CN112760267B - 一株拮抗野油菜黄单胞菌的产酶溶杆菌cx06及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一株拮抗野油菜黄单胞菌的产酶溶杆菌CX06及其应用，该产酶溶杆菌CX06已于2020年07月08日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.20321。本发明还公开了产酶溶杆菌CX06在抑制病原菌中的应用。在抑菌谱测定试验中，菌株CX06表现出广谱抗性，对7种病原真菌和5种病原细菌均具有拮抗效果。在进行温室盆栽防效试验中，菌株CX06对甘蓝黑腐病的防效高达90.7％，对甘蓝茎基腐病的防效达到62.8％，对白菜细菌性黑腐病的防效达79.98％，说明菌株CX06具有较好的应用前景，为进一步开发利用提供了一定的理论基础和技术支持。

Description

一株拮抗野油菜黄单胞菌的产酶溶杆菌CX06及其应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一株拮抗野油菜黄单胞菌的产酶溶杆菌CX06及其应用。

背景技术

目前生产上对野油菜黄单胞菌的防治措施主要依靠抗病育种和化学防治为主。化学防治常用的农药包括一些农用抗生素(春雷霉素)、铜制剂(喹啉铜)等。总体来看，用来防治野油菜黄单胞菌病害的农药种类较少，而且农药的使用有些会受到抑制，有些防治效果一般，因此生产上迫切需要开发更多新型、高效、安全的防治措施。其中生物防治即为一种利用有益微生物抑制病原菌，减少病原菌数量，阻止病原菌的侵染，从而减少病害发生的防治方法，因具有绿色、无污染、成本低等优点而备受人们的关注，在细菌性病害防治方面具有巨大的发展前景。

产酶溶杆菌(Lysobacter enzymogenes)属于黄单胞菌科(Xanthomonadaceae)、黄单胞目(Xanthomonadales)、γ-变形菌纲(Gammaproteobacteria)、变形菌门(Proteobacteria)。产酶溶杆菌具有高效拮抗菌活性和植物病害的生防潜力，是一类新型植物病害生防细菌。产酶溶杆菌具有很强的几丁质酶、蛋白酶、纤维素酶活性，可以溶解革兰氏阳性、阴性细菌，丝状真菌、酵母、藻类。其防病机理为：(1)富有胞外酶；(2)分泌生物表面活性剂；(3)产生抗生素；(4)较好的定殖能力。因此，分离鉴定对野油菜黄单胞菌具有拮抗作用的产酶溶杆菌菌株，从中获得抗菌活性物质，对开发具有安全、高效、广谱生防潜力的产酶溶杆菌菌株，生防资源的构建，保护生态环境和减少化学农药的使用具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一株拮抗野油菜黄单胞菌的产酶溶杆菌CX06及其应用。

为了实现上述目的，本发明首先提供了产酶溶杆菌(Lysobacter enzymogenes)CX06，其保藏编号为CGMCC No.20321。

本发明提供的产酶溶杆菌(Lysobacter enzymogenes)CX06已于2020年07月08日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC；地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；邮编：100101)，保藏编号为CGMCCNo.20321。

为了实现上述目的，本发明又提供了上述产酶溶杆菌(Lysobacter enzymogenes)CX06的菌悬液或培养液或发酵液或发酵产物或含有其的菌剂。

为了实现上述目的，本发明还提供了上述产酶溶杆菌(Lysobacter enzymogenes)CX06或其菌悬液或培养液或发酵液或发酵产物或含有其的菌剂在抑制致病菌中的应用。

本发明还提供了上述产酶溶杆菌(Lysobacter enzymogenes)CX06或其菌悬液或培养液或发酵液或发酵产物或含有其的菌剂在制备抑制致病菌的产品中的应用。

本发明还提供了上述产酶溶杆菌(Lysobacter enzymogenes)CX06或其菌悬液或培养液或发酵液或发酵产物或含有其的菌剂在防治致病菌引起的植物病害中的应用。

本发明还提供了上述产酶溶杆菌(Lysobacter enzymogenes)CX06或其菌悬液或培养液或发酵液或发酵产物或含有其的菌剂在制备防治致病菌引起的植物病害的产品中的应用。

本发明还提供了上述产酶溶杆菌(Lysobacter enzymogenes)CX06或其菌悬液或培养液或发酵液或发酵产物或含有其的菌剂在防治甘蓝黑腐病和/或甘蓝茎基腐病和/或白菜细菌性黑腐病中的应用。

本发明还提供了上述产酶溶杆菌(Lysobacter enzymogenes)CX06或其菌悬液或培养液或发酵液或发酵产物或含有其的菌剂在制备防治甘蓝黑腐病和/或甘蓝茎基腐病和/或白菜细菌性黑腐病的产品中的应用。

为了实现上述目的，本发明还提供了一种产品，其活性成分为上述产酶溶杆菌(Lysobacter enzymogenes)CX06或其菌悬液或培养液或发酵液或发酵产物或含有其的菌剂；

所述产品具有如下a1)-a3)中任一种功能：

a1)抑制致病菌；

a2)防治致病菌引起的植物病害；

a3)防治甘蓝黑腐病和/或甘蓝茎基腐病和/或白菜细菌性黑腐病。

为了实现上述目的，本发明最后提供了如下b1)-b3)中任一种方法：

b1)一种抑制致病菌的方法，包括如下步骤：用上述产酶溶杆菌(Lysobacterenzymogenes)CX06或其菌悬液或培养液或发酵液或发酵产物或含有其的菌剂处理致病菌；

b2)一种防治致病菌引起的植物病害的方法，包括如下步骤：用上述产酶溶杆菌(Lysobacter enzymogenes)CX06或其菌悬液或培养液或发酵液或发酵产物或含有其的菌剂处理植物；

b3)一种防治甘蓝黑腐病和/或甘蓝茎基腐病和/或白菜细菌性黑腐病的方法，包括如下步骤：用上述产酶溶杆菌(Lysobacter enzymogenes)CX06或其菌悬液或培养液或发酵液或发酵产物或含有其的菌剂处理甘蓝或白菜。

上述任一所述致病菌为植物致病菌。所述植物致病菌可为致病真菌或致病细菌。

所述致病真菌具体可包括多主棒孢菌(Corynespora cassiicola)、尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)、辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)、灰葡萄孢菌(Botrytiscinerea)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、茄匍柄霉菌(Stemphylium solani)、西瓜壳二孢菌(Ascochyta citrullina)。

所述致病细菌具体可包括野油菜黄单胞野油菜致病变种(Xanthomonascampestris pv.campestris)、密执安棒杆菌马铃薯环腐致病变种(Clavibactermichiganensis subsp.sepedonicus)、丁香假单胞杆菌流泪致病变种(Pseudomonassyringae pv.lachryrnans)、葡萄土壤杆菌(Agrobacterium vitis)、密执安棒杆菌番茄溃疡病致病变种(Clavibacter michiganensis subsp.michiganensis)。

上述任一所述植物病害包括黑腐病和基腐病。所述黑腐病具体可为甘蓝黑腐病或白菜细菌性黑腐病。所述基腐病具体可为甘蓝茎基腐病。

上述任一所述植物具体可为甘蓝或白菜。

以上任一所述菌悬液或培养液或发酵液或发酵产物或菌剂中的产酶溶杆菌(Lysobacter enzymogenes)CX06的菌浓度可为1×10⁷cfu/mL-1×10⁹cfu/mL，具体可为1×10⁸cfu/mL。

在一个具体实施例中，所述菌悬液或培养液或发酵液或发酵产物或菌剂的具体制备方法可包括如下步骤：将产酶溶杆菌(Lysobacter enzymogenes)CX06接种于LB液体培养基中，28℃、180r/min振荡培养至浓度为1×10⁸cfu/mL。

在另一个具体实施例中，所述菌悬液或培养液或发酵液或发酵产物或菌剂的具体制备方法可包括如下步骤：将产酶溶杆菌(Lysobacter enzymogenes)CX06接种于LB液体培养基中，28℃、180r/min振荡培养至浓度为1×10⁸cfu/mL，然后用蒸馏水稀释至100倍体积。

本发明从作物根际土中分离到一株对野油菜黄单胞致病变种具有明显拮抗作用的菌株CX06。经过对菌株的形态特征、Biolog检测、电镜扫描、生理生化指标及多基因***发育树进行分析，初步鉴定菌株CX06为产酶溶杆菌(Lysobacter enzymogenes)。在不同培养基上，菌株CX06生长极快，在NA培养基、LB培养基、TSA培养基上，菌落均呈现淡黄色、表面突出、菌体湿润有光泽，不易挑起；菌株CX06对病原真菌菌丝有一定的影响，会造成菌丝的膨大、扭曲、畸形和影响菌丝正常生长繁殖。对菌株CX06进行了酶活试验，测定了菌株CX06代谢产物中包含纤维素酶、几丁质酶、蛋白酶。在抑菌谱测定试验中，菌株CX06表现出广谱抗性，对7种病原真菌和5种病原细菌均具有拮抗效果。在进行温室盆栽防效试验中，菌株CX06对甘蓝黑腐病的防效高达90.7％，对甘蓝茎基腐病的防效达到62.8％，对白菜细菌性黑腐病的防效达79.98％，说明菌株CX06具有较好的应用前景，为进一步开发利用提供了一定的理论基础和技术支持。

附图说明

图1为土样分离筛选得到的8个菌株。A：CX01；B：CX02；C：CX03；D：CX04；E：CX05；F：CX06；G：CX07；H：CX08。

图2为菌株CX06在不同培养基上形态特征。A：LB培养基；B：TSA培养基；C：NA培养基；D：10％TSA培养基。

图3为菌株CX06电镜扫描照片。

图4为菌株CX06基于多基因序列的***进化树。

图5为菌株CX06真菌抑菌谱分析及对病原真菌菌丝的影响。图5a为菌株CX06真菌抑菌谱分析，其中，A：尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)；B：灰葡萄孢菌(Botrytiscinerea)；C：立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)；D：多主棒孢菌(Corynesporacassiicola)；E：西瓜壳二孢菌(Diaporthe batatas)；F：茄匍柄霉(Stemphylium solani)；G：辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)。图5b为菌株CX06对病原真菌菌丝的影响。

图6为菌株CX06细菌抑菌谱分析。A：密执安棒杆菌马铃薯环腐致病变种(Clavibacter michiganensis subsp.sepedonicus)；B：密执安棒杆菌番茄溃疡病致病变种(Clavibacter michiganensis subsp.michiganensis)；C：葡萄土壤杆菌(Agrobacterium vitis)；D：野油菜黄单胞野油菜致病变种(Xanthomonas campestrispv.campestris)；E：丁香假单胞菌流泪致病变种(Pseudomonas syringaepv.lachryrnans)。

图7为菌株CX06酶活性测定。A：纤维素酶Celluase；B：几丁质酶Chitinase；C：蛋白酶Protease。

图8为菌株CX06的生长曲线。

图9为菌株CX06的pH值变化曲线。

图10为菌株CX06对甘蓝黑腐病盆栽试验。A：菌株CX06；B：春雷霉素1000倍液；C：空白对照(蒸馏水)；D：健康对照。

图11为菌株CX06对甘蓝茎基腐病盆栽试验。A：菌株CX06；B：4％井岗霉素500倍液；C：空白对照(蒸馏水)。

图12为菌株CX06与其他试剂的防效比较试验。A：CX06；B：多抗霉素；C：多粘类芽孢杆菌；D：蜡质芽孢杆菌；E：荧光假单胞菌；F：坚强芽孢杆菌；G：地衣芽孢杆菌；H：中生菌素；I：氢氧化铜；J：枯草芽孢杆菌；K：春雷霉素；L：噻唑锌；M：乙蒜素；N：琥胶肥酸铜；O：喹啉铜；P：噻霉铜；Q：四霉素；R：空白对照(蒸馏水)。

保藏说明

中文名：产酶溶杆菌

拉丁名：Lysobacter enzymogenes

菌株编号：CX06

保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心

保藏机构简称：CGMCC

地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号

保藏日期：2020年07月08日

保藏中心登记入册编号：CGMCC No.20321

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本发明的限制。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例中的培养基，如无特殊说明均为自然pH。如无特殊说明，以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。

下述实施例中涉及的供试培养基与供试溶液如下：

PDA培养基用于拮抗作用试验，PDA培养基具体配方如下：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15g，蒸馏水1000mL。

CMC培养基用于纤维素酶的测定，CMC培养基具体配方如下：硫酸镁0.1g，硫酸铵1g，10×磷酸缓冲液(磷酸氢二钾70g，磷酸二氢钾20g，蒸馏水1000mL)100mL，酵母提取物5g，甘油2mL，羧甲基纤维素钠1g，琼脂8g，蒸馏水900mL。

LB培养基、NB培养基、WA培养基用于细菌抑菌谱的测定，LB液体培养基具体配方如下：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl 10g，蒸馏水1000mL。NB培养基具体配方如下：蛋白胨10g，牛肉粉3g，NaCl 5g，蒸馏水1000mL，pH7.0。WA培养基具体配方如下：琼脂5g，蒸馏水1000mL，分装试管，每支5mL。

蛋白酶培养基用于蛋白酶的测定，蛋白酶培养基具体配方如下：NA培养基(蛋白胨10g，牛肉粉3g，NaCl 5g，琼脂15g，蒸馏水980mL，pH7.0)，20mL脱脂牛奶高温加热煮沸后加入融化后的NA培养基中。

几丁质酶培养基用于几丁质酶测定，几丁质酶培养基具体配方如下：酪胨(不含维生素)5g，几丁质盐3g，5％磷酸氢二钾水溶液7mL，MgSO₄·7H₂O(1：10000)5mL，琼脂15g，加水定容至1000mL，pH 7.0，116℃，高压蒸汽灭菌15min。

刚果红溶液：0.2％(w/v)。刚果红粉末2g，蒸馏水1000mL。可加少量酒精帮助溶解均匀。

NaCl溶液：1M。NaCl 58.5g，蒸馏水1000mL。

实施例1、菌株CX06的分离、鉴定及保藏

一、菌株CX06的分离

1、菌株分离

取不同作物根际土样，称取每份土样10g，加入到90mL灭菌水中，置于28℃恒温摇床振荡培养30min。将混匀的土样按照10^-1至10^-8进行梯度稀释，将稀释至梯度10^-6、10^-7、10^-8的土样进行涂板，每个梯度吸取100μL，涂布LB平板上，各涂3个平板，置于28℃培养2d。挑取不同类型的菌落于LB平板上进行纯化，纯化3次后，保存于-80℃冻存管中。最终从不同作物根际土壤中分离得到8株细菌，分别命名为CX01-CX08(图1)。

2、菌株筛选

将步骤1获得的8株菌作为供试菌株，以野油菜黄单胞野油菜致病变种(Xanthomonas campestris pv.Campestris)作为指示菌，采用双层培养法筛选到1株拮抗作用的生防菌菌株CX06。

具体方法如下：挑取菌株单菌落接种于LB液体培养基中，28℃、180r/min振荡培养至浓度为1×10⁸cfu/mL，在PDA平板中心接种5μL待测菌株菌悬液，28℃下培养24h后，将培养皿倒置，在通风橱中向每个培养皿里加入3mL氯仿，静置12h以灭活拮抗菌。将病原细菌接种于NB培养基中，28℃、180r/min振荡培养36h，向4mL 5％(m/v)WA培养基中加入100μL菌悬液，混匀后倒入PDA平板，作为上层。培养箱中培养24h，观察并测量抑菌圈大小。

二、菌株CX06的鉴定

1、生理生化鉴定

参考《常见细菌***鉴定手册》的方法，对菌株CX06分别进行如下生理生化试验：革兰氏染色试验、生长温度试验、耐盐性试验、游动性试验、接触酶试验、V-P试验、淀粉水解试验、柠檬酸盐的利用试验、明胶液化试验。

生理生化测定结果见表1，结果表明，菌株CX06为革兰氏阴性菌，最适生长温度为28～37℃，在1％NaCl中正常生长，4％NaCl抑制生长，有游动性。可以水解几丁质、明胶、吐温20，不能水解淀粉和纤维素，可以利用柠檬酸盐为碳源。

表1、菌株CX06的生理生化特性分析结果

注：+表示该试验结果为阳性；-表示该试验结果为阴性。

2、Biolog检测

挑取菌株CX06单菌落接种至NA培养基试管斜面上，28℃培养24h。由中国农业微生物菌种保藏中心使用BIOLOG GENⅢ试剂盒(按照试剂盒说明书操作)对菌株CX06进行唯一碳源利用的测定。

Biolog检测结果如表2所示，结果表明，菌株CX06可以利用D-麦芽糖、α-D-乳糖、D-蜜二糖、D-甘露糖、D-海藻糖和L-鼠李糖，不能利用葡聚糖、水苏糖、D-甘露醇和二甲胺四环素。初步鉴定菌株CX06为溶杆菌属。

表2、利用BIOLOG GENIII试剂条测定菌株CX06的唯一碳源利用

注：+，阳性；-，阴性；w，弱阳性

3、形态鉴定

1)形态观察

取CX06菌液3μL分别点于10％TSA、TSA、NA、LB培养基中央，28℃培养2-4d，观察形态。

结果如图2所示，结果表明：菌株CX06在NA培养基、LB培养基、TSA培养基上的菌落形态均呈淡黄色，菌落表面突出，菌体湿润有光泽，粘液状，不易挑起；在10％TSA培养基上，菌落形态出现乳白色，表面平坦，不易挑起。

2)电镜观察

菌株CX06在NA培养基上划线，在菌落生长新鲜处，用灭菌水冲洗菌落，并轻微晃动培养基，反复冲洗，配置成菌悬液。在石蜡板上滴加1-2滴新鲜的PTA复染液，再取新的铜网片吸附菌悬液，置于干净的滤纸上晾干。待铜网片上的菌悬液晾干时，将铜网片吸附菌悬液的一面接触负染液，漂浮染色15s。从负染液中取出铜网片，用滤纸吸干负染液，在日光灯下照45s使其干燥。将样品放置于透射电镜80千伏下观察细胞形态。结果如图3所示。

4、分子鉴定

用普通细菌基因组提取试剂盒小量提取菌株CX06的基因组DNA后，利用细菌16SrDNA的通用引物27F：5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′，1492R：5′-TACGGCTACCTTGTTACGACTT-3′，对菌株CX06的16S rDNA序列进行PCR扩增。

PCR运行程序：95℃预变性5min；95℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸45s，共34个循环；72℃延伸10min。所得产物由博迈德生物公司进行序列测定，测序结果表明：菌株CX06的16S rDNA基因序列如序列表中序列1所示。

NCBI网站下载其余序列，用MEGA7.0采用最大似然法构建***发育树，分析其亲缘关系。

结果如图4所示，该菌株与产酶溶杆菌Lysobacter enzymogenes YC36聚在一簇，确定菌株CX06为产酶溶杆菌(Lysobacter enzymogenes)。

结合形态鉴定、生理生化鉴定、Biolog测定和分子鉴定结果，确定菌株CX06属于产酶溶杆菌(Lysobacter enzymogenes)。

三、菌株CX06的保藏

产酶溶杆菌(Lysobacter enzymogenes)CX06已于2020年07月08日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC；地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；邮编：100101)，保藏编号为CGMCC No.20321。

实施例2、菌株CX06抑菌谱的测定

一、真菌抑菌谱测定及菌株CX06对病原真菌菌丝的影响

1、真菌抑菌谱测定

采用平板对峙法进行真菌抑菌谱的测定。

病原真菌：多主棒孢菌(Corynespora cassiicola)、尖孢镰孢菌(Fusariumoxysporum)、辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)、灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、茄匍柄霉菌(Stemphylium solani)、西瓜壳二孢菌(Ascochyta citrullina)。

多主棒孢菌(Corynespora cassiicola)已在文献“高苇、李宝聚、石延霞、谢学文.多主棒孢菌在黄瓜、番茄和茄子寄主上致病力的分化.园艺学报，2011，38(3)：465-470.”中公开，公众可从中国农业科学院蔬菜花卉研究所获得，以重复本申请实验，不可作为其它用途使用。

尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)已在文献“石延霞、张晓慧、徐玉芳、谢学文、柴阿丽、李宝聚.吡唑并嘧啶衍生物BDO-1诱导黄瓜对枯萎病的抗性.园艺学报，2019，46(05)：877-890.”中公开，公众可从中国农业科学院蔬菜花卉研究所获得，以重复本申请实验，不可作为其它用途使用。

辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)已在文献“程颖超、康华军、石延霞、柴阿丽、张红杰、谢学文、李宝聚.辣椒疫霉菌RT-PCR检测技术的建立及应用.园艺学报，2018，45(05)：997-1006.”中公开，公众可从中国农业科学院蔬菜花卉研究所获得，以重复本申请实验，不可作为其它用途使用。

茄匍柄霉菌(Stemphylium solani)已在文献“李新宇、李磊、陈利达、石延霞、柴阿丽、谢学文、李宝聚.番茄匍柄霉叶斑病拮抗细菌的筛选与鉴定.园艺学报，2020，47(04)：741-748.”中公开，公众可从中国农业科学院蔬菜花卉研究所获得，以重复本申请实验，不可作为其它用途使用。

西瓜壳二孢菌(Ascochyta citrullina)已在文献“刘书林、顾兴芳、石延霞、李宝聚、苗晗、王敏、王烨、张圣平.瓜类蔬菜蔓枯病研究概况.中国蔬菜，2013(18)：1-10.”中公开，公众可从中国农业科学院蔬菜花卉研究所获得，以重复本申请实验，不可作为其它用途使用。

灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)已在文献“石延霞、唐明、晋知文、谢学文、柴阿丽、李宝聚.蔬菜作物灰葡萄孢菌对不同类型杀菌剂抗性评价.中国蔬菜，2016，(03)：60-65.”中公开，公众可从中国农业科学院蔬菜花卉研究所获得，以重复本申请实验，不可作为其它用途使用。

立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)已在文献“高苇、李宝聚、孙军德、石延霞、金丹.绿色木霉对黄瓜立枯丝核菌和尖孢镰刀菌的拮抗作用.中国蔬菜，2008，(6)：9-12.”中公开，公众可从中国农业科学院蔬菜花卉研究所获得，以重复本申请实验，不可作为其它用途使用。

具体方法如下：在90mm PDA平板中心分别接种5mm所选取的真菌靶标菌片，28℃下培养2d。将菌株接种在液体LB培养基中，28℃、180r/min下振荡培养16h，调节菌悬液浓度至10⁸cfu/mL。在距离培养皿边缘10mm处相对的4点接种5μL菌株的菌悬液，以接种液体LB培养基为空白对照，28℃下培养5d后测量靶标菌的对照生长量(菌落半径)和处理生长量(接种细菌后的生长半径)，用抑菌率表示。抑菌率(％)＝(对照生长量-处理生长量)/对照生长量×100。

结果如表3和图5a所示，结果表明：菌株CX06可以有效抑制多主棒孢菌、辣椒疫霉菌、尖孢镰刀菌、灰葡萄孢菌、茄匍柄霉菌、西瓜壳二孢菌和立枯丝核菌的菌丝生长。对立枯丝核菌的抑制率在50％以上，对其他病原真菌的抑制率达到20％以上。

表3、真菌抑制率

注：数据为平均值±标准误，不同小字母表示0.05水平上差异显著。

2、菌株CX06对病原真菌菌丝的影响

挑取真菌抑菌谱测定中对峙平板菌落边界处菌丝，制作乳酚油玻片，置于光学显微镜下观察，拍照。

结果如图5b所示，结果表明：与正常菌丝对比，菌株CX06与病原真菌对峙处理后的菌丝形态异常，扭曲，畸形，顶端胞壁加厚，局部细胞膨大、菌丝内细胞内含物分布不均匀，生长杂乱，包壁变厚且异常分支增多等。

二、细菌抑菌谱测定

采用双层培养法进行细菌抑菌谱测定。

病原细菌：野油菜黄单胞野油菜致病变种(Xanthomonas campestrispv.campestris)、密执安棒杆菌马铃薯环腐致病变种(Clavibacter michiganensissubsp.sepedonicus)、丁香假单胞杆菌流泪致病变种(Pseudomonas syringaepv.lachryrnans)、葡萄土壤杆菌(Agrobacterium vitis)、密执安棒杆菌番茄溃疡病致病变种(Clavibacter michiganensis subsp.michiganensis)。

野油菜黄单胞野油菜致病变种(Xanthomonas campestris pv.campestris)已在文献“张扬、李金萍、周慧敏、李宝聚.十字花科蔬菜细菌性黑腐病的发生规律及防治.中国蔬菜，2011，17：23-25.”中公开，公众可从中国农业科学院蔬菜花卉研究所获得，以重复本申请实验，不可作为其它用途使用。

密执安棒杆菌马铃薯环腐致病变种(Clavibacter michiganensissubsp.sepedonicus)已在文献“李磊、赵昱榕、郑斐、石延霞、柴阿丽、谢学文、李宝聚.马铃薯黑痣病生防菌的筛选及防治效果.植物病理学报，2020，https://doi.org/10.13926/j.cnki.apps.000357.”中公开，公众可从中国农业科学院蔬菜花卉研究所获得，以重复本申请实验，不可作为其它用途使用。

丁香假单胞杆菌流泪致病变种(Pseudomonas syringae pv.lachryrnans)已在文献“李焕玲、李宝聚.李宝聚博士诊病手记(五十三)黄瓜细菌性角斑病的症状多样性与综合防治.中国蔬菜，2012，(21)：23-25.”中公开，公众可从中国农业科学院蔬菜花卉研究所获得，以重复本申请实验，不可作为其它用途使用。

葡萄土壤杆菌(Agrobacterium vitis)已在文献“赵昱榕、李磊、谢学文、石延霞、柴阿丽、孙广玉、李宝聚.贝莱斯芽胞杆菌ZF2对多主棒孢病菌防治效果.中国生物防治学报，2019，35(02)：217-225.”中公开，公众可从中国农业科学院蔬菜花卉研究所获得，以重复本申请实验，不可作为其它用途使用。

密执安棒杆菌番茄溃疡病致病变种(Clavibacter michiganensissubsp.michiganensis)已在文献“李磊、赵昱榕、郑斐、石延霞、柴阿丽、谢学文、李宝聚.芹菜软腐病拮抗芽孢杆菌筛选及防治效果.中国生物防治学报，2020，36(03)：388-395.”中公开，公众可从中国农业科学院蔬菜花卉研究所获得，以重复本申请实验，不可作为其它用途使用。

具体方法如下：将菌株接种在液体LB培养基中，28℃、180r/min下振荡培养16h，调节菌悬液浓度至10⁸cfu/mL。在90mm PDA平板中心接种5μL菌株的菌悬液，以接种液体LB培养基为空白对照，28℃下培养24h后在通风橱中向倒扣的培养皿中加入3mL氯仿，静置12h。将病原细菌接种于NB培养基中，28℃振荡培养36h，调节菌悬液浓度至10⁸cfu/mL。在4mL5％(m/v)WA培养基中加入100μL病原菌菌悬液，混匀后倒入PDA平板，作为上层。培养箱中培养48h，观察并测量抑菌圈大小。抑菌率(％)＝(对照生长量-处理生长量)/对照生长量×100。

结果如表4和图6所示，结果表明：菌株CX06对病原细菌也有很好的抑制效果，对野油菜黄单胞菌致病变种、密执安棒杆菌番茄溃疡病致病变种、葡萄土壤杆菌、丁香假单胞菌流泪致病变种、密执安棒杆菌马铃薯环腐致病变种的抑菌直径均在1.70cm以上，其中对野油菜黄单胞野油菜致病变种的抑菌率在30％以上。

表4、细菌抑菌率

注：数据为平均值±标准误，不同小字母表示0.05水平上差异显著。

实施例3、菌株CX06酶活性检测

一、蛋白酶的检测

挑取菌株CX06单菌落接种于LB液体培养基中，28℃、180r/min振荡培养至浓度为1×10⁸cfu/mL。在蛋白酶培养基中心位置接种菌株CX06菌悬液，每个处理重复3次，28℃培养24h后观察消解圈。

二、纤维素酶的检测

挑取菌株CX06单菌落接种于LB液体培养基中，28℃、180r/min振荡培养至浓度为1×10⁸cfu/mL。在CMC培养基中心位置接种菌株CX06菌悬液，28℃培养24h后，3mL刚果红染料染色30min，5mL 1mol/L NaCl溶液脱色15min，每个处理重复3次，观察消解圈。

三、几丁质酶测定

挑取菌株CX06单菌落接种于LB液体培养基中，28℃、180r/min振荡培养至浓度为1×10⁸cfu/mL。在几丁质酶培养基中心位置接种菌株CX06菌悬液，每个处理重复3次，28℃培养24h后观察消解圈。

结果如图7所示，结果表明：菌株CX06在蛋白酶培养基中有明显的透明圈产生，在CMC培养基中经过染色、脱色，形成黄色的透明圈，在几丁质酶培养基中有非常明显的透明圈产生。说明菌株CX06具有产蛋白酶、纤维素酶和几丁质酶的能力。

实施例4、菌株CX06生长曲线和pH值测定

挑取菌株单菌落接种于LB液体培养基中，28℃、180r/min下振荡培养16h，调节菌悬液浓度至1×10⁸cfu/mL。将菌悬液按1：1000的比例加入到LB液体培养基中，28℃下振荡培养。每4h一次，连续测量48h菌株的OD₆₀₀值与活菌数及pH值，3次重复。

结果如图8和图9所示，结果表明：在28℃条件下，菌株CX06菌体数量在培养初期迅速增长，在30h后达到最大值，OD₆₀₀值为2.12，平板菌落数为2.7×10¹²/mL；随后菌体数量逐渐平稳。此外，随着培养时间的延长，菌株CX06 pH值逐渐增加，48h后pH值为8.14。

实施例5、菌株CX06防治甘蓝黑腐病效果检测

采用喷雾接种法进行甘蓝黑腐病防效测定。

具体方法如下：挑取野油菜黄单胞野油菜致病变种(Xanthomonas campestrispv.campestris)单菌落接种于NB培养基中，28℃、180r/min振荡培养至浓度为1×10⁸cfu/mL，对甘蓝(中甘21号)幼苗进行喷雾接种预处理。挑取菌株CX06单菌落接种于LB液体培养基中，28℃、180r/min振荡培养至浓度为1×10⁸cfu/mL，稀释100倍后喷雾接种于接种病原菌24h后的甘蓝幼苗上。每处理10株，3次重复。其后每天观察甘蓝发病情况。计算发病率、病情指数与防治效果。试验共设置3个处理：(1)菌株CX06菌液100倍液(1×10⁸cfu/mL)；(2)4％春雷霉素1000倍液；(3)空白对照(蒸馏水)；(4)健康对照。

野油菜黄单胞野油菜致病变种(Xanthomonas campestris pv.campestris)已在文献“张扬、李金萍、周慧敏、李宝聚.十字花科蔬菜细菌性黑腐病的发生规律及防治.中国蔬菜，2011，17：23-25.”中公开，公众可从中国农业科学院蔬菜花卉研究所获得，以重复本申请实验，不可作为其它用途使用。

4％春雷霉素可湿性粉剂(山东省乳山韩威生物科技有限公司，登记证号：PD20100329)。

发病率(％)＝100×发病总叶数/调查总叶数。

病情指数＝100×∑(各级病叶数×相对级数值)/(调查总叶数×9)。病级分类标准：0级：无病斑；1级：病斑面积占整个叶面积的5％以下；2级：病斑面积占整个叶面积的6％～25％；3级：病斑面积占整个叶面积的26％～50％；4级：病斑面积占整个叶面积的51％～75％；5级：病斑面积占整个叶面积的75％以上。

防治效果(％)＝100×(对照病情指数-处理病情指数)/对照病情指数。

结果如表5和图10所示，结果表明：菌株CX06在温室条件下对野油菜黄单胞致病变种引起的甘蓝黑腐病有良好的防治效果。接种菌株CX06的甘蓝植株病情指数为8.4，相比接种野油菜黄单胞致病变种的对照试验组，病情指数下降了82.2。从防治效果看，菌株CX06对甘蓝黑腐病的防效为90.7％，高于春雷霉素的防治效果。

表5、菌株CX06对甘蓝黑腐病的盆栽防效

处理	浓度	病情指数	防治效果(％)
				CX06	1×10<sup>8</sup>cfu/mL	8.4	90.7
春雷霉素	1000倍液	14.4	84.1
				对照CK	-	90.6	-

实施例6、菌株CX06防治甘蓝茎基腐病效果检测

采用麦粒接种法进行甘蓝茎基腐病防效测定。

具体方法如下：对甘蓝(中甘21号)茎基部采用针刺造成伤口后用带有立枯丝核菌菌丝的麦粒接种处理，处理1d后采用灌根法，挑取菌株CX06单菌落接种于LB液体培养基中，28℃、180r/min振荡培养至浓度为1×10⁸cfu/mL，每株用10mL进行灌根处理，每个处理10株，其后每天观察甘蓝发病情况。计算发病率、病情指数与防治效果。试验设置3个处理：(1)菌株CX06(1×10⁸cfu/mL)；(2)4％井冈霉素500倍液；(3)空白对照(蒸馏水)。

立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)已在文献“高苇、李宝聚、孙军德、石延霞、金丹.绿色木霉对黄瓜立枯丝核菌和尖孢镰刀菌的拮抗作用.中国蔬菜，2008，(6)：9-12.”中公开，公众可从中国农业科学院蔬菜花卉研究所获得，以重复本申请实验，不可作为其它用途使用。

4％井冈霉素水剂(山东省济宁市通达化工厂，PD20142295)。

发病率(％)＝100×发病总叶数/调查总叶数。

病情指数＝100×∑(各级病叶数×相对级数值)/(调查总叶数×9)。病级分类标准：0级：无病斑；1级：病斑面积占整个叶面积的5％以下；2级：病斑面积占整个叶面积的6％～25％；3级：病斑面积占整个叶面积的26％～50％；4级：病斑面积占整个叶面积的51％～75％；5级：病斑面积占整个叶面积的75％以上。

防治效果(％)＝100×(对照病情指数-处理病情指数)/对照病情指数。

结果如表6和图11所示，结果表明：菌株CX06在温室条件下对立枯丝核菌引发的甘蓝茎基腐病有良好的防治效果。接种菌株CX06的甘蓝植株病情指数为31.25，相比接种立枯丝核菌的对照试验组，病情指数下降了53.45。从防治效果看，菌株CX06对甘蓝茎基腐病的防效为62.8％，高于4％井岗霉素的防治效果。

表6、菌株CX06对甘蓝茎基腐病的盆栽防效

处理	浓度	病情指数	防治效果(％)
				CX06	1×10<sup>8</sup>cfu/mL	31.25	62.8
4％井冈霉素水剂	500倍液	44.4	47.2
				对照CK	-	84.1	-

实施例7、产酶溶杆菌CX06与其他药剂防效对比平行试验

采用喷雾法测定菌株CX06和其他药剂对白菜细菌性黑腐病的活体防效。

具体方法如下：挑取野油菜黄单胞野油菜致病变种(Xanthomonas campestrispv.campestris)单菌落接种于NB培养基中，28℃、180r/min振荡培养至浓度为1×10⁸cfu/mL，喷雾接种于白菜幼苗上。病原菌接种24h后，分别将对照药剂和CX06菌悬液稀释100倍后喷雾接种于白菜幼苗上，正常培养，待空白对照处理组植株完全发病后调查其他处理组的病情指数和防效。以蒸馏水作为供试品的空白对照(CK)。每处理15株，3次重复。CX06菌悬液的制备方法如下：挑取菌株CX06单菌落接种于LB液体培养基中，28℃、180r/min振荡培养至浓度为1×10⁸cfu/mL。

对照药剂分别为：10亿CFU/克多粘类芽孢杆菌可湿性粉剂(广东顾地丰生物科技有限公司，登记证号：PD20181264)350倍液，1000亿芽孢/克枯草芽孢杆菌可湿性粉剂(武汉科诺生物科技股份有限公司，登记证号：PD20140209)1400倍液，8亿个/克蜡质芽孢杆菌可湿性粉剂(山东泰诺药业有限公司，登记证号：PD20094534)100倍液，100亿芽孢/克坚强芽孢杆菌可湿性粉剂(江西顺泉生物科技有限公司，登记证号：PD20184023)100倍液，80亿个活芽孢/毫升地衣芽孢杆菌水剂(广西金燕子农药有限公司，登记证号：PD20140122)90倍液，5亿芽孢/克荧光假单胞杆菌可湿性粉剂(山东泰诺药业有限公司，登记证号：PD20140874)50倍液，3％中生菌素可湿性粉剂(福建凯立生物制品有限公司，登记证号：PD20110113)650倍液，4％春雷霉素可湿性粉剂(山东省乳山韩威生物科技有限公司，登记证号：PD20100329)1000倍液，80％乙蒜素乳油(开封大地农化生物科技有限公司，登记证号：PD20101285)2200倍液，0.3％四霉素水剂(辽宁微科生物工程股份有限公司，登记证号：PD20160345)1100倍液，10％多抗霉素可湿性粉剂(山东省德州祥龙生化有限公司，登记证号：PD20100857)1000倍液，30％琥胶肥酸铜可湿性粉剂(黑龙江齐齐哈尔四友化工有限公司，登记证号：PD20097367)275倍液，46％氢氧化铜水分散粒剂(美国杜邦公司，登记证号：PD20110053)1800倍液，33.5％喹啉铜悬浮剂(山东奥胜生物科技有限公司，登记证号：PD20200743)1500倍液，1.6％噻霉酮涂抹剂(陕西西大华特科技实业有限公司，登记证号：PD20120375)700倍液，20％噻唑锌悬浮剂(浙江新农化工股份有限公司，登记证号：PD20096932)1000倍液。

病级分类标准：0级：无病斑；1级：病斑面积占整个叶面积的5％以下；2级：病斑面积占整个叶面积的6％～25％；3级：病斑面积占整个叶面积的26％～50％；4级：病斑面积占整个叶面积的51％～75％；5级：病斑面积占整个叶面积的75％以上。发病率(％)＝100×发病总叶数/调查总叶数。病情指数＝100×∑(各级病叶数×相对级数值)/(调查总叶数×9)。防治效果(％)＝100×(对照病情指数-处理病情指数)/对照病情指数。

野油菜黄单胞野油菜致病变种(Xanthomonas campestris pv.campestris)已在文献“张扬、李金萍、周慧敏、李宝聚.十字花科蔬菜细菌性黑腐病的发生规律及防治.中国蔬菜，2011，17：23-25.”中公开，公众可从中国农业科学院蔬菜花卉研究所获得，以重复本申请实验，不可作为其它用途使用。

结果如表7和图12所示，结果表明：菌株CX06对白菜细菌性黑腐病的防效达79.98％，显著高于其他药剂。

表7、产酶溶杆菌CX06与其他药剂防效对比结果

实施例7、菌株CX06对抗生素的耐受水平

选用10种抗生素：氨苄青霉素、羧苄青霉素、卡那霉素、氯霉素、链霉素、四环素、庆大霉素、利福平、万古霉素、壮观霉素，制备50μg/mL、60μg/mL、70μg/mL3种抗生素梯度平板，接种CX06菌悬液，观察生长情况，3次重复。CX06菌悬液制备方法如下：挑取菌株CX06单菌落接种于LB液体培养基中，28℃、180r/min振荡培养至浓度为1×10⁸cfu/mL。

结果如表8所示，结果表明：菌株CX06对多种抗生素具备较高的耐受能力，对氨苄、羧苄、氯霉素、卡那霉素、链霉素、庆大霉素、壮观霉素的耐受水平均达到50μg/mL以上，对四环素的耐受水平达到30μg/mL，而对利福平和万古霉素的耐受水平在50μg/mL以下，表明菌株CX06仅对利福平和万古霉素敏感，对其余8种抗生素均不敏感。

表8、菌株CX06对抗生素耐受水平(μg/mL)

以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本发明作进一步的改进。总之，按本发明的原理，本申请欲包括任何变更、用途或对本发明的改进，包括脱离了本申请中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。按以下附带的权利要求的范围，可以进行一些基本特征的应用。

序列表

<110> 中国农业科学院蔬菜花卉研究所

<120> 一株拮抗野油菜黄单胞菌的产酶溶杆菌CX06及其应用

<160> 1

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1326

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 1

tgcttctggt gcaacaaact cccatggtgt gacgggcggt gtgtacaagg cccgggaacg 60

tattcaccgc agcaatgctg atctgcgatt actagcgatt ccgacttcat ggagtcgagt 120

tgcagactcc aatccggact gagatagggt ttctgggatt ggcttgccct cgcgggtttg 180

cagccctctg tccctaccat tgtagtacgt gtgtagccct ggccgtaagg gccatgatga 240

cttgacgtca tccccacctt cctccggttt gtcaccggcg gtctccttag agttcccacc 300

attacgtgct ggcaactaag gacaagggtt gcgctcgttg cgggacttaa cccaacatct 360

cacgacacga gcacgacagc catgcagcac ctgtgttcga gttcccgaag gcaccaatcc 420

atctctggaa agttctcgac atgtcaaggc caggtaaggt tcttcgcgtt gcatcgaatt 480

aaaccacata ctccaccgct tgtgcgggcc cccgtcaatt cctttgagtt tcagtgcgac 540

cgtacttccc aggcggcgaa cttaacgcgt tagcttcgat actgagggcc aagttgcccc 600

caacatccag ttcgcatcgt ttagggcgtg gactaccagg gtatctaatc ctgtttgctc 660

cacgctttcg tgcctcagtg tcagtgctgg tccaggtagc cgccttcgcc acagatgttc 720

ctcccgatat ctacgcattt cactgctaca ccgggaattc cgctaccctc taccgcactc 780

tagtaagcca gtttccaatg ccattcccag gttgagccca gggctttcac atcagactta 840

acaaaccacc tacgcacgct ttacgcccag taattccgag taacgcttgc acccttcgta 900

ttaccgcggc tgctggcacg aagttagccg gtgcttattc ttccggtacc gtcatgactc 960

aaggttatta accctaagct tttctttccg gacaaaagtg ctttacaacc cgaaggcctt 1020

cttcacacac gcggcatggc tggatcaggc ttgcgcccat tgtccaatat tccccactgc 1080

tgcctcccgt aggagtctgg accgtgtctc agttccagtg tggctgatca tcctctcaga 1140

ccagctacgg atcgtcgcct tggtgggcct ttaccccgcc aactagctaa tccgacgtcg 1200

gctcatctat ctgcgtgagg ccttgcggtc ccccactttc acccgtaggt cgtatgcggt 1260

attagcgtaa gtttccctac gttatccccc acaaataggc agattccgac gtattcctca 1320

cccgtc 1326

Claims (9)

1.产酶溶杆菌（Lysobacter enzymogenes）CX06，其保藏编号为CGMCC No.20321。

2.权利要求1所述产酶溶杆菌（Lysobacter enzymogenes）CX06的菌悬液或发酵液或含有所述产酶溶杆菌CX06的菌剂。

3.权利要求1所述产酶溶杆菌（Lysobacter enzymogenes）CX06或其菌悬液或发酵液或含有所述产酶溶杆菌CX06的菌剂在抑制植物致病菌中的应用；

所述植物致病菌为致病真菌或致病细菌；

所述致病真菌为多主棒孢菌（Corynespora cassiicola）、尖孢镰孢菌（Fusarium oxysporum）、辣椒疫霉菌（Phytophthora capsici）、灰葡萄孢菌（Botrytis cinerea）、立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）、茄匍柄霉菌（Stemphylium solani）、西瓜壳二孢菌（Ascochyta citrullina）；

所述致病细菌为野油菜黄单胞野油菜致病变种（Xanthomonas campestris pv.campestris）、密执安棒杆菌马铃薯环腐致病变种（Clavibacter michiganensis subsp.sepedonicus）、丁香假单胞杆菌流泪致病变种（Pseudomonas syringae pv.lachryrnans）、葡萄土壤杆菌（Agrobacterium vitis）、密执安棒杆菌番茄溃疡病致病变种（Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis）。

4.权利要求1所述产酶溶杆菌（Lysobacter enzymogenes）CX06或其菌悬液或发酵液或含有所述产酶溶杆菌CX06的菌剂在制备抑制植物致病菌的产品中的应用；

所述植物致病菌为致病真菌或致病细菌；

所述致病真菌为多主棒孢菌（Corynespora cassiicola）、尖孢镰孢菌（Fusarium oxysporum）、辣椒疫霉菌（Phytophthora capsici）、灰葡萄孢菌（Botrytis cinerea）、立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）、茄匍柄霉菌（Stemphylium solani）、西瓜壳二孢菌（Ascochyta citrullina）；

所述致病细菌为野油菜黄单胞野油菜致病变种（Xanthomonas campestris pv.campestris）、密执安棒杆菌马铃薯环腐致病变种（Clavibacter michiganensis subsp.sepedonicus）、丁香假单胞杆菌流泪致病变种（Pseudomonas syringae pv.lachryrnans）、葡萄土壤杆菌（Agrobacterium vitis）、密执安棒杆菌番茄溃疡病致病变种（Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis）。

5.权利要求1所述产酶溶杆菌（Lysobacter enzymogenes）CX06或其菌悬液或发酵液或含有所述产酶溶杆菌CX06的菌剂在防治植物致病菌引起的植物病害中的应用；

所述植物致病菌为致病真菌或致病细菌；

所述致病真菌为多主棒孢菌（Corynespora cassiicola）、尖孢镰孢菌（Fusarium oxysporum）、辣椒疫霉菌（Phytophthora capsici）、灰葡萄孢菌（Botrytis cinerea）、立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）、茄匍柄霉菌（Stemphylium solani）、西瓜壳二孢菌（Ascochyta citrullina）；

所述致病细菌为野油菜黄单胞野油菜致病变种（Xanthomonas campestris pv.campestris）、密执安棒杆菌马铃薯环腐致病变种（Clavibacter michiganensis subsp.sepedonicus）、丁香假单胞杆菌流泪致病变种（Pseudomonas syringae pv.lachryrnans）、葡萄土壤杆菌（Agrobacterium vitis）、密执安棒杆菌番茄溃疡病致病变种（Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis）。

6.权利要求1所述产酶溶杆菌（Lysobacter enzymogenes）CX06或其菌悬液或发酵液或含有所述产酶溶杆菌CX06的菌剂在制备防治植物致病菌引起的植物病害的产品中的应用；

所述植物致病菌为致病真菌或致病细菌；

所述致病真菌为多主棒孢菌（Corynespora cassiicola）、尖孢镰孢菌（Fusarium oxysporum）、辣椒疫霉菌（Phytophthora capsici）、灰葡萄孢菌（Botrytis cinerea）、立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）、茄匍柄霉菌（Stemphylium solani）、西瓜壳二孢菌（Ascochyta citrullina）；

所述致病细菌为野油菜黄单胞野油菜致病变种（Xanthomonas campestris pv.campestris）、密执安棒杆菌马铃薯环腐致病变种（Clavibacter michiganensis subsp.sepedonicus）、丁香假单胞杆菌流泪致病变种（Pseudomonas syringae pv.lachryrnans）、葡萄土壤杆菌（Agrobacterium vitis）、密执安棒杆菌番茄溃疡病致病变种（Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis）。

7.权利要求1所述产酶溶杆菌（Lysobacter enzymogenes）CX06或其菌悬液或发酵液或含有所述产酶溶杆菌CX06的菌剂在防治甘蓝黑腐病和/或甘蓝茎基腐病和/或白菜细菌性黑腐病中的应用。

8.权利要求1所述产酶溶杆菌（Lysobacter enzymogenes）CX06或其菌悬液或发酵液或含有所述产酶溶杆菌CX06的菌剂在制备防治甘蓝黑腐病和/或甘蓝茎基腐病和/或白菜细菌性黑腐病的产品中的应用。

9.如下b1）-b3）中任一种方法：

b1）一种抑制植物致病菌的方法，包括如下步骤：用权利要求1所述产酶溶杆菌（Lysobacter enzymogenes）CX06或其菌悬液或发酵液或含有所述产酶溶杆菌CX06的菌剂处理植物致病菌；

b2）一种防治植物致病菌引起的植物病害的方法，包括如下步骤：用权利要求1所述产酶溶杆菌（Lysobacter enzymogenes）CX06或其菌悬液或发酵液或含有所述产酶溶杆菌CX06的菌剂处理植物；

b3）一种防治甘蓝黑腐病和/或甘蓝茎基腐病和/或白菜细菌性黑腐病的方法，包括如下步骤：用权利要求1所述产酶溶杆菌（Lysobacter enzymogenes）CX06或其菌悬液或发酵液或含有所述产酶溶杆菌CX06的菌剂处理甘蓝或白菜；

其中，b1）或b2）中所述植物致病菌为致病真菌或致病细菌；

所述致病真菌为多主棒孢菌（Corynespora cassiicola）、尖孢镰孢菌（Fusarium oxysporum）、辣椒疫霉菌（Phytophthora capsici）、灰葡萄孢菌（Botrytis cinerea）、立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）、茄匍柄霉菌（Stemphylium solani）、西瓜壳二孢菌（Ascochyta citrullina）；

所述致病细菌为野油菜黄单胞野油菜致病变种（Xanthomonas campestris pv.campestris）、密执安棒杆菌马铃薯环腐致病变种（Clavibacter michiganensis subsp.sepedonicus）、丁香假单胞杆菌流泪致病变种（Pseudomonas syringae pv.lachryrnans）、葡萄土壤杆菌（Agrobacterium vitis）、密执安棒杆菌番茄溃疡病致病变种（Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis）。

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