CN112708627A - 一种通过花色识别转基因大豆植株的方法 - Google Patents

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flower
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侯文胜
陈莉
袁珊
孙�石
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Institute of Crop Sciences of Chinese Academy of Agricultural Sciences
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Institute of Crop Sciences of Chinese Academy of Agricultural Sciences
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
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    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8262—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield involving plant development
    • C12N15/827—Flower development or morphology, e.g. flowering promoting factor [FPF]
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
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    • G01N21/77—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator
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Abstract

本发明公开了一种通过花色识别转基因大豆植株的方法。本发明提供了一种核酸分子，序列表中序列1所示的核苷酸序列组成的DNA分子。本发明发明人发现大豆花色是一种很容易识别的表型，通过Z1基因的过表达，能够使白色花变成紫色花，该方法可作为鉴定大豆转基因阳性植株的可视化表型鉴定指标。因此，放在可视化报告***上，这将极大方便和有效的检测转基因大豆植株。

Description

一种通过花色识别转基因大豆植株的方法
技术领域
本发明属于生物技术领域，涉及一种通过花色识别转基因大豆植株的方法。
背景技术
目前，大豆遗传转化主要采用根癌农杆菌介导的大豆子叶节法，获得的T0转基因植株大多为嵌合体，纯合转基因植株至少从T1代获得。大量的转基因植株鉴定工作都是在T1代，检测费时费力，成本高。目前常用的报告基因包括绿色荧光蛋白基因(GFP)、β-葡萄糖醛酸酶基因(GUS)、红色荧光蛋白基因(DsRed2)等，对于大豆并不适用。GFP和DsRed2在大豆中不容易观察，GUS染色会破坏组织活性。一个高效的、可视化的转基因植物筛选***将对大豆转化技术产生重大影响。
因此，适用于大豆转基因植物鉴定的报告基因选择及鉴定方法就成为研究重点。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种核酸分子。
本发明提供的核酸分子，其为如下1)-4)任一所述的DNA分子：
1)序列表中序列1所示的核苷酸序列组成的DNA分子；
2)在1)序列的末端连接标签编码基因得到的共表达核酸分子；
3)与1)或2)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且编码相同蛋白质的DNA分子；
4)在严格条件下与1)或2)限定的核苷酸序列杂交，且编码相同蛋白质的DNA分子。
含有上述核酸分子的表达盒、重组载体、转基因细胞或重组菌也是本发明保护的范围。
上述的核酸分子或上述的表达盒、重组载体、转基因细胞或重组菌在如下A-E中的应用也是本发明保护的范围；
A、改变植物花色；
B、筛选转基因植物；
C、用于可视化筛选转其他外源基因植物；
D、作为可视化报告标签；
E、制备可视化的转基因植物筛选***。
本发明另一个目的是提供一种改变植物花色的方法。
本发明提供的方法，为如下1)或2)：
1)所述的方法包括如下步骤：提高出发植物中上述核酸分子编码蛋白的含量和/或活性，得到花色改变的转基因植物或其后代；
2)所述的方法包括如下步骤：提高出发植物中编码上述核酸分子的表达，得到花色改变的转基因植物或其后代。
上述方法中，所述花色改变为将白色变为紫色。
本发明还有一个目的是提供一种通过花色鉴定转基因植物的方法，为如下1)或2):
1)所示的方法包括如下步骤：提高出发植物中上述核酸分子编码蛋白的含量和/或活性，得到转化植株，从所述转化植株的后代中筛选花色变化的植株，即为转基因植物；
2)所示的方法包括如下步骤：提高出发植物中编码上述核酸分子的表达，得到转化植株，从所述转化植株的后代中筛选花色变化的植株，即为转基因植物。
上述从所述转化植株的后代中筛选花色变化的植株为如下：检测转化植株的后代花色，若为紫花，则为转基因植株；若为白花，则不为转基因植株。
上述中，所述植物为双子叶植物或单子叶植物。
上述中，所述花色改变或花色变化为由白花变为紫花。
本发明发明人发现大豆花色是一种很容易识别的表型，从大豆中黄42品种中克隆了一个基因，命名为ZI。通过ZI基因的过表达，能够使白色花变成紫色花，该方法可作为鉴定大豆转基因阳性植株的可视化表型鉴定指标。因此，放在可视化报告***上，这将极大方便和有效的检测转基因大豆植株。
附图说明
图1为过表达ZI转基因植株呈现紫花。
图2为PAT试纸条检测结果。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
白花栽培大豆Jack记载在如下文献中：Chen L,Cai Y,Liu X,Yao W,Guo C,SunS,Wu C,Jiang B,Han T,Hou W(2018),Improvement of soybean Agrobacterium-mediated transformation efficiency by adding glutamine and asparagine intothe culture media.International Journal of Molecular Sciences 19,3039,公众可以从中国农业科学院作物科学研究所获得。
大豆品种Zhonghuang42记载在如下文献中：陈普，陈莉，韩天富，东方阳，侯文胜。中国大豆主栽品种遗传转化效率相关性状的比较研究，中国油料作物学报，2016，38(1)：027-033,公众可以从中国农业科学院作物科学研究所获得。
pTF101载体记载在如下文献中:Paz M,Shou H,Guo Z,Zhang Z,Banerjee A,etal.Assessment of conditions affecting Agrobacterium-mediated soybeantransformation using the cotyledonary node explant.Euphytica.2004,136:167–179，公众可从中国农业科学院作物科学研究所获得。
根癌农杆菌EHA101记载在如下文献中：Chen L,Cai Y,Liu X,Yao W,Guo C,SunS,Wu C,Jiang B,Han T,Hou W(2018),Improvement of soybean Agrobacterium-mediated transformation efficiency by adding glutamine and asparagine intothe culture media.International Journal of Molecular Sciences 19,3039，公众可以从中国农业科学院作物科学研究所获得。
MS盐：Phyto Tech，目录号：M524。
MS有机：Phyto Tech，目录号：M533。
B5有机：Phytotech公司，目录号：G219。
B5盐：Phytotech公司，目录号：G768。
YEP固体培养基由溶剂和溶剂组成；溶质及其在YEP固体培养基中的浓度为：NaCl5g/L，酵母提取物5g/L，胰蛋白胨10g/L，15g/L琼脂；溶剂为水。YEP固体培养基的pH为7.0。
发芽培养基(pH5.8)：3.12g/L B5盐、1ml/L B5有机、20g/L蔗糖、7.5g/L琼脂，余量为水。
液体培养基(pH5.4)：0.43g/L MS盐、1ml/L B5有机、40mg/L乙酰丁香酮、150mg/L二硫苏糖醇、100mg/L L-半胱氨酸、30g/L蔗糖、3.9mg/L 2-吗啉乙磺酸，余量为水。
共培养培养基(pH5.4)：0.43g/L MS盐、1ml/L B5有机、40mg/L乙酰丁香酮、150mg/L二硫苏糖醇、100mg/L L-半胱氨酸、30g/L蔗糖、7.5g/L琼脂、3.9mg/L 2-吗啉乙磺酸，余量为水。
恢复培养基(pH5.4)：3.1g/L B5盐、1ml/L B5有机、30g/L蔗糖、150mg/L 头孢霉素、150mg/L特美汀、1mg/L 6-BA、0.98g/L 2-吗啉乙磺酸、7.5g/L琼脂、4ml/L Fe盐(200×)、50mg/L L-天冬酰胺、50mg/L L-谷氨酰胺，余量为水。
筛选培养基(pH5.4)：3.1g/L B5盐、1ml/L B5有机、0.98g/L 2-吗啉乙磺酸、30g/L蔗糖、150mg/L头孢霉素、150mg/L特美汀、1mg/L 6-BA、6mg/L草丁膦、7.5g/L琼脂、4ml/L Fe盐(200×)、50mg/L L-天冬酰胺、50mg/L L-谷氨酰胺，余量为水。
伸长培养基(pH5.6)：4.0g/L MS盐、1ml/L B5有机、0.6g/L 2-吗啉乙磺酸、30g/L蔗糖、150mg/L头孢霉素、150mg/L特美汀、0.1mg/L IAA、0.5mg/L GA、1mg/L 6-BA、6mg/L草丁膦、7.5g/L琼脂、4ml/L Fe盐(200×)、50mg/L L-天冬酰胺、50mg/L L-谷氨酰胺，余量为水。
生根培养基(pH5.7)：2.165g/L MS盐、1ml/L B5有机、0.6g/L 2-吗啉乙磺酸、20g/L蔗糖、7.5g/L琼脂、50mg/L L-天冬酰胺、50mg/L L-谷氨酰胺，余量为水。
实施例1、一种通过花色识别转基因大豆植株的方法
一、GmZI基因的克隆
提取紫花栽培大豆品种Zhonghuang42的花中RNA,逆转录合成cDNA。
以cDNA为模板，采用新的引物F和引物R组成的引物对进行PCR扩增，产物大小约为1500bp。
F：5′-ATGGACTCATTGTTACTTCT-3′；
R：5′-CAACCAATTCTAAGAAATGTAA-3′。
经过测序，该PCR产物的核苷酸序列为序列表中序列1，即为ZI基因。
二、GmZI过表达载体的构建
1、上述一得到的PCR产物为模板，采用引物F-inf和引物R-inf组成的引物对进行PCR扩增，回收约1500bp的PCR扩增产物。
F-inf：5′-GAGAACACGGGGGACTCTAGAATGGACTCATTGTTACTTCT-3′；
R-inf：5′-CCCTTGCTCACCATTCTAGACAACCAATTCTAAGAAATGTAA-3′。
2、用限制性内切酶XbaⅠ单酶切PTF101-GFP载体，回收约10000bp的载体骨架。PTF101-GFP载体是用限制性内切酶XbaⅠ和SacⅠ双酶切PTF101载体，回收约10000bp载体骨架，将GFP基因(序列3)连接到PTF101载体骨架上构建而成。
3、将步骤1得到的PCR产物和步骤2得到的载体骨架连接，进行同源重组，得到重组表达载体PTF-ZI。
重组表达载体PTF-ZI为将序列表中序列1所示的GmZI基因***PTF101-GFP载体中，得到的重组载体。
三、重组菌的构建
将重组表达载体PTF-ZI转入根癌农杆菌EHA101中，得到重组菌EHA101/PTF101-ZI。
四、农杆菌介导转化
利用农杆菌介导法将构建好的EHA101/PTF101-ZI转化白花大豆品种Jack，具体方法为：
1、种子灭菌
1)、取无病虫害和斑点、饱满、均一、干燥的大豆品种Jack(以下称为野生型大豆；为白花)种子，完全平铺在培养皿中，然后将培养皿放入干燥器中。
2)、完成步骤1)后，在干燥器中放入100ml容量的烧杯，在烧杯中倒入80ml 12M次氯酸钠水溶液，再慢慢加入4ml浓盐酸，然后迅速盖上干燥器，用凡士林密封，放置12-16h，进行氯气灭菌。
2、制备侵染菌液
1)、28℃，培养EHA101/PTF101-ZI农杆菌菌液，用液体培养基重悬，得到OD600nm＝0.6的侵染菌液。
2)、将萌发好的种子放入超净台中，在显微镜下，剥去种皮，沿长轴将两个子叶分开，保留带完整胚轴的那片子叶，在其胚轴和子叶连接处进行划伤，一般一个子叶划伤3-5刀，然后在28℃培养箱中，浸染2h。
3)、将子叶内面(平滑面)向上，平铺于已铺有无菌滤纸的共培养培养基上，温度22℃，暗培养5d。
4)、共培养5d后，外植体胚轴伸长到1-2cm，切掉部分胚轴，使其保留0.5cm。将处理后的外植体放到恢复培养基中，28℃，16h光照/8h黑暗条件下，培养7d。
5)、从恢复培养基中取出外植体，去除新芽，切除部分胚轴，保留0.5cm的胚轴，再将修整后外植体转入到筛选培养基中，28℃，16h光照/8h黑暗条件下培养21d。
6)、经过21d的筛选诱导，外植体产生大量不定芽，剥除子叶和棕色的叶子，将剩余的部分转入伸长培养基中培养，28℃，16h光照/8h黑暗条件下培养。
7)、在伸长培养基中，当丛生芽抽出5-8cm幼茎时，从不定芽基部剪下来；茎基部在1mg/L IBA溶液中沾1min，然后转入生根培养基中培养，28℃，16h光照/8h黑暗条件下培养一周，在茎基部产生大量根后，移栽到盆中，长成的植株为T0代转化大豆植株。
五、转基因植株的鉴定
1、花色鉴定T0代植株
统计T0代转化大豆植株的花色，在T0代转化大豆植株中，出现9株紫花植株。
同时剪取T0代转化大豆植株的叶片，放入含有200ul无菌水的1.5ml离心管中，将叶片捣碎成匀浆。将PAT试纸条(转化用的载体上的筛选基因是bar基因)放入管中，15分钟内记录试纸条上出现的条带数。
若出现2个条带表示为阳性T0代转化大豆，只出现1个条带的为阴性T0代转化大豆。
结果显示，9株紫花T0代转化大豆植株均检测出2条带，为阳性T0代转化大豆。
2、花色鉴定T1代转基因植株
将所有紫花T0代转化大豆植株种子播种，得到T1代转化大豆植株。
检测花色，若为紫花，则为T1代转基因植株；若为白花，则不为转基因植株。
统计T1代转化大豆植株的花色，在23株T1代转化大豆植株中，出现11株紫花植株，命名为T1代转基因植株，其中OE-4和OE-11表型如图1所示；出现12株白花，不为转基因植株。
同时剪取T1代转化大豆植株的叶片，放入含有200ul无菌水的1.5ml离心管中，将叶片捣碎成匀浆。将PAT试纸条放入管中，15分钟内记录试纸条上出现的条带数。
若出现2个条带表示为阳性T1代转基因植物，只出现1个条带不为转基因植株。
PAT试纸条检测结果显示，所有紫花植株都检测出2条带(图2，1-11分别为11株紫花植株；WT为野生型大豆)，为阳性T1代转基因植物，所有白花植株只出现1个条带，不为转基因植株。
上述结果表明，可以通过ZI基因过表达植物的花色准确判断是否为转基因大豆植株。
SEQUENCE LISTING
<110>中国农业科学院作物科学研究所
<120> 一种通过花色识别转基因大豆植株的方法
<160> 3
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1530
<212> DNA
<213> Glycine max
<400> 1
atggactcat tgttacttct aaaagaaatt gccacttcca ttttgatctt cttgatcact 60
cgtctctcca ttcaaacatt cctcaaaagc tatcgccaga aactcccacc ggggccaaaa 120
gggtggccag ttgtgggtgc actccctctc atgggaagca tgcctcatgt caccttagca 180
aagatggcaa aaaaatatgg acctataatg tacctcaaaa tgggcactaa caacatggtt 240
gtggcctcta ctccagctgc tgctcgtgcc ttcctcaaaa cccttgatca aaacttttca 300
aaccggccct ccaatgctgg tgcaacccat ttggcttatg atgcacggga tatggtgttt 360
gctcattacg gatcacggtg gaagttgcta agaaaactaa gtaacttgca catgcttgga 420
ggaaaggcac ttgatgattg ggcccaaatt cgagatgaag agatggggca catgcttggt 480
gcaatgtacg attgtaacaa gagggatgag gctgtggtgg tggcggagat gttgacatat 540
tcaatggcca acatgattgg ccaagttata ttgagtcgtc gagtgtttga gacaaagggt 600
tcggagtcta acgagttcaa ggacatggtg gttgagctca tgaccgttgc tggttacttc 660
aacattggtg acttcatacc ctttttggcc aagttggact tgcaaggcat agagcgtggc 720
atgaagaagt tgcacaagaa gtttgatgcg ttgttaacga gcatgattga ggagcatgtt 780
gcttctagtc acaagagaaa gggcaagccc gatttcttag acatggtaat ggctcatcat 840
agtgagaact ccgatgggga ggaactatcg ctcaccaaca tcaaggcact actcttgaac 900
ctattcaccg caggcaccga tacatcttca agtataatag agtggtcctt agccgagatg 960
ttgaagaagc ccagcataat gaagaaggct catgaagaaa tggaccaagt cataggaagg 1020
gatcgccgtc tcaaagaatc tgacatacca aagcttccat acttccaagc catttgcaaa 1080
gagacctata gaaagcaccc ttcaacaccc ctaaacctgc ctcgaatctc atctgaaccg 1140
tgccaagtga atggttacta cattcccgag aacactaggc tgaatgtgaa catttgggcc 1200
ataggaagag accctgatgt gtggaacaat cctttggagt ttatgcccga gaggtttttg 1260
agtgggaaga atgccaaaat tgacccacgt gggaatgatt ttgagcttat tccatttggt 1320
gctgggagga ggatttgtgc agggactagg atggggattg tgttggttca ctacattttg 1380
ggcactttgg tgcattcgtt tgattggaag ctacccaatg gggagaggga gttagacatg 1440
gaggagtcct ttgggcttgc cttgcaaaaa aaggttccac ttgctgcttt ggttacccct 1500
aggttgaatc caagtgctta catttcttag 1530
<210> 2
<211> 509
<212> PRT
<213> Glycine max
<400> 2
Met Asp Ser Leu Leu Leu Leu Lys Glu Ile Ala Thr Ser Ile Leu Ile
1 5 10 15
Phe Leu Ile Thr Arg Leu Ser Ile Gln Thr Phe Leu Lys Ser Tyr Arg
20 25 30
Gln Lys Leu Pro Pro Gly Pro Lys Gly Trp Pro Val Val Gly Ala Leu
35 40 45
Pro Leu Met Gly Ser Met Pro His Val Thr Leu Ala Lys Met Ala Lys
50 55 60
Lys Tyr Gly Pro Ile Met Tyr Leu Lys Met Gly Thr Asn Asn Met Val
65 70 75 80
Val Ala Ser Thr Pro Ala Ala Ala Arg Ala Phe Leu Lys Thr Leu Asp
85 90 95
Gln Asn Phe Ser Asn Arg Pro Ser Asn Ala Gly Ala Thr His Leu Ala
100 105 110
Tyr Asp Ala Arg Asp Met Val Phe Ala His Tyr Gly Ser Arg Trp Lys
115 120 125
Leu Leu Arg Lys Leu Ser Asn Leu His Met Leu Gly Gly Lys Ala Leu
130 135 140
Asp Asp Trp Ala Gln Ile Arg Asp Glu Glu Met Gly His Met Leu Gly
145 150 155 160
Ala Met Tyr Asp Cys Asn Lys Arg Asp Glu Ala Val Val Val Ala Glu
165 170 175
Met Leu Thr Tyr Ser Met Ala Asn Met Ile Gly Gln Val Ile Leu Ser
180 185 190
Arg Arg Val Phe Glu Thr Lys Gly Ser Glu Ser Asn Glu Phe Lys Asp
195 200 205
Met Val Val Glu Leu Met Thr Val Ala Gly Tyr Phe Asn Ile Gly Asp
210 215 220
Phe Ile Pro Phe Leu Ala Lys Leu Asp Leu Gln Gly Ile Glu Arg Gly
225 230 235 240
Met Lys Lys Leu His Lys Lys Phe Asp Ala Leu Leu Thr Ser Met Ile
245 250 255
Glu Glu His Val Ala Ser Ser His Lys Arg Lys Gly Lys Pro Asp Phe
260 265 270
Leu Asp Met Val Met Ala His His Ser Glu Asn Ser Asp Gly Glu Glu
275 280 285
Leu Ser Leu Thr Asn Ile Lys Ala Leu Leu Leu Asn Leu Phe Thr Ala
290 295 300
Gly Thr Asp Thr Ser Ser Ser Ile Ile Glu Trp Ser Leu Ala Glu Met
305 310 315 320
Leu Lys Lys Pro Ser Ile Met Lys Lys Ala His Glu Glu Met Asp Gln
325 330 335
Val Ile Gly Arg Asp Arg Arg Leu Lys Glu Ser Asp Ile Pro Lys Leu
340 345 350
Pro Tyr Phe Gln Ala Ile Cys Lys Glu Thr Tyr Arg Lys His Pro Ser
355 360 365
Thr Pro Leu Asn Leu Pro Arg Ile Ser Ser Glu Pro Cys Gln Val Asn
370 375 380
Gly Tyr Tyr Ile Pro Glu Asn Thr Arg Leu Asn Val Asn Ile Trp Ala
385 390 395 400
Ile Gly Arg Asp Pro Asp Val Trp Asn Asn Pro Leu Glu Phe Met Pro
405 410 415
Glu Arg Phe Leu Ser Gly Lys Asn Ala Lys Ile Asp Pro Arg Gly Asn
420 425 430
Asp Phe Glu Leu Ile Pro Phe Gly Ala Gly Arg Arg Ile Cys Ala Gly
435 440 445
Thr Arg Met Gly Ile Val Leu Val His Tyr Ile Leu Gly Thr Leu Val
450 455 460
His Ser Phe Asp Trp Lys Leu Pro Asn Gly Glu Arg Glu Leu Asp Met
465 470 475 480
Glu Glu Ser Phe Gly Leu Ala Leu Gln Lys Lys Val Pro Leu Ala Ala
485 490 495
Leu Val Thr Pro Arg Leu Asn Pro Ser Ala Tyr Ile Ser
500 505
<210> 3
<211> 720
<212> DNA
<213> Artificial sequence
<400> 3
atggtgagca agggcgagga gctgttcacc ggggtggtgc ccatcctggt cgagctggac 60
ggcgacgtaa acggccacaa gttcagcgtg tccggcgagg gcgagggcga tgccacctac 120
ggcaagctga ccctgaagtt catctgcacc accggcaagc tgcccgtgcc ctggcccacc 180
ctcgtgacca ccctgaccta cggcgtgcag tgcttcagcc gctaccccga ccacatgaag 240
cagcacgact tcttcaagtc cgccatgccc gaaggctacg tccaggagcg caccatcttc 300
ttcaaggacg acggcaacta caagacccgc gccgaggtga agttcgaggg cgacaccctg 360
gtgaaccgca tcgagctgaa gggcatcgac ttcaaggagg acggcaacat cctggggcac 420
aagctggagt acaactacaa cagccacaac gtctatatca tggccgacaa gcagaagaac 480
ggcatcaagg tgaacttcaa gatccgccac aacatcgagg acggcagcgt gcagctcgcc 540
gaccactacc agcagaacac ccccatcggc gacggccccg tgctgctgcc cgacaaccac 600
tacctgagca cccagtccgc cctgagcaaa gaccccaacg agaagcgcga tcacatggtc 660
ctgctggagt tcgtgaccgc cgccgggatc actctcggca tggacgagct gtacaagtaa 720

Claims (8)

1.一种核酸分子，其为如下1)-4)任一所述的DNA分子：
1)序列表中序列1所示的核苷酸序列组成的DNA分子；
2)在1)序列的末端连接标签编码基因得到的共表达核酸分子；
3)与1)或2)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且编码相同蛋白质的DNA分子；
4)在严格条件下与1)或2)限定的核苷酸序列杂交，且编码相同蛋白质的DNA分子。
2.含有权利要求1所述核酸分子的表达盒、重组载体、转基因细胞或重组菌。
3.权利要求1所述的核酸分子或权利要求2所述的表达盒、重组载体、转基因细胞或重组菌在如下A-E中的应用；
A、改变植物花色；
B、筛选转基因植物；
C、用于可视化筛选转其他外源基因植物；
D、作为可视化报告标签；
E、制备可视化的转基因植物筛选***。
4.一种培育花色改变目的植物的方法，为如下1)或2)：
1)所述的方法包括如下步骤：提高出发植物中权利要求1所述核酸分子编码蛋白的含量和/或活性，得到花色改变的转基因植物或其后代；
2)所述的方法包括如下步骤：提高出发植物中编码权利要求1所述核酸分子的表达，得到花色改变的转基因植物或其后代。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述花色改变为将白色变为紫色。
6.一种通过花色鉴定转基因植物的方法，为如下1)或2):
1)所示的方法包括如下步骤：提高出发植物中权利要求1所述核酸分子编码蛋白的含量和/或活性，得到转化植株，从所述转化植株的后代中筛选花色变化的植株，即为转基因植物；
2)所示的方法包括如下步骤：提高出发植物中编码权利要求1所述核酸分子的表达，得到转化植株，从所述转化植株的后代中筛选花色变化的植株，即为转基因植物。
7.根据权利要求3所述的应用或权利要求4或5所述的方法，其特征在于：所述植物为双子叶植物或单子叶植物。
8.根据权利要求3所述的应用或权利要求4或5所述的方法，其特征在于：
所述花色改变或花色变化为由白花变为紫花。
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