CN113438953A

CN113438953A - 采用高度唾液酸化IgG组合物的治疗

Info

Publication number: CN113438953A
Application number: CN201980082700.0A
Authority: CN
Inventors: S·阿罗约; W·丹尼
Original assignee: Momenta Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Momenta Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2018-10-11
Filing date: 2019-10-11
Publication date: 2021-09-24
Also published as: AU2019357842A1; WO2020077298A1; KR20210077706A; WO2020077298A9; BR112021006852A2; EP3863673A1; EP3863673A4; CA3115821A1; MA53875A; US20210353752A1; JP2022502466A; IL282136A

Abstract

本发明描述了包含高度唾液酸化IgG制剂的组合物以及使用此类制剂治疗患者的方法。本申请部分地基于以下令人惊讶的发现：剂量为IVIG的有效剂量的约1％至10％的高度唾液酸化IgG(hsIgG)制剂可有效治疗用IVIG治疗的疾病。

Description

采用高度唾液酸化IgG组合物的治疗

优先权要求

本申请要求提交于2018年10月11日的美国临时申请序列号62/744,536和提交于2019年7月29日的美国临时申请序列号62/879,930的权益。上述临时申请的全部内容以引用方式并入本文。

背景技术

静脉注射免疫球蛋白(IVIg或IVIG；CAS号：9007-83-4)是可商购获得的治疗产品(例如，

和

)，主要由人免疫球蛋白G(IgG)构成。IVIG由许多健康供体的混合血浆制备，从而确保IgG库中的多样性超过单个供体的多样性。静脉注射免疫球蛋白用于治疗多种慢性自身免疫性和全身炎性病状。自身免疫性适应症包括特发性血小板减少性紫癜(ITP)、川崎病、格-巴二氏综合征和其他自身免疫性神经病、重症肌无力、皮肌炎和若干罕见病。IVIg的确切作用机制尚不清楚。各种研究已记载了调节先天性和适应性免疫***(4,6)的组分的一系列非相互排斥的机制。例如，IVIG已被证实能通过其对树突状细胞、自然杀伤细胞、调节性T细胞、B细胞和单核细胞/巨噬细胞***的作用以及通过其对可溶性因子(诸如炎性细胞因子、趋化因子和病原性自身抗体)的抑制或中和来介导抗炎反应。

发明内容

本申请部分地基于以下令人惊讶的发现：剂量为IVIG的有效剂量的约1％至10％的高度唾液酸化IgG(hsIgG)制剂可有效治疗用IVIG治疗的疾病。高度唾液酸化IgG制剂可由IVIG制备。因此，类似于IVIG，它包含预期存在于人血清中的IgG亚类和多种抗体的异质混合物。当由IVIG制备hsIgG时，大量供体确保Ig库中的多样性。

高度唾液酸化IgG(hsIgG)制剂是其中IgG抗体上的支链聚糖的至少60％在α1,3分支和α1,6分支两者上具有通过NeuAc-α2,6-Gal末端键连接的唾液酸(即，被唾液酸化)的IgG制剂。换句话说，支链聚糖的至少60％在每个分支上具有唾液酸，并且该唾液酸为NeuAc并通过α2,6键连接到Gal。IgG抗体在Fc结构域的位置N297处具有糖基化位点，并且在高度唾液酸化IgG制剂中，IgG抗体的Fc结构域上的支链聚糖的至少60％在α1,3分支和α1,6分支两者上具有通过NeuAc-α2,6-Gal末端键连接的唾液酸。IgG抗体还可在Fab区上具有支链聚糖，并且这些支链聚糖的至少50％在α1,3分支和α1,6分支两者上具有通过NeuAc-α2,6-Gal末端键连接的唾液酸。

当由IVIG制备时，hsIgG制剂也可称为高度唾液酸化IVIG或超唾液酸化IVG制剂(hsIVIG)。

在一些实施方案中，用于本文所述方法中的hsIgG制剂包含IgG，其中IgG上的支链聚糖的至少60％(70％、75％、80％、85％、90％或95％)在α1,3分支和α1,6分支两者上具有唾液酸。在一些实施方案中，IgG上的Fc聚糖的至少65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％在α1,3分支和α1,6分支两者上具有唾液酸。在一些实施方案中，IgG上的Fab支链聚糖的至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％或85％在α1,3分支和α1,6分支两者上具有唾液酸。在一些情况下，IgG上的支链聚糖的至少80％在α1,3分支和α1,6分支两者上具有唾液酸。在一些实施方案中，IgG上的Fc聚糖的至少85％在α1,3分支和α1,6分支两者上具有唾液酸。在一些实施方案中，IgG上的Fab支链聚糖的至少60％在α1,3分支和α1,6分支两者上具有唾液酸。

在一些实施方案中，hsIgG制剂中的蛋白质的至少90％、92％、93％、94％或95％w/w是IgG。

在一些实施方案中，本发明涉及一种用于治疗疾病的方法，该方法包括以IVIG的有效剂量的1％至10％的剂量向受试者施用包含hsIgG制剂的组合物。在一些实施方案中，IVIG的有效剂量为400mg/kg、500mg/kg、600mg/kg、1000mg/kg或2000mg/kg。在一些实施方案中，包含hsIgG制剂的组合物以约2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、55mg/kg、60mg/kg、65mg/kg、70mg/kg、75mg/kg、80mg/kg、85mg/kg、90mg/kg、95mg/kg、100mg/kg、105mg/kg、110mg/kg、115mg/kg、120mg/kg、125mg/kg、130mg/kg、135mg/kg、140mg/kg、145mg/kg、150mg/kg、155mg/kg、160mg/kg、165mg/kg、170mg/kg、175mg/kg、180mg/kg、185mg/kg、190mg/kg、195mg/kg或200mg/kg、250mg/kg、300mg/kg、350mg/kg、400mg/kg、450mg/kg、500mg/kg、550mg/kg、600mg/kg、650mg/kg、700mg/kg、750mg/kg、800mg/kg、850mg/kg、900mg/kg、950mg/kg、975mg/kg或1000mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，包含hsIgG制剂的组合物每天、每周、每半周、每两周、每月、每半月、每两月、每3天、每4天、每5天、每6天、每7天施用，每14天施用一次，每21天施用一次，每28天施用一次，在28天周期内连续两天每天施用一次，或以与FDA批准的IVIG剂量相同的施用频率施用。在一些情况下，hsIgG制剂的施用频率通常低于IVIG的有效施用频率或批准施用频率。在一些实施方案中，将包含hsIgG制剂的组合物静脉内、皮下或肌内施用。在一些实施方案中，组合物以单剂量施用。在一些实施方案中，组合物以多剂量施用。

在一些实施方案中，疾病为炎性疾病。在一些实施方案中，受试者患有抗体缺乏症。在一些实施方案中，受试者患有一抗缺乏症。在一些实施方案中，疾病与自身抗体的存在相关联。

在一些实施方案中，疾病为神经病。在一些实施方案中，神经病选自由以下项组成的组：皮肌炎、格-巴二氏综合征、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病(CIDP)、多灶性运动神经病(MMN)、重症肌无力和僵人综合征。

在一些实施方案中，疾病选自由以下项组成的组：免疫性血细胞减少症、细小病毒B19相关红细胞再生障碍、继发于骨髓瘤和慢性淋巴细胞白血病的低丙种球蛋白血症以及骨髓移植后。

在一些实施方案中，疾病选自由以下项组成的组：血管炎、***性红斑狼疮(SLE)、粘膜类天疱疮和葡萄膜炎，并且在皮肤病学中，该方法最常用于治疗川崎综合征、皮肌炎、中毒性表皮坏死松解症和水疱病。

在一些实施方案中，疾病经FDA批准用IVIG治疗。在一些实施方案中，剂量为用于疾病的FDA批准的IVIG剂量的1％至10％(例如，1％至10％、1％至9％、1％至8％、1％至7％、1％至6％、1％至5％、1％至4％、1％至3％、1％至2％、2％至10％、2％至9％、2％至8％、2％至7％、2％至6％、2％至5％、2％至4％、2％至3％、3％至10％、3％至9％、3％至8％、3％至7％、3％至6％、3％至5％、3％至4％、1％至2％、3％、2％或1％)。在一些实施方案中，IVIG的FDA批准剂量为200mg/kg、400mg/kg、500mg/kg、600mg/kg、1000mg/kg或2000mg/kg。在一些实施方案中，包含hsIgG制剂的组合物以约2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、55mg/kg、60mg/kg、65mg/kg、70mg/kg、75mg/kg、80mg/kg、85mg/kg、90mg/kg、95mg/kg、100mg/kg、105mg/kg、110mg/kg、115mg/kg、120mg/kg、125mg/kg、130mg/kg、135mg/kg、140mg/kg、145mg/kg、150mg/kg、155mg/kg、160mg/kg、165mg/kg、170mg/kg、175mg/kg、180mg/kg、185mg/kg、190mg/kg、195mg/kg或200mg/kg、250mg/kg、300mg/kg、350mg/kg、400mg/kg、450mg/kg、500mg/kg、550mg/kg、600mg/kg、650mg/kg、700mg/kg、750mg/kg、800mg/kg、850mg/kg、900mg/kg、950mg/kg、975mg/kg或1000mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，包含hsIgG制剂的组合物每天、每周、每半周、每两周、每月、每半月、每两月、每3天、每4天、每5天、每6天、每7天施用，每14天施用一次，每21天施用一次，每28天施用一次，在28天周期内连续两天每天施用一次，或以与FDA批准的IVIG剂量相同的施用频率施用。在一些实施方案中，将包含hsIgG制剂的组合物静脉内、皮下或肌内施用。在一些实施方案中，组合物以单剂量施用。在一些实施方案中，组合物以多剂量施用。

在一些实施方案中，疾病选自由以下项组成的组：

心肌炎

急性运动性轴索型神经病

痛性肥胖症

抗肾小球基底膜肾炎；古德巴斯捷氏综合征

抗磷脂综合征(APS、APLS)

抗合成酶综合征；肌炎，ILD

共济失调性神经病(急性和慢性)

自身免疫性肠病(AIE)

自身免疫性中性粒细胞减少症

自身免疫性视网膜病

自身免疫性甲状腺炎

自身免疫性荨麻疹

疱疹样皮炎

获得性大疱性表皮松解症

原发性混合型冷球蛋白血症

肉芽肿性多血管炎(GPA)

混合性***病(MCTD)

神经性肌强直

视神经炎

副肿瘤性小脑变性

抗N-甲基-D-天冬氨酸(抗NMDA)受体脑炎

自身免疫性溶血性贫血

自身免疫性血小板减少性紫癜

慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病

皮肌炎

妊娠性类天疱疮

格雷夫斯病

格-巴二氏综合征

IgG4相关性疾病

兰伯特-伊顿肌无力综合征

狼疮性肾炎

肌炎

多灶性运动神经病

重症肌无力

视神经脊髓炎

寻常型天疱疮

多肌炎，以及

***性红斑狼疮(SLE)。

在一些实施方案中，疾病选自由以下项组成的组：

急性播散性脑脊髓炎(ADEM)

自身免疫性血管性水肿(II型获得性血管性水肿)

自身免疫性肝炎(I型和II型)

自身免疫性垂体炎；淋巴细胞性垂体炎

自身免疫性内耳病(AIED)

伊文氏综合征

格雷夫斯眼病

桥本脑病

IgA血管炎(IgAV)

隐匿性自身免疫性肝炎

线状IgA病(LAD)

狼疮性血管炎

膜性肾小球肾炎

显微镜下多血管炎(MPA)

莫伦氏溃疡

硬斑病

眼阵挛-肌阵挛综合征

奥德氏甲状腺炎

复发性风湿病

副肿瘤性眼阵挛-肌阵挛-共济失调伴神经母细胞瘤

链球菌相关性儿童自身免疫性神经精神疾病(PANDAS)

心包切开术后综合征

原发性胆汁性肝硬化(PBC)

拉斯穆森脑炎

类风湿血管炎

施尼茨勒综合征

西登哈姆舞蹈病

未分化***病(UCTD)，以及

米勒费雪综合征。

在一些实施方案中，组合物包含hsIgG制剂，其中Fab结构域上的支链聚糖的至少60％在α1,3臂和α1,6臂两者上具有通过NeuAc-α2,6-Gal末端键连接的唾液酸；并且Fc结构域上的支链聚糖的至少60％在α1,3臂和α1,6臂两者上具有通过NeuAc-α2,6-Gal末端键连接的唾液酸。

本文公开了一种治疗患有CIDP的受试者的CIDP的方法，该方法包括以IVIG的有效剂量的10％或小于10％的剂量施用hsIgG制剂。在一些实施方案中，IVIG的有效剂量为200mg/kg至2000mg/kg。在一些实施方案中，hsIgG制剂以IVIG的有效剂量的10％的剂量施用。在一些实施方案中，hsIgG制剂以IVIG的有效剂量的1％至10％、1％至9％、1％至8％、1％至7％、1％至6％、1％至5％、1％至4％、1％至3％、1％至2％或1％的剂量施用。在一些实施方案中，hsIgG制剂以约2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、55mg/kg、60mg/kg、65mg/kg、70mg/kg、75mg/kg、80mg/kg、85mg/kg、90mg/kg、95mg/kg、100mg/kg、105mg/kg、110mg/kg、115mg/kg、120mg/kg、125mg/kg、130mg/kg、135mg/kg、140mg/kg、145mg/kg、150mg/kg、155mg/kg、160mg/kg、165mg/kg、170mg/kg、175mg/kg、180mg/kg、185mg/kg、190mg/kg、195mg/kg或200mg/kg的剂量施用。

本文公开了一种治疗患有ITP的受试者的ITP的方法，该方法包括以IVIG的有效剂量的10％或小于10％的剂量施用hsIgG制剂。在一些实施方案中，IVIG的有效剂量为1000mg/kg至2000mg/kg。在一些实施方案中，hsIgG制剂以IVIG的有效剂量的10％的剂量施用。在一些实施方案中，hsIgG制剂以IVIG的有效剂量的1％至10％、1％至9％、1％至8％、1％至7％、1％至6％、1％至5％、1％至4％、1％至3％、1％至2％、2％至10％、2％至9％、2％至8％、2％至7％、2％至6％、2％至5％、2％至4％、2％至3％、3％至10％、3％至9％、3％至8％、3％至7％、3％至6％、3％至5％、3％至4％、1％至2％、2％或1％的剂量施用。在一些实施方案中，hsIgG制剂以约2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、55mg/kg、60mg/kg、65mg/kg、70mg/kg、75mg/kg、80mg/kg、85mg/kg、90mg/kg、95mg/kg、100mg/kg、105mg/kg、110mg/kg、115mg/kg、120mg/kg、125mg/kg、130mg/kg、135mg/kg、140mg/kg、145mg/kg、150mg/kg、155mg/kg、160mg/kg、165mg/kg、170mg/kg、175mg/kg、180mg/kg、185mg/kg、190mg/kg、195mg/kg或200mg/kg的剂量施用。

本文公开了一种治疗患有wAIHA的受试者的wAIHA的方法，该方法包括以IVIG的有效剂量的10％或小于10％的剂量施用hsIgG制剂。在一些实施方案中，IVIG的有效剂量为1000mg/kg。在一些实施方案中，hsIgG制剂以IVIG的有效剂量的1％至10％、1％至9％、1％至8％、1％至7％、1％至6％、1％至5％、1％至4％、1％至3％、1％至2％、2％至10％、2％至9％、2％至8％、2％至7％、2％至6％、2％至5％、2％至4％、2％至3％、3％至10％、3％至9％、3％至8％、3％至7％、3％至6％、3％至5％、3％至4％、1％至2％、2％或1％的剂量施用。在一些实施方案中，hsIgG制剂以IVIG的有效剂量的1％的剂量施用。在一些实施方案中，hsIgG制剂以约2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、55mg/kg、60mg/kg、65mg/kg、70mg/kg、75mg/kg、80mg/kg、85mg/kg、90mg/kg、95mg/kg、100mg/kg、105mg/kg、110mg/kg、115mg/kg、120mg/kg、125mg/kg、130mg/kg、135mg/kg、140mg/kg、145mg/kg、150mg/kg、155mg/kg、160mg/kg、165mg/kg、170mg/kg、175mg/kg、180mg/kg、185mg/kg、190mg/kg、195mg/kg或200mg/kg的剂量施用。

本文公开了一种治疗患有格-巴二氏综合征的受试者的格-巴二氏综合征的方法，该方法包括以IVIG的有效剂量的10％的剂量施用hsIgG制剂。在一些实施方案中，IVIG的有效剂量为1000mg/kg至2000mg/kg。在一些实施方案中，hsIgG制剂以IVIG的有效剂量的小于10％的剂量施用。在一些实施方案中，hsIgG制剂以IVIG的有效剂量的1％至10％、1％至9％、1％至8％、1％至7％、1％至6％、1％至5％、1％至4％、1％至3％、1％至2％、2％至10％、2％至9％、2％至8％、2％至7％、2％至6％、2％至5％、2％至4％、2％至3％、3％至10％、3％至9％、3％至8％、3％至7％、3％至6％、3％至5％、3％至4％、1％至2％、2％或1％的剂量施用。在一些实施方案中，hsIgG制剂以约2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、55mg/kg、60mg/kg、65mg/kg、70mg/kg、75mg/kg、80mg/kg、85mg/kg、90mg/kg、95mg/kg、100mg/kg、105mg/kg、110mg/kg、115mg/kg、120mg/kg、125mg/kg、130mg/kg、135mg/kg、140mg/kg、145mg/kg、150mg/kg、155mg/kg、160mg/kg、165mg/kg、170mg/kg、175mg/kg、180mg/kg、185mg/kg、190mg/kg、195mg/kg或200mg/kg的剂量施用。

本文公开了一种治疗患有PID(原发性体液免疫缺陷病)的受试者的PID的方法，该方法包括以IVIG的有效剂量的10％或小于10％的剂量施用hsIgG制剂。在一些实施方案中，IVIG的有效剂量为200mg/kg至800mg/kg。在一些实施方案中，hsIgG制剂以IVIG的有效剂量的1％至10％、1％至9％、1％至8％、1％至7％、1％至6％、1％至5％、1％至4％、1％至3％、1％至2％、2％至10％、2％至9％、2％至8％、2％至7％、2％至6％、2％至5％、2％至4％、2％至3％、3％至10％、3％至9％、3％至8％、3％至7％、3％至6％、3％至5％、3％至4％、1％至2％、2％或1％的剂量施用。在一些实施方案中，hsIgG制剂以IVIG的有效剂量的1％的剂量施用。在一些实施方案中，hsIgG制剂以约2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、55mg/kg、60mg/kg、65mg/kg、70mg/kg、75mg/kg、80mg/kg、85mg/kg、90mg/kg、95mg/kg、100mg/kg、105mg/kg、110mg/kg、115mg/kg、120mg/kg、125mg/kg、130mg/kg、135mg/kg、140mg/kg、145mg/kg、150mg/kg、155mg/kg、160mg/kg、165mg/kg、170mg/kg、175mg/kg、180mg/kg、185mg/kg、190mg/kg、195mg/kg或200mg/kg的剂量施用。

本文公开了一种治疗患有川崎病的受试者的川崎病的方法，该方法包括以IVIG的有效剂量的10％或小于10％的剂量施用hsIgG制剂。在一些实施方案中，IVIG的有效剂量为1000mg/kg至2000mg/kg。在一些实施方案中，hsIgG制剂以IVIG的有效剂量的1％至10％、1％至9％、1％至8％、1％至7％、1％至6％、1％至5％、1％至4％、1％至3％、1％至2％、2％至10％、2％至9％、2％至8％、2％至7％、2％至6％、2％至5％、2％至4％、2％至3％、3％至10％、3％至9％、3％至8％、3％至7％、3％至6％、3％至5％、3％至4％、1％至2％、2％或1％的剂量施用。在一些实施方案中，hsIgG制剂以IVIG的有效剂量的1％的剂量施用。在一些实施方案中，hsIgG制剂以约2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、55mg/kg、60mg/kg、65mg/kg、70mg/kg、75mg/kg、80mg/kg、85mg/kg、90mg/kg、95mg/kg、100mg/kg、105mg/kg、110mg/kg、115mg/kg、120mg/kg、125mg/kg、130mg/kg、135mg/kg、140mg/kg、145mg/kg、150mg/kg、155mg/kg、160mg/kg、165mg/kg、170mg/kg、175mg/kg、180mg/kg、185mg/kg、190mg/kg、195mg/kg或200mg/kg的剂量施用。

在一些实施方案中，以IVIG的有效剂量的1％至10％、1％至9％、1％至8％、1％至7％、1％至6％、1％至5％、1％至4％、1％至3％、1％至2％、2％至10％、2％至9％、2％至8％、2％至7％、2％至6％、2％至5％、2％至4％、2％至3％、3％至10％、3％至9％、3％至8％、3％至7％、3％至6％、3％至5％、3％至4％、1％至2％、2％或1％的剂量施用包含hsIgG制剂的组合物具有与施用包含有效剂量的IVIG的组合物相似的功效。

在一些实施方案中，通过以IVIG的有效剂量的1％至10％的剂量施用hsIgG制剂来减轻归因于有效剂量的IVIG的至少一种副作用。在一些实施方案中，与有效剂量的IVIG相比，施用包含hsIgG制剂的组合物导致以下副作用中的一种或多种副作用的严重程度或时间的减少：肿胀、疼痛、肢体变色、呼吸短促、快速脉搏/心动过速、肢体或身体一侧麻木或虚弱、棕色或红色尿、眼睛或皮肤发黄、发烧超过100°F、头晕、肌肉痉挛、恶心、呕吐、肌痛和低血压。

如本文所用，“聚糖”是糖，其可以是糖残基的单体或聚合物，诸如至少三种糖，并且可以是直链或支链的。“聚糖”可包括天然糖残基(例如，葡萄糖、N-乙酰葡糖胺、N-乙酰神经氨酸、半乳糖、甘露糖、岩藻糖、己糖、***糖、核糖、木糖等)和/或改性糖(例如，2'-氟核糖、2'-脱氧核糖、磷酸甘露糖、6'磺基N-乙酰葡糖胺等)。术语“聚糖”包括糖残基的均聚物和杂聚物。术语“聚糖”还涵盖糖缀合物(例如糖蛋白、糖脂、蛋白聚糖等)的聚糖组分。该术语还涵盖游离聚糖，包括已从糖缀合物裂解或以其他方式释放的聚糖。

如本文所用，术语“Fc区”是指两个“Fc多肽”的二聚体，每个“Fc多肽”包含除第一恒定区免疫球蛋白结构域之外的抗体恒定区。在一些实施方案中，“Fc区”包括通过一个或多个二硫键、化学接头或肽接头连接的两个Fc多肽。“Fc多肽”是指IgA、IgD和IgG的最后两个恒定区免疫球蛋白结构域，以及IgE和IgM的最后三个恒定区免疫球蛋白结构域，并且还可包括这些结构域的柔性铰链N-末端的部分或全部。对于IgG，“Fc多肽”包含免疫球蛋白结构域Cgamma2(Cγ2)和Cgamma3(Cγ3)以及Cgamma1(Cγ1)与Cγ2之间的铰链的下部。虽然Fc多肽的边界可以变化，但通常将人IgG重链Fc多肽定义为包含从T223或C226或P230开始至其羧基末端的残基，其中根据如Kabat等人(1991,NIH Publication 91-3242,NationalTechnical Information Services,Springfield,VA)的EU索引进行编号。对于IgA，Fc多肽包含免疫球蛋白结构域Calpha2(Cα2)和Calpha3(Cα3)以及Calpha1(Cα1)与Cα2之间的铰链的下部。Fc区可以是合成的、重组的或由天然来源诸如IVIG生成。

如本文所用，“Fc区的N-糖基化位点”是指聚糖与之N-连接的Fc区内的氨基酸残基。

对于任何给定的参数，在一些实施方案中，“百分比”是指特定聚糖(聚糖X)相对于制剂的聚糖总摩尔数的摩尔数。在一些情况下，该百分比可通过确定PNGase F释放的Fc聚糖X相对于PNGase F释放的Fc聚糖总摩尔数的摩尔数来评估。

所谓“纯化的”(或“分离的”)是指核酸序列(例如，多核苷酸)或氨基酸序列(例如，多肽)从其天然环境中存在的其他组分去除或分离。例如，分离的多肽是与产生其的细胞的其他组分(例如，内质网或细胞质蛋白和RNA)分离的多肽。分离的多核苷酸是与其他核组分(例如，组蛋白)和/或与上游或下游核酸序列分离的多核苷酸。分离的核酸序列或氨基酸序列可至少60％不含、或至少75％不含、或至少90％不含、或至少95％不含所指出的核酸序列或氨基酸序列的天然环境中存在的其他组分。

如本文所用，术语“ST6唾液酸转移酶”是指其氨基酸序列包含涉及将唾液酸通过α2,6键转移到聚糖的末端半乳糖上的蛋白质(例如，ST6Gal-I)的至少一个特征序列并且/或者显示出与该蛋白质至少100％、99％、98％、97％、96％、95％、94％、93％、92％、91％、90％同一性的多肽。多种ST6唾液酸转移酶序列是本领域已知的，诸如本文所述的那些；在一些实施方案中，ST6唾液酸转移酶与本文示出的ST6唾液酸转移酶中的一种唾液酸转移酶(其每一者均可视为“参考”ST6唾液酸转移酶)共享至少一个特征序列和/或显示出与所述一种唾液酸转移酶的指定程度的总体序列同一性。在一些实施方案中，如本文所述的ST6唾液酸转移酶与参考ST6唾液酸转移酶共享至少一种生物活性，如本文所示。在一些此类实施方案中，共享的生物活性涉及唾液酸向聚糖的转移。用于制备hsIgG的合适ST6唾液酸转移酶是人ST6Gal，其可在CHO细胞中表达。

N-连接糖基化

将N-连接的低聚糖链添加至内质网的腔中的蛋白质(参见Molecular Biology ofthe Cell,Garland Publishing,Inc.(Alberts等人，1994年))。具体地，将初始低聚糖(通常为14-糖)添加至Asn-X-Ser/Thr的靶共有序列内包含的天冬酰胺残基的侧链上的氨基，其中X可以是除脯氨酸之外的任何氨基酸。该初始低聚糖的结构是大多数真核生物共有的，并且含有3个葡萄糖残基、9个甘露糖残基和2个N-乙酰葡糖胺残基。该初始低聚糖链可被内质网中的特定糖苷酶修剪，从而得到由两个N-乙酰葡糖胺残基和三个甘露糖残基(如图1所示，连接到天冬酰胺残基)构成的短支链核心低聚糖。分支之一在本领域中被称为“α1,3臂”，并且第二分支被称为“α1,6臂”，如图1所示。

N-聚糖可细分成被称为“高甘露糖型”、“杂合型”和“复杂型”的三个不同组，其中在所有三个组中出现共同的五糖核心(Man(α1,6)-(Man(α1,3))-Man(β1,4)-GlcpNAc(β1,4)-GlcpNAc(β1,N)-Asn)。

在内质网中进行初始加工后，糖蛋白被转运到高尔基体，在此可进行进一步加工。如果在将聚糖完全修剪成核心五糖结构之前将聚糖转移到高尔基体，则得到“高甘露糖聚糖”。

除此之外或另选地，可将N-乙酰葡糖胺的一个或多个单糖单元添加至核心甘露糖亚基以形成“复杂聚糖”。可将半乳糖添加至N-乙酰葡糖胺亚基，并且可将唾液酸亚基添加至半乳糖亚基，从而得到以唾液酸、半乳糖或N-乙酰葡糖胺残基中的任一者封端的链。另外，可将岩藻糖残基添加至核心低聚糖的N-乙酰葡糖胺残基。这些添加中的每一者均由本领域已知的特定糖基转移酶催化。

唾液酸是具有杂环结构的9碳单糖家族。它们经由连接到环的羧酸基团以及包括N-乙酰基和N-乙醇酰基基团在内的其他化学修饰而带有负电荷。存在于哺乳动物表达***中产生的糖蛋白中的唾液酸残基的两种主要类型是N-乙酰神经氨酸(NeuAc)和N-羟乙酰神经氨酸(NeuGc)。它们通常作为在N-连接的聚糖和O-连接的聚糖两者的非还原末端处附接到半乳糖(Gal)残基的末端结构出现。这些唾液酸基团的糖苷键构型可为α2,3或α2,6。

“杂合聚糖”包含高甘露糖和复杂聚糖两者的特征。例如，杂合聚糖的一个分支可主要包含或仅包含甘露糖残基，而另一个分支可包含N-乙酰葡糖胺、唾液酸和/或半乳糖。

当提及IVIG的有效剂量的特定百分比时，指定百分比是指±5mg/kg的范围。因此，1,000mg/kg剂量的10％为1000mg/kg±5％，并且1,000mg/kg剂量的5％为50mg/kg±5％。

抗体在免疫球蛋白重链的Fc区中的保守N-连接糖基化位点处被糖基化。例如，IgG抗体的每条重链在CH2结构域的Asn297处具有单个N-连接的糖基化位点(参见Jefferis,Nature Reviews 8:226-234(2009))。IgA抗体在CH2和CH3结构域内具有N-连接的糖基化位点，IgE抗体在CH3结构域内具有N-连接的糖基化位点，并且IgM抗体在CH1、CH2、CH3和CH4结构域内具有N-连接的糖基化位点(参见Arnold等人，J.Biol.Chem.280:29080-29087(2005)；Mattu等人，J.Biol.Chem.273:2260-2272(1998)；Nettleton等人，Int.Arch.Allergy Immunol.107:328-329(1995))。

每种抗体同种型在恒定区中具有不同种类的N-连接的碳水化合物结构。例如，IgG在Fc区的每个Fc多肽中的CH2结构域的Asn297处具有单个N-连接的双触角碳水化合物，其还包含C1q和FcγR的结合位点(参见Jefferis等人，Immunol.Rev.163:59-76(1998)以及Wright等人，Trends Biotech 15:26-32(1997))。对于人IgG，核心低聚糖通常由具有不同数目的外部残基的GlcNAc2Man3GlcNAc组成。各个IgG之间的差异可经由半乳糖和/或半乳糖-唾液酸在一个或两个末端GlcNAc处的连接或经由第三GlcNAc臂的连接(平分GlcNAc)和/或岩藻糖的连接而发生。

除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。本文描述了用于本发明的方法和材料；也可使用本领域已知的其他合适的方法和材料。另外，材料、方法和示例仅为例示性的，而非旨在进行限制。本文提到的所有出版物、专利申请、专利、序列、数据库条目及其他参考文献均全文以引用方式并入。若有矛盾，应以本说明书及其定义为准。

根据如下具体实施方式和附图以及权利要求书，本发明的其他特征和优点将显而易见。

附图说明

图1是通过NeuAc-α2,6-Gal末端键在α1,3臂和α1,6臂两者上唾液酸化的支链聚糖的示例的示意图。

图2是用于制备hsIgG的方法的示意图。起始底物可为IVIG或其一部分。

图3是ST6Gal1对支链聚糖的唾液酸化的示意图。

图4是示出在CMP-NANA和ST6Gal1的存在下IVIg Fc糖型比例的时间进程的曲线图。将半乳糖基化IVIg与20mM CMP-NANA和0.3U/mg ST6Gal1在37℃下温育。在不同时间点取出等分试样，并通过糖肽LC-MS/MS分析测定IVIg糖型的相对比例。

图5A和图5B示出了鼠ITP模型中的IVIG剂量–反应分析的结果(ns，不显著。*P<0.05；**P<0.01；***P<0.001)。

图6示出了比较ITP的鼠模型中的0.1g/kg hsIgG与0.1g/kg和1g/kg IVIg的治疗给药的研究结果。

图7示出了具有ITP的人类患者中hsIgG和IVIG的比较结果。

具体实施方式

本公开涉及使用hsIgG制剂进行治疗的方法。hsIgG制剂是包含IgG抗体(例如，由IVIG制备)的混合物的制剂，其中支链聚糖的至少60％被二唾液酸化，即，在α1,3臂(例如，具有NeuAc-α2,6-Gal末端键)和α1,6臂(例如，具有NeuAc-α2,6-Gal末端键)上具有唾液酸。

本文所公开的hsIgG制剂可用于治疗用IVIG治疗的疾病。重要的是，hsIgG制剂比IVIG有效得多，从而允许以低得多的剂量和/或不太频繁的治疗进行有效治疗。例如，如本文所示，hsIgG制剂的效能可以是IVIG的10倍至100倍，从而允许以有效或批准的IVIG剂量的1％至10％的剂量进行治疗。

目前利用IVIG的治疗具有明显的局限性，包括但不限于不同的功效、临床风险、高成本和有限的供应。在当前的最大给药方案中，在许多情况下仅获得部分且持续性差的响应。此外，与高体积IVIg治疗(IVIG通常以1,000mg/kg至2,000mg/kg给药)相关联的长输注时间(4h至6h)会消耗输注中心的大量资源，并且不利地影响患者报告的结果，诸如便利性和生活质量。

由于hsIgG制剂比IVIG有效得多，因此其可提供更短的输注时间、施用的蛋白质的量低得多，并且在一些情况下，施用频率更低。为此，与用IVIG治疗相比，hsIgG制剂可提供大大改善的患者体验和更高的生活质量。在一些情况下，必须用静脉内施用IVIG治疗的病状可以用皮下施用(注射或输注)hsIgG治疗，例如使用皮下泵，从而允许患者在家中施用。此外，有效剂量的hsIgG可由比有效剂量的IVIG所需量低得多的量的IVIG制备。这是一个重要的优点，因为IVIG的供应有限且昂贵。

唾液酸化水平可基于单个Fc区测量(例如，在Fc区中的支链聚糖的α1,3臂、α1,6臂或两者上具有唾液酸的支链聚糖数量)，或基于糖蛋白制剂的总体组成测量(例如，在糖蛋白制剂的Fc区中的支链聚糖的α1,3臂、α1,6臂或两者上具有唾液酸的支链聚糖的数量或百分比)。

唾液酸化IgG制备方法

如Washburn等人(Proc Natl Acad Sci 112(11):E1297-306)中所述，ST6 GalI唾液酸转移酶催化唾液酸从唾液酸供体(例如胞苷5'-单磷酸-N-乙酰神经氨酸)通过α2,6键以有序方式转移到聚糖的末端半乳糖残基。ST6唾液酸转移酶将唾液酸转移到支链聚糖的α1,3臂，之后可将第二唾液酸转移到α1,6臂(从而产生二唾液酸化支链聚糖)，并且之后还可从α1,3臂去除唾液酸(从而产生在α1,6臂上具有唾液酸的支链聚糖)。因此，通过控制和/或调节ST6唾液酸转移酶的活性(例如，动力学)，可制备具有特定唾液酸化模式的糖蛋白。

用于制备hsIgG的方法在例如Washburn等人和US 2016/0108450中有所描述，所述文献据此以引用方式并入。ST6Gal-1唾液酸转移酶的缺失突变体(Engel等人，BMCProceedings 7(增刊6):P110,2013)也可用于制备hsIgG。

无法有意义地增加Fab唾液酸化的不同唾液酸化方法在Huang等人(J Am ChemSoc 134(29):12308–12318,2012)中有所描述。尽管不含Fab唾液酸化，但通过该方法唾液酸化的IVIG可以是有用的。

hsIgG制剂可如下由可商购获得的IVIG制造。将10％的本体IVIG溶液(0.1g/mL)合并，并用3-(N-吗啉代)丙磺酸(MOPS)pH 7.4缓冲液稀释。使用30kDa切向流过滤(TFF)膜(由聚醚砜组成的膜)，用五倍渗滤体积(DV)的MOPS pH 7.4缓冲液渗滤(DF)溶液。然后浓缩经缓冲液交换的IVIG溶液，之后进行深度和0.2μm过滤，得到≥150mg/mL的最终IVIG浓度。唾液酸化在两个酶促反应步骤中使用溶解于MOPS pH 7.4缓冲液中的两种糖核苷酸来实现。首先，通过在MOPS pH 7.4缓冲液中与β-1,4半乳糖基转移酶(B4GalT)、尿苷二磷酸半乳糖(UDP-Gal)和氯化锰反应进行半乳糖基化。通过添加MOPS缓冲液将反应溶液调节至约135mg/mL，并且在约37℃下保持约48小时。在半乳糖基化后，将材料进一步温育约72小时，同时添加人α2,6-唾液酸转移酶(ST6-Gal1)和胞苷5'单磷酸-N-乙酰神经氨酸(CMP-NANA)，并且用MOPS缓冲液(pH 7.4)调节至约120mg/mL。以约12小时的间隔在整个反应过程中分批加入CMP-NANA。

聚糖评估

糖蛋白的聚糖可使用本领域已知的任何方法进行评估。例如，聚糖组合物的唾液酸化(例如，在α1,3臂和/或α1,6臂上具有唾液酸的支链聚糖的含量)可使用例如Barb,Biochemistry 48:9705–9707(2009)；Anumula,J.Immunol.Methods 382:167–176(2012)；Gilar等人，Analytical Biochem.417:80-88(2011)；Wuhrer等人，J.Chromatogr.B.849:115-128(2007)中所述的方法进行表征。在一些实施方案中，除了评估聚糖的唾液酸化之外，还评估了表1中所述的一个或多个参数。

在一些情况下，如本文所述的聚糖结构和组合物例如通过酶促、色谱、质谱(MS)、色谱后接MS、电泳方法、电泳方法后接MS、核磁共振(NMR)方法以及它们的组合中的一种或多种进行分析。示例性酶促方法包括使糖蛋白制剂与一种或多种酶在足以释放一种或多种聚糖(例如，一种或多种暴露的聚糖)的条件和时间下接触。在一些情况下，所述一种或多种酶包括PNGase F。示例性色谱方法包括但不限于使用脉冲安培检测的高效阴离子交换色谱(SAX-PAD)、液相色谱(LC)、高效液相色谱(HPLC)、超高效液相色谱(UPLC)、薄层色谱(TLC)、酰胺柱色谱以及它们的组合。示例性质谱(MS)包括但不限于串联MS、LC-MS、LC-MS/MS、基质辅助激光解吸电离质谱(MALDI-MS)、傅里叶变换质谱(FTMS)、离子迁移分离-质谱(IMS-MS)、电子转移解离(ETD-MS)以及它们的组合。示例性电泳方法包括但不限于毛细管电泳(CE)、CE-MS、凝胶电泳、琼脂糖凝胶电泳、丙烯酰胺凝胶电泳、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)后接使用识别特定聚糖结构的抗体进行Western印迹、以及它们的组合。示例性核磁共振(NMR)包括但不限于一维NMR(1D-NMR)、二维NMR(2D-NMR)、相关光谱学磁角旋转NMR(COSY-NMR)、总相关光谱学NMR(TOCSY-NMR)、异核单量子相干NMR(HSQC-NMR)、异核多量子相干(HMQC-NMR)、旋转核欧佛豪瑟效应频谱NMR(ROESY-NMR)、核欧佛豪瑟效应频谱(NOESY-NMR)以及它们的组合。

在一些情况下，本文所述的技术可与用于检测、分析和/或分离聚糖或糖蛋白的一种或多种其他技术组合。例如，在某些情况下，使用一种或多种可用的方法根据本公开分析聚糖(仅举例而言，参见Anumula,Anal.Biochem.,350(1):1,2006；Klein等人，Anal.Biochem.,179:162,1989；和/或Townsend,R.R.Carbohydrate Analysis”HighPerformance Liquid Chromatography and Capillary Electrophoresis.,编者Z.ElRassi，第181-209页，1995年；WO2008/128216；WO2008/128220；WO2008/128218；WO2008/130926；WO2008/128225；WO2008/130924；WO2008/128221；WO2008/128228；WO2008/128227；WO2008/128230；WO2008/128219；WO2008/128222；WO2010/071817；WO2010/071824；WO2010/085251；WO2011/069056和WO2011/127322，这些文献中的每一篇全文以引用方式并入本文)。例如，在一些情况下，使用色谱方法、电泳方法、核磁共振方法以及它们的组合中的一种或多种来表征聚糖。在一些情况下，用于评估例如糖蛋白制剂的一个或多个靶蛋白特异性参数(例如本文所公开参数中的一个或多个参数)的方法可通过以下方法中的一种或多种方法进行。

在一些情况下，用于评估例如糖蛋白制剂的一个或多个靶蛋白特异性参数(例如本文所公开参数中的一个或多个参数)的方法可通过以下方法中的一种或多种方法进行。

表1：评估参数的示例性方法：

以上引用的文献据此全文以引用方式并入，或者在替代方案中，在它们涉及用于确定本文所述的参数的方法中的一种或多种方法的范围内并入。

药物组合物和施用

hsIgG可掺入药物组合物中。用于静脉内施用hsIgG制剂的药物组合物可通过本领域技术人员已知的方法配制。例如，可通过将hsIgG制剂与药学上可接受的载体或介质(诸如无菌水和生理盐水、植物油、乳化剂、悬浮剂、表面活性剂、稳定剂、调味赋形剂、稀释剂、媒介物、防腐剂、粘结剂)适当地组合，然后以公认的药学实践所需的单位剂型进行混合来配制药物组合物。药物制剂中包含的活性成分的量使得提供指定范围内的合适剂量。

用于注射的无菌组合物可根据常规的药学实践使用注射用蒸馏水作为媒介物来配制。例如，生理盐水或包含葡萄糖和其他补充剂(诸如D-山梨醇、D-甘露糖、D-甘露糖醇和氯化钠)的等渗溶液可用作注射用水性溶液，任选地与合适的增溶剂例如醇诸如乙醇和多元醇如丙二醇或聚乙二醇，以及非离子表面活性剂诸如聚山梨酸酯80^TM、HCO-50等组合。

油性液体的非限制性示例包括芝麻油和大豆油，并且其可与作为增溶剂的苯甲酸苄酯或苄醇组合。可包含的其他物品为缓冲剂诸如磷酸盐缓冲剂或乙酸钠缓冲剂、抚慰剂诸如盐酸普鲁卡因、稳定剂诸如苄醇或酚以及抗氧化剂。配制的注射剂可包装在合适的安瓿中。

在一些实施方案中，剂量为FDA批准的(或其他国家或国际监管机构)IVIG剂量或用于疾病的有效IVIG剂量的1％至10％。在一些实施方案中，IVIG的FDA(或其他国家或国际监管机构)批准剂量或有效剂量为200mg/kg、400mg/kg、500mg/kg、600mg/kg、1000mg/kg或2000mg/kg。在一些实施方案中，包含hsIgG制剂的组合物以约4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg、80mg/kg、90mg/kg、100mg/kg、110mg/kg、120mg/kg、130mg/kg、140mg/kg、150mg/kg、160mg/kg、170mg/kg、180mg/kg、190mg/kg、200mg/kg、250mg/kg、300mg/kg、350mg/kg、400mg/kg、450mg/kg、500mg/kg、550mg/kg、600mg/kg、650mg/kg、700mg/kg、750mg/kg、800mg/kg、850mg/kg、900mg/kg、950mg/kg、975mg/kg或1000mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，包含hsIgG制剂的组合物每天、每周、每半周、每两周、每月、每半月、每两月、每3天、每4天、每5天、每6天、每7天施用，每14天施用一次，每21天施用一次，每28天施用一次，在28天周期内连续两天每天施用一次，或以与FDA批准的IVIG剂量相同的施用频率施用。在一些实施方案中，组合物以单剂量施用。在一些实施方案中，组合物以多剂量施用。施用的剂量和方法根据患者的体重、年龄、病状等而变化，并且可根据本领域技术人员的需要进行适当选择。

如Washburn等人所述，ST6Gal1对唾液酸化的分析显示，ST6Gal1不仅可催化唾液酸从CMP-NANA糖核苷酸转移到Fc聚糖，而且还可促进唾液酸从唾液酸化产物的去除。反应在图3中示意性地示出。

如Washburn等人报道，在某些反应条件下，双触角聚糖的α1,3分支的唾液酸化(以形成A1F-1,3)很快速并且在30min时基本完成，而双唾液酸化物质(A2F)以约10×的较慢速率形成并且在24h时停止聚积。在24h后，在α1,6分支上具有唾液酸的单唾液酸化物质(A1F-1,6)开始形成并继续稳定聚积，在64h时达到约35％的糖基化物质。因此，A2F表现出从20h时的71％稳定下降至64h时的44％，这表明A1F-1,6糖型是通过去除二唾液酸化A2F的更暴露的α1,3分支上的唾液酸残基而生成的。另外的温育导致A1F-1,6糖型中的1,6唾液酸裂解，从而生成脱唾液酸化但完全半乳糖基化和岩藻糖基化的物质G2F。当A2F和A1F-1,6的含量下降时，在反应开始时以痕量存在的G2F在40h时以可测量的量出现并且继续增加，在64h时达到15％。

Washburn等人进一步报道，这些观察结果在优化参数以使A2F物质的收率最大化同时使A1F-1,3、A1F-1,6和G2F糖型最小化方面很关键。通过评估影响

糖型分布的瞬时状态的参数矩阵，他们发现反应的去唾液酸化组分

通过CMP-NANA在反应中的自发分解而得到促进。Wasburn等人得出结论，在唾液酸化反应中补充CMP-NANA有助于使A2F收率最大化，并且发现新鲜CMP-NANA的定期给药使24小时后的A2F聚糖含量最大化，而不形成大量A1F-1,6或G2F物质。

IVIG的半乳糖基化和唾液酸化

分析唾液酸转移酶ST6对IVIG的唾液酸化。首先将IVIG半乳糖基化，然后唾液酸化。反应相继进行。在半乳糖基化反应与唾液酸化反应之间不进行纯化。在唾液酸化反应后分析糖型的相对丰度。

A.半乳糖基化

以所示浓度建立包含下列组分的反应：

组分	最终浓度
		MOPS(pH 7.4)	25mM
MnCl<sub>2</sub>	10mM
		IVIG	12.5mg/ml
B4GalT1(90u/ml)	400mu/ml
		UDP-半乳糖	50mM

将反应在37℃下温育72小时。

B.唾液酸化

向半乳糖基化反应的等分试样中添加CMP-NANA、MOPS缓冲液和ST6Gal1。调节最终体积，使得反应中组分的最终浓度如下所示。

组分	最终浓度
		MOPS(pH 7.4)	50mM
MnCl<sub>2</sub>	8mM
		IVIG	10mg/ml
CMP-NANA	20mM
		ST6Gal1(SEQ ID NO:1)	0.6mg ST6/mg

将反应在37℃下温育。在不同时间提取等分试样并冷冻于-20℃以用于后续分析。

C.结果

图4示出了在CMP-NANA和ST6Gal1的存在下在基本上如上所述进行的唾液酸化反应过程中IVIG Fc结构域糖型比例的时间进程。简而言之，将半乳糖基化IVIG与20mM CMP-NANA和0.3U/mg ST6Gal1在37℃下温育。在不同时间点取出等分试样，并通过糖肽LC-MS/MS分析测定IVIG糖型的相对比例。如图4所示，在反应过程中，由于竞争性添加(正向反应)和去除(反向反应)步骤，主要糖型随时间推移从G2F变成A1F(1,3)，再变成A2F，再变成A1F(1,6)。

hsIgG制剂的分析

基本上如上所述制备由可商购获得的IVIG制造的hsIgG制剂，其中在唾液酸化反应期间定期添加CMP-NANA。在唾液酸化之前和之后充分分析起始IVIG材料和所得hsIgG制剂。关于Fc结构域唾液酸化，hsIgG制剂基本上被四唾液酸化(即，每个Fc链上的支链聚糖在两个分支上被唾液酸化)。糖基化的更详细分析以同种型和位点特异性方式进行，以区分不同的Fc同种型和Fab糖基化。Fc糖基化从起始IVIG材料中的主要脱唾液酸化物质(例如，G0F和G1F)变为hsIgG制剂的每个IgG同种型中的超过90％的二唾液酸化物质(例如，A2F、A2和A2F+BGlcNAc)。Fab聚糖的分析还显示，尽管IVIG起始材料在Fab中含有显著分布的单唾液酸化(约35％)和二唾液酸化(约35％)聚糖，该分布转变为hsIgG制剂中更高含量的二唾液酸化聚糖(约75％)。

hsIgG在ITP的鼠模型中防止血小板破坏方面的效能是IVIG的约10倍

Washburn等人将hsIgG制剂与IVIG在鼠抗CD41抗体诱导的血小板减少症模型中进行比较。简而言之，通过如下方式制备6A6-IgG2a抗体：瞬时转染293T细胞，然后用蛋白G珠粒(GE Healthcare)纯化来自无血清细胞培养上清液的重组抗体，如制造商所建议。将IVIG制剂在甘氨酸缓冲液(盐水)中稀释以用于实验。每天注射0.1μg/g 6A6-IgG2a抗血小板抗体来诱导慢性ITP。使得小鼠血小板减少，直到实验结束(第3天)。在以PBS中的1:4稀释液进行每日抗体注射之前和之后4h时，在血液学***(Advia120；Bayer HealthCare)中测定血小板计数。将抗体注射前的血小板计数设定为100％。ITP模型中的IVIG的剂量–反应曲线(图5)。在用抗血小板抗体进行最大血小板耗尽后，用0.1g/kg至1g/kg的IVIG处理小鼠，并在IVIg处理当天(第1天)和处理后连续两天(实验的第2天和第3天)测量血小板水平。在该模型中在该范围内观察到清晰的剂量-反应(图5)。IVIg的完全活性以0.1g/kg损失。将hsIgG制剂和IVIG在ITP模型中进行比较，观察到明显的增强功效。如图6所示，用0.1g/kg的hsIgG治疗处理使第2天和第3天的血小板水平回到与用1g/kg的IVIg获得的那些相似的水平。

人类患者的研究

在患有ITP的人类患者中，将hsIgG制剂(支链聚糖的至少80％通过NeuAc-α2,6-Gal末端键在α1,3臂和α1,6臂两者上被唾液酸化)与IVIG进行比较。在一项研究中，在3.5个月的时间段内向正常健康志愿者给予单次递增剂量。在该双盲安慰剂对照研究中，每14天按以下顺序向患者给予单剂量的hsIgG：3mg/kg、10mg/kg、30mg/kg、60mg/kg、120mg/kg和250mg/kg。终点衡量为安全性和耐受性。

在一项单独的研究中，在4个月的时间段内向ITP患者给予单次递增剂量。按以下固定顺序向ITP患者给予单剂量的hsIVIG：60mg/kg、120mg/kg、250mg/kg、500mg/kg和1000mg/kg。施用hsIgG剂量，28天后，向同一患者施用1000mg/kg IVIG。在整个研究中测量血小板水平。终点衡量为安全性和耐受性。

在随机化研究中，ITP患者以hsIgG或IVIG开始并切换至中间研究。在一小部分中，5名患者以高hsIVIG剂量开始，另5名患者以1,000mg/kg IVIG开始。在研究中途2个月时，以高hsIVIG剂量开始的患者在研究的剩余时间内被给予1,000mg/kg IVIG，并且以1,000mg/kg IVIG开始的患者在研究的剩余时间内被给予高hsIgG剂量。自始至终测量血小板反应。在另一小部分中，5名患者以低hsIgG剂量开始，另5名患者以1,000mg/kg IVIG开始。在研究中途2个月时，以低hsIgG剂量开始的患者在研究的剩余时间内被给予1,000mg/kg IVIG，并且以1,000mg/kg IVIG开始的患者在研究的剩余时间内被给予低hsIgG剂量。自始至终测量血小板反应。测定hsIVIG的效能。

hsIgG制剂在人类ITP患者中比IVIG更有效

在患有ITP的人类患者中，将hsIgG制剂与IVIG进行比较。在该hsIgG制剂中，支链聚糖的至少80％通过NeuAc-α2,6-Gal末端键在α1,3臂和α1,6臂两者上被唾液酸化。向患者施用43mg/kg hsIVIG。如图7所示，当以43mg/kg施用hsIgG制剂时，该患者具有与以1000mg/kg IVIG剂量施用时相似的网织红细胞计数。因此，hsIgG制剂在预防该患者的血小板破坏方面的效能是IVIG的约25倍。

其他实施方案

应当理解，虽然已结合本发明的具体实施方式描述了本发明，但是前述描述旨在说明而非限制由随附权利要求书所限定的本发明的范围。其他方面、优点和修改均在以下权利要求书的范围内。

Claims

1.一种用于治疗疾病的方法，所述方法包括以用于治疗所述疾病的IVIG的有效剂量的1％至10％的剂量向受试者施用hsIgG制剂。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述hsIgG制剂以5mg/kg至100mg/kg的剂量施用。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述疾病是炎性疾病。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述受试者患有抗体缺乏症。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述受试者患有一抗缺乏症。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述疾病与自身抗体的存在相关联。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述剂量的hsIVIG与所述有效剂量的IVIG一样有效。

8.根据权利要求1或权利要求7所述的方法，其中所述hsIgG制剂以与所述有效剂量的IVIG相同的频率施用。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述疾病是神经病。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述神经病选自由以下项组成的组：皮肌炎、格-巴二氏综合征、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病(CIDP)、多灶性运动神经病(MMN)、重症肌无力和僵人综合征。

11.根据权利要求1所述的方法，其中所述疾病选自由以下项组成的组：免疫性血细胞减少症、细小病毒B19相关红细胞再生障碍、继发于骨髓瘤和慢性淋巴细胞白血病的低丙种球蛋白血症以及骨髓移植后。

12.根据权利要求1所述的方法，其中所述疾病选自由以下项组成的组：血管炎、***性红斑狼疮(SLE)、粘膜类天疱疮和葡萄膜炎，并且在皮肤病学中，所述方法最常用于治疗川崎综合征、皮肌炎、中毒性表皮坏死松解症和水疱病。

13.根据权利要求1所述的方法，其中所述疾病经FDA批准用IVIG治疗，或者IVIG适应于治疗所述疾病。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述hsIgG制剂为用于所述疾病的经FDA批准的IVIG剂量的1％至10％。

15.根据权利要求1所述的方法，其中所述疾病选自由以下项组成的组：

心肌炎

急性运动性轴索型神经病

痛性肥胖症

抗肾小球基底膜肾炎；古德巴斯捷氏综合征

抗磷脂综合征(APS、APLS)

抗合成酶综合征；肌炎，ILD

共济失调性神经病(急性和慢性)

自身免疫性肠病(AIE)

自身免疫性中性粒细胞减少症

自身免疫性视网膜病

自身免疫性甲状腺炎

自身免疫性荨麻疹

疱疹样皮炎

获得性大疱性表皮松解症

原发性混合型冷球蛋白血症

肉芽肿性多血管炎(GPA)

混合性***病(MCTD)

神经性肌强直

视神经炎

副肿瘤性小脑变性

抗N-甲基-D-天冬氨酸(抗NMDA)受体脑炎

自身免疫性溶血性贫血

自身免疫性血小板减少性紫癜

慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病

皮肌炎

妊娠性类天疱疮

格雷夫斯病

格-巴二氏综合征

IgG4相关性疾病

兰伯特-伊顿肌无力综合征

狼疮性肾炎

肌炎

多灶性运动神经病

重症肌无力

视神经脊髓炎

寻常型天疱疮

多肌炎，以及

***性红斑狼疮(SLE)。

16.根据权利要求1所述的方法，其中所述疾病选自由以下项组成的组：

急性播散性脑脊髓炎(ADEM)

自身免疫性血管性水肿(II型获得性血管性水肿)

自身免疫性肝炎(I型和II型)

自身免疫性垂体炎；淋巴细胞性垂体炎

自身免疫性内耳病(AIED)

伊文氏综合征

格雷夫斯眼病

桥本脑病

IgA血管炎(IgAV)

隐匿性自身免疫性肝炎

线状IgA病(LAD)

狼疮性血管炎

膜性肾小球肾炎

显微镜下多血管炎(MPA)

莫伦氏溃疡

硬斑病

眼阵挛-肌阵挛综合征

奥德氏甲状腺炎

复发性风湿病

副肿瘤性眼阵挛-肌阵挛-共济失调伴神经母细胞瘤

链球菌相关性儿童自身免疫性神经精神疾病(PANDAS)

心包切开术后综合征

原发性胆汁性肝硬化(PBC)

拉斯穆森脑炎

类风湿血管炎

施尼茨勒综合征

西登哈姆舞蹈病

未分化***病(UCTD)，以及

米勒费雪综合征。

17.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述hsIgG制剂中的IgG上的聚糖的60％在α1,3分支和α1,6分支两者上具有唾液酸。

18.根据权利要求17所述的方法，其中Fab结构域上的支链聚糖的至少60％在α1,3臂和α1,6臂两者上具有通过NeuAc-α2,6-Gal末端键连接的唾液酸；并且Fc结构域上的支链聚糖的至少60％在α1,3臂和α1,6臂两者上具有通过NeuAc-α2,6-Gal末端键连接的唾液酸。

19.一种治疗患有CIDP的受试者的CIDP的方法，所述方法包括以IVIG的有效剂量的10％或小于10％的有效剂量施用hsIgG制剂。

20.根据权利要求19所述的方法，其中IVIG的所述有效剂量为200mg/kg至2000mg/kg。

21.根据权利要求19或20所述的方法，其中所述hsIgG制剂以IVIG的所述有效剂量的10％或小于10％的有效剂量施用。

22.根据权利要求19或20所述的方法，其中所述hsIgG制剂以IVIG的所述有效剂量的1％的剂量施用。

23.根据权利要求19所述的方法，其中所述hsIgG制剂以约2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、55mg/kg、60mg/kg、65mg/kg、70mg/kg、75mg/kg、80mg/kg、90mg/kg、100mg/kg、110mg/kg、120mg/kg、130mg/kg、140mg/kg、150mg/kg、160mg/kg、170mg/kg、180mg/kg、190mg/kg或200mg/kg的剂量施用。

24.一种治疗患有ITP的受试者的ITP的方法，所述方法包括以IVIG的有效剂量的10％或小于10％的有效剂量施用hsIgG制剂。

25.根据权利要求24所述的方法，其中IVIG的所述有效剂量为1000mg/kg至2000mg/kg。

26.根据权利要求24所述的方法，其中所述hsIgG制剂以IVIG的所述有效剂量的10％或小于10％的有效剂量施用。

27.根据权利要求24所述的方法，其中所述hsIgG制剂以IVIG的所述有效剂量的1％至5％的剂量施用。

28.根据权利要求24所述的方法，其中所述hsIgG制剂以约10mg/kg、20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg、80mg/kg、90mg/kg、100mg/kg、110mg/kg、120mg/kg、130mg/kg、140mg/kg、150mg/kg、160mg/kg、170mg/kg、180mg/kg、190mg/kg或200mg/kg的剂量施用。

29.一种治疗患有wAIHA的受试者的wAIHA的方法，所述方法包括以IVIG的有效剂量的10％或小于10％的有效剂量施用hsIgG制剂。

30.根据权利要求29所述的方法，其中IVIG的所述有效剂量为1000mg/kg。

31.根据权利要求29所述的方法，其中所述hsIgG制剂以IVIG的所述有效剂量的小于10％的剂量施用。

32.根据权利要求29所述的方法，其中所述hsIgG制剂以IVIG的所述有效剂量的1％至5％的剂量施用。

33.根据权利要求29所述的方法，其中所述hsIgG制剂以约10mg/kg、20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg、80mg/kg、90mg/kg或100mg/kg的剂量施用。

34.一种治疗患有格-巴二氏综合征的受试者的格-巴二氏综合征的方法，所述方法包括以IVIG的有效剂量的10％或小于10％的有效剂量施用hsIgG制剂。

35.根据权利要求34所述的方法，其中IVIG的所述有效剂量为1000mg/kg至2000mg/kg。

36.根据权利要求34所述的方法，其中所述hsIgG制剂以IVIG的所述有效剂量的10％的剂量施用。

37.根据权利要求34所述的方法，其中所述hsIgG制剂以IVIG的所述有效剂量的1％至5％的剂量施用。

38.根据权利要求34所述的方法，其中所述hsIgG制剂以约10mg/kg、20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg、80mg/kg、90mg/kg、100mg/kg、110mg/kg、120mg/kg、130mg/kg、140mg/kg、150mg/kg、160mg/kg、170mg/kg、180mg/kg、190mg/kg或200mg/kg的剂量施用。

39.一种治疗患有PID(原发性体液免疫缺陷病)的受试者的PID的方法，所述方法包括以IVIG的有效剂量的10％或小于10％的有效剂量施用hsIgG制剂。

40.根据权利要求39所述的方法，其中IVIG的所述有效剂量为200mg/kg至800mg/kg。

41.根据权利要求39所述的方法，其中所述hsIgG制剂以IVIG的所述有效剂量的小于10％的剂量施用。

42.根据权利要求39所述的方法，其中所述hsIgG制剂以IVIG的所述有效剂量的1％至5％的剂量施用。

43.根据权利要求39所述的方法，其中所述hsIgG制剂以约2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、55mg/kg、60mg/kg、65mg/kg、70mg/kg、75mg/kg或80mg/kg的剂量施用。

44.一种治疗患有川崎病的受试者的川崎病的方法，所述方法包括以IVIG的有效剂量的10％或小于10％的有效剂量施用hsIgG制剂。

45.根据权利要求44所述的方法，其中IVIG的所述有效剂量为1000mg/kg至2000mg/kg。

46.根据权利要求44所述的方法，其中所述hsIgG制剂以IVIG的所述有效剂量的小于10％的剂量施用。

47.根据权利要求44所述的方法，其中所述hsIgG制剂以IVIG的所述有效剂量的1％至5％的剂量施用。

48.根据权利要求44所述的方法，其中所述hsIgG制剂以约10mg/kg、20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg、80mg/kg、90mg/kg、100mg/kg、110mg/kg、120mg/kg、130mg/kg、140mg/kg、150mg/kg、160mg/kg、170mg/kg、180mg/kg、190mg/kg或200mg/kg的剂量施用。

49.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述剂量的hsIgG制剂具有与所述有效剂量的IVIG相似的功效。

50.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中通过施用所述hsIgG制剂来减轻归因于所述有效剂量的IVIG的至少一种副作用。

51.一种制品，所述制品包括容器，所述容器容纳无菌组合物，所述无菌组合物包含110mg、9mg、8mg、7mg、6mg、5mg、4mg、3mg、2mg或1mg的hsIgG制剂。

52.根据权利要求51所述的制品，其中所述hsIgG制剂中的IgG的Fab结构域上的支链聚糖的至少60％在α1,3臂和α1,6臂两者上具有通过NeuAc-α2,6-Gal末端键连接的唾液酸；并且所述hsIgG制剂中的IgG的Fc结构域上的支链聚糖的至少60％通过NeuAc-α2,6-Gal末端键在α1,3臂和α1,6臂两者上具有唾液酸。

53.根据权利要求51所述的制品，其中所述容器为小瓶、瓶或袋。