CN112500486A - 一种抗pd-l1抗体及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种特异性结合PD‑L1的抗体或其抗原结合部分,属于抗体技术领域。所述抗体或其抗原结合部分的重链可变区CDR‑H1、CDR‑H2、CDR‑H3和轻链可变区CDR‑L1、CDR‑L2、CDR‑L3分别包括SEQ ID NO.3‑8所示的氨基酸序列。本发明的抗PD‑L1抗体具有极高的亲和力和特异性,在相关应用领域有巨大的潜力和优势,尤其是本发明的抗PD‑L1抗体能够确定组织细胞内PD‑L1的定位及含量,配合自动免疫组化染色平台,可为临床诊断尤其是靶向PD‑1或PD‑L1药物治疗的伴随诊断提供更准确和科学的检测结果。
Description
技术领域
本发明属于抗体领域,具体地,涉及一种抗PD-L1抗体及其应用。
背景技术
PD-L1是PD-1的2个配体之一,属于B7家族的跨膜分子,基因定位于人染色体9p24.2。该分子是由290个氨基酸残基组成的跨膜蛋白,胞外段为两个免疫球蛋白恒定区(IgC)和IgV样结构域,主要表达于成熟的CD4+T细胞、CD8+T细胞、单核细胞、巨噬细胞、B细胞、树突状细胞等造血细胞,以及一些非造血细胞,如内皮细胞、胰岛细胞、肥大细胞等的膜表面,而且在多种肿瘤细胞均高表达PD-L1分子。
程序性死亡受体-1(programmed death-1,PD-1)是T细胞上的一种跨膜受体PD-1能够与配体PD-L1、PD-L2相互作用,抑制T细胞增殖。在正常机体中,PD-1作为一种T细胞增殖的负调节分子,对维持机体的免疫耐受有重要作用;而在肿瘤中,细胞PD-L1和PD-L2表达上调,与T细胞表面的PD-1受体相互作用,能够抑制T细胞的活化、增殖及对肿瘤的杀伤,使其功能发生紊乱和枯竭。抗PD-L1的单克隆抗体可阻断PD-L1与PD-1、CD80的相互作用,从而恢复T细胞功能。
在肿瘤患者体内,PD-L1的高表达能够增强肿瘤的转移能力、导致患者死亡率上升,因此可以作为患者愈后的标志物。
发明内容
本发明的目的是提供一种抗PD-L1抗体及其应用,为此,本发明采用的技术方案如下:
本发明第一方面提供一种特异性结合PD-L1的抗体或其抗原结合部分,,其重链可变区CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3和轻链可变区CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3分别包括SEQ ID NO:3-8所示的氨基酸序列。
在本发明的一些实施方案中,所述抗原结合部分选自Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、Fv片段、scFv片段、Fd片段和单域抗体。
本发明的第二方面提供编码本发明第一方面任一所述抗体或其抗原结合部分的基因,编码重链的基因包括SEQ ID NO.1所示核苷酸序列,编码轻链的基因包括SEQ IDNO.2所示核苷酸序列。
本发明的第三方面提供一种表达载体,包括本发明第二方面所述的基因。在本发明中,所述载体可以是任意地能够在宿主细胞内表达的载体。在本发明的一些实施方案中,所述载体为原核表达载体或真核表达载体。
本发明的第四方面提供一种宿主细胞,其含有本发明第三方面所述的表达载体。
在一些实施方案中,所述载体为原核表达载体,所述宿主细胞为原核细胞,如大肠杆菌。在另一些实施方案中,所述载体为真核表达载体,所述宿主细胞为真核细胞。
本发明第五方面提供本发明第一方面所述的抗体或其抗原结合部分在制备用于检测PD-L1蛋白的试剂盒中的应用。
在一些实施方案中,检测PD-L1蛋白的方法选自包括IHC法、酶联免疫吸附法、免疫印迹法和流式细胞法的组。
本发明第六方面提供一种用于检测PD-L1蛋白的试剂盒,包括本发明第一方面所述的抗体或其抗原结合部分。
在一些实施方案中,所述试剂盒适用于选自包括IHC法、酶联免疫吸附法、免疫印迹法和流式细胞法的组中的检测方法。
本发明第七方面提供本发明第一方面所述的抗体或其抗原结合部分在制备用于靶向PD-1或PD-L1药物治疗的伴随诊断的试剂盒中的应用。
本发明第七方面提供一种用于靶向PD-1或PD-L1药物治疗的伴随诊断的试剂盒,包括本发明第一方面所述的抗体或其抗原结合部分。
在一些实施方案中,所述靶向PD-1的药物包括但不限于帕博利珠单抗(可瑞达)、纳武利尤单抗(欧狄沃)、特瑞普利单抗(拓益)、信迪利单抗(达伯舒)、卡瑞丽珠单抗(艾立妥)和替雷利珠单抗(百泽安)。
在另一些实施方案中,所述靶向PD-L1药物包括但不限于度伐利尤单抗(英飞凡)和阿替利珠单抗(泰圣奇)。
本发明的有益效果
相对于现有技术,本发明具有以下有效效果:
本发明的抗CD40的兔单克隆抗体具有极高的特异性,能与PD-L1重组蛋白特异性结合,且不与PD-L2的重组蛋白有交叉反应,在相关研究和应用领域有巨大的潜力和优势
本发明的抗PD-L1抗体可以与冷冻或石蜡切片组织、细胞液涂片中的抗原分子特异性结合并通过化学反应使标记抗体的显色剂显色来确定组织细胞内PD-L1的定位及含量。
利用本发明的抗PD-L1抗体,配合快速高效、重复性好、标准化程度高的自动免疫组化染色平台,可为临床诊断尤其是靶向PD-1或PD-L1药物治疗的伴随诊断提供更准确和科学的检测结果。
本发明的抗PD-L1抗体其他的应用还包括但不限于:ELISA检测,Western blot,流式细胞术等。
附图说明
图1示出了利用本发明的抗PD-L1抗体对正常组织和肿瘤组织样本进行IHC的检测结果。A:胎盘,B:扁桃体,C:肺癌芯片。
图2示出了利用抗PD-L1抗体通过酶联免疫吸附法检测PD-L1重组蛋白的结果。
图3示出了利用抗PD-L1抗体通过蛋白质印迹法检测PD-L1重组蛋白的结果。泳道1:1:500,泳道2:1:1000,泳道3:1:2000,泳道4:1:4000,泳道5:1:8000,泳道6:1:16000,泳道7:Actin肌动蛋白。
图4示出了利用抗PD-L1抗体检测293-6E过表达细胞PD-L1蛋白的流式细胞检测结果。左侧峰为空白细胞,右侧峰为为PD-L1。
图5示出了抗PD-L1抗体与PD-1重组蛋白竞争PD-L1 ELISA曲线。
图6示出了利用酶联免疫吸附法验证PD-L1抗体特异性的结果。
图7示出了利用蛋白印迹法验证抗PD-L1抗体特异性的结果。
具体实施方式
为了使本发明所解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白,以下结合实施例,对本发明进行进一步详细说明。
实施例
以下例子在此用于示范本发明的优选实施方案。本领域内的技术人员会明白,下述例子中披露的技术代表发明人发现的可以用于实施本发明的技术,因此可以视为实施本发明的优选方案。但是本领域内的技术人员根据本说明书应该明白,这里所公开的特定实施例可以做很多修改,仍然能得到相同的或者类似的结果,而非背离本发明的精神或范围。
除非另有定义,所有在此使用的技术和科学的术语,和本发明所属领域内的技术人员所通常理解的意思相同,在此公开引用及他们引用的材料都将以引用的方式被并入。
那些本领域内的技术人员将意识到或者通过常规试验就能了解许多这里所描述的发明的特定实施方案的许多等同技术。这些等同将被包含在权利要求书中。
下述实施例中的实验方法,如无特殊说明,均为常规方法。下述实施例中所用的仪器设备,如无特殊说明,均为实验室常规仪器设备;下述实施例中所用的试验材料,如无特殊说明,均为自常规生化试剂商店购买得到的。
实施例1抗PD-L1单克隆抗体及其制备
以重组人PD-L1全长蛋白为免疫原对实验兔进行背部皮下注射免疫。取实验兔血并分离外周血单核细胞(PBMC),标记并筛选PBMC中的B细胞,获取表达PD-L1抗体的B细胞遗传信息进行扩增重组,筛选符合要求的遗传信息装载入载体后转染载体细胞,载体细胞培养分泌的抗体经过纯化后获得单克隆抗体。
具体步骤如下:
1.合成人PD-L1全长重组蛋白作为免疫原(Novoprotein,C315)。
2.免疫原与佐剂等体积混合后背部皮下注射实验兔进行免疫。每次免疫使用0.1mg免疫原,共免疫4次。
3.第4次免疫后取实验兔血分离血清,使用10μg/mL PD-L1重组蛋白包被,第二天5%脱脂奶封闭60min,清洗3次,实验兔血清从1:100开始按照4倍倍比稀释至7个梯度孵育60min,清洗3次,加入HRP羊抗兔二抗(Jackson ImmunoResearch,111-035-144)孵育60min,清洗3次,加入TMB显色液孵育15min后终止显色反应,在酶标仪上读取OD450吸光值,挑选1:16000稀释度读值高于0.5的血清为合格候选。
4.血清值合格候选的实验兔采抗凝血20mL,加入20mL淋巴细胞分离液1500RPM离心30min,去除第一层血浆后,吸取第二层淋巴细胞。
5.分离的淋巴细胞于生物素交联的PD-L1重组蛋白孵育5min后再于抗生物素磁珠继续孵育15min,使用磁力架吸附并洗脱杂细胞,清洗3次后收集特异性淋巴细胞计数。
6.按照5个细胞/孔进行有限稀释,将淋巴细胞接种至96孔板培养。
7.3天后吸取50uL上清进行ELISA检测。使用10ug/mLPD-L1重组蛋白包被,第二天5%脱脂奶封闭60min,清洗3次,加入淋巴细胞培养上清孵育60min,清洗3次,加入HRP羊抗兔二抗孵育60min,清洗3次,加入TMB显色液孵育15min后终止显色反应,在酶标仪上读取OD450吸光值,读值高于0.5上清合格。
8.将上清合格孔内的淋巴细胞裂解提取总RNA,以其中的mRNA为模板,使用引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增,而获得阳性B细胞克隆抗体的H链或L链基因。
H链基因序列:(SEQ ID NO.1)
ATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTCTCCTGGTCGCTGTGCTCAAAGGTGTCCAGTGTCAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTACCAATGCAATGAGTTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATACATCGGAATCATTAGTAGTAGTGGTAGCACATACTACGCGAGGTGGGCAAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAACCTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGGCAAAGGAAACATCTGGGGCCCAGGCACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGGGCAACCTAAGGCTCCATCAGTCTTCCCACTGGCCCCCTGCTGCGGGGACACACCCAGCTCCACGGTGACCCTGGGCTGCCTGGTCAAAGGGTACCTCCCGGAGCCAGTGACCGTGACCTGGAACTCGGGCACCCTCACCAATGGGGTACGCACCTTCCCGTCCGTCCGGCAGTCCTCAGGCCTCTACTCGCTGAGCAGCGTGGTGAGCGTGACCTCAAGCAGCCAGCCCGTCACCTGCAACGTGGCCCACCCAGCCACCAACACCAAAGTGGACAAGACCGTTGCGCCCTCGACATGCAGCAAGCCCACGTGCCCACCCCCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCACGCACCCCCGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGATGACCCCGAGGTGCAGTTCACATGGTACATAAACAACGAGCAGGTGCGCACCGCCCGGCCGCCGCTACGGGAGCAGCAGTTCAACAGCACGATCCGCGTGGTCAGCACCCTCCCCATCGCGCACCAGGACTGGCTGAGGGGCAAGGAGTTCAAGTGCAAAGTCCACAACAAGGCACTCCCGGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAGAGGGCAGCCCCTGGAGCCGAAGGTCTACACCATGGGCCCTCCCCGGGAGGAGCTGAGCAGCAGGTCGGTCAGCCTGACCTGCATGATCAACGGCTTCTACCCTTCCGACATCTCGGTGGAGTGGGAGAAGAACGGGAAGGCAGAGGACAACTACAAGACCACGCCGGCCGTGCTGGACAGCGACGGCTCCTACTTCCTCTACAGCAAGCTCTCAGTGCCCACGAGTGAGTGGCAGCGGGGCGACGTCTTCACCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCTTGCACAACCACTACACGCAGAAGTCCATCTCCCGCTCTCCGGGTAAATGA
L链基因序列:(SEQ ID NO.2)
ATGGACACGAGGGCCCCCACTCAGCTGCTGGGGCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGGTGCCACATTTGCCCAAGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTGCGGCTGTTGGAGGCACAGTCACCATCAATTGCCAGTCCAGTCAGAGTGTTTATAAGAACAACTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAGACTCCTGATCTATGCTGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAAGGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGTGACGTGCAGTGTGACGATGCTACCACTTACTACTGTCTAGGTAGTTATGATTGTGATAGTGCTGATTGTGGTGCTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAAGGTGATCCAGTTGCACCTACTGTCCTCATCTTCCCACCAGCTGCTGATCAGGTGGCAACTGGAACAGTCACCATCGTGTGTGTGGCGAATAAATACTTTCCCGATGTCACCGTCACCTGGGAGGTGGATGGCACCACCCAAACAACTGGCATCGAGAACAGTAAAACACCGCAGAATTCTGCAGATTGTACCTACAACCTCAGCAGCACTCTGACACTGACCAGCACACAGTACAACAGCCACAAAGAGTACACCTGCAAGGTGACCCAGGGCACGACCTCAGTCGTCCAGAGCTTCAATAGGGGTGACTGTTAG
9.将H链和L链基因连接到载体上并其转入大肠杆菌中,提取其质粒后转入293细胞内表达为抗PD-L1兔单克隆抗体。
经分析,该抗PD-L1单克隆抗体的重链可变区CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3和轻链可变区CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3的氨基酸序列如下:
(1)CDR-H1氨基酸序列包括:RYAIT(SEQ ID NO:3)。
(2)CDR-H2氨基酸序列包括:IIDGDDIEWCATWAKG(SEQ ID NO:4)。
(3)CDR-H3氨基酸序列包括;VVHSGEDYYTFNL(SEQ ID NO:5)。
(4)CDR-L1氨基酸序列包括:QASQNIYRYLS(SEQ ID NO:6)。
(5)CDR-L2氨基酸序列包括:KASTLAS(SEQ ID NO:7)。
(6)CDR-L3氨基酸序列包括:QYTYVGDSSSWGP(SEQ ID NO:8)。
实施例2IHC法检测肿瘤组织PD-L1表达
1.准备包含多正常组织和肿瘤组织的芯片蜡块、多肺癌芯片蜡块,切成3μm厚度切片。
2.组织切片60℃烘烤1h。
3.切片浸入脱蜡液30min,进行脱蜡处理。
4.脱蜡后的组织切片分别浸入无水乙醇、95%乙醇、75%乙醇各10min水化处理。
5.水化后的组织切片高温在pH 9.0的Tris-EDTA溶液中修复抗原。
6.修复抗原后的组织切片在3%H2O2中封闭10min。
7.室温加入0.1μg/mL实施例1制备的抗PD-L1兔单克隆抗体孵育1h。
8.清洗,加入100μL增强型羊抗鼠兔二抗(advanced-biosystems,1981-07)室温孵育1h。
9.清洗,加入100μL DAB显色液显色2min后终止。
10.苏木素复染5min。
11.染色完毕后的组织切片分别浸入75%乙醇、95%乙醇、无水乙醇、脱蜡液各2min后封片。
在显微镜下可观察到PD-L1兔单克隆抗体在肺癌芯片、胎盘、扁桃体等组织上的特异性细胞膜定位染色,且无非特异性染色,如图1所示。
实施例3利用抗PD-L1抗体通过酶联免疫吸附法检测PD-L1重组蛋白
1.使用10μg/mL PD-L1重组蛋白(Novoprotein,C315)包被酶标板,用封膜封板,4℃过夜。
2.次日,将酶标板至于洗板机上,用PBST洗板3次后,每孔加入脱脂奶或BSA封闭液封闭酶标板,置于30℃,恒温摇床震荡封闭约1h。
3.将实施例1制备的抗PD-L1兔单克隆抗体预稀释至8个梯度,分别为1000ng/mL、250ng/mL、62.5ng/mL、15.625ng/mL、3.906ng/mL、0.977ng/mL、0.244ng/mL、0.061ng/mL,每孔加入50μL置于30℃,恒温摇床震荡孵育约1h。
4.洗板后,每孔加50μL HRP偶联的羊抗兔IgG二抗(Jackson ImmunoResearch,111-035-144),置于30℃,恒温摇床震荡孵育约45min。
5.洗板后,每孔加50μL TMB底物显色液,置于30℃,恒温摇床震荡避光显色约15min。
6.加50μL H2SO4终止液终止反应,约5~30min后于酶标仪上读取吸光值。
结果如图2所示,可见各个稀释度间读值明显差异证明抗体能与PD-L1重组蛋白特异性结合。
实施例4利用抗PD-L1抗体通过蛋白印迹法检测PD-L1重组蛋白
1.用PD-L1重组蛋白(Novoprotein,C315)裂解液制胶并电泳转至PVDF膜。
2.5%脱脂奶封闭60min。
3.清洗并在第1泳道加入100ng/mL实施例1制备的抗PD-L1兔单克隆抗体,在2~6泳道分别加入2倍倍比稀释的抗PD-L1抗体孵育60min。
4.清洗,加入羊抗兔HRP二抗(Thermo Scientific,31460)孵育60min。
5.清洗后滴加2mL ECL显影液,室温显影5min后在成像仪中曝光30秒,拍摄图片。
结果图3所示,可见40~60KD的特异性条带,表明制备的PD-L1抗体能够用于检测PD-L1重组蛋白。
实施例5利用抗PD-L1抗体检测PD-L1过表达293细胞
1.取PD-L1转染的293细胞,用PBS清洗细胞后,1500rpm,4℃离心5min后,调整细胞密度为3M/mL。
2.按照1M细胞加入100μL 4%多聚甲醛固定液,轻轻混匀。室温条件下固定细胞约10min。
3.加入PBS,1500rpm,离心5min后弃上清,离心管底细胞用1mL PBS重悬后,再加入10mL PBS清洗细胞后,1500rpm,离心5min。
4.取3个洁净的1.5mL离心管,每管中加入100μL 3M/mL的PD-L1过表达细胞,即每管含0.3M个PD-L1过表达细胞,离心后弃上清,其中一管加入100μL PBS作为阴性对照,其中一管加入100μL 1:100实施例1制备的抗PD-L1兔单克隆抗体,另一管加入100μL 5μg/mL兔同型IgG,室温条件下孵育约1h。
5.清洗细胞,每管加入100μL 1:200稀释的FITC二抗,室温孵育40min。
6.清洗细胞,每管加入200μL PBS上流式细胞仪检测各管细胞的荧光强度。
结果如图4所示,左侧峰为加入兔同型对照的PD-L1转染的293细胞荧光强度峰,右侧峰为加入了抗PD-L1兔单克隆抗体的PD-L1转染的293细胞荧光强度峰。可见抗PD-L1兔单克隆抗体与PD-L1转染的293细胞表面PD-L1蛋白特异性结合后,荧光强度峰与对照相比产生了明显位移。
实施例6抗PD-L1兔单克隆抗体与PD-1重组蛋白竞争PD-L1 ELISA曲线
1.PD-L1重组蛋白(Novoprotein,C315)0.1μg/mL,包被酶标板,用封膜封板,4℃过夜。
2.次日,将酶标板至于洗板机上,用PBST洗板3次后,每孔加入BSA封闭液封闭酶标板,置于30℃,恒温摇床震荡封闭约1h。
3.将实施例1制备的抗PD-L1兔单克隆抗体预调整至1000ng/mL起始浓度,随后在稀释版上做倍比稀释,共9个梯度,准备PD-1重组蛋白(Novoprotein,C745)稀释至20ng/mL。取50μL抗PD-L1兔单克隆抗体,50μL PD-1重组蛋白于另一洁净稀释板上混匀后,置于30℃、100rpm恒温摇床,孵育约30min。
4.洗酶标板后,每孔加入50μL步骤3中的混合物,置于30℃,恒温摇床震荡孵育约1h。
5.洗板后,每孔加50μL HRP偶联的羊抗兔IgG二抗,置于30℃,恒温摇床震荡孵育约45min。
6.洗板后,每孔加50μLTMB底物显色液,置于30℃,恒温摇床震荡避光显色约15min。
7.加50μL H2SO4终止液终止反应,约5~30min后于酶标仪上读取吸光值。
结果如图5所示,可见各个稀释度间读值明显差异,证明抗PD-L1兔单克隆抗体能与PD-1特异性结合,并且其结合位点与PD-L1-PD-1配受体结合的位点可发生竞争。
实施例7利用酶联免疫吸附法验证抗PD-L1单克隆抗体特异性
1.使用10μg/mL PD-L1重组蛋白(Novoprotein,C315)和PD-L2重组蛋白(Novoprotein,CA09)分别包被酶标板,用封膜封板,4℃过夜。
2.次日,将酶标板至于洗板机上,用PBST洗板3次后,每孔加入脱脂奶或BSA封闭液封闭酶标板,置于30℃,恒温摇床震荡封闭约1h。
3.将实施例1制备的抗PD-L1兔单克隆抗体预稀释至7个梯度,分别为1000ng/mL、250ng/mL、62.5ng/mL、15.625ng/mL、3.906ng/mL、0.977ng/mL、0.244ng/mL,每孔加入50μL置于30℃,恒温摇床震荡孵育约1h。
4.洗板后,每孔加50μL HRP偶联的羊抗兔IgG二抗(Jackson ImmunoResearch,111-035-144),置于30℃,恒温摇床震荡孵育约45min。
5.洗板后,每孔加50μL TMB底物显色液,置于30℃,恒温摇床震荡避光显色约15min。
6.加50μL H2SO4终止液终止反应,约5~30min后于酶标仪上读取吸光值。
结果如图6所示,可见各个稀释度间读值明显差异,证明抗PD-L1单克隆抗体能与PD-L1重组蛋白特异性结合,且不与PD-L2重组蛋白有交叉反应,特异性好。
实施例8利用蛋白印迹法验证抗PD-L1单克隆抗体特异性
1.分别用PD-L1转染的293细胞裂解液,PD-L2转染的293细胞裂解液,空载质粒表达的293细胞裂解液制胶并电泳转至PVDF膜。
2.5%脱脂奶封闭60min。
3.清洗并在3个泳道分别加入100ng/mL实施例1制备的抗PD-L1兔单克隆抗体孵育60min。
4.清洗,加入羊抗兔HRP二抗孵育60min。
5.清洗后滴加2mL ECL显影液,室温显影5min后在成像仪中曝光60秒,拍摄图片。
结果图7所示,抗体与PD-L1转染的293细胞裂解液蛋白反应在40~60KD形成特异性条带,而不与PD-L2转染的293细胞裂解液蛋白和空载质粒293细胞裂解液蛋白反应。该检测结果同样表明,抗PD-L1单克隆抗体能与PD-L1重组蛋白特异性结合,且不与PD-L2的重组蛋白有交叉反应,具有非常好的特异性。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考,就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解,在阅读了本发明的上述讲授内容之后,本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改,这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
序列表
<110> 杭州百凌生物科技有限公司
<120> 一种抗PD-L1抗体及应用
<130> AJ2010210
<160> 8
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1353
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
atggagactg ggctgcgctg gcttctcctg gtcgctgtgc tcaaaggtgt ccagtgtcag 60
tcggtggagg agtccggggg tcgcctggtc acgcctggga cacccctgac actcacctgc 120
acagtctctg gaatcgacct cagtaccaat gcaatgagtt gggtccgcca ggctccaggg 180
aaggggctgg aatacatcgg aatcattagt agtagtggta gcacatacta cgcgaggtgg 240
gcaaaaggcc gattcaccat ctccagaacc tcgaccacgg tggatctgaa aatgaccagt 300
ctgacaaccg aggacacggc cacctatttc tgtggcaaag gaaacatctg gggcccaggc 360
accctggtca ccgtctcctc agggcaacct aaggctccat cagtcttccc actggccccc 420
tgctgcgggg acacacccag ctccacggtg accctgggct gcctggtcaa agggtacctc 480
ccggagccag tgaccgtgac ctggaactcg ggcaccctca ccaatggggt acgcaccttc 540
ccgtccgtcc ggcagtcctc aggcctctac tcgctgagca gcgtggtgag cgtgacctca 600
agcagccagc ccgtcacctg caacgtggcc cacccagcca ccaacaccaa agtggacaag 660
accgttgcgc cctcgacatg cagcaagccc acgtgcccac cccctgaact cctgggggga 720
ccgtctgtct tcatcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc acgcaccccc 780
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc caggatgacc ccgaggtgca gttcacatgg 840
tacataaaca acgagcaggt gcgcaccgcc cggccgccgc tacgggagca gcagttcaac 900
agcacgatcc gcgtggtcag caccctcccc atcgcgcacc aggactggct gaggggcaag 960
gagttcaagt gcaaagtcca caacaaggca ctcccggccc ccatcgagaa aaccatctcc 1020
aaagccagag ggcagcccct ggagccgaag gtctacacca tgggccctcc ccgggaggag 1080
ctgagcagca ggtcggtcag cctgacctgc atgatcaacg gcttctaccc ttccgacatc 1140
tcggtggagt gggagaagaa cgggaaggca gaggacaact acaagaccac gccggccgtg 1200
ctggacagcg acggctccta cttcctctac agcaagctct cagtgcccac gagtgagtgg 1260
cagcggggcg acgtcttcac ctgctccgtg atgcacgagg ccttgcacaa ccactacacg 1320
cagaagtcca tctcccgctc tccgggtaaa tga 1353
<210> 2
<211> 717
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
atggacacga gggcccccac tcagctgctg gggctcctgc tgctctggct cccaggtgcc 60
acatttgccc aagtgctgac ccagactgca tcccccgtgt ctgcggctgt tggaggcaca 120
gtcaccatca attgccagtc cagtcagagt gtttataaga acaacttagc ctggtatcag 180
cagaaaccag ggcagcctcc cagactcctg atctatgctg catccactct ggcatctggg 240
gtcccatcgc ggttcaaggg cagtggatct gggacacagt tcactctcac catcagtgac 300
gtgcagtgtg acgatgctac cacttactac tgtctaggta gttatgattg tgatagtgct 360
gattgtggtg ctttcggcgg agggaccgag gtggtggtca aaggtgatcc agttgcacct 420
actgtcctca tcttcccacc agctgctgat caggtggcaa ctggaacagt caccatcgtg 480
tgtgtggcga ataaatactt tcccgatgtc accgtcacct gggaggtgga tggcaccacc 540
caaacaactg gcatcgagaa cagtaaaaca ccgcagaatt ctgcagattg tacctacaac 600
ctcagcagca ctctgacact gaccagcaca cagtacaaca gccacaaaga gtacacctgc 660
aaggtgaccc agggcacgac ctcagtcgtc cagagcttca ataggggtga ctgttag 717
<210> 3
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
Arg Tyr Ala Ile Thr
1 5
<210> 4
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
Ile Ile Asp Gly Asp Asp Ile Glu Trp Cys Ala Thr Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 5
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
Val Val His Ser Gly Glu Asp Tyr Tyr Thr Phe Asn Leu
1 5 10
<210> 6
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
Gln Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Arg Tyr Leu Ser
1 5 10
<210> 7
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
Lys Ala Ser Thr Leu Ala Ser
1 5
<210> 8
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
Gln Tyr Thr Tyr Val Gly Asp Ser Ser Ser Trp Gly Pro
1 5 10
Claims (10)
1.一种特异性结合PD-L1的抗体或其抗原结合部分,其特征在于,其重链可变区CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3和轻链可变区CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3分别包括SEQ ID NO.3-8所示的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合部分,其特征在于,所述抗原结合部分选自Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、Fv片段、scFv片段、Fd片段和单域抗体。
3.编码权利要求1或2所述抗体或其抗原结合部分的基因,其特征在于,编码重链可变区的基因包括SEQ ID NO.1所示核苷酸序列,编码轻链可变区的基因包括SEQ ID NO.2所示核苷酸序列。
4.一种表达载体,其特征在于,包括权利要求3所述的基因。
5.一种宿主细胞,其特征在于,含有权利要求4所述的表达载体。
6.权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合部分在制备用于检测PD-L1蛋白的试剂盒中的应用。
7.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,检测PD-L1蛋白的方法选自包括IHC法、酶联免疫吸附法、免疫印迹法和流式细胞法的组。
8.一种用于检测PD-L1蛋白的试剂盒,其特征在于,包括权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合部分。
9.权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合部分在制备用于靶向PD-1或PD-L1药物治疗的伴随诊断的试剂盒中的应用。
10.一种用于靶向PD-1或PD-L1药物治疗的伴随诊断的试剂盒,其特征在于,包括权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合部分。
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-
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