CN112816698A - 提高检测临床相关性的缓冲试剂和胶乳免疫比浊试剂盒 - Google Patents

提高检测临床相关性的缓冲试剂和胶乳免疫比浊试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明涉及免疫检测领域，具体而言，提供了一种提高检测临床相关性的缓冲试剂和胶乳免疫比浊试剂盒。本发明提供的提高检测临床相关性的缓冲试剂，包括电解质，电解质为氯化胆碱。发明人经研究发现，在胶乳免疫比浊检测的缓冲试剂中加入氯化胆碱可以显著提高检测结果的临床相关性，提高检测的准确度。该缓冲试剂应用于胶乳免疫比浊检测中，作为检测试剂中的第一试剂，与含有抗体包被的胶乳颗粒的第二试剂进行反应，不仅可以显著提高检测的临床相关性，对抗各种干扰物干扰也具有显著的效果，从而进一步提高了检测试剂盒的准确度和灵敏性。

Description

提高检测临床相关性的缓冲试剂和胶乳免疫比浊试剂盒
技术领域
本发明涉及免疫检测领域，具体而言，涉及一种提高检测临床相关性的缓冲试剂和胶乳免疫比浊试剂盒。
背景技术
胶乳免疫比浊法通过将样本中的待检测抗原与检测试剂中包被到胶乳微球上的特异性抗体发生免疫反应，形成免疫复合物，使胶乳微球间连接成网状，从而增加了反应溶液体系的浊度。在一定范围内浊度高低与样本中待检测抗原的浓度呈正相关，所以通过测定特定波长(570nm)的反应体系吸光度，参照校准曲线即可计算出样本中待检测抗原的含量。与其他检测方法相比，胶乳免疫比浊法通量大，耗时短，可实现自动化，减少人为因素对检测结果的影响，同时具备良好的灵敏度及准确度。因此，胶乳免疫比浊法具有较好的应用前景。
然而，目前市场上的各种项目的胶乳免疫比浊法试剂盒依然存在试剂特异性和抗干扰能力较差等问题，从而影响了临床检测结果的准确度。因此，如何提高胶乳免疫比浊法检测试剂的临床相关性值得更进一步的研究，这对免疫诊断方法的改进具有重要意义。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的目的在于提供一种提高检测临床相关性的缓冲试剂以及应用该缓冲试剂的胶乳免疫比浊试剂盒，旨在解决现有技术中采用胶乳免疫比浊法进行检测时，检测结果的临床相关性较差，特异性、灵敏度和抗干扰能力有待改善的问题。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
一种提高检测临床相关性的缓冲试剂，所述缓冲试剂包括电解质，所述电解质为氯化胆碱。
进一步地，所述氯化胆碱的浓度为200-400mmol/L；
优选地，所述缓冲试剂还包括缓冲液、阻断剂、表面活性剂、增敏剂、稳定剂和防腐剂中的至少一种。
进一步地，所述缓冲液包括HEPES缓冲液、PB缓冲液、PBS缓冲液、Tris缓冲液或磷酸盐缓冲液；
优选地，所述阻断剂包括RF和HAMA结合蛋白、鼠IgG、鼠IgM和鼠血清中的至少一种；
优选地，所述表面活性剂包括Brij35、吐温20或曲拉通X-100；
优选地，所述增敏剂包括聚乙二醇4000、聚乙二醇6000或聚乙二醇8000；
优选地，所述稳定剂包括乙二胺四乙酸二钠、BSA或海藻糖；
优选地，所述防腐剂包括Proclin300或叠氮钠。
进一步地，所述缓冲液包括HEPES缓冲液或PB缓冲液，缓冲液的pH优选范围为6-8，缓冲液的浓度优选为10-200mmol/L；
优选地，所述阻断剂包括RF和HAMA结合蛋白，阻断剂的浓度优选为4-6g/L；
优选地，所述RF和HAMA结合蛋白包括HIER-E-010；
优选地，所述表面活性剂包括Brij35，表面活性剂的浓度优选为0.5-1.5g/L；
优选地，所述增敏剂包括PEG6000，增敏剂的浓度优选为15-25g/L；
优选地，所述稳定剂包括乙二胺四乙酸二钠，稳定剂的浓度优选为0.5-1.5g/L；
优选地，所述防腐剂的浓度为0.5-1.5g/L。
上述缓冲试剂在胶乳免疫比浊法或制备胶乳免疫比浊试剂盒中的应用。
一种胶乳免疫比浊试剂盒，所述试剂盒包括第一试剂和第二试剂，所述第一试剂为上述缓冲试剂。
进一步地，第二试剂包括缓冲液、防腐剂、抗体包被的胶乳颗粒、稳定剂和电解质；
优选地，所述缓冲液包括HEPES缓冲液，缓冲液的pH优选范围为6-8，缓冲液的浓度优选为30-70mmol/L；
优选地，所述防腐剂的浓度为0.5-1.5g/L；
优选地，所述稳定剂包括BSA和海藻糖，BSA的浓度优选为4-6g/L，海藻糖的浓度优选为35-45g/L；
优选地，所述电解质包括氯化钠，电解质的浓度优选为150-250mmol/L。
进一步地，所述抗体包被的胶乳颗粒中抗体包括PGⅠ抗体、PG II抗体或CRP抗体；
优选地，所述抗体包被的胶乳颗粒的浓度为2-3g/L。
进一步地，所述试剂盒还包括校准品和质控品。
进一步地，所述校准品的稀释液包括缓冲液、表面活性剂、防腐剂、电解质和稳定剂；
优选地，所述缓冲液包括HEPES缓冲液，缓冲液的pH优选范围为6-8，缓冲液的浓度优选为30-70mmol/L；
优选地，所述表面活性剂包括吐温20，表面活性剂的浓度优选为0.5-1.5g/L；
优选地，所述防腐剂的浓度包括0.5-1.5g/L；
优选地，所述电解质包括氯化钠，电解质的浓度优选为150-250mmol/L；
优选地，所述稳定剂包括BSA和乙二胺四乙酸二钠，BSA的浓度优选为2-4g/L，乙二胺四乙酸二钠的浓度优选为0.5-1.5g/L。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明提供一种提高检测临床相关性的缓冲试剂，包括电解质，电解质为氯化胆碱。发明人经研究发现，在胶乳免疫比浊检测的缓冲试剂中加入氯化胆碱可以显著提高检测结果的临床相关性，提高检测的准确度。此外，发明人经试验证实，本发明提供的缓冲试剂通用性好，在多种检测项目中均能改善检测的临床相关性，可以广泛应用于各项胶乳免疫比浊检测项目中。该缓冲试剂应用于胶乳免疫比浊检测中，作为检测试剂中的第一试剂，与含有抗体包被的胶乳颗粒的第二试剂进行反应，不仅可以显著提高检测的临床相关性，对抗胆红素干扰、抗维生素C干扰、抗Intralipid脂肪乳剂干扰、抗血红蛋白干扰、抗乙二胺四乙酸二钠干扰和抗肝素钠干扰也具有显著的效果，从而进一步提高了检测试剂盒的准确度和灵敏性。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例3中校准曲线；
图2为本发明实施例3中线性相关曲线；
图3为本发明实施例4中临床相关性结果图；
图4为本发明实施例5中100mmol/L氯化胆碱缓冲试剂临床相关性结果图；
图5为本发明实施例5中200mmol/L氯化胆碱缓冲试剂临床相关性结果图；
图6为本发明实施例5中300mmol/L氯化胆碱缓冲试剂临床相关性结果图；
图7为本发明实施例5中400mmol/L氯化胆碱缓冲试剂临床相关性结果图；
图8为本发明实施例5中100mmol/L氯化钠缓冲试剂临床相关性结果图；
图9为本发明实施例5中200mmol/L氯化钠缓冲试剂临床相关性结果图；
图10为本发明实施例5中300mmol/L氯化钠缓冲试剂临床相关性结果图；
图11为本发明实施例5中400mmol/L氯化钠缓冲试剂临床相关性结果图；
图12为本发明实施例7中300mmol/L氯化胆碱缓冲试剂PGⅡ临床相关性结果图；
图13为本发明实施例7中300mmol/L氯化钠缓冲试剂PGⅡ临床相关性结果图；
图14为本发明实施例7中300mmol/L氯化钾缓冲试剂PGⅡ临床相关性结果图；
图15为本发明实施例7中300mmol/L氯化胆碱缓冲试剂CRP临床相关性结果图；
图16为本发明实施例7中300mmol/L氯化钠缓冲试剂CRP临床相关性结果图；
图17为本发明实施例7中300mmol/L氯化钾缓冲试剂CRP临床相关性结果图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。
除非另有说明，本文中所用的专业与科学术语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法或材料也可应用于本发明中。
一种提高检测临床相关性的缓冲试剂，缓冲试剂包括电解质，电解质为氯化胆碱。
发明人经研究发现，在胶乳免疫比浊检测的缓冲试剂中加入氯化胆碱可以显著提高检测结果的临床相关性，提高检测的准确度。此外，发明人经试验证实，本发明提供的缓冲试剂通用性好，在多种检测项目中均能改善检测的临床相关性，可以广泛应用于各项胶乳免疫比浊检测项目中。该缓冲试剂应用于胶乳免疫比浊检测中，作为检测试剂中的第一试剂，与含有抗体包被的胶乳颗粒的第二试剂进行反应，不仅可以显著提高检测的临床相关性，对抗胆红素干扰、抗维生素C干扰、抗Intralipid脂肪乳剂干扰、抗血红蛋白干扰、抗乙二胺四乙酸二钠干扰和抗肝素钠干扰也具有显著的效果，从而进一步提高了检测试剂盒的准确度和灵敏性。
在优选地实施方式中，氯化胆碱的浓度为200-400mmol/L。发明人经研究发现，氯化胆碱的浓度在200-400mmol/L范围时，检测的效果较好，临床相关性显著，氯化胆碱的浓度典型但非限制性的为200mmol/L、250mmol/L、300mmol/L、350mmol/L或400mmol/L。
在优选地实施方式中，缓冲试剂除了电解质氯化胆碱还包括缓冲液、阻断剂、表面活性剂、增敏剂、稳定剂和防腐剂中的至少一种。
在优选地实施方式中，缓冲液包括HEPES缓冲液、PB缓冲液、PBS缓冲液、Tris缓冲液或磷酸盐缓冲液。
在优选地实施方式中，阻断剂包括RF(类风湿因子)和HAMA(异嗜性抗体)结合蛋白、鼠IgG、鼠IgM和鼠血清中的至少一种。
在优选地实施方式中，表面活性剂包括Brij35、吐温20或曲拉通X-100。
在优选地实施方式中，增敏剂包括聚乙二醇4000、聚乙二醇6000或聚乙二醇8000。
在优选地实施方式中，稳定剂包括乙二胺四乙酸二钠、BSA或海藻糖。
在优选地实施方式中，防腐剂包括Proclin300或叠氮钠。
本发明中对缓冲试剂的其他组分都进行了优化，例如阻断剂的选择解决了现有技术中胶乳免疫比浊检测抗RF和HAMA干扰性能较差的技术问题，从而进一步提高了检测试剂盒的准确度和灵敏性；电解质、表面活性剂和增敏剂等组分的配合，使得该缓冲试剂的检测特异性好，灵敏度高并且抗干扰能力强，可以准确快速得到待检测抗原的含量。
在优选地实施方式中，缓冲液包括HEPES缓冲液或PB缓冲液，缓冲液的pH优选范围为6-8，缓冲液的浓度优选为10-200mmol/L；阻断剂优选包括RF和HAMA结合蛋白，阻断剂的浓度优选为4-6g/L，其中，RF和HAMA结合蛋白包括HIER-E-010；表面活性剂优选包括Brij35，表面活性剂的浓度优选为0.5-1.5g/L；增敏剂优选包括PEG6000，增敏剂的浓度优选为15-25g/L；稳定剂包括乙二胺四乙酸二钠，稳定剂的浓度优选为0.5-1.5g/L；防腐剂的浓度优选为0.5-1.5g/L。发明人经试验发现，上述该组分的选取及其配比的结合，使得胶乳免疫比浊检测的临床相关性更好，准确性和灵敏度得到提高。
需要说明的是，HIER-E-010是指菲鹏生物公司销售的货号为HIER-E-010的阻断剂。
在更优选地实施方式中，缓冲试剂包括：100mmol/L HEPES缓冲液，5g/L HIER-E-010，300mmol/L氯化胆碱，1g/L Brij35，20g/L PEG6000，1g/L乙二胺四乙酸二钠和1g/LProclin300。发明人通过试验发现该配方的检测效果显著，研究发现氯化胆碱的使用，可以显著提高检测试剂盒的特异性，与市售试剂盒具有良好的临床相关性；同时检测试剂盒的线性范围宽、准确度好，例如PGⅠ检测项目中，检测下限可达2ng/ml，线性范围为2-200ng/ml，为临床的准确诊断提供依据。PEG6000和Brij35的协同作用，使检测试剂盒具有较好的精密度，从而可以确保单次测量结果的重复性和准确性。HIER-E-010的使用，使检测试剂盒具有较好的抗RF和HAMA干扰能力，并且能充分抑制高浓度的RF和HAMA及其他干扰物的干扰作用。此外，上述组分的配比也是通过科学和合理的限定，使得组分及其配比共同作用显著提高检测的性能。
本发明提供上述缓冲试剂在胶乳免疫比浊法或制备胶乳免疫比浊试剂盒中的应用。
一种胶乳免疫比浊试剂盒，包括第一试剂(R1)和第二试剂(R2)，其中，第一试剂为本发明提供的缓冲试剂。
该试剂盒由于采用本发明提供的缓冲试剂作为第一试剂，所以临床相关性得到显著的提高，试剂盒整体性能得到有效改善。
在优选地实施方式中，第二试剂包括缓冲液、防腐剂、抗体包被的胶乳颗粒、稳定剂和电解质。
在优选地实施方式中，第二试剂中，缓冲液包括HEPES缓冲液，缓冲液的pH优选范围为6-8，缓冲液的浓度优选为30-70mmol/L；防腐剂的浓度优选为0.5-1.5g/L；稳定剂优选包括BSA和海藻糖，BSA的浓度优选为4-6g/L，海藻糖的浓度优选为35-45g/L；电解质优选包括氯化钠，电解质的浓度优选为150-250mmol/L。
在优选地实施方式中，抗体包被的胶乳颗粒中抗体包括PGⅠ(胃蛋白酶原Ⅰ)抗体、PG II(胃蛋白酶原II)抗体或CRP(C反应蛋白)抗体，抗体包被的胶乳颗粒的浓度优选为2-3g/L。本发明中抗体可以为本领域常用的抗体，在此不作特定的限定，优选为PGⅠ抗体、PGII抗体或CRP抗体，进一步优选为PGⅠ抗体。更优选地，PGⅠ抗体包括两种PGⅠ单克隆抗体(抗体来源：菲鹏生物；抗体货号：MABM-PGⅠ-1-5和MABM-PGⅠ-2-24)，该抗体可以有效提高检测的灵敏度和特异性。
在优选地实施方式中，第二试剂包括：50mmol/L HEPES缓冲液，5g/L BSA，200mmol/L氯化钠，40g/L海藻糖，2.5g/L PGⅠ抗体包被的胶乳颗粒和1g/L Proclin300。发明人研究中发现，在第二试剂中添加电解质氯化钠、稳定剂BSA和海藻糖可以有效提高第二试剂的稳定性，延长试剂有效期，同时有利于改善PGⅠ检测的准确性。第二试剂中各组分的配比也是通过科学合理的筛选得到，使得该配比下的各组分共同作用显著提高检测试剂盒的性能。
在更优选地实施方式中，第二试剂中PGⅠ抗体包被的胶乳颗粒的制备为如下方法：利用EDC和NHS将聚苯乙烯胶乳微球活化，加入PGⅠ抗体孵育，离心得到PGⅠ抗体包被的胶乳颗粒。
例如，第二试剂的制备包括：
(1)微球活化：将0.1ml直径200nm的聚苯乙烯胶乳微球溶液(浓度10％)加入到4.5ml 0.01M MES(pH6.0)缓冲液中，然后加入0.05ml EDC(碳化亚胺，浓度10mg/ml)和0.05ml NHS(N-羟基琥珀酰亚胺，浓度20mg/ml)，室温条件下，活化20min；
(2)胃蛋白酶原Ⅰ抗体的偶联：将0.5mg抗体(两株胃蛋白酶原Ⅰ单抗1：1混合，单抗来自菲鹏生物，抗体货号：MABM-PGⅠ-1-5和MABM-PGⅠ-2-24)，加入上述活化后的溶液中，室温混匀2-4h，14000rpm离心30min，弃上清，沉淀用第二试剂(不含抗体包被的胶乳颗粒)5ml混匀，然后超声分散微球，得到浓度为0.1mg/ml的PGⅠ抗体标记的胶乳微球溶液，即为第二试剂。
在优选地实施方式中，试剂盒还包括校准品和质控品。
在优选地实施方式中，校准品的稀释液包括缓冲液、表面活性剂、防腐剂、电解质和稳定剂。
在优选地实施方式中，校准品的稀释液中，缓冲液包括HEPES缓冲液，缓冲液的pH优选范围为6-8，缓冲液的浓度优选为30-70mmol/L；表面活性剂优选包括吐温20，表面活性剂的浓度优选为0.5-1.5g/L；防腐剂的浓度优选包括0.5-1.5g/L；电解质优选包括氯化钠，电解质的浓度优选为150-250mmol/L；稳定剂优选包括BSA和乙二胺四乙酸二钠，BSA的浓度优选为2-4g/L，乙二胺四乙酸二钠的浓度优选为0.5-1.5g/L。
在更优选地实施方式中，校准品的稀释液包括：50mmol/L HEPES缓冲液，200mmol/L氯化钠，3g/L BSA，1g/L乙二胺四乙酸二钠，1g/L吐温20和1g/L Proclin300。发明人通过研究发现，对稀释液进行上述特定组分和配比的限定，制备校准曲线的效果最好，体系稳定性好，对检测影响小，校准曲线的线性范围较宽。
在优选地实施方式中，待检测样本、第一试剂和第二试剂的体积用量比为(5.5-7.5)：(140-160)：50。
下面通过具体的实施例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例仅仅是用于更详细地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。
实施例1提高检测临床相关性的缓冲试剂
一种提高检测临床相关性的缓冲试剂，具体组分如下表1：
表1
Figure BDA0002277788230000111
实施例2PGⅠ胶乳免疫比浊检测试剂盒
一种胶乳免疫比浊检测试剂盒，包括第一试剂(实施例1中的缓冲试剂)，第二试剂(如下表2)，以及PGⅠ校准品(校准品的稀释液为表3)：
表2
Figure BDA0002277788230000112
表3
Figure BDA0002277788230000113
PGⅠ校准品的梯度浓度为：0ng/ml、10ng/ml、25ng/ml、50ng/ml、100ng/ml和200ng/ml。
第二试剂的制备包括：
(1)微球活化：将0.1ml直径200nm的聚苯乙烯胶乳微球溶液(微球购自JSR，浓度10％)加入到4.5ml 0.01M MES(pH6.0)缓冲液中，然后加入0.05ml EDC(碳化亚胺，浓度10mg/ml)和0.05ml NHS(N-羟基琥珀酰亚胺，浓度20mg/ml)，室温条件下，活化20min；
(2)胃蛋白酶原Ⅰ抗体的偶联：将0.5mg抗体(两株胃蛋白酶原Ⅰ单抗1：1混合，单抗来自菲鹏生物，货号是MABM-PGI-1-5和MABM-PGI-2-24)，加入上述活化后的溶液中，室温混匀2-4h，14000rpm离心30min，弃上清，沉淀用第二试剂(不含抗体包被的胶乳颗粒)5ml混匀，然后超声分散微球，得到浓度为0.1mg/ml的胃蛋白酶原Ⅰ抗体标记的胶乳微球溶液，即为第二试剂。
实施例3线性范围的确定
利用实施例2中的检测试剂盒，临床标准方法收集的血清作为待检测样本，反应体系如下表4：
表4
比色杯中加入 空白管 校准管 样品管
第一试剂(μL) 150 150 150
蒸馏水(μL) 6.5 - -
校准品(μL) - 6.5 -
待检测样本(μL) - - 6.5
第二试剂(μL) 50 50 50
分别混匀，在37℃孵育0.5分钟和5分钟时，分别读取570nm吸光度A1和A2，计算△A＝(A2-A1)；其中，空白管的数值用于制备校准曲线，作为校准曲线的0值。
利用浓度为：0ng/ml、10ng/ml、25ng/ml、50ng/ml、100ng/ml和200ng/ml的校准品得到校准曲线(结果如图1所示)。将待检测样本的吸光度差值带入校准曲线得到待检测样本中PGⅠ的含量。
参考值范围见表5：
表5
血清胃蛋白酶原结果 PG阳性度结果判断
1≥70ng/mL或1/2＞3.0 阴性(-)
1＜70ng/mL并且1/2＜3.0 阳性(+)轻度萎缩
1＜50ng/mL并且1/2＜3.0 阳性(++)中度萎缩
1＜30ng/mL并且1/2＜2.0 阳性(+++)重度萎缩
将浓度为110ng/mL的PGⅠ校准品样本稀释成梯度浓度，用本发明提供的试剂盒对每个浓度重复测定3次，取平均值，与理论值计算线性相关系数，检测结果如表6所示，线性相关性如图2所示。对应的线性相关方程见图2，为：y＝1.0221x-2.8234，相关系数R2＝0.9976，结果表明本试剂盒线性检测范围2-200ng/mL，检测下限可达2ng/mL。
表6PGⅠ抗原梯度浓度检测结果
Figure BDA0002277788230000131
此外，检测本发明提供的试剂盒的灵敏度和精密度，测试2ng/ml(低值1)、6ng/ml(低值2)和64ng/ml(高值1)的临床样本，结果如下表7所示：
表7
Figure BDA0002277788230000132
Figure BDA0002277788230000141
实施例4临床相关性的检测
将实施例2中的检测试剂盒与Abbott公司(A试剂盒)的PGⅠ检测试剂进行样本比对测试，表8测定结果，结果如图3所示，相关系数R2为0.9914，相关性良好，可用于临床诊断使用。
表8
Figure BDA0002277788230000142
Figure BDA0002277788230000151
实施例5试剂组分优化
对实施例1中的缓冲试剂(实施例2中试剂盒的第一试剂)，电解质的含量及种类进行优化，选取不同氯化胆碱和不同氯化钠作为缓冲试剂中的电解质(具体配比见表9)，检测试剂盒其他组分及配比不便，检测与对照雅培试剂的临床相关性，检测结果见表10，组分1-8统计结果分别见图4-11。分析数据得出最优盐组分及浓度为组分3配方，即当缓冲试剂中所用电解质为氯化胆碱，浓度在300mM时，临床相关性R2最高，为0.9822。与氯化钠相比，缓冲试剂中使用氯化胆碱会使试剂临床相关性结果更好，分析其原因可能为：(1)氯化胆碱可阻断样本中的补体干扰；(2)体系中不同种类的盐可使抗体，抗原及基质蛋白表面携带电荷量不同，而氯化胆碱更好地改变抗原、抗体及基质蛋白表面携带的电荷量，提高与抗体结合蛋白表面电荷门槛，使杂蛋白不易与抗体结合。
表9
Figure BDA0002277788230000152
表10
Figure BDA0002277788230000153
Figure BDA0002277788230000161
类似的方式，其他组分及配比不变，对缓冲试剂中阻断剂的种类及浓度进行优化，得到表11中5组配方组分，检测抗RF干扰性能，结果如表12所示。
表11
Figure BDA0002277788230000162
表12
Figure BDA0002277788230000171
参考上述缓冲试剂中电解质和阻断剂的种类及含量优化方法，本实施例对缓冲试剂中的其他组分也做了类似实验，得到本发明提供的组分及配方。
实施例6抗干扰能力检测
本实施例中检测了实施例2中的试剂盒对血红蛋白、胆红素、乳糜、抗坏血酸和RF的抗干扰能力，结果如下：血红蛋白≤1000mg/dL(表15)；胆红素≤20mg/dL(表14)；乳糜≤1000mg/dL(表13)；抗坏血酸≤50mg/dL(表16)；RF≤800IU/mL(表17)的标本，对PGⅠ测量无显著干扰，相对偏差≤±10％。
表13脂血干扰
Figure BDA0002277788230000172
表14胆红素干扰
Figure BDA0002277788230000173
Figure BDA0002277788230000181
表15血红蛋白干扰
Figure BDA0002277788230000182
表16抗坏血酸干扰
Figure BDA0002277788230000183
表17
Figure BDA0002277788230000184
实施例7缓冲试剂应用于其它检测项目的临床相关性检测
(1)针对胃蛋白酶原Ⅱ检测试剂(胶乳增强免疫比浊法)
胃蛋白酶原Ⅱ检测试剂R2(pH7.5)：20mM Hepes、150mM NaCl、0.5％BSA、4％蔗糖、0.1％Proclin300、0.1％胃蛋白酶原Ⅱ单克隆抗体致敏的纳米胶乳微粒。
不同盐种类及浓度的胃蛋白酶原Ⅱ检测试剂的R1比较，组分配方见表18，结果如表19所示，图12-14所示：
表18 PGⅡ试剂R1中盐浓度及种类优化
Figure BDA0002277788230000191
表19 PG II试剂R1中盐浓度及种类优化
Figure BDA0002277788230000192
Figure BDA0002277788230000201
结论：在PGII试剂中，使用氯化胆碱作为R1中的电解质，比氯化钠和氯化钾具有更高的临床相关性。
(2)针对CRP检测试剂(胶乳增强免疫比浊法)
CRP检测试剂R2(pH7.5)：20mM Hepes、150mM NaCl、0.5％BSA、4％蔗糖、0.1％Proclin300、0.1％CRP单克隆抗体致敏的纳米胶乳微粒。
不同盐种类及浓度的CRP检测试剂的R1比较，组分配方见表20，结果如表21所示，图15-17所示：
表20 CRP试剂R1中盐浓度及种类优化
Figure BDA0002277788230000202
表21 CRP试剂R1中盐浓度及种类优化
Figure BDA0002277788230000203
Figure BDA0002277788230000211
结论：在CRP试剂中，使用氯化胆碱作为R1中的电解质，比氯化钠和氯化钾具有更高的临床相关性。
尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。

Claims (10)

1.一种提高检测临床相关性的缓冲试剂，其特征在于，所述缓冲试剂包括电解质，所述电解质为氯化胆碱。
2.根据权利要求1所述的缓冲试剂，其特征在于，所述氯化胆碱的浓度为200-400mmol/L；
优选地，所述缓冲试剂还包括缓冲液、阻断剂、表面活性剂、增敏剂、稳定剂和防腐剂中的至少一种。
3.根据权利要求2所述的缓冲试剂，其特征在于，所述缓冲液包括HEPES缓冲液、PB缓冲液、PBS缓冲液、Tris缓冲液或磷酸盐缓冲液；
优选地，所述阻断剂包括RF和HAMA结合蛋白、鼠IgG、鼠IgM和鼠血清中的至少一种；
优选地，所述表面活性剂包括Brij35、吐温20或曲拉通X-100；
优选地，所述增敏剂包括聚乙二醇4000、聚乙二醇6000或聚乙二醇8000；
优选地，所述稳定剂包括乙二胺四乙酸二钠、BSA或海藻糖；
优选地，所述防腐剂包括Proclin300或叠氮钠。
4.根据权利要求3所述的缓冲试剂，其特征在于，所述缓冲液包括HEPES缓冲液或PB缓冲液，缓冲液的pH优选范围为6-8，缓冲液的浓度优选为10-200mmol/L；
优选地，所述阻断剂包括RF和HAMA结合蛋白，阻断剂的浓度优选为4-6g/L；
优选地，所述RF和HAMA结合蛋白包括HIER-E-010；
优选地，所述表面活性剂包括Brij35，表面活性剂的浓度优选为0.5-1.5g/L；
优选地，所述增敏剂包括PEG6000，增敏剂的浓度优选为15-25g/L；
优选地，所述稳定剂包括乙二胺四乙酸二钠，稳定剂的浓度优选为0.5-1.5g/L；
优选地，所述防腐剂的浓度为0.5-1.5g/L。
5.权利要求1-4任一项所述的缓冲试剂在胶乳免疫比浊法或制备胶乳免疫比浊试剂盒中的应用。
6.一种胶乳免疫比浊试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括第一试剂和第二试剂，所述第一试剂为权利要求1-4任一项所述的缓冲试剂。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，第二试剂包括缓冲液、防腐剂、抗体包被的胶乳颗粒、稳定剂和电解质；
优选地，所述缓冲液包括HEPES缓冲液，缓冲液的pH优选范围为6-8，缓冲液的浓度优选为30-70mmol/L；
优选地，所述防腐剂的浓度为0.5-1.5g/L；
优选地，所述稳定剂包括BSA和海藻糖，BSA的浓度优选为4-6g/L，海藻糖的浓度优选为35-45g/L；
优选地，所述电解质包括氯化钠，电解质的浓度优选为150-250mmol/L。
8.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述抗体包被的胶乳颗粒中抗体包括PGⅠ抗体、PG II抗体或CRP抗体；
优选地，所述抗体包被的胶乳颗粒的浓度为2-3g/L。
9.根据权利要求6-8任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括校准品和质控品。
10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述校准品的稀释液包括缓冲液、表面活性剂、防腐剂、电解质和稳定剂；
优选地，所述缓冲液包括HEPES缓冲液，缓冲液的pH优选范围为6-8，缓冲液的浓度优选为30-70mmol/L；
优选地，所述表面活性剂包括吐温20，表面活性剂的浓度优选为0.5-1.5g/L；
优选地，所述防腐剂的浓度包括0.5-1.5g/L；
优选地，所述电解质包括氯化钠，电解质的浓度优选为150-250mmol/L；
优选地，所述稳定剂包括BSA和乙二胺四乙酸二钠，BSA的浓度优选为2-4g/L，乙二胺四乙酸二钠的浓度优选为0.5-1.5g/L。
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