CN113337437A - 利用刺糖多孢菌菌株j1-ds1902制备多杀菌素类化合物的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物发酵技术领域，具体而言，本发明涉及利用刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa)J1‑DS1902制备多杀菌素类化合物的方法。发明人通过从大量的菌株中筛选出一株高产多杀菌素菌株刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa)J1‑DS1902，利用其发酵制备多杀菌素摇瓶产量高达2.9g/L，相比野生型的刺糖多孢菌，大大提高了多杀菌素产量。因此，刺糖多孢菌J1‑DS1902可作为多杀菌素高产的工业化菌株进行开发。
Description
技术领域
本发明涉及生物发酵技术领域，具体而言，本发明涉及利用刺糖多孢菌菌株J1-DS1902制备多杀菌素类化合物的方法。
背景技术
多杀菌素类化合物(spinosyns)是由刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa)进行有氧发酵后获得的一种次级代谢产物，是一种新型的绿色广谱生物杀虫剂，属于大环内酯类抗生素。多杀菌素独特的杀虫机理表现出生物农药的安全性和化学农药的快速性，并且由于多杀菌素的易降解性，对环境、农作物和哺乳动物无害，没有致癌、致畸、致突变或神经毒性，因此曾三次获得美国“总统绿色化学品挑战奖”。
多杀菌素的作用方式是通过刺激昆虫的神经***，导致非功能性的肌收缩、衰竭，并伴随颤抖和麻痹，同时也作用于γ-氨基丁酸受体，这有可能进一步提高了其杀虫活性。迄今为止，尚未发现能以相同的作用方式影响昆虫神经***的类似产品，而且尚无有关多杀菌素交叉抗性的报道。
多杀菌素属广谱杀虫剂，能有效地控制鳞翅目、双翅目和缨翅目的害虫，可以很好地防治鞘翅目和直翅目中某些大量吞食叶片的害虫种类。多杀菌素对鳞翅目幼虫的活性显著高于各种有机磷、氨基甲酸酯杀虫剂，与拟除虫菊酯相当。多杀菌素具有高杀虫活性的同时，对捕食性昆虫还表现出较低的毒性，对鳞翅目昆虫而言，多杀菌素是已发现的杀虫剂中选择性最高的化合物之一。此外，多杀菌素对蓟马、虱、白蚁以及许多膜翅目害虫也有较好的效果。
根据中国农药毒性分级标准，多杀菌素属低毒杀虫剂。它对哺乳动物和鸟类相对低毒，对水生动物也只是轻微的中等毒性。因此，它是进行害虫综合治理的首选。
目前，多杀菌素仍由刺糖多孢菌通过有氧发酵进行生产。尽管有多个专利报道通过改良培养基或发酵罐的控制方法来提升多杀菌素的产量，但由于菌种本身发酵产量不佳，因此通过发酵优化也很难实现规模化生产，因此我国至今尚未实现该品种的国产化。
因此，急需产量较高的菌株以促进多杀菌素的推广及应用。
发明内容
本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于发现一种新的刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa)菌株J1-DS1902，利用该菌株发酵制备多杀菌素类化合物，相比野生型的刺糖多孢菌，大大提高了多杀菌素产量。
为此本发明第一方面提供一株刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa)J1-DS1902。根据本发明的实施例，所述刺糖多孢菌的保藏号为CCTCC NO:M 2021277。
现有的制备多杀菌素类化合物的方法，通常是通过利用刺糖多孢菌进行有氧发酵制得，然而该方法生产多杀菌素类化合物的产量较低，提高了工业化制备多杀菌素类化合物的成本。发明人通过从大量的菌株中筛选出一株多杀菌素高产菌株刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa)J1-DS1902，利用其发酵制备多杀菌素摇瓶产量高达2.9g/L。因此，刺糖多孢菌J1-DS1902可作为多杀菌素高产的工业化菌株进行开发。
刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa)J1-DS1902，已于2021年3月25日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC,地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号)，保藏中心登记入册编号CCTCC NO:M 2021277。
本发明第二方面提供第一方面所述的刺糖多孢菌或其发酵产物或其菌悬液或其培养液在制备多杀菌素类化合物中的用途。
根据本发明的实施例，所述多杀菌素类化合物包括多杀菌素A和多杀菌素D。
多杀菌素A和多杀菌素D的化学结构式为：
上述结构通式中，当R取代基为H时，则上述结构式展示的是多杀菌素A；当R取代基为-CH3时，则上述结构式展示的是多杀菌素D。
本发明第三方面提供一种多杀菌素类化合物的制备方法。根据本发明的实施例，所述制备方法包括将第一方面所述的刺糖多孢菌进行发酵培养，以便获取多杀菌素类化合物。
根据本发明的实施例，所述多杀菌素类化合物包括多杀菌素A和多杀菌素D。
本发明第四方面提供第一方面所述的刺糖多孢菌或其发酵产物或其菌悬液或其培养液在制备生物制剂中的用途。
本发明第五方面提供一种生物制剂。根据本发明的实施例，所述生物制剂包括第一方面所述的刺糖多孢菌和/或其发酵产物和/或其菌悬液和/或其培养液。
本发明第六方面提供一种生物杀虫剂。根据本发明的实施例，所述生物杀虫剂包括第一方面所述的刺糖多孢菌和/或其发酵产物和/或其菌悬液和/或其培养液。
含有刺糖多孢菌J1-DS1902和/或其发酵产物和/或其菌悬液和/或其培养液的生物杀虫剂，能有效地控制鳞翅目、双翅目和缨翅目的害虫，可以很好地防治鞘翅目和直翅目中某些大量吞食叶片的害虫种类。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
保藏信息：
菌株名称：Saccharopolyspora spinosa J1-DS1902
保藏日期：2021年3月25日
保藏单位：中国典型培养物保藏中心
保藏编号：CCTCC NO:M 2021277
地址：中国.武汉.武汉大学
附图说明
本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
图1显示了利用LC-MS检测发酵物的成分的结果，上图为标准品多杀菌素D的检测结果，下图为检测实施例1中发酵物的结果；
图2显示了利用LC-MS检测发酵物的成分的结果，上图为标准品多杀菌素A的检测结果，下图为检测实施例1中发酵物的结果；
图3显示了利用HPLC分析多杀菌素A和多杀菌素D的产量结果。
具体实施方式
术语
本发明中所述的“发酵产物”是指刺糖多孢菌J1-DS1902经发酵培养以后产生的化合物。
本发明中所述的“菌悬液”是指包含刺糖多孢菌J1-DS1902及其发酵产物的溶液。
本发明中所述的“培养液”是指刺糖多孢菌J1-DS1902在培养基中发酵后的溶液。
本发明中所述的“生物制剂”是指包含刺糖多孢菌J1-DS1902和/或其发酵产物和/或其菌悬液和/或其培养液的试剂。
本发明中所述的“生物杀虫剂”是指包含刺糖多孢菌J1-DS1902和/或其发酵产物和/或其菌悬液和/或其培养液的用于杀虫的制剂。
根据本发明的实施例，本发明提供一株刺糖多孢菌(Saccharopolysporaspinosa)J1-DS1902，所述刺糖多孢菌的保藏号为CCTCC NO:M 2021277。
现有的制备多杀菌素类化合物的方法，利用刺糖多孢菌生产多杀菌素类化合物的产量较低，导致工业化制备多杀菌素类化合物的成本较高。发明人从大量的菌株中通过产多杀菌素的条件筛选以及紫外多轮诱变，获得一株多杀菌素高产菌株刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa)J1-DS1902，利用其发酵制备多杀菌素摇瓶产量高达2.9g/L。因此，刺糖多孢菌J1-DS1902可作为多杀菌素高产的工业化菌株进行开发。
根据本发明的实施例，本发明提供的刺糖多孢菌J1-DS1902或其发酵产物或其菌悬液或其培养液能够用于制备多杀菌素A和多杀菌素D。
根据本发明的实施例，本发明提供一种多杀菌素类化合物的制备方法，所述制备方法包括将所述的刺糖多孢菌J1-DS1902进行发酵培养，以便获取多杀菌素A和多杀菌素D。
本发明中通过发酵培养刺糖多孢菌J1-DS1902制备多杀菌素类化合物的方法，其中对于发酵培养条件以及培养基并没有特别的限制，采用本领域常规的适用于刺糖多孢菌有氧发酵生产多杀菌素类化合物的培养基以及培养条件即可。
适用于刺糖多孢菌有氧发酵生产多杀菌素类化合物的培养基例如可以是以下组成的培养基：每100mL蒸馏水中加入8g的葡萄糖、2g的棉籽饼粉、1g的蛋白粉、0.5g的酵母粉、0.4g的柠檬酸三钠、0.2g的磷酸氢二钾、0.3g的碳酸钙、0.2g的硫酸铵、5g的菜籽油。
根据本发明的实施例，本发明提供刺糖多孢菌J1-DS1902或其发酵产物或其菌悬液或其培养液在制备生物制剂中的用途。
根据本发明的实施例，本发明提供一种生物制剂，所述生物制剂包括所述的刺糖多孢菌J1-DS1902和/或其发酵产物和/或其菌悬液和/或其培养液。
本发明提供刺糖多孢菌J1-DS1902或其发酵产物或其菌悬液或其培养液能够用于制备生物制剂，根据生物制剂的用途需要，相应的可以加入一些其他的组分，以增强生物制剂的效果。
本发明提供一种生物杀虫剂，所述生物杀虫剂包括所述的刺糖多孢菌J1-DS1902和/或其发酵产物和/或其菌悬液和/或其培养液。
含有刺糖多孢菌J1-DS1902和/或其发酵产物和/或其菌悬液和/或其培养液的生物杀虫剂，能有效地控制鳞翅目、双翅目和缨翅目的害虫，可以很好地防治鞘翅目和直翅目中某些大量吞食叶片的害虫种类。为提升该生物杀虫剂的药效，也可以在所述生物杀虫剂中加入其他的有效成分，与刺糖多孢菌J1-DS1902发酵生产的多杀菌素共同作用，更高效地控制、杀死和防治害虫。
下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1：刺糖多孢菌J1-DS1902的获取
1、产多杀菌素的菌株的获取
从湖北省、四川省等地区采集土壤样品，将其进行放线菌分离，分离方法为：将土壤用无菌水分装成0.1g/mL，用无菌水将土壤进行悬浮后加入10颗玻璃珠，然后将其按照递减10倍进行逐级稀释，每个浓度涂布10块分离培养基。在最终能长出的菌落中，挑选菌落形态为有孢子产生的链霉菌样样本进行保种，共收集105株菌。
其中分离培养基的基础配方为：在1L的蒸馏水中加入5g的葡萄糖、3g的酵母提取物、10g的酶解酪蛋白(N-Z amine type A)，混合充分溶解后用NaOH调节pH为7.0；按照200mL分装,每瓶加入琼脂4g；115℃灭菌30min。灭菌完成后冷却至65℃左右，加入萘啶酮酸至终浓度25μg/mL以抑制革兰氏阴性菌生长，制霉菌素至终浓度50μg/mL以抑制真菌生长。
将上述105株菌中每5株菌进行混合发酵，发酵方法如下：
(1)种子培养基：每100mL蒸馏水中加入1g的葡萄糖、1g的酵母提取物、0.2g的N-Zamine typeA、2.5g的棉籽饼粉、2g的玉米淀粉、0.2g的七水硫酸镁、0.1g的硫酸铵，混合充分溶解后用NaOH调节pH为7.0；种子培养每瓶分装25mL种子培养基；121℃灭菌30min。
(2)发酵培养基：每100mL蒸馏水中加入8g的葡萄糖、2g的棉籽饼粉、1g的蛋白粉、0.5g的酵母粉、0.4g的柠檬酸三钠、0.2g的磷酸氢二钾、0.3g的碳酸钙、0.2g的硫酸铵、5g的菜籽油；混合充分溶解后用NaOH调节pH为7.0；121℃灭菌30min；发酵培养每瓶分装25mL发酵培养基；注：碳酸钙分装到每瓶。
(3)发酵培养
将每个分离菌株挑取单菌落划菌于另一新的分离培养基平板生长，待生长到适合状态，划取1cm*1cm左右大小的菌块于种子培养基中，5株分离菌株接种于一个培养瓶(共21瓶)，250rpm、28℃、60％的湿度下培养一级种子96h后镜检观察一级种子是否染菌，以及种子的生长状态，未染菌且生长状态良好则按1％的转接量转接二级种子；二级种子培养条件同一级种子，培养到60h的时候进行二级种子镜检并观察种子是否染菌，若正常进行发酵的转接，按5％的转接量转接，每瓶菌做三个平行。二级种子按5％的转接量转接发酵，每瓶种子设三个平行；发酵培养条件为：250rpm、28℃、湿度60％的条件下培养12天。其中，一级种子和二级种子均指(1)中的种子培养基。
(4)筛选产多杀菌素的菌株
参考文献(Gao-Yi,Tan,Kunhua,et al.Heterologous Biosynthesis ofSpinosad:An Omics-Guided Large Polyketide Synthase Gene ClusterReconstitution in Streptomyces[J].Acs Synth Biol,2017)的检测方法，分析发酵产物中是否含有多杀菌素。发现在第19瓶中有多杀菌素产生，将第19瓶的5株菌按照上述(3)中发酵方法进行逐一发酵，最终发现1株可以产生多杀菌素的菌株，其中产量分别为73.2mg/L，将其分别命名为J1-DS1900。
2、高产多杀菌素的菌株的获取
将J1-DS1900的菌株斜面用生理盐水制备成孢子悬液，脱脂棉过滤后调整孢子浓度为10-6～10-7个/mL，取单孢子悬液10mL于无菌的直径9cm平皿内，进行第一轮诱变，具体为在距15W紫外灯20cm处照射30s，然后按照递减10倍进行逐级稀释涂板。
将每20株菌分为一组，按照上述(3)中培养方法进行发酵培养，并通过上述(4)中筛选方法进行菌株筛选，共筛选约3000株菌，将其中产量最高的1组，共20株选为初步筛选菌株。将这20株菌株进行混合再按照上述第一轮诱变方法进行第二轮诱变，同样筛选约3000株，选最高的一组20株为待筛选菌株(分别命名为J1-DS1901—J1-DS1920)。
将这20株菌株进行逐一发酵，其中最高产量的菌株为J1-DS1902，参考文献(Gao-Yi,Tan,Kunhua,et al.Heterologous Biosynthesis of Spinosad:An Omics-GuidedLarge Polyketide Synthase Gene Cluster Reconstitution in Streptomyces[J].AcsSynth Biol,2017.)的检测方法，利用LC-MS检测发酵物的成分，结果(图1和图2)显示，在发酵液中能检测到多杀菌素A和多杀菌素D，随后用HPLC(图3)分析，多杀菌素A和多杀菌素D的摇瓶产量总和约为2.9g/L，其中A组分约占85％，D组分约占15％。
3.菌株J1-DS1902的鉴定
菌株J1-DS1902的16s rRNA序列如SEQ ID NO:1所示，与GENBANK ACCESSION NR_024839.1的序列相似性最高，相似性为99％。根据以上结果，鉴定菌株J1-DS1902属于刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa)。
刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa)J1-DS1902的16s rRNA序列如下所示：
AAAGGAGGTGATCCAGCCGCACCTTCCGGTACGGCTACCTTGTTACGACTTCGTCCCAATCGCCAGTCCCACCTTCGACCACTCCCCCCACAAGGGTTGGGCCATGGGCTTCGGGTGTTACCGACTTTCATGACGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCAGCAATGCTGATCTGCGATTACTAGCGACTCCGACTTCACGAGGTCGAGTTGCAGACCCCGATCCGAACTGAGACCGGCTTTAAGGGATTCGCTCCACCTCACGATATCGCCACCCTGTACCAGCCATTGTAGCATGTGTGAAGCCCTGGGCATAAGGGGCATGATGACTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGAGTTGACCCCGGCAGTCCCCACGAGTCCCCGGCATAACCCGCTGGCAACATAGGGCAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAGCCATGCACCACCTGTACACCAACCACAAGGGAAACCCCATCTCTGGAGCTGTCTAGTGCATGTCAAACCCAGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCATCGAATTAATCCACATGCTCCGCCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTCGAGTTTTAGCCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGGGCGCTTAATGCGTTAGCTACGGCACGGAAACAGTGGAACCCATCCCCACACCTAGCGCCCAACGTTTACGGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTCGCTCCCCACGCTTTCGCTCCTCAGCGTCAGTATCGGCCCAGAGACCCGCCTTCGCCACCGGTGTTCCTCCTGATATCTGCGCATTTCACCGCTACACCAGGAATTCCAGTCTCCCCTACCGAACTCAAGTCTGCCCGTATCGACCGCAAGCCCACAGTTAAGCTGCAGGTTTTCACGGCCGACGCGACAAACCGCCTACGAGCTCTTTACGCCCAATAAATCCGGACAACGCTCGCACCCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGGTGCTTCTTCTACACCTACCGTCACCCGAAGGCTTCGTCGATGTCGAAAGAGGTTTACAACCCGAAGGCCGTCATCCCCACGCGGCGTTGCTGCGTCAGGCTTTCGCCCATTGCGCAAGATTCCCCACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAGTGTGGCCGGTCACCCTCTCAGGCTAAGCTACCCGTCGTCGCCTTGGTAGGCCATCACCCCACCAACAAGCTGATAGGCCGCGGACTCATCCTGCACCGCCAGAACTTTCCACACACCACCATGCGATAATGTGTCATATCCGGTATTAGACCCCGTTTCCAAGGCTTATCCCAGAGTGCAGGGCAGATTACCCACGTGTTACTCACCCGTTCGCCACTCATCCACACCCGAAGATGCTTCAGCGTTCGACTTGCATGTGTTAAGCACGCCGCCAGCGTTCGTCCTGAGCCAGGATCAAACTCTCCAA
4.菌株J1-DS1902的保藏
菌株J1-DS1902，属于刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa)，已于2021年3月25日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC,地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号)，保藏中心登记入册编号CCTCC NO:M 2021277。
实施例2：刺糖多孢菌J1-DS1902和野生型刺糖多孢菌菌株产多杀菌素能力比较
1、发酵培养野生型刺糖多孢菌菌株
获取刺糖多孢菌的野生型菌株NRRL18395(美国农业研究菌种保藏中心)，按照实施例1中的发酵方法对野生型刺糖多孢菌进行发酵培养。
2、检测野生型刺糖多孢菌NRRL18395的产多杀菌素能力
参考文献(Gao-Yi,Tan,Kunhua,et al.Heterologous Biosynthesis ofSpinosad:An Omics-Guided Large Polyketide Synthase Gene ClusterReconstitution in Streptomyces[J].Acs Synth Biol,2017)的检测方法，分析发酵产物中是否含有多杀菌素，并检测发酵产物中多杀菌素的产量为78.7mg/L。
3、刺糖多孢菌J1-DS1902与野生型刺糖多孢菌NRRL18395的产多杀菌素能力对比
野生型刺糖多孢菌产量为78.7mg/L，其中A组分约占84％，D组分约在16％。该结果说明，本发明筛选获取的J1-DS1902的产多杀菌素能力显著高于野生型刺糖多孢菌，且利用本发明提供的刺糖多孢菌J1-DS1902发酵制备多杀菌素产量高达2.9g/L。因此，刺糖多孢菌J1-DS1902可作为多杀菌素高产的工业化菌株进行开发。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。
SEQUENCE LISTING
<110> 武汉臻智生物科技有限公司
<120> 利用刺糖多孢菌菌株J1-DS1902制备多杀菌素类化合物的方法
<130> BI3210546
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1516
<212> DNA
<213> 刺糖多孢菌（Saccharopolyspora spinosa）
<400> 1
aaaggaggtg atccagccgc accttccggt acggctacct tgttacgact tcgtcccaat 60
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tgctggcacg tagttagccg gtgcttcttc tacacctacc gtcacccgaa ggcttcgtcg 1080
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cagtcccagt gtggccggtc accctctcag gctaagctac ccgtcgtcgc cttggtaggc 1260
catcacccca ccaacaagct gataggccgc ggactcatcc tgcaccgcca gaactttcca 1320
cacaccacca tgcgataatg tgtcatatcc ggtattagac cccgtttcca aggcttatcc 1380
cagagtgcag ggcagattac ccacgtgtta ctcacccgtt cgccactcat ccacacccga 1440
agatgcttca gcgttcgact tgcatgtgtt aagcacgccg ccagcgttcg tcctgagcca 1500
ggatcaaact ctccaa 1516
Claims (8)
1.一株刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa)J1-DS1902，其特征在于，其保藏号为CCTCC NO:M 2021277。
2.权利要求1所述的刺糖多孢菌或其发酵产物或其菌悬液或其培养液在制备多杀菌素类化合物中的用途。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述多杀菌素类化合物包括多杀菌素A和多杀菌素D。
4.一种多杀菌素类化合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括将权利要求1所述的刺糖多孢菌进行发酵培养，以便获取多杀菌素类化合物。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述多杀菌素类化合物包括多杀菌素A和多杀菌素D。
6.权利要求1所述的刺糖多孢菌或其发酵产物或其菌悬液或其培养液在制备生物制剂中的用途。
7.一种生物制剂，其特征在于，所述生物制剂包括权利要求1所述的刺糖多孢菌和/或其发酵产物和/或其菌悬液和/或其培养液。
8.一种生物杀虫剂，其特征在于，所述生物杀虫剂包括权利要求1所述的刺糖多孢菌和/或其发酵产物和/或其菌悬液和/或其培养液。
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Citations (3)
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|---|---|---|---|---|
| CN102337219A (zh) * | 2010-07-19 | 2012-02-01 | 牡丹江佰佳信生物科技有限公司 | 一种刺糖多孢菌菌株、其用途及制备多杀霉素的方法 |
| CN102676393A (zh) * | 2011-12-16 | 2012-09-19 | 天津北洋百川生物技术有限公司 | 产多杀菌素刺糖多孢菌及其培养和应用 |
| CN111849807A (zh) * | 2020-06-30 | 2020-10-30 | 北大方正集团有限公司 | 一种刺糖多孢菌ds190375及其发酵产物、菌剂、发酵与筛选方法及应用 |
-
2021
- 2021-06-17 CN CN202110671480.4A patent/CN113337437A/zh active Pending
Patent Citations (3)
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