CN113439739A - 冷冻保存作业辅助治具 - Google Patents

Abstract

本发明的目的在于提供一种冷冻保存作业辅助治具，其能够稳定地保持冷冻保存用治具，盖构件不接触所载置的细胞或组织，能够容易地包裹该细胞或组织，能够迅速地进行在液氮中的浸渍。本发明是一种冷冻保存作业辅助治具，其在基材上至少具有盖构件保持部、具有开口结构的观察部和主体构件保持部，该盖构件保持部、该具有开口结构的观察部和该主体构件保持部配置成大致直线状。

Description

冷冻保存作业辅助治具

技术领域

本发明涉及在细胞或组织的冷冻操作时适合利用的冷冻保存作业辅助治具。

背景技术

在各种产业领域中需要细胞或组织的优异的保存技术。例如，在牛的胚胎移植技术中，将胚胎冷冻保存，与胚胎受体牛的发情周期相应地将胚胎融解，进行移植。另外，在人的***治疗中，从母体采集卵子或卵巢后，为了配合适于移植的时机而预先冷冻保存，在移植时进行融解来使用。

通常，从生物体内采集的细胞或组织即使在培养液中，也会逐渐丧失活性或发生形质的变化，因此不优选在生物体外长期培养细胞或组织。因此，用于在保持生物体活性的状态下长期保存的技术是重要的。通过优异的保存技术，能够更准确地分析所采集的细胞或组织。另外，通过优异的保存技术，能够在保持更高的生物体活性的状态下将细胞或组织用于移植，可期待移植后的着床存活率提高。此外，也可以预先依次生产并保存在生物体外培养的培养皮肤、在生物体外构建的所谓的细胞片那样的用于移植的人工组织，并在必要时使用，不仅在医疗方面，在产业方面也可以期待大的优点。

作为细胞或组织的冷冻保存方法，例如已知缓慢冷冻法。在该方法中，首先，将细胞或组织浸渍在保存液中，该保存液是通过在例如磷酸缓冲生理食盐水等生理溶液中含有抗冻剂而得到的。作为该抗冻剂，可以使用甘油、乙二醇、二甲基亚砜等化合物。将细胞或组织浸渍于该保存液后，以较慢的冷却速度(例如0.3～0.5℃/分钟的速度)冷却至-30～-35℃，由此细胞内外或组织内外的溶液被充分冷却，粘性变高。在这样的状态下，如果将该保存液中的细胞或组织进一步冷却至液氮的温度(-196℃)，则细胞内或组织内和其外的周围的微量溶液均发生玻璃化，该玻璃化是以非晶的状态固化的现象。如果通过玻璃化而引起细胞内外或组织内外固化，则实质上分子的运动消失，因此认为通过将玻璃化后的细胞或组织保存于液氮中，能够半永久地保存。

另外，作为细胞或组织的冷冻保存方法，还已知玻璃化冷冻法。玻璃化冷冻法使用了如下原理：由于包含大量甘油、乙二醇、二甲基亚砜等抗冻剂的保存液的凝固点下降，所以即使在冰点下也难以形成冰晶。如果使该保存液急速地在液氮中冷却，则能够在不产生冰晶的状态下使其固化。将这样固化的情况称为玻璃化冷冻。另外，包含大量抗冻剂的保存液被称为玻璃化液。

在上述缓慢冷冻法中，需要以比较慢的冷却速度进行冷却，因此用于冷冻保存的操作需要时间。另外，存在需要用于控制冷却速度的装置或治具的问题。此外，在上述缓慢冷冻法中，由于在细胞外或组织外的保存液中形成冰晶，所以细胞或组织有可能因为该冰晶而受到物理损害。与此相对，在上述玻璃化冷冻法中，操作的时间为短时间，是不需要特别的装置或治具的工艺。此外，玻璃化冷冻法通过不产生冰晶而得到高存活率。

关于使用了玻璃化冷冻法的细胞或组织的冷冻保存方法，示出了以各种方法使用了各种种类的细胞或组织的例子。例如，在专利文献1中示出了玻璃化冷冻法对动物或人的生殖细胞或体细胞的适用在冷冻保存和融解后的存活率方面极其有用。

玻璃化冷冻法是主要使用人的生殖细胞发展起来的技术，但最近也广泛研究了对iPS细胞、ES细胞的应用。另外，在非专利文献1中示出了玻璃化冷冻法对于果蝇的胚胎的保存是有效的。此外，在专利文献2中示出了玻璃化冷冻法在植物培养细胞、组织的保存中是有效的。这样，已知玻璃化冷冻法在广泛的各种种类的细胞和组织的保存中是有用的。

为了能够实现适当的玻璃化冷冻，已知冷冻速度越快越优选。此外，已知在冷冻保存后的融解工序时，从抑制细胞或组织中再形成冰晶的观点出发，融解速度越快越优选。

通常，作为与玻璃化冷冻法相关的冷冻保存方法，在专利文献3中提出了如下方法：将哺乳动物胚胎或卵子用最少量的足以包裹这些胚胎或卵子的玻璃化液贴附于冷冻吸管、冷冻小瓶或冷冻管等冷冻保存用容器的内表面，使该容器与液氮接触而急速冷却。在该冷冻方法之后进行的融解方法如下：从液氮中取出通过上述方法保存的冷冻保存用容器，使容器的一端部开口，向该容器内注入33～39℃的稀释液，对冷冻的胚胎或卵子进行融解稀释。根据该方法，不存在哺乳动物胚胎或卵子被病毒、细菌污染的风险，能够以高存活率进行保存和融解稀释。然而，在冷冻吸管、冷冻小瓶或冷冻管等冷冻保存用容器的内表面贴附胚胎或卵子的作业的难度高，另外，难以确认将胚胎或卵子可靠地载置于冷冻保存用容器内的情况。此外，在冷冻工序中需要吸管封口机，在融解工序中也需要吸管切割器等，需要特别的器具，成为繁杂的工艺。

在专利文献4中记载了具备具有导热性构件的细胞保持构件和筒状收纳构件的细胞冷冻保存用具，在一定程度上解决了专利文献3的冷冻融解方法中的问题。专利文献4中记载的冷冻保存用具的使用方法具体而言如下。首先，在显微镜下，使卵子附着于细胞保持构件，在将保持构件收纳于筒状收纳构件后，浸渍于液氮而进行玻璃化冷冻。然后，在筒状构件的开口部安装盖构件，在液氮罐内保存。

在专利文献5～7中提出了一种冷冻保存用治具，其能够将细胞或组织与包含大量抗冻剂的保存液一起载置于保存液除去材料上，除去附着于细胞或组织的周围的多余的保存液，以优异的存活率进行冷冻保存。在专利文献5中记载了具有特定雾度值的保存液吸收体，此外，在专利文献6、专利文献7中记载了具有多孔烧结形成体、由具有特定的折射率的原材料形成的多孔结构体作为保存液吸收体的玻璃化冷冻保存用治具。

在上述专利文献5～7中，作为在细胞或组织不与液氮接触的情况下进行冷冻操作的冷冻保存方法，记载了在上述保存液除去材料上滴加附着细胞或组织后，利用盖构件包裹包含该保存液除去材料的条带，由此能够维持无菌状态。另外，在专利文献8中记载了如下冷冻保存方法：将包含将卵子与少量的玻璃化液一起载置的生物体细胞保持部在内的冷冻保存用治具整体收纳于筒状的收纳容器后，浸渍于液氮中，进行玻璃化冷冻。

另一方面，为了提高冷冻保存方法中的冷冻操作的作业性，已知有如专利文献9所记载的在冷冻细胞的前阶段使用的器具。该器具具有槽部，在该槽部中载置冷冻受精卵时使用的平板状的细胞冷冻器具。另外，该槽部可以设为与细胞冷冻器具的握持部的形状对应的形状，在该情况下，细胞冷冻器具的前端在从该器具的端部突出的位置被固定，因此能够一边用透射型显微镜观察，一边进行细胞的滴加附着作业。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特许第3044323号公报

专利文献2：日本特开2008-5846号公报

专利文献3：日本特开2000-189155号公报

专利文献4：日本特许第5798633号公报

专利文献5：日本特开2014-183757号公报

专利文献6：日本特开2015-142523号公报

专利文献7：国际公开第2015/064380号小册子

专利文献8：国际公开第2019/004300号小册子

专利文献9：日本特许第6636202号公报

非专利文献

非专利文献1：Steponkus et al.，Nature 345：170-172(1990)

发明内容

发明要解决的课题

在使用了专利文献4～7中记载的冷冻保存用具或冷冻保存用治具等的冷冻操作中，在利用盖构件包裹载置有细胞或组织的保存液除去材料或细胞保持部的条带的操作时，在使用了专利文献9中记载的器具的情况下，难以在盖构件不与载置于保存液除去材料上或条带上的细胞或组织接触的情况下利用盖构件迅速地包裹它们，要求进行改善。在玻璃化冷冻法中，由于由玻璃化液中所含的高浓度的抗冻剂引起的毒性的问题，重要的是将细胞或组织滴加附着于保存液除去材料、条带上后，迅速地浸渍于液氮中进行冷冻，但上述包裹操作妨碍迅速的冷冻，期望得到改善。

本发明的主要课题在于提供用于在细胞或组织的玻璃化冷冻保存的冷冻操作时实现良好的作业性的冷冻保存作业辅助治具。具体而言，课题在于提供一种冷冻保存作业辅助治具，其在细胞或组织的冷冻保存作业时能够稳定地保持冷冻保存用治具，能够在盖构件不与载置于条带上的细胞或组织接触的情况下容易地包裹细胞或组织，能够迅速地进行在液氮中的浸渍。

用于解决课题的手段

本发明人等为了解决上述课题而进行了深入研究，结果发现，通过具有以下构成的冷冻保存作业辅助治具，能够解决上述课题。

即，本发明是一种冷冻保存作业辅助治具，其特征在于，在基材上至少具有盖构件保持部、具有开口结构的观察部和主体构件保持部，该盖构件保持部、具有开口结构的观察部和主体构件保持部被配置成大致直线状。

发明的效果

根据本发明，能够提供一种冷冻保存作业辅助治具，其在细胞或组织的冷冻保存作业时能够稳定地保持冷冻保存用治具，能够在盖构件不与载置于条带上的细胞或组织接触的情况下容易地包裹该细胞或组织，能够迅速地进行在液氮中的浸渍。

附图说明

图1是表示本发明的冷冻保存作业辅助治具的一例的俯视示意图。

图2是图1的冷冻保存作业辅助治具所具有的盖构件保持部的截面示意图。

图3是图1的冷冻保存作业辅助治具所具有的主体构件保持部的截面示意图。

图4是图1的冷冻保存作业辅助治具所具有的具有开口结构的观察部的截面示意图。

图5是图1的冷冻保存作业辅助治具的长轴方向的截面示意图。

图6是表示本发明的冷冻保存作业辅助治具的另一例的俯视示意图。

图7是图6的冷冻保存作业辅助治具所具有的盖构件保持部的截面示意图。

图8是表示本发明的冷冻保存作业辅助治具的另一例的俯视示意图。

图9是表示本发明的冷冻保存作业辅助治具的另一例的俯视示意图。

图10是表示本发明的冷冻保存作业辅助治具的另一例的俯视示意图。

图11是表示本发明的冷冻保存作业辅助治具的另一例的俯视示意图。

图12是表示本发明的冷冻保存作业辅助治具保持盖构件和主体构件的状态的一例的示意图。

图13是以图12中的虚线Q为切截面，从主体构件保持部3侧朝向盖构件保持部2的方向观察时的截面示意图。

图14是以图12中的虚线S为切截面，从盖构件保持部2侧朝向主体构件保持部3的方向观察时的截面示意图。

图15是以图12中的虚线R为切截面，从主体构件保持部3侧朝向盖构件保持部2的方向观察时的截面示意图。

图16是以图12中的虚线T为切截面的截面示意图。

图17是表示使用本发明的冷冻保存作业辅助治具在冷冻保存用治具的条带上滴加附着细胞或组织时的一例的示意图。

图18是表示使用本发明的冷冻保存作业辅助治具将主体构件与盖构件嵌合·固定时的一例的示意图。

图19是表示使用本发明的冷冻保存作业辅助治具将主体构件与盖构件嵌合·固定时的另一例的示意图。

附图标记说明

1：基材

2：盖构件保持部

3：主体构件保持部

4：具有开口结构的观察部

5：空洞部

6：基准位置指示部

7：条带

8：嵌合结构部

9：握持部

10：主体构件

11：盖构件

12：内腔

13：细胞

14：保存液

15：孔

16：冷冻保存作业辅助治具

具体实施方式

本发明的冷冻保存作业辅助治具用于保持在冷冻保存细胞或组织时使用的冷冻保存用治具。本发明的冷冻保存作业辅助治具优选在通过所谓的玻璃化冷冻保存法将细胞或组织冷冻时适宜使用。在本发明中，细胞不仅包含单一的细胞，还包含由多个细胞构成的生物的细胞群。由多个细胞构成的细胞群可以是由单一种类的细胞构成的细胞群，也可以是由多个种类的细胞构成的细胞群。另外，组织可以是由单一种类的细胞构成的组织，也可以是由多个种类的细胞构成的组织，还可以是除了细胞以外还包含细胞外基质那样的非细胞性的物质的组织。本发明的冷冻保存作业辅助治具能够特别适合用于卵子或胚胎的冷冻保存。

以下，对本发明的冷冻保存作业辅助治具进行详细说明。

本发明的冷冻保存作业辅助治具(以下，也称为“本发明的辅助治具”)能够以可装卸的状态保持冷冻保存用治具所具有的盖构件和主体构件。即，本发明的辅助治具能够保持盖构件与主体构件未嵌合的状态的冷冻保存用治具、或者盖构件与主体构件嵌合而成为一体的状态的冷冻保存用治具。另外，通过使用本发明的辅助治具，能够在盖构件不会与载置于附设于主体构件的条带上的细胞或组织接触的情况下迅速且容易地进行盖构件与主体构件的嵌合作业。

本发明的辅助治具的特征在于，在基材上，盖构件保持部、具有开口结构的观察部(以下，也简称为“观察部”)和主体构件保持部配置成大致直线状。如后所述，盖构件保持部和主体构件保持部需要分别保持冷冻保存用治具的盖构件和主体构件并使其可滑动，因此从图1的视点方向即从上表面观察到的这些区域(盖构件保持部和主体构件保持部)的轮廓形状为具有沿着基材的长轴方向延伸的平行的两边的槽形状(细长的形状)。本发明的辅助治具具有这样的配置形状：具有细长形状的盖构件保持部的区域和具有细长形状的主体构件保持部的区域将具有开口结构的观察部的区域夹在中间而在长轴方向上连接。本发明中的大致直线状的配置是指能够设想沿长轴方向贯穿盖构件保持部的区域内、具有开口结构的观察部的区域内和主体构件保持部的区域内的一条直线(例如，后述的图1中的虚线L)。

如果使用本发明的辅助治具，则能够以稳定的状态保持处于载置细胞或组织之前的状态的冷冻保存用治具(条带未被盖构件被覆，以该条带露出的状态被保持的冷冻保存用治具)。另外，该辅助治具通过具备具有开口结构的观察部，从而能够在显微镜观察下且在良好的可视性下进行使细胞或组织滴加附着于附设于冷冻保存用治具的主体部的条带上的作业。

此外，如果使用本发明的辅助治具，则在附设于主体构件的条带上滴加附着细胞或组织后，使保持于盖构件保持部的盖构件向主体构件保持部的方向滑动，或者使保持于主体构件保持部的主体构件向盖构件保持部的方向滑动，由此能够在盖构件不会与载置于条带上的细胞或组织接触的情况下容易地用盖构件包裹该条带。另外，能够迅速且容易地将盖构件与主体构件嵌合·固定。因此，如果使用本发明的辅助治具，则能够迅速且容易地进行冷冻操作。

以下，根据附图对本发明的辅助治具进一步进行说明。

图1是表示本发明的辅助治具的一例的俯视示意图。在图1中，冷冻保存作业辅助治具16在基材1上呈大致直线状地配置有盖构件保持部2、具有开口结构的观察部4、主体构件保持部3。

图2是图1的冷冻保存作业辅助治具所具有的盖构件保持部的截面示意图。详细而言，是以图1中所示的虚线M为切截面，从主体构件保持部3侧朝向盖构件保持部2的方向观察该切截面时的截面示意图。图2中形成于基材1上的盖构件保持部2具有用于保持未图示的冷冻保存用治具的盖构件的槽部(凹部)。需要说明的是，在包括图2在内的以下说明的截面示意图中，用实线描绘冷冻保存作业辅助治具的切截面的轮廓，用虚线描绘不存在切截面且投影上可见的冷冻保存作业辅助治具的轮廓线。

作为上述槽部的形状(截面形状)，可例示在上方具有开口的半圆、半椭圆和在上方具有开口的各种多边形，但从能够可靠地保持盖构件，另外使盖构件滑动时的作业性的观点出发，优选槽部具有底面和壁面，特别优选长方形或正方形。

在本发明的辅助治具16所具有的盖构件保持部2具有由底面和壁面构成的槽部的情况下，该槽部的底面的宽度相对于成为保持对象的冷冻保存用治具所具有的盖构件的宽度优选为100～150％。若考虑到一般所使用的冷冻保存用治具的大小，槽部的底面的宽度优选为2.3～4.8mm。壁面的高度(槽部的深度)可以根据盖构件的大小适当调整，盖构件保持部2的壁面的高度相对于盖构件的高度优选为10～120％，更优选为20～80％。若考虑到一般所使用的冷冻保存用治具的大小，壁面的高度(槽部的深度)优选为0.2～3.8mm，更优选为0.4～2.6mm。在壁面的高度低于盖构件的高度的10％的情况下，有时难以稳定地保持盖构件。另一方面，在壁面的高度超过盖构件的高度的120％的情况下，在使细胞或组织滴加附着于条带上之后，有时使保持于盖构件保持部2的盖构件沿着壁面向主体构件的方向移动时的作业性降低。

本发明的辅助治具16所具有的盖构件保持部2的长度(长轴方向的长度；例如图5中a3)可以根据成为保持对象的冷冻保存用治具所具有的盖构件的长度(例如，图16中a4)适当调整，优选相对于盖构件的长度为50～150％。更优选为60～100％。若考虑到一般所使用的冷冻保存用治具的大小，盖构件保持部2的长度(长轴方向的长度)优选为22.0～100mm，更优选为26.0～66.0mm。在盖构件保持部2的长度相对于盖构件的长轴方向的长度低于50％的情况下，有时盖构件保持部2难以稳定地保持盖构件。另一方面，在盖构件保持部2的长度相对于盖构件的长轴方向的长度超过150％的情况下，有时盖构件保持部2难以始终在相同的位置保持盖构件而使作业性降低。

图3是图1的冷冻保存作业辅助治具所具有的主体构件保持部的截面示意图。需要说明的是，图3是以图1中的虚线N为切截面，从主体构件保持部3侧朝向盖构件保持部2的方向观察时的截面示意图。形成于基材1上的主体构件保持部3具有用于保持未图示的冷冻保存用治具的主体构件(详细而言为主体构件所具有的握持部)的槽部。

在图3中，主体构件保持部3具有能够稳定地保持冷冻保存用治具所具有的主体构件的槽部。该主体构件保持部3能够根据主体构件所具有的握持部的截面形状而设定为任意的形状。如后所述，握持部的截面形状优选为长方形或正方形，在该情况下，优选该槽部具有由底面和壁面构成的槽部。该槽部的底面的宽度相对于主体构件所具有的握持部的宽度优选为100～150％。若考虑到一般所使用的冷冻保存用治具的大小，该槽部的底面的宽度优选为2.4～4.9mm。由此，能够容易地进行盖构件和主体构件的嵌合作业。

在本发明的辅助治具16所具有的主体构件保持部3具有由底面和壁面构成的槽部的情况下，壁面的高度可以根据成为保持对象的冷冻保存用治具所具有的主体构件的大小适当调整，优选相对于主体构件所具有的握持部的高度为10～120％。更优选为50～100％。若考虑到一般所使用的冷冻保存用治具的大小，该壁面的高度优选为0.2～4.0mm，更优选为1.1～3.3mm。在壁面的高度低于握持部的高度的10％的情况下，有时主体构件保持部3难以稳定地保持主体构件。另一方面，在壁面的高度超过握持部的高度的120％的情况下，有时在从本发明的辅助治具16中取出冷冻保存用治具时壁面造成干扰而使作业性降低。

在本发明中，主体构件保持部3的长轴方向的长度可以根据成为保持对象的冷冻保存用治具所具有的主体构件的长轴方向的长度适当调整，相对于主体构件的能够握持的部分的长轴方向的长度(将后述的嵌合结构部和握持部合在一起的长轴方向的长度)优选为30～150％。更优选为40～70％。若考虑到一般所使用的冷冻保存用治具的大小，该长轴方向的长度优选为26.0～160mm，更优选为34.0～71.0mm。在主体构件保持部3的长度相对于主体构件的能够握持的部分的长轴方向的长度低于30％的情况下，有时难以稳定地保持主体构件。另一方面，在超过150％的情况下，有时在主体构件保持部3中难以始终在相同的位置保持主体构件而使作业性降低。

图4是图1的冷冻保存作业辅助治具所具有的具有开口结构的观察部的截面示意图。需要说明的是，图4是以图1中的虚线O为切截面，从主体构件保持部3侧朝向盖构件保持部2的方向观察时的截面示意图。具有开口结构的观察部4具有贯通基材1而开口的结构。

本发明的辅助治具所具有的观察部4具有开口结构。通过观察部4具有开口结构，例如在冷冻操作中将细胞或组织滴加附着于条带上时，在使用具有下部光源的透射型显微镜观察细胞或组织的情况下(以下，也简记为“显微镜观察下”)，来自光源的观察光(平行光)不会散射，能够以良好的可视性观察细胞或组织。另外，在使用具有上部光源的透射型显微镜的情况下，由于在目镜与观察对象的条带之间不存在其他物质，所以能够以良好的可视性观察细胞或组织。

如图4所示，图1的结构的冷冻保存作业辅助治具16所具有的观察部4在切截面仅存在壁面，其全部区域成为开口部。在这样的结构的情况下，观察部的宽度(图1中的a1)需要与盖构件的宽度(在图1中，与虚线L垂直的方向的盖构件的尺寸，例如后述的图13中的a2)、主体构件的宽度(例如后述的图14中的握持部9的宽度)相同或者更宽。如果观察部的宽度比盖构件的宽度、主体构件的宽度更窄，则在使盖构件、主体构件滑动移动时，盖构件、主体构件无法通过观察部内，无法将盖构件嵌合于主体构件。另一方面，如果观察部的宽度过宽，则在使盖构件滑动移动时，有时盖构件的行进方向容易与主体构件的方向偏离，作业性降低，因此观察部的宽度优选为盖构件的宽度的2倍以下。若考虑到一般所使用的冷冻保存用治具的大小，观察部的宽度优选为6.4mm以下。另外，如果虚线L的方向上的观察部的长度接近盖构件的长度(例如后述的图16中的a4)，则在使盖构件滑动移动时，盖构件可能从观察部的开口部掉落，因此在确保显微镜观察下的视野的基础上，优选观察部的长度为盖构件的长度的80％以下。若考虑到一般所使用的冷冻保存用治具的大小，观察部的长度优选为53mm以下。为了消除这样的限制，关于设为将盖构件保持部2和主体保持部3的壁面和底面连续的结构并在其中设置有具有开口结构的观察部的结构的本发明的优选例，使用图8等在后面进行叙述。

图5是图1所示的冷冻保存作业辅助治具的长轴方向的截面示意图，是以图1中的虚线L为切截面的截面示意图。在图1中，盖构件保持部2的底面与主体构件保持部3的底面为相同高度的面。在这样的情况下，通过使盖构件或主体构件中的至少一方沿着底面移动，能够容易地进行盖构件和主体构件的嵌合作业，是优选的。

在本发明中，冷冻保存作业辅助治具16所具有的盖构件保持部2的端部(与主体构件保持部3侧相反侧的端部)优选不开口而封闭。在此，封闭是指在使保持于盖构件保持部的盖构件沿着壁面滑动移动时，无法超过该端部地移动的结构。如果盖构件保持部2的端部封闭，例如通过使盖构件沿着该封闭部，从而容易使保持盖构件的位置和具有开口结构的观察部4的位置始终处于相同的位置。从减轻对作业人员的作业负担的观点出发，优选这样设计的冷冻保存作业辅助治具16。

接下来，根据附图对本发明的辅助治具的另一方式进一步进行说明。

图6是表示本发明的辅助治具的另一例的俯视示意图。上述图1～图5所示的冷冻保存作业辅助治具16通过对基材1形成槽部(凹部)而得到盖构件保持部2和主体构件保持部3，与此相对，图6所示的冷冻保存作业辅助治具16通过具有平行地配置有基板1的2列的壁(凸部)，从而得到盖构件保持部2和主体构件保持部3。另外，图6也是盖构件保持部2的壁面的高度与主体构件保持部3的壁面的高度为相同高度的冷冻保存作业辅助治具的例子。

图7是图6的冷冻保存作业辅助治具所具有的盖构件保持部的截面示意图，是以图6中的虚线P为切截面，从具有开口结构的观察部4侧朝向盖构件保持部2的方向观察时的截面示意图。图7所示的冷冻保存作业辅助治具16为了保持未图示的冷冻保存用治具，通过在基材1上形成2列的凸部，从而得到盖构件保持部2和主体构件保持部3。

图8是表示图1所示的本发明的辅助治具的变形例的俯视示意图。详细而言，图8的冷冻保存作业辅助治具16在基材1上呈大致直线状地配置有盖构件保持部2、具有开口结构的观察部4、主体构件保持部3。上述观察部4的宽度(与使盖构件沿着壁面朝向主体构件水平移动的方向垂直的方向的长度)比盖构件保持部2和主体构件保持部3的宽度更窄，并且该盖构件保持部2和主体构件保持部3的壁面和底面具有连续的结构。该结构也可以说是具有开口结构的观察部4在开口部的周围具有底面的结构。具有这样的结构的冷冻保存作业辅助治具16的盖构件的一端不会落入该观察部4的开口部，能够提高使未图示的冷冻保存用治具的盖构件或主体构件滑动移动时的作业性。观察部4的宽度优选比盖构件的宽度(图13中的a2)更窄，优选为50～98％。若考虑到一般所使用的冷冻保存用治具的大小，观察部4的宽度优选为3.2mm以下，更优选为1.6～3.1mm。在观察部4的宽度相对于盖构件的宽度低于50％的情况下，有时显微镜观察下的视野变窄，无法得到良好的观察性。另一方面，在观察部4的宽度相对于盖构件的宽度超过98％的情况下，有时发生在使盖构件滑动移动时盖构件的端部进入观察部4的开口部等作业性降低。另外，对于观察部4的长度，由于在开口部的周围存在底面而使盖构件的一端不会落入观察部4的开口部，因此只要能够确保显微镜观察下的视野就没有限制。

图9是表示本发明的辅助治具的另一例的俯视示意图。图9所示的冷冻保存作业辅助治具16具有在基材1上呈大致直线状地配置有盖构件保持部2、具有开口结构的观察部4、主体构件保持部3的结构，在主体构件保持部3的一部分具有空洞部5。空洞部5具有贯通基材1并开口的结构。主体构件保持部3被空洞部5划分成2个部位。通过设为这样的结构，在将未图示的冷冻保存用治具滴加附着于细胞或组织后，在握持握持部而取出冷冻保存用治具时，作业人员的手不会干扰主体构件保持部3所具有的壁面，因此能够容易地取出嵌合·固定有盖构件的冷冻保存用治具。

图10是表示本发明的辅助治具的另一例的俯视示意图。图10所示的冷冻保存作业辅助治具16在与具有开口结构的观察部4相邻的基材1上具有基准位置指示部6。该基准位置指示部6只要在与具有开口结构的观察部4相邻的至少一侧的基材1上具有即可，更优选在与观察部4相邻的基材1上的两侧具有。如果以主体构件所具有的条带(特别是条带上的载置细胞或组织的载置部分)接近该基准位置指示部6的方式载置主体构件，则作业人员能够容易地识别将细胞或组织与保存液一起滴加附着的位置，能够进一步提高冷冻操作的作业性。

作为上述基准位置指示部6，例如可以例示基于标记的线、基于凹凸结构的线。

图11是表示本发明的辅助治具的另一例的俯视示意图。图11所示的冷冻保存作业辅助治具16除了用于在基材1上保持未图示的冷冻保存用治具的盖构件保持部2、具有开口结构的观察部4和主体构件保持部3以外，还具有多个孔15。通过像这样冷冻保存作业辅助治具具有多个孔15，从而例如在该孔15中贮留平衡化液、玻璃化液的情况下，在进行玻璃化冷冻的细胞或组织的平衡化处理、该平衡化处理结束后的细胞或组织在玻璃化液中的浸渍后，能够快速地进行向冷冻保存用治具的滴加附着的操作，能够更迅速地进行玻璃化冷冻保存的冷冻操作。

作为形成本发明的辅助治具的基材，可以优选使用铝、铁、铜、不锈钢合金等各种金属；ABS树脂、丙烯酸系树脂、聚丙烯树脂、聚苯乙烯树脂、聚乙烯树脂、聚碳酸酯树脂、氟系树脂、各种工程塑料；此外，可以优选使用玻璃、橡胶原材料等。特别是如果使用总透光率为80％以上的透光性基材，则例如在细胞或组织误附着于冷冻保存作业辅助治具上时，能够一边利用透射型显微镜进行观察，一边确定该细胞或组织的位置并回收，是优选的。作为这样的透光性基材，可例示ABS树脂、丙烯酸系树脂、聚丙烯树脂、聚苯乙烯树脂、聚乙烯树脂、氟树脂、玻璃等。

在本发明的辅助治具中，优选在配置成大致直线状的盖构件保持部、具有开口结构的观察部和主体构件保持部所具有的各个底面之间不存在阶差。如后所述，在使用本发明的辅助治具进行冷冻保存作业的情况下，在主体构件所具有的条带上载置细胞或组织后，例如使盖构件向主体构件侧滑动，由此将盖构件与主体构件嵌合(或者也可以进行与其相反的过程)。这时，在盖构件保持部、具有开口结构的观察部和主体构件保持部所具有的各个底面间不存在阶差的情况下，能够得到良好的作业性。另外，优选在盖构件保持部、具有开口结构的观察部和主体构件保持部所优选具有的各个壁面间也不存在阶差。

需要说明的是，出于调整盖构件、主体构件的滑动程度的目的，可以对该底面和该壁面实施粗糙化处理，或者也可以具有与使盖构件、主体构件滑动的方向平行的槽结构(凹结构)。

接下来，对使用了本发明的辅助治具的冷冻保存方法进行详细说明。

本发明的辅助治具可以适合用于细胞或组织的玻璃化冷冻保存法的冷冻操作时。通常，在利用所谓的玻璃化冷冻保存法保存细胞或组织时，使用具有条片状的条带的冷冻保存用治具来进行冷冻保存。这样的冷冻保存用治具除了上述专利文献4～8以外，还公开在日本特开2002-315573号公报、日本特开2006-271395号公报和国际公开第2011/070973号小册子等中。

作为使用了本发明的辅助治具的玻璃化冷冻保存法的冷冻操作，第一，在将细胞或组织与保存液一起滴加附着于条带上的作业之前，在将冷冻保存用治具所具有的盖构件与主体构件分离的状态下，将盖构件载置于冷冻保存作业辅助治具上的盖构件保持部，将主体构件载置于主体构件保持部。

图12是表示本发明的辅助治具保持冷冻保存用治具的盖构件和主体构件的状态的一例的示意图。作为一个方式，本例中使用的冷冻保存用治具的主体构件10具备条带7、用于嵌合上述盖构件的嵌合结构部8和握持部9。冷冻保存作业辅助治具16所具有的盖构件保持部2保持盖构件11。另外，主体构件保持部3保持主体构件10的握持部9(也可以保持嵌合结构部8的一部分)。主体构件10所具有的条带7位于具有开口结构的观察部4的上方，载置于条带7上的细胞或组织可以利用未图示的显微镜进行观察。

接下来，使进行了平衡化处理的细胞或组织与保存液一起滴加附着于附设于冷冻保存用治具的主体部的条带7上。该作业优选在透射型显微镜下进行。此时，如果冷冻保存用治具所具有的条带7具有保存液吸收体，则能够有效地除去多余的保存液，因此优选。另外，条带7具有保存液吸收体时，能够进一步减少存在于细胞或组织的周围的保存液，能够得到高的冷冻速度和融解速度，因此优选。

图13是以图12中的虚线Q为切截面，从主体构件保持部3侧朝向盖构件保持部2的方向观察时的截面示意图。图13所示的盖构件保持部2保持有具有圆柱形状的内腔12的四棱柱形状的盖构件11。

图14是以图12中的虚线S为切截面，从盖构件保持部2侧朝向主体构件保持部3的方向观察时的截面示意图。图14所示的主体构件保持部3保持有四棱柱形状的握持部9。

图15是以图12中的虚线R为切截面，从主体构件保持部3侧朝向盖构件保持部2的方向观察时的截面示意图。主体构件所具有的条带7位于图15所示的具有开口结构的观察部4的上方。具有开口结构的观察部4的宽度相对于条带7的宽度稍大，因此在用透射型显微镜观察时，能够清楚地观察条带的宽度方向整体。另外，由于滴加附着细胞或组织的条带7不与基材1接触，所以异物、杂菌不会附着于条带7，能够保持条带7的清洁性。

图16是以图12中的虚线T为切截面的截面示意图。如图16所示，冷冻保存作业辅助治具16具有盖构件保持部2、具有开口结构的观察部4、主体构件保持部3，盖构件保持部2保持盖构件11，主体构件保持部3保持主体构件10。需要说明的是，盖构件保持部2的端部(与观察部4相反侧的端部)封闭，该封闭部分的表面形状优选为沿着盖构件11的前端部的形状的形状。由此，容易将盖构件始终保持在相同的位置。主体构件10以主体构件10所具有的条带7位于具有开口结构的观察部4的上方的方式载置。另外，如图16所示，如果在载置细胞或组织之前预先将条带7的前端稍微***盖构件11的内腔，则将冷冻保存用治具的盖构件11与主体构件10嵌合·固定时的作业性提高，是优选的。这时，如上述图12、图16所示，例如具有着色为黑色的前端部的条带7是优选的。另外，如果主体构件10的长轴方向的长度比主体构件保持部3的长轴方向的长度更长，则主体构件10所具有的握持部9的一端被保持在从冷冻保存作业辅助治具16的端部突出的位置。在该情况下，例如即使作业人员佩戴手套等保护用具，也能够容易地从辅助治具16取下冷冻保存用治具，能够高效地进行该冷冻保存用治具在液氮中的浸渍，是优选的。

图17是表示使用本发明的辅助治具在冷冻保存用治具的条带上滴加附着细胞或组织时的一例的示意图。如图17所示，盖构件11和主体构件10以未嵌合的状态保持在冷冻保存作业辅助治具16上，细胞13和保存液14载置于主体构件10所具有的条带7上。在条带7上载置细胞13和保存液14的作业优选在显微镜观察下进行。基准位置指示部6对用于使作业人员容易地视觉辨认应滴加附着细胞13和保存液14的位置是有用的。

然后，载置有细胞13和保存液14的条带7被盖构件11包裹，并且盖构件11嵌合·固定于主体构件10。

作为嵌合、固定时的一例，例示出使保持于盖构件保持部2的盖构件11沿着槽部的壁面向主体构件保持部3的方向滑动来进行嵌合·固定的方法。图18是表示使用本发明的辅助治具，通过上述方法将主体构件与盖构件嵌合·固定时的一例的示意图。

或者，也可以使保持于主体构件保持部3的主体构件10向盖构件保持部2的方向滑动移动而包裹条带7。图19是表示使用本发明的辅助治具，通过上述方法将主体构件与盖构件嵌合·固定时的另一例的示意图。

如上述那样将嵌合·固定有主体构件和盖构件的冷冻保存用治具从冷冻保存作业辅助治具取出后，将该冷冻保存用治具的盖构件侧浸渍于液氮中，载置于条带上的细胞或组织被冷却·冷冻。此时，被密闭的条带上的细胞或组织在不与液氮接触的情况下被冷却。

从将细胞或组织与保存液一起载置于条带之后起，经过将主体构件与盖构件嵌合·固定的工序，直至将细胞或组织浸渍于液氮中为止的时间优选为大致1分钟以内，更优选为30秒以内，如果使用本发明的辅助治具，则能够迅速地进行在液氮中的浸渍。

如上述那样冷冻的细胞或组织在维持其玻璃化冷冻状态的状态下，在通过液氮等保持了极低温的低温保存容器中被保持冷却。

以上，对使用了本发明的辅助治具的冷冻保存方法进行了说明。接下来，对由本发明的辅助治具保持的冷冻保存用治具的优选例进行说明。

如上述图12所示，该冷冻保存用治具具有主体构件10和盖构件11。该冷冻保存用治具所具有的主体构件10具有条带7、嵌合结构部8和握持部9。

主体构件10所具有的条带7优选为条片状。如果为条片状，则容易将该条带7收纳于盖构件11，是优选的。

在本发明中，作为冷冻保存用治具所具有的条带7，例如可举出各种树脂膜、金属板、玻璃板、橡胶板等。条带7可以由1种原材料构成，也可以由2种以上的原材料构成。其中，从处理的观点考虑，优选使用树脂膜。作为树脂膜的具体例，可举出包含聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚萘二甲酸乙二醇酯等聚酯树脂、丙烯酸系树脂、环氧树脂、硅树脂、聚碳酸酯树脂、二乙酸酯树脂、三乙酸酯树脂、聚丙烯酸酯树脂、聚氯乙烯树脂、聚砜树脂、聚醚砜树脂、聚酰亚胺树脂、聚酰胺树脂、聚烯烃树脂、环状聚烯烃树脂等的树脂膜。另外，如果条带7的总透光率为80％以上，则能够使用透射型显微镜容易地确认载置于条带的细胞或组织，因此优选。

另外，作为上述条带7，也可以使用保存液吸收体。如果在条带7中使用保存液吸收体，则能够有效地除去多余的保存液，因此冷冻速度提高。作为保存液吸收体，例如可例示金属网、纸等、由合成树脂形成且具有贯通孔的膜状物。作为其他保存液吸收体，可例示出使用折射率为1.45以下的原材料所形成的多孔结构体。通过该多孔结构体，能够有效地除去存在于细胞或组织的周围的保存液。另外，通过使该多孔结构体的折射率为1.45以下，从而在透射型的光学显微镜观察下，能够以良好的可视性容易且可靠地进行载置细胞或组织并冷冻的操作以及在冷冻后融解的操作。

上述多孔结构体的原材料的折射率例如可以使用阿贝折射计(Na光源，波长：589nm)，依据JIS K 0062：1992、JIS K 7142：2014进行测定。作为形成多孔结构体的折射率为1.45以下的原材料，可举出聚四氟乙烯树脂、聚偏二氟乙烯树脂、聚三氟氯乙烯树脂等氟树脂、硅树脂那样的塑料树脂材料；二氧化硅那样的金属氧化物材料；氟化钠、氟化镁、氟化钙那样的无机材料。

基于多孔结构体的保存液吸收体的细孔径优选为5.5μm以下，更优选为1.0μm以下，进一步优选为0.75μm以下。由此，能够提高光学显微镜观察下的细胞或组织的可视性。保存液吸收体的厚度优选为10～500μm，更优选为25～150μm。需要说明的是，在塑料树脂材料的多孔结构体的情况下，保存液吸收体的细孔径是通过起泡点试验测定的最大细孔的直径。另外，在金属氧化物或无机材料的多孔结构体的情况下，是由该多孔结构体的表面和截面的图像观察测定的平均细孔直径。

保存液吸收体的空隙率优选为30％以上，更优选为70％以上。空隙率由下式定义。在此，空隙体积V可以通过将使用水银孔隙率计(测定器名称Autopore II 9220制造者lnicromeritics instrument corporation)测定·处理的保存液吸收体中的细孔半径3nm～400nm的累积细孔容积(ml/g)乘以保存液吸收体的干燥固体成分量(g/平方米)，作为每单位面积(平方米)的数值求出。另外，保存液吸收体的厚度T可以通过利用电子显微镜拍摄保存液吸收体的截面并进行长度测量而得到。

P＝(V/T)×100(％)

P：空隙率(％)

V：空隙体积(ml/m²)

T：厚度(μm)

在本发明中，冷冻保存用治具所具有的盖构件11例如可以使用各种树脂、金属等对液氮等冷却溶剂具有耐性的原材料来形成。盖构件可以由1种原材料形成，也可以由2种以上的原材料形成。其中，树脂通过注射成型等工艺能够容易地形成任意的结构，因此优选。作为树脂的具体例，可举出包含聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚萘二甲酸乙二醇酯等聚酯树脂、丙烯酸系树脂、环氧树脂、硅树脂、聚碳酸酯树脂、二乙酸酯树脂、三乙酸酯树脂、聚丙烯酸酯树脂、聚氯乙烯树脂、聚砜树脂、聚醚砜树脂、聚酰亚胺树脂、聚酰胺树脂、聚烯烃树脂、环状聚烯烃树脂等的树脂。另外，如果盖构件的总透光率为80％以上，则在嵌合盖构件后，能够容易地确认盖内部的条带的情况，因此优选。

在本发明中，冷冻保存用治具所具有的主体构件10具有握持部9。作为握持部9的截面形状，例示出圆、椭圆以及各种多边形，但从握持的容易度、操作性的观点出发，优选为长方形或正方形。握持部9优选为由对液氮等冷却溶剂具有耐性的原材料形成的构件。作为这样的原材料，例如可以优选使用铝、铁、铜、不锈钢等各种金属、ABS树脂、丙烯酸系树脂、聚丙烯树脂、聚乙烯树脂、氟树脂、各种工程塑料以及玻璃等。

在本发明中，冷冻保存用治具所具有的主体构件10优选具有嵌合结构部8。嵌合结构部8是用于将盖构件10与主体构件11嵌合·固定的结构，可以优选具有锥形结构、螺纹切削结构。

在本发明中，在将细胞或组织冷冻的情况下，保存液可以使用通常用于卵子、胚胎等细胞的冷冻的保存液，例如可以使用在磷酸缓冲生理食盐水等生理溶液中含有抗冻剂(甘油、乙二醇等)的保存液、大量(至少相对于保存液的总质量为10质量％以上，更优选为20质量％以上)含有甘油、乙二醇、二甲基亚砜等各种抗冻剂的保存液。另外，在融解的情况下，关于融解液，也可以使用通常为了卵子、胚胎等细胞的融解而使用的融解液，例如，可以使用为了调整渗透压而在上述磷酸缓冲生理食盐水等生理溶液中含有1M的蔗糖的融解液。

在本发明中，作为冷冻保存的细胞，例如可举出哺乳类(例如人(人类)、牛、猪、马、兔、大鼠、小鼠等)的卵子、胚胎、***等生殖细胞；诱导多能干细胞(iPS细胞)、胚胎干细胞(ES细胞)等多能性干细胞。另外，可举出原代培养细胞、传代培养细胞和细胞株细胞等培养细胞。另外，在一个或多个实施方式中，细胞可举出成纤维细胞、胰腺癌·肝癌细胞等来自于癌的细胞；上皮细胞、血管内皮细胞、***内皮细胞、神经细胞、软骨细胞、组织干细胞和免疫细胞等粘附性细胞。此外，作为能够冷冻保存的组织，可举出由同种或异种的细胞构成的组织，例如卵巢、皮肤、角膜上皮、牙周膜、心肌等组织。

实施例

以下，通过实施例更详细地示出本发明，具体地说明本发明，但本发明不限于以下的实施例。

(实施例1)

使用总透光率为85％的聚碳酸酯树脂，通过切削加工，制作图1所示的具有盖构件保持部2、主体构件保持部3和具有开口结构的观察部4的冷冻保存作业辅助治具16。关于基材1的尺寸[纵×横×高度(厚度)]，从左端至右方向(横向)80mm为止(包含盖构件保持部2和具有开口结构的观察部4的范围)为23mm×80mm×3mm，其右侧(形成有主体构件保持部3的范围)为23mm×90mm×4mm。盖构件保持部2的宽度×长度×深度为3.2mm×35mm×1mm。主体构件保持部3的宽度×长度×深度为3.2mm×90mm×2mm。具有开口结构的观察部4的宽度×长度为5mm×40mm。需要说明的是，盖构件保持部2所具有的底面和主体构件保持部3所具有的底面距离基材1的底面的高度(厚度)均为2mm。另外，盖构件保持部2所具有的槽部的一个一端(图中左侧)被封闭。

(实施例2)

使基材1的整体的高度均匀，作为整体，将纵×横×高度设为23mm×170mm×3mm，将主体构件保持部3所具有的槽部的深度变更为1mm，除此以外，与实施例1同样地操作，制作实施例2的冷冻保存作业辅助治具。盖构件保持部2所具有的底面和主体构件保持部3所具有的底面距离基材1的底面的高度(厚度)均为2mm。

(实施例3)

使用聚碳酸酯树脂，通过切削加工制作图8所示的具有盖构件保持部2、主体构件保持部3和具有开口结构的观察部4的冷冻保存作业辅助治具。关于基材1的尺寸[纵×横×高度(厚度)]，从左端至右方向(横向)80mm为止(形成有盖构件保持部2和具有开口结构的观察部4的范围)为23mm×80mm×3mm，其右侧(形成有主体构件保持部3的范围)为23mm×90mm×4mm。盖构件保持部2所具有的槽部的宽度×长度×深度为3.2mm×35mm×1mm，主体构件保持部3所具有的槽部的宽度×长度×深度为3.2mm×90mm×2mm，具有开口结构的观察部4的开口部的宽度×长度为2.8mm×40mm。具有开口结构的观察部4为在开口部的周围具有底面的结构，开口部的宽度比盖构件保持部2和主体保持部3的宽度更窄。此外，该盖构件保持部2、具有开口结构的观察部4和主体保持部3具有壁面和底面连续且没有阶差的结构。

(实施例4)

将基材1的右侧部分的纵×横×高度设为23mm×45mm×4mm，将主体构件保持部3所具有的槽的长度设为45mm，除此以外，与实施例3同样地操作，制作实施例4的冷冻保存作业辅助治具。

<冷冻保存用治具的保持情况的评价>

对于实施例1～4的冷冻保存作业辅助治具，为了评价冷冻保存用治具的保持情况，制作图12所示的具有盖构件11和主体构件10的冷冻保存用治具。该冷冻保存用治具所具有的盖构件11由ABS树脂制作，盖构件11的截面的外形为4边的长度均为3.1mm的正方形，长轴方向的长度为45mm，在一个端面具有圆形的开口部和与其连续的圆柱形状的内腔12。该冷冻保存用治具所具有的主体构件10的截面的外形为4边的长度均为3.1mm的正方形，具有长轴方向的长度为85mm的四棱柱形状的握持部9、长度为10mm的圆锥台形状的嵌合结构部8、以及条片状(宽度1.5mm、长度20mm、厚度190μm)的条带7。握持部9和嵌合结构部8由ABS树脂制作，并与由聚对苯二甲酸乙二醇酯树脂膜制作的条带7接合，由此制作主体构件10。使用上述冷冻保存用治具，将冷冻保存用治具的盖构件11和主体构件10分别载置于实施例1～4的冷冻保存作业辅助治具所具有的盖构件保持部2和主体构件保持部3而保持，作为冷冻保存用治具的保持情况的评价，按照以下基准评价此时的稳定性。将其结果示于表1的“保持性”一项。

○：能够稳定地保持冷冻保存用治具。

△：能够保持冷冻保存用治具，但存在主体构件稍微不稳定的情况。

<条带的包裹操作的作业性>

对于实施例1～4的冷冻保存作业辅助治具，评价了用盖构件11包裹冷冻保存用治具的主体构件10所具有的条带的操作时的作业性。将如上述那样得到的冷冻保存用治具的盖构件11和主体构件10分别沿着盖构件11的圆形开口部侧与主体构件10的条带7侧相面对的方向载置于实施例1～4的冷冻保存作业辅助治具所具有的盖构件保持部2和主体构件保持部3，在透射型显微镜下，使平衡化处理后的小鼠8细胞期胚胎与保存液0.1μL一起分别滴加附着于该主体构件10所具有的条带7上。需要说明的是，保存液使用在Sigma-Aldrich公司制Medium199培养基中包含15容积％二甲基亚砜、15容积％乙二醇、17质量％蔗糖的组成的保存液。接下来，使保持于盖构件保持部2的盖构件11沿着槽部的壁面向主体构件保持部3的方向滑动，包裹条带7，将盖构件11与主体构件10嵌合·固定。按照以下基准评价此时的作业性。将其结果示于表1的“包裹操作的作业性”一项。

○：盖构件不与载置于条带上的细胞或组织接触，能够顺利地进行嵌合·固定作业。

△：使盖构件滑动而嵌合的作业稍微繁杂，但固定作业能够无障碍地进行。

<液氮浸渍时的作业性>

对于实施例1～4的冷冻保存作业辅助治具，在进行上述“条带的包裹操作的作业性”的评价之后，将冷冻保存用治具从冷冻保存作业辅助治具中取出，按照以下基准评价液氮浸渍时的作业性。需要说明的是，作业人员佩戴保护用具(手套)。将其结果示于表1的“液氮浸渍时的作业性”一项。

○：能够顺利地取出冷冻保存用治具，能够迅速地进行在液氮中的浸渍。

△：取出冷冻保存用治具时的作业稍微繁杂，但浸渍于液氮的一系列作业能够无障碍地进行。

【表1】

由上述试验结果可知，根据本发明，能够提供一种冷冻保存作业辅助治具，其在细胞或组织的冷冻保存作业时能够稳定地保持冷冻保存用治具，盖构件不接触载置于条带上的细胞或组织，能够容易地包裹该细胞或组织，能够迅速地进行在液氮中的浸渍。

产业上的可利用性

本发明除了牛等家畜、动物的胚胎移植、人工授精、对人的人工授精等以外，还能够用于iPS细胞、ES细胞、通常使用的培养细胞、从包含胚胎或卵子的生物体采集的检查用或移植用的细胞或组织、在生物体外培养的细胞或组织等的冷冻保存。

Claims (3)

1.一种冷冻保存作业辅助治具，其特征在于，在基材上至少具有盖构件保持部、具有开口结构的观察部和主体构件保持部，该盖构件保持部、该具有开口结构的观察部和主体构件保持部配置成大致直线状。

2.根据权利要求1所述的冷冻保存作业辅助治具，其中，所述盖构件保持部和所述主体构件保持部由设置于基材上的槽部形成。

3.根据权利要求1所述的冷冻保存作业辅助治具，其中，所述盖构件保持部和所述主体构件保持部由配置于基材上的2列的凸部形成。

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