 11.5 Hz, 1H), 2.44 (dd, J= 18.8, 8.1 Hz, 1H), 2.20 (dt, J= 21.1, 10.4 Hz, 2H), 1.78 – 1.59 (m, 4H).
實施例 30 ： (S)-2-((4-(6-((4- 氯苯並呋喃 -7- 基 ) 甲氧基 ) 吡啶 -2- 基 ) 哌 𠯤 -1- 基 ) 甲基 )-1-( 氧雜環丁烷 -2- 基甲基 )-1 H- 苯並 [ d ] 咪唑 -6- 羧酸 ( 化合物 54) 的製備 ( 按照方案九線路製備）
步驟 30a ：
2-溴-6-((4-氯苯並呋喃-7-基) 甲氧基)吡啶 (化合物0901-54)的製備: 氮氣保護下，往(4-氯苯並呋喃-7-基)甲醇(0201-12)(230毫克，1.26毫摩爾，1.0當量)在四氫呋喃的混合物中在10-15℃加入六甲基二矽基胺基鉀 (1摩爾/升，3.78毫摩爾，3.0 eq) ，混合物在15℃下攪拌1小時。將2-溴-6-氟吡啶用四氫呋喃溶解，滴加入到反應體系中。混合物在15℃下攪拌1小時。混合物加水淬滅，用乙酸乙酯萃取。有機相用無水硫酸鈉乾燥並減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝10/1)純化粗產物，得到黃色固體。
2-溴-6-((4-氯苯並呋喃-7-基) 甲氧基)吡啶 (化合物0901-54)的製備: 氮氣保護下，往(4-氯苯並呋喃-7-基)甲醇(0201-12)(230毫克，1.26毫摩爾，1.0當量)在四氫呋喃的混合物中在10-15℃加入六甲基二矽基胺基鉀 (1摩爾/升，3.78毫摩爾，3.0 eq) ，混合物在15℃下攪拌1小時。將2-溴-6-氟吡啶用四氫呋喃溶解，滴加入到反應體系中。混合物在15℃下攪拌1小時。混合物加水淬滅，用乙酸乙酯萃取。有機相用無水硫酸鈉乾燥並減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝10/1)純化粗產物，得到黃色固體。
2-溴-6-((4-氯苯並呋喃-7-基) 甲氧基)吡啶（140毫克，產率：32.87%）。LCMS(ESI)：m/z=338 (M+H) +。
步驟30b：4-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌𠯤-1-羧酸叔丁酯(化合物0902-54)的製備：氮氣保護下，
2-溴-6-((4-氯苯並呋喃-7-基) 甲氧基)吡啶(0901-54)(150毫克，0.44毫摩爾，1.0當量)，1-叔丁氧羰基哌𠯤(92毫克，0.49毫摩爾，1.1當量)、碳酸銫(290毫克，0.89毫摩爾，2.0當量)、1,1'-聯萘-2,2'-雙二苯膦(31毫克，0.05毫摩爾，0.1當量)和三(二亞苄基丙酮)二鈀(0) (28毫克，0.03毫摩爾，0.05當量)的甲苯(15 毫升)的混合物在125℃下攪拌過夜。冷卻至室溫後，將反應液通過矽藻土過濾，固體用乙酸乙酯洗滌。將濾液減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝10/1)純化粗產物，得到黃色油狀液體4-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌𠯤-1-羧酸叔丁酯(71毫克，產率：36.43％)。LCMS(ESI)：m/z=443 (M+H) +。
步驟30c：1-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基) 甲氧基)吡啶-2-基)哌𠯤鹽酸鹽 (化合物0903-54)的製備：將4-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌𠯤-1-羧酸叔丁酯(0902-54) (71毫克，0.16毫摩爾，1.0當量)和鹽酸的乙酸乙酯溶液(2M，4毫升)的甲醇(4毫升)溶液在40℃下攪拌2小時。混合物減壓濃縮，得到粗品1-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基) 甲氧基)吡啶-2-基)哌𠯤鹽酸鹽(55毫克, 粗品). 該產品不需要進一步純化直接用於下一步。LCMS(ESI)：m/z=343 (M+H) +。
步驟30d：(S)-2-((4-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌𠯤-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d ]咪唑-6-羧酸甲酯 (化合物0904-54)的製備: 1-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基) 甲氧基)吡啶-2-基)哌𠯤鹽酸鹽 (0903-54) (55毫克，0.16毫摩爾，1.2當量)，(S)-2-(氯甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（0116-3）(40毫克，0.13毫摩爾，1.0當量)和N,N-二異丙基乙胺(1毫升)的N-甲基吡咯烷酮(10毫升)溶液在60℃的下攪拌過夜。將反不混合物冷卻至室溫後加水，加乙酸乙酯萃取。有機相用無水硫酸鈉乾燥並減壓濃縮。殘留物用矽膠薄層層析製備板純化(洗脫劑為：乙酸乙酯：石油醚=3/1)得黃色油狀液體(S)-2-((4-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌𠯤-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d ]咪唑-6-羧酸甲酯(85毫克，收率：100%)。LCMS(ESI)：m/z=603 (M+H) +。
步驟30e：(S)-2-((4-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌𠯤-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d ]咪唑-6-羧酸 (化合物54)的製備: (S)-2-((4-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌𠯤-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d ]咪唑-6-羧酸甲酯(0904-58)(85毫克，0.14毫摩爾，1.0當量)和一水合氫氧化鋰(18毫克，0.43毫摩爾，3.0當量)的乙腈/水=5/1(12毫升)混合物在40℃下攪拌過夜。混合物冷卻到室溫，並減壓濃縮。混合物用水洗滌，殘留物pH值用1摩爾/升的鹽酸調節至6。殘留物加乙酸乙酯萃取並減壓濃縮。粗產品用矽膠薄層層析製備板純化(洗脫劑為：二氯甲烷：甲醇=10/1)，得到黃色固體(S)-2-((4-(6-((4-氯苯並呋喃-7-基)甲氧基)吡啶-2-基)哌𠯤-1-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d ]咪唑-6-羧酸(71毫克，收率：86.25%)。LCMS(ESI)：m/z=588 (M+H) +。 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8.14 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.81 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.49 – 7.42 (m, 2H), 7.38 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.33 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.03 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 6.31 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 6.09 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 5.55 (s, 2H), 5.15 – 5.08 (m, 1H), 4.71 (dd, J= 15.2, 7.0 Hz, 1H), 4.59 (dd, J= 15.3, 3.1 Hz, 1H), 4.49 (dd, J= 13.3, 8.0 Hz, 1H), 4.37 (dt, J= 9.0, 5.9 Hz, 1H), 3.92 (d, J= 13.5 Hz, 1H), 3.77 (d, J= 13.4 Hz, 1H), 3.43 (dd, J= 12.0, 7.3 Hz, 4H), 3.29 – 3.24 (m, 4H), 2.73 – 2.65 (m, 1H), 2.47 – 2.41 (m, 1H).
實施例 31 ： (S)-2-((6-(2-(4- 氯苯並呋喃 -7- 基 ) 乙氧基 )-3',6'- 二氫 -[2,4'- 聯吡啶 ]-1'(2'H)- 基 ) 甲基 )-1-( 氧雜環丁烷 -2- 基甲基 )-1H- 苯並 [d] 咪唑 -6- 羧酸 ( 化合物 55) 的製備 ( 按照方案三線路製備）
步驟31a：2-(4-氯苯並呋喃-7-基)乙烷-1-醇 (化合物0201-55)的製備：
Figure 02_image201
氮氣保護下，往 7-(溴甲基)-4-氯苯並呋喃 (1克，4.08毫摩爾，1.0當量)和碳酸鉀(1.12克，8.16毫摩爾，2當量)的四氫呋喃(10毫升)溶液中加入三甲基矽氰(808毫克，8.16毫摩爾，2當量)。混合物在90℃下攪拌4小時。反應冷卻至室溫。反應用水淬滅，用乙酸乙酯萃取。有機相用食飽和鹽水洗滌，並用無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝50/1-10/1)純化，得到黃色油狀物2-(4-氯苯並呋喃-7-基)乙腈(880毫克，粗品)。LCMS(ESI)：m/z=192 (M+H) +。
往 2-(4-氯苯並呋喃-7-基)乙腈 (880毫克，6.24毫摩爾，1.0當量)的乙醇/水(10/10毫升)溶液中加入氫氧化鉀(1.74克，31.2毫摩爾，5當量)。混合物在90℃下攪拌16小時。反應冷卻至室溫。混合物的pH值用2N 鹽酸調節至1，之後形成固體沉澱。混合物過濾。殘留物用水洗滌和乾燥，得到黃色固體2-(4-氯苯並呋喃-7-基)乙酸(510毫克，產率：38.75％)。LCMS(ESI)：m/z=211 (M+H) +。
氮氣保護下，在0到10℃之間，往 2-(4-氯苯並呋喃-7-基)乙酸(510毫克，2.43毫摩爾，1.0當量)的四氫呋喃(10毫升)溶液中滴加硼烷(0.64毫升，10摩爾/升的二甲硫醚，6.375毫摩爾，2.5當量)。混合物在室溫下攪拌1小時。反應用甲醇淬滅，並用乙酸乙酯萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌，並用無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝20/1-5/1)純化粗產物，得到透明油狀物2-(4-氯苯並呋喃-7-基)乙烷-1-醇(397毫克，產率：41.18％)。LCMS(ESI)：m/z=197 (M+H) +。
步驟31b：6-((2-(4-氯苯並呋喃-7-基)乙氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯 (化合物0303-55)的製備：氮氣保護下，在0到10℃之間，在 2-(4-氯苯並呋喃-7-基)乙烷-1-醇（0201-55）(338毫克，1.724毫摩爾，1.0當量)的四氫呋喃(20毫升)溶液中加入六甲基二矽基胺基鉀(3.5毫升，1摩爾/升的四氫呋喃，3.448毫摩爾，2當量)。混合物在10℃下攪拌45分鐘。2-溴-6-氟吡啶（0301-2）(303毫克，1.724毫摩爾，1當量)在10℃時分批加入到反應混合物中，混合物在室溫下攪拌1小時。反應用水淬滅，用乙酸乙酯萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌，並用無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝200/1-20/1)純化，得到黃色固體2-溴-6-(2-(4-氯苯並呋喃-7-基)乙氧基)吡啶(383毫克，產率：63.09％)。LCMS(ESI)：m/z=352 (M+H) +。 氮氣保護下，上述得到的2-溴-6-(2-(4-氯苯並呋喃-7-基)乙氧基)吡啶(272毫克，0.77毫摩爾，1.05當量)， 4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)-3,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(226毫克，0.73毫摩爾，1當量)，碳酸鈉 (155毫克，1.46毫摩爾，2.0當量)，二(三苯基膦)二氯化鈀(51毫克，0.073毫摩爾，0.1當量) 的N,N-二甲基甲醯胺/水=10/1(11毫升)混合物在92℃下攪拌過夜。在冷卻至室溫後加水，加乙酸乙酯萃取。有機相用無水硫酸鈉乾燥並減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝20/1-10/1)純化，得到透明油狀物6-((2-(4-氯苯並呋喃-7-基)乙氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯(123毫克，收率：37.05%)。LCMS(ESI)：m/z=455 (M+H) +。
步驟31c：6-((2-(4-氯苯並呋喃-7-基)乙氧基)-1',2',3',6'-四氫-2,4'-聯吡啶4-甲基苯磺酸鹽 (化合物0304-55)的製備：往6-((2-(4-氯苯並呋喃-7-基)乙氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯（0303-55）(100毫克，0.22毫摩爾，1.0當量)的乙酸乙酯(5毫升)溶液中加入對甲苯磺酸一水合物(114毫克，0.66毫摩爾，3當量)。混合物在60℃下攪拌過夜。混合物冷卻至室溫。混合物減壓濃縮。殘留物不純化直接用於下一步(103毫克, 粗品)。LCMS(ESI)：m/z=355 (M+H) +。
步驟31d：(S)-2-((6-(2-(4-氯苯並呋喃-7-基)乙氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯(化合物0305-55)的製備: 將6-((2-(4-氯苯並呋喃-7-基)乙氧基)-1',2',3',6'-四氫-2,4'-聯吡啶4-甲基苯磺酸鹽（0304-55）(103毫克，0.203毫摩爾，1.2當量)，(S)-2-(氯甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（0116-3）(50毫克，0.17毫摩爾，1.0當量)和碳酸鉀(94毫克，0.68毫摩爾，4.0當量)的乙腈(10毫升)溶液在60℃的條件下攪拌16小時。將反應混合物冷卻至室溫後加水，加乙酸乙酯萃取。有機相用無水硫酸鈉乾燥並減壓濃縮。殘留物用矽膠薄層層析製備板純化(洗脫劑為：乙酸乙酯)得黃色油狀物(S)-2-((6-(2-(4-氯苯並呋喃-7-基)乙氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯(69毫克，收率：66.34%)。LCMS(ESI)：m/z=613 (M+H) +。
步驟31e：(S)-2-((6-(2-(4-氯苯並呋喃-7-基)乙氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸 (化合物55)的製備: (S)-2-((6-(2-(4-氯苯並呋喃-7-基)乙氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2'H)-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（0604-55）(69毫克，0.11毫摩爾，1.0當量)和一水合氫氧化鋰(14毫克，0.33毫摩爾，3當量)的乙腈/水=5/1(6毫升)混合物在40℃下攪拌過夜。混合物冷卻到室溫，並減壓濃縮。殘留物的pH值用1摩爾/升的鹽酸調節至6，之後形成固體沉澱。混合物過濾。殘留物用水洗。殘留物用矽膠薄層層析製備板純化(洗脫劑為：二氯甲烷/甲醇=10/1)得到黃色固體(S)-2-((6-(2-(4-氯苯並呋喃-7-基)乙氧基)-3'，6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2'H)-基) 甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸(27毫克，收率：40.29%)。LCMS(ESI)：m/z=599 (M+H) +。 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.72 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.08 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 7.81 (dd, J= 8.4, 1.4 Hz, 1H), 7.70 – 7.60 (m, 2H), 7.25 (q, J= 8.0 Hz, 2H), 7.03 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 6.98 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 6.70 (s, 1H), 6.59 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 5.06 (ddd, J= 14.4, 7.3, 2.8 Hz, 1H), 4.79 (dd, J= 15.2, 7.3 Hz, 1H), 4.70 – 4.55 (m, 3H), 4.46 (dd, J= 13.6, 7.7 Hz, 1H), 4.35 (dt, J= 9.0, 5.9 Hz, 1H), 4.07 (d, J= 13.6 Hz, 1H), 3.92 (d, J= 13.5 Hz, 1H), 3.27 – 3.21 (m, 2H), 2.80 – 2.69 (m, 2H), 2.65 (ddd, J= 16.2, 8.7, 5.4 Hz, 1H), 2.51 (s, 2H), 2.44 – 2.34 (m, 1H).
實施例 32 ： 2- （（ 4- （ 2- （ 4- 氯苯並呋喃 -7- 基） -2- 甲基苯並 [d] [1,3] 二氧雜戊環 -4- 基）呱啶 -1- 基）甲基） -1- （（（（ S ） - 氧雜環丁烷 -2- 基）甲基） -1H- 苯並 [d] 咪唑 -6- 甲酸 ( 化合物 56) 的製備 ( 按照方案十線路製備）
步驟32a：4-（2,3-二羥基苯基）呱啶-1-羧酸叔丁酯（化合物1003-56）的製備:
Figure 02_image203
0℃下往3-溴鄰苯二酚（1.2克，6.35毫摩爾，1.0當量）和N,N-二異丙基乙胺（2.82毫升，15.87毫摩爾，2.5當量）在二氯甲烷（20毫升）的混合物中逐滴加入2-（三甲基甲矽烷基）乙氧基甲基氯（2.65克，15.87毫摩爾，2.5當量）。混合物升到室溫並攪拌2小時。減壓除去溶劑。殘餘物在矽膠上進行柱色譜分離（石油醚：乙酸乙酯 30：1），得到無色油狀物（（（（（3-溴-1,2-亞苯基）雙（氧基））雙（亞甲基））雙（氧基））雙（乙烷-2，1-二基））雙（三甲基矽烷）（2.27克，收率：79％）。TLC：Rf 0.5（石油醚:乙酸乙酯 = 30:1）。
往（（（（（3-溴-1,2-亞苯基）雙（氧基））雙（亞甲基）雙（氧基））雙（乙烷-2,1-二基））雙（三甲基矽烷）（2.27克，5.04毫摩爾，1.0當量），[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀（221毫克，0.302毫摩爾，0.06當量）和碳酸鈉（1.60克， 15.12毫摩爾，3.0當量）在二氧六環（30毫升）和水（7.5毫升）的混合物中加入4-（4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基）-3,6-二氫吡啶-1（2H）-羧酸叔丁酯（1.87克，6.05毫摩爾，1.2當量）。混合物在氮氣氛圍下加熱至85℃並攪拌16小時。減壓下除去溶劑。殘餘物在矽膠上進行柱色譜分離（石油醚∶乙酸乙酯 30∶1），得到淡黃色油狀物4-（2,3-雙（（2-（三甲基甲矽烷基）乙氧基）甲氧基）苯基）-3,6-二氫吡啶-1（2H）-羧酸叔丁酯（2.37克，產率：85％）。LCMS(ESI)： m/z552[M+1] +；TLC：Rf 0.5（石油醚:乙酸乙酯 = 10:1）.
往4-（2,3-雙（（2-（三甲基甲矽烷基）乙氧基）甲氧基）苯基）-3,6-二氫吡啶-1（2H）-羧酸叔丁酯（1.0克，1.81毫摩爾，1.0當量）在甲醇（15毫升）的混合物中加入鈀碳（0.2 g）。混合物在氫氣球壓力下室溫攪拌過夜。混合物過濾。濾液在減壓下濃縮。殘餘物在矽膠上進行柱色譜分離（石油醚∶乙酸乙酯 30∶1），得到白色固體4-（2,3-雙（（2-（三甲基甲矽烷基）乙氧基）甲氧基）苯基）呱啶-1-羧酸叔丁酯（0.48克，產率：48％）。LCMS(ESI)： m/z554[M+1] +；TLC：Rf 0.5（石油醚:乙酸乙酯 = 10:1）。
4-（2,3-雙（（2-（三甲基甲矽烷基）乙氧基）甲氧基）苯基）呱啶-1-羧酸叔丁酯（1.1克，1.99毫摩爾，1.0當量）在氯化氫甲醇溶液（4M溶液，15毫升）的混合物在室溫下攪拌過夜。減壓除去溶劑並在真空下乾燥，得到白色固體4-（2,3-二羥基苯基）呱啶鹽酸鹽（601毫克，粗品）。LCMS(ESI)： m/z194[M+1] +；TLC：Rf 0.3（二氯甲烷:甲醇 = 10:1）。
往4-（2,3-二羥基苯基）呱啶鹽酸鹽（454毫克，1.99毫摩爾，1.0當量）和碳酸氫鈉（502毫克，5.97毫摩爾，3.0當量）在甲醇（6毫升）中的混合物中加入二碳酸二叔丁酯（456毫克，2.09毫摩爾，1.05當量）。混合物在室溫下攪拌3小時。減壓除去溶劑。殘餘物經矽膠柱色譜純化（二氯甲烷∶甲醇 30∶1），得到灰色固體4-（2，3-二羥基苯基）呱啶-1-羧酸叔丁酯（583毫克，收率：100％）。LCMS(ESI)： m/z294[M+1] +；TLC：Rf 0.5（二氯甲烷:甲醇 = 10:1）。
步驟32b：4-（2-（4-氯苯並呋喃-7-基）-2-甲基苯並[d] [1,3]二氧雜戊環-4-基）呱啶-1-羧酸叔丁酯（化合物1004-56）的製備: 往4-（2,3-二羥基苯基）呱啶-1-羧酸叔丁酯（1003-56）（0.25克，0.85毫摩爾，1.0當量），十二羰基三釕（27毫克，0.043毫摩爾，0.05當量）和碳酸氫鈉（72毫克，0.85毫摩爾，1.0當量）在甲苯（10毫升）的混合物中加入4-氯-7-乙炔基苯並呋喃（化合物1101-57）（150毫克，0.85毫摩爾，1.0當量）。混合物在氮氣氛圍下加熱到120℃並攪拌過夜。減壓除去溶劑。殘餘物在矽膠上進行柱色譜分離（石油醚：乙酸乙酯 30：1），得到淡黃色油狀物4-（2-（4-氯苯並呋喃-7-基）-2-甲基苯並[d] [1,3]二氧雜戊環-4-基）呱啶-1-羧酸叔丁酯（70毫克，收率：18％）。LCMS(ESI)： m/z470[M+1] +；TLC：Rf 0.5（石油醚:乙酸乙酯 = 10:1）。
步驟32c：4-（2-（4-氯苯並呋喃-7-基）-2-甲基苯並[d] [1,3]二氧雜戊環-4-基）呱啶鹽酸鹽（化合物1005-56）的製備: 4-（2-（4-氯苯並呋喃-7-基）-2-甲基苯並[d] [1,3]二氧雜戊環-4-基）呱啶-1-羧酸叔丁酯（1004-56）（70毫克，0.15毫摩爾，1.0當量）在氯化氫二氧六環溶液（4M溶液，1.5毫升）的混合物在室溫下攪拌1小時。減壓除去溶劑並在真空下乾燥，得到白色固體4-（2-（4-氯苯並呋喃-7-基）-2-甲基苯並[d] [1,3]二氧雜戊環-4-基）呱啶鹽酸鹽（61毫克，粗品）。LCMS(ESI)： m/z370[M+1] +；TLC：Rf 0.3（二氯甲烷:甲醇 = 10:1）。
步驟32d：2-（（4-（2-（4-氯苯並呋喃-7-基）-2-甲基苯並[d] [1,3]二氧雜戊環-4-基）呱啶-1-基）甲基）-1-（（（S）-氧雜環丁烷-2-基）甲基）-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（化合物1006-56）的製備: 往4-（2-（4-氯苯並呋喃-7-基）-2-甲基苯並[d] [1,3]二氧雜戊環-4-基）呱啶鹽酸鹽（1005-56）（61毫克，0.15毫摩爾，1.0 當量）和（S）-2-（氯甲基）-1-（氧雜環丁烷-2-基甲基）-1H-苯並[d]咪唑-6-甲酸甲酯（0116-3）（44毫克，0.15毫摩爾，1.0當量）在乙腈（5毫升）的混合物中加入碳酸鉀（51毫克，0.37毫摩爾，2.5當量）。混合物在60℃加熱過夜。減壓除去溶劑。殘餘物在矽膠上進行柱色譜分離（石油醚：乙酸乙酯 3：1），得到白色固體2-（（4-（2-（4-氯苯並呋喃-7-基）-2-甲基苯並[d] [1,3]二氧雜戊環-4-基）呱啶-1-基）甲基）-1-（（（S）-氧雜環丁烷-2-基）甲基）-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（81毫克，收率：87％）。LCMS(ESI)： m/z628[M+1] +；TLC：Rf 0.5（石油醚:乙酸乙酯 = 1:1）。
步驟32e：2-（（4-（2-（4-氯苯並呋喃-7-基）-2-甲基苯並[d] [1,3]二氧雜戊環-4-基）呱啶-1-基）甲基）-1-（（（S）-氧雜環丁烷-2-基）甲基）-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸（化合物56）的製備: 往2-（（4-（2-（4-氯苯並呋喃-7-基）-2-甲基苯並[d] [1,3]二氧雜戊環-4-基）呱啶-1-基）甲基）-1-（（（S）-氧雜環丁烷-2-基）甲基）-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（1006-56）（81毫克，0.13毫摩爾，1.0當量）在四氫呋喃（5毫升）和水（2毫升）的混合物中加入氫氧化鋰一水合物（16毫克，0.39毫摩爾，3.0當量）。混合物在40℃加熱過夜。混合物用水（15毫升）稀釋。加入1N 稀鹽酸溶液調節pH = 5然後水層用乙酸乙酯（15毫升×3）萃取。合併的有機層用飽和食鹽水（15毫升×1）洗滌，經無水硫酸鈉乾燥並濃縮。殘餘物通過製備薄層色譜（乙酸乙酯：甲醇=10：1）純化，得到白色固體2-（（4-（2-（4-氯苯並呋喃-7-基）-2-甲基苯並[d] [1,3]二氧雜戊環-4-基）呱啶-1-基）甲基）-1-（（（S）-氧雜環丁烷-2-基）甲基）-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸（53毫克，收率：66 ％）。LCMS（ESI）： m/z614[M+1] +；TLC：Rf 0.5（乙酸乙酯：甲醇=10：1）；熔點： 165-167℃。 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.70 (s, 1H), 8.27 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 8.21 (d, J= 6.3 Hz, 1H), 7.80 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.64 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.44 (dd, J= 8.1, 2.9 Hz, 1H), 7.37 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.06 (s, 1H), 6.75 (dd, J= 16.6, 4.4 Hz, 3H), 5.17 – 5.03 (m, 1H), 4.78 (dd, J= 15.1, 7.2 Hz, 1H), 4.65 (d, J= 15.7 Hz, 1H), 4.44 (dt, J= 13.0, 7.6 Hz, 1H), 4.41 – 4.32 (m, 1H), 3.96 (dd, J= 13.5, 3.6 Hz, 1H), 3.78 (d, J= 13.5 Hz, 1H), 3.01 (s, 1H), 2.86 (d, J= 10.5 Hz, 1H), 2.67 (dd, J= 23.9, 16.3 Hz, 2H), 2.44 (s, 1H), 2.26 (s, 1H), 2.16 (s, 4H), 1.82 – 1.67 (m, 4H).
實施例 33 ： 2-((4-(2-(4- 氯苯並呋喃 -7- 基 )-2- 甲基苯並 [d] [1,3] 二氧雜戊環 -4- 基 )-3,6- 二氫吡啶 -1(2H)- 基 ) 甲基 )-1-(((S)- 氧雜環丁烷 -2- 基 ) 甲基 )-1H- 苯並 [d] 咪唑 -6- 羧酸 ( 化合物 57) 的製備 ( 按照方案十線路製備）
步驟33a：4-氯-7-乙炔基苯並呋喃 (化合物1001-57)的製備:
Figure 02_image205
2-溴-5-氯苯酚(5.0克，24.1毫摩爾，1.0當量)，2-溴-1,1-二乙氧基乙烷(5.7克，28.9毫摩爾，1.2當量)和碳酸鉀(6.7克，48.2毫摩爾，2.0當量)的N,N-二甲基甲醯胺(70毫升)溶液120℃攪拌過夜。冷卻到室溫後，混合物倒入水中，加入乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗、濃縮。殘留物用矽膠柱層析純化(洗脫劑為：石油醚/乙酸乙酯=200/1到100/1)得到黃色油狀物1-溴-4-氯-2-(2,2-二乙氧基乙氧基)苯(8.0克，收率：102%)。
氮氣保護下，1-溴-4-氯-2-(2,2-二乙氧基乙氧基)苯(8.0克，19.8毫摩爾，1.0當量)和多聚磷酸(12.5克，37.1毫摩爾，1.5當量)的二氯乙烷(150毫升)溶液在72℃下攪拌過夜。冷卻到室溫後，加入水，混合物攪拌30分鐘。分液後，有機層用飽和食鹽水洗、濃縮。殘留物用矽膠柱層析純化(洗脫劑為：石油醚)得到無色液體7-溴-4-氯苯並呋喃(4.2克，收率：73.7%)。
氮氣保護下，7-溴-4-氯苯並呋喃(2.0克，8.6毫摩爾，1.0當量)，二三苯基膦二氯化鈀(303毫克，0.43毫摩爾，0.05當量)，碘化亞銅(41毫克，0.215毫摩爾，0.025當量)，三甲基矽乙炔(4.2克，43.0毫摩爾，5.0當量)和三乙胺(15毫升)的四氫呋喃(20毫升)混合物在90℃下攪拌過夜。冷卻到室溫後，混合物過濾，濾液濃縮。殘留物溶於乙酸乙酯，加入碳酸鉀(1.0克)，混合物室溫下攪拌2小時。加入水，混合物分液。有機層濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化(洗脫劑為：石油醚)得到黃色固體4-氯-7-乙炔基苯並呋喃(1.4克，收率：92.1%)。
步驟33b：4-溴-2-(4-氯苯並呋喃-7-基)-2-甲基苯並[d] [1,3]二氧雜戊環 (化合物1002-57)的製備: 氮氣保護下，4-氯-7-乙炔基苯並呋喃（1001-57）(1.3克，7.4毫摩爾，1.0當量)，3-溴-1,2-苯二酚(1.5克，8.1毫摩爾，1.1當量)，碳酸氫鈉(622毫克，7.4毫摩爾，1.0當量)和十二羰基釕(236毫克，0.37毫摩爾，0.05當量)的甲苯(50毫升)混合物在120℃下攪拌過夜。冷卻到室溫後，混合物過濾，濾液真空濃縮。殘留物用矽膠柱層析純化(洗脫劑為：石油醚)得到黃色固體4-溴-2-(4-氯苯並呋喃-7-基)-2-甲基苯並[d] [1,3]二氧雜戊環(0.66克，收率：24.4%)。
步驟33c：4-(2-(4-氯苯並呋喃-7-基)-2-甲基苯並[d] [1,3]二氧雜戊環-4-基)-3,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯  (化合物1004-57)的製備: 氮氣保護條件下，4-溴-2-(4-氯苯並呋喃-7-基)-2-甲基苯並[d] [1,3]二氧雜戊環（1002-57）(660毫克，1.8毫摩爾，1.0當量)，4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)-3,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(612克，1.98毫摩爾，1.1當量)，[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(132毫克，0.18毫摩爾，0.1當量)和碳酸鈉(572毫克，5.4毫摩爾，3.0當量)的二氧六環/水=10/1(11毫升)混合物在90℃下攪拌過夜。冷卻到室溫後，加入水和乙酸乙酯。混合物分液，有機層真空濃縮。殘留物用矽膠柱層析純化(洗脫劑為：石油醚/乙酸乙酯=200/1到30/1)得到黃色固體4-(2-(4-氯苯並呋喃-7-基)-2-甲基苯並[d] [1,3]二氧雜戊環-4-基)-3,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯 (680毫克，收率：80.5%)。LCMS(ESI)：m/z=468 (M+H) +。
步驟33d：4-(2-(4-氯苯並呋喃-7-基)-2-甲基苯並[d] [1,3]二氧雜戊環-4-基)-1,2,3,6-四氫吡啶鹽酸鹽 (化合物1005-57)的製備: 4-(2-(4-氯苯並呋喃-7-基)-2-甲基苯並[d] [1,3]二氧雜戊環-4-基)-3,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯 （1004-57）(100毫克，0.21毫摩爾，1.0當量)的4摩爾每升鹽酸二氧六環(4毫升)溶液在室溫下攪拌過夜。真空下旋出溶劑得到黃色固體4-(2-(4-氯苯並呋喃-7-基)-2-甲基苯並[d] [1,3]二氧雜戊環-4-基)-1,2,3,6-四氫吡啶鹽酸鹽，該產品不需要進一步純化直接用於下一步。
步驟33e：2-((4-(2-(4-氯苯並呋喃-7-基)-2-甲基苯並[d] [1,3]二氧雜戊環-4-基)-3,6-二氫吡啶-1(2H)-基)甲基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯 (化合物1006-57)的製備: 將4-(2-(4-氯苯並呋喃-7-基)-2-甲基苯並[d] [1,3]二氧雜戊環-4-基)-1,2,3,6-四氫吡啶鹽酸鹽（1005-57）(80克，0.2毫摩爾，1.0當量)，(S)-2-(氯甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（0116-3）(35克，0.12毫摩爾，0.6當量)和碳酸鉀(138毫克，1.0毫摩爾，5.0當量)的乙腈(6毫升)溶液在60℃下攪拌過夜。冷卻到室溫後，加入乙酸乙酯和水，混合物分液。有機層濃縮，殘留物用矽膠薄層層析製備板純化(洗脫劑為：乙酸乙酯/甲醇=30/1)得白色固體2-((4-(2-(4-氯苯並呋喃-7-基)-2-甲基苯並[d] [1,3]二氧雜戊環-4-基)-3,6-二氫吡啶-1(2H)-基)甲基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯(55毫克，收率：44.4%)。LCMS(ESI)：m/z=626 (M+H) +。
步驟33f：2-((4-(2-(4-氯苯並呋喃-7-基)-2-甲基苯並[d] [1,3]二氧雜戊環-4-基)-3,6-二氫吡啶-1(2H)-基)甲基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸 (化合物57)的製備: 2-((4-(2-(4-氯苯並呋喃-7-基)-2-甲基苯並[d] [1,3]二氧雜戊環-4-基)-3,6-二氫吡啶-1(2H)-基)甲基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（1006-57）(55毫克，0.09毫摩爾，1.0當量)和一水合氫氧化鋰(19毫克，0.45毫摩爾，5.0當量)的乙腈/水=5/1(6毫升)混合物在40℃下攪拌過夜。冷卻到室溫後，加入水，加入1.0摩爾每升的鹽酸調節pH=6-7。加入二氯甲烷萃取，有機層真空濃縮。殘留物用矽膠薄層層析製備板純化(洗脫劑為：二氯甲烷/甲醇=12/1)得白色固體2-((4-(2-(4-氯苯並呋喃-7-基)-2-甲基苯並[d] [1,3]二氧雜戊環-4-基)-3,6-二氫吡啶-1(2H)-基)甲基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸(40毫克，收率：74.1%)。LCMS(ESI)：m/z=612 (M+H) +。 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.53 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.21 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 7.82 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.65 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.43 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.36 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.06 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 6.90 – 6.79 (m, 3H), 6.39 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 5.11 – 5.02 (m, 1H), 4.83 – 4.74 (m, 1H), 4.64 (d, J= 13.1 Hz, 1H), 4.49 – 4.40 (m, 1H), 4.34 (tt, J= 11.8, 5.9 Hz, 1H), 4.06 (d, J= 13.7 Hz, 1H), 3.92 (d, J= 13.6 Hz, 1H), 3.25 – 3.19 (m, 2H), 2.75 (s, 2H), 2.65 (dd, J= 17.6, 8.4 Hz, 1H), 2.54 (s, 1H), 2.47 – 2.35 (m, 2H), 2.15 (s, 3H).
實施例 34 ： 2- （（ 4- （ 2- （ 4- 氯苯並呋喃 -7- 基） -2- 甲基苯並 [d] [1,3] 二氧雜戊環 -4- 基）呱啶 -1- 基）甲基） -3- （（（ S ） - 氧雜環丁烷 -2- 基）甲基） -3H- 咪唑並 [4,5-b] 吡啶 -5- 羧酸 ( 化合物 58)( 按照方案十線路製備）
步驟34a：2-（（4-（2-（4-氯苯並呋喃-7-基）-2-甲基苯並[d] [1,3]二氧雜戊環-4-基）呱啶-1-基）甲基）-3-（（（S）-氧雜環丁烷-2-基）甲基）-3H-咪唑並[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯（化合物1006-58）的製備: 往4-（2-（4-氯苯並呋喃-7-基）-2-甲基苯並[d] [1,3]二氧雜戊環-4-基）呱啶鹽酸鹽（1005-56）（33毫克，0.08毫摩爾，1.0 當量）和（S）-2-（氯甲基）-3-（氧雜環丁烷-2-基甲基）-3H-咪唑並[4,5-b]吡啶-5-甲酸甲酯（0116-1）（24毫克，0.08毫摩爾，1.0當量）在乙腈（4毫升）的混合物中加入碳酸鉀（28毫克，0.20毫摩爾，2.5當量）。混合物在60℃加熱過夜。減壓除去溶劑。殘餘物通過製備薄層色譜（乙酸乙酯：甲醇 60：1）純化，得到淡黃色固體2-（（4-（2-（4-氯苯並呋喃-7-基）-2-甲基苯並[d] [1,3]二氧雜戊環-4-基）呱啶-1-基）甲基）-3-（（（S）-氧雜環丁烷-2-基）甲基）-3H-咪唑並[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯（29毫克，收率：57％）。LCMS(ESI)： m/z629[M+1] +；TLC：Rf 0.5（二氯甲烷:甲醇 = 30:1）。
步驟34b：2-（（4-（2-（4-氯苯並呋喃-7-基）-2-甲基苯並[d] [1,3]二氧雜戊環-4-基）呱啶-1-基）甲基）-3-（（（S）-氧雜環丁烷-2-基）甲基）-3H-咪唑並[4,5-b]吡啶-5-羧酸（化合物58）的製備: 往2-（（4-（2-（4-氯苯並呋喃-7-基）-2-甲基苯並[d] [1,3]二氧雜戊環-4-基）呱啶-1-基）甲基）-3-（（（S）-氧雜環丁烷-2-基）甲基）-3H-咪唑並[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯（1006-58）（29毫克，0.05毫摩爾，1.0當量）在四氫呋喃（4毫升）和水（2毫升）的混合物中加入氫氧化鋰一水合物（6毫克，0.15毫摩爾，3.0當量）。混合物在40℃加熱過夜。混合物用水（15毫升）稀釋。加入1N 稀鹽酸溶液調節pH = 5然後水層用乙酸乙酯（20毫升×3）萃取。合併的有機層用飽和食鹽水（20毫升×1）洗滌，經無水硫酸鈉乾燥並濃縮。 殘餘物通過製備薄層色譜（二氯甲烷：甲醇=6：1）純化，得到白色固體2-（（4-（2-（4-氯苯並呋喃-7-基）-2-甲基苯並[d] [1,3]二氧雜戊環-4-基）呱啶-1-基）甲基）-3-（（（S）-氧雜環丁烷-2-基）甲基）-3H-咪唑並[4,5-b]吡啶-5-羧酸（18毫克，收率：64％）。LCMS（ESI）： m/z615[M+1] +；TLC：Rf 0.5（二氯甲烷：甲醇=6：1）；熔點： 129-132℃。 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8.22 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.99 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 7.44 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.37 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.06 (s, 1H), 6.76 (d, J= 11.1 Hz, 3H), 5.19 (s, 1H), 4.82 (s, 1H), 4.72 (s, 1H), 4.45 (s, 1H), 4.36 (s, 1H), 3.98 (s, 1H), 3.87 (d, J= 13.9 Hz, 1H), 2.99 (s, 1H), 2.90 (s, 1H), 2.67 (s, 2H), 2.52 (s, 1H), 2.24 (dd, J= 26.5, 14.2 Hz, 2H), 2.17 (d, J= 12.3 Hz, 3H), 1.87 – 1.63 (m, 4H).
實施例 35 ： 2-((4-(2-(4- 氰基苯並呋喃 -7- 基 )-2- 甲基苯並 [d] [1,3] 二氧雜戊環 -4- 基 ) 呱啶 -1- 基 ) 甲基 )-1-((( S)- 氧雜環丁烷 -2- 基 ) 甲基 )-1H- 苯並 [d] 咪唑 -6- 羧酸 ( 化合物 61) 的製備 ( 按照方案十線路製備）
步驟35a：7-乙炔基苯並呋喃-4-腈 (化合物1001-61)的製備：
Figure 02_image207
將7-(羥甲基)苯並呋喃-4-腈(441毫克，2.55毫摩爾，1.0當量)和二氧化錳(3.33克，38.26毫摩爾，15.0當量)的二氯甲烷(10毫升)混合物在室溫下攪拌過夜。反應液通過矽藻土過濾，並用二氯甲烷(15毫升)洗滌。濾液減壓濃縮得到粗產品。粗產品用矽膠柱層析純化(洗脫劑為：石油醚/乙酸乙酯=10/1)得到白色固體7-甲醯基苯並呋喃-4-腈(288毫克，產率：65.7％)。LCMS(ESI)：m/z=172 (M+H) +。
氮氣保護條件下，將7-甲醯基苯並呋喃-4-腈(251毫克，1.47毫摩爾，1.0當量)，(1-重氮基-2-側氧丙基)膦酸二甲酯(338毫克，1.76毫摩爾，1.2當量)和碳酸鉀(405毫克，2.94毫摩爾，2.0當量)的甲醇(6毫升)混合物攪拌過夜。反應用水淬滅，並用乙酸乙酯萃取。有機層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮。殘留物用矽膠柱層析純化(洗脫劑為：石油醚/乙酸乙酯=10/1)得到白色固體7-乙炔基苯並呋喃-4-腈(228毫克，產率：92.3％)。LCMS(ESI)：m/z=168 (M+H) +。
步驟35b：4-(2-(4-氰基苯並呋喃-7-基)-2-甲基苯並[d] [1,3]二氧雜戊環-4-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯  (化合物1004-61)的製備：氮氣保護條件下，7-乙炔基苯並呋喃-4-腈（1001-61）(228毫克，1.37毫摩爾，1.0當量)，4-(2,3-二羥基苯基)呱啶-1-羧酸叔丁酯 （1003-56）(442毫克，1.51毫摩爾，1.1當量)、碳酸氫鈉(115毫克，1.37毫摩爾，1.0當量)和十二羰基三釕(44毫克，0.07毫摩爾，0.05當量)的甲苯(6毫升)混合物在120℃下回流過夜。冷卻至室溫後，將反應液通過矽藻土過濾，並用乙酸乙酯(12毫升)洗滌。將濾液用水(15毫升)稀釋，並用乙酸乙酯(10毫升)萃取。有機層用無水硫酸鈉乾燥，並減壓濃縮。用柱色譜法(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝ 10/1)純化粗產物，得到白色固體4-(2-(4-氰基苯並呋喃-7-基)-2-甲基苯並[d] [1,3]二氧雜戊環-4-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯 (80毫克，產率：12.7％)。LCMS(ESI)：m/z=461 (M+H) +。
步驟35c：7-(2-甲基-4-(呱啶-4-基)苯並[d] [1,3]二氧雜戊環-2-基)苯並呋喃-4-腈鹽酸鹽 (化合物1005-61)的製備：往4-(2-(4-氰基苯並呋喃-7-基)-2-甲基苯並[d] [1,3]二氧雜戊環-4-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯（1004-61）(80毫克，0.17毫摩爾，1.0當量)的二氧六環(2毫升)溶液加入氯化氫的二氧六環溶液(4.0摩爾/升, 4毫升)，混合物在室溫下攪拌過夜。減壓除去溶劑得到粗產品7-(2-甲基-4-(呱啶-4-基)苯並[d] [1,3]二氧雜戊環-2-基)苯並呋喃-4-腈鹽酸鹽。該產品不需要進一步純化直接用於下一步。LCMS(ESI)：m/z=361 (M+H) +。
步驟35d：2-((4-(2-(4-氰基苯並呋喃-7-基)-2-甲基苯並[d] [1,3]二氧雜戊環-4-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(( (S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯 (化合物1006-61)的製備: 將7-(2-甲基-4-(呱啶-4-基)苯並[d] [1,3]二氧雜戊環-2-基)苯並呋喃-4-腈鹽酸鹽（1005-61）(80毫克，假定為0.17毫摩爾，1.0當量)、(S)-2-(氯甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（0116-3）(52毫克，0.17毫摩爾，1.0當量)和碳酸鉀(96毫克，0.70毫摩爾，4.0當量)的乙腈(5毫升)的混合物在60℃下攪拌4小時。將反應混合物冷卻至室溫後加水，加乙酸乙酯萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥並減壓濃縮。殘留物用矽膠薄層層析製備板純化(洗脫劑為：石油醚/乙酸乙酯=1/10)得白色固體2-((4-(2-(4-氰基苯並呋喃-7-基)-2-甲基苯並[d] [1,3]二氧雜戊環-4-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(( (S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯(50毫克，收率：46.7%)。LCMS(ESI)：m/z=619 (M+H) +。
步驟35e：2-((4-(2-(4-氰基苯並呋喃-7-基)-2-甲基苯並[d] [1,3]二氧雜戊環-4-基)呱啶-1-基)甲基)-1-((( S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸 (化合物61)的製備: 將2-((4-(2-(4-氰基苯並呋喃-7-基)-2-甲基苯並[d] [1,3]二氧雜戊環-4-基)呱啶-1-基)甲基)-1-(( (S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯（1006-61）(50毫克，0.08毫摩爾，1.0當量)和一水合氫氧化鋰(7毫克，0.16毫摩爾，2.0當量)的乙腈/水=5/1(3毫升)混合物在40℃下攪拌過夜。混合物冷卻到室溫後，用1摩爾/升的鹽酸調節pH約至6，然後形成固體沉澱物。漿液用水(12毫升)稀釋，攪拌4小時，然後通過過濾收集固體。固體用水洗滌，然後在真空下乾燥。將固體溶解在二氯甲烷/甲醇＝1/2(5毫升)中，然後過濾，將濾液用無水硫酸鈉乾燥並減壓濃縮。殘留物真空乾燥得到白色固體2-((4-(2-(4-氰基苯並呋喃-7-基)-2-甲基苯並[d] [1,3]二氧雜戊環-4-基)呱啶-1-基)甲基)-1-((( S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸(40毫克，收率：81.6%)。LCMS(ESI)：m/z=605 (M+H) +。 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.72 (s, 1H), 8.38 (dd, J= 7.9, 2.2 Hz, 1H), 8.27 (d, J= 3.0 Hz, 1H), 7.82 (t, J= 7.9 Hz, 2H), 7.64 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.59 (dd, J= 7.9, 2.9 Hz, 1H), 7.24 (t, J= 2.1 Hz, 1H), 6.79 (dd, J= 6.6, 3.4 Hz, 2H), 6.77 – 6.73 (m, 1H), 5.12 (tt, J= 12.1, 3.6 Hz, 1H), 4.78 (dd, J= 14.6, 6.6 Hz, 1H), 4.65 (dd, J= 12.5, 4.7 Hz, 1H), 4.50 – 4.42 (m, 1H), 4.37 (td, J= 12.2, 6.1 Hz, 1H), 3.96 (dd, J= 13.5, 4.7 Hz, 1H), 3.79 (d, J= 13.6 Hz, 1H), 3.02 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 2.87 (d, J= 8.9 Hz, 1H), 2.68 (dt, J= 18.9, 6.5 Hz, 2H), 2.53 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 2.48 – 2.42 (m, 1H), 2.25 (d, J= 10.9 Hz, 1H), 1.74 (dd, J= 29.5, 15.3 Hz, 4H).
實施例 36 生物活性試驗
本發明所用的對照化合物為PF-06882961，結構如下：
Figure 02_image209
並且，本發明還合成了以下4個對照化合物：
Figure 02_image211
其合成方法如下：
1. ( S)-2-((6-( 苯並 [ d][1,3] 二氧雜戊環 -5- 基甲氧基 )-3',6'- 二氫 -[2,4'- 聯吡啶 ]-1' (2' H)- 基 ) 甲基 )-1-( 氧雜環丁烷 -2- 基甲基 )-1 H- 苯並 [ d] 咪唑 -6- 羧酸 ( 化合物 24067) 的製備
步驟1-1：2-(苯並[ d][1,3]二氧雜戊環-5-基甲氧基)-6-溴吡啶的製備：
Figure 02_image213
在氮氣保護下，將(苯並[ d] [1,3]二氧雜戊環-5-基)甲醇（304毫克，2.0毫摩爾，1.0當量）加入到無水四氫呋喃（10毫升）中，冷卻至0℃。將1M六甲基二矽基胺基鉀的四氫呋喃溶液（4.0毫升，4.0毫摩爾，2.0當量）滴加到混合物中，在0℃下攪拌一小時。將2-溴-6-氟吡啶（388 毫克，2.2毫摩爾，1.1當量）的四氫呋喃溶液滴加到上述混合物中，在室溫下攪拌一小時。加入氯化銨水溶液淬滅，用乙酸乙酯萃取。有機相經過水和飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮，經過矽膠柱層析純化（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=20/1）得到白色固體2-(苯並[ d][1,3]二氧雜戊環-5-基甲氧基)-6-溴吡啶（600毫克，收率：97.4%）。LCMS(ESI)：m/z=308(M+H) +。
步驟1-2：6-(苯並[ d][1,3]二氧雜戊環-5-基甲氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2' H)-羧酸叔丁酯的製備：
Figure 02_image215
在氮氣保護下，將2-(苯並[ d][1,3]二氧雜戊環-5-基甲氧基)-6-溴吡啶（600毫克，1.95毫摩爾，1.0當量）、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷-2-基)-3,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯（723毫克，2.34毫摩爾，1.2當量）、二氯二（三苯基膦）鈀（69毫克，0.098毫摩爾，0.05當量）和碳酸鈉（414毫克，3.9毫摩爾，2.0當量）加入到甲苯（20毫升）、乙醇（10毫升）和水（10毫升）的混合溶劑中，在110℃下攪拌反應兩小時。用乙酸乙酯萃取，經水和飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，有機相減壓濃縮，經過矽膠柱層析純化（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=10/1到3/1）得到無水油狀物6-(苯並[ d][1,3]二氧雜戊環-5-基甲氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2' H)-羧酸叔丁酯（815毫克，收率：96%）。LCMS(ESI)：m/z=411(M+H) +。
步驟1-3：( S)-2-((6-(苯並[ d][1,3]二氧雜戊環-5-基甲氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2' H)-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d]咪唑-6-羧酸甲酯的製備：
Figure 02_image217
在室溫下，將6-(苯並[ d][1,3]二氧雜戊環-5-基甲氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2' H)-羧酸叔丁酯（200毫克，0.49毫摩爾，1.8當量）溶解於5毫升二氧六環中，加入1毫升4M氯化氫的二氧六環溶液，混合物在室溫下攪拌50分鐘。混合物經過減壓濃縮至幹，所得殘留物加入到5毫升 N-甲基吡咯烷酮。加入1毫升二異丙基乙胺和( S)-2-(氯甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d]咪唑-6-羧酸甲酯（80毫克，0.27毫摩爾，1.0當量），混合物在60℃下攪拌過夜。加入乙酸乙酯，用水和飽和食鹽水洗，經過無水硫酸鈉乾燥，有機相減壓濃縮，經製備薄層色譜純化（展開劑：石油醚/乙酸乙酯=1/1）得到黃色固體( S)-2-((6-(苯並[ d][1,3]二氧雜戊環-5-基甲氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2' H)-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d]咪唑-6-羧酸甲酯（46毫克，收率：29.8%）。LCMS(ESI)：m/z=569(M+H) +。
步驟1-4:( S)-2-((6-(苯並[ d][1,3] 二氧雜戊環-5-基甲氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1' (2' H)-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d]咪唑-6-羧酸(化合物24067)的製備：
Figure 02_image219
將 ( S)-2-((6-(苯並[ d][1,3]二氧雜戊環-5-基甲氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2' H)-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d]咪唑-6-羧酸甲酯（46毫克，0.081毫摩爾，1.0當量）和一水合氫氧化鋰（11毫克，0.243毫摩爾，3.0當量）加入到5毫升乙腈和1毫升水的混合溶劑中，混合物在40℃下攪拌過夜。混合物冷卻到室溫，並減壓濃縮。加入稀硫酸調節殘留物的pH值至6，加入乙酸乙酯萃取，用飽和食鹽水洗。有機相經過無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物用製備薄層色譜純化（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇=15/1）得到黃色固體( S)-2-((6-(苯並[ d][1,3] 二氧雜戊環-5-基甲氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1' (2' H)-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d]咪唑-6-羧酸（22毫克，收率：48.8%)。LCMS(ESI)：m/z=555 (M+H) +, 熔點：144~146℃。 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.71 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.81 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.65 (dd, J= 8.0, 5.8 Hz, 2H), 7.06 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 7.00 (s, 1H), 6.93 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 6.87 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 6.75 (s, 1H), 6.68 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 5.99 (s, 2H), 5.26 (s, 2H), 5.06 (dt, J= 7.2, 4.8 Hz, 1H), 4.80 (dd, J= 15.2, 7.2 Hz, 1H), 4.66 (dd, J= 15.2, 2.3 Hz, 1H), 4.47 (dd, J= 13.7, 7.6 Hz, 1H), 4.36 (dt, J= 8.9, 5.9 Hz, 1H), 4.07 (d, J= 13.5 Hz, 1H), 3.93 (d, J= 13.5 Hz, 1H), 3.21 (d, J= 17.6 Hz, 2H), 2.81 – 2.71 (m, 2H), 2.66 (dt, J= 16.3, 7.7 Hz, 1H), 2.54 (s, 2H), 2.44 – 2.34 (m, 1H).
2. ( S)-2-((6-(2,2- 二氟苯並 [ d][1,3] 二氧雜戊環 -5- 基甲氧基 )-3',6'- 二氫 -[2,4'- 聯吡啶 ]-1' (2' H)- 基 ) 甲基 )-1-( 氧雜環丁烷 -2- 基甲基 )-1 H- 苯並 [ d] 咪唑 -6- 羧酸 ( 化合物 24068) 的製備
步驟2-1：2-溴-6-(2,2-二氟苯並[ d][1,3]二氧雜戊環-5-基甲氧基)吡啶的製備：
Figure 02_image221
在氮氣保護下，將2,2-二氟苯並[ d] [1,3]二氧雜戊環-5-基甲醇（376毫克，2.0毫摩爾，1.0當量）加入到無水四氫呋喃（10毫升）中，冷卻至0℃。將1M六甲基二矽基胺基鉀的四氫呋喃溶液（4.0毫升，4.0毫摩爾，2.0當量）滴加到混合物中，在0℃下攪拌一小時。將2-溴-6-氟吡啶（388 毫克，2.2毫摩爾，1.1當量）的四氫呋喃溶液滴加到上述混合物中，在室溫下攪拌一小時。加入氯化銨水溶液淬滅，用乙酸乙酯萃取。有機相經過水和飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮，經過矽膠柱層析純化（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=20/1）得到無色固體2-溴-6-(2,2-二氟苯並[ d][1,3]二氧雜戊環-5-基甲氧基)吡啶（626 毫克，收率：90.9%）。LCMS(ESI)：m/z=344(M+H) +。
步驟2-2：6-(2,2-二氟苯並[ d][1,3]二氧雜戊環-5-基甲氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2' H)-羧酸叔丁酯的製備：
Figure 02_image223
在氮氣保護下，將2-溴-6-(2,2-二氟苯並[ d][1,3]二氧雜戊環-5-基甲氧基)吡啶（626毫克，1.82毫摩爾，1.0當量）、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷-2-基)-3,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯（675毫克，2.18毫摩爾，1.2當量）、二氯二（三苯基膦）鈀（64毫克，0.09毫摩爾，0.05當量）和碳酸鈉（386毫克，3.64毫摩爾，2.0當量）加入到甲苯（20毫升）、乙醇（10毫升）和水（10毫升）的混合溶劑中，在110℃下攪拌反應兩小時。用乙酸乙酯萃取，經水和飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，有機相減壓濃縮，經過矽膠柱層析純化（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=10/1到3/1）得到黃色固體6-(2,2-二氟苯並[ d][1,3]二氧雜戊環-5-基甲氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2' H)-羧酸叔丁酯（800毫克，收率：98.4%）。LCMS(ESI)：m/z=447(M+H) +。
步驟2-3：( S)-2-((6-(2,2-二氟苯並[ d][1,3]二氧雜戊環-5-基甲氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2' H)-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d]咪唑-6-羧酸甲酯的製備：
Figure 02_image225
在室溫下，將6-(2,2-二氟苯並[ d][1,3]二氧雜戊環-5-基甲氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2' H)-羧酸叔丁酯（300毫克，0.67毫摩爾，3.3當量）溶解於5毫升二氧六環中，加入1毫升4M氯化氫的二氧六環溶液，混合物在室溫下攪拌60分鐘。混合物經過減壓濃縮至幹，所得殘留物加入到5毫升 N-甲基吡咯烷酮。加入1毫升二異丙基乙胺和( S)-2-(氯甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d]咪唑-6-羧酸甲酯（60毫克，0.20毫摩爾，1.0當量），混合物在60℃下攪拌過夜。加入乙酸乙酯，用水和飽和食鹽水洗，經過無水硫酸鈉乾燥，有機相減壓濃縮，經製備薄層色譜純化（展開劑：乙酸乙酯）得到黃色油狀物( S)-2-((6-(2,2-二氟苯並[ d][1,3]二氧雜戊環-5-基甲氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2' H)-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d]咪唑-6-羧酸甲酯（57毫克，收率：46.3%）。LCMS(ESI)：m/z=605(M+H) +。
步驟2-4：( S)-2-((6-(2,2-二氟苯並[ d][1,3] 二氧雜戊環-5-基甲氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1' (2' H)-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d]咪唑-6-羧酸（化合物24068）的製備：
Figure 02_image227
將( S)-2-((6-(2,2-二氟苯並[ d][1,3]二氧雜戊環-5-基甲氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2' H)-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d]咪唑-6-羧酸甲酯（57毫克，0.094毫摩爾，1.0當量）和一水合氫氧化鋰（12毫克，0.284毫摩爾，3.0當量）加入到5毫升乙腈和1毫升水的混合溶劑中，混合物在40℃下攪拌過夜。混合物冷卻到室溫，並減壓濃縮。加入稀硫酸調節殘留物的pH值至6，加入乙酸乙酯萃取，用飽和食鹽水洗。有機相經過無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物用製備薄層色譜純化（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇=12/1）得到黃色固體( S)-2-((6-(2,2-二氟苯並[ d][1,3] 二氧雜戊環-5-基甲氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1' (2' H)-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d]咪唑-6-羧酸（36毫克，收率：64.8%)。LCMS(ESI)：m/z=591 (M+H) +, 熔點：102~104℃。 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.69 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.81 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.67 (dd, J= 12.3, 7.9 Hz, 2H), 7.49 (s, 1H), 7.38 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.30 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.07 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 6.78 – 6.68 (m, 2H), 5.36 (s, 2H), 5.07 (d, J= 7.1 Hz, 1H), 4.80 (dd, J= 15.1, 7.2 Hz, 1H), 4.65 (d, J= 14.8 Hz, 1H), 4.46 (dd, J= 13.9, 6.9 Hz, 1H), 4.36 (dd, J= 14.2, 6.2 Hz, 1H), 4.07 (d, J= 13.5 Hz, 1H), 3.93 (d, J= 13.5 Hz, 1H), 3.21 (d, J= 17.1 Hz, 2H), 2.75 (s, 2H), 2.66 (dd, J= 17.6, 7.9 Hz, 1H), 2.52 (s, 2H), 2.39 (dd, J= 17.6, 8.5 Hz, 1H).
3. ( S)-2-((6-((1- 甲基 -1 H- 苯並 [ d] 咪唑 -6- 基 ) 甲氧基 )-3',6'- 二氫 -[2,4'- 聯吡啶 ]-1' (2' H)- 基 ) 甲基 )-1-( 氧雜環丁烷 -2- 基甲基 )-1 H- 苯並 [ d] 咪唑 -6- 羧酸 ( 化合物 24069) 的製備
步驟3-1： (1-甲基-1 H-苯並[ d]咪唑-6-基)甲醇的製備：
Figure 02_image229
在氮氣保護下，將1-甲基-1H-苯並[ d]咪唑-6-羧酸（300毫克，1.7毫摩爾，1.0當量）加入到無水四氫呋喃（10毫升）中，冷卻至0℃。將氫化鋰鋁（260毫克，6.8毫摩爾，4.0當量）加入到混合物中，在室溫下攪拌三小時。在冰浴下，依次滴加0.26毫升水、0.26毫升15%氫氧化鈉水溶液和0.78毫升水，升至室溫，加入無水硫酸鈉攪拌，抽濾，濾液減壓濃縮，經過矽膠柱層析純化（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇=20/1）得到白色固體(1-甲基-1 H-苯並[ d]咪唑-6-基)甲醇（126 毫克，收率：45.6%）。LCMS(ESI)：m/z=163(M+H) +。
步驟3-2：6-(((6-溴吡啶-2-基)氧基)甲基)-1-甲基-1 H-苯並[ d]咪唑的製備：
Figure 02_image231
在氮氣保護下，將(1-甲基-1 H-苯並[ d]咪唑-6-基)甲醇（159毫克，1.0毫摩爾，1.0當量）加入到無水四氫呋喃（10毫升）中，冷卻至0℃。將1M六甲基二矽基胺基鉀的四氫呋喃溶液（2.0毫升，2.0毫摩爾，2.0當量）滴加到混合物中，在0℃下攪拌一小時。將2-溴-6-氟吡啶（194 毫克，1.1毫摩爾，1.1當量）的四氫呋喃溶液滴加到上述混合物中，在室溫下攪拌一小時。加入氯化銨水溶液淬滅，用乙酸乙酯萃取。有機相經過水和飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮，經過矽膠柱層析純化（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇=20/1）得到白色固體6-(((6-溴吡啶-2-基)氧基)甲基)-1-甲基-1 H-苯並[ d]咪唑（288 毫克，收率：91.1%）。LCMS(ESI)：m/z=318(M+H) +。
步驟3-3：6-(1-甲基-1 H-苯並[ d]咪唑-6-基甲氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2' H)-羧酸叔丁酯的製備：
Figure 02_image233
在氮氣保護下，將6-(((6-溴吡啶-2-基)氧基)甲基)-1-甲基-1 H-苯並[ d]咪唑（288毫克，0.91毫摩爾，1.0當量）、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷-2-基)-3,6-二氫吡啶-1(2 H)-羧酸叔丁酯（337毫克，1.09毫摩爾，1.2當量）、二氯二（三苯基膦）鈀（32毫克，0.046毫摩爾，0.05當量）和碳酸鈉（193毫克，1.82毫摩爾，2.0當量）加入到甲苯（10毫升）、乙醇（5毫升）和水（5毫升）的混合溶劑中，在110℃下攪拌反應兩小時。用乙酸乙酯萃取，經水和飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉乾燥，有機相減壓濃縮，經過矽膠柱層析純化（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇=33/1）得到黃色固體6-(1-甲基-1 H-苯並[ d]咪唑-6-基甲氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2' H)-羧酸叔丁酯（374毫克，收率：97.3%）。LCMS(ESI)：m/z=421(M+H) +。
步驟3-4：( S)-2-((6-(1-甲基-1 H-苯並[ d]咪唑-5-基甲氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2' H)-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d]咪唑-6-羧酸甲酯的製備：
Figure 02_image235
在室溫下，將6-(1-甲基-1 H-苯並[ d]咪唑-6-基甲氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2' H)-羧酸叔丁酯（187毫克，0.45毫摩爾，2.25當量）溶解於5毫升二氧六環中，加入1毫升4M氯化氫的二氧六環溶液，混合物在室溫下攪拌60分鐘。混合物經過減壓濃縮至幹，所得殘留物加入到5毫升 N-甲基吡咯烷酮。加入1毫升二異丙基乙胺和( S)-2-(氯甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d]咪唑-6-羧酸甲酯（60毫克，0.20毫摩爾，1.0當量），混合物在60℃下攪拌過夜。加入乙酸乙酯，用水和飽和食鹽水洗，經過無水硫酸鈉乾燥，有機相減壓濃縮，經製備薄層色譜純化（展開劑：二氯甲烷/甲醇=15/1）得到黃色油狀物( S)-2-((6-(1-甲基-1 H-苯並[ d]咪唑-5-基甲氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2' H)-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d]咪唑-6-羧酸甲酯（67毫克，收率：57.8%）。LCMS(ESI)：m/z=579(M+H) +。
步驟3-5: ( S)-2-((6-((1-甲基-1 H-苯並[ d]咪唑-6-基)甲氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1' (2' H)-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d]咪唑-6-羧酸(化合物24069)的製備：
Figure 02_image237
將( S)-2-((6-(1-甲基-1 H-苯並[ d]咪唑-5-基甲氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2' H)-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d]咪唑-6-羧酸甲酯（67毫克，0.116毫摩爾，1.0當量）和一水合氫氧化鋰（19毫克，0.46毫摩爾，4.0當量）加入到5毫升乙腈和1毫升水的混合溶劑中，混合物在40℃下攪拌過夜。混合物冷卻到室溫，並減壓濃縮。加入稀硫酸調節殘留物的pH值至6，加入乙酸乙酯萃取，用飽和食鹽水洗。有機相經過無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，殘留物用製備薄層色譜純化（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇=12/1）得到黃色固體( S)-2-((6-((1-甲基-1 H-苯並[ d]咪唑-6-基)甲氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1' (2' H)-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯並[ d]咪唑-6-羧酸（41毫克，收率：62.5%)。LCMS(ESI)：m/z=565 (M+H) +, 熔點：135~137℃。 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.61 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.82 (dd, J= 8.4, 1.5 Hz, 1H), 7.70 – 7.64 (m, 3H), 7.62 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.31 (dd, J= 8.3, 1.3 Hz, 1H), 7.06 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 6.78 (s, 1H), 6.71 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 5.49 (s, 2H), 5.07 (ddd, J= 14.5, 7.3, 2.8 Hz, 1H), 4.80 (dd, J= 15.3, 7.3 Hz, 1H), 4.66 (dd, J= 15.2, 2.7 Hz, 1H), 4.47 (dt, J= 14.0, 7.1 Hz, 1H), 4.36 (dt, J= 9.0, 5.9 Hz, 1H), 4.08 (d, J= 13.5 Hz, 1H), 3.97 – 3.90 (m, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.26 (d, J= 12.6 Hz, 2H), 2.80 – 2.74 (m, 2H), 2.70 – 2.62 (m, 1H), 2.60 – 2.53 (m, 2H), 2.45 – 2.38 (m, 1H).
4. (S)-2-((6-((2 ， 3- 二氫苯並 [b][1 ， 4] 二氧雜環己烯 -6- 基 ) 甲氧基 )-3 ', 6 '- 二氫 -[2, 4 '- 聯吡啶 ]-1 '(2 ' H)- 基 ) 甲基 )-1-( 氧雜環丁烷 -2- 基甲基 )-1H- 苯並 [d] 咪唑 -6- 羧酸 ( 化合物 24070) 的製備
步驟4-1：6-氯-3 ', 6 '-二氫-[2, 4 '-聯吡啶]-1 '(2 ' H)-羧酸叔丁酯的製備：
Figure 02_image239
氮氣保護條件下，將2-溴-6-氯吡啶(1.0克，5.20毫摩爾，1.0當量) , 4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)-3,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(1.6克，5.20毫摩爾，1.0當量)，1,1'-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀和碳酸鈉加入到二氧六環與水（10:1）的混合溶劑(11 毫升)中，在90℃攪拌過夜。反應液冷卻至室溫，然後用水淬滅，加入乙酸乙酯萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌，並用無水硫酸鈉乾燥。有機相減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析(洗脫劑為：石油醚 / 乙酸乙酯＝10/1)純化，得到黃色固體6-氯-3 ', 6 '-二氫-[2, 4 '-聯吡啶]-1 '(2 ' H)-羧酸叔丁酯(3.26克，收率：214％)。LCMS(ESI)：m/z=295 (M+H) +。
步驟4-2：6-氯-1 ', 2 ', 3 ', 6 '-四氫-2, 4 '-聯吡啶對甲苯磺酸鹽的製備：
Figure 02_image241
6-氯-3 ', 6 '-二氫-[2, 4 '-聯吡啶]-1 '(2 ' H)-羧酸叔丁酯(2.94毫克，9.99毫摩爾，1.0當量)和對甲苯磺酸 (4.3克，24.97毫摩爾，2.5單量)的乙酸乙酯混合物(50 毫升)在60℃下攪拌30分鐘。將反應液過濾，濾餅得到白色固體6-氯-1 ', 2 ', 3 ', 6 '-四氫-2, 4 '-聯吡啶對甲苯磺酸鹽(232毫克，產率12%)。該產品不需要進一步純化直接用於下一步。
步驟4-3：(S)-2-((6-氯-3 ', 6 '-二氫-[2, 4 '-聯吡啶]-1 '(2 ' H)-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯的製備：
Figure 02_image243
將6-氯-1 ', 2 ', 3 ', 6 '-四氫-2, 4 '-聯吡啶對甲苯磺酸鹽(232毫克，0.634毫摩爾，1.2當量)和碳酸鉀（291毫克，2.11毫摩爾，4.0單量）的乙腈(10毫升)混合物加熱至60℃，直到pH到7~8，然後將(S)-2-(氯甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯(150毫克，0.528毫摩爾，1.0單量)加入到混合物並攪拌過夜。冷卻至室溫後，反應用水淬滅，用乙酸乙酯萃取。有機相用飽和食鹽水洗滌，並用無水硫酸鈉乾燥。將有機相減壓濃縮，得到(S)-2-((6-氯-3 ', 6 '-二氫-[2, 4 '-聯吡啶]-1 '(2 ' H)-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯(188.5毫克，收率：81.74％)為黃色固體。LCMS(ESI)：m/z=453.9 (M+H) +。
步驟4-4：(S)-2-((6-((2，3-二氫苯並[b][1，4]二氧雜環己烯-6-基)甲氧基)-3 ', 6 '-二氫-[2, 4 '-聯吡啶]-1 '(2 ' H)-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯的製備：
Figure 02_image245
將(S)-2-((6-氯-3 ', 6 '-二氫-[2, 4 '-聯吡啶]-1 '(2 ' H)-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯(188.5毫克，0.417毫摩爾，1.0當量)，(2，3-二氫苯並[b][1，4]二氧雜環己烯-6-基)甲醇(83.1毫克，0.500毫摩爾，1.2當量)，三(二亞苄基丙酮)二鈀 (19.23毫克，0.021毫摩爾，0.05當量)，2-雙環已基膦-2 ',6'-二異丙氧基聯苯(19.46毫克，0.0417毫摩爾，0.1當量)和碳酸銫(382.86毫克，1.175毫摩爾，2.5當量)的甲苯 (70毫升)的混合物在120℃下攪拌過夜。冷卻至室溫後，將反應液過濾並將濾液減壓濃縮。殘留物用矽膠薄層層析製備板純化（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=1/2）得黃色固體化合物(S)-2-((6-((2，3-二氫苯並[b][1，4]二氧雜環己烯-6-基)甲氧基)-3 ', 6 '-二氫-[2, 4 '-聯吡啶]-1 '(2 ' H)-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯(20毫克，產率8.44%)。LCMS(ESI)：m/z=583.6 (M+H) +。
步驟4-5：(S)-2-((6-((2，3-二氫苯並[b][1，4]二氧雜環己烯-6-基)甲氧基)-3 ', 6 '-二氫-[2, 4 '-聯吡啶]-1 '(2 ' H)-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸(化合物24070)的製備：
Figure 02_image247
將(S)-2-((6-((2，3-二氫苯並[b][1，4]二氧雜環己烯-6-基)甲氧基)-3 ', 6 '-二氫-[2, 4 '-聯吡啶]-1 '(2 ' H)-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸甲酯(20毫克，0.034毫摩爾，1.0當量)和一水合氫氧化鋰（2.85毫克，0.068毫摩爾，2.0單量）的乙腈/水=5/1（6毫升）的混合物在40℃攪拌過夜。然後將混合物冷卻至室溫，通過加入1.0 M 硫酸將pH調節至約6，之後形成固體沉澱。將混合物過濾。殘留物用水洗。混合物用甲醇打漿得到黃色固體(S)-2-((6-((2，3-二氫苯並[b][1，4]二氧雜環己烯-6-基)甲氧基)-3 ', 6 '-二氫-[2, 4 '-聯吡啶]-1 '(2 ' H)-基)甲基)-1-(氧雜環丁烷-2-基甲基)-1H-苯並[d]咪唑-6-羧酸(18毫克，產率92.4%)。LCMS(ESI)：m/z=569 (M+H) +。 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.67 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.81 (dd, J= 8.4, 1.2 Hz, 1H), 7.65 (t, J= 8.2 Hz, 2H), 7.05 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 6.92 (d, J= 1.8 Hz, 1H), 6.89 (dd, J= 8.2, 1.9 Hz, 1H), 6.81 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 6.74 (s, 1H), 6.67 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 5.24 (s, 2H), 5.07 (qd, J= 7.2, 2.8 Hz, 1H), 4.80 (dd, J= 15.2, 7.3 Hz, 1H), 4.65 (dd, J= 15.2, 2.6 Hz, 1H), 4.47 (dd, J= 13.6, 7.7 Hz, 1H), 4.36 (dt, J= 8.9, 5.9 Hz, 1H), 4.20 (s, 4H), 4.07 (d, J= 13.5 Hz, 1H), 3.93 (d, J= 13.5 Hz, 1H), 3.23 (s, 2H), 2.79 – 2.72 (m, 2H), 2.66 (ddd, J= 8.8, 8.2, 5.5 Hz, 1H), 2.54 (s, 2H), 2.40 (ddd, J= 16.1, 11.2, 7.1 Hz, 1H).
一、hGLP-1R 293Ta細胞株中環磷酸腺苷（cAMP）水準測定
1.實驗材料
名稱 來源 貨號
cAMP檢測試劑盒 Cisbio 62AM6PEB (1,000 tests)
IBMX Cisbio 62AMXADA
FBS Biological Industries 04-001-1ACS
DMEM GIBCO C11995500BT
低容量白色微孔板 Cisbio 66PL96025
帝肯INFINITE F NANO+酶標儀 帝肯 Infinite 200 PRO
2.實驗原理
Cisbio公司的環磷酸腺苷檢測試劑盒是一種競爭性免疫分析方法，旨在測量細胞內環磷酸腺苷的積累。該原理基於HTRF®技術，細胞產生的天然環磷酸腺苷或未標記的環磷酸腺苷（標準曲線）與d2標記的環磷酸腺苷（紅色受體）競爭結合單克隆環磷酸腺苷 Europium Cryptate標記抗體（Europium供體）。特定信號與標準品或樣品中的環磷酸腺苷濃度成反比。
對於所有其他HTRF分析，螢光比（665 nm / 620 nm）的計算消除了任何可能的光物理干擾，這意味著該分析不受實驗培養基條件（例如培養基，血清，生物素，有色化合物等）的影響。
3.實驗準備
1) hGLP-1R 293Ta穩轉細胞株構建： a) 委託蘇州金唯智生物科技有限公司合成hGLP-1R全長序列，並與慢病毒載體pLEX-MCS進行連接。 b) 將連接hGLP-1R序列的慢病毒質粒pLEX-MCS分別轉染293Ta細胞產生慢病毒； c) 用慢病毒感染293Ta細胞，用嘌呤黴素進行篩選從而得到含hGLP-1R序列的293Ta穩轉細胞系。
2) 試劑準備： a) 配製環磷酸腺苷檢測試劑（試劑需要置於室溫30min）
Anti-環磷酸腺苷-Cryptate     (Europium 供體, 凍乾粉) 1 vial 加入1.1ml蒸餾水重組，輕輕混勻。每管50ul分裝，-80°C保存。用裂解&檢測 Buffer 1按1:4比例配製工作液
環磷酸腺苷 - d2  (red acceptor, 凍乾粉) 1 vial 加入1.1ml蒸餾水重組，輕輕混勻。每管50ul分裝，-80°C保存。用裂解&檢測 Buffer 1按1:4比例配製工作液
環磷酸腺苷-環磷酸腺苷-Gs HiRange 標準對照品 (凍乾粉) 1 vial 加入0.4ml蒸餾水重組，輕輕混勻。每管50ul分裝，-20°C保存
裂解&檢測Buffer 1 1 vial（13ml）   
刺激Buffer 1 (5X) 1 vial（8ml） 用蒸餾水按1:4比例稀釋（400ul+1600ul）
b)   3-異丁基-1-甲基黃嘌呤：3-異丁基-1-甲基黃嘌呤（500mM）用DMSO稀釋到50mM，分裝20ul每管，4°C保存。20ul加2ml 刺激Buffer 1稀釋為0.5mM使用。
4.細胞實驗
1) 化合物稀釋:2mM母液用DMSO稀釋到200nM（40X），然後取2ul加38ul 刺激 Buffer 1（含3-異丁基-1-甲基黃嘌呤 0.5mM）稀釋到10nM（2X），反應體系終濃度為5nM。用刺激 Buffer 1（含3-異丁基-1-甲基黃嘌呤0.5mM）依次5倍稀釋，共8個濃度點。
2) 消化離心收集hGLP-1R 293Ta細胞，加入DMEM培養基（含10%FBS）吹打重懸細胞，用Scepter自動細胞計數儀（Millipore #PHCC00000）計數。調整細胞數為1X10 6cells/ml，96孔微孔白板每孔加入5ul（即每孔5000個細胞）。
3) 向96孔中加入5ul稀釋好的8個濃度梯度2X化合物，另在一孔中加入5ul 刺激 Buffer 1（含3-異丁基-1-甲基黃嘌呤 0.5mM）作為對照。蓋上蓋子，37°C培養30min。
4) 取50ul 環磷酸腺苷 - d2和50ul Anti-環磷酸腺苷 Eu-Cryptate 分別加入200ul 裂解&檢測Buffer 1配置工作液。96孔板每孔加入5ul 環磷酸腺苷 - d2工作液，然後加入5ul Anti-環磷酸腺苷 Eu-Cryptate工作液。混勻，用封板膜封好96孔板，室溫孵育2小時。
5) 取下封板膜，用帝肯INFINITE F NANO+酶標儀讀取HTRF信號。用公式Ratio=Signal 665nm/Signal 620nm*10000計算每個單孔的受體和供體激發信號的比率。以HTRF信號比率以及對應的化合物濃度，用GraphPad Prism軟體處理數據，通過S形劑量-反應曲線擬合計算EC50值。測試結果如表1所示。
表1. 測定化合物對hGLP-1R 293Ta細胞環磷酸腺苷水準影響
化合物 測定EC50 pM    化合物 測定EC50 pM
1 11.19    2 6.10
3 11.62    4 5.82
5 34.66    6 3.56
8 55.23    12 10.35
14 15.60    15 32.03
16 6.57    17 21.65
20 2681.00    23 909.30
24 1029.00    25 5.39
28 81.10    30 41.96
31 244.80    32 313.00
33 127.90    44 1512.00
46 11.01    47 117.80
49 944.90    53 262.00
54 32.72    55 1686.00
56 206.50    57 68.49
58 9.40    61 109.60
PF-06882961 31.44    24067 394.9
24068 669.0    24069 1100.0
24070 342.8         
從上表中可以看出，本發明的化合物可啟動hGLP-1R 293Ta細胞中cAMP水準，且比對照化合物PF-06882961、24067、24068、24069和24070的活性更高。
二、藥代動力學（PK）實驗
1.實驗方法
雄性SD大鼠，體重180-320克，試驗前禁食過夜。待測化合物溶解在30%磺丁基-β-環糊精（SBE-β-CD）中，以20 mg/kg單次灌胃給藥。給藥後15 分鐘、30 分鐘和 1、2、4、6、8 及 24小時尾端斷口取血，每時間點約0.3 ml，置於含 K2-EDTA的離心管中，離心處理（2000 g，10 分鐘，4 °C）取血漿，儲存在−70℃至−80℃的超低溫冰箱中。50μL的血漿樣品用135μL乙腈（含內標0.5 μg/mL）渦旋混合進行蛋白沉澱 ，離心，取上清進行LC-MS/MS分析。
2.實驗結果
本發明提供的苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物各化合物在大鼠經口服給藥後，吸收良好，血液暴露量較高，結果見圖1、2和表2。本發明的苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物的T max為0.5-2.67小時，C max為180-2553.33 ng/ml，AUC 0-24h為934.28-9583.02 ng/ml*h。C max是指最大血藥濃度，T 1/2為半衰期，AUC 0-24是指0-24小時時間-濃度曲線下面積，AUC 0-inf是指0-Inf時間-濃度曲線下面積。
表2. 大鼠灌胃給藥（20 mg/kg）藥代動力學參數
   化合物 PK參數
T 1/2(hr) T max(hr) C max(ng/ml) AUC 0-24(hr*ng/mL) AUC 0-inf(hr*ng/mL)
1 4.06 0.5 180 973.96 984.46
2 6.38 0.75 665.5 2377.02 2553.77
3 4.21 0.83 261.33 954.4 962.73
4 3.48 0.5 618 1489.7 1498.13
6 3.89 0.5 384.5 934.28 939.92
12 1.2 1 1139.33 2761.02 2797.66
16 2.54 1 2553.33 9583.02 9595.58
46 3.72 0.5 1255.33 2553.19 2565.2
58 2.77 2.67 1205.33 5977.89 5985.82
PF-06882961 3.74 2.5 99.03 648.77 656.99
三、藥效學實驗
1.實驗方法
基因工程hGLP1R 小鼠，雄性，7周，購於百奧賽圖江蘇基因生物技術有限公司。實驗動物均飼養於水準流獨立通風籠具內，溫度在20-26ºC，相對濕度在40-70% RH，換氣次數為15-30次/小時、空氣潔淨度為7級、晝夜明暗交替時間為12h/12h；持續供給鈷60放射滅菌鼠全價顆粒飼料（廣東省醫學實驗動物中心，大、小鼠維持飼料），不限量自由攝取；飲用自來水（高壓蒸汽滅菌後使用），不間斷供水，自由攝取。飼養籠具是透明的聚醚醯亞胺籠盒（蘇州艾可林淨化設備有限公司，水準流小鼠籠盒），無病原微生物；墊料是玉米芯（廣東省醫學實驗動物中心，高壓蒸汽滅菌後使用），每籠2-5只動物，籠卡上標明IACUC批准號、實驗編號、實驗開始時間、課題負責人、實驗人員、動物來源、組別和動物編號等。本試驗的動物使用方法經由廣州必貝特醫藥技術有限公司IACUC批准。
hGLP1R小鼠口服葡萄糖耐量試驗：動物禁食過夜，不禁水，口服單次給溶媒或相應的化合物，給溶媒或化合物前測血糖（相當於-60min血糖值），給溶媒或化合物60分鐘後口服給葡萄糖（2g/kg），給葡萄糖前測血糖（相當於0min血糖值），給葡萄糖後15min、30min、60min、90min、120min測血糖值。溶媒為40%PEG400+60%MCT(0.5%MC/0.1%Tween80)水溶液，化合物劑量分別為0.3mg/kg(n=2-4)，1mg/kg(n=2-4)。
2. 實驗結果
如圖3和圖4所示，化合物12和化合物16與PF-06882961在同劑量（1mg/kg）單次口服給藥時，從血糖曲線和血糖AUC(0-2h)來看，化合物12與PF-06882961的降糖效果相當；化合物16的降糖效果優於PF-06882961。
如圖5和圖6所示，化合物6和化合物16與PF-06882961在同劑量（0.3mg/kg）單次口服給藥時，從血糖曲線和血糖AUC(0-2h)來看，化合物6比PF-06882961的降糖效果略好；化合物16的降糖效果明顯優於PF-06882961。
如圖7和圖8所示，化合物3、化合物16和化合物58在同劑量（0.3mg/kg）單次口服給藥時，從血糖曲線和血糖AUC(0-2h)來看，化合物16的降糖效果表現最好。
以上所述實施例的各技術特徵可以進行任意的組合，為使描述簡潔，未對以下實施例中的各個技術特徵所有可能的組合都進行描述，然而，只要這些技術特徵的組合不存在矛盾，都應當認為是本說明書記載的範圍。
以上所述實施例僅表達了本發明的幾種實施方式，其描述較為具體和詳細，但並不能因此而理解為對本發明專利範圍的限制。應當指出的是，對於本領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明構思的前提下，還可以做出若干變形和改進，這些都屬於本發明的保護範圍。因此，本發明專利的保護範圍應以所附申請專利範圍為准。
無
圖1為化合物1、2、3、4和化合物6的大鼠灌胃給藥（20 mg/kg）的平均藥時曲線圖。 圖2為化合物PF-06882961、12、16、46和化合物58的大鼠灌胃給藥（20 mg/kg）的平均藥時曲線圖。 圖3為化合物12和化合物16在小鼠葡萄糖耐量試驗的血糖曲線。 圖4為化合物12和化合物16在小鼠葡萄糖耐量試驗的AUC (0-2h)。 圖5為化合物6和化合物16在小鼠葡萄糖耐量試驗的血糖曲線。 圖6化合物6和化合物16在小鼠葡萄糖耐量試驗的AUC (0-2h)。 圖7化合物3、化合物16和化合物58在小鼠葡萄糖耐量試驗的血糖曲線。 圖8化合物3、化合物16和化合物58在小鼠葡萄糖耐量試驗的AUC (0-2h)。
Figure 111122480-A0101-11-0002-3

Claims (26)

  1. 一種如式（I）所示的苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物或者其藥學上可接受的鹽或者其立體異構體：
    Figure 03_image001
    （I） 其中： R 1和R 2分別獨立選自：H，鹵素，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基； R 3和R 4分別獨立選自：H，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基；或者R 3和R 4相連組成3-8元碳環或3-8元雜環； R 5選自：3-8元雜環基取代的C1-C4烷基，5-10元雜芳基取代的C1-C4烷基，C1-C6烷氧基取代的C1-C4烷基；其中，所述R 5中的3-8元雜環基和5-10元雜芳基可以獨立任選的被一個或多個R 10取代； R 6和R 7分別獨立選自：H，C1-C6烷基；或者R 6和R 7一起形成G，G選自=O； 各R 8和R 9分別獨立選自：H，鹵素，C1-C6烷基，C2-C6烯基，C2-C6炔基，C3-C8環烷基，C3-C8環烷基甲基，鹵素取代的C1-C6烷基，羥基取代的C1-C6烷基，C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基，胺基取代的C1-C6烷基, C1-C6烷基胺基取代的C1-C6烷基，芳基，雜芳基，硝基，氰基，-OR，-N(R) 2，-SR，-C(O)OR，-C(O)N(R) 2，-C(O)R，-S(O)R，-S(O) 2R，-S(O) 2N(R) 2，-N(R)C(O)R； R選自：H， C1-C6烷基，C2-C6烯基，C2-C6炔基，C3-C8環烷基，C3-C8環烷基甲基，鹵素取代的C1-C6烷基，羥基取代的C1-C6烷基，C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基，胺基取代的C1-C6烷基, C1-C6烷基胺基取代的C1-C6烷基； n選自：0，1或2； p選自：1或2； m選自：1，2或3； W選自：O，S，NR 10； W 1選自：O，S； Q選自：C，CH，N； X選自：N，CR 10； Y選自：N，CR 11； R 10選自：H，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基； R 11選自：H，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基；或者R 11和R 6相連組成5-8元雜環； Q與相鄰C之間的虛線表示所述Q與相鄰C之間的化學鍵可選單鍵或雙鍵。
  2. 如請求項1所述的苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物或者其藥學上可接受的鹽或者其立體異構體，其特徵在於，具有如下式（II）或者式（III）所示結構：
    Figure 03_image003
    （II）
    Figure 03_image005
    （III）。
  3. 如請求項1所述的苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物或者其藥學上可接受的鹽或者其立體異構體，其特徵在於，具有如下式（IV）或者式（V）所示結構：
    Figure 03_image007
    （IV）
    Figure 03_image009
    （V）。
  4. 如請求項1所述的苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物或者其藥學上可接受的鹽或者其立體異構體，其特徵在於，具有如下式（VI）或者式（VII）所示結構：
    Figure 03_image011
    （VI）
    Figure 03_image013
    （VII）。
  5. 如請求項1所述的苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物或者其藥學上可接受的鹽或者其立體異構體，其特徵在於，W為O，R 6和R 7分別獨立選自：H，C1-C6烷基。
  6. 如請求項1-5中任一項所述的苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物或者其藥學上可接受的鹽或者其立體異構體，其特徵在於，W 1為O。
  7. 如請求項1-5中任一項所述的苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物或者其藥學上可接受的鹽或者其立體異構體，其特徵在於，Q選自：C，CH。
  8. 如請求項1-5中任一項所述的苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物或者其藥學上可接受的鹽或者其立體異構體，其特徵在於，X選自：N，CH。
  9. 如請求項1-5中任一項所述的苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物或者其藥學上可接受的鹽或者其立體異構體，其特徵在於，R 1和R 2分別獨立選自：H，鹵素，C1-C3烷基，C1-C3烷氧基。
  10. 如請求項1-5中任一項所述的苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物或者其藥學上可接受的鹽或者其立體異構體，其特徵在於，R 3和R 4分別獨立選自：H，C1-C3烷基，C1-C3烷氧基。
  11. 如請求項1-5中任一項所述的苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物或者其藥學上可接受的鹽或者其立體異構體，其特徵在於，R 5選自：3-4元雜環基取代的C1-C4烷基，5-6元雜芳基取代的C1-C4烷基，C1-C3烷氧基取代的C1-C4烷基；其中，所述R 5中的3-4元雜環基和5-6元雜芳基可以獨立任選的被一個或多個R 10取代。
  12. 如請求項11所述的苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物或者其藥學上可接受的鹽或者其立體異構體，其特徵在於，R 5選自：3-4元雜環基取代的甲基，3-4元雜環基取代的乙基，5-6元雜芳基取代的甲基，5-6元雜芳基取代的乙基；其中，所述R 5中的3-4元雜環基和5-6元雜芳基可以獨立任選的被一個或多個R 10取代，R 10選自：H、C1-C3烷基。
  13. 如請求項12所述的苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物或者其藥學上可接受的鹽或者其立體異構體，其特徵在於，R 5選自：氧雜環丁烷取代的甲基，氧雜環丁烷取代的乙基，乙基咪唑取代的甲基，乙基咪唑取代的乙基。
  14. 如請求項1-5中任一項所述的苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物或者其藥學上可接受的鹽或者其立體異構體，其特徵在於，R 6和R 7分別獨立選自：H，C1-C3烷基。
  15. 如請求項1-5中任一項所述的苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物或者其藥學上可接受的鹽或者其立體異構體，其特徵在於，各R 8和R 9分別獨立選自：H，鹵素，氰基，C1-C3烷基，鹵素取代的C1-C3烷基。
  16. 如請求項15所述的苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物或者其藥學上可接受的鹽或者其立體異構體，其特徵在於，各R 8分別獨立選自：H，鹵素，C1-C3烷基；各R 9分別獨立選自：H，鹵素，氰基，C1-C3烷基，三氟甲基。
  17. 如請求項16所述的苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物或者其藥學上可接受的鹽或者其立體異構體，其特徵在於，各R 8分別獨立選自：H、Cl、F、甲基；各R 9分別獨立選自：氰基、Cl、甲基。
  18. 如請求項1所述的苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物或者其藥學上可接受的鹽或者其立體異構體，其特徵在於，選自如下化合物：
    Figure 03_image015
    化合物1
    Figure 03_image017
    化合物2
    Figure 03_image019
    化合物3
    Figure 03_image021
    化合物4
    Figure 03_image023
    化合物5
    Figure 03_image025
    化合物6
    Figure 03_image027
    化合物7
    Figure 03_image029
    化合物8
    Figure 03_image031
    化合物9
    Figure 03_image033
    化合物10
    Figure 03_image035
    化合物11
    Figure 03_image037
    化合物12
    Figure 03_image039
    化合物13
    Figure 03_image041
    化合物14
    Figure 03_image043
    化合物15
    Figure 03_image045
    化合物16
    Figure 03_image047
    化合物17
    Figure 03_image049
    化合物18
    Figure 03_image051
    化合物19
    Figure 03_image053
    化合物20
    Figure 03_image055
    化合物21
    Figure 03_image057
    化合物22
    Figure 03_image059
    化合物23
    Figure 03_image061
    化合物24
    Figure 03_image063
    化合物25
    Figure 03_image065
    化合物26
    Figure 03_image067
    化合物27
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    化合物28
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    化合物29
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    化合物30
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    化合物34
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    化合物35             
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    化合物36
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    化合物37
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    化合物39
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    化合物45
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    化合物46
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    化合物48
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    化合物50
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    化合物53
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    化合物54
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    化合物58
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    化合物59
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    化合物60
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    化合物61
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    化合物62
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    化合物63
    Figure 03_image141
    化合物64     。
  19. 請求項1-18中任一項所述的苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物或者其藥學上可接受的鹽或者其立體異構體在製備GLP-1R激動劑中的應用。
  20. 請求項1-18中任一項所述的苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物或者其藥學上可接受的鹽或者其立體異構體在製備用於預防和/或治療與GLP-1R下游信號通路相關的疾病和/或症狀的藥物中的應用。
  21. 如請求項20所述的應用，其特徵在於，與GLP-1R下游信號通路相關的疾病和/或症狀選自：糖尿病，糖尿病視網膜病變，糖尿病性腦血管病變，糖尿病性神經病變，胰島素抵抗，高血糖症，糖尿病性腎病，高血壓，白內障，骨質疏鬆症，高尿酸血症以及糖尿病引起的感染、肥胖症、代謝綜合征、血脂異常、非酒精性脂肪肝病、非酒精性脂肪性肝炎、纖維化、心臟病、中風、肝硬化、肝癌、代謝性酸中毒、酮病、心血管不適、癲癇、動脈粥樣硬化、帕金森氏病和阿爾茲海默病。
  22. 請求項1-18中任一項所述的苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物或者其藥學上可接受的鹽或者其立體異構體在製備促進胰島素分泌的藥物中的應用。
  23. 請求項1-18中任一項所述的苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物或者其藥學上可接受的鹽或者其立體異構體在製備降血糖的藥物中的應用。
  24. 請求項1-18中任一項所述的苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物或者其藥學上可接受的鹽或者其立體異構體在製備預防和/或治療糖尿病的藥物中的應用。
  25. 如請求項24所述的應用，其特徵在於，所述糖尿病為1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病、特發性1型糖尿病、早髮型2型糖尿病、青年人的成年型糖尿病、青少年發作的非典型糖尿病、營養不良相關性糖尿病、成人隱匿性自身免疫性糖尿病。
  26. 一種預防和/或治療糖尿病及其併發症的藥物組合物，其特徵在於，包括活性成分以及藥學上可接受的輔料和/或載體，所述活性成分包括有請求項1-18中任一項所述的苯並咪唑或氮雜苯並咪唑-6-羧酸類化合物或者其藥學上可接受的鹽或者其立體異構體。
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