CN102286376B

CN102286376B - 一种高效发酵床用微生物菌剂及其制备方法

Info

Publication number: CN102286376B
Application number: CN 201110166962
Authority: CN
Inventors: 尹红梅; 贺月林; 张德元; 吴迎奔; 陈薇; 许丽娟; 王震; 周映华; 吴胜莲
Original assignee: HUNAN INST OF MICROBE
Current assignee: HUNAN INST OF MICROBE
Priority date: 2011-06-21
Filing date: 2011-06-21
Publication date: 2013-05-22
Anticipated expiration: 2031-06-21
Also published as: CN102286376A

Abstract

本发明公开了一种高效发酵床用微生物菌剂及其制备方法，该菌剂是按重量百分比：枯草芽孢杆菌发酵物粉剂30～40％，地衣芽孢杆菌发酵物粉剂30～40％，产朊假丝酵母发酵物粉剂20～30％，充分混匀得到的。其能有效促进畜禽粪尿“原位降解”，显著降低畜禽粪尿中氨及其它腐败物的产生，且能提高猪肉品质。

Description

一种高效发酵床用微生物菌剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及微生物发酵领域，确切的说是一种发酵床用微生物菌剂及其制备方法。

背景技术

近年来随着我国养猪业规模化、集约化的迅猛发展，畜禽粪便及污水排放对环境的污染日显严重。据统计，现在全国每年畜牧生产的固体废弃物总量约为30亿吨，仅长沙市每年就约有8000万吨畜禽养殖废水、120万吨以上固体粪便排出，大部分养殖场只经过沼气池简单处理后就直接外排，对环境造成了较大的污染。

目前传统养猪的粪尿处理技术大多采用堆肥发酵、沼气发酵、好氧发酵烘干技术等方式进行处理，堆肥发酵处理粪便占用土地，对环境的空气污染较大，沼气发酵具有季节局限性，好氧发酵烘干技术成本较高，在实际利用中均有一定的局限性。

益生菌发酵床养猪技术是根据微生态原理和生物发酵理论，将锯末屑、稻壳、粉碎的农作物秸秆、微生物菌剂和米糠、糖等辅助发酵剂按一定比例混合均匀，铺在猪舍发酵池内，自然发酵，形成微生物发酵床，生猪饲养其上，利用微生物对畜禽粪尿“原位降解”，达到生态环境“零污染”的新型养殖模式。

由于发酵床垫料的配比、厚度、所处的地理生态环境不同，使得垫料的透气性、吸水性、空气湿度和环境温度不同；由于生猪在不断的产生***物，必须及时的降解，因此选用安全、稳定、定殖能力强、降解率高且功能具有互补作用的菌株组成的复合微生物菌剂是发酵床清洁养殖的有利保证。

发明内容

本发明的目的旨在提供一种有效促进畜禽粪尿“原位降解”，显著降低畜禽粪尿中氨及其它腐败物的产生，且能提高猪肉品质的发酵床用微生物菌剂及其制备方法。

本发明的目的是通过以下方式实现的：

一种高效发酵床用复合微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：

1)枯草芽孢杆菌发酵物制备

首先，将枯草芽孢杆菌经过斜面菌种活化、摇瓶种子培养；

然后进行发酵罐培养：发酵罐中培养基装量为总体积的50～70％，接种量占培养基体积的0.1～0.3％，发酵温度34～37℃，通空气180～200rpm搅拌培养，通气体积与发酵液体积的比值0.9∶1～1∶1，罐压0.03～0.05MPa；发酵终点为芽孢数不低于总菌数的90％，且发酵液的活菌数在1.0×10¹⁰～1.5×10¹⁰cfu/mL之间；发酵罐培养基各组分质量百分比为：葡萄糖0.5～0.7％，淀粉0.3～0.5％，豆饼粉0.8～1.2％，硫酸锰0.0062％，酵母粉0.5～0.8％，蛋白胨0.3～0.5％，氯化铁0.01％，磷酸二氢钾0.4％，碳酸钙0.1％，硫酸镁0.05％，其余为水，pH 7.2～7.4；

最后进行固体吸附：发酵液用麦麸按1∶2～1∶3的重量比例吸附，吸附后低温抽湿干燥，粉碎，粉剂产品含菌量在2.0×10⁹～5.0×10⁹cfu/g之间；

2)地衣芽孢杆菌发酵物制备

首先，将地衣芽孢杆菌经过斜面菌种活化、摇瓶种子培养；所述的地衣芽孢杆菌，保藏号为CGMCC No.4835；

然后进行发酵罐培养：发酵罐中培养基装量为总体积的50～70％，接种量占培养基体积的0.1～0.3％，发酵温度45～50℃，通空气180～200rpm搅拌培养，通气体积与发酵液体积的比值0.9∶1～1∶1，罐压保持在0.03～0.05MPa，发酵终点为芽孢数不低于总菌数的90％，且发酵液的含菌数在8.0×10⁹～1.2×10¹⁰cfu/mL之间；发酵罐培养基各组分质量百分比为：淀粉1.0～1.5％，糊精0.5～0.8％，豆饼粉1.2～1.5％，硫酸铵0.6～0.8％，酵母粉0.3～0.4％，碳酸钙0.2％，氯化钠0.4％，磷酸二氢钾0.02％，其余为水，pH 7.0～7.2；

最后进行固体吸附：发酵液用麦麸按1∶2～1∶3的重量比例吸附，吸附后低温抽湿干燥，粉碎，粉剂产品含菌量在1.5×10⁹～4.0×10⁹cfu/g之间；

3)产朊假丝酵母发酵物制备

首先，将产朊假丝酵母经过斜面菌种活化、摇瓶种子培养；

然后进行发酵罐培养：发酵罐中培养基装量为总体积的50～70％，接种量占培养基体积的0.3～0.5％，发酵温度25～28℃，通空气120～150rpm搅拌培养，通气体积与发酵液体积的比值1∶1～1.1∶1，罐压保持在0.03～0.05MPa，46～48小时发酵完毕后发酵液的含菌数在2.0×10⁹～3.0×10⁹cfu/mL之间；发酵罐培养基各组分质量百分比为：葡萄糖3.5～4.0％，硫酸铵1.5～2.0％，酵母粉0.2～0.25％，磷酸二氢钾0.1％，氯化钠0.01％，硫酸镁0.05％，其余为水，pH 6.0～6.5；

最后进行固体吸附：发酵液用麦麸按1∶1的重量比例吸附，吸附后低温抽湿干燥，粉碎，粉剂产品含菌量在1.5×10⁹～2.5×10⁹cfu/g之间；

4)高效发酵床用复合微生物菌剂复配

按重量百分比草芽孢杆菌发酵物粉剂30～40％，地衣芽孢杆菌发酵物粉剂30～40％，产朊假丝酵母发酵物粉剂20％～30％，充分混匀即可。

所述的高效发酵床用复合微生物菌剂的活菌总数不低于1.0×10⁹cfu/g。

步骤1)所述的斜面菌种活化的培养基各组分质量百分比为：蛋白胨1％，NaCl 0.5％，酵母膏0.5％，琼脂1.5％～2.0％，其余为水，pH 7.2-7.4；

步骤1)所述的摇瓶种子培养的培养基是在步骤1)所述的斜面培养基中不加琼脂，具体操作：取活化的新鲜斜面菌种一环，接种于摇瓶种子液体培养基中，装量为100mL/500mL，转速为180～200rpm，34～37℃恒温培养22～24h后，80℃水浴热处理10分钟，即可。

步骤2)所述的斜面菌种活化的培养基各组分质量百分比为：葡萄糖0.4％，麦芽提取物1％，酵母提取物0.4％，碳酸钙0.2％，琼脂1.5％～2.0％，其余为水，pH 7.0～7.2；

步骤2)所述的摇瓶种子培养的培养基是在步骤2)所述的斜面培养基中不加琼脂，具体操作：取活化的新鲜斜面菌种一环，接种于摇瓶种子液体培养基中，装量为100mL/500mL，转速为180～200rpm，45～50℃恒温培养28～30h后，终止培养。

步骤3)所述的斜面菌种活化的培养基为PDA培养基；

步骤3)所述的摇瓶种子培养具体操作：取活化的新鲜斜面菌种一环，接种于摇瓶种子液体培养基中，装量为150mL/500mL，转速为120～150rpm，25～28℃恒温培养30～32h后，终止培养；所述的摇瓶种子的培养基各组分质量百分比：葡萄糖2％，蛋白胨2％，酵母浸膏1％，其余为水，pH 6.0～6.5。

一种高效发酵床用微生物菌剂是由上述的方法制备而成的菌剂。所述的地衣芽孢杆菌，保藏号为CGMCC No.4835。

本发明的优势：

优良菌种的选择

枯草芽孢杆菌：好氧菌，能产生蛋白酶，淀粉酶等多种酶类，可明显提高动物生长速率和饲料利用率。在饲料加工过程及酸性环境中有较高的稳定性，繁殖速度快，抗逆性好，分解粪尿能力强。经过优化后的菌株适宜温度为30℃～37℃，接种到液体发酵培养基中，24h时产蛋白酶和产淀粉酶活力分别为2706u/mL、31.331MMU；接种在猪粪尿提取液中反应25天后，对COD的降解率、NH₃-N降解率分别为86.5％、70.7％。

地衣芽孢杆菌：从健康猪排放的腐熟猪粪中筛选分离得到，高温生长菌。能够产生蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶等。在高温阶段，菌较活跃。经过优化后的菌株适宜温度为45℃～55℃，接种在猪粪尿提取液中反应25天后，对NH₃-N降解率为75.2％。

产朊假丝酵母：兼氧菌，适宜生长温度25℃～28℃，pH值6.0～6.5。为动物提供蛋白质和维生素，帮助消化，刺激动物生长，抑制病源微生物繁殖，提高机体免疫力。接种在猪粪尿提取液中反应2天后，对NH₃-N降解率为83.5％。

本发明产品发酵床用复合微生物菌剂接种在猪粪尿提取液中反应25天后COD降解率达到了89.9％，NH₃-N去除率达84.5％。

本发明菌株的保藏信息如下：

保藏日期：2011年5月9日

保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)

保藏编号：CGMCC No.4835

分类命名：地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。

本发明的有益效果

本发明产品根据不同有益菌株的功能互补性构建的，其组成明确，质量稳定。特别是经过本发明独特发酵工艺后，实际上得到的是菌剂与发酵代谢产物的混合物，可能能够产生诸多有益的物质。通过实际的生产检验发现，本发明产品用于发酵床养猪能利用微生物对畜禽粪尿“原位降解”，达到减少养猪场对生态环境的污染，实现循环生态农业目的；同时能提高生猪福利，提高猪肉品质。

具体实施方式

以下实施方式旨在进一步说明本发明，而非限制本发明。

本发明采用的3株菌株名称及菌种来源如下：

枯草芽孢杆菌(ACCC10619)，购买于中国农业微生物菌种保藏中心；

地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)，从健康猪排放的腐熟猪粪中筛选分离得到，经中科院微生物研究所鉴定。并于2011年5月9日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心进行了保藏，地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)，保藏号为CGMCCNo.4835。

筛选过程如下：将腐熟的健康猪粪样品和富集培养基(新鲜猪粪)按一定比例(重量比)充分混合，逐步加入锯木屑和稻壳，调节物料的含水率在55％左右，装于干净塑料桶中，静止室温培养，每天搅拌数次，测定培养过程中臭气变化和减重率变化情况，直到粪尿基本无臭且减重不明显时，移种继续振荡培养，逐步提高富集培养基浓度至95％，每一轮培养至无臭，减重不明显时为止。将富集培养物通过多次平板涂布分离，获得粪尿分解能力强的菌株4株。其中1株菌株菌落较大，边缘不整齐；菌体呈杆状，有芽孢，革兰氏染色阳性；淀粉水解试验、明胶水解、氧化酶试验、接触酶试验、甲基红试验、柠檬酸盐试验、VP＜pH6试验阳性；VP＞pH7试验阴性。经中科院微生物研究所鉴定为地衣芽孢杆菌。

产朊假丝酵母(ACCC20060)，购买于中国农业微生物菌种保藏中心。

实施例1：复合菌剂制备

1.枯草芽孢杆菌发酵物制备

斜面菌种活化：取冰箱保存斜面菌种，无菌操作接种于新鲜试管斜面培养基中，37℃恒温培养过夜，制成新鲜试管斜面菌种。斜面培养基：蛋白胨1％，NaCl 0.5％，酵母膏0.5％，琼脂1.5％～2.0％，其余为水，pH 7.2-7.4。

摇瓶种子培养：取活化的新鲜斜面菌种一环，无菌操作接种于摇瓶种子液体培养基中，装量为100mL/500mL，转速为180～200rpm，34～37℃恒温培养22～24h后，80℃水浴热处理10分钟，即可。所述的摇瓶种子的培养基是在斜面培养基中不加琼脂。

发酵罐培养：发酵罐中培养基装量为总体积的50～70％，接种量占培养基体积的0.1～0.3％，发酵温度34～37℃，通空气搅拌培养(180～200rpm)，通气体积比0.9∶1～1∶1，罐压保持在0.03-0.05MPa，接种后根据泡沫情况适当调整排气量和罐压，防止逃液。当泡沫逐渐消失后，加大通气量。每4小时取样镜检一次。发酵终点为芽孢数占总菌数的90％以上。放罐样用平板计数法测定总菌数。发酵液的含菌数在1.0×10¹⁰-1.5×10¹⁰cfu/ml之间。发酵罐培养基：葡萄糖0.5～0.7％，淀粉0.3～0.5％，豆饼粉0.8～1.2％，硫酸锰0.0062％，酵母粉0.5～0.8％，蛋白胨0.3～0.5％，氯化铁0.01％，磷酸二氢钾0.4％，碳酸钙0.1％，硫酸镁0.05％，其余为水，pH 7.2～7.4。

固体吸附：发酵液用麦麸按1∶2～1∶3的重量比例吸附，吸附后低温抽湿干燥，粉碎，测定含菌量后，入库保存。粉剂产品含菌量在2.0×10⁹-5.0×10⁹cfu/g之间。

2.地衣芽孢杆菌发酵物制备

斜面菌种活化的培养基各组分质量百分比为：葡萄糖0.4％，麦芽提取物1％，酵母提取物0.4％，碳酸钙0.2％，琼脂1.5％～2.0％，其余为水，pH 7.0～7.2；

取活化的新鲜斜面菌种一环，接种于摇瓶种子液体培养基中，装量为100mL/500mL，转速为180～200rpm，45～50℃恒温培养28～30h后，终止培养。所述的摇瓶种子的培养基是在斜面培养基中不加琼脂。

然后进行发酵罐培养：发酵罐中培养基装量为总体积的50～70％，接种量占培养基体积的0.1～0.3％，发酵温度45～50℃，通空气搅拌培养(180～200rpm)，通气体积比(通气量与发酵液体积的比值)0.9∶1～1∶1，罐压保持在0.03～0.05MPa，发酵终点为芽孢数不低于总菌数的90％；发酵液的含菌数在8.0×10⁹～1.2×10¹⁰cfu/mL之间；发酵罐培养基各组分质量百分比为：淀粉1.0～1.5％，糊精0.5～0.8％，豆饼粉1.2～1.5％，硫酸铵0.6～0.8％，酵母粉0.3～0.4％，碳酸钙0.2％，氯化钠0.4％，磷酸二氢钾0.02％，其余为水，pH 7.0～7.2；

最后进行固体吸附：发酵液用麦麸按1∶2～1∶3的重量比例吸附，吸附后低温抽湿干燥，粉碎，粉剂产品含菌量在1.5×10⁹～4.0×10⁹cfu/g之间。

3.产朊假丝酵母发酵物制备

斜面菌种活化的培养基为PDA培养基；

取活化的新鲜斜面菌种一环，接种于摇瓶种子液体培养基中，装量为150mL/500mL，转速为120～150rpm，25～28℃恒温培养30～32h后，终止培养。所述的摇瓶种子的培养基各组分质量百分比：葡萄糖2％，蛋白胨2％，酵母浸膏1％，其余为水，pH 6.0～6.5。

然后进行发酵罐培养：发酵罐中培养基装量为总体积的50～70％，接种量占培养基体积的0.3～0.5％，发酵温度25～28℃，通空气搅拌培养(120～150rpm)，通气体积比(通气量与发酵液体积的比值)1∶1～1.1∶1，罐压保持在0.03～0.05MPa，46～48小时发酵完毕；发酵液的含菌数在2.0×10⁹～3.0×10⁹cfu/mL之间；发酵罐培养基各组分质量百分比为：葡萄糖3.5～4.0％，硫酸铵1.5～2.0％，酵母粉0.2～0.25％，磷酸二氢钾0.1％，氯化钠0.01％，硫酸镁0.05％，其余为水，pH 6.0～6.5；

最后进行固体吸附：发酵液用麦麸按1∶1的重量比例吸附，吸附后低温抽湿干燥，粉碎，粉剂产品含菌量在1.5×10⁹～2.5×10⁹cfu/g之间。

4.发酵菌复配

按重量百分比枯草芽孢杆菌发酵物粉剂30～40％，地衣芽孢杆菌发酵物粉剂30～40％，产朊假丝酵母发酵物粉剂20～30％，充分混匀后真空包装即得到复合菌剂。

实施例2：利用本发明的复合菌剂制备发酵床的养猪功效

1.发酵床制备

发酵床垫料由锯末屑、稻壳按1∶1的重量比构成，或由锯末屑、谷壳、农作物秸秆按5∶3∶2的重量比构成。锯末屑、谷壳、农作物秸秆起吸附菌剂、保持水分、疏松透气、为功能微生物提供C、N源等作用。制作发酵床前最好将锯末屑、稻壳、秸秆等在太阳下曝晒1～2天，栏舍要彻底消毒。

发酵床垫料应无霉变、无腐败，无恶臭或其他异味。物料粒径在2～10mm，碳氮比率40～100∶1，粪大肠杆菌数≤100cfu/g，蛔虫卵死亡率≥98％，pH值7.5左右。化学胶合板锯末屑不能用作垫料。

在发酵池内将本发明产品、垫料、辅助发酵剂加水混合均匀，铺在发酵池内，垫料的水分含量45％左右，堆积发酵3天左右，当垫料中层温度达到45℃～55℃时深翻一次，再发酵3天左右，待中层温度降至40℃左右时，将堆积的垫料耙平，符合要求就可以进猪了，不符合要求则重新发酵消毒。发酵床垫料压实后厚度为80cm，比采食台面低10cm左右。

2.试验分组

2009年7月5日～12月8日在某养猪场进行了本发明产品发酵床养殖技术养猪试验。垫料由锯末屑、稻壳按1∶1的重量比构成。按产期，体重相近的原则，选择同品种、同批次、平均体重(16.35±2.33)kg的杂交(本地白♀×大约克♂)猪180头，每头猪挂上耳标，随机分成3组，每组4次重复，每重复8头公猪，7头母猪。试验I组为对照组，传统水泥地圈栏；试验II组，用本发明的复合微生物菌剂制成的发酵床养殖，菌剂组分及其重量百分比组成为：枯草芽孢杆菌发酵物粉剂35％，地衣芽孢杆菌发酵物粉剂35％，产朊假丝酵母发酵物粉剂30％，发酵剂的用量200g/立方米垫料；试验III组，用本发明的复合微生物菌剂制成的发酵床养殖，菌剂组分及其重量百分比组成为：枯草芽孢杆菌发酵物粉剂40％，地衣芽孢杆菌发酵物粉剂40％，产朊假丝酵母发酵物粉剂20％，发酵剂的用量200g/立方米垫料。

3.实验结果如下：

表1圈舍环境及生猪体表观察结果

表2生猪生产性能结果

由表1、表2可以看出，试验II、III组的圈舍环境明显比对照I组好，无明显臭味，无明显蚊蝇滋生；试验II、III组的平均日增重高于对照I组(P＜0.05)，料肉比低于对照组(P＜0.05)，试验II、III组之间差异不显著。由此得出结论，本发明的菌剂可以减轻环境污染，提高饲料利用率，有效促进猪的生长。

表3饲养模式对生猪肉质的影响

从表3可以看出，试验组猪肉品质优于对照组。同时将猪肉经农业部畜产品质量安全监督检验测试中心(长沙)检验，各试验组猪肉肉质完全符合《无公害畜禽肉安全要求标准(GB18406.3-2001)》要求，说明发酵床养猪对猪肉的品质无不良影响。

表4垫料温度变化

从表4可以看出，试验II、III组垫料表层下5cm处，日平均温度分别为28.5℃、29.0℃，差异不显著；30cm处的日平均温度，试验II组为40.9℃，试验III组为44.3℃，垫料里层保持较高的温度，有利于猪粪尿的迅速降解。

表5垫料中有益活菌数变化

从表5可以看出，当发酵进入30d时，试验II组与III组有益菌数含量为10⁸数量级；发酵150d时，试验II组与III组有益菌数含量仍保持10⁷数量级，说明本发明产品在发酵床垫料中有较强的定植能力。

Claims

1.一种高效发酵床用复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）枯草芽孢杆菌ACCC 10619发酵物制备

首先，将枯草芽孢杆菌经过斜面菌种活化、摇瓶种子培养；

然后进行发酵罐培养：发酵罐中培养基装量为总体积的50～70%，接种量占培养基体积的0.1～0.3%，发酵温度34～37°C，通空气180～200rpm搅拌培养，通气体积与发酵液体积的比值0.9:1～1:1，罐压0.03～0.05MPa；发酵终点为芽孢数不低于总菌数的90%，且发酵液的活菌数在1.0×10¹⁰～1.5×10¹⁰cfu/mL之间；发酵罐培养基各组分质量百分比为:葡萄糖0.5～0.7％，淀粉0.3～0.5％，豆饼粉0.8～1.2％，硫酸锰0.0062％，酵母粉0.5～0.8％，蛋白胨0.3～0.5％，氯化铁0.01％，磷酸二氢钾0.4％，碳酸钙0.1％，硫酸镁0.05％，其余为水，pH7.2～7.4；

最后进行固体吸附：发酵液用麦麸按1:2～1:3的重量比例吸附，吸附后低温抽湿干燥，粉碎，粉剂产品含菌量在2.0×10⁹～5.0×10⁹cfu/g之间；

2）地衣芽孢杆菌发酵物制备

然后进行发酵罐培养：发酵罐中培养基装量为总体积的50～70%，接种量占培养基体积的0.1～0.3%，发酵温度45～50°C，通空气180～200rpm搅拌培养，通气体积与发酵液体积的比值0.9:1～1:1，罐压保持在0.03～0.05MPa，发酵终点为芽孢数不低于总菌数的90%，且发酵液的含菌数在8.0×10⁹～1.2×10¹⁰cfu/mL之间；发酵罐培养基各组分质量百分比为：淀粉1.0～1.5％，糊精0.5～0.8％，豆饼粉1.2～1.5％，硫酸铵0.6～0.8％，酵母粉0.3～0.4％，碳酸钙0.2％，氯化钠0.4％，磷酸二氢钾0.02％，其余为水，pH7.0～7.2；

最后进行固体吸附：发酵液用麦麸按1:2～1:3的重量比例吸附，吸附后低温抽湿干燥，粉碎，粉剂产品含菌量在1.5×10⁹～4.0×10⁹cfu/g之间；

3）产朊假丝酵母ACCC 20060发酵物制备

首先，将产朊假丝酵母经过斜面菌种活化、摇瓶种子培养；

然后进行发酵罐培养：发酵罐中培养基装量为总体积的50～70%，接种量占培养基体积的0.3～0.5%，发酵温度25～28°C，通空气120～150rpm搅拌培养，通气体积与发酵液体积的比值1:1～1.1:1，罐压保持在0.03～0.05MPa，46～48小时发酵完毕后发酵液的含菌数在2.0×10⁹～3.0×10⁹cfu/mL之间；发酵罐培养基各组分质量百分比为：葡萄糖3.5～4.0％，硫酸铵1.5～2.0％，酵母粉0.2～0.25％，磷酸二氢钾0.1％，氯化钠0.01％，硫酸镁0.05％，其余为水，pH6.0～6.5；

最后进行固体吸附：发酵液用麦麸按1:1的重量比例吸附，吸附后低温抽湿干燥，粉碎，粉剂产品含菌量在1.5×10⁹～2.5×10⁹cfu/g之间；

4）高效发酵床用复合微生物菌剂复配

按重量百分比草芽孢杆菌发酵物粉剂30～40%，地衣芽孢杆菌发酵物粉剂30～40%，产朊假丝酵母发酵物粉剂20%～30%，充分混匀即可;

步骤2）所述的斜面菌种活化的培养基各组分质量百分比为：葡萄糖0.4%，麦芽提取物1%，酵母提取物0.4%，碳酸钙0.2%，琼脂1.5%～2.0%，其余为水，pH7.0～7.2；

步骤2）所述的摇瓶种子培养的培养基是在步骤2）所述的斜面培养基中不加琼脂，具体操作：取活化的新鲜斜面菌种一环，接种于摇瓶种子液体培养基中，装量为100mL／500mL，转速为180～200rpm,45～50℃恒温培养28～30h后，终止培养。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的高效发酵床用复合微生物菌剂的活菌总数不低于1.0×10⁹cfu/g。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

步骤1）所述的斜面菌种活化的培养基各组分质量百分比为：蛋白胨1%，NaCl0.5%，酵母膏0.5%，琼脂1.5%～2.0%，其余为水，pH7.2-7.4；

步骤1）所述的摇瓶种子培养的培养基是在步骤1）所述的斜面培养基中不加琼脂，具体操作：取活化的新鲜斜面菌种一环，接种于摇瓶种子液体培养基中，装量为100mL／500mL，转速为180～200rpm,34～37℃恒温培养22～24h后，80°C水浴热处理10分钟，即可。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

步骤3）所述的斜面菌种活化的培养基为PDA培养基；

步骤3）所述的摇瓶种子培养具体操作：取活化的新鲜斜面菌种一环，接种于摇瓶种子液体培养基中，装量为150mL／500mL，转速为120～150rpm，25～28℃恒温培养30～32h后，终止培养；所述的摇瓶种子的培养基各组分质量百分比：葡萄糖2%，蛋白胨2%，酵母浸膏1%，其余为水，pH6.0～6.5。

5.一种高效发酵床用微生物菌剂，其特征在于，是由权利要求1-4任意一项所述的方法制备而成的菌剂。

6.一株用于高效发酵床用微生物菌剂发酵制备用菌株，其特征在于，所述的菌株为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)，保藏号为CGMCC No.4835。