CN112899198B - 复合微生物菌剂及其制备和在快速消减养殖场环境中氨气和硫化氢的应用 - Google Patents

复合微生物菌剂及其制备和在快速消减养殖场环境中氨气和硫化氢的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及微生物菌种及其应用，特别是指一种复合微生物菌剂及其制备和在快速消减养殖场环境中氨气和硫化氢的应用。本发明提供了一种含有异常威克汉姆酵母和植物乳杆菌的复合微生物菌剂及其制备方法，该微生物菌剂可以对畜禽场环境的氨气和硫化氢起到快速有效的消减作用，使用本发明中的复合微生物菌剂后氨气和硫化氢等有害物质含量符合行业标准的相关要求，具有广阔的应用前景。

Description

复合微生物菌剂及其制备和在快速消减养殖场环境中氨气和 硫化氢的应用
技术领域
本发明涉及微生物菌种及其应用，特别是指一种复合微生物菌剂及其制备和在快速消减养殖场环境中氨气和硫化氢的应用。
背景技术
恶臭污染是世界公认的七大环境公害之一，作为畜禽养殖大国，养殖场散发的臭味成为我国农业污染的主要来源之一，养殖场臭味不仅影响周边环境，还直接影响牲畜和饲养员健康。恶臭中的氨气和硫化氢为可溶或易溶于水，这些有害气体极易吸附在牲畜乃至人的呼吸***粘膜上，动物如果长时间接触和生活在有害气体环境中，免疫***功能会减弱，机体功能会受到不可逆的损伤，造成生产性能慢慢下降。养殖场的恶臭问题一直是污染防治的重点和难点，制约着畜禽养殖行业的绿色健康发展。
目前，国内外常规除臭技术以化学、物理技术为主。这两种技术虽然可以达到有效除臭的效果，但也存在使用成本高，影响动物健康，易造成二次污染等问题。生物除臭法是上世纪50年代发展起来的一种治理恶臭污染的方法，该方法是利用微生物的生理代谢活动来降解恶臭物质使之转化为无臭物质，具有处理效率高、无二次污染、便于操作、费用低廉等特点。虽然以环境微生物应用为核心的生物除臭方法是当前的发展方向，但目前市场上的菌剂大多存在菌株浓度虚高，对于养殖场环境中氨气和硫化氢的去除效果低且不稳定等问题。
申请人检索的背景文献包括：
公开号为CN102851210A的专利文献中公开了一种畜禽粪污微生物除臭菌剂、其制备方法及其应用，该菌剂含有保藏号为CGMCC No.5982的酵母菌种杰丁毕赤酵母Pichiajadinii和保藏号为CGMCC No.5984的酵母菌种酿酒酵母Saccharomycescerevisiae。将该菌剂添加到猪粪中，15天后氨气的降低率为44％～51％，硫化氢的降低率为33％～38％。
发明内容
本发明的目的之一是提供一种复合微生物菌剂。
其中含有如下菌体数量份数的原料：
异常威克汉姆酵母或含有其的发酵液1～3；
植物乳杆菌或含有其的发酵液1～3；
所述的复合微生物菌剂中总菌数≥1×109个/ml，异常威克汉姆酵母的拉丁文名称为Wickerhamomyces anomalus，其保藏编号为CGMCC No.20654；植物乳杆菌的拉丁文名称为lactobacillus plantarum，其保藏编号为CGMCC No.20656。
本发明中的菌种——异常威克汉姆酵母是从生猪养殖粪污中分离获得的，该菌株于2020年9月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，分类命名为异常威克汉姆酵母(Wickerhamomyces anomalus)，保藏编号CGMCC No.20654，保藏机构地址位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所(简称CGMCC)。
该菌种的菌落形态及生理生化特性如下：
该菌株在YPD培养基平皿上培养，菌落形态呈圆屋顶状，灰白色，不透明，表面平滑，边缘较整齐，粘稠；单细胞为椭圆形或纺锤形，个体大，单一或聚集分布，菌株的生理生化特征如表1，通过菌株形态学特征、生理生化特征和16S rRNA序列分析，该菌株被鉴定为异常威克汉姆酵母菌，其拉丁文名称为Wickerhamomyces anomalus。
菌株的生长特征如下：
拉丁文名称为Wickerhamomyces anomalus的异常威克汉姆酵母CGMCC No.20654，可以在20℃～40℃下生长，最适温度为28～35℃，兼性厌氧，最适的pH为6.0～6.5。整个生长周期中延迟期特别短，增殖速度快，能快速进入对数期(6～30小时)，培养30小时后进入稳定期(30～54小时)，培养到54小时后逐渐进入衰退期。
表1异常威克汉姆酵母菌(Wickerhamomyces anomalus)的生理生化实验
Figure GDA0003590581670000021
Figure GDA0003590581670000031
注：“+”表示阳性或生长；“-”表示不生长或阴性。
该菌株的筛选方法如下：
1、菌株的分离
将采集的样品各取10g，放入到含有灭菌玻璃珠和50ml生理盐水的三角瓶中，于30℃、160转/分钟的转速下震荡2小时，静置20分钟，取上清液1ml，用无菌水稀释成10～4～10～6等不同浓度梯度，吸取不同稀释度悬液100μl涂布在YPD琼脂培养基上，30℃培养48小时，分离出酵母菌47株。
2.菌株的初筛
取10mL NH3选择性培养基装于PA瓶中，高压灭菌后注入10μL体积百分比浓度为25％的氨水，将分离得到的菌株接种至培养基，在摇床上30℃、160转/分钟培养48小时，按体积百分比为3％接种量接种至PA瓶中，于30℃、160转/分钟摇床上恒温培养，观察菌液变化，若菌液浑浊表明该菌株具有利用氨气的能力。
3.菌株的复筛
通过测定氨气释放量的变化进行菌株的复筛，取200g新鲜猪粪置于体积为1L的锥形瓶中，将初选的菌株接种于YPD液体培养基培养，按猪粪质量的10％加入锥形瓶中，用保鲜膜密封后，置于30℃恒温培养箱中发酵培养3天。对照组加入等量灭菌培养基，每个处理重复3次。用气体检测仪测定氨气的释放量。
最终选得除臭效果最好的菌株Y21，对其进行进一步的鉴定。
本发明中的菌种——植物乳杆菌是从肉牛养殖场玉米秸秆青贮饲料中筛选得到，该菌株于2020年9月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，分类命名为植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)，保藏编号CGMCC No.20656，保藏机构地址位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所(简称CGMCC)。
该菌种的菌落形态及生长特性如下：
在MRS固体培养基上生长菌落形态为圆形，稍凸起，乳白色，菌落微小，不透明，表面光滑易挑起；单细胞呈杆状，两端圆形，无芽孢，呈单一或链状排列。
该菌株的生理生化特征如表2，通过菌株形态学特征、生理生化特征和16S rRNA序列分析，该菌株被鉴定为植物乳杆菌，其拉丁文名称为lactobacil lus plantarum。
菌株的生长特征如下：
拉丁文名称为lactobacillus plantarum的植物乳杆菌CGMCC No.20656，可以在20℃～40℃下生长，最适温度为32℃～40℃，兼性厌氧，最适的pH为6.0～6.5。整个生长周期中延迟期特别短，增殖速度快，能快速进入对数期(6～36小时)，培养36小时后进入稳定期(36～60小时)，培养到60小时时未见衰退期。
表2植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)的生理生化实验
Figure GDA0003590581670000041
Figure GDA0003590581670000051
本发明的目的之二是提供复合微生物菌剂的制备方法。
本发明中的复合微生物菌剂是将拉丁文名称为Wickerhamomyces anoma lus、保藏编号为CGMCC No.20654的异常威克汉姆酵母，以及拉丁文名称为lactobacillusplantarum，保藏编号为CGMCC No.20656的植物乳杆菌分别接种于灭菌后且含有碳源、氮源及无机盐的培养基中进行通气培养制成发酵液，将上述发酵液按比例复配或纯化后按比例复配制成。
复合微生物菌剂的制备方法包括如下工艺步骤：
(1)菌种活化
将拉丁文名称为Wickerhamomyces anomalus、保藏编号为CGMCC No.20654的异常威克汉姆酵母，以及拉丁文名称为lactobacillus plantarum，保藏编号为CGMCC No.20656的植物乳杆菌分别接种在相应的无菌液体培养基上，培养至生长对数期，得到相应的种子液；
(2)菌种扩大培养
将步骤(1)得到的种子液按照体积比10％的接种量分别接种于相应的无菌扩大培养基中，扩大培养得分别含有异常威克汉姆酵母菌以及植物乳杆菌的发酵液；
(3)菌种复配
对步骤(2)得到的分别含有异常威克汉姆酵母菌以及植物乳杆菌的发酵液进行菌落计数，按照菌数比例混合制成复合微生物菌剂。
所述的步骤(1)中培养异常威克汉姆酵母的液体培养基选用YPD培养基，培养植物乳杆菌的液体培养基选用MRS培养基，异常威克汉姆酵母菌的活化培养条件为：温度28℃～35℃，转速为160转/分钟摇床培养至生长对数期；植物乳杆菌的活化培养条件为：温度30℃～37℃，转速为160转/分钟摇床培养培养至生长对数期。
所述的步骤(2)中培养异常威克汉姆酵母的扩大培养基选用如下质量百分含量的原料组成：红糖4.0％～7.0％，硫酸铵0.2％，磷酸二氢钾0.2％，余量为水；培养异常威克汉姆酵母的条件为：温度28℃～35℃，转速为160～200转/分钟，摇床培养培养36～48小时；步骤(2)中培养植物乳杆菌的扩大培养基选用如下质量百分含量的原料组成：红糖3.0％～5.0％，豆粕1.0％～1.5％，酵母粉1.0％～1.5％，乙酸钠0.5％，硫酸镁0.05％，硫酸锰0.05％，余量为水；培养植物乳杆菌的条件为：温度30℃～37℃，转速为160～200转/分钟，摇床培养培养24～36小时。
本发明的目的之三是提供复合微生物菌剂在快速消减养殖场环境中氨气和硫化氢的应用。
本发明所取得的实质性特点和显著的技术进步在于：
1、本发明筛选获得异常威克汉姆酵母菌及植物乳杆菌，上述菌种对氨气和硫化氢有较为明显或优异的消减去除效果；且对于植物乳杆菌而言上述功能属于首次发现。
2、本发明通过对异常威克汉姆酵母菌和植物乳杆菌进行独立培养后混配发现，两株菌之间不存在拮抗反应，且可以显著提升去除氨气和硫化氢的效果。经实际检测，本发明所制备的微生物菌剂对氨气和硫化氢的去除率分别达到63.27％和67.65％(最高可达78.43％和79.7％)。采用本发明制备的微生物菌剂处理后氨气和硫化氢的浓度低于《畜禽场环境质量标准》(NY/T388～1999)中规定的数值且明显优于申请人所了解的现有技术，对于净化养殖环境效果显著，安全无害且具有广阔的应用前景。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明做进一步描述，但不作为对本发明的限定，本发明的保护范围以权利要求记载的内容为准，任何依据本发明的说明书所做出的等效手段替换，均不脱离本发明的保护范围。
实施例1
复合微生物菌剂，其中含有如下菌体数量份数的原料：
异常威克汉姆酵母或含有其的发酵液3；
植物乳杆菌或含有其的发酵液1；
所述的复合微生物菌剂中总菌数≥1×109个/ml，异常威克汉姆酵母的拉丁文名称为Wickerhamomyces anomalus，其保藏编号为CGMCC No.20654；植物乳杆菌的拉丁文名称为lactobacillus plantarum，其保藏编号为CGMCC No.20656。
复合微生物菌剂的制备方法，是将拉丁文名称为Wickerhamomyces anom alus、保藏编号为CGMCC No.20654的异常威克汉姆酵母，以及拉丁文名称为lactobacillusplantarum，保藏编号为CGMCC No.20656的植物乳杆菌分别接种于灭菌后且含有碳源、氮源及无机盐的培养基中进行通气培养制成发酵液，将上述发酵液按比例复配或纯化后按比例复配制成。
上述制备方法包括如下工艺步骤：
(1)菌种活化
将拉丁文名称为Wickerhamomyces anomalus、保藏编号为CGMCC No.20654的异常威克汉姆酵母，以及拉丁文名称为lactobacillus plantarum，保藏编号为CGMCC No.20656的植物乳杆菌分别接种在相应的无菌液体培养基上，培养至生长对数期，得到相应的种子液；
(2)菌种扩大培养
将步骤(1)得到的种子液按照体积比10％的接种量分别接种于相应的无菌扩大培养基中，扩大培养得分别含有异常威克汉姆酵母菌以及植物乳杆菌的发酵液；
(3)菌种复配
对步骤(2)得到的分别含有异常威克汉姆酵母菌以及植物乳杆菌的发酵液进行菌落计数，按照菌数比例混合制成复合微生物菌剂。
所述的步骤(1)中培养异常威克汉姆酵母的液体培养基选用YPD培养基，培养植物乳杆菌的液体培养基选用MRS培养基，异常威克汉姆酵母菌的活化培养条件为：温度35℃，转速为160转/分钟摇床培养至生长对数期；植物乳杆菌的活化培养条件为：温度37℃，转速为160转/分钟摇床培养培养至生长对数期。
所述的步骤(2)中培养异常威克汉姆酵母的扩大培养基选用如下质量百分含量的原料组成：红糖7.0％，硫酸铵0.2％，磷酸二氢钾0.2％，余量为水；培养异常威克汉姆酵母的条件为：温度35℃，转速为200转/分钟，摇床培养培养48小时；步骤(2)中培养植物乳杆菌的扩大培养基选用如下质量百分含量的原料组成：红糖5.0％，豆粕1.5％，酵母粉1.5％，乙酸钠0.5％，硫酸镁0.05％，硫酸锰0.05％，余量为水；培养植物乳杆菌的条件为：温度37℃，转速为200转/分钟，摇床培养培养36小时。
复合微生物菌剂在快速消减养殖场环境中氨气和硫化氢的应用。
实施例2
本实施例与实施例1的区别在于：
复合微生物菌剂，其中含有如下菌体数量份数的原料：
异常威克汉姆酵母或含有其的发酵液1；
植物乳杆菌或含有其的发酵液3；
复合微生物菌剂的制备方法，是将异常威克汉姆酵母以及植物乳杆菌分别接种于灭菌后且含有碳源、氮源及无机盐的培养基中进行通气培养制成发酵液，将上述发酵液按比例复配或纯化后按比例复配制成。
上述制备方法包括如下工艺步骤：
(1)菌种活化
将异常威克汉姆酵母以及植物乳杆菌分别接种在相应的无菌液体培养基上，培养至生长对数期，得到相应的种子液；
(2)菌种扩大培养
将步骤(1)得到的种子液按照体积比10％的接种量分别接种于相应的无菌扩大培养基中，扩大培养得分别含有异常威克汉姆酵母菌以及植物乳杆菌的发酵液；
(3)菌种复配
对步骤(2)得到的分别含有异常威克汉姆酵母菌以及植物乳杆菌的发酵液进行菌落计数，按照菌数比例混合制成复合微生物菌剂。
所述的步骤(1)中培养异常威克汉姆酵母的液体培养基选用YPD培养基，培养植物乳杆菌的液体培养基选用MRS培养基，异常威克汉姆酵母菌的活化培养条件为：温度28℃，转速为160转/分钟摇床培养至生长对数期；植物乳杆菌的活化培养条件为：温度30℃，转速为160转/分钟摇床培养培养至生长对数期。
所述的步骤(2)中培养异常威克汉姆酵母的扩大培养基选用如下质量百分含量的原料组成：红糖4.0％，硫酸铵0.2％，磷酸二氢钾0.2％，余量为水；培养异常威克汉姆酵母的条件为：温度28℃，转速为160转/分钟，摇床培养培养36小时；步骤(2)中培养植物乳杆菌的扩大培养基选用如下质量百分含量的原料组成：红糖3.0％，豆粕1.0％，酵母粉1.0％，乙酸钠0.5％，硫酸镁0.05％，硫酸锰0.05％，余量为水；培养植物乳杆菌的条件为：温度30℃，转速为160转/分钟，摇床培养培养24小时。
其余内容同实施例1。
实施例3
本实施例与实施例1的区别在于：
复合微生物菌剂，其中含有如下菌体数量份数的原料：
异常威克汉姆酵母或含有其的发酵液1.5；
植物乳杆菌或含有其的发酵液1；
复合微生物菌剂的制备方法，是将异常威克汉姆酵母以及植物乳杆菌分别接种于灭菌后且含有碳源、氮源及无机盐的培养基中进行通气培养制成发酵液，将上述发酵液按比例复配或纯化后按比例复配制成。
上述制备方法包括如下工艺步骤：
(1)菌种活化
将异常威克汉姆酵母以及植物乳杆菌分别接种在相应的无菌液体培养基上，培养至生长对数期，得到相应的种子液；
(2)菌种扩大培养
将步骤(1)得到的种子液按照体积比10％的接种量分别接种于相应的无菌扩大培养基中，扩大培养得分别含有异常威克汉姆酵母菌以及植物乳杆菌的发酵液；
(3)菌种复配
对步骤(2)得到的分别含有异常威克汉姆酵母菌以及植物乳杆菌的发酵液进行菌落计数，按照菌数比例混合制成复合微生物菌剂。
所述的步骤(1)中培养异常威克汉姆酵母的液体培养基选用YPD培养基，培养植物乳杆菌的液体培养基选用MRS培养基，异常威克汉姆酵母菌的活化培养条件为：温度32℃，转速为160转/分钟摇床培养至生长对数期；植物乳杆菌的活化培养条件为：温度34℃，转速为160转/分钟摇床培养培养至生长对数期。
所述的步骤(2)中培养异常威克汉姆酵母的扩大培养基选用如下质量百分含量的原料组成：红糖5.5％，硫酸铵0.2％，磷酸二氢钾0.2％，余量为水；培养异常威克汉姆酵母的条件为：温度32℃，转速为180转/分钟，摇床培养培养42小时；步骤(2)中培养植物乳杆菌的扩大培养基选用如下质量百分含量的原料组成：红糖4.0％，豆粕1.3％，酵母粉1.3％，乙酸钠0.5％，硫酸镁0.05％，硫酸锰0.05％，余量为水；培养植物乳杆菌的条件为：温度34℃，转速为180转/分钟，摇床培养培养30小时。
其余内容同实施例1。
实施例4
本实施例与实施例1的区别在于：
复合微生物菌剂，其中含有如下菌体数量份数的原料：
异常威克汉姆酵母或含有其的发酵液2.5；
植物乳杆菌或含有其的发酵液1.2；
复合微生物菌剂的制备方法，是将异常威克汉姆酵母以及植物乳杆菌分别接种于灭菌后且含有碳源、氮源及无机盐的培养基中进行通气培养制成发酵液，将上述发酵液按比例复配或纯化后按比例复配制成。
上述制备方法包括如下工艺步骤：
(1)菌种活化
将异常威克汉姆酵母以及植物乳杆菌分别接种在相应的无菌液体培养基上，培养至生长对数期，得到相应的种子液；
(2)菌种扩大培养
将步骤(1)得到的种子液按照体积比10％的接种量分别接种于相应的无菌扩大培养基中，扩大培养得分别含有异常威克汉姆酵母菌以及植物乳杆菌的发酵液；
(3)菌种复配
对步骤(2)得到的分别含有异常威克汉姆酵母菌以及植物乳杆菌的发酵液进行菌落计数，按照菌数比例混合制成复合微生物菌剂。
所述的步骤(1)中培养异常威克汉姆酵母的液体培养基选用YPD培养基，培养植物乳杆菌的液体培养基选用MRS培养基，异常威克汉姆酵母菌的活化培养条件为：温度29℃，转速为160转/分钟摇床培养至生长对数期；植物乳杆菌的活化培养条件为：温度31℃，转速为160转/分钟摇床培养培养至生长对数期。
所述的步骤(2)中培养异常威克汉姆酵母的扩大培养基选用如下质量百分含量的原料组成：红糖4.5％，硫酸铵0.2％，磷酸二氢钾0.2％，余量为水；培养异常威克汉姆酵母的条件为：温度29℃，转速为170转/分钟，摇床培养培养38小时；步骤(2)中培养植物乳杆菌的扩大培养基选用如下质量百分含量的原料组成：红糖3.5％，豆粕1.1％，酵母粉1.1％，乙酸钠0.5％，硫酸镁0.05％，硫酸锰0.05％，余量为水；培养植物乳杆菌的条件为：温度31℃，转速为170转/分钟，摇床培养培养25小时。
其余内容同实施例1。
实施例5
本实施例与实施例1的区别在于：
复合微生物菌剂，其中含有如下菌体数量份数的原料：
异常威克汉姆酵母或含有其的发酵液1；
植物乳杆菌或含有其的发酵液2.8；
复合微生物菌剂的制备方法，是异常威克汉姆酵母以及植物乳杆菌分别接种于灭菌后且含有碳源、氮源及无机盐的培养基中进行通气培养制成发酵液，将上述发酵液按比例复配或纯化后按比例复配制成。
上述制备方法包括如下工艺步骤：
(1)菌种活化
将异常威克汉姆酵母以及植物乳杆菌分别接种在相应的无菌液体培养基上，培养至生长对数期，得到相应的种子液；
(2)菌种扩大培养
将步骤(1)得到的种子液按照体积比10％的接种量分别接种于相应的无菌扩大培养基中，扩大培养得分别含有异常威克汉姆酵母菌以及植物乳杆菌的发酵液；
(3)菌种复配
对步骤(2)得到的分别含有异常威克汉姆酵母菌以及植物乳杆菌的发酵液进行菌落计数，按照菌数比例混合制成复合微生物菌剂。
所述的步骤(1)中培养异常威克汉姆酵母的液体培养基选用YPD培养基，培养植物乳杆菌的液体培养基选用MRS培养基，异常威克汉姆酵母菌的活化培养条件为：温度34℃，转速为160转/分钟摇床培养至生长对数期；植物乳杆菌的活化培养条件为：温度36℃，转速为160转/分钟摇床培养培养至生长对数期。
所述的步骤(2)中培养异常威克汉姆酵母的扩大培养基选用如下质量百分含量的原料组成：红糖6.5％，硫酸铵0.2％，磷酸二氢钾0.2％，余量为水；培养异常威克汉姆酵母的条件为：温度34℃，转速为190转/分钟，摇床培养培养46小时；步骤(2)中培养植物乳杆菌的扩大培养基选用如下质量百分含量的原料组成：红糖4.5％，豆粕1.4％，酵母粉1.4％，乙酸钠0.5％，硫酸镁0.05％，硫酸锰0.05％，余量为水；培养植物乳杆菌的条件为：温度36℃，转速为190转/分钟，摇床培养培养35小时。
其余内容同实施例1。
因畜禽养殖场中臭气主要成分为氨气及硫化氢，为验证本发明所制备的复合微生物菌剂对氨气和硫化氢的去除效果，申请人用氨气和硫化氢气体检测仪进行了如下试验：
1、试验时间：2019年11月；
2、试验场所：河北省辛集市某养殖公司猪场；
3、试验器材：实施例1～5制备的复合微生物菌剂，农用喷雾器，便携式气体检测仪(英思科IBRID MX6)；
4、试验过程：试验进行的第一天，在早上7～8点时间段对试验猪舍内氨气和硫化氢浓度进行检测记录，作为猪舍内氨气和硫化氢初始浓度。然后将实施例1～5制备的复合微生物菌剂用自来水稀释100倍后用喷雾器均匀地喷洒在规格相同的试验猪舍内。每天早上在7～8点时间段分别在猪舍中心距离地面1.5m和0.5m位置，用仪器检测猪舍内氨气和硫化氢的浓度。
5、试验结果如表3。
表3对生猪养殖场氨气和硫化氢去除试验结果
Figure GDA0003590581670000131
6、试验结论
从表3中看出，喷洒实施例1～5制备的复合微生物菌剂后第四天猪舍内氨气浓度降至最低，达到8.35～13.66mg/m3，消减率达到63.27％～78.43％；猪舍内硫化氢的浓度在第五天降至最低，达到4.10～6.68mg/m3，消减率达到了和67.65％～79.70％。本试验是实施例1～5中复合微生物菌剂稀释100倍喷洒一次的情况，如果长期的施用该菌剂使其维持优势菌群，会产生更好更持久的效果，在生态养殖方面应用前景广阔。

Claims (6)

1.复合微生物菌剂，其特征在于其中的微生物由如下菌体数量份数的菌种组成：
异常威克汉姆酵母 1～3；
植物乳杆菌 1～3；
所述的复合微生物菌剂中总菌数≥1×109个/ml，异常威克汉姆酵母(Wickerhamomycesanomalus)保藏编号为CGMCC No.20654；植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)保藏编号为CGMCC No.20656。
2.根据权利要求1所述的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于是将拉丁文名称为Wickerhamomyces anomalus、保藏编号为CGMCC No.20654的异常威克汉姆酵母，以及拉丁文名称为lactobacillus plantarum，保藏编号为CGMCC No.20656的植物乳杆菌分别接种于灭菌后且含有碳源、氮源及无机盐的培养基中进行通气培养制成发酵液，将上述发酵液按比例复配或纯化后按比例复配制成。
3.根据权利要求2所述的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于包括如下工艺步骤：
(1)菌种活化
将拉丁文名称为Wickerhamomyces anomalus、保藏编号为CGMCC No.20654的异常威克汉姆酵母，以及拉丁文名称为lactobacillus plantarum，保藏编号为CGMCC No.20656的植物乳杆菌分别接种在相应的无菌液体培养基上，培养至生长对数期，得到相应的种子液；
(2)菌种扩大培养
将步骤(1)得到的种子液按照体积比10％的接种量分别接种于相应的无菌扩大培养基中，扩大培养得分别含有异常威克汉姆酵母菌以及植物乳杆菌的发酵液；
(3)菌种复配
对步骤(2)得到的分别含有异常威克汉姆酵母菌以及植物乳杆菌的发酵液进行菌落计数，按照菌数比例混合制成复合微生物菌剂。
4.根据权利要求3所述的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于所述的步骤(1)中培养异常威克汉姆酵母的液体培养基选用YPD培养基，培养植物乳杆菌的液体培养基选用MRS培养基，异常威克汉姆酵母菌的活化培养条件为：温度28℃～35℃，转速为160转/分钟摇床培养至生长对数期；植物乳杆菌的活化培养条件为：温度30℃～37℃，转速为160转/分钟摇床培养培养至生长对数期。
5.根据权利要求3所述的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于所述的步骤(2)中培养异常威克汉姆酵母的扩大培养基选用如下质量百分含量的原料组成：红糖4.0％～7.0％，硫酸铵0.2％，磷酸二氢钾0.2％，余量为水；培养异常威克汉姆酵母的条件为：温度28℃～35℃，转速为160～200转/分钟，摇床培养培养36～48小时；步骤(2)中培养植物乳杆菌的扩大培养基选用如下质量百分含量的原料组成：红糖3.0％～5.0％，豆粕1.0％～1.5％，酵母粉1.0％～1.5％，乙酸钠0.5％，硫酸镁0.05％，硫酸锰0.05％，余量为水；培养植物乳杆菌的条件为：温度30℃～37℃，转速为160～200转/分钟，摇床培养培养24～36小时。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的复合微生物菌剂在消减养殖场环境中氨气和硫化氢的应用。
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CN110168072A (zh) * 2017-01-06 2019-08-23 轨迹Ip有限责任公司 新发酵***和方法
CN108048344B (zh) * 2017-11-20 2019-05-31 广东博沃特生物科技有限公司 两株除臭菌株及其在制备复合生物除臭剂中的应用
CN108456650B (zh) * 2018-03-30 2021-07-02 上海华浩原益生物科技有限公司 一种复合微生物除臭菌剂及其制备方法和应用
CN108531411B (zh) * 2018-04-23 2020-10-27 中国科学院成都生物研究所 一种发酵鸡粪的组合菌制剂
CN110577906B (zh) * 2019-08-29 2021-04-16 中国农业科学院农产品加工研究所 一种新型多菌种复合面制品发酵剂与应用

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