CN113365626A - 用噻唑啉抗痛觉过敏药物治疗疼痛的方法 - Google Patents

Abstract

本文提供了治疗糖尿病神经病理性疼痛和手术后疼痛的方法。所述方法包括向个体施用治疗有效量的式I化合物(化合物1)。所述方法可以用于治疗由任何类型的神经损伤引起的糖尿病神经病变，并且还可以用于治疗由任何外科手术引起的手术后疼痛，而不产生与广泛使用的镇痛药(如阿片类药物)相关联的副作用。化合物1可以配制成许多合适的剂型，包括如片剂等口服剂型。

Description

用噻唑啉抗痛觉过敏药物治疗疼痛的方法

相关申请的交叉引用

本申请要求于2019年2月1日提交的题为“METHODS OF TREATING PAIN WITH ATHIAZOLINE ANTI-HYPERALGESIC[用噻唑烷抗痛觉过敏药物治疗疼痛的方法]”的美国临时专利申请序列号62/800,232的优先权，将所述披露内容通过引用以其整体并入本文中。

背景

疼痛被定义为不愉快的感觉和情感体验。然而，疼痛可以是信息性的且有用的。例如，伤害性疼痛通常表示受伤(例如，组织损伤)，并且这种疼痛通常引起动物或人的逃避性行为或保护性行为，以便于使其自身脱离或保护自身免于进一步暴露于损害。然而，由受伤或疾病引起的炎症、细胞损伤和神经元损伤以及其他过程可能导致慢性病理性疼痛状态。痛觉过敏是其中存在对有害刺激具有增强的敏感性并且因此使疼痛知觉被夸大的病症。痛觉超敏是其中通常非有害刺激变成疼痛的病症。表现为痛觉过敏和/或痛觉超敏的持续性疼痛或慢性疼痛对于治疗仍然具有挑战性。许多患者对现有的治疗方法不应答，或疼痛控制不佳(即缓解不足)，或经历持续时间不足的缓解。

如可以在痛觉过敏和痛觉超敏的动物模型证实由受伤、刺激物和疾病产生的内源性活性物质是疼痛的主要驱动因素。活性氧物质(ROS)和活性氮物质(RNS)包括游离基(例如超氧化物和羟基基团)以及强氧化剂过氧亚硝酸盐(OONO^-)和过氧化物(过氧化氢)(H₂O₂)。受伤后在外周产生的过氧亚硝酸盐(PN)和过氧化氢均会导致感觉传入中兴奋性的变化。

已表明过氧亚硝酸盐与阿片剂诱导的镇痛(疼痛)耐受性(快速耐受性)的发展有关(Muscoli等人,2007,J Clin Invest[临床研究杂志]117:3530-3539)。过氧亚硝酸盐由超氧化物(O₂ ^-)和一氧化氮(NO)的扩散受控反应产生。与其他内源性产生的活性物质/氧化剂不同，过氧亚硝酸盐不受酶促控制的管理。过氧亚硝酸盐的形成很容易，释放了其基本未经约束的强大的氧化性质，从而导致可以引起疼痛的下游效应。

相反，超氧化物是由NADPH氧化酶和黄嘌呤氧化酶的作用形成的，并且一氧化氮是由一氧化氮合酶(NOS)产生的。过氧化氢由超氧化物和超氧化物歧化酶的作用形成。在细胞应激期间(例如，炎症、神经损伤、局部缺血)，这些酶***的作用可导致一氧化氮、超氧化物和过氧化物水平显著增加，这可导致神经元损伤、痛觉过敏和痛觉超敏。一氧化氮和超氧化物的同时增加可以导致过氧亚硝酸盐的局部增加大幅增加，所述过氧亚硝酸盐能够硝化蛋白质内的酪氨酸残基，并使半胱氨酸残基交联，并破坏谷胱甘肽-二硫化物稳态。共同地，这些作用导致神经元致敏和疼痛，包括神经病理性疼痛。

糖尿病是神经病变的主要病因。大约50％的糖尿病患者会发展为周围神经病变，表现为烧灼感、剧痛、刺痛或顽固性疼痛。目前可用的治疗方法是姑息性的，在提供症状缓解上仅对一部分患者有效，而不能改善病情(糖尿病)。更麻烦的是，即使是最初从给定的治疗方法中得到缓解的患者，随着时间的推移，通常也会回到痛苦的状态。抗惊厥药物(如普瑞巴林(pregabalin)、加巴喷丁(gabapentin)和拉莫三嗪(lamotrigine))以及卡马西平(carbamazepine)等较早的三环抗抑郁药(TCA)可能有效，但容易产生CNS相关的不良反应(例如，镇静、认知缺陷)。属于去甲肾上腺素和/或羟色胺重摄取抑制剂(SNRI)类的抗抑郁药(如度洛西汀(duloxetine))在一些患者中是有用的替代药物。阿片类药物和非甾体抗炎药(NSAID)的使用很普遍但由于导致剂量递增、便秘、恶心、呕吐和呼吸抑制(众所周知发生在阿片类药物治疗和胃肠道溃疡以及与NSAID使用相关联的肾毒性中)的滥用潜力、退出、耐受性而不被优选。近期，已使用局部药剂(辣椒素、局部硝酸盐和局部TCA)和局部麻醉剂，产生了混杂的结果。

共同地，疼痛性糖尿病神经病变的治疗仍然管理不善，如需要治疗的数量(Numbers-Needed-to-Treat)值所证明的——针对大多数广泛使用的药物

该值的范围为5至6(Treatmentof Painful Diabetic Neuropathy[疼痛性糖尿病神经病变的治疗],Ther.Adv.ChronicDis.[慢性病的治疗进展]2015,6(1)15(S Javed))。

术后疼痛是疼痛的另一个来源，需要比现存方案更好的治疗方案。术后疼痛通常是手术的结果，但是其他治疗(例如，烧伤或非手术创伤后的急性疼痛的管理)也可能导致严重的疼痛。术后疼痛管理对于减少或消除疼痛和不适以便手术患者能尽快开始下床活动(这可加速康复)非常重要。

手术部位对术后疼痛程度具有显著影响。通常，胸部和上腹部的手术比下腹部手术更痛，而下腹部手术又比四肢上进行的周围手术更痛。特别是胸部手术或上腹部手术可能引起肺功能的大幅改变、腹部肌肉张力下降和相关的横隔膜功能下降。横膈膜功能下降可能导致不能咳嗽和清除粘液，从而可能导致肺萎陷和/或肺炎。持续性疼痛会减少身体活动和行动能力，并导致深静脉血栓形成和肺栓塞的风险增加。这些问题令人不快或甚至危及生命，并且常常导致住院时间延长。患有中度至重度手术后疼痛的患者常常在创伤或手术后的至少前3天内，以及经常在手术后的长达2至3周内都需要疼痛控制。

医学界和患者群体需要新型的治疗剂，所述治疗剂可以缓解各种疼痛，包括但不限于痛苦的糖尿病神经病变和手术后疼痛。本文所描述的方法和化合物解决了这一紧迫的需求。

发明概述

在不同实施例中，提供了治疗糖尿病神经病变的方法。所述方法包括施用治疗有效量的包含式I化合物的组合物：

至患有糖尿病神经病变的个体。

在不同实施例中，提供了治疗手术后疼痛的方法。所述方法包括施用治疗有效量的包含式I化合物的组合物：

至患有手术后疼痛的个体。

在不同实施例中，提供了制备式I化合物(化合物1)的方法。所述方法包括使具有结构

的胺与

在碱和第一溶剂的存在下反应以形成式II中间体产物：

式II(化合物1两性离子)，并且使所述中间体产物与酸和第二溶剂接触以形成式I化合物。

在不同实施例中，提供了一种试剂盒，其包含含有式I化合物的组合物，

施药器和所述试剂盒的使用说明材料。所述说明材料包含用于治疗糖尿病神经病变或手术后疼痛的说明书。

附图说明

附图通常通过举例而非限制的方式来展示本发明的不同实施例。

图1是根据不同实施例的(R)-2-(2-羟基苯基氨基)-5,5-二甲基-4,5-二氢噻唑-4-甲酸单盐酸盐(化合物1)的X射线晶体结构。

图2是根据不同实施例的化合物1的红外(IR)谱。

图3是根据不同实施例的化合物1的¹H-NMR(核磁共振)谱。

图4是根据不同实施例的化合物1的¹³C-NMR谱。

图5是根据不同实施例的化合物1的实验XRPD(X射线粉末衍射)迹线(下迹线)和计算的XRPD迹线(上迹线)。

图6是根据不同实施例的化合物1的GVS等温线图。

图7是根据不同实施例的化合物1的DSC/TGA迹线。

图8是根据不同实施例的化合物1的制备期间可能形成的杂质结构的清单。

图9是根据不同实施例的从化合物1两性离子制备化合物1期间可能形成的杂质结构的清单。

图10展示了根据不同实施例的在啮齿动物切口模型中化合物1对痛觉过敏的非限制性影响。

图11展示了根据不同实施例的在切口诱导的痛觉过敏模型中化合物1与塞来昔布和***相比的非限制性疗效。

图12展示了根据不同实施例的由化合物1进行的已确立的切口诱导的痛觉过敏的非限制性逆转和化合物1的日剂量防止回到痛觉过敏的发现。

图13展示了根据不同实施例的通过每日给药化合物1的严重切口损伤后痛觉过敏的非限制性预防。

图14展示了根据不同实施例的在糖尿病神经病变模型中通过化合物1的机械性超敏反应的非限制性逆转。链脲佐菌素(STZ)破坏小鼠体内产生胰岛素的细胞并产生糖尿病表型。在第-7天向动物给药STZ。到第0天，动物出现高血糖和痛觉过敏(第0天BL)。化合物1阻断STZ诱导的机械性痛觉超敏。在重复给药后，尽管受到外周限制，但化合物1的疗效和效力类似于加巴喷丁。

图15展示了根据不同实施例的来自单一剂量PO研究的犬血浆中化合物1的浓度。

图16展示了根据不同实施例的来自单一剂量IV研究的犬血浆中化合物1的浓度。

图17展示了非晶态化合物1的XPRD谱。

图18展示了化合物1游离碱(上迹线)和化合物1(下迹线)的XPRD谱的比较。

具体实施方式

现在将详细地参考所披露主题的某些实施例，所述实施例的实例部分地展示于附图中。虽然所披露的主题将与列举的权利要求一并描述，但应理解，所例示的主题并非旨在将权利要求限制于所披露的主题。

贯穿本文档全文，应以灵活的方式解释以范围格式表示的值，以不仅包括作为范围限制明确陈述的数值，而且包括该范围内涵盖的所有单独的数值或子范围，就像每个数值和子范围是明确陈述的一样。例如，“约0.1％至约5％”或“约0.1％至5％”的范围应被解释为不仅包括约0.1％至约5％，还包括所指示范围内的单个值(例如，1％、2％、3％和4％)和子范围(例如，0.1％至0.5％、1.1％至2.2％、3.3％至4.4％)。表述“约X至Y”具有与“约X至约Y”相同的含义，除非另外指示。同样地，除非另外指示，否则表述“约X、Y、或约Z”具有与“约X、约Y、或约Z”相同的含义。

在本文档中，术语“一个/一种(a/an)”或“所述(the)”用来包括一个/一种或多于一个/一种，除非上下文另外清楚规定。术语“或”用来指非排他性的“或”，除非另外指示。表述“A和B中的至少一个/一种”或“A或B中的至少一个/一种”具有与“A、B或A和B”相同的含义。另外，应理解的是，本文所采用的、并且未另外定义的用语或术语只是为了描述的目的，而不是限制。章节标题的任何使用都旨在帮助阅读本文档，并且不应被解释为是限制性的；与章节标题相关的信息可能出现在该特定章节内或外。本文档中提及的所有出版物、专利和专利文档均通过引用以其整体并入本文中，如同通过引用单独并入一样。如果本文档与那些通过引用如此并入的文档之间出现不一致用法，则所并入的引用中的用法应被视为对本文档的用法的补充；对于不可调和的不一致，本文档中的用法优先。

在本文所描述的方法中，动作可以在不偏离本发明的原则的情况下以任何顺序进行，除非明确地陈述时间或操作顺序。此外，特定的动作可以同时进行，除非明确的要求语言指出它们是分开进行的。例如，要求的做X的动作和要求的做Y的动作可以在单个操作内同时进行，并且所得过程将落入所要求过程的文字范围内。

如本文所用，术语“约”可以允许一定值或范围内的一定程度的可变性，例如，在规定的值或规定的范围限制的10％内、5％内或1％内，并且包括确切的规定值或范围。

如本文所用，术语“基本上”是指绝大多数或大多数，如在至少约50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.9％、99.99％、或至少约99.999％或更多、或100％中。如本文所用，术语“基本上不含”可以意指不具有或具有微不足道的量，使得所存在材料的量不影响包含所述材料的组合物的材料性质，使得组合物为材料的约0wt％至约5wt％，或约0wt％至约1wt％，或约5wt％或更小，或小于、等于或大于约4.5wt％、4wt％、3.5wt％、3wt％、2.5wt％、2wt％、1.5wt％、1wt％、0.9wt％、0.8wt％、0.7wt％、0.6wt％、0.5wt％、0.4wt％、0.3wt％、0.2wt％、0.1wt％、0.01wt％、或约0.001wt％或更小。术语“基本上不含”可以意指具有微不足道的量，使得组合物为材料的约0wt％至约5wt％，或约0wt％至约1wt％，或约5wt％或更小，或小于、等于或大于约4.5wt％、4wt％、3.5wt％、3wt％、2.5wt％、2wt％、1.5wt％、1wt％、0.9wt％、0.8wt％、0.7wt％、0.6wt％、0.5wt％、0.4wt％、0.3wt％、0.2wt％、0.1wt％、0.01wt％、或约0.001wt％或更小、或约0wt％。

如本文所用，术语“溶剂”是指可以溶解固体、液体或气体的液体。溶剂的非限制性实例为硅酮、有机化合物、水、醇、离子液体和超临界流体。

如本文所用，术语“独立地选自”是指所引用的组是相同的、不同的或其混合物，除非上下文另外清楚指示。因此，根据该定义，短语“X¹、X²和X³独立地选自惰性气体”将包括以下场景：其中，例如，X¹、X²和X³都是相同的，其中X¹、X²和X³都是不同的，其中X¹和X²是相同的但X³是不同的，和任何其他类似的排列。

如本文所用，化合物的“有效量”、“治疗有效量的”或“药学上有效量”是足以对被施用所述化合物的受试者提供有益作用的化合物的量。

本文使用的术语“说明材料”包括出版物、记录、图表或任何其他表达介质，其可用于在试剂盒中传达本发明的组合物和/或化合物的有用性。试剂盒的说明材料可以例如固定在含有本发明的化合物和/或组合物的容器上，或者与含有化合物和/或组合物的容器一起运输。可替代地，说明材料可以与容器分开运输，意图是接受者协同使用说明材料和化合物。说明材料的递送可以例如通过传达试剂盒有用性的出版物或其他表达介质的物理递送，或可替代地通过电子传输(例如凭借计算机，如通过电子邮件，或从网站下载)实现。

如本文所用，术语“药物组合物”或“组合物”是指可用于本发明中的至少一种化合物与药学上可接受的载体的混合物。所述药物组合物促进所述化合物向受试者的施用。

如本文所用，术语“药学上可接受的”是指不会消除在本发明中有用的化合物的生物活性或性质且相对无毒的材料，如载体或稀释剂，即，可将该材料向受试者施用，而不会引起不希望的生物效应或以有害方式与包含该材料的组合物的任何组分相互作用。

如本文所用，术语“药学上可接受的载体”是指药学上可接受的材料、组合物或载体，例如液体或固体填充剂、稳定剂、分散剂、悬浮剂、稀释剂、赋形剂、增稠剂、溶剂或封装材料，这些材料涉及将本发明中有用的化合物在受试者体内载运或输送或载运或输送到受试者体内以使其可发挥预期的功能。典型地，这些构建体从一个器官或身体的一部分载运或输送到另一个器官或身体的另一部分。每种载体在与配制品的其他成分(包括可用于本发明中的化合物)相容且对受试者无害的意义上必须是“可接受的”。可充当药学上可接受的载体的材料的一些实例包括：糖类，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素和它的衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；粉末状黄芪胶；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，如可可脂和栓剂蜡；油，如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油、以及大豆油；二醇，如丙二醇；多元醇，如甘油、山梨糖醇、甘露醇和聚乙二醇；酯，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；表面活性剂；海藻酸；无热原水；等渗盐水；林格氏溶液；乙醇；磷酸盐缓冲溶液；以及在药物配制品中采用的其他无毒相容的物质。如本文所用，“药学上可接受的载体”还包括与可用于本发明中的化合物的活性相容并且对于受试者来说在生理学上是可接受的任何和所有的涂覆剂、抗细菌剂和抗真菌剂、以及吸收延迟剂等。补充活性化合物也可以掺入组合物中。“药学上可接受的载体”可以进一步包括可用于本发明的化合物的药学上可接受的盐。可以包括在用于实施本发明的药物组合物中的其他另外成分在本领域中是已知的，并且描述于例如Remington’sPharmaceutical Sciences[雷明顿氏药物科学](Genaro,版本,Mack Publication Co.,1985,Easton,PA[马克出版公司，1985，伊斯顿，宾夕法尼亚州])中，所述文献通过引用并入本文。

如本文所用，语言“药学上可接受的盐”是指由药学上可接受的无毒性酸和碱(包括无机酸、无机碱、有机酸、无机碱、其溶剂化物、水合物和包合物)制备的所施用的化合物的盐。

如本文所用，术语“预防(prevent、preventing或prevention)”是指避免或延迟与受试者的疾病或病症相关的症状的发作，所述受试者在被开始施用药剂或化合物时未发展为此类症状。疾病、病症和障碍在本文可互换使用。

如本文所用，术语“特异性结合(specifically bind或specifically binds)”是指第一分子优先与第二分子(例如，特定的受体或酶)结合，但不一定仅结合所述第二分子。

如本文所用，“受试者”、“个体”或“患者”可以是人或非人哺乳动物或鸟类。非人哺乳动物包括例如家畜和宠物，如绵羊、牛、猪、犬、猫和鼠科哺乳动物。优选地，个体是人。如本文所用，术语“个体”还指需要缓解疼痛的个体或受试者、患者或个人、或愿意被施用治疗剂的人类志愿者。

如本文所用，术语“治疗(treat、treating或treatment)”意指由于向受试者施用药剂或化合物来降低受试者经历的疾病或病症的症状的频率或严重程度。

如本文所用，术语“切口”意指任何通过手术切割器械、腹腔镜器械、缝线、起搏器等对个体皮肤的刺穿。术语“切口”还涵盖内部(在个体的体腔内)切口、烧灼、缝线或手术中进行的其他医疗程序。术语“切口”还涵盖在医疗环境之外造成的皮肤外部刺穿，所述刺穿随后进行医学或外科治疗。

本文使用以下缩写：BBr₃，三溴化硼；CD₃OD，(四)氘-甲醇；COX，环氧合酶；d，天；DMSO，二甲亚砜；DSC，差示扫描量热法；ELSD，蒸发光散射检测；g，克；GC，气相色谱法；GC-MS，气相色谱-质谱；GVS，重量蒸气吸附；h，小时；HCl，盐酸；HPLC，高效液相色谱法；ICH，国际协调会议；iPrOH，异丙醇；IR，红外(谱)；mg，毫克；min，分钟；mL，毫升；mol，摩尔；mmol，毫摩尔；MTBE，甲基叔丁基醚；NADPH，二氢烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸；NaOH，氢氧化钠；ng，纳克；NLT，不少于；NMR，核磁共振；NMT，不多于；NOS，一氧化氮合酶；NSAID，非甾体抗炎药；pKa，酸分离常数的负基-10对数；PN，过氧亚硝酸盐；RNS，活性氮物质；ROI，炽灼残渣；ROS，活性氧物质；TRP，瞬时感受器电位；USP，美国药典；UV，紫外线；XRPD，x射线(粉末)衍射图。

治疗糖尿病神经病变的方法

在不同实施例中，提供了治疗糖尿病神经病变的方法。所述方法包括施用治疗有效量的包含式I化合物的组合物：

至患有糖尿病神经病变的个体。化合物1的正式名称为(R)-2-(2-羟基苯基氨基)-5,5-二甲基-4,5-二氢噻唑-4-甲酸单盐酸盐。虽然化合物1是结晶的，但化合物1的非晶态形式也可用于本文所述治疗糖尿病神经病变的方法。另外，以任何比例的结晶化合物1和非晶态化合物1的混合物也可用于本文所述治疗糖尿病神经病变的方法。化合物1的对映异构体为(S)-2-(2-羟基苯基氨基)-5,5-二甲基-4,5-二氢噻唑-4-甲酸单盐酸盐，并且可以被指定为(S)-化合物1。在不同实施例中，化合物1的对映异构体纯度可以为至少约95％、97％、98％、99％、99.2％、99.4％、99.6％、98.8％、99.9％、99.99％或更多。因此，例如，如果化合物1的对映异构体纯度为99.5％，则组合物含有99.5％的化合物1和0.5％的(S)-化合物1。对映异构体纯度仅仅是指化合物1和(S)-化合物1的相对量，并且另外的杂质可以如本文所描述的存在。在不同实施例中，组合物包含治疗有效量的化合物1的外消旋混合物。化合物1的外消旋混合物含有约50％化合物1和约50％(S)-化合物1。所述方法可以用于治疗患有I型或II型糖尿病的个体的糖尿病神经病变。

所述方法可以用于治疗周围神经病变(其是与糖尿病有关的神经病变的最常见的形式)。周围神经病变通常与通向个体足部的神经的损伤有关，并可能导致足部畸形、感染、溃疡和截肢。所述方法还可以用于治疗近端神经病变(其又被称为糖尿病肌萎缩)。这种形式的神经病变特别影响一条或两条腿的上部、臀部和髋部的肌肉。近端神经病变还可能涉及神经疼痛，特别是从下背部并顺着腿部向下射的疼痛，其被称为神经根病(坐骨神经痛)。近端神经病变常影响患有糖尿病的老年人。

所述方法还可以用于治疗糖尿病个体的自主神经病变，所述自主神经病变影响负责维持无意识身体功能(如心脏泵血、呼吸和消化)的自主神经。自主神经病变可能特别严重，因为它可以影响从消化道到视觉的许多身体***。

所述方法还可以用于治疗糖尿病个体的局灶性神经病变。局灶性神经病变影响的是特定的神经而不是许多神经。局灶性神经病变通常是突然发生的，最常影响头部的神经(特别是连接到眼睛的神经)。局灶性神经病变还可以影响躯干和腿部。当局灶性神经病变影响腿部时，其具有不同于近端神经病变的症状。近端神经病变会导致腿部肌肉无力，并且还会导致顺着腿部向下的射痛。然而，局灶性神经病变会导致腿部非常具体的位置的疼痛。

所述方法还可以用于治疗神经退行性疾病(如肌萎缩性侧索硬化症(ALS)、帕金森病、多发性硬化症，以及神经创伤事件(如中风和局部缺血))进展期间发生的疼痛。

针对糖尿病神经病变治疗的给药和给药方案

在不同实施例中，用于治疗糖尿病神经病变的化合物1的治疗有效量可以为从约5mg至约5000mg。化合物1的治疗有效量可以为约10mg至约4750mg、约25mg至约4500mg、约50mg至约4250mg、约100mg至约4000mg、约150mg至约3750mg、约200mg至约3500mg、约275mg至约3250mg、或约100mg至约3000mg、约200mg至约2000mg、或约300mg至1000mg。在不同实施例中，化合物1的治疗有效量可以为至少、等于或大于约5mg、10mg、20mg、40mg、60mg、80mg、100mg、120mg、140mg、160mg、180mg、200mg、220mg、240mg、260mg、280mg、300mg、320mg、340mg、360mg、380mg、400mg、420mg、440mg、460mg、480mg、500mg、600mg、750mg、1000mg、1250mg、1500mg、1750mg、2000mg、2500mg和3000mg。

治疗有效量的化合物1可以一天施用一次、一天施用两次、一天施用三次、一天施用四次或者更多。在不同实施例中，治疗有效量的化合物1的施用持续约1天至约90天。治疗有效量的化合物1的施用可以持续约1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、14天、28天或更多。经咨询医生，只要患者针对其个体情况认为有必要维持足够的疼痛控制，就可以继续施用化合物1。在不同实施例中，化合物1的施用可以持续约1个月至约24个月、或贯穿个体的生命周期。

治疗手术后疼痛的方法

在不同实施例中，提供了治疗手术后疼痛的方法。所述方法包括施用治疗有效量的包含式I化合物的组合物：

至患有手术后疼痛的个体。虽然化合物1是结晶的，但化合物1的非晶态形式也可用于本文所述治疗手术后疼痛的方法。另外，以任何比例的结晶化合物1和非晶态化合物1的混合物也可用于本文所述治疗手术后疼痛的方法。化合物1的对映异构体为(S)-2-(2-羟基苯基氨基)-5,5-二甲基-4,5-二氢噻唑-4-甲酸单盐酸盐，并且可以被指定为(S)-化合物1。在不同实施例中，化合物1的对映异构体纯度可以为至少约95％、97％、98％、99％、99.2％、99.4％、99.6％、98.8％、99.9％、99.99％或更多。因此，例如，如果化合物1的对映异构体纯度为99.5％，则组合物含有99.5％的化合物1和0.5％的(S)-化合物1。对映异构体纯度仅仅是指化合物1和(S)-化合物1的相对量，并且另外的杂质可以如本文所描述的存在。在不同实施例中，组合物包含治疗有效量的化合物1的外消旋混合物。化合物1的外消旋混合物含有约50％化合物1和约50％(S)-化合物1。所述方法可以用于治疗手术引起的疼痛。通常，在个体在外科手术前或外科手术期间接受的任何全身或局部麻醉逐渐消失后，个体才会意识到手术后的疼痛。在不同实施例中，手术后疼痛存在于至少一个手术部位处或其附近。手术部位可以是个体的表面上和/或个体的体腔内的一个或多个位置。在不同实施例中，手术部位包含至少一个切口。

化合物1可以用于(不限于)急性和亚急性环境(持续时间<14天)中作为疼痛的非阿片类药物治疗，包括在围手术环境中作为通常在外科手术后开处方的“门户”阿片类药物产品(例如，

)的替代品。化合物1可以用于治疗由任何类型的外科手术或手术造成的手术后疼痛，所述外科手术或手术的非限制性实例包括阑尾切除术、关节镜手术、脑外科手术、乳腺活检、颈动脉内膜切除术、白内障手术、剖腹产术、胆囊切除术、***环切术、冠状动脉旁路术、结肠或直肠、伤口、烧伤或感染的清创术、扩张和刮除术、内窥镜检查、游离植皮术、胃旁路术、痔疮切除术、髋关节置换术、子宫切除术、宫腔镜检查、***修补术、膝关节置换术、腹腔镜手术、下背痛手术、肝切除术、肺切除术、***切除术(部分、全部或改良根治性)、中孔***或移除、整形外科手术、部分结肠切除术、甲状旁腺切除术、***切除术、脊柱手术、第三磨牙拔除术、拔牙、输卵管结扎、甲状腺切除术和扁桃体切除术。

针对手术后疼痛治疗的给药和给药方案

在不同实施例中，用于治疗手术后疼痛的化合物1的治疗有效量可以为从约5mg至约5000mg。化合物1的治疗有效量可以为约10mg至约4750mg、约25mg至约4500mg、约50mg至约4250mg、约100mg至约4000mg、约150mg至约3750mg、约200mg至约3500mg、约275mg至约3250mg、或约100mg至约3000mg、约200mg至约2000mg、或约300mg至1000mg。在不同实施例中，化合物1的治疗有效量可以为至少、等于或大于约5mg、10mg、20mg、40mg、60mg、80mg、100mg、120mg、140mg、160mg、180mg、200mg、220mg、240mg、260mg、280mg、300mg、320mg、340mg、360mg、380mg、400mg、420mg、440mg、460mg、480mg、500mg、600mg、750mg、1000mg、1250mg、1500mg、1750mg、2000mg、2500mg和3000mg。

治疗有效量的化合物1可以一天施用一次、一天施用两次、一天施用三次、一天施用四次或者更多。在不同实施例中，治疗有效量的化合物1的施用持续约1天至约90天。治疗有效量的化合物1的施用可以持续约1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、14天、28天或更多。经咨询医生，只要患者针对其个体情况认为有必要维持足够的疼痛控制，就可以继续施用化合物1。在不同实施例中，化合物1的施用可以持续约1个月至约24个月、或贯穿个体的生命周期。

在不同实施例中，在本文所述的任何条件下施用化合物1可以在大鼠、小鼠、犬或人类中产生约5μg/mL至约300μg/mL的最大观察血浆浓度(C_max)。化合物1的C_max可以为约10μg/mL至约280μg/mL、约20μg/mL至约260μg/mL、约40μg/mL至约240μg/mL、约50μg/mL至约220μg/mL、约60μg/mL至约200μg/mL、约70μg/mL至约180μg/mL、约80μg/mL至约160μg/mL、约90μg/mL至约140μg/mL、或约95μg/mL至约120μg/mL。在不同实施例中，化合物1的C_max可以为至少、等于或大于约5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL、40μg/mL、50μg/mL、60μg/mL、70μg/mL、80μg/mL、90μg/mL、100μg/mL、120μg/mL、140μg/mL、160μg/mL、180μg/mL、200μg/mL、220μg/mL、240μg/mL、260μg/mL、280μg/mL、或约300μg/mL。

在不同实施例中，在本文所述的任何条件下施用化合物1可以在大鼠、小鼠、犬或人类中产生约100hr·μg/mL至约3000hr·μg/mL的曲线下面积(AUC_INF)。化合物1的AUC_INF可以为约100hrμg/mL至约2800hr·μg/mL、约200hr·μg/mL至约2600hr·μg/mL、约400hr·μg/mL至约2400hr·μg/mL、约500hr·μg/mL至约2200hr·μg/mL、约600hr·μg/mL至约2000hr·μg/mL、约700hr·μg/mL至约1800hr·μg/mL、约800hr·μg/mL至约1600hr·μg/mL、约900hr·μg/mL至约1400hr·μg/mL、或约950hr·μg/mL至约1200hr·μg/mL。在不同实施例中，化合物1的AUC_INF可以为至少、等于或大于约50hrμg/mL、100hrμg/mL、200hrμg/mL、300hrμg/mL、400hrμg/mL、500hrμg/mL、600hrμg/mL、700hrμg/mL、800hrμg/mL、900hrμg/mL、1000hrμg/mL、1200hrμg/mL、1400hrμg/mL、1600hrμg/mL、1800hrμg/mL、2000hrμg/mL、2200hrμg/mL、2400hrμg/mL、2600hrμg/mL、2800hrμg/mL、或约3000hrμg/mL。

组合疗法

在不同实施例中，所述方法包括将治疗有效量的含有化合物1的组合物与至少一种另外的药物活性剂组合或辅助地施用。可以与化合物1组合或辅助地施用的药物活性剂的类型并非特别限制的。另外的药物活性剂的非限制性实例包括对乙酰氨基酚、α-2肾上腺素激动剂、阿司匹林、COX-1抑制剂、COX-2抑制剂、电压门控离子通道阻滞剂(NaV、CaV和KaV家族)、配体门控离子通道(TRPV1、TRPV4、TRPA1和TRPM8拮抗剂和激动剂)、阿片类镇痛药(μ-、δ-、κ选择性的和混合的)、非阿片类镇痛药、非甾体抗炎药、去甲肾上腺素重摄取抑制剂、羟色胺重摄取抑制剂、双去甲肾上腺素-羟色胺重摄取抑制剂、抗惊厥药物(拉莫三嗪)(包括加巴喷丁类似物(加巴喷丁、普瑞巴林、米罗巴林(mirogabalin)))、抗抑郁药(包括三环类，如阿米替林(amitriptyline)、多塞平(doxepin)和地昔帕明(desipramine))、曲马多(tramadol)和他喷他多(tapentadol)。

可以在与化合物1的组合或辅助疗法中有用的镇痛药的非限制性实例包括但不限于对乙酰氨基酚、阿芬太尼(alfentanil)、烯丙罗定(allylprodine)、阿尔法罗定(alphaprodine)、氨苄哌替啶(anileridine)、阿司匹林、苄***(benzylmorphine)、苯腈米特(bezitramide)、丁丙诺啡(buprenorphine)、布托啡诺(butorphanol)、可乐定(clonitazene)、氯硝胺咪(clonitazene)、可待因(codeine)、环唑辛(cyclazocine)、地索***(desomorphine)、右旋吗酰胺(dextromoramide)、右旋丙氧酚(dextropropoxyphene)、地佐辛(dezocine)、双胺丙酰胺(diampromide)、双***酮(diamorphone)、二氢可待因(dihydrocodeine)、二氢***(dihydromorphine)、地美沙朵(dimenoxadol)、地美庚醇(dimepheptanol)、二甲噻丁(dimethylthiambutene)、二氧杂苯丁酸酯(dioxaphetylbutyrate)、地匹哌酮(dipipanone)、度洛西汀(duloxetine)、依他佐辛(eptazocine)、依索庚嗪(ethoheptazine)、乙基甲基硫安丁烯(ethylmethylthiambutene)、乙基***、依托尼秦(etonitazene)、芬太尼(fentanyl)、加巴喷丁、***、氢可酮(hydrocodone)、氢***酮(hydromorphone)、羟基哌替啶(hydroxypethidine)、异***(isomethadone)、凯托米酮(ketobemidone)、烯丙左吗喃(levallorphan)、羟甲左吗喃(levorphanol)、左旋苯酰甲吗喃(levophenacyl-morphan)、洛芬太尼(lofentanil)、哌替啶(meperidine)、美普他酚(meptazinol)、美他佐辛(metazocine)、***(methadone)、美托普(metopon)、米罗巴林、***、密罗啡因(myrophine)、纳布啡(nalbuphine)、纳洛啡(nalorphine)、那碎因(narceine)、尼可***(nicomorphine)、去甲左啡诺(norlevorphanol)、去甲***(normethadone)、去甲***(normorphine)、诺匹哌酮(norpipanone)、阿片、氧可酮(oxycodone)、氧***酮(oxymorphone)、阿片全碱(papaveretum)、镇痛新(pentazocine)、苯吗庚酮(phenadoxone)、吩那唑新(phenazocine)、非诺吗烷(phenomorphan)、苯丙苯哌酯(phenoperidine)、去痛定(piminodine)、哌腈米特(piritramide)、普瑞巴林、丙庚嗪(proheptazine)、普鲁米多(promedol)、异丙哌替啶(properidine)、丙吡胺(propiram)、丙氧芬、舒芬太尼(sufentanil)、他喷他多(tapentadol)、替利定(tilidine)、曲马多、NO-萘普生、NCX-701、ALGRX-4975、其药学上可接受的盐、及其任何组合。

可以与化合物1组合或辅助地使用的抗惊厥药物的非限制性实例包括但不限于乙酰苯丁酰脲、阿布妥因(albutoin)、氨鲁米特、4-氨基-3-羟丁酸、苯乳胺、贝克拉胺、布拉氨酯、卡马西平(carbamazepine)、桂溴胺、氯美噻唑、氯硝西泮、地西酰胺(decimemide)、地沙双酮、二甲二酮、去氧苯妥英(doxenitoin)、依特比妥(eterobarb)、乙恶二酮、乙琥胺、乙妥英、非尔氨酯、氟苯乙砜、福苯腰英(fosphenyloin)、加巴喷丁、加奈索酮(ganaxolone)、拉莫三嗪、左乙拉西坦、劳拉西泮(lorazepam)、美苯腰英(mephenyloin)、甲基***(mephobarbital)、美沙比妥(metharbital)、美替妥英(methetoin)、甲琥胺(methsuximide)、咪达***(midazolam)、米罗巴林、那可比妥、硝西泮(nitrazepam)、奥卡西平、甲乙双酮(paramethadione)、苯乙酰脲(phenacemide)、苯二乙巴比妥(phenetharbital)、苯丁酰脲、***、苯琥胺、苯甲基巴比妥酸、苯妥英(phenyloin)、苯乙醇盐(phenethylate)、普瑞巴林、普里米酮(primidone)、普罗加比(progabide)、立马醋胺(remacemide)、卢非酰胺、琥氯非尼、硫噻嗪(sulthiame)、他仑帕奈(talampanel)、替群妥英(tetrantoin)、噻加宾(tiagabine)、托吡酯、三甲双酮、丙戊酸、丙戊酰胺、氨己烯酸(vigabatrin)、唑尼沙胺、其药学上可接受的盐、及其任何组合。

可以与化合物1组合或辅助地使用的抗抑郁药的非限制性实例包括但不限于双环、三环和四环抗抑郁药，酰肼，肼，苯基恶唑烷酮和吡咯烷酮。具体实例包括阿地***(adinazolam)、阿屈非尼(adrafinil)、安咪奈丁(amineptine)、阿米替林(amitriptyline)、氧阿米替林(amitriptylinoxide)、阿莫沙平、贝氟沙通(befloxatone)、安非他酮(bupropion)、布他西丁(butacetin)、布替林(butriptyline)、卡罗沙酮(caroxazone)、西酞普兰(citalopram)、氯米帕明(clomipramine)、可铁宁(cotinine)、地美替林(demexiptiline)、地昔帕明、二苯西平、二甲他林、二甲沙生、地奥沙屈、度琉平(dothiepin)、多塞平(doxepin)、度洛西汀(duloxetine)、依托哌酮、非莫西汀(femoxetine)、芬咖明(fencamine)、芬戊二醇(fenpentadiol)、氟星精(fluacizine)、氟西汀、氟伏沙明、血卟啉、金丝桃素、丙咪嗪、氧丙咪嗪、吲达品、茚洛秦、伊普吲哚(iprindole)、异丙氯肼、异丙烟肼、异卡波肼、左法哌酯(levophacetoperane)、洛非帕明、马普替林、美地沙明、美利曲辛(melitracen)、美他帕明(metapramine)、美曲吲哚、米安色林(mianserin)、米那普仑、米那卜林(minaprine)、米氮平、吗氯贝胺、奈法唑酮，奈福泮、尼亚酰胺、诺米芬辛、去甲替林、肟替林(noxiptilin)、奥他莫辛(octamoxin)、奥匹哌醇、奥沙氟生、羟色氨酸、奥昔哌汀、帕罗西汀、苯乙肼、吡贝拉林、苯噻啶、苯咯戊烷、丙吡西平、普罗替林、吡啶琥醇(pyrisuccideanol)、奎纽帕明、瑞波西汀、利坦色林、罗克吲哚、氯化铷、舍曲林、舒必利、坦度螺酮、硫西新(thiazesim)、托扎啉酮(thozalinone)、噻萘普汀、托芬那辛、托洛沙酮、反苯环丙胺(tranylcypromine)、曲唑酮、曲米帕明、色氨酸、文拉法辛、维洛沙秦、齐美定、其药学上可接受的盐、及其任何组合。

另外的药物活性剂可以与化合物1一起纳入同一剂型或单独剂型，并且本文所述的任何剂型可以合适地用于将化合物1和另外的药物活性剂组合在同一剂型中。当另外的药物活性剂存在于单独的剂型中时，所述另外的药物活性剂可以与化合物1在同一时间或不同时间施用，如在施用化合物1之后约1小时至约24小时施用。另外的药物活性剂可以在化合物1的整个施用持续时间内施用、或在更短或更长的时间内施用。

剂型和配制品

在不同实施例中，所述组合物可以包含至少一种药学上可接受的载体和/或至少一种药学上可接受的赋形剂。

有用的药学上可接受的载体包括但不限于，甘油、水、盐水、乙醇和其他药学上可接受的盐溶液(如磷酸盐和有机酸的盐)。这些和其他药学上可接受的载体的实例描述于Remington’s Pharmaceutical Sciences[雷明顿氏药物科学],第18版(1990,MackPublication Co.,New Jersey[马克出版公司，新泽西州])。

组合物可以以无菌可注射水性或油性悬浮液或溶液的形式制备、封装或出售。这种悬浮液或溶液可以根据已知技术来配制，并且除了活性成分之外还可以包含其他成分，如本文所述的抗氧化剂、分散剂、润湿剂或悬浮剂。此类无菌可注射配制品可以使用无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂(如水或1,3-丁二醇)制备。其他可接受的稀释剂以及溶剂包括但不限于林格氏溶液、等渗氯化钠溶液以及固定油(如合成的甘油单酯或甘油二酯)。

在本文所述的方法中有用的组合物可以以适合于静脉内、皮下、舌下、口服、直肠、***、肠胃外、局部、肺部、鼻内、经颊、眼部或其他施用途径的配制品形式施用、制备、封装和/或出售。其他预期的配制品包括投射的纳米颗粒、脂质体制剂、含有活性成分的再密封的红细胞以及基于免疫学的配制品。

组合物可以经由多种途径施用，包括但不限于静脉内、皮下、舌下、口服、直肠、***、肠胃外、局部、肺部、鼻内、经颊或眼部施用途径。一种或多种施用途径对技术人员来说是显而易见的，并且将取决于许多因素(包括所治疗障碍的类型和严重程度，兽医或所治疗的人患者的类型和年龄等)。

在本文所述的方法中有用的组合物可以以静脉内和皮下液体配制品、口服和舌下固体配制品、眼部、栓剂、气溶胶、局部或其他类似配制品的形式***性地施用。除了如硫酸肝素或其生物等效物等化合物之外，此类药物组合物还可以含有药学上可接受的载体和其他已知可增强和促进药物施用的成分。其他可能的配制品(如纳米颗粒、脂质体、再密封的红细胞和基于免疫学的***)也可以用于根据本发明的方法施用化合物。

药物局部施用的障碍是表皮的角质层。角质层是由蛋白质、胆固醇、鞘脂、游离脂肪酸以及各种其他脂质组成的高度抗性层，并且包括角化细胞以及活细胞。限制化合物通过角质层的穿透率(通量)的因素之一是可以被负载或涂覆到皮肤表面上的活性物质的量。每单位皮肤面积涂覆的活性物质的量越大，皮肤表面与皮肤下层之间的浓度梯度越大，并且活性物质通过皮肤的扩散力越大。因此，在所有其他条件相等的情况下，含有更高浓度活性物质的配制品比活性物质浓度更低的配制品更可能导致活性物质穿透皮肤，并且穿透皮肤的活性物质越多，渗透速率越稳定。

本文所述的组合物的配制品可以通过药理学领域已知的或今后开发的任何方法来制备。通常，此类制备方法包括以下步骤：使活性成分(例如，化合物1)与载体或一种或多种其他辅助成分结合，然后如果必要或合乎需要，将产品成形或封装成期望的单剂量或多剂量单位。

虽然本文所提供的组合物的描述主要涉及适合于根据处方来向人施用的药物组合物，但是本领域技术人员将理解，此类组合物通常适合于向各种受试者施用。

为了使组合物适于向各种动物施用，对适于向人施用的组合物进行改进是已得到充分认识的，普通的兽医药理学家只需要普通的(如果有的话)实验，就可以设计并进行此类改进。考虑接受施用本文所述组合物的受试者包括但不限于人以及其他灵长类动物，哺乳动物(包括商业相关的哺乳动物，如牛、猪、马、绵羊、猫和犬)。

在本文所述的方法中有用的组合物可以以适合于静脉内、皮下、舌下、口服、直肠、***、肠胃外、局部、肺部、鼻内、经颊、眼部、鞘内或其他施用途径的配制品形式制备、封装或出售。其他预期的配制品包括投射的纳米颗粒、脂质体制剂、含有活性成分的再密封的红细胞以及基于免疫学的配制品。

用于在本文所述的方法中使用的组合物可以呈单一单位剂量或呈多个单一单位剂量进行批量制备、封装、或出售。如本文所用，“单位剂量”是包含预定量的活性成分的药物组合物的离散量。活性成分的量通常等于将向受试者施用的活性成分的剂量或这种剂量的便利分率，例如这种剂量的一半或三分之一。

本发明药物组合物中活性成分(例如，化合物1)、药学上可接受的载体以及任何另外成分的相对量将根据所治疗受试者的特性、体型以及状况而变化，并且还取决于施用组合物的途径。举例来说，所述组合物可以包括在0.1％和100％(w/w)之间的活性成分。

本发明的药物组合物的控释或缓释配制品可以使用常规技术制备。适合于局部施用的配制品包括但不限于液体或半液体制剂，例如搽剂、洗剂、水包油或油包水乳液(如乳膏剂、软膏剂或糊剂)，以及溶液剂或悬浮剂。尽管活性成分的浓度可以与活性成分在溶剂中的溶解度极限一样高，但局部施用的配制品可以例如包含从约1％至约10％(w/w)的活性成分。用于局部施用的配制品可以进一步包括本文所述的一种或多种另外的成分。

可以使用渗透增强剂。这些材料增加了药物穿透皮肤的速度。本领域中的典型增强剂包括乙醇、甘油单月桂酸酯、PGML(聚乙二醇单月桂酸酯)、二甲亚砜以及类似物质。其他增强剂包括油酸、油醇、乙氧基二甘醇、月桂氮酮、链烷羧酸、极性脂质或N-甲基-2-吡咯烷酮。

用于局部递送本发明的一些组合物的一种可接受的媒介物可以含有脂质体。脂质体的组成及其用途是本领域已知的(例如，参见美国专利号6,323,219)。

化合物1的局部剂型可以任选地与其他成分(如佐剂、抗氧化剂、螯合剂、表面活性剂、发泡剂、润湿剂、乳化剂、增粘剂、缓冲剂、防腐剂以及类似物质)组合。在不同实施例中，组合物中包含渗透或穿透增强剂，并且相对于缺乏渗透增强剂的组合物，有效改善活性成分进入以及穿过角质层的经皮穿透。包括油酸、油醇、乙氧基二甘醇、月桂氮酮、链烷羧酸、二甲亚砜、极性脂质或N-甲基-2-吡咯烷酮的各种渗透增强剂是本领域技术人员已知的。另一个方面，所述组合物可以进一步包含水溶助长剂，所述水溶助长剂起增加角质层结构紊乱的作用，因此允许增加通过角质层的输送。各种水溶助长剂如异丙醇、丙二醇或二甲苯磺酸钠是本领域技术人员已知的。

应以有效实现所需变化的量来涂覆局部剂型的化合物1。如本文所用，“有效量”应意指足以覆盖需要改变的皮肤表面区域的量。在不同实施例中，化合物1可以以按组合物的重量体积计从约0.0001％至约15％的量存在。在不同实施例中，化合物1可以以组合物的从约0.0005％至约5％的量存在；最优选地，其应以组合物的从约0.001％至约1％的量存在。

直接从生物来源制成的液体衍生物和天然提取物可以以约1％至约99％的浓度(w/v)用于本文所述的组合物中。天然提取物和蛋白酶抑制剂的级分可能具有不同的优选范围，从组合物的约0.01％至约20％，并且更优选地从组合物的约1％至约10％。当然，本文所述的活性剂的混合物可以在同一配制品中或在不同配制品的系列应用中组合并一起使用。

本文所述的组合物可以包含按组合物的总重量计从约0.005％至2.0％的防腐剂。防腐剂用于防止在水性凝胶的情况下由于当水性凝胶暴露于来自例如暴露于空气或患者皮肤(包括接触用于涂覆本文所述的组合物(如治疗凝胶或乳膏剂)的手指)的环境中的污染物时患者的重复使用的变质。根据本发明的有用防腐剂的实例包括但不限于选自由以下组成的组的那些：苄醇、山梨酸、对羟基苯甲酸酯、咪唑啉基脲(imidurea)及其组合。特别优选的防腐剂是约0.5％至2.0％苄醇与0.05％至0.5％山梨酸的组合。

所述组合物可以包含可抑制化合物1可能发生的任何降解的抗氧化剂和螯合剂，以在本发明中用于水性凝胶配制品。合适的抗氧化剂包括占组合物总重量的约0.01重量％至0.3重量％优选范围内的BHT、BHA、α-生育酚以及抗坏血酸，更优选0.03重量％至0.1重量％范围内的BHT。优选地，螯合剂以占组合物总重量的0.01重量％至0.5重量％的量存在。特别优选的螯合剂包括占组合物总重量约0.01重量％至0.20重量％的重量范围内、并且更优选地0.02重量％至0.10重量％范围内的乙二胺四乙酸盐(例如乙二胺四乙酸二钠)以及柠檬酸。螯合剂对于螯合组合物中的金属离子是有用的，所述金属离子可能对配制品的保质期有害。虽然对于一些化合物来说，BHT和乙二胺四乙酸二钠分别是特别优选的抗氧化剂和螯合剂，但是其他合适并且等效的抗氧化剂和螯合剂可以对它们进行替换，如本领域技术人员所知。控释制剂也可以使用并且用于使用此类制剂的方法为本领域技术人员所知。

在一些情况下，待使用的剂型可以通过使用例如羟丙基甲基纤维素、其他聚合物基质、凝胶、可渗透膜、渗透***、多层涂层、微粒、脂质体或微球体或其组合来作为其中的一种或多种活性成分的缓释或控释来提供，以便提供不同比例的所需释放曲线。本领域普通技术人员已知的合适的控释配制品(包括本文所述的那些)可容易地选择用于与本发明的药物组合物一起使用。因此，本发明涵盖适于口服施用的单一单位剂型，如适用于控释的片剂、胶囊、胶丸以及囊片。

大多数控释药物产品具有与非控制药物产品所实现的药物治疗相比，改善药物治疗的共同目标。理想的是，在医学治疗中使用最佳设计的控释制剂的特征是在最短的时间内用最少量的原料药来治愈或控制病症。控释配制品的优点包括口药物的延长活性、减少的给药频率以及增加的患者依从性。另外，控释配制品可以用来影响作用的起效时间或其他特性，如药物的血药浓度，因此可以影响副作用的发生。

大多数控释配制品被设计成最初释放一定量的药物，所述药物迅速产生所需的治疗效果，并且逐渐并持续地释放其他量的药物以便在延长的时间段内维持这种治疗效果水平。为了在体内保持这种恒定的药物水平，药物必须以一定的速率从剂型中释放出来，以替代经过代谢并从身体中排出的药物的量。

可以通过各种诱导剂，例如pH、温度、酶、水或其他生理条件或化合物来刺激活性成分的控制释放。本发明上下文中的术语“控释组分”在本文定义为有利于活性成分的控制释放的一种或多种化合物，包括但不限于聚合物、聚合物基质、凝胶、可渗透膜、脂质体或微球体或其组合。

可以使用常规方法制备液体悬浮液，以实现活性成分在水性或油性媒介物中悬浮。水性媒介物包括例如，水和等渗盐水。油性媒介物包括例如，杏仁油、油性酯、乙醇、植物油(如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油、经分馏的植物油)和矿物油(如液体石蜡)。液体悬浮液可以进一步包含一种或多种另外的成分，包括但不限于悬浮剂、分散剂或润湿剂、乳化剂、舒缓剂、防腐剂、缓冲液、盐、调味剂、着色剂和甜味剂。油性悬浮液可以进一步包含增稠剂。已知的悬浮剂包括但不限于山梨糖醇糖浆、氢化食用脂肪、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶、***胶以及纤维素衍生物如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素。

合适的分散剂或润湿剂包括但不限于，天然存在的磷脂(如卵磷脂)；环氧烷与脂肪酸、与长链脂肪醇、与衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯、或与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物(例如，分别是聚氧乙烯硬脂酸酯、十七乙烯氧基鲸蜡醇、聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯和聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯)。合适的乳化剂包括但不限于卵磷脂和***胶。合适的防腐剂包括但不限于甲基、乙基、或正丙基对羟基苯甲酸盐、抗坏血酸和山梨酸。合适的甜味剂包括例如，甘油、丙二醇、山梨糖醇、蔗糖和糖精。用于油性悬浮液的合适增稠剂包括例如，蜂蜡、硬石蜡和鲸蜡醇。

能以与液体悬浮液基本相同的方式制备在水性溶剂或油性溶剂中活性成分的液体溶液，主要区别在于活性成分溶解在溶剂中而不是悬浮在溶剂中。本发明药物组合物的液体溶液可包含关于液体悬浮液所描述的每种组分，应理解为悬浮剂不一定会帮助将活性成分溶解在溶剂中。水性溶剂包括例如，水和等渗盐水。油性溶剂包括例如，杏仁油、油性酯、乙醇、植物油(例如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油、经分馏的植物油)和矿物油(例如液体石蜡)。

可以使用已知的方法制备本发明药物制剂的粉末状和颗粒状配制品。可以将直接施用于受试者的此类配制品例如用于形成片剂、填充胶囊或通过向其中添加水性或油性媒介物来制备水性或油性悬浮液或溶液。这些配制品中的每一种可进一步包含分散剂或润湿剂、悬浮剂、以及防腐剂中的一种或多种。这些配制品中还可以包含另外的赋形剂(例如填充剂和甜味剂、调味剂或着色剂)。

本文所述的组合物可以以水包油乳液或油包水乳液的形式进行制备、封装或出售。油相可以是植物油，如橄榄油或花生油；矿物油，如液体石蜡，或这些物质的组合。此类组合物可以进一步包含一种或多种乳化剂，如天然存在的胶，如***胶或黄蓍胶；天然存在的磷脂，如大豆磷脂或卵磷脂磷脂；衍生自脂肪酸和己糖醇酐的组合的酯或偏酯，如山梨糖醇酐单油酸酯；和此类偏酯与环氧乙烷的缩合产物，如聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯。这些乳液还可以含有另外的成分(包括例如，甜味剂或调味剂)。

如本文所用，“油性”液体是含有含碳液体分子、并且显示出具有比水小的极性的液体。

适合口服施用的本文所述组合物的配制品可以以离散固体剂量单位的形式制备、封装或出售，所述离散固体剂量单位包括但不限于片剂、硬胶囊或软胶囊、扁囊剂、糖锭或锭剂，各自含有预定量的活性成分。其他适合口服施用的配制品包括但不限于粉末状或颗粒状配制品、水性或油性悬浮液、水性或油性溶液、糊剂、凝胶、牙膏、漱口剂、涂覆剂、口服灌洗剂或乳液。术语口服灌洗剂和漱口剂在本文可互换使用。

如本文所述的组合物可以以适合口服或经颊施用的配制品来制备、封装或出售。此类配制品可以包括但不限于凝胶、液体、悬浮液、糊剂、牙膏、漱口剂或口服灌洗剂和涂覆剂。例如，本发明的口服灌洗剂可以包含约1.4％的本发明的化合物、葡萄糖酸氯己定(0.12％)、乙醇(11.2％)、糖精钠(0.15％)、FD&C蓝1号(FD&C Blue No.1)(0.001％)、薄荷油(0.5％)、丙三醇(10.0％)、Tween 60(0.3％)和水(补足100％)。在另一个实施例中，本发明的牙膏可以包含约5.5％的本发明的化合物、70％山梨糖醇水溶液(25.0％)、糖精钠(0.15％)、十二烷基硫酸钠(1.75％)、卡波姆934的6％分散体(15％)、留兰香油(1.0％)、50％氢氧化钠水溶液(0.76％)、二水合二碱式磷酸钙(45％)和水(补足100％)。本文所述的配制品的实例不是穷举的，并且应理解，本发明包括本文未描述但对于本领域技术人员是已知的这些和其他配制品的另外的修饰。

包含化合物1的片剂可以例如通过压制或模制活性成分，任选地与一种或多种另外的成分一起制备。压制的片剂可以通过在合适的装置中压制自由流动形式的活性成分如粉末或颗粒制剂，任选地与粘合剂、润滑剂、赋形剂、表面活性剂以及分散剂中的一种或多种混合来制备。模制片剂可以通过在合适的装置中模制活性成分、药学上可接受的载体以及至少足以润湿混合物的液体来制备。用于制造片剂的药学上可接受的赋形剂包括但不限于惰性稀释剂、制粒剂以及崩解剂、粘合剂以及润滑剂。合适的分散剂包括但不限于马铃薯淀粉以及淀粉乙醇酸钠。合适的表面活性剂包括但不限于十二烷基硫酸钠。合适的稀释剂包括但不限于碳酸钙、碳酸钠、乳糖、微晶纤维素、磷酸钙、磷酸氢钙以及磷酸钠。合适的制粒剂和崩解剂包括但不限于玉米淀粉和海藻酸。合适的粘合剂包括但不限于明胶、***胶、预凝胶化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮以及羟丙基甲基纤维素。合适的润滑剂包括但不限于硬脂酸镁、硬脂酸、二氧化硅以及滑石。

片剂可以是未经涂覆的，或可以使用已知方法进行涂覆，以在受试者的胃肠道中实现延迟崩解，从而提供活性成分的持续释放和吸收。举例来说，可以使用如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯等材料涂覆片剂。进一步举例来说，可以使用美国专利号4,256,108；4,160,452；和4,265,874中描述的方法对片剂进行涂覆，从而形成渗透控释片剂。片剂可以进一步包含甜味剂、调味剂、着色剂、防腐剂，或这些物质的一些组合，以便于提供药学上精致且适口的制剂。

可以使用生理学上可降解的组合物(如明胶)来制备包含化合物1的硬胶囊。此类硬胶囊包含化合物1，并且可以进一步包含另外的成分，包括例如惰性固体稀释剂如碳酸钙、磷酸钙或高岭土。

可以使用生理学上可降解的组合物(如明胶)来制备包含化合物1的软明胶胶囊。此类软胶囊包含化合物1，其可以与水或油介质如花生油、液体石蜡或橄榄油混合。

适合口服施用的本文所述组合物的液体配制品可以以液体形式或以旨在用于在使用前与水或另外合适的媒介物重构的干燥产品的形式来制备、封装并出售。

本文所述的组合物可以以适合直肠施用的配制品来制备、封装或出售。这样的组合物可以处于例如栓剂、保留灌肠制剂、和用于直肠或结肠灌洗的溶液的形式。

可以通过将活性成分与非刺激性药学上可接受的赋形剂混合来制备栓剂配制品，所述赋形剂在正常室温(即约20℃)下呈固体，并且在受试者的直肠温度(即，健康人约37℃)下呈液体。适合的药学上可接受的赋形剂包括但不限于可可脂、聚乙二醇和各种甘油酯。栓剂配制品可以进一步包含多种另外的成分(包括但不限于抗氧化剂和防腐剂)。

可以通过将化合物1与药学上可接受的液体载体组合来制备保留灌肠制剂或用于直肠或结肠灌洗的溶液。如本领域众所周知的，可以使用适合于受试者的直肠解剖学的递送装置来施用灌肠制剂，并且可以将其包装在所述递送装置内。灌肠制剂可以进一步包含多种另外的成分(包括但不限于抗氧化剂和防腐剂)。

用于使用化学组合物浸渍或涂覆材料的方法在本领域中是已知的，并且包括但不限于将化学组合物沉积或结合到表面上的方法，在材料(即，例如使用生理学上可降解的材料)的合成过程中将化学组合物掺入到材料结构中的方法，以及将水性或油性溶液或悬浮液吸收到吸收性材料中随后进行干燥或不进行干燥的方法。

如本文所用，药物组合物的“肠胃外施用”包括以受试者的组织的物理破坏表征的任何施用途径以及通过组织破坏而施用药物组合物。肠胃外施用因此包括但不限于通过注射组合物、通过手术切口应用组合物，通过穿透组织的非手术伤口应用组合物等方式施用药物组合物。特别地，预期肠胃外施用包括但不限于静脉内、皮下、腹膜内、肌肉内、胸骨内注射和肾透析性输注技术。

适合肠胃外施用的药物组合物的配制品包含与药学上可接受的载体(如无菌水或无菌等渗盐水)组合的活性成分(例如，化合物1)。此类配制品能以适合于快速浓注或连续施用的形式来制备、封装或出售。可注射配制品可以以单位剂型来制备、封装或出售，如在安瓿或含有防腐剂的多剂量容器中。用于肠胃外施用的配制品包括但不限于悬浮液、溶液、油性或水性媒介物中的乳液、糊剂以及可植入的持续释放或生物可降解配制品。这类配制品可以进一步包含一种或多种另外的成分，包括但不限于悬浮剂、稳定剂或分散剂。在用于肠胃外施用的配制品的一个实施例中，活性成分以干燥(即粉末或颗粒)形式提供，以便在肠胃外给予重构组合物之前用合适的媒介物(例如无菌无热原水)重构。

药物组合物能以无菌可注射水性或油性悬浮液或溶液的形式制备、封装或出售。这种悬浮液或溶液可以根据已知技术来配制，并且除了活性成分之外还可以包含其他成分，如本文所述的抗氧化剂、分散剂、润湿剂或悬浮剂。此类无菌可注射配制品可以使用无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂(如水或1,3-丁二醇)制备。其他可接受的稀释剂以及溶剂包括但不限于林格氏溶液、等渗氯化钠溶液以及固定油(如合成的甘油单酯或甘油二酯)。有用的其他可肠胃外给药的配制品包括以下制剂，这些制剂包含在脂质体制剂中或作为生物可降解聚合物***的组分的呈微晶形式的活性成分。用于持续释放或植入的组合物可以包含药学上可接受的聚合物或疏水材料，例如乳液、离子交换树脂、微溶聚合物或微溶盐。

本文所述组合物可以以适合经颊施用的配制品来制备、封装或出售。此类配制品可以例如呈使用常规方法制成的片剂或锭剂形式，并且可包含例如0.1％至20％(w/w)的活性成分，剩余的包含可口服溶解的或可降解的组合物以及任选地本文描述的另外的成分中的一种或多种。可替代地，适合经颊施用的配制品可包括包含活性成分的粉剂或雾化的或喷雾的溶液或悬浮液。当分散时，这种粉末化、雾化或雾化制剂优选地具有约0.1至约200纳米的平均颗粒或液滴大小，并且可以进一步包含一种或多种在此所述的另外成分。

如本文所用，“另外的成分”包括但不限于以下中的一种或多种：赋形剂；表面活性剂；分散剂；惰性稀释剂；制粒剂和崩解剂；粘合剂；润滑剂；甜味剂；调味剂；着色剂；防腐剂；生理学上可降解的组合物(如明胶)；水性媒介物和溶剂；油性媒介物和溶剂；悬浮剂；分散剂或润湿剂；乳化剂、舒缓剂；缓冲液；盐；增稠剂；填充剂；乳化剂；抗氧化剂；抗生素；抗真菌剂；稳定剂；和药学上可接受的聚合物或疏水材料。可以包括在本发明的药物组合物中的其他“另外的成分”在本领域中是已知的，并且描述于例如Genaro(编辑)(1985,Remington’s Pharmaceutical Sciences[雷明顿氏药物科学],Mack Publication Co.,Easton,PA[马克出版公司，伊斯顿，宾夕法尼亚州])中，所述文献通过引用并入本文。

通常，可以施用给受试者(优选地是人)的本文所述的组合物的剂量将取决于许多因素，包括但不限于动物的类型和所治疗疾病状态的类型、受试者的年龄和施用途径。

试剂盒

在不同实施例中，提供了试剂盒。所述试剂盒包含含有式I化合物的组合物，

施药器和所述试剂盒的使用说明材料。

所述说明材料包含用于治疗糖尿病神经病变或手术后疼痛的说明书。在不同实施例中，所述说明材料包含用于施用包含约5mg至约500mg的化合物1的组合物的说明书。在不同实施例中，所述说明材料包含用于治疗糖尿病神经病变的说明书。在不同实施例中，所述说明材料包含用于治疗手术后疼痛的说明书。

实例

通过参考以下实例可以更好地理解本发明的不同实施例，所述实例是通过说明的方式提供的。本发明并不限于本文给出的实例。

实例1：化合物1的物理性质

化合物1，(R)-2-(2-羟基苯基氨基)-5,5-二甲基-4,5-二氢噻唑-4-甲酸单盐酸盐，具有式I的结构：

化合物1具有以下pKa值：2.29±0.02(酸性)、6.97±0.01(碱性)和10.24±0.03(酸性)。化合物1易溶于甲醇和叔丁醇:水(1:1)。化合物1微溶于2-丙醇、乙醇、10％水:乙酸异丙酯、10％水/四氢呋喃和水。化合物1不易溶于正庚烷、甲苯、丙酮、四氢呋喃、乙酸乙酯、乙酸异丙酯、甲基叔丁基醚和叔丁醇。

化合物1在pH 7.2下的LogD分布系数为-0.07(3mL PBS缓冲液：1mL辛醇)和-0.39(2mL PBS缓冲液：2mL辛醇)，其中PBS为磷酸盐缓冲溶液。

图1示出了化合物1的X射线晶体结构。图1中结构的晶体学参数列于下表1。

图2是化合物1的红外谱。表2列出了在化合物1的红外谱中观察到的化合物中官能团的峰分配。

图3示出了化合物1的¹H NMR谱。表3列出了化合物1中氢原子核的峰分配。

图4示出了化合物1的¹³C NMR谱。表4列出了化合物1中碳原子核的峰分配。

化合物1和有关化合物的另外特性描述于美国专利号9,102,636中，将所述美国专利通过引用以其整体特此并入。

实例2：化合物1的多晶型

多晶型筛选使用15种有机/水性溶剂体系进行，包括：正庚烷、甲醇、甲苯、丙酮、四氢呋喃、2-丙醇、乙醇、乙酸乙酯、乙酸异丙酯、甲基叔丁基醚、10％水/90％异丙醇、10％水/90％四氢呋喃、叔丁醇、水和1:1叔丁醇:水。仅获得了一种结晶形式(形式1)。化合物1是非溶剂化的结晶单HCl盐。图5下迹线中示出了实验获得的化合物1的XPRD谱、上迹线中示出了模拟的XPRD谱。实验获得的化合物1的XPRD谱具有以下峰和相关联的强度：

重量蒸气吸附(GVS)显示0％和90％RH之间6％的吸收率。样品具有吸湿性。GVS等温线图提供于图6中。

(R)-2-(2-羟基苯基氨基)-5,5-二甲基-4,5-二氢噻唑-4-甲酸单盐酸盐的组合DSC/TGA结果提供于图7中。DSC显示在200℃和250℃之间有一个分开的吸热，TGA显示在约202℃时开始分解(总共5％质量损失)。

实例3：制备化合物1的方法

提供了制备式I化合物(化合物1)的方法。

所述方法包括使具有如下结构的胺

与

在碱和第一溶剂的存在下反应以形成式II中间体产物：

使所述中间体产物与酸和第二溶剂接触以形成化合物1。在不同实施例中，化合物1两性离子在用酸处理之前分离。

碱可以是任何合适的碱，如但不限于伯胺、仲胺、或叔胺、烷基锂、格氏(Grignard)试剂或碱金属氢氧化物。在不同实施例中，碱选自由以下组成的组：LiOH、NaOH、KOH、及其组合。在不同实施例中，碱是NaOH。

第一溶剂可以是任何能够溶解起始材料的合适溶剂。在不同实施例中，第一溶剂可以是极性质子溶剂、极性非质子溶剂、或其组合。在不同实施例中，合适的极性质子溶剂可以是水、甲醇、乙醇、三氟乙醇、异丙醇、及其混合物。在不同实施例中，极性非质子溶剂可以是丙酮、四氢呋喃、二甲亚砜、乙腈、N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮、及其混合物。第一溶剂也可以是任何合适比率(如从约1:1(质子:非质子)到约1:10(质子:非质子)，或约10:1(质子:非质子))的质子极性溶剂和非质子极性溶剂的混合物。在不同实施例中，第一溶剂是水。

酸可以是任何合适的无机酸，如HF、HCl、HBr、H₂SO₄、HNO₃、H₃NSO₃、H₃PO₄等。酸还可以是有机酸，如乙酸、三氟乙酸、己二酸、抗坏血酸、天冬氨酸、苯磺酸、苯甲酸、丁酸、樟脑酸、樟脑磺酸、肉桂酸、柠檬酸、二葡糖酸、乙磺酸、谷氨酸、乙醇酸、甘油磷酸、半硫酸、己酸、甲酸、富马酸、2-羟基乙磺酸(羟乙磺酸)、乳酸、羟基马来酸、苹果酸、丙二酸、扁桃酸、均三甲苯磺酸、甲磺酸、萘磺酸、烟酸、2-萘磺酸、草酸、棕榈酸、果胶酸、苯乙酸、3-苯基丙酸、特戊酸、丙酸、丙酮酸、水杨酸、硬脂酸、琥珀酸、磺胺酸、酒石酸、对甲苯磺酸、十一烷酸等。在不同实施例中，酸是盐酸(HCl)。

第二溶剂可以是任何能够溶解极性物质(如化合物1两性离子)的合适溶剂。在不同实施例中，第二溶剂可以是极性质子溶剂、极性非质子溶剂、或其组合。在不同实施例中，合适的极性质子溶剂可以是水、甲醇、乙醇、三氟乙醇、异丙醇、及其混合物。在不同实施例中，极性非质子溶剂可以是丙酮、四氢呋喃、二甲亚砜、乙腈、N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮、及其混合物。第二溶剂也可以是任何合适比率(如从约1:1(质子:非质子)到约1:10(质子:非质子)，或约10:1(质子:非质子))的质子极性溶剂和非质子极性溶剂的混合物。在不同实施例中，第二溶剂是异丙醇。

在不同实施例中，化合物1可以根据如下方案1来制备：

方案1

在不同实施例中，化合物1两性离子可以根据方案2来制备：

方案2

将纯化水(8体积)用氩气脱气大约30分钟。添加L-青霉胺(1.6756mol.)并搅拌大约10分钟以将温度维持在30℃以下。将混合物冷却至10±5℃。在保持温度低于20℃的同时，将氢氧化钠(3.3512mol.)在脱气水(2体积)中的冷却溶液缓慢添加到上述质量中，然后在30℃以下缓慢添加2-氯苯并噁唑(1.8431mol)。在完全添加后，允许反应质量达到环境温度，并将其在环境温度下搅拌不少于8h。反应完成后，将反应混合物冷却至10±5℃，用异丙醇(10体积)稀释，并在30℃下通过逐滴添加2N盐酸水溶液而酸化至pH 4.3-4.6。将溶液在低于5±5℃下搅拌大约16小时。将固体通过过滤分离，用异丙醇(3体积)洗涤并干燥，以得到呈白色固体的两性离子。

在不同实施例中，化合物1可以根据方案3来制备：

方案3

将两性离子添加到异丙醇(17.5体积)中并冷却至5±5℃。在10℃以下添加新鲜制备的在异丙醇中的2M HCl(关于两性离子的1.05等价)。将混合物搅拌大约15min，并在惰性气氛下过滤澄清溶液。将滤液在5±5℃下搅拌不少于16h。在30℃以下将混合物浓缩至大约3体积，添加甲基叔丁基醚(MTBE)(5体积)并在5±5℃下保持不少于20h。将形成的固体通过过滤分离并用MTBE(3体积)洗涤。将分离的固体在50±5℃的真空盘式干燥机中干燥大约12h以获得呈白色固体的化合物1。

des-HCl化合物1(即缺乏化合物1的HCl加成盐)可以根据方案4制备：

方案4

(i)N-(2-甲氧基苯基)氨腈(2)的制备：将氨水(25％，90mL)添加到1-(2-甲氧基苯基)硫脲(1)(5.00g，27.44mmol)在乙腈(90mL)中的经搅拌且冰冷的悬浮液中。将二乙酰氧基碘苯(10.60g，32.92mmol)在10min的时间段内分批添加。将反应混合物在室温下搅拌4h并将沉淀硫过滤。将滤液浓缩(至体积的1/2)并用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将乙酸乙酯层先后用水(2×30mL)和盐水(50mL)洗涤。将有机层经无水固体Na₂SO₄干燥、过滤并在减压下浓缩滤液。将所得残余物通过使用石油醚/***(1:1)的快速柱色谱法纯化，以得到N-(2-甲氧基苯基)-氨腈(2)(3.33g，82％产率)。300MHz ¹H-NMR(CDCl₃,ppm):7.08(ddd,J＝7.5,1.9,0.5Hz,1H)7.04(ddd,J＝7.5,7.5,1.9Hz)6.98(ddd,J＝7.5,7.5,1.7Hz)6.88(dd,J＝7.5,1.7Hz)6.26(s,1H)3.88(s,3H)。ESI-MS(m/z):149[M+H]⁺。

(ii)((R)-2-((2-甲氧基苯基)氨基)-5,5-二甲基-4,5-二氢噻唑-4-甲酸(3)的制备：将N-(2-甲氧基苯基)氨腈(2)(1.00g，6.75mmol)和L-青霉胺(1.21g，8.10mmol)于去离子水/乙腈(20mL/20mL)中的混合物在氩气气氛下回流加热2h。然后将混合物在减压下浓缩，并将残余物通过反相色谱法纯化，以得到(R)-2-((2-甲氧基苯基)氨基)-5,5-二甲基-4,5-二氢噻唑-4-甲酸(3)(0.92g，49％产率)。300MHz ¹H-NMR(CD₃OD,ppm):7.43-7.33(m,2H)7.15(dd,J＝8.3,1.1Hz,1H)7.03(ddd,J＝7.7,7.7,1.2Hz)4.42(s,1H)3.91(s,3H)1.77(s,3H)1.60(s,3H)。ESI-MS(m/z):281[M+H]⁺

(iii)(R)-2-((2-羟基苯基)氨基)-5,5-二甲基-4,5-二氢噻唑-4-甲酸(4)的制备：在0℃温度下将净BBr₃(2.19mL，12.84mmol)添加到((R)-2-((2-甲氧基苯基)氨基)-5,5-二甲基-4,5-二氢噻唑-4-甲酸(3)(360mg，1.28mmol)于CH₂Cl₂(20mL)中的溶液中。将反应混合物在环境温度下搅拌3h，然后添加水(2mL)，并将所得悬浮液搅拌10min。将产生的沉淀过滤并去除。将滤液蒸发并通过反相色谱法纯化，以得到(R)-2-((2-羟基苯基)氨基)-5,5-二甲基-4,5-二氢噻唑-4-甲酸(4)(210mg，64％产率)。300MHz ¹H-NMR(CD₃OD,ppm):6.94-6.86(m,2H)6.82-6.77(m,1H)6.73(ddd,J＝7.5,7.5,1.5Hz)4.19(s,1H)3.91 1.68(s,3H)1.49(s,3H)。ESI-MS(m/z):267[M+H]⁺

虽然化合物1是4的氢氯化物酸加成盐，但4的其他药学上可接受的酸加成盐也可以用于本文所述的方法。药学上可接受的酸是指那些无毒的酸或在其他情况下不是生物学上所不希望的酸。药学上可接受的酸加成盐可以用药学上可接受的无机酸(包括但不限于氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、硝酸、磷酸等)形成。

药学上可接受的酸加成盐还可以用药学上可接受的有机酸形成。药学上可接受的有机酸的实例包括但不限于乙酸、三氟乙酸、己二酸、抗坏血酸、天冬氨酸、苯磺酸、苯甲酸、丁酸、樟脑酸、樟脑磺酸、肉桂酸、柠檬酸、二葡糖酸、乙磺酸、谷氨酸、乙醇酸、甘油磷酸、半硫酸、己酸、甲酸、富马酸、2-羟基乙磺酸(羟乙磺酸)、乳酸、羟基马来酸、苹果酸、丙二酸、扁桃酸、均三甲苯磺酸、甲磺酸、萘磺酸、烟酸、2-萘磺酸、草酸、棕榈酸、果胶酸、苯乙酸、3-苯基丙酸、特戊酸、丙酸、丙酮酸、水杨酸、硬脂酸、琥珀酸、磺胺酸、酒石酸、对甲苯磺酸、十一烷酸等。

化合物1的非晶态形式也可以通过例如如下冻干(结晶)化合物1来制备：(R)-2-(2-羟基苯基氨基)-5,5-二甲基-4,5-二氢噻唑-4-甲酸单盐酸盐(化合物1，200mg)在RT下溶解于叔丁醇:水体系(1:1比率，40体积，8ml)。将溶液过滤以去除潜在的种子，并将过滤后的溶液于圆底烧瓶中在干冰和丙酮浴之上冷冻。然后将样品冷冻干燥。将回收的固体通过适当技术进行分析。非晶态化合物1的XPRD谱如图17所示。

实例4：制备性对照

阶段1

阶段1过程中对照包括测试反应的完成(未反应的L-青霉胺百分比)、残留溶剂(包括三乙胺)、水分含量和初步干燥后的测定/有关物质以及干燥损失和最终干燥后的炽灼残渣。

阶段2

阶段2过程中对照包括异丙醇/HCl添加的滴定、测定用粗反应混合物/有关物质的测试、手性杂质、L-青霉胺和炽灼残渣(ROI)。纯化后，重复ROI测试。干燥残留溶剂后确定水分。

实例5：材料的对照

1.起始材料

(L)-青霉胺和2-氯苯并噁唑已被选为针对产生用于支持I期临床研究的临床材料的调控起始材料。结构提供于表5中。

起始材料可商购获得并且在使用前被测试以确保满足验收标准。(L)-青霉胺和2-氯苯并噁唑的释放规范分别提供于表6和表7中。

实例6：各批次化合物1的分析测试

对适合于施用给个体并根据本文所述方法制备的各批次化合物1进行纯度分析。杂质(Imp名称见表8A-8B)的结构描绘于表10中。

实例7：分析方法

在不同实施例中，凭借以下阐述的设备和参数执行分析方法。测试是根据USP(美国药典)的方法和规范针对适合于施用给个体的各批次化合物1进行的。

实例8：化合物1的临床批次中的杂质

在不同实施例中，含有化合物1的任何组合物可以含有至多0.15％的下表10中阐述的一种或多种杂质，并且如图8和图9中所示：

表10：化合物1的批次中鉴定的杂质

在不同实施例中，包含治疗有效量的化合物1的组合物具有小于约0.30％w/w、0.25％w/w、0.20％w/w、或0.15％w/w的选自由以下组成的组的至少一种杂质：2-Cl-BO、BO-Imp-1、BO-Imp-2、BO-Imp-3、BO-Imp-4、BO-Imp-5、和Cmp1 Imp-3。在不同实施例中，包含治疗有效量的化合物1的组合物具有约0.0001％至约0.30％w/w、约0.0001％至约0.25％w/w、约0.0001％至约0.20％w/w、约0.001％至约0.15％w/w、或约0.01％至约0.15％w/w的选自由以下组成的组的至少一种杂质：2-Cl-BO、BO-Imp-1、BO-Imp-2、BO-Imp-3、BO-Imp-4、BO-Imp-5、和Cmp1 Imp-3。在不同实施例中，包含治疗有效量的化合物1的组合物具有约0.0005％、0.001％、0.002％、0.003％、0.004％、0.005％、0.006％、0.007％、0.008％、0.009％、0.010％、0.012％、0.014％、0.016％、0.018％、0.020％、0.022％、0.024％、0.026％、0.028％、0.030％、0.032％、0.034％、0.036％、0.038％、0.040％、0.042％、0.044％、0.046％、0.048％、或0.050％w/w的选自由以下组成的组的至少一种杂质：2-Cl-BO、BO-Imp-1、BO-Imp-2、BO-Imp-3、BO-Imp-4、BO-Imp-5、和Cmp1 Imp-3。在不同实施例中，包含治疗有效量的化合物1的组合物包含约0.010％至约0.020％w/w的杂质BO-Imp-1和约0.002％至约0.004％w/w的杂质BO-Imp-5。

杂质BO-Imp-1到BO-Imp-5可以来自2-氯苯并噁唑起始材料。图8中提供了示出这些杂质的形成的流程图。

BO-Imp-3是由2-氯苯并噁唑通过与氢氧化钠的小竞争反应途径水解而形成的过程杂质。它通过过滤化合物1的两性离子净化。BO-Imp-3在强制降解研究期间仅在5N氢氧化钠持续5h的最严苛条件下作为次要杂质(0.3％)形成并且在推荐的或加速的原料药储存条件下不太可能成为降解剂。

Cmp1 Imp-3是通过盐酸盐形成期间无盐化合物1与异丙醇溶剂的酸催化酯化形成的过程杂质。通过在异丙醇中使用化学计量氯化氢(其被添加到预冷却的异丙醇中两性离子的悬浮液中)可以最小化其形成。它通过化合物1的过滤净化。Cmp1 Imp-3的形成如图9所示。

在不同实施例中，化合物1的制备产生以下如表11中所阐述的杂质：

在不同实施例中，根据本文所述方法产生的化合物1具有以下分析参数：

实例9：药理学概述

化合物1是非金属、口服生物可利用的小分子活性物质分解促进剂(RSDAx)，在不同实施例中，其可破坏过氧亚硝酸盐(PN)和/或过氧化氢。过氧亚硝酸盐和过氧化物是在受伤和疾病条件下产生的强氧化剂，通过蛋白质硝化和感觉离子通道的修饰导致神经元敏感和疼痛而引起不良反应。

在过氧亚硝酸盐(PN)氧化的基于化学的测定中，化合物1抑制PN介导的小分子有机底物(如鲁米诺)的氧化。在PN介导的细胞毒性的基于细胞的测定中，化合物1是保护性的。化合物1还可以在生理条件下(即，中性pH)在蛋白质硝化(过氧亚硝酸盐氧化的结果)和乳过氧化物酶氧化(由过氧化物介导)模型中催化去除过氧亚硝酸盐。化学上，化合物1还可以在化学计量上与过氧亚硝酸盐反应形成对硝基加合物。不受理论束缚，通过靶向并去除过氧亚硝酸盐和过氧化物，化合物1可以破坏导致超敏反应(蛋白质修饰、离子通道兴奋过度)的随后的级联反应，从而提供了持续时间长的疼痛缓解事件。

在不同实施例中，从预防性和姑息性两方面，化合物1对急性切口后痛觉过敏的体内动物模型均有效。化合物1可在不穿透大脑的情况下减轻糖尿病神经病变(链脲佐菌素-和甲基乙二醛诱导的)大鼠模型的痛觉超敏，从而避免与加巴喷丁和度洛西汀相关联的常见CNS副作用。在不同实施例中，化合物1不穿透血脑屏障(BBB)。在不同实施例中，血浆中小于约1％、0.8％、0.6％、0.4％、0.2％、0.1％、0.08％、0.06％、0.04％、0.02％、或0.01％的化合物1穿透BBB。当给予未受伤的动物时，化合物1不会改变正常的感觉。

化合物1可迅速完全逆转由损伤/损害(如切口或刺激物)引起的超敏反应，并在重复给药后逆转疼痛糖尿病神经病变模型中的痛觉超敏。

在多种药代动力学和代谢研究中对化合物1进行了检验。在大鼠和犬(为毒理学研究选择的物种)中对所述化合物进行了详细的检验。在体内，使用手性方法未发现差向异构化作用。口服施用后，在大鼠和犬的血浆中均发现微克量，所述化合物具有生物可利用性。雌性大鼠的暴露量高于雄性大鼠，但不同性别的犬之间暴露量相似。在28天的研究中，血浆浓度在1小时或更短的时间内达到T_max，并且大鼠的半衰期在大约3至8小时不等，但犬的半衰期更一致(t_1/2为约3.5小时)。在28天的关键大鼠和犬研究中血浆浓度非常高，在一些剂量下达到超过100μg/mL的C_max值。

施用后，化合物1在大鼠、犬和人的血浆和肝细胞中均稳定。化合物1主要作为硫酸盐缀合物***到大鼠的尿液和粪便中。化合物1分布于组织，但在脑内没有可察觉程度的分布。化合物1在各物种中中度结合蛋白质。化合物1不抑制主要的CYP同种型(CYP 3A4、2D6、1A2、2C9、2C19的IC₅₀均>100μM)。化合物1不抑制P-gp、OATP1B1、OATP1B3和OAT1，微弱抑制OAT3、并且适度抑制BCRP，表明在药理学活性剂量下，与转运体的相互作用或对CYP的抑制极小或不存在。

实例10：化合物1对啮齿动物切口模型中痛觉过敏的影响

使用了两种切口疼痛模型评估化合物1对痛觉过敏的影响。第一种模型被称为布伦南(Brennan)模型，其中，在麻醉下，在大鼠后爪的皮肤和底层筋膜上切1cm的纵向切口。第二种是变型，但是一种更具侵入性的手术，其中，使用镊子将皮肤和肌肉分开，从而产生更持久的超敏反应。

使用布伦南方案和预防模式，在切口前15min施用化合物1(3剂PO给予)或媒介物。在切口后24、48、和72h时间点，获得机械阈值(手动von Frey丝，使用上/下方法)。相对于媒介物处理组，接受化合物1的动物表现出呈剂量依赖性模式的痛觉过敏逆转，如图10所示。

10mg/kg PO化合物1组显示出统计学上显著的痛觉过敏逆转，痛觉过敏阈值返回到接近损伤前的基线水平。在随后的实验中，采用相同的模式，将化合物1连同阳性对照组(由塞来昔布(30mg/kg PO)、***(10mg/kg SC)和媒介物组成)一起以30mg/kg PO的剂量施用。在切口后的24、48和72h时间点，化合物1处理组表现出类似于损伤前基线值(32g)的机械缩爪阈值(32-35g)，而相对于相应组的基线(损伤前)阈值(29-31g)，塞来昔布、***和媒介物组均表现出痛觉过敏(13-18g)，并且与媒介物组损伤后(12-17g)相当。

该研究表明，化合物1的单一口服剂量可在至少3天内防止切口痛觉过敏发展。化合物1的疗效是剂量依赖性的，相对于媒介物，10mg/kg PO产生统计学上显著的疗效，30mg/kg PO发挥充分疗效(即，无痛觉过敏发展)(图11)。

实例11：通过化合物1的既定痛觉过敏逆转

在大鼠中使用布伦南方案和治疗模式，每日在切口后24h施用化合物1(10mg/kgPO和30mg/kg PO)、***(3mg/kg SC)或媒介物，并且在切口后48和72h再次施用。在所有天的所有组中，在给药后1h和2h获得机械阈值。在切口前，所有组均表现正常基线值(31-35g)，并且在切口后24h，但在测试品施用之前，所有组均表现强烈痛觉过敏(15-19g；以用药前(D1)指示)。

在第1天给药时，在1h时间点处，由超过正常基线(35g)的阈值(45g)明显可知***处理组表现出统计学上显著的无痛觉，并且这种作用在2h时间点处减弱(尽管动物没有表现出痛觉过敏)。在1h(26g)时，相对于用药前(18g)并且与媒介物(18g)相比较，高剂量化合物1组表现出痛觉过敏的部分逆转，并在2h时间点处表现出近乎完全逆转(27g)。低剂量化合物1组在2h时间点显示部分逆转。

在给药前第2天(用药前(D2))，媒介物组和***组痛觉过敏(<15g)；在后一种情况下，来自前一剂量***的镇痛作用已经完全减弱。相比之下，相对于相应的基线阈值，高剂量化合物1组基本无痛觉过敏(29g)，且低剂量化合物1组仅表现出轻微痛觉过敏(26g)。

随后在第2天给药测试品，然后在给药后1h和2h进行机械阈值测试，表明两个化合物1处理组的痛觉过敏均完全逆转。***处理组在1h时间点时无痛觉过敏，但在2h时表现出轻微痛觉过敏。在给药前第3天，化合物1处理的动物未出现痛觉过敏，与来自第2天的结果一致。如前，化合物1(低剂量和高剂量两者)完全预防/逆转了痛觉过敏(图12)。

实例12：通过化合物1的痛觉过敏预防

在小鼠切口模型(模拟布伦南方案)中，动物在切口前针对机械阈值基线化，并且然后给予日剂量的化合物1(10mg/kg IP QD)或媒介物，持续7天。在第1天和第3天(切口后约24h和约72h)，化合物1处理组无痛觉过敏，而媒介物处理组表现出严重痛觉过敏。在第7天，两组均表现出正常的基线敏感性，表明病变在第3天之后和第7天之前的某个时间已经愈合，并且没有切口或化合物1治疗造成的持久影响。

在小鼠严重切口(组织和肌肉用镊子扩张)模型中，动物在切口前处于机械阈值的基线，并且然后给予日剂量的化合物1(10mg/kg IP)或媒介物，持续15天。在切口后第1、3、6、8、10、13、15和21天，化合物1处理组免受痛觉过敏影响，而媒介物处理组表现出持续的痛觉过敏。在第21天，两组均表现出正常的基线敏感性，表明病变在第15天之后和第21天之前的某个时间已经愈合，并且没有由切口或持续15天的每日口服化合物1治疗造成的持久影响(图13)。

实例13：化合物1对啮齿动物糖尿病神经病变模型中痛觉超敏的影响

进行实验以确定化合物1对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠的影响。在第一实验中，在获得机械阈值基线后，施用STZ(50mg/kg IV)(在第-7天)。两天后，测量血糖水平，并且高血糖(>250mg/dL)动物继续进行研究。在第0天，在给药测试品前为大鼠确立机械阈值的基线。然后每日施用化合物1(10mg/kg PO、30mg/kg Po和100mg/kg PO)、加巴喷丁(100mg/kg PO)或媒介物，持续5天。在第0天，在给药后1、3和6h获得机械阈值。在第1天，在给药前即时和给药后3h测量机械阈值。在第3天遵循相同的方案。加巴喷丁组在第0天和之后的所有时间点的给药后1h均表现出痛觉超敏的显著逆转。化合物1处理组在第0天显示出的痛觉超敏逆转不显著，在随后的几天变得在统计学上显著，明显表现为机械阈值相对于媒介物增加，并且这些效果与加巴喷丁相当(图14)。

在随后的研究中，遵循了相同的STZ模式。然而，除了100mg/kg化合物1组外，接受化合物1 100mg/kg剂量的另外两个组分为50mg/kg BID和33mg/kg TID的每天两个剂量或三个剂量。除加巴喷丁(100mg/kg PO)组外，还有单独组接受度洛西汀(30mg/kg PO)。另外，在本研究中，每天在给药前即时和给药后2h实施机械阈值测试，持续7天。从第1天及以后，持续每日给药达到统计学显著性后，化合物1逆转了痛觉超敏。关于给药方案，化合物1处理组之间没有明显的差异(100mg/kg QD相对于50mg/kg BID相对于33mg/kg TID)。加巴喷丁在整个研究过程中都显著逆转了痛觉超敏，而度洛西汀组则需要连续剂量以达到可评估的活性。

实例14：药代动力学测量的分析方法

针对所有GLP研究验证了配制品分析和生物分析方法。使用HPLC在1至200mg/mL范围内验证了化合物1在水中的配制品，并在相同范围内验证了所述化合物在0.5％羟丙基甲基纤维素(HPMC)中的配制品。

使用LC/MS/MS(定量下限为0.1μg/mL，使用50μL样品)对大鼠血浆中化合物1的浓度进行了验证。同样使用50μL的血浆，使用类似的条件验证犬血浆的生物分析方法。在两种测定中，都使用了氘化(化合物1-d₄)内标。

使用经过验证的高效液相色谱法(HPLC)/紫外(UV)分析方法(2750-001-001剂量配制品方法1)对所有良好实验室实践(GLP)一般毒理学研究进行剂量配制品分析。体内毒理学研究中使用的媒介物为0.5％HPMC。分析方法采用HPLC，监测波长为227nm，采用无梯度流动相甲醇，柱温设置为25℃。在1.0至200mg/mL的范围内的线性度。在该范围内的剂量配制品在室温下可保持稳定多达13天，并且在-20℃下冷冻储存时可保持稳定多达85天。

另外，使用经过验证的HPLC/UV分析方法(2750-001-001剂量配制品方法2号)在0.001至50mg/mL范围内的线性度下进行了针对体外遗传毒理学研究的配制品分析。体外测定的剂量配制品在室温下可保持稳定多达1天，并且在-20℃下冷冻储存时可保持稳定多达45天。

实例15：单一PO剂量施用后的大鼠药代动力学

该非GLP研究的目的是确定化合物1在单次口服(灌胃)剂量后大鼠体内的药代动力学，并确定化合物1在大鼠体内是否经历差向异构化。化合物1以于媒介物0.5％水性HPMC中100mg/kg的单一口服灌胃剂量的形式施用给

IGS[Crl:CD(SD)](Sprague Dawley)大鼠(5只/性别/组)。以10mL/kg体重的剂量体积向大鼠给药。在给药后的六个时间点(30和60分钟以及2、4和8和24小时)在麻醉下从每只大鼠眶后窦获得用于确定测试品的血浆水平的血样；EDTA被用作抗凝剂。

使用手性柱的分析没有提供化合物1的任何差向异构化的证据。因此，使用非手性方法重新分析了样品以改进定量。对于所有五只雌性，测试品在直到24小时的所有时间点处是可量化的。对于雄性，测试品在所有五只动物直到8小时的所有时间点处都是可量化的，但在给药后24小时时间点处，五只动物中只有两只的结果是可量化的。雌性和雄性的平均C_max值分别为60μg/mL和15μg/mL。针对雌性和雄性的T_max分别为2小时和1小时，t_1/2值分别为4小时和7小时。

当使用非手性测定分析这些相同的样品时，C_max和AUC值没有差异。确定食物对口服生物利用度的影响。在10mg/kg和100mg/kg两种剂量下，化合物1在进食和禁食的大鼠中均能较好地迅速吸收。在100mg/kg口服给药组中，进食和禁食的大鼠之间未发现药代动力学性质的统计学显著差异。然而，与10mg/kg剂量的进食大鼠相比较，禁食大鼠中观察到峰值血浆浓度的显著增加。在浓度-时间曲线中检测到次级峰，表明存在肠肝循环，所述肝肠循环可能是通过化合物1的葡糖苷酸缀合物的形成而实现的。

实例16：7天重复剂量PO施用后的大鼠药代动力学

对于第一7天的重复剂量研究，通过口服灌胃以10、100和1000mg/kg体重的剂量水平向Hsd:Sprague

大鼠(SD)(4只/性别/组)施用化合物1，持续7天。对照组和100mg/kg/天组的剂量体积为10mL/kg，且1000mg/kg/天组的剂量体积为20mL/kg。媒介物为0.5％HPMC。在给药的第一天和最后一天，在给药后2小时采血进行毒物动力学分析。仅针对1000mg/kg/天动物进行大体尸检评估、器官重量和组织病理学检查。在第1天和第7天，在六个时间点(给药前；给药后1、2、4、8和24小时)在麻醉下从每只大鼠眶后窦获得用于确定测试品的血浆水平的血样。

基于化合物1先前研究的结果，使用非手性方法对血浆样品进行了最佳定量分析。毒物动力学(TK)结果如下：

综上所述，雌性大鼠可耐受持续7天的剂量水平为2000mg/kg的化合物1的口服(灌胃)施用。因此，2000mg/kg被认为是MTD，并推荐作为化合物1在大鼠中28天口服毒性研究的高剂量水平，因为人类预期的***性暴露未知。

实例17：28天重复剂量PO施用后的大鼠药代动力学

在10mL/kg的给药体积下，以0、500、1000或2000mg/kg/天的口服灌胃剂量对大鼠进行化合物1的28天GLP重复剂量研究。媒介物为0.5％HPMC。对照组和高剂量组中有15只大鼠/性别(针对14天的恢复期，5只/性别)，而低、中剂量组则由10只大鼠/性别组成。针对毒物动力学的卫星组大鼠/性别/组被纳入。

用于确定化合物1的血浆水平的血样(大约0.5mL)在第1、14和28天的六个时间点(在给药后大约0.5、1、2、4、8和24小时)采集自TK研究动物的眶后神经丛。在那些天，组1(媒介物对照)中的大鼠在给药后大约1小时放血一次。

毒物动力学分析显示，在口服施用范围为从500至2000mg/kg的单一剂量的化合物1后，第1、14和28天的中值t_max为1小时(0.5至2小时)，性别或剂量水平之间无差异。中值t_max随着研究天数而有所变化，然而，在所有剂量水平和性别中，总体中值t_max在第1天为2小时，在第14和28天为1小时。总体平均t_1/2为4.24小时，性别、研究天数或剂量水平之间几乎或没有差异。总体平均CL/F为2.11L/hr/kg(中度可变性)，并且与雄性相比较，在雌性中略微更低。

在研究天数或剂量水平之间，CL/F没有一致的差异。总体平均V/F为12.5L/kg(高度可变性)，并且在雌性中低于雄性。在研究天数或剂量水平之间，V/F没有一致的差异。在第1、14和28天的所有剂量下，***性暴露的所有度量值(C_max、AUC_TAU和AUC_INF)在雌性中均高于雄性。在任何剂量水平下，化合物1的浓度从第1天到第14天在两个性别中都没有积累，而是似乎略有下降。然而，化合物1的浓度从第14天到第28天确实在积累，特别是在雌性体内。在整个28天的时间段内，***性暴露没有净变化。在所有TK分析日，***性暴露在两种性别中均随剂量而增加，尽管这种增加并不总是与剂量成正比。

表15：来自28天大鼠研究(PO)的选择的毒物动力学参数

在第1天，¹CL/F＝CLz/F，在第14和28天，¹CL/F＝CLss/F

在第1天，²V/F＝Vz/F，在第14和28天，²V/F＝Vss/F

实例18：大鼠7天重复IV剂量研究

在第三研究中，SD大鼠(3只/性别/组)经尾静脉IV施用化合物1，持续7天，剂量为0、75或150mg/kg/天。媒介物为15％二甲基乙酰胺、85％磷酸盐缓冲盐水。在第7天最后一次剂量后大约2小时从所有存活动物中采集血液以进行毒物动力学分析。

表16：7天重复剂量IV研究中大鼠血浆中的化合物1浓度

实例19：单一PO和IV剂量施用后的犬药代动力学

在犬身上进行的第一单一剂量非GLP研究的目的是确定化合物1在犬体内单次口服(灌胃)或单次静脉内(IV)剂量后的药代动力学和生物利用度。将测试品配制品以10mg/kg(给药体积为2mL/kg体重)的剂量水平经灌胃口服施用给三只雄性犬。在最少三天的洗脱期后，在大约1-2分钟内将测试品配制品以3mg/kg的剂量水平(给药体积为0.5mL/kg)经IV丸推施用给相同的三只犬。用于口服灌胃给药的媒介物为0.5％HPMC；用于IV注射的媒介物为无菌磷酸盐缓冲盐水(PBS；pH 7.4)。在每个剂量后的九个时间点(5、15、30和60分钟以及2、4、6、8和24小时)从颈静脉获得用于确定测试品的血浆水平的血样。动物在最后一次采血后被送回隔离。在8小时时间段内针对PO和IV剂量施用两者的血浆浓度如图15和图16所示。

使用手性柱的分析没有提供化合物1的任何差向异构化的证据。因此，使用非手性方法重新分析了样品以改进定量。在以10mg/kg口服施用后，针对所有动物，测试品在至多6小时的时间点内是可量化的，但在给药后的24小时时间点，只有一只动物的结果是可量化的。平均口服C_max为12μg/mL，t_max为约1小时。中值t_1/2为1.4小时，72％平均口服生物利用度范围为56％至91％。在以3mg/kg IV施用后，针对所有动物，测试品在至多4小时的时间点内是可量化的，并且t_max为约5分钟。由于针对IV施用，测试品在6小时及后续时间点不可量化，因此无法计算C_max和生物利用度。

在另一项研究中，将化合物1作为单一剂量以10mg/kg IV施用给禁食的比格犬，并且以10mg/kg和100mg/kg口服施用。化合物1口服吸收快且好，在1h内，10mg/kg和100mg/kg剂量分别达到15μg/mL和108μg/mL的峰值血浆浓度。化合物易于在组织中分布，稳态分布体积适中(0.3L/kg)。化合物以3.9h的平均终末半衰期从***性循环中清除。化合物1在10mg/kg和100mg/kg剂量下均具有良好的口服生物利用度(75％)。

在犬身上进行的第三单一剂量研究的目的是确定在雄性和雌性犬中的单一口服(灌胃)剂量后化合物1的最大耐受剂量(MTD)。使用金字塔剂量计划，将250、350和500mg/kg的剂量水平施用给2只犬/性别(在至少三天的洗脱期后，向相同的动物给药下一个剂量水平)。剂量体积为10mL/kg体重。媒介物为0.5％水性HPMC。在每个剂量后的三个时间点(0.5、1和2小时)从每只犬的颈静脉获得用于确定化合物1的血浆水平的血样。

四只给药动物中有三只(1只雄性，两只雌性)由于呕吐不耐受单一剂量的500mg/kg化合物1。因此，在犬中，500mg/kg化合物1的单一口服(灌胃)剂量是不耐受的，选择400mg/kg/作为犬中后续7天研究的高剂量。

表17：犬血浆中的化合物1浓度(单一剂量PO研究)

实例20：7天重复剂量PO施用后的犬药代动力学

目的是在持续7天每日口服(灌胃)施用给雄性和雌性犬后得到化合物1的初步毒性曲线，以支持对犬进行28天毒性研究的剂量选择。基于MTD阶段的结果选择剂量。剂量水平为0(媒介物对照)、200、350和400mg/kg(1只犬/性别/组)。媒介物为0.5％水性HPMC。

在第1天，在七个时间点[0(给药前)；给药后0.5、1、2、4、8和24小时]并在第7天的六个时间点(与针对第1天的时间点相同，除给药前外)从颈静脉或头静脉获得用于确定化合物1的血浆水平的血样。将该研究中使用的动物送回饲养群

实例21：28天重复剂量PO施用后的犬药代动力学

每日向比格犬(4只/性别/组加2只/性别/组用于对照，高剂量动物用于恢复)施用于0.5％HPMC中的0、100、250或400mg/kg/天剂量的化合物1。用于确定化合物1的血浆水平的血样(大约3mL)在第1、14和28天相对于给药的七个时间点(给药前以及在给药后大约0.5、1、2、4、8和24小时)采集自主要研究动物的颈静脉或头静脉。在那些天，组1(媒介物对照)中的犬在给药后大约2-4小时放血一次。

研究中所有动物对化合物1的吸收类似。中值t_max为1小时，与研究天数或性别无明显关系。T_max随剂量水平略有变化；100和250mg/kg处理组的中值t_max为1小时，但400mg/kg处理组的中值t_max增加至2小时。贯穿两种性别、研究天数和剂量水平，平均t_1/2为3.5小时。平均t_1/2在雌性和雄性之间，或在研究天数之间几乎没有差异。随着剂量增加，平均t_1/2趋于下降。

随着剂量增加，CL/F和V/F趋于增加。在所有研究天数和剂量水平中，雌性和雄性之间的***性暴露差异很小。从第1天到第15天到第28天，无论性别或剂量水平如何，不仅没有积累，血浆水平和***性暴露的总体变化也很小。化合物1***性暴露随剂量以不足以与剂量成正比的方式增加。

表19：犬血浆中的化合物1浓度(28天重复剂量PO研究)

实例22：化合物1的分布

为了确定标准药代动力学参数并评估口服和静脉内施用的化合物1的脑渗透性质，进行了大鼠脑分布研究。施用30mg/kg剂量后，化合物在大鼠体内被迅速且完全地吸收，1小时内达到9μg/mL的峰值血浆浓度。化合物易于在组织中分布，稳态分布体积为1.7L/kg。化合物1受到周围限制，在IV施用后1h的脑-血浓度比为0.02，以中等速度从***性循环中清除。针对30mg/kg口服剂量计算出的口服生物利用度为111％，终末半衰期为1.6小时。

红细胞(RBC)分区显示，化合物1在所有物种(大鼠、犬、猴、人)中暴露后60min(K_RBC/PL<0.25)时均不能很好地分区到RBC中。

实例23：化合物1的代谢

在来自大鼠、犬、猴和人的肝细胞中，化合物1表现出代谢稳定性，并且似乎没有一种预测的代谢物具有反应性。化合物在多种物种的血浆中也很稳定。在大鼠单一剂量研究中对尿液和血浆的检查表明，大约5％-15％的施用的化合物1在尿液和粪便中均原样回收。少量(1％-2％)的化合物被发现是葡糖苷酸，而其余(大约85％)是母体的硫酸盐缀合物，在尿液和粪便中排出。将在其他物种中进行进一步的代谢工作。

实例24：CYP抑制

在不同浓度下，在已知的特定CYP同种型底物(见下文)存在下，将化合物1与人肝微粒体(HLM)一起孵育，以测量由化合物1诱导的抑制。在底物存在的情况下，将微粒体与每个CYP同种型的已知抑制剂(阳性对照)一起孵育，以测量微粒体的代谢活性。

化合物1不抑制所测试的五种CYP同种型(见下表)。阳性对照产生的CYP抑制与历史(和文献)值一致，表明微粒体具有代谢活性和高度完整性。

CYP同种型	IC<sub>50</sub>(μM)
		CYP 3A4	>100
CYP 1A2	>100
		CYP 2D6	>100
CYP 2C9	>100
		CYP 2C19	>100

实例25：转运体的抑制

对化合物1进行了评估，以确定对人ATP结合盒(ABC)转运体(称为外排性转运体)和溶质连接载体(SLC)转运体(称为摄取转运体)的抑制，如下所述：

表22：化合物1对P-gp和BCRP抑制的体外评估的实验设计

表23：化合物1对OATP、OAT、OCT抑制和MATE抑制的体外评估的实验设计

通过测量从细胞释放到培养基中的乳酸脱氢酶(LDH)来评估化合物1对本研究中使用的各种细胞***的毒性。对于Caco-2和HEK293细胞，观察到细胞毒性低于25％。在MDCKII对照细胞中，100μM和600μM化合物1是具有细胞毒性的，细胞毒性百分比分别为31.3％和33.6％。结果，30μM化合物1是针对BCRP抑制所分析的最高浓度。

转运体	IC<sub>50</sub>(μM)
		P-gp	>600
BCRP	>30
		OATP1B1	>600
OATP1B3	>600
		OAT1	>600
OAT3	174
		OCT1	>600
MATE1	>600
		MATE2-K	>600

实例26：***

静脉内施用后，化合物1以大约3小时的半衰期从大鼠血浆中清除。口服施用后，t_1/2在大鼠中范围为3-8小时，在犬中为大约3.5小时。在大鼠研究中，化合物1主要以硫酸盐缀合物的形式在尿液和粪便中***，其中少量原样排出。

已经采用的术语和表达被用作说明的术语并且没有限制性，并且并非旨在使用此类术语以及表达而将本发明示出或描述的特征的任何等效物或其一部分排除在外，但是将认识到的是本发明的实施例范围之内的不同的修改是有可能的。因此，应当理解的是尽管本发明已经通过特定实施例和任选的特征确切地进行了披露，但是在本文所披露的概念的改变和变体可以由本领域的普通技术人员采取，并且此类修改和变体被认为是在本发明的实施例的范围之内。

枚举的实施例

提供了以下枚举的实施例，其编号不应被解释为指定的重要性水平：

实施例1提供了一种治疗糖尿病神经病变的方法，所述方法包括施用治疗有效量的包含式I化合物的组合物：

至患有糖尿病神经病变的个体。

实施例2提供了如实施例1所述的方法，其中所述糖尿病神经病变包含周围神经病变、近端神经病变、自主神经病变、局灶性神经病变、或其组合。

实施例3提供了如实施例1-2中任一项所述的方法，其中所述个体患有I型或II型糖尿病。

实施例4提供了如实施例1-3中任一项所述的方法，其中化合物1的治疗有效量是约5mg至约5000mg。

实施例5提供了如实施例1-4中任一项所述的方法，其中组合物施用约1天至约90天。

实施例6提供了如实施例1-5中任一项所述的方法，其中所述组合物的施用产生的最大观察到的血浆浓度(C_max)为约5μg/mL至约300μg/mL。

实施例7提供了如实施例1-6中任一项所述的方法，其中所述组合物的施用产生的曲线下面积(AUC_INF)为约100hr·μg/mL至约3000hr·μg/mL。

实施例8提供了如实施例1-7中任一项所述的方法，其中所述个体是人。

实施例9提供了如实施例1-8中任一项所述的方法，其中所述组合物包含至少一种另外的药物活性剂。

实施例10提供了如实施例1-9中任一项所述的方法，其中所述组合物包含至少一种药学上可接受的赋形剂。

实施例11提供了如实施例1-10中任一项所述的方法，其中所述组合物包含至少一种药学上可接受的载体。

实施例12提供了如实施例1-11中任一项所述的方法，其中通过选自由以下组成的组的至少一种途径来将所述组合物施用至所述个体：鼻内、吸入、局部、口服、经颊、直肠、胸膜、腹膜、***、肌肉内、皮下、经皮、硬膜外、气管内、经耳、眼内、鞘内以及静脉内施用。

实施例13提供了如实施例1-12中任一项所述的方法，其中所述组合物口服施用。

实施例14提供了如实施例1-13中任一项所述的方法，其中所述组合物以包含片剂、硬胶囊、软胶囊、扁囊剂、糖锭、锭剂或栓剂的形式施用。

实施例15提供了一种治疗手术后疼痛的方法，所述方法包括施用治疗有效量的包含式I化合物的组合物：

至患有手术后疼痛的个体。

实施例16提供了如实施例15所述的方法，其中手术后疼痛存在于至少一个手术部位处或其附近。

实施例17提供了如实施例15-16中任一项所述的方法，其中所述手术部位包含至少一个切口。

实施例18提供了如实施例15-17中任一项所述的方法，其中所述至少一个手术部位由选自由以下组成的组的外科手术或手术产生：阑尾切除术，关节镜手术，脑外科手术，乳腺活检，颈动脉内膜切除术，白内障手术，剖腹产术，胆囊切除术，***环切术，冠状动脉旁路术，结肠或直肠手术，伤口、烧伤或感染的清创术，扩张和刮除术，内窥镜检查，游离植皮术，胃旁路术，痔疮切除术，髋关节置换术，子宫切除术，宫腔镜检查，***修补术，下背痛手术，肝切除术，肺切除术，***切除术(部分、全部或改良根治性)，中孔***或移除，整形外科手术，部分结肠切除术，甲状旁腺切除术，***切除术，脊柱手术，输卵管结扎术，甲状腺切除术，扁桃体切除术、及其组合。

实施例19提供了如实施例15-18中任一项所述的方法，其中化合物1的治疗有效量是约5mg至约5000mg。

实施例20提供了如实施例15-19中任一项所述的方法，其中组合物施用约1天至约90天。

实施例21提供了如实施例15-20中任一项所述的方法，其中所述组合物的施用产生的最大观察到的血浆浓度(C_max)为约5μg/mL至约300μg/mL。

实施例22提供了如实施例15-21中任一项所述的方法，其中所述组合物的施用产生的曲线下面积(AUC_INF)为约100hr·μg/mL至约3000hr·μg/mL。

实施例23提供了如实施例15-22中任一项所述的方法，其中所述个体是人。

实施例24提供了如实施例15-23中任一项所述的方法，其中所述组合物包含至少一种另外的药物活性剂。

实施例25提供了如实施例15-24中任一项所述的方法，其中所述组合物包含至少一种药学上可接受的赋形剂。

实施例26提供了如实施例15-25中任一项所述的方法，其中所述组合物包含至少一种药学上可接受的载体。

实施例27提供了如实施例15-26中任一项所述的方法，其中通过选自由以下组成的组的至少一种途径来将所述组合物施用至所述个体：鼻内、吸入、局部、口服、经颊、直肠、胸膜、腹膜、***、肌肉内、皮下、经皮、硬膜外、气管内、经耳、眼内、鞘内以及静脉内施用。

实施例28提供了如实施例15-27中任一项所述的方法，其中所述组合物口服施用。

实施例29提供了如实施例15-28中任一项所述的方法，其中所述组合物以包含片剂、硬胶囊、软胶囊、扁囊剂、糖锭、锭剂或栓剂的形式施用。

实施例30提供了一种制备式I化合物的方法：

所述方法包括：

使具有如下结构的胺

与

在碱和第一溶剂的存在下反应以形成式II中间体产物：

使所述中间体产物与酸和第二溶剂接触以形成式I化合物。

实施例31提供了如实施例30所述的方法，其中所述碱包含碱金属氢氧化物。

实施例32提供了如实施例30-31中任一项所述的方法，其中所述碱金属氢氧化物选自由以下组成的组：LiOH、NaOH、KOH、及其组合。

实施例33提供了如实施例30-32中任一项所述的方法，其中所述碱金属氢氧化物是NaOH。

实施例34提供了如实施例30-33中任一项所述的方法，其中所述第一溶剂包含极性质子溶剂、极性非质子溶剂、或其任何组合。

实施例35提供了如实施例30-34中任一项所述的方法，其中所述第一溶剂为极性质子溶剂。

实施例36提供了如实施例30-35中任一项所述的方法，其中所述第一溶剂为水。

实施例37提供了如实施例30-36中任一项所述的方法，其中所述中间体产物在与所述酸和所述第二溶剂接触前分离。

实施例38提供了如实施例30-37中任一项所述的方法，其中所述酸为无机酸或有机酸。

实施例39提供了如实施例30-38中任一项所述的方法，其中所述酸为无机酸。

实施例40提供了如实施例30-39中任一项所述的方法，其中所述酸为盐酸(HCl)。

实施例41提供了一种试剂盒，其包含含有式I化合物的组合物，

施药器和所述试剂盒的使用说明材料，其中所述说明材料包含用于治疗糖尿病神经病变或手术后疼痛的说明书。

实施例42提供了如实施例41所述的试剂盒，其中所述说明材料包含用于施用包含约5mg至约500mg的化合物1的组合物的说明书。

实施例43提供了如实施例41-42中任一项所述的试剂盒，其中所述说明材料包含用于治疗糖尿病神经病变的说明书。

实施例44提供了如实施例41-43中任一项所述的试剂盒，其中所述说明材料包含用于治疗手术后疼痛的说明书。

Claims (44)

1.一种治疗糖尿病神经病变的方法，所述方法包括：

施用治疗有效量的包含式I化合物的组合物

至患有糖尿病神经病变的个体。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述糖尿病神经病变包含周围神经病变、近端神经病变、自主神经病变、局灶性神经病变、或其组合。

3.如权利要求1所述的方法，其中所述个体患有I型或II型糖尿病。

4.如权利要求1所述的方法，其中化合物1的治疗有效量是约5mg至约5000mg。

5.如权利要求1所述的方法，其中所述组合物施用约1天至约90天。

6.如权利要求1所述的方法，其中所述组合物的施用产生的最大观察到的化合物1的血浆浓度(C_max)为约5μg/mL至约300μg/mL。

7.如权利要求1所述的方法，其中所述组合物的施用产生的化合物1的曲线下面积(AUC_INF)为约100hr·μg/mL至约3000hr·μg/mL。

8.如权利要求1所述的方法，其中所述个体是人。

9.如权利要求1所述的方法，其中所述组合物包含至少一种另外的药物活性剂。

10.如权利要求1所述的方法，其中所述组合物包含至少一种药学上可接受的赋形剂。

11.如权利要求1所述的方法，其中所述组合物包含至少一种药学上可接受的载体。

12.如权利要求1所述的方法，其中通过选自由以下组成的组的至少一种途径来将所述组合物施用至所述个体：鼻内、吸入、局部、口服、经颊、直肠、胸膜、腹膜、***、肌肉内、皮下、经皮、硬膜外、气管内、经耳、眼内、鞘内以及静脉内施用。

13.如权利要求1所述的方法，其中所述组合物口服施用。

14.如权利要求1所述的方法，其中所述组合物以包含片剂、硬胶囊、软胶囊、扁囊剂、糖锭、锭剂或栓剂的形式施用。

15.一种治疗手术后疼痛的方法，所述方法包括：

施用治疗有效量的包含式I化合物的组合物

至患有手术后疼痛的个体。

16.如权利要求15所述的方法，其中所述手术后疼痛存在于至少一个手术部位处或其附近。

17.如权利要求16所述的方法，其中所述手术部位包含至少一个切口。

18.如权利要求16所述的方法，其中所述至少一个手术部位由选自由以下组成的组的外科手术或手术产生：阑尾切除术，关节镜手术，脑外科手术，乳腺活检，颈动脉内膜切除术，白内障手术，剖腹产术，胆囊切除术，***环切术，冠状动脉旁路术，结肠或直肠手术，伤口、烧伤或感染的清创术，扩张和刮除术，内窥镜检查，游离植皮术，胃旁路术，痔疮切除术，髋关节置换术，子宫切除术，宫腔镜检查，***修补术，下背痛手术，肝切除术，肺切除术，***切除术(部分、全部或改良根治性)，中孔***或移除，整形外科手术，部分结肠切除术，甲状旁腺切除术，***切除术，脊柱手术，输卵管结扎术，甲状腺切除术，扁桃体切除术、及其组合。

19.如权利要求15所述的方法，其中化合物1的治疗有效量是约5mg至约5000mg。

20.如权利要求15所述的方法，其中所述组合物施用约1天至约90天。

21.如权利要求15所述的方法，其中所述组合物的施用产生的最大观察到的化合物1的血浆浓度(C_max)为约5μg/mL至约300μg/mL。

22.如权利要求15所述的方法，其中所述组合物的施用产生的化合物1的曲线下面积(AUC_INF)为约100hr·μg/mL至约3000hr·μg/mL。

23.如权利要求15所述的方法，其中所述个体是人。

24.如权利要求15所述的方法，其中所述组合物包含至少一种另外的药物活性剂。

25.如权利要求15所述的方法，其中所述组合物包含至少一种药学上可接受的赋形剂。

26.如权利要求15所述的方法，其中所述组合物包含至少一种药学上可接受的载体。

27.如权利要求15所述的方法，其中通过选自由以下组成的组的至少一种途径来将所述组合物施用至所述个体：鼻内、吸入、局部、口服、经颊、直肠、胸膜、腹膜、***、肌肉内、皮下、经皮、硬膜外、气管内、经耳、眼内、鞘内以及静脉内施用。

28.如权利要求15所述的方法，其中所述组合物口服施用。

29.如权利要求15所述的方法，其中所述组合物以包含片剂、硬胶囊、软胶囊、扁囊剂、糖锭、锭剂或栓剂的形式施用。

30.一种制备式I化合物的方法：

所述方法包括：

使具有如下结构的胺

与

在碱和第一溶剂的存在下反应以形成式II中间体产物：

和

使所述中间体产物与酸和第二溶剂接触以形成式I化合物。

31.如权利要求30所述的方法，其中所述碱包含碱金属氢氧化物。

32.如权利要求31所述的方法，其中所述碱金属氢氧化物选自由以下组成的组：LiOH、NaOH、KOH、及其组合。

33.如权利要求32所述的方法，其中所述碱金属氢氧化物为NaOH。

34.如权利要求30所述的方法，其中所述第一溶剂包含极性质子溶剂、极性非质子溶剂、或其任何组合。

35.如权利要求34所述的方法，其中所述第一溶剂为极性质子溶剂。

36.如权利要求35所述的方法，其中所述第一溶剂为水。

37.如权利要求30所述的方法，其中所述中间体产物在与所述酸和所述第二溶剂接触前分离。

38.如权利要求30所述的方法，其中所述酸为无机酸或有机酸。

39.如权利要求38所述的方法，其中所述酸为无机酸。

40.如权利要求39所述的方法，其中所述酸为盐酸(HCl)。

41.一种试剂盒，其包含含有式I化合物的组合物，

施药器和所述试剂盒的使用说明材料，其中所述说明材料包含用于治疗糖尿病神经病变或手术后疼痛的说明书。

42.如权利要求41所述的试剂盒，其中所述说明材料包含用于施用包含约5mg至约500mg的化合物1的组合物的说明书。

43.如权利要求41所述的试剂盒，其中所述说明材料包含用于治疗糖尿病神经病变的说明书。

44.如权利要求41所述的试剂盒，其中所述说明材料包含用于治疗手术后疼痛的说明书。

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