KR102056137B1 - 암의 검출 방법 - Google Patents
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Abstract
이 발명은 생체 시료에 있어서 서열목록의 서열번호 2~30의 짝수의 서열번호에 나타내어지는 어느 아미노산 서열을 갖는 CAPRIN-1에 대한 항체와 항원 항체 반응에 의해 결합하는 반응성을 갖는 폴리펩티드의 발현을 측정하는 것을 포함하는 암의 검출 방법, CAPRIN-1 표적약의 암 환자로의 투여를 결정하기 위해서 암 환자 시료 중의 CAPRIN-1의 존재 및 그 양을 결정하는 암의 검출 방법, 및 항CAPRIN-1 항체를 포함하는 암 진단약 및 암 진단용 키트를 제공한다.
Description
본 발명은 CAPRIN-1을 종양 마커로 하는 암의 검출 방법에 관한 것이다.
암은 전체 사망 원인의 제 1 위를 차지하는 질환이며, 현재 행해지고 있는 치료는 수술 요법을 주체로 방사선 요법과 화학 요법을 조합한 것이다. 지금까지의 의료 기술의 진보에 의해 암종에 따라서는 조기 발견할 수 있으면 고칠 수 있는 가능성이 높은 질환이 되어 있다. 그 때문에 암 환자의 체력적, 경제적 부담이 없는 간편하게 검사할 수 있는 암의 검출 방법이 요구되고 있다.
최근에는 종양 마커 등의 종양 생산물을 측정하는 방법이 보급되어 왔다. 종양 생산물이란 종양에 관련되는 항원, 효소, 특정 단백질, 대사 산물, 종양 유전자, 종양 유전자 생산물 및 종양 억제 유전자 등을 나타내고, 암 태아성 항원 CEA, 당 단백질 CA19-9, 전립선 특이 항원 PSA, 갑상선에서 산생되는 펩티드 호르몬인 칼시토닌 등이 일부의 암에서 종양 마커로서 암 진단에 활용되고 있다. 그러나, 많은 암종에 있어서는 암 진단에 유용한 종양 마커는 존재하지 않는다. 또한, 현재 알려져 있는 종양 마커의 대부분은 체액 중에 극히 미량(pg/㎖ 오더 정도)밖에 존재하지 않기 때문에 그들을 검출하기 위해서는 고감도의 측정법이나 특수한 기술이 필요하다. 이와 같은 현상 중에서 각종 암을 간편한 조작으로 고감도로 검출할 수 있는 신규 암 검사 수단이 제공되면 각종 암에 대한 진단 용도가 펼쳐진다고 기대된다.
한편, 최근의 새로운 수술법의 개발이나 새로운 항암제의 발견에도 불구하고 암의 치료 성적은 그다지 향상되어 있지 않는 것이 현상황이다. 이는 일부의 암을 제외하고 많은 암에서는 효과적인 암 진단 기술이 확립되어 있지 않는 것이 원인으로 암을 조기 발견할 수 없는 것이 하나의 원인이 되어 있다.
최근, 분자 생물학이나 암 면역학의 진보에 의해 암에 특이적으로 반응하는 항체나, 암화나 암의 증악에 관련되는 암 항원에 대한 분자 표적약 등, 암 항원류를 타겟으로 한 특이적 암 치료법으로의 기대가 높아지고 있다.
그 중에서도 암 세포 상의 항원 단백질을 표적으로 한 암을 치료하기 위한 항체 의약이 복수 출시되어 암 치료에 사용되고 있다. 항체 의약은 암 특이적 치료약으로서 일정한 약효가 얻어져서 주목받고 있지만, 표적이 되는 항원 단백질의 대부분은 정상 세포에도 발현되는 것이기 때문에 항체 투여의 결과, 암 세포뿐만 아니라 항원이 발현되는 정상 세포도 상해되어 버려서 그 결과 발생하는 부작용이 문제가 되고 있다. 또한, 암 치료의 효과는 각각의 암 환자에 있어서의 여러 가지 요인에 의해 개인차가 상위가 매우 크다. 예를 들면, 수술, 화학 요법 또는 방사선 요법에 있어서 암의 진행 단계에 의해 그 치료 및 예후는 크게 좌우된다. 다른 개인이 같은 암 치료약에 대하여 다른 감수성을 갖는 것이 알려져 있고, 이는 개체의 다양성때문에 어떤 환자에서 유효한 약이 다른 환자에서 유효하다고는 할 수 없는 것을 나타내고 있다.
그래서, 일부의 치료약에 대해서는 미리 환자의 질환 관련 유전자나 단백질의 발현을 측정하고, 어떤 특정 약품이 특정 유전자 또는 단백질을 발현하고 있는 환자에게 유효한지의 여부를 평가한 후에 암 환자로의 치료약의 투여의 결정이 이루어지고 있다. 구체적으로는 어떤 종의 암에 대한 질환 관련 유전자나 단백질을 측정하는 검출법을 사용하여 임상 현장에서 암 환자 유래의 시료, 예를 들면 혈청이나 조직 중에 암 항원이 존재하는지 검사한 후에 암 항원 특이적인 치료약의 투여의 결정이 이루어지고 있다. 예를 들면, 대장암 환자의 암 조직을 면역 조직 화학 염색 EGFR 검출법 「EGFRpharm(DAKO Corporation)」에 의해 평가하고, 대장암에 있어서의 에리비탁스(등록상표)(세툭시맵)의 유효성을 예측하여 에리비탁스의 투여를 결정하는 것이 행해지고 있다. 또한, 유방암 환자의 암 조직을 면역 조직 화학 염색 Her2 검출법 「허셉 테스트」에 의해 평가하고, 유방암에 있어서의 허셉틴(등록상표)(트라스트주맵)의 유효성을 예측하여 허셉틴의 적용을 결정하는 것이 행해지고 있다.
그런데, 최근 반려 동물은 가족의 일원으로서 사육되어 주인과 같은 생활 습관을 갖고 있는 경우가 많다. 그 때문에 반려 동물의 암 감염에 의해 주인이 장래 암을 발증할 위험성이 높은 것을 예측할 수 있다고 전해진다.
대표적인 반려 동물인 개는 인간에 비해 7배 빨리 나이를 먹는다는 것이 알려져 있다. 현재, 개의 사육수는 일본에서는 약 670만마리, 또한 미국에서는 약 1764만마리라고 전해진다. 광견병 예방 접종 이외에 5종, 7종, 8종 등의 혼합 백신이 일반적으로 보급되고, 개 파르보바이러스 감염증, 개 디스템퍼바이러스 감염증, 개 파라인플루엔자(켄넬코프), 개 아데노바이러스 2형 감염증(켄넬코프), 개 전염성 간염, 개 코로나바이러스 감염증, 렙토스피라증이라는 치사율이 높은 감염증이 감소했다. 그 때문에 개의 평균 수명은 길어지고, 7세 이상의 고령견은 전체 사육수의 35.5%를 차지하고 있다. 사망 원인도 인간과 같이 암이나 고혈압, 심장병 등이 증가의 일로를 걷고 있다. 미국에서는 1년간 약 400만마리의 개가 암으로 진단되고 있고, 일본에 있어서도 잠재적으로 약 160만마리에 어떠한 종양이 있다고 전해지고 있다. 그러나, 반려 동물은 인간과 같이 건강 진단이 보급되어 있지 않기 때문에 발견이 늦고, 종양이 커져 주인이 처음으로 알아차려서 내원하는 경우가 많다. 그 커져버린 종양이 악성일 경우, 수술 등의 외과적 요법이나 항암제 등의 투약을 행한다고 해도 이미 때가 늦게 되는 경우가 매우 많다. 그 때문에 수의사가 악성이라고 판단했을 경우에는 수술하지 않고 항암제 치료를 행하는 것이 일반적이다. 수술을 행할 경우에도 마진 확보의 크기나 수술 중의 혈액, 세포 비산 대책이라는 수술 중의 대책도 엄중하게 실시할 필요가 있다. 수술 후 즉시 항암제 치료를 개시하고, 경과 관찰도 짧은 간격으로 행하는 것이 바람직하다. 따라서, 암에 걸린 반려 동물에 있어서도 암 치료약의 투약은 필수이다. 어떤 종류의 암에 대한 질환 관련 유전자나 단백질을 측정하는 검출법이 존재하면 지금까지보다 효과적인 치료가 가능해져 주인에 있어서도 수의사에 있어서도 메리트가 크다.
Cytoplasmic-and proliferation-associateed protein 1(CAPRIN-1)은 휴지기의 정상 세포가 활성화나 세포 분열을 일으킬 때에 발현되고, 또한 세포 내에서 RNA와 세포 내 스트레스 과립을 형성하여 mRNA의 수송, 번역의 제어에 관여하는 것 등이 알려져 있는 세포 내 단백질이다. 한편, 유방암 세포의 막 표면에 CAPRIN-1이 고발현되고, CAPRIN-1에 대한 항체가 유방암 세포에 대하여 강한 항종양 효과를 발휘하는 것이 명백해졌다(특허문헌 1). 또한, 세포 표면에 발현되어 있는 CAPRIN-1에 결합하는 항체를 사용하여 환자 유래 시료 중의 CAPRIN-1의 발현을 측정함으로써 암의 검출 및 암의 악성도를 평가할 수 있는 것이 보고되어 있다(특허문헌 2). 즉, 세포막 단백질의 하나인 CAPRIN-1이 암 치료 등의 타겟이 될 수 있는 것이 기재되어 있다. 한편, 상술한 바와 같이 암 환자의 다양성으로부터 CAPRIN-1을 표적으로 한 치료약, 예를 들면 항체의 투여를 결정하기 위해서는 미리 암 환자 유래의 시료 중의 CAPRIN-1의 존재를 검증할 필요가 있다. 그러나, 이와 같이 특이적인 치료약을 적용하기 위한 CAPRIN-1의 검출 방법에 관한 보고는 없고, 또한 암 환자 시료를 사용한 암을 검출하는 시약은 존재하지 않는다.
본 발명의 목적은 암의 진단에 유용한 암의 검출 수단을 제공하는 것이다. 본 발명의 목적은, 또한 암 환자에 대한 CAPRIN-1 표적약의 투여를 결정하기 위한 암 환자 시료 중의 CAPRIN-1의 존재 및 그 양을 결정하는 것에 의한 암의 검출 방법, 암 진단약 및 키트를 제공하는 것이다.
본 발명자들은 예의 연구의 결과, 개 정소 유래의 cDNA 라이브러리와 담암견(擔癌犬)의 혈청을 사용한 SEREX법에 의해 담암 생체 유래의 혈청 중에 존재하는 항체와 결합하는 단백질을 코딩하는 cDNA를 취득하고, 그 cDNA를 기초로 하여 서열번호 6, 8, 10, 12 및 14로 나타내어지는 아미노산 서열을 갖는 개 CAPRIN-1을 제작했다. 또한, 취득한 유전자의 인간 상동성 유전자를 기초로 하여 서열번호 2 및 4로 나타내어지는 아미노산 서열을 갖는 인간 CAPRIN-1을 제작했다. 그리고, 그들단백질을 코딩하는 유전자가 각각 개 및 인간의 정소 및 악성의 암 세포에 있어서 특이적으로 발현되는 것(후술하는 실시예 1을 참조), 및 그들 단백질의 아미노산 서열을 기초로 제작된 재조합 폴리펩티드를 항원으로 하여 제작한 모노클로날 항체가 여러 가지 암 조직 중의 CAPRIN-1과 결합하여 CAPRIN-1을 그 표면에 갖는 암 세포를 상해할 수 있는 것을 발견하고, 그 결과 CAPRIN-1이 암 치료 표적이 된다는 지견을 얻었다. 또한, 상술한 모노클로날 항체를 이용하여 암 환자 유래의 시료로부터 특이적으로 CAPRIN-1을 검출할 수 있는 것을 발견했다. 즉, 본 발명은 생체로부터 분리된 시료에 대하여 적용하는 소정의 항CAPRIN-1 항체를 사용하여 CAPRIN-1의 발현을 측정하는 것을 포함하는 암의 검출 방법을 제공한다. 또한, 본 발명에서는 상술한 모노클로날 항체를 사용한 면역학적 분석법, 예를 들면 소정의 항CAPRIN-1 모노클로날 항체를 사용한 암 환자 유래의 혈청에 대한 ELISA법 또는 암 조직에 대한 면역 조직 화학 염색법에 의해 암 환자 유래의 시료 중의 CAPRIN-1을 검출하고, 그 발현량을 평가하는 방법을 확립했다. 또한, 본 방법을 적용하여 암 유래의 시료를 평가하고, 그 결과 CAPRIN-1을 발현하고, 그 존재량이 높다고 판단된 환자에 대해서 CAPRIN-1 표적약의 적용이 가능해지는 것이 나타내어지는 것을 발견하고, 본원 발명을 완성했다.
본 발명은 생체로부터 분리된 시료에 대하여 적용하는 방법으로서, 상기 시료 중의 CAPRIN-1을 검출하고, 그 양을 측정하는 것에 의한 암의 검출 방법을 제공한다. 또한, CAPRIN-1 표적약을 환자에게 투여하기 전에 조직 중의 CAPRIN-1의 발현량을 측정함으로써 그 유효성을 예측하고, CAPRIN-1에 대한 치료약의 적용성(CAPRIN-1 표적약, 예를 들면 항체 등을 그 암 환자에게 적용할 수 있는지 등)을 명확히 하는 진단 방법을 제공한다. 또한, 본 발명은 CAPRIN-1과 항원 항체 반응하는 항체 또는 그 항원 결합성 단편을 포함하는 암 진단약 또는 키트를 제공한다.
구체적으로는 본 발명은 이하의 특징을 갖는다.
(1) 서열번호 66에 나타내어지는 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드에 대하여 면역학적 반응성을 갖는 항체 또는 그 항원 결합성 단편을 사용하여 항원 항체 반응에 의해 생체 시료 중의 CAPRIN-1의 발현량을 측정하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 암의 검출 방법.
(2) 상기 (1)에 있어서, 측정해야 할 상기 CAPRIN-1은 (a) 서열목록의 서열번호 2~30 중 짝수의 서열번호에 나타내어지는 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 또는 (b) 서열목록의 서열번호 2~30 중 짝수의 서열번호에 나타내어지는 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드와 85% 이상의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드인 것을 특징으로 하는 암의 검출 방법.
(3) 상기 (1) 또는 (2)에 있어서, 상기 생체 시료는 인간, 개 또는 고양이 유래인 것을 특징으로 하는 암의 검출 방법.
(4) 상기 (1) 내지 (3) 중 어느 하나에 있어서, 상기 생체 시료는 개 유래이며, 측정해야 할 상기 CAPRIN-1은 서열번호 6, 8, 10, 12 또는 14에 나타내어지는 아미노산 서열을 갖는 것을 특징으로 하는 암의 검출 방법.
(5) 상기 (1) 내지 (3) 중 어느 하나에 있어서, 상기 생체 시료는 인간 유래이며, 측정해야 할 상기 CAPRIN-1은 서열번호 2 또는 4에 나타내어지는 아미노산 서열을 갖는 것을 특징으로 하는 암의 검출 방법.
(6) 상기 (1) 내지 (5) 중 어느 하나에 있어서, 측정된 CAPRIN-1 발현량은 건강한 개체와 비교하여 높을 경우에 암 치료약으로서의 상기 항체의 표적이 되는 암의 존재가 나타내어지는 것을 특징으로 하는 암의 검출 방법.
(7) 상기 (1) 내지 (6) 중 어느 하나에 있어서, 상기 CAPRIN-1의 발현량의 측정은 면역학적 분석법을 사용하여 행하는 것을 특징으로 하는 암의 검출 방법.
(8) 상기 (7)에 있어서, 상기 면역학적 분석법은 ELISA 및/또는 면역 조직 화학 염색법인 것을 특징으로 하는 암의 검출 방법.
(9) 상기 (1) 내지 (8) 중 어느 하나에 있어서, 상기 시료는 체액, 조직 또는 세포인 것을 특징으로 하는 암의 검출 방법.
(10) 상기 (1) 내지 (9) 중 어느 하나에 있어서, 상기 암은 유방암, 뇌종양, 식도암, 위암, 폐암, 간암, 신장암, 갑상선암, 비장암, 췌장암, 대장암, 피부암, 난소암, 자궁암, 전립선암, 방광암, 정소암, 골육종 및 섬유육종으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1개의 암인 것을 특징으로 하는 암의 검출 방법.
(11) 상기 (1) 내지 (10) 중 어느 하나에 있어서, 상기 항체 또는 그 항원 결합성 단편은 서열번호 70에 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 71에 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄 가변 영역을 갖는 모노클로날 항체 또는 그 항원 결합성 단편인 것을 특징으로 하는 암의 검출 방법.
(12) 서열번호 66에 나타내어지는 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드에 대하여 면역학적 반응성을 갖는 항체 또는 그 항원 결합성 단편을 포함하는 것을 특징으로 하는 암 진단약 또는 키트.
(13) 상기 (12)에 있어서, 상기 항체 또는 그 항원 결합성 단편은 서열번호 70에 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 71에 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄 가변 영역을 갖는 모노클로날 항체 또는 그 항원 결합성 단편인 것을 특징으로 하는 암 진단약 또는 키트.
(14) 서열번호 66에 나타내어지는 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드에 대하여 면역학적 반응성을 갖는 항체 또는 그 항원 결합성 단편을 사용하여 생체 시료 중의 CAPRIN-1의 발현량을 측정하고, 그 발현량이 건강한 개체와 비교하여 통계학적으로 유의하게 높을 경우에 CAPRIN-1 표적약을 상기 생체 시료가 유래되는 개체에 투여하는데 적합한 암 치료약으로서 선택하는 것을 결정하는 것을 특징으로 하는 개체별 암 치료약의 선택 방법.
(15) 상기 (14)에 있어서, 상기 CAPRIN-1 표적약은 CAPRIN-1과 면역학적 반응성을 갖는 항체 또는 그 항원 결합성 단편인 것을 특징으로 하는 개체별 암 치료약의 선택 방법.
본 명세서는 본원의 우선권 주장의 기초가 되는 일본 특허 출원 2012-160763호의 개시 내용 전체를 포함한다.
(발명의 효과)
본 발명에 의해 암 환자로부터 분리된 시료 중의 CAPRIN-1의 발현을 측정하는 것에 의한 신규 암의 검출 방법이 제공된다. 후술하는 실시예에 있어서 구체적으로 나타내어지는 바와 같이 CAPRIN-1(또는 Caprin-1 또는 CAPRIN-1 단백질이라고도 함)의 아미노산 서열목록을 기초로 제작한 재조합 폴리펩티드를 항원으로서 사용하여 제작한 항체는 암 환자의 혈청 등의 체액이나 조직 중의 CAPRIN-1에 특이적으로 반응한다. 또한, 하기 실시예에 기재되는 바와 같이 여러 가지 암 조직에 있어서 CAPRIN-1 자체가 특이적으로 고발현되어 있는 점에서 암 환자로부터 분리한 시료 중의 CAPRIN-1의 존재 및 양을 측정함으로써 암의 검출이 가능해진다. 또한, CAPRIN-1을 표적으로 한 치료약 등의 CAPRIN-1 표적약, 예를 들면 항체 의약에 감수성이 있는지의 여부를 미리 판정함으로써 본 약제를 적용 가능한 환자의 선발이 가능해진다. 즉, 본 발명을 암 환자에게 적용하고, CAPRIN-1의 발현 및 양을 미리 측정함으로써 CAPRIN-1에 대한 항체를 사용한 것보다 효율적인 치료의 제공이 가능해진다.
도 1은 CAPRIN-1을 코딩하는 유전자의 정상 조직 및 종양 세포주에서의 발현 패턴을 나타내는 도면이다. 참조 번호 1; CAPRIN-1 단백질을 코딩하는 유전자의 발현 패턴, 참조 번호 2; GAPDH 유전자의 발현 패턴을 나타낸다. 최상단의 패널은 개 정상 조직, 좌중단의 패널은 개 유방암 조직, 우중단의 패널은 인간 유방암 세포주, 최하단의 패널은 각종 인간 암 세포주에 대한 결과를 나타낸다.
본 발명의 암의 검출 방법에 있어서는 생체로부터 분리된 시료(생체 시료) 중의 CAPRIN-1(CAPRIN-1 단백질)의 양(발현량)을 측정한다. 암 환자 시료 중의 CAPRIN-1의 발현량의 측정은, 예를 들면 CAPRIN-1에 대한 항체(항CAPRIN-1 항체)를 사용하여 CAPRIN-1을 검출하는 면역학적 분석법을 사용하여 행할 수 있다. CAPRIN-1의 발현량의 측정에 적용 가능한 여러 가지 면역학적 분석법이 상기 기술분야에서는 잘 알려져 있고, 예를 들면 면역 조직 화학적 해석, 웨스턴 블롯 해석, 면역 침강, 분자 결합 분석, ELISA, 생화학적 효소 활성 분석 등을 들 수 있다. 이와 같은 측정법에 의한 CAPRIN-1의 발현량의 측정 결과는 시료 중의 CAPRIN-1의 존재, CAPRIN-1 발현 세포의 비율, 조직 중의 발현 부위의 분포 및 부위마다의 발현 강도 등도 나타낼 수 있다. 또한, 본 명세서에 있어서의 「발현량」은 세포 내에 있어서의 단백질의 축적량 및 존재량을 포함한다.
시료 중의 CAPRIN-1의 발현량의 측정 결과를 실시예에 나타내는 스코어값으로 분류할 수 있다. 그 스코어값이 높으면 높을수록 암 환자의 암 조직이나 암 혈청 등의 생체 시료 중에 CAPRIN-1이 많이 포함되어 있는 것을 나타낸다. 또한, 본 발명에 있어서 「측정」이라는 용어에는 검출, 정성, 정량 및 반정량 모두가 포함된다.
서열번호 6, 8, 10, 12 또는 14에 나타내어지는 아미노산 서열은 개의 CAPRIN-1의 아미노산 서열이다. 상기 아미노산 서열을 갖는 개 CAPRIN-1은 개 정소 유래의 cDNA 라이브러리와 담암견 유래의 혈청을 사용한 SEREX법에 의해 담암견 유래의 혈청 중에 특이적으로 존재하는 항체와 결합하는 폴리펩티드로서 cDNA 라이브러리로부터 동정된 것이다(실시예 1 참조). 상기 방법에 의해 개의 조직 중의 항원인 서열번호 6, 8, 10, 12 또는 14의 CAPRIN-1 자체를 측정함으로써도 CAPRIN-1 표적약에 대한 감수성의 유무를 진단할 수 있다(실시예를 참조).
또한, 본 명세서에서 사용하는 「아미노산 서열을 갖는다」란 아미노산 잔기가 소정의 아미노산 서열 정보 중에 나타낸 순서로 배열되어 있다는 의미이다. 따라서, 예를 들면 「서열번호 2로 나타내어지는 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드」란 서열번호 2에 나타내어지는 Met Pro Ser Ala··(중략)··Gln Gln Val Asn의 아미노산 서열에 따라 아미노산 잔기가 연결된 709 아미노산 잔기의 사이즈의 폴리펩티드를 의미한다. 또한, 예를 들면 「서열번호 2로 나타내어지는 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드」를 「서열번호 2의 폴리펩티드」라고 약기하는 경우가 있다. 「염기 서열을 갖는다」라는 표현에 대해서도 마찬가지이다. 「아미노산 서열을 갖는다」 및 「염기 서열을 갖는다」라는 기재에 있어서 「갖는다」라는 용어는 「로 이루어진다」라는 표현으로 치환해도 좋다.
또한, 본 명세서 중에서 사용하는 「폴리펩티드」란 복수의 아미노산이 펩티드 결합함으로써 형성되는 분자를 말하고, 구성하는 아미노산수가 많은 폴리펩티드 분자뿐만 아니라 아미노산수가 적은 저분자량의 분자(올리고펩티드나 펩티드)나 전체 길이 단백질도 포함된다. 본 발명에서는 서열번호 2~30 중 짝수의 서열번호에 나타내는 아미노산 서열을 갖는 CAPRIN-1의 전체 길이 단백질도 폴리펩티드에 포함된다.
본 발명의 방법에서는 서열번호 6, 8, 10, 12 또는 14의 개 CAPRIN-1 이외의 기타 포유 동물의 CAPRIN-1도 측정 대상이 된다. 본 명세서에서는 이하 개 이외의 포유 동물의 CAPRIN-1을 개 CAPRIN-1에 대한 「상동 인자」또는 「호모로그」라 하는 경우가 있다. 또한, 간단하게 「CAPRIN-1」이라 할 경우에는 개에 한정되지 않고 다른 포유 동물 유래의 CAPRIN-1도 포함된다. 본 발명의 방법으로 측정 대상이 되는 기타 포유 동물의 CAPRIN-1로서는, 예를 들면 인간 CAPRIN-1, 고양이 CAPRIN-1 등을 들 수 있지만, 이들에 한정되지 않는다.
하기 실시예에 구체적으로 기재되는 바와 같이 인간 CAPRIN-1을 코딩하는 mRNA는 서열번호 6, 8, 10, 12 또는 14의 개 CAPRIN-1과 마찬가지로 인간의 정소와 암 세포에서 유의하게 고발현되고 있지만, 건강한 인간 체내에는 항인간 CAPRIN-1 항체가 검출되지 않는다. 또한, 항고양이 CAPRIN-1 항체는 건강한 고양이 체내에서는 검출되지 않고, 담암 고양이에서만 검출된다. 따라서, 개 이외의 포유 동물에 있어서의 CAPRIN-1의 발현량을 측정했을 경우에도 상기 포유 동물로의 CAPRIN-1 표적약의 적부를 판정할 수 있다.
또한, 인간 CAPRIN-1을 코딩하는 염기 서열 및 그 아미노산 서열은 서열목록의 서열번호 1, 3 및 서열번호 2, 4에 각각 나타내어지는 바와 같다. 인간 CAPRIN-1의 개 CAPRIN-1과의 서열 동일성은 염기 서열에서 94%, 아미노산 서열에서 98%이다. 개와 인간과 같이 유전적으로 원연(遠緣)인 포유 동물 사이이어도 각각의 CAPRIN-1의 아미노산 서열의 서열 동일성은 98%로 매우 높은 점에서 인간 및 개 이외의 포유 동물의 CAPRIN-1과, 인간 또는 개 CAPRIN-1 사이에서도 85% 정도 이상의 높은 서열 동일성을 갖는 것이 많이 존재한다. 즉, 본 발명의 방법에 있어서 발현량을 측정하는 CAPRIN-1은 특별히 한정되지 않지만, 서열번호 2, 4, 6, 8, 10, 12 또는 14에 나타내어지는 개 또는 인간 CAPRIN-1의 아미노산 서열과 바람직하게는 85% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상의 서열 동일성을 갖는 것일 수 있다.
통상, 단백질 등과 같은 복잡한 구조를 취하는 분자량이 큰 항원 물질의 경우, 분자 상에 구조가 다른 복수의 에피토프가 존재하고 있다. 따라서, 생체 내에서는 그와 같은 항원 물질에 대하여 복수의 에피토프를 각각 인식하여 결합하는 복수 종류의 항체가 생산된다. 즉, 생체 내에서 단백질 등의 항원 물질에 대하여 생산되는 항체는 복수 종류의 항체의 혼합물인 폴리클로날 항체이다. 본원 발명자들이 발견한 담암에 감염된 생체 유래의 혈청 중에 특이적으로 존재하여 재조합 CAPRIN-1과 항원 항체 반응에 의해 특이적으로 결합하는 항체 또한 폴리클로날 항체이다. 또한, 본 발명에 있어서 「폴리클로날 항체」라고 했을 경우에는 항원 물질을 체내에 포함하는 생체 유래의 혈청 중에 존재하는 항체로서, 상기 항원 물질에 대하여 상기 생체 내에서 유도된 항체를 가리킨다.
항CAPRIN-1 항체를 얻기 위해서 항원으로서 사용하는 폴리펩티드의 바람직한 구체예로서는 서열번호 2~30 중 짝수의 서열번호의 폴리펩티드 또는 그 단편을 들 수 있다. 특히, 서열번호 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 및 30의 폴리펩티드, 또는 바람직한 에피토프를 포함하는 서열번호 66에 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 그들의 단편을 항원으로서 사용하여 얻어지고, 서열번호 66에 나타내어지는 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드와 특이적으로 결합하는(면역학적 반응성을 가짐) 항CAPRIN-1 항체를 본 발명의 방법에서 적합하게 사용할 수 있다.
또한, 서열번호 2~30 중 짝수의 서열번호(즉, 서열번호 2, 4, 6··28, 30)의 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 염기 서열은 각각 서열번호 1~29 중 홀수의 서열번호(즉, 서열번호 1, 3, 5··27, 29)에 나타내어져 있다.
일반적으로 단백질 항원에 있어서 상기 단백질의 아미노산 서열 중 소수의 아미노산 잔기가 치환되고, 결실되고, 부가되고 또는 삽입되었을 경우에도 원래의 단백질과 거의 동일한 항원성을 갖고 있는 경우가 있는 것은 당업자에 있어서 널리 알려져 있다. 따라서, CAPRIN-1의 아미노산 서열 중 소수의(바람직하게는 1개 또는 수개의) 아미노산 잔기가 치환되고, 결실되고, 부가되고 및/또는 삽입된 서열을 갖는 폴리펩티드로서, 원래의 서열과 80% 이상, 85% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 보다 바람직하게는 95% 이상, 더욱 바람직하게는 98% 이상의 서열 동일성을 갖고, 또한 CAPRIN-1에 대한 폴리클로날 항체와 항원 항체 반응에 의해 특이적으로 결합하는 폴리펩티드(이하, 편의적으로 「특이 반응성 수식 폴리펩티드」라 하는 경우가 있음)도 서열번호 2~30 중 짝수의 서열번호의 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드와 마찬가지로 항CAPRIN-1 항체의 산생에 사용할 수 있다. 바람직하게는 상기 특이 반응성 수식 폴리펩티드는 CAPRIN-1의 아미노산 서열에 있어서 1 또는 수개의 아미노산 잔기가 치환되고, 결실되고, 부가되고 및/또는 삽입된 아미노산 서열을 갖는다. 본 명세서 중의 「수개」란 2~10의 정수, 바람직하게는 2~6의 정수, 더욱 바람직하게는 2~4의 정수를 나타낸다. 본 명세서 중에서 사용하는 아미노산 서열의 「서열 동일성」이란 비교해야 할 2개의 아미노산 서열의 아미노산 잔기가 가능한 많이 일치하도록 양 아미노산 서열을 정렬시키고, 일치한 아미노산 잔기수를 전체 아미노산 잔기수로 나눈 것을 백분율로 나타낸 것이다. 상기 정렬시에는 필요에 따라서 비교하는 2개의 서열의 일방 또는 쌍방에 적당히 갭을 삽입한다. 이와 같은 서열의 정렬화(얼라인먼트)는, 예를 들면 BLAST, FASTA, CLUSTAL W 등의 주지의 프로그램을 사용하여 행할 수 있다(Karlin 및 Altschul, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 87: 2264~2268, 1993; Altschul 외, Nucleic Acids Res., 25: 3389~3402, 1997).
또한, 천연의 단백질을 구성하는 20종류의 아미노산은 저극성 측쇄를 갖는 중성 아미노산(Gly, Ile, Val, Leu, Ala, Met, Pro), 친수성 측쇄를 갖는 중성 아미노산(Asn, Gln, Thr, Ser, Tyr, Cys), 산성 아미노산(Asp, Glu), 염기성 아미노산(Arg, Lys, His), 방향족 아미노산(Phe, Tyr, Trp, His)과 같이 유사한 성질을 갖는 것으로 그룹을 나눌 수 있고, 이들 사이에서의 치환, 즉 보존적 치환이면 폴리펩티드의 성질이 변화되지 않는 것이 많은 점이 알려져 있다. 따라서, CAPRIN-1의 아미노산 잔기를 치환하는 경우에는 이들 각 그룹의 멤버 사이에서 치환함으로써 대응 항체와의 결합성을 유지할 수 있는 가능성이 높아진다. 그러나, 본 발명에서는 상기 개변체는 미개변체와 동등 또는 거의 동등한 면역 유도 활성을 부여하는 한 비보존적 치환을 갖고 있어도 좋다.
본 발명에서 사용되는 상기 폴리펩티드는, 예를 들면 Fmoc법(플루오레닐메틸옥시카르보닐법), tBoc법(t-부틸옥시카르보닐법) 등의 화학 합성법에 따라 합성할 수 있다(일본 생화학회 편찬, 생화학 실험 강좌 1, 단백질의 화학 Ⅳ, 화학 수식과 펩티드 합성, Tokyo Kagaku Dojin Co., Ltd.(일본), 1981년). 또한, 각종 시판된 펩티드 합성기를 이용하여 상법에 의해 합성할 수도 있다. 또는 공지의 유전자 공학적 방법(Sambrook 외, Molecular Cloning, 제 2 판, Current Protocols in Molecular Biology(1989), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Ausubel 외, Short Protocols in Molecular Biology, 제 3 판, A compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology(1995), John Wiley & Sons 등)을 사용하여 용이하게 조제할 수 있다. 예를 들면, 서열번호 2의 인간 CAPRIN-1 또는 그 상동 인자를 코딩하는 유전자를 발현하고 있는 조직으로부터 추출한 RNA로부터 상기 유전자의 cDNA를 RT-PCR에 의해 조제하고, 상기 cDNA의 전체 길이 또는 소망의 일부를 발현 벡터에 편입하고, 숙주 세포 중에 도입하여 목적으로 하는 폴리펩티드를 얻을 수 있다. 서열번호 6, 8, 10, 12 및 14의 개 CAPRIN-1을 코딩하는 cDNA의 염기 서열은 각각 서열번호 5, 7, 9, 11 및 13에 그 인간 상동 인자인 서열번호 2 및 4의 인간 CAPRIN-1을 코딩하는 cDNA의 염기 서열은 각각 서열번호 1 및 3에 나타내어져 있기 때문에 RT-PCR에 사용하는 프라이머는 이들 염기 서열을 참조하여 용이하게 설계할 수 있다. 또한, 후술하는 바와 같이 인간 이외의 포유 동물의 CAPRIN-1을 코딩하는 유전자는 서열번호 5~29 중 홀수의 서열번호의 염기 서열을 참조하여 설계한 프라이머에 의해 증폭될 수 있기 때문에, 예를 들면 고양이 CAPRIN-1을 코딩하는 cDNA도 상기와 마찬가지의 방법에 의해 용이하게 조제할 수 있다. RNA의 추출, RT-PCR, 벡터로의 cDNA의 편입, 벡터의 숙주 세포로의 도입은, 예를 들면 이하에 기재하는 바와 같이 주지의 방법에 의해 행할 수 있다. 또한, 사용하는 벡터나 숙주 세포도 주지이며, 여러 가지 것이 시판되어 있다.
상기 숙주 세포로서는 상기 폴리펩티드를 발현 가능한 세포이면 어떠한 것이어도 좋고, 원핵 세포의 예로서는 대장균 등, 진핵 세포의 예로서는 원숭이 신장 세포(COS1), 차이니즈 햄스터 난소 세포(CHO), 인간 태아 신장 세포주(HEK293), 마우스 태아 피부 세포주(NIH3T3) 등의 포유 동물 배양 세포, 출아 효모, 분열 효모, 누에 세포, 아프리카 손톱 개구리 난세포 등을 들 수 있다.
숙주 세포로서 원핵 세포를 사용할 경우, 발현 벡터로서는 원핵 세포 중에서 복제 가능한 오리진, 프로모터, 리보솜 결합 부위, 멀티클로닝사이트, 터미네이터, 약제 내성 유전자, 영양 요구성 상보 유전자 등을 갖는 발현 벡터를 사용한다. 대장균용 발현 벡터로서는 pUC계, pBluescriptⅡ, pET 발현 시스템, pGEX 발현 시스템 등을 예시할 수 있다. 상기 폴리펩티드를 코딩하는 DNA를 이와 같은 발현 벡터에 편입하고, 상기 벡터에서 원핵 숙주 세포를 형질 전환한 후, 얻어진 형질 전환체를 배양하면 상기 DNA가 코딩하고 있는 폴리펩티드를 원핵 숙주 세포 중에서 발현시킬 수 있다. 이 때, 상기 폴리펩티드를 다른 단백질과의 융합 단백질로서 발현시킬 수도 있다. 또한, 상기 폴리펩티드를 코딩하는 DNA는, 예를 들면 상술한 바와 같이 RT-PCR에 의해 cDNA를 조제하여 얻을 수 있고, 또한 후술하는 바와 같이 시판된 핵산 합성기를 사용하여 상법에 의해 합성할 수도 있다. 또한, 서열번호 2 및 4의 CAPRIN-1을 코딩하는 유전자의 cDNA의 염기 서열은 각각 서열목록의 서열번호 1 및 3에 나타내어져 있다.
숙주 세포로서 진핵 세포를 사용할 경우, 발현 벡터로서는 프로모터, 스플라이싱 영역, 폴리(A) 부가 부위 등을 갖는 진핵 세포용 발현 벡터를 사용한다. 그와 같은 발현 벡터로서는 pKA1, pCDM8, pSVK3, pMSG, pSVL, pBK-CMV, pBK-RSV, EBV 벡터, pRS, pcDNA3, pYES2 등을 예시할 수 있다. 상기와 마찬가지로 본 발명에서 사용되는 폴리펩티드를 코딩하는 DNA를 이와 같은 발현 벡터에 편입하고, 상기 벡터에서 진핵 숙주 세포를 형질 전환한 후, 얻어진 형질 전환체를 배양하면 상기 DNA가 코딩하고 있는 폴리펩티드를 진핵 숙주 세포 중에서 발현시킬 수 있다. 발현 벡터로서 pIND/V5-His, pFLAG-CMV-2, pEGFP-N1, pEGFP-C1 등을 사용한 경우에는 His택(예를 들면, (His)6~(His)10), FLAG택, myc택, HA택, GFP 등 각종 택을 부가한 융합 단백질로서 상기 폴리펩티드를 발현시킬 수 있다.
발현 벡터의 숙주 세포로의 도입에는 전기 천공법, 인산 칼슘법, 리포솜법, DEAE 덱스트란법, 마이크로인젝션, 바이러스 감염, 리포펙션, 세포막 투과성 펩티드와의 결합 등의 주지의 방법을 사용할 수 있다.
숙주 세포로부터 목적의 폴리펩티드를 단리 정제하기 위해서는 공지의 분리 조작을 조합하여 행할 수 있다. 예를 들면, 요소 등의 변성제나 계면활성제에 의한 처리, 초음파 처리, 효소 소화, 염석이나 용매 분별 침전법, 투석, 원심분리, 한외 여과, 겔 여과, SDS-PAGE, 등전점 전기영동, 이온 교환 크로마토그래피, 소수 크로마토그래피, 어피니티 크로마토그래피, 역상 크로마토그래피 등을 들 수 있다.
이상의 방법에 의해 얻어지는 폴리펩티드에는 다른 임의의 단백질과의 융합 단백질의 형태로 있는 것도 포함된다. 예를 들면, 글루타티온-S-트랜스페라아제(GST)나 His택과의 융합 단백질 등을 예시할 수 있다. 이와 같은 융합 단백질의 형태의 폴리펩티드도 상기 특이 반응성 부가 폴리펩티드에 포함된다. 또한, 형질 전환 세포에서 발현된 폴리펩티드는 번역된 후, 세포 내에서 각종 수식을 받는 경우가 있다. 이와 같은 번역 후 수식된 폴리펩티드도 CAPRIN-1에 대한 폴리클로날 항체와의 결합성을 갖는 한 사용 가능하다. 이와 같은 번역 수식으로서는 N 말단 메티오닌의 탈리, N 말단 아세틸화, 당쇄 부가, 세포내 프로테아제에 의한 한정 분해, 미리스토일화, 이소프레닐화, 인산화 등을 예시할 수 있다.
상기와 같은 CAPRIN-1 또는 그 단편을 항원으로서 사용하여 항CAPRIN-1 항체를 제작할 수 있다. 본 발명에서 사용하는 항CAPRIN-1 항체는 폴리클로날 항체이어도 좋고, 모노클로날 항체이어도 좋지만, 모노클로날 항체가 보다 바람직하다.
본 발명의 방법에서는 그와 같이 하여 얻어지는 항CAPRIN-1 항체 중 서열번호 66에 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드와 특이적으로 결합하는(면역학적 반응성을 갖는) 항CAPRIN-1 항체를 CAPRIN-1의 발현량 측정 등의 해석에 적합하게 사용할 수 있다. 이와 같은 항CAPRIN-1 항체는 인간 또는 개의 CAPRIN-1(예를 들면, 서열번호 2~30 중 짝수의 서열번호에 나타내어지는 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드) 및 그들의 호모로그(예를 들면, 서열번호 2~30 중 짝수의 서열번호에 나타내어지는 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드와 85% 이상의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드)를 표적으로서 결합할 수 있다.
서열번호 66에 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드에 대하여 면역학적 반응성을 갖는 항CAPRIN-1 항체는 상기 CAPRIN-1 또는 서열번호 66에 나타내어지는 아미노산 서열을 포함하는 그 단편을 사용하여 동물을 면역시킴으로써 폴리클로날 항체를 산생하고, 거기에서 서열번호 66의 폴리펩티드에 대한 면역학적 반응성에 대해서 항체를 스크리닝함으로써 폴리클로날 항체로서 취득할 수 있다. 또는 서열번호 66에 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드에 대하여 면역학적 반응성을 갖는 항CAPRIN-1 항체는 상기 CAPRIN-1 또는 그 상기 단편을 사용하여 동물을 면역시키고, 그 비장 세포 등의 면역 세포를 사용하여 모노클로날 항체를 산생하는 하이브리도마를 제작하고, 또한 서열번호 66의 폴리펩티드에 대한 면역학적 반응성을 갖는 항체를 스크리닝함으로써 모노클로날 항체로서 취득할 수도 있다.
면역되는 동물로서는 하이브리도마 세포를 제작하는 것이 가능한 비장 세포 등을 갖는 비인간 동물이면 좋고, 예를 들면 마우스, 래트, 햄스터, 래빗, 닭을 들 수 있지만, 마우스를 보다 바람직하게 사용할 수 있다.
면역의 방법으로서는, 예를 들면 CAPRIN-1 또는 그 단편을 키홀림펫헤모시아닌(KLH), 카제인, 혈청 알부민 등의 캐리어 단백질에 결합시킨 것을 면역원으로 하여 아쥬반트와 함께 동물에게 면역함으로써 CAPRIN-1에 대한 항체를 유기할 수 있다. 보다 구체적으로는, 예를 들면 생후 4~10주된 마우스의 피하 또는 복강 내에 아쥬반트와 함께 상기 CAPRIN-1 또는 그 단편을 수회 투여하고, 혈중 항체가의 상승이 확인된 후에 CAPRIN-1 또는 그 단편만을 정맥내 또는 복강 내에 투여함으로써 부스팅하고, 3~10일째에 혈액, 복수 또는 비장 세포를 채취하면 좋다. 이 경우, 채취한 혈액으로부터 얻어지는 혈청이나 복수는 항CAPRIN-1 항체를 포함하는 폴리클로날 항체이다. 얻어진 폴리클로날 항체를 어피니티 크로마토그래피 등의 상법에 의해 서열번호 66의 폴리펩티드에 대한 결합에 대하여 스크리닝하여 서열번호 66의 폴리펩티드에 대한 면역학적 반응성을 갖는 항체를 선별할 수 있다.
아쥬반트로서는 프로인트 완전 아쥬반트, 프로인트 불완전 아쥬반트, 수산화 알루미늄 겔과 백일해균 백신의 혼합물, MPL+TDM 아쥬반트(SIGMA Corporation), Titer Max Gold(Vaxel Inc.) 또는 GERBU 아쥬반트(GERBU Biotechnik GmbH) 등을 예시할 수 있다.
혈중 항체가의 측정은 면역된 동물의 안저정맥총 또는 미정맥으로부터 채혈하고, 얻어진 혈액 중의 CAPRIN-1에 반응하는 항체의 유무를 면역학적 분석법으로 조사하면 좋다.
혈중 항체가의 상승이 확인되고, 부스팅을 행한 후 3~10일째에 채취한 면역 동물의 비장 세포를 마이엘로마 세포와 세포 융합시키면 자율 증식능을 가진 하이브리도마 세포를 제작할 수 있고, 목적의 특이성을 가진 항체를 산생하는 하이브리도마 세포를 스크리닝함으로써 모노클로날 항체를 대량으로 조제할 수 있다.
세포 융합에 사용하는 마이엘로마 세포로서는, 예를 들면 SP2/0, P3-X63Ag8-U1(P3-U1), P3-X63-Ag8653(653), P3-X63-Ag8(X63), P3/NS1/1-Ag4-1(NS1) 등을 사용할 수 있고, 이들의 세포주는 ATCC(American Type Culture Collection), ECACC(European Collection of Cell Cultures) 또는 RIKEN BioResource Center 등으로부터 입수 가능하다.
비장 세포와 마이엘로마 세포의 세포 융합은 양 세포를 세정한 후, 마이엘로마 세포 1에 대하여 비장 세포를 1~10의 비율로 혼합하고, 융합 촉진제로서 평균 분자량 1000~6000의 폴리에틸렌글리콜 또는 폴리비닐알코올을 첨가하거나 전기 자극(예를 들면, 일렉트로포레이션)을 이용한 시판의 세포 융합 장치를 사용하거나 하여 행하면 좋다.
세포 융합을 위한 처리가 완료된 후에는 융합 세포를 배지에 현탁하여 세정하고, 한계 희석법 또는 메틸셀룰로오스 배지 중에서의 콜로니 형성법에 의해 클로닝을 행하게 된다. 여기서, 한계 희석법으로서는, 예를 들면 103~107세포/㎖가 되도록 희석 후, 96웰의 세포 배양용 마이크로플레이트에 102~106세포/웰이 되도록 파종하여 배양하는 방법을 예시할 수 있다.
하이브리도마 세포의 클로닝을 행할 때의 배양 배지에는 목적으로 하는 융합 세포만이 선택적으로 얻어지도록 HAT 서플리먼트를 첨가하는 것이 바람직하다. 보다 상세하게는 Antibodies: A Laboratory Manual(Cold Spring Harbor Laboratory, 1988년)이나 Selected Methods in Cellular Immunology(W. H. Freeman and Company, 1980년)에 기재된 방법에 따라서 목적으로 하는 하이브리도마 세포를 취득하고, 클로닝하면 좋다.
서열번호 66의 폴리펩티드에 대한 면역학적 반응성을 갖는 항체를 산생하는 하이브리도마 세포의 스크리닝은 이하와 같이 하여 행할 수 있다. 예를 들면, CAPRIN-1 또는 그 단편을 담체에 고정(고상화)하고, 각 하이브리도마 세포의 배양 상청(하이브리도마 세포가 산생하는 항CAPRIN-1 항체를 포함)을 첨가하여 항체/항원 복합체를 형성하는데 충분한 시간, 4~37℃의 조건에서 반응시킨 후, 효소, 색소 또는 라디오아이소토프 등으로 표식된 2차 항체를 형성된 항체/항원 복합체에 접촉시켜 항체/항원/2차 항체 복합체를 형성하는데 충분한 시간, 4~37℃의 조건에서 반응시킨다. 또한, 2차 항체에 표식되어 있는 효소, 색소 또는 라디오아이소토프의 시그널을 지표로 형성된 항체/항원/2차 항체 복합체의 유무를 검출하고, 복합체 형성이 확인된 항CAPRIN-1 항체를 목적의 항체로서 선발함으로써 그것을 산생하는 하이브리도마 세포를 스크리닝할 수 있다.
이와 같이 하여 선택된 하이브리도마 세포를 무혈청 배지에 순화시키고, 그 배양 상청으로부터 모노클로날 항체를 조제할 수 있다. 대량으로 모노클로날 항체를 조제할 경우에는, 예를 들면 생후 6~8주된 누드 마우스 또는 SCID 마우스의 복강 내에 0.5㎖의 프리스탄(2,6,10,14-테트라메틸펜타데칸)을 투여하고, 2주간 사육한 후에 5×106~2×107세포/마리의 하이브리도마 세포를 복강 내에 투여하고, 10~21일간 사육함으로써 얻어지는 복수로부터 모노클로날 항체를 조제할 수 있다.
이상과 같이 하여 얻어진 서열번호 66에 나타내어지는 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드에 대하여 면역학적 반응성을 갖는 항CAPRIN-1 항체 또는 그 항원 결합성 단편을 본 발명에 있어서 사용할 수 있다. 상기 항체의 항원 결합성 단편은 항원과의 결합능을 유지하는 임의의 항체 단편을 의미하고, 예를 들면 Fv, scFv, Fab, Fab', F(ab)2 등을 들 수 있다. 상기 항CAPRIN-1 항체 또는 항원 결합성 단편은 망간이나 철 등의 금속을 결합시킨 것이어도 좋다.
본 발명의 방법에서는 생체로부터 얻은 시료(생체 시료) 중에 포함될 수 있는 CAPRIN-1이 측정된다. 상술한 바와 같이 암 세포에 있어서는 항원인 CAPRIN-1의 발현량(축적량)이 유의하게 높은 것을 알고 있다. 암 세포나 암 조직 중의 CAPRIN-1 자체를 측정함으로써 CAPRIN-1의 발현량이 높은 환자에 대하여 CAPRIN-1 표적약을 적용할 수 있는 것이 나타내어진다. 이는 하기 실시예에 구체적으로 기재되어 있는 바와 같다.
생체 시료 중의 폴리펩티드의 측정은 상술한 바와 같이 상기 항CAPRIN-1 항체 또는 그 항원 결합성 단편을 사용하여 항원 항체 반응에 의거하는 주지의 면역학적 분석법에 의해 용이하게 행할 수 있다. 상술한 바와 같이 항체에는 교차 반응성이 있기 때문에, 예를 들면 서열번호 6의 개 CAPRIN-1과 항원 항체 반응하는 항체 또는 그 항원 결합성 단편을 사용하여 서열번호 6의 개 CAPRIN-1뿐만 아니라 기타 포유 동물에 있어서의 그 상동 인자, 예를 들면 서열번호 2 또는 4의 인간 CAPRIN-1이나 고양이 CAPRIN-1 등의 다른 포유 동물의 CAPRIN-1도 측정할 수 있다.
생체 시료는, 또한 본 발명의 방법의 대상이 되는 생체는 포유 동물이며, 인간이나 개, 고양이가 바람직하다.
본 발명의 방법에 제공하는 생체 시료로서는 한정되는 것은 아니지만, 전형적으로는 체액, 조직 또는 세포를 들 수 있다. 본 명세서에서 「체액」이란 액체상의 생체 시료를 말한다. 예를 들면, 혈액(혈청, 혈장 및 간질액을 포함), 림프액, 복수, 흉수, 수액, 담, 눈물, 콧물, 타액, 소변, 질액, 정액 등을 들 수 있는 외에 생리식염수를 사용한 복강 세정액 등도 포함할 수 있다. 본 발명에 있어서 생체 시료로서 사용되는 체액은 바람직하게는 혈청, 혈장, 복수 또는 흉수이다.
예를 들면, 생체 시료 중의 CAPRIN-1의 발현량을 항CAPRIN-1 항체를 사용하여 측정하고, 그 양이 건강한 개체와 비교하여 높을 경우(바람직하게는 통계학적으로 유의하게 높을 경우), 그 생체 시료가 암 세포 또는 암 조직을 포함한다고 판정할 수 있다. 본 발명에 있어서 「건강한 개체」란 피험 개체와 같은 생물종의 암에 감염되어 있지 않는 건강한 개체를 말한다.
일실시형태로서 외과 수술 동안에 환자로부터 얻은 조직이나 자연적으로 또는 트랜스펙션 후에 CAPRIN-1을 발현하는 세포계를 접종한 이종 이식 조직을 담지하는 동물로부터 얻은 조직 등의 조직으로부터 파라포름알데히드 또는 아세톤 고정한 동결 절편 또는 파라포름알데히드로 고정하여 파라핀 포매한 조직 절편에 대해서 상기 항CAPRIN-1 항체를 사용하여 당업자에게 주지의 면역학적 분석법을 사용한 면역 조직 화학에 의해 조직 시료 중의 CAPRIN-1과의 반응성에 관해서 실험할 수도 있다.
면역 조직 화학 염색을 행한 후, 시료 중의 CAPRIN-1의 발현량(축적량·존재량)의 정량화는 염색 상태에 의거하여 스코어값으로서 수치화함으로써 행할 수 있다. 스코어값의 설정은 2단계 이상이 바람직하고, 가장 바람직한 실시형태에서는 4단계의 분류이다. 예를 들면, 조직 시료 중의 암 세포의 세포 표면에 발현되는 CAPRIN-1을 통상의 면역 조직 화학 염색법으로 염색하고, 그 염색 상태를 반영시킨 스코어값을 4단계로 분류했을 경우의 각 스코어는 이하와 같이 설정된다.
· 스코어 0(CAPRIN-1 과잉 발현 없음): 세포막에 양성 염색 없음 또는 세포막의 양성 염색이 있는 암 세포의 비율이 10% 미만.
· 스코어 1(CAPRIN-1 과잉 발현 없음): 거의 식별할 수 없는 정도의 희미한 세포막의 염색이 있는 암 세포의 비율이 10% 이상이며, 암 세포는 세포막만이 부분적으로 염색되어 있다.
· 스코어 2(CAPRIN-1 과잉 발현 있음): 약~중 정도의 완전한 세포막의 양성 염색이 있는 암 세포의 비율이 10% 이상 또는 강한 완전한 세포막의 양성 염색이 있는 암 세포의 비율이 10% 이상 30% 이하이다.
· 스코어 3(CAPRIN-1 과잉 발현 있음): 강한 완전한 세포막의 양성 염색이 있는 암 세포의 비율이 30% 이상이다.
이와 같은 스코어값의 설정은 미국 American Society of Clinical Oncology에 있어서 정해진 것이며, 일본 국내에 있어서는 일본 병리학회가 인정하고 있다. 마찬가지의 스코어값의 설정은 암 항원 중 하나인 Her2의 환자 시료 중의 존재량을 정량하는 「허셉 테스트」에도 적용되어 있다. Her2의 정량에 대해서는 ASCO/CAP Her2 검사 가이드라인에 정해져 있고, 국내에 있어서도 트라스트주맵 병리부회가 본 스코어의 설정을 포함시킨 Her2 검사 가이드를 정하고 있다.
각 스코어값에 기재되어 있는 면역 조직 화학 염색 후의 암 세포가 염색되는 비율은 광학 현미경의 감도를 4배, 10배 또는 20배로 올리고, 시야에 들어 있는 세포를 최저 500개 계측하고, 각 스코어값에 기재된 세포막에 염색상을 나타내는 세포를 계측하여 이하의 식을 이용하여 검산할 수 있다.
양성 세포수/전체 세포수(약 500 전후)×100
이 스코어값의 기준에 있어서는 스코어 2 및 3의 경우에 CAPRIN-1을 발현하고 있는 암 조직이 생체 시료에 포함되어 있다고 판정할 수 있다.
면역 조직 화학 염색을 위해서 항CAPRIN-1 항체의 항원 항체 반응을 여러 가지 방법으로 가시화할 수 있다. 예를 들면, 호스래디시 퍼옥시다아제나 알칼리 포스파타아제 등의 효소로 표식한 2차 항체와 항CAPRIN-1 항체를 반응시키고, 상기 효소의 발색 반응, 화학 발광, 화학 형광 등의 반응을 유도함으로써 항CAPRIN-1 항체와 CAPRIN-1의 결합을 가시화할 수 있다. 2차 항체의 표식에는 형광 표식, 방사성 동위체 표식, 바이오틴 표식 등을 사용할 수도 있다.
CAPRIN-1은 암 세포의 표면에 발현되는 세포막 단백질인 것이 판명되었다. 생체 중에는 많은 단백질 분해 효소가 포함되어 있는 점으로부터 암 환자 체내에서는 암 세포에서 발현된 CAPRIN-1 중의 세포외 영역이 분해되어서 암 세포로부터 분리되기 때문에 CAPRIN-1의 세포내 영역에서도 많이 세포 외에 존재한다. 따라서, 항CAPRIN-1 항체 또는 그 항원 결합성 단편으로서 암 세포의 세포 표면에 존재하는 CAPRIN-1의 세포외 영역에 의해 강하게 결합하는 것을 사용하여 CAPRIN-1을 검출함으로써 암 조직뿐만 아니라 암 감염 개체 유래의 체액이나 세포 집단(예를 들면, 슬라이드에 고정된 암 조직이나 암 환자 혈청) 중에 존재하는 CAPRIN-1도 검출할 수 있다. 따라서, 본 발명에서는 CAPRIN-1 단백질 중 암 세포의 세포 표면에 발현되는 부분(CAPRIN-1의 세포외 영역)에 결합하는 항CAPRIN-1 항체가 바람직하게 사용된다. 이와 같은 항체가 인식하는 CAPRIN-1의 부분 펩티드로서는 서열목록의 서열번호 2~30 중 서열번호 6 및 서열번호 18을 제외한 짝수 번호로 나타내어지는 아미노산 서열 중의 세포외 영역 내의 서열로 이루어지는 것을 들 수 있다. 그와 같은 세포외 영역 내의 서열은 서열번호 2를 기준으로 했을 경우에는 아미노산 잔기 번호(aa) 50위치~98위치 또는 아미노산 잔기 번호(aa) 233위치~344위치의 영역 내의 연속하는 7개 이상의 아미노산 서열이 상당한다. 구체적으로는, 예를 들면 암 세포에 있어서 발현되어 있는 CAPRIN-1의 세포외 영역에 위치하는 서열번호 43, 서열번호 61, 서열번호 62에 나타내어지는 아미노산 서열 중의 서열로 이루어지는 CAPRIN-1의 부분 펩티드에 결합하는 항CAPRIN-1 항체가 바람직하다. 또한, 이들 아미노산 서열과 80% 이상, 바람직하게는 85% 이상, 보다 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열로 이루어지는 펩티드에 결합하는 항CAPRIN-1 항체가 특히 바람직하게 사용된다. 본 발명의 방법에서 사용한 서열번호 66에 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드와 특이적으로 결합하는(면역학적 반응성을 갖는) 항CAPRIN-1 항체는 상기와 같은 CAPRIN-1의 세포외 영역에 결합할 수 있고, 본 발명의 방법으로 사용함으로써 고감도로 CAPRIN-1을 검출할 수 있다. 서열번호 66에 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드와 특이적으로 결합하는(면역학적 반응성을 갖는) 항CAPRIN-1 항체는 서열번호 70에 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 가변 영역과 서열번호 71에 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄 가변 영역을 갖는 항체(바람직하게는 모노클로날 항체) 또는 그 항원 결합성 단편인 것이 더욱 바람직하다.
본 발명의 방법에서 검출 대상이 되는 암으로서는 CAPRIN-1을 과잉 발현하고 있는 암이며, 유방암, 뇌종양, 식도암, 위암, 폐암, 간암, 신장암, 갑상선암, 비장암, 췌장암, 대장암, 피부암, 난소암, 자궁암(자궁경부암 및 자궁체부암), 전립선암, 방광암, 정소암, 골육종을 들 수 있다. 그 밖에 머리, 목의 편평상피암, 멜라노마, 각종 선암, 간세포암, 기저세포암, 칙세포종양 치육종, 구강내종류, 항문주위선암, 항문낭종류, 항문낭 아포크린선암, 셀트리세포종, 질전정암, 피지선암, 피지선상피종, 피지선종, 땀샘암, 비강내선암, 비선암, 기관지선암, 선관암, 유선암, 복합형 유선암, 유선 악성 혼합 종양, 유관내 유두상선암, 섬유육종, 혈관주피종, 연골육종, 연부 조직육종, 조직구육종, 점액육종, 미분화육종, 폐암, 비만세포종, 피부평활근종, 복강내 평활근종, 평활근종, 만성형 림프구성 백혈병, 림프종, 소화관형 림프종, 소화기형 림프종, 소~중 세포형 림프종, 부신수질종양, 과립막세포종, 갈색세포종 등을 들 수 있지만, 이들에 한정되지 않는다.
본 발명의 방법에서는 측정된 CAPRIN-1 발현량이 건강한 개체와 비교하여 높은(바람직하게는 통계학적으로 유의하게 높은) 경우, 그 생체 시료가 유래하는 생체(개체) 중에 그 측정에 사용한 항CAPRIN-1 항체가 특이적으로 결합 가능한 암(즉, 암 치료약으로서의 상기 항체의 표적이 됨)이 존재하는 것이 나타내어진다. 이 점을 이용하여 암 환자 유래의 생체 시료에 대해서 본 발명의 방법에 의해 CAPRIN-1의 발현량을 측정하고, 그 발현량을 건강한 개체와 비교함으로써 환자의 암이 CAPRIN-1 표적약을 적용할 수 있는(예를 들면, 암 치료약으로서의 상기 항체의 표적이 되는) 암인지의 여부를 판정할 수 있다.
따라서, 본 발명에 의거하면 CAPRIN-1을 표적으로 한 항체를 비롯한 CAPRIN-1 표적약의 투여에 의해 치료 효과를 기대할 수 있는 암 환자의 특정이 가능해져 보다 효과적인 암 치료를 제공할 수 있다.
일실시형태에서는 본 발명은 서열번호 66에 나타내어지는 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드에 대하여 면역학적 반응성을 갖는 항체를 사용하여 생체 시료 중의 CAPRIN-1의 발현량을 측정하고, 그 발현량이 건강한 개체와 비교하여 높은 경우(바람직하게는 통계학적으로 유의하게 높은 경우)에 CAPRIN-1 표적약을 바람직하게는 CAPRIN-1에 대하여 면역학적 반응성을 갖는 항체 또는 그 항원 결합성 단편을 상기 생체 시료가 유래하는 개체에 투여하는데 적합한 암 치료약으로서 선택하는 것을 포함하는 개체별 암 치료약의 선택 방법에 관한 것이다. 개체별 암 치료약의 선택에 의해 환자 개인에게 최적인 암 치료법을 적용하는 소위 오더메이드 의료가 가능해진다.
본 명세서에 있어서 「통계학적으로 유의」란 양자간의 양적 차이를 통계학적으로 처리했을 때에 유의차가 있는 것을 말한다. 구체적으로는, 예를 들면 위험률(유의 수준)이 5%, 1% 또는 0.1%보다 작은 경우를 들 수 있다. 검정 방법은 유의성의 유무를 판단 가능한 공지의 방법이면 특별히 한정되지 않는다. 예를 들면, 스튜던트 t 검정법, 다중 비교 검정법을 사용할 수 있다.
또한, 본 발명은 본 발명에 있어서 CAPRIN-1의 발현 측정에 사용되는 항CAPRIN-1 항체(특히, 서열번호 66에 나타내어지는 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드에 대하여 면역학적 반응성을 갖는 항CAPRIN-1 항체) 또는 그 항원 결합성 단편을 시약으로서 포함하는 암 진단약 또는 암 진단용 키트도 제공한다. 이 경우의 암 진단약 또는 키트는 상기 항체 또는 항원 결합성 단편의 안정화 등에 유용한 각종 첨가제 등을 포함하고 있어도 좋다. 상기 항CAPRIN-1 항체 또는 항원 결합성 단편은 망간이나 철 등의 금속을 결합시킨 것이어도 좋다. 그와 같은 금속 결합항체 또는 항원 결합성 단편을 체내에 투여하면 항원 단백질이 보다 많이 존재하는 부위에 상기 항체 또는 항원 결합성 단편이 보다 많이 집적되므로 MRI 등에 의해 금속을 측정하면 항원 단백질을 산생하는 암 세포의 존재를 검출할 수 있다.
실시예
이하, 본 발명을 실시예에 의거하여 보다 구체적으로 설명하지만, 본 발명의 범위는 이들 실시예에 의해 제한되지 않는 것으로 한다.
실시예 1: 각 조직에서의 CAPRIN-1 발현 해석
CAPRIN-1 유전자의 개 및 인간의 정상 조직, 및 각종 암 조직 및 암 세포주에 있어서의 발현을 WO2010/016526의 실시예 1(4)에 따라서 RT-PCR법에 의해 조사했다. 그 결과, 건강한 개 정상 조직에서는 정소에 강한 발현이 보이고, 또한 개 유방암(도 1) 및 선암 조직에서 발현이 보였다. 또한, 인간 조직에서의 발현을 함께 확인한 결과, 개 CAPRIN-1 유전자와 마찬가지로 정상 조직에서 발현을 확인할 수 있었던 것은 정소뿐이었지만, 암 세포에서는 인간 유방암 세포주 8종(ZR75-1, MCF7, T47D, SK-BR-3, MDA-MB-157, BT-20, MDA-MB-231V, MRK-nu-1) 외에 뇌종양 세포주, 백혈병 유래의 세포주, 폐암 세포주, 식도암 세포주 등 다종류의 암 세포주에서 발현이 검출되었다(도 1). 이 결과로부터 CAPRIN-1은 정소 이외의 정상 조직에서는 발현이 보이지 않고, 한편, 유방암 세포를 비롯한 많은 암 세포에 발현되어 있는 것이 확인되었다.
실시예 2: CAPRIN-1에 대한 항체의 제작
(1) 마우스 항인간 CAPRIN-1 모노클로날 항체의 제작
WO2010/016526의 실시예 3에서 조제한 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 인간 CAPRIN-1100㎍을 등량의 MPL+TDM 아쥬반트(SIGMA Corporation제)와 혼합하고, 이것을 마우스 1마리당 항원 용액으로 했다. 이 항원 용액을 생후 6주된 Balb/c 마우스(Japan SLC, Inc.제)의 복강 내에 투여 후, 1주일마다 3회 더 투여를 행했다. 최후의 면역으로부터 3일 후에 적출한 비장을 멸균한 2매의 슬라이드 유리에 끼워서 으깨고, PBS(-)(Nippon Suisan Kaisha, Ltd.제)를 사용하여 세정하고, 1500rpm으로 10분간 원심하여 상청을 제거하는 조작을 3회 반복하여 비장 세포를 얻었다. 얻어진 비장 세포와 마우스 마이엘로마 세포 SP2/0(ATCC로부터 구입)를 10:1의 비율로 혼화하고, 거기에 37℃로 가온한 10% FBS를 포함하는 RPMI1640 배지 200㎕와 PEG1500(Boehringer Ingelheim.제) 800㎕를 혼화하여 조제한 PEG 용액을 첨가하고, 5분간 정치하여 세포 융합을 행했다. 1700rpm으로 5분간 원심하고, 상청을 제거 후, Thermo Fisher Scientific Inc.제의 HAT 용액을 2%당량 첨가한 15% FBS를 포함하는 RPMI1640 배지(HAT 선택 배지) 150㎖에서 세포를 현탁하고, 96구멍 플레이트(Nunc Co., Ltd.제)의 1웰당 100㎕씩 플레이트 15매에 파종했다. 7일간, 37℃, 5% CO2의 조건에서 배양함으로써 비장 세포와 마이엘로마 세포가 융합된 하이브리도마를 얻었다.
제작한 하이브리도마가 산생하는 항체의 CAPRIN-1에 대한 결합 친화성을 지표로 하이브리도마를 선발했다. 상기 CAPRIN-1 단백질 용액 1㎍/㎖를 96구멍 플레이트 1웰당 100㎕ 첨가하고, 4℃에서 18시간 정치했다. 각 웰을 PBS-T로 3회 세정 후, 0.5% Bovine Serum Albumin(BSA) 용액(SIGMA Corporation제)을 1웰당 400㎕ 첨가하고, 실온에서 3시간 정치했다. 용액을 제외하고 1웰당 400㎕의 PBS-T로 웰을 3회 세정 후, 상기에서 얻어진 하이브리도마의 각 배양 상청을 1웰당 100㎕ 첨가하고, 실온에서 2시간 정치했다. PBS-T로 각 웰을 3회 세정한 후, PBS로 5000배로 희석한 HRP 표식 항마우스 IgG(H+L) 항체(Life technologies제)를 1웰당 100㎕ 첨가하고, 실온에서 1시간 정치했다. PBS-T로 웰을 3회 세정한 후, TMB 기질 용액(Thermo Fisher Scientific Inc.제)을 1웰당 100㎕ 첨가하고, 15-30분간 정치하여 발색 반응을 행했다. 발색 후, 1규정 황산을 1웰당 100㎕ 첨가하고, 반응을 정지시켜 흡광도계를 사용하여 450㎚와 595㎚의 흡광도값을 측정했다. 그 결과, 흡광도값이 높았던 항체를 산생하는 하이브리도마를 목적의 하이브리도마의 후보주로서 복수개 선발했다.
선발한 하이브리도마를 96구멍 플레이트 1웰당 0.5개가 되도록 플레이트에 첨가하여 배양했다. 1주일 후, 웰 중에 단일 콜로니를 형성하고 있는 하이브리도마가 관찰되었다. 그들 웰의 세포를 더 배양하여 클로닝된 하이브리도마가 산생하는 항체의 CAPRIN-1에 대한 결합 친화성을 지표로 하이브리도마를 선발했다. 상기 CAPRIN-1 단백질 용액 1㎍/㎖를 96구멍 플레이트 1웰당 100㎕ 첨가하고, 4℃에서 18시간 정치했다. 각 웰을 PBS-T로 3회 세정 후, 0.5% BSA 용액을 1웰당 400㎕ 첨가하고, 실온에서 3시간 정치했다. 용액을 제외하고 1웰당 400㎕의 PBS-T로 웰을 3회 세정 후, 상기 얻어진 하이브리도마의 각 배양 상청을 1웰당 100㎕ 첨가하고, 실온에서 2시간 정치했다. PBS-T로 각 웰을 3회 세정한 후, PBS로 5000배로 희석한 HRP 표식 항마우스 IgG(H+L) 항체(Life technologies제)를 1웰당 100㎕ 첨가하고, 실온에서 1시간 정치했다. PBS-T로 웰을 3회 세정한 후, TMB 기질 용액(Thermo Fisher Scientific Inc.제)을 1웰당 100㎕ 첨가하고, 15~30분간 정치하여 발색 반응을 행했다. 발색 후, 1규정 황산을 1웰당 100㎕ 첨가하여 반응을 정지시키고, 흡광도계를 사용하여 450㎚와 595㎚의 흡광도값을 측정했다. 그 결과, CAPRIN-1에 반응성을 나타내는 모노클로날 항체를 산생하는 복수의 하이브리도마주를 얻고, 하이브리도마의 배양 상청을 프로틴G 담체를 사용하여 정제하고, CAPRIN-1에 결합하는 모노클로날 항체 150개를 얻었다.
이어서, 그들 모노클로날 항체 중 CAPRIN-1이 발현되는 유방암 세포의 세포 표면에 반응성을 나타내는 것을 선발했다. 구체적으로는 106개의 인간 유방암 세포주 MDA-MB-231V를 1.5㎖ 용적의 마이크로 원심 튜브로 원심분리하고, 이것에 상기 각 하이브리도마 상청 100㎕를 첨가하고, 빙상에서 1시간 정치했다. PBS로 세정한 후, 0.1% 소 태아 혈청을 포함하는 PBS로 500배 희석한 FITC 표식 염소 항마우스 IgG 항체(Life technologies제)를 첨가하고, 얼음 상에서 1시간 정치했다. PBS로 세정 후, Becton, Dickinson and Company의 FACS 캘리버로 형광 강도를 측정했다. 한편, 상기와 마찬가지의 조작을 항체 대신에 배지를 첨가한 것을 대조군으로 했다. 그 결과, 대조군과 비교하여 형광 강도가 강한, 즉 유방암 세포의 세포 표면에 반응하는 모노클로날 항체 10개(#1~#10)를 선발했다. 이들 모노클로날 항체의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역 각각의 서열을 서열번호 44~60에 나타낸다. 상기 모노클로날 항체 #1은 서열번호 44의 중쇄 가변 영역과 서열번호 45의 경쇄 가변 영역을 포함하고, #2는 서열번호 44의 중쇄 가변 영역과 서열번호 46의 경쇄 가변 영역을 포함하고, #3은 서열번호 44의 중쇄 가변 영역과 서열번호 47의 경쇄 가변 영역을 포함하고, #4는 서열번호 44의 중쇄 가변 영역과 서열번호 48의 경쇄 가변 영역을 포함하고, #5는 서열번호 49의 중쇄 가변 영역과 서열번호 50의 경쇄 가변 영역을 포함하고, #6은 서열번호 51의 중쇄 가변 영역과 서열번호 52의 경쇄 가변 영역을 포함하고, #7은 서열번호 53의 중쇄 가변 영역과 서열번호 54의 경쇄 가변 영역을 포함하고, #8은 서열번호 55의 중쇄 가변 영역과 서열번호 56의 경쇄 가변 영역을 포함하고, #9는 서열번호 57의 중쇄 가변 영역과 서열번호 58의 경쇄 가변 영역을 포함하고, #10은 서열번호 59의 중쇄 가변 영역과 서열번호 60의 경쇄 가변 영역을 포함한다.
(2) 암 세포의 세포 표면에 반응하는 마우스 항CAPRIN-1 항체가 결합하는 CAPRIN-1 중의 펩티드의 동정
상기에서 취득한 암 세포의 세포 표면에 반응하는 #1~#10의 마우스 항CAPRIN-1 모노클로날 항체를 사용하여 그들이 인식하는 CAPRIN-1 중의 부분 서열의 동정을 행했다.
우선, PBS로 1㎍/㎕의 농도로 용해한 재조합 CAPRIN-1 단백질 용액 100㎕에 최종 농도가 10mM이 되도록 DTT(Sigma-Aldrich Co., LLC.제)를 첨가하고, 95℃, 5분간 반응시켜서 CAPRIN-1 단백질 내의 디술피드 결합의 환원을 행하고, 이어서 최종 농도 20mM의 요오드아세트아미드(Wako Pure Chemical Industries, Ltd.제)를 첨가하고, 37℃, 차광 조건 하에서 30분간 티올기의 알킬화 반응을 행했다. 얻어진 환원 알킬화 CAPRIN-1 단백질 40㎍에 #1~#10의 마우스 항CAPRIN-1 모노클로날 항체를 각각 50㎍ 첨가하고, 20mM 인산 완충액(pH 7.0) 1㎖에 메스업하여 교반 혼합하면서 4℃에서 밤새 반응시켰다.
이어서, 트립신(Promega KK.제)을 최종 농도 0.2㎍이 되도록 첨가하고, 37℃ 1시간, 2시간, 4시간 및 12시간 반응시킨 후, 미리 1% BSA(SIGMA Corporation제)를 포함하는 PBS로 블록킹하고, PBS로 세정한 프로틴A-유리비즈(General Electric Company제)와 1mM 탄산 칼슘, NP-40 완충액(20mM 인산 완충액(pH 7.4), 5mM EDTA, 150mM NaCl, 1% NP-40) 중에서 혼합하고, 각각 30분간 반응시켰다.
반응액을 25mM 탄산 암모늄 완충액(pH 8.0)으로 세정한 후, 0.1% 포름산 100㎕를 사용하여 항원 항체 복합체를 용출하고, 용출액에 대해서 Q-TOF Premier(Waters Corporation제)를 사용하여 LC-MS 해석을 행했다. 해석은 기기에 부속된 프로토콜에 따랐다.
그 결과, #1~#10의 모든 마우스 항인간 CAPRIN-1 모노클로날 항체가 인식하는 CAPRIN-1의 부분 서열로서 서열번호 61의 폴리펩티드가 동정되었다. 또한, 모노클로날 항체 #1~#4, #5~#7 및 #9가 인식하는 상기 서열번호 61의 폴리펩티드 중의 부분 서열로서 서열번호 62의 펩티드가 동정되고, 또한 모노클로날 항체 #10이 부분 서열 펩티드인 서열번호 63의 펩티드를 인식하는 것을 알았다.
(3) 닭 항인간 CAPRIN-1 모노클로날 항체의 제작
WO2010/016526의 실시예 3에서 조제한 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 인간 CAPRIN-1 300㎍을 등량의 프로인트의 완전 아쥬반트와 혼합하고, 이것을 닭 1마리당 항원 용액으로 했다. 항원 용액을 생후 7주령의 닭의 복강 내에 투여 후, 4주마다 7회 투여를 행하여 면역을 완료했다. 최후의 면역으로부터 4일 후에 적출한 각각의 비장을 멸균한 2매의 슬라이드 유리에 끼워서 으깨고, PBS(-)(Nippon Suisan Kaisha, Ltd.제)를 사용하여 세정하고, 1500rpm으로 10분간 원심하여 상청을 제거하는 조작을 3회 반복하여 비장 세포를 얻었다. 얻어진 비장 세포와 조류 세망내피증 바이러스를 사용하여 닭으로부터 형질 전환법에 의해 수립한 경쇄가 결손되어 있는 닭 마이엘로마 세포를 5:1의 비율로 혼화하고, 거기에 37℃로 가온한 10% FBS를 포함하는 IMDM 배지 200㎕와 PEG1500(Boehringer Ingelheim.제) 800㎕를 혼화하여 조제한 PEG 용액을 첨가하고, 5분간 정치하여 세포 융합을 행했다. 1700rpm으로 5분간 원심하여 상청을 제거 후, Thermo Fisher Scientific Inc.제의 HAT 용액을 2%당량 첨가한 10% FBS를 포함하는 IMDM 배지(HAT 선택 배지) 300㎖에서 세포를 현탁하고, 96구멍 플레이트(Nunc Co., Ltd.제)의 1웰당 100㎕씩 플레이트 30매에 파종했다. 7일간, 37℃, 5% CO2의 조건에서 배양함으로써 비장 세포와 닭 마이엘로마 세포가 융합된 하이브리도마를 얻었다.
제작한 하이브리도마가 산생하는 항체의 CAPRIN-1 단백질에 대한 결합 친화성을 지표로 하이브리도마를 선발했다. CAPRIN-1 단백질 용액 1㎍/㎖를 96구멍 플레이트 1웰당 100㎕ 첨가하고, 4℃에서 18시간 정치했다. 각 웰을 PBS-T로 3회 세정 후, 0.5% Bovine Serum Albumin(BSA) 용액(SIGMA Corporation제)을 1웰당 400㎕ 첨가하고, 실온에서 3시간 정치했다. 용액을 제외하고 1웰당 400㎕의 PBS-T로 웰을 3회 세정 후, 상기 얻어진 하이브리도마의 각 배양 상청을 1웰당 100㎕ 첨가하고, 실온에서 2시간 정치했다. PBS-T로 각 웰을 3회 세정한 후, PBS로 5000배로 희석한 HRP 표식 항닭 IgY 항체(SIGMA제)를 1웰당 100㎕ 첨가하고, 실온에서 1시간 정치했다. PBS-T로 웰을 3회 세정한 후, TMB 기질 용액(Thermo Fisher Scientific Inc.제)을 1웰당 100㎕ 첨가하고, 15~30분간 정치하여 발색 반응을 행했다. 발색 후, 1규정 황산을 1웰당 100㎕ 첨가하여 반응을 정지시키고, 흡광도계를 사용하여 450㎚와 595㎚의 흡광도값을 측정했다. 그 결과, 흡광도값이 높았던 항체를 산생하는 하이브리도마를 목적의 하이브리도마의 후보주로서 복수개 선발했다.
선발한 하이브리도마를 96구멍 플레이트 1웰당 0.5개가 되도록 플레이트에 첨가하여 배양했다. 1주일 후, 웰 중에 단일 콜로니를 형성하고 있는 하이브리도마가 관찰되었다. 그들 웰의 세포를 더 배양하고, 클로닝된 하이브리도마가 산생하는 항체의 CAPRIN-1 단백질에 대한 결합 친화성을 지표로 하이브리도마를 선발했다. CAPRIN-1 단백질 용액 1㎍/㎖을 96구멍 플레이트 1웰당 100㎕ 첨가하고, 4℃에서 18시간 정치했다. 각 웰을 PBS-T로 3회 세정 후, 0.5% BSA 용액을 1웰당 400㎕ 첨가하고, 실온에서 3시간 정치했다. 용액을 제외하고 1웰당 400㎕의 PBS-T로 웰을 3회 세정 후, 상기 얻어진 하이브리도마의 각 배양 상청을 1웰당 100㎕ 첨가하고, 실온에서 2시간 정치했다. PBS-T로 각 웰을 3회 세정 후, PBS로 5000배로 희석한 HRP 표식 항닭 IgY 항체(SIGMA제)를 1웰당 100㎕ 첨가하고, 실온에서 1시간 정치했다. PBS-T로 웰을 3회 세정한 후, TMB 기질 용액(Thermo Fisher Scientific Inc.제)을 1웰당 100㎕ 첨가하고, 15~30분간 정치하여 발색 반응을 행했다. 발색 후, 1규정 황산을 1웰당 100㎕ 첨가하여 반응을 정지시키고, 흡광도계를 사용하여 450㎚와 595㎚의 흡광도값을 측정했다. 그 결과, CAPRIN-1 단백질에 반응성을 나타내는 모노클로날 항체를 산생하는 하이브리도마주를 목적의 하이브리도마의 후보주로서 복수개 얻었다.
이어서, 그들 모노클로날 항체 중 CAPRIN-1이 발현되는 유방암 세포의 세포 표면에 반응성을 나타내는 것을 선발했다. 구체적으로는 5×105개의 인간 유방암 세포주 MDA-MB-231V를 1.5㎖용적의 마이크로 원심 튜브로 원심분리하고, 이것에 상기 각 하이브리도마의 배양 상청 100㎕를 첨가하고, 빙상에서 1시간 정치했다. PBS로 세정한 후, 0.1% FBS를 포함하는 PBS로 30배 희석한 FITC 표식 염소 항닭 IgG(H+L) 항체(SouthernBiotech Company제)를 첨가하고, 얼음 상에서 1시간 정치했다. PBS로 세정 후, Becton, Dickinson and Company의 FACS 캘리버로 형광 강도를 측정했다. 한편, 상기와 마찬가지의 조작을 하이브리도마 배양용 배지를 사용하여 행하고, 대조군의 샘플로 했다. 그 결과, 대조군과 비교하여 형광 강도가 강한, 즉 CAPRIN-1을 발현하는 유방암 세포의 세포 표면에 반응하는 모노클로날 항체 1개(닭 항인간 CAPRIN-1 모노클로날 항체 #11)를 선발했다.
(4) 마우스-닭 키메라 재조합 항체의 제작
상기 (3)에서 얻어진 서열번호 64로 나타내어지는 닭 항인간 CAPRIN-1 모노클로날 항체 #11의 중쇄 가변 영역의 유전자 증폭 단편의 양단을 제한 효소 처리한 후 정제하고, 닭 항체 유래의 리더 서열과 마우스 IgG1의 H쇄 정상 영역을 이미 삽입 완료한 pcDNA4/myc-His(Life technologies제) 벡터에 상법을 따라서 삽입했다. 또한, 서열번호 65로 나타내어지는 닭 항인간 CAPRIN-1 모노클로날 항체 #11의 경쇄 가변 영역의 유전자 증폭 단편의 양단을 제한 효소 처리한 후 정제하고, 닭 항체 유래의 리더 서열과 마우스 IgG1의 L쇄 정상 영역을 이미 삽입 완료한 pcDNA 3.1/myc-His(Life technologies제) 벡터에 상법을 따라서 삽입했다.
이어서, 닭 항인간 CAPRIN-1 모노클로날 항체 #11의 중쇄 가변 영역이 삽입된 상기 재조합 벡터와, 닭 항인간 CAPRIN-1 모노클로날 항체 #11의 경쇄 가변 영역이 삽입된 상기 재조합 벡터를 CHO-K1 세포(RIKEN Cell Bank로부터 입수)에 도입했다. 구체적으로는 12구멍 배양 플레이트의 1웰당 1㎖의 10% FBS를 포함하는 Ham'sF12 배지(Thermo Fisher Scientific Inc.제)에서 배양된 2×105개의 CHO-K1 세포를 PBS(-)로 세정한 후에 1웰당 1㎖의 10% FBS를 포함하는 Ham'sF12 배지를 새롭게 첨가한 웰에 30㎕의 OptiMEM(Thermo Fisher Scientific Inc.제)에 용해한 상기 각 벡터 250ng과 Polyfect transfection reagent(QIAGEN Company제) 30㎕를 혼합한 것을 첨가했다. 상기 재조합 벡터를 도입한 CHO-K1 세포를 200㎍/㎖ 제오신(Thermo Fisher Scientific Inc.제) 및 200㎍/㎖ 제네티신(Roche Diagnostics K.K.제)을 첨가한 10% FBS를 포함하는 Ham'sF12 배지에서 배양한 후, 96웰 플레이트의 1웰당 0.5개가 되도록 상기 재조합 벡터를 도입한 CHO-K1 세포를 파종하고, 닭 항인간 CAPRIN-1 모노클로날 항체 #11의 가변 영역과 마우스 IgG1의 정상 영역을 갖는 마우스-닭 키메라 항인간 CAPRIN-1 모노클로날 항체 #12를 안정적으로 산생하는 세포주를 제작했다. 제작한 세포주를 150㎠ 플라스크를 사용하여 5×105개/㎖에서 혈청을 포함하지 않는 OptiCHO 배지(Life technologies제) 30㎖를 사용하여 5일간 배양하고, #12를 포함하는 배양 상청을 얻었다.
(5) 마우스-닭 키메라 항인간 CAPRIN-1 모노클로날 항체 #12가 인식하는 CAPRIN-1 에피토프의 동정
(4)에서 취득한 암 세포의 세포 표면에 반응하는 마우스-닭 키메라 항인간 CAPRIN-1 모노클로날 항체 #12를 사용하여 인식하는 CAPRIN-1 에피토프 영역의 동정을 행했다. CAPRIN-1 재조합 단백질 100㎍을 단백질 저해제를 포함하지 않는 용해 버퍼에 용해하고, 마우스-닭 키메라 항인간 CAPRIN-1 모노클로날 항체 #12와 반응시켰다. 그 용액에 트립신 또는 키모트립신 소화 효소를 첨가하고, 적정 온도에서 소화 반응을 행했다. 반응 후 프로틴G 세파로스 담체를 첨가하여 반응시키고, 원심 조작에 의해 담체를 침전시켰다. 상청을 제거한 후, 용해 버퍼와 PBS로 세정하여 0.1%의 포름산에 용해시키고, 그 상청을 회수했다. 회수한 상청 샘플을 역상 컬럼(HLB Extraction Cartridge(Smithers-Oasis Company))에 걸쳐서 항체를 제거한 샘플 용액을 얻었다. 얻어진 샘플을 역상 액체 크로마토그래피(크로마토그래피 나노시스템(KYA Technologies Corporation))을 사용하여 펩티드만이 포함된 용액을 회수하고, 탠덤형 질량 분석계 quadrupole-TOF mass spectrometer(Waters Corporation)에 도입하여 MS/MS 해석을 행하고, 샘플 내에 포함되는 펩티드를 검출했다. 그 결과, 마우스-닭 키메라 항인간 CAPRIN-1 모노클로날 항체 #12가 인식하는 CAPRIN-1의 부분 서열로서 서열번호 66의 아미노산 서열로 이루어지는 펩티드가 동정되었다. 닭 항CAPRIN-1 모노클로날 항체 #11도 마우스-닭 키메라 항인간 CAPRIN-1 모노클로날 항체 #12와 동일한 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 갖기 때문에 서열번호 66의 아미노산 서열로 이루어지는 펩티드를 CAPRIN-1의 부분 서열로서 인식한다.
(6) 인간-닭 키메라 항인간 CAPRIN-1 항체의 제작
상기 (3)에서 얻어진 서열번호 64로 나타내어지는 닭 항인간 CAPRIN-1 모노클로날 항체 #11의 중쇄 가변 영역의 유전자 증폭 단편의 양단을 제한 효소 처리한 후 정제하고, 서열번호 67을 포함하는 닭 항체 유래의 리더 서열과 서열번호 68을 포함하는 인간 IgG1의 H쇄 정상 영역을 이미 삽입 완료된 pcDNA4/myc-His(Life technologies제) 벡터에 상법을 따라서 삽입했다. 또한, 서열번호 65로 나타내어지는 닭 항인간 CAPRIN-1 모노클로날 항체 #11의 경쇄 가변 영역의 유전자 증폭 단편의 양단을 제한 효소 처리한 후 정제하고, 서열번호 68을 포함하는 닭 항체 유래의 리더 서열과 서열번호 69를 포함하는 인간 IgG1의 L쇄 정상 영역을 이미 삽입 완료된 pcDNA 3.1/myc-His(Life technologies제) 벡터에 상법에 따라서 삽입했다.
이어서, 닭 모노클로날 항체 #11의 중쇄 가변 영역이 삽입된 상기 재조합 벡터와, 닭 모노클로날 항체 #11의 경쇄 가변 영역이 삽입된 상기 재조합 벡터를 CHO-K1 세포(RIKEN Cell Bank로부터 입수)에 도입했다. 구체적으로는 12구멍 배양 플레이트의 1웰당 1㎖의 10% FBS를 포함하는 Ham'sF12 배지(Thermo Fisher Scientific Inc.제)에서 배양된 2×105개의 CHO-K1 세포를 PBS(-)로 세정한 후에 1웰당 1㎖의 10% FBS를 포함하는 Ham'sF12 배지를 새롭게 첨가한 웰에 30㎕의 OptiMEM(Thermo Fisher Scientific Inc.제)에 용해한 상기 각 벡터 250ng과 Polyfect transfection reagent(QIAGEN Company제) 30㎕를 혼합한 것을 첨가했다. 상기 재조합 벡터를 도입한 CHO-K1 세포를 200㎍/㎖ 제오신(Thermo Fisher Scientific Inc.제) 및 200㎍/㎖ 제네티신(Roche Diagnostics K.K.제)을 첨가한 10% FBS를 포함하는 Ham'sF12 배지에서 배양한 후, 96웰 플레이트의 1웰당 0.5개가 되도록 상기 재조합 벡터를 도입한 CHO-K1 세포를 파종하고, 닭 항인간 CAPRIN-1 모노클로날 항체 #11의 가변 영역과 인간 IgG1의 정상 영역을 갖는 인간-닭 키메라 항인간 CAPRIN-1 항체 #13을 안정적으로 산생하는 세포주를 제작했다. 제작한 세포주를 150㎠ 플라스크를 사용하여 5×105개/㎖로 혈청을 포함하지 않는 OptiCHO 배지(Life technologies제) 30㎖를 사용하여 5일간 배양하여 항체 #13을 포함하는 배양 상청을 얻었다.
(7) 마우스 항인간 CAPRIN-1 모노클로날 항체 #14의 제작
(1)과 마찬가지의 방법으로 (5)에서 동정한 서열번호 66의 아미노산 서열과 캐리어 단백질의 KLH(Keyhole limpet haemocyanin)의 융합 단백질을 면역원으로 하여 등량의 아쥬반트제 TiterMax Gold(등록상표)(CytRx Corporation)와 혼합하여 7일 간격으로 마우스의 피하에 1회당 20㎍ 투여했다. 합계 4회의 투여를 행한 후, 최종 면역으로부터 3일 후의 마우스로부터 비장 세포를 얻고, 상기 (1)과 마찬가지의 방법으로 마우스 마이엘로마 세포와 융합하여 하이브리도마를 제작했다. 그 후, 제작한 하이브리도마의 배양 상청 중에 포함되는 각 항체와 WO2010/016526의 실시예 3에서 조제한 CAPRIN-1 단백질 용액 1㎍/㎖ 또는 면역원으로서 사용한 서열번호 66의 아미노산 서열과 캐리어 단백질의 KLH의 융합 단백질의 반응성을 지표로 항체를 선발했다. WO2010/016526의 실시예 3에서 조제한 CAPRIN-1 단백질 용액 1㎍/㎖와 서열번호 66의 아미노산 서열과 캐리어 단백질의 KLH의 융합 단백질 30㎍/㎖를 각각 96구멍 플레이트 1웰당 100㎕ 첨가하고, 4℃에서 18시간 정치했다. 각 웰을 PBS-T로 세정 후, 블록에이스(DS Pharma Biomedical Co., Ltd.) 용액을 1웰당 400㎕ 첨가하고, 실온에서 3시간 정치했다. 용액을 제외하고 PBS-T로 웰을 세정 후, 상기 얻어진 하이브리도마의 각 배양 상청을 1웰당 100㎕ 첨가하고, 실온에서 2시간 정치했다. PBS-T로 각 웰을 세정한 후, PBS로 5000배로 희석한 HRP 표식 항마우스 IgG(H+L) 항체(Life technologies제)를 1웰당 100㎕ 첨가하고, 실온에서 1시간 정치했다. PBS-T로 웰을 세정한 후, TMB 기질 용액(Thermo Fisher Scientific Inc.제)을 1웰당 100㎕ 첨가하고, 5~30분간 정치하여 발색 반응을 행했다. 발색 후, 1규정 황산을 1웰당 100㎕ 첨가하여 반응을 정지시키고, 흡광도계를 사용하여 450㎚과 595㎚의 흡광도값을 측정했다. 그 결과, 흡광도값이 높았던 항체를 산생하는 하이브리도마를 선발했다.
선발한 하이브리도마를 96구멍 플레이트 1웰당 0.3개가 되도록 플레이트에 첨가하여 배양했다. 1주일 후, 웰 중에 단일 콜로니를 형성하고 있는 하이브리도마가 관찰되었다. 그들 웰의 세포를 더 배양하고, 클로닝된 하이브리도마가 산생하는 항체의 CAPRIN-1의 부분 서열의 서열번호 66의 아미노산 서열에 대한 결합 친화성을 지표로 상기와 마찬가지의 방법을 사용하여 서열번호 66의 아미노산에 대한 항체를 산생하는 하이브리도마를 얻었다.
얻어진 하이브리도마가 산생하는 모노클로날 항체 중 CAPRIN-1을 발현하는 유방암 세포의 세포 표면에 반응성을 나타내는 것을 선발했다. 구체적으로는 106개의 인간 유방암 세포주 MDA-MB-231을 1.5㎖용적의 마이크로 원심 튜브로 원심분리하고, 이에 상기 각 하이브리도마의 배양 상청 100㎕를 첨가하여 얼음 상에서 1시간 정치했다. PBS로 세정한 후, 0.1% FBS를 포함하는 PBS로 500배 희석한 FITC 표식 염소 항마우스 IgG 항체(Life technologies제)을 첨가하고, 얼음 상에서 1시간 정치했다. PBS로 세정 후, Becton, Dickinson and Company의 FACS 캘리버로 형광 강도를 측정했다. 한편, 상기와 마찬가지의 조작을 항체 대신에 아무것도 처리되어 있지 않는 생후 6주령의 Balb/c 마우스의 혈청을 하이브리도마 배양용 배지에서 500배 희석한 것을 사용한 샘플 및 2차 항체만을 반응시킨 샘플을 음성 대조군으로서 행했다. 그 결과, 음성 대조군에 비하여 형광 강도가 강한, 즉 유방암 세포의 세포 표면에 반응하는 마우스 항인간 CAPRIN-1 모노클로날 항체 #14를 얻었다. 상기 모노클로날 항체 #14은 서열번호 70의 중쇄 가변 영역과 서열번호 71의 경쇄 가변 영역을 포함한다.
얻어진 마우스 항인간 CAPRIN-1 모노클로날 항체 #14가 면역원인 CAPRIN-1의 부분 서열인 서열번호 66의 아미노산 서열에 특이적으로 반응하는 것을 조사했다. 0.1M의 탄산 나트륨 수용액에서 30㎍/㎖로 조제한 서열번호 66의 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드를 포함하는 용액 및 서열번호 66의 아미노산 서열을 포함하지 않는 CAPRIN-1의 부분 서열로 이루어지는 폴리펩티드의 용액을 각각 ELISA용 96웰 플레이트 이모빌라이저 아미노(Nunc Co., Ltd.)에 100㎍/㎖씩 첨가하고, 4℃에서 만 하루 반응시켜서 펩티드를 웰에 결합시켰다. 펩티드가 결합한 웰에 10mM 에탄올아민을 포함하는 0.1M 탄산 나트륨 수용액을 첨가하고, 실온에서 1시간 정치했다. 웰 내의 용액을 제거 후, PBS-T로 세정한 후, 블록에이스 용액을 1웰당 400㎕ 첨가하고, 실온에서 3시간 정치했다. 웰 내의 용액을 제거하고, PBS-T로 세정 후, 마우스 모노클로날 항체 #14를 포함하는 배양 상청을 1웰당 50㎕ 첨가하고, 실온에서 1시간 반응시켰다. 그 후 PBS-T로 세정하고, 블록에이스 용액으로 5000배로 희석한 HRP 표식 항마우스 IgG(H+L) 항체(Life technologies제)를 1웰당 50㎕ 첨가하고, 실온에서 1시간 정치했다. PBS-T로 웰을 충분히 세정한 후, TMB 기질 용액(Thermo Fisher Scientific Inc.제)을 1웰당 100㎕ 첨가하고, 5~30분간 정치하여 발색 반응을 행했다. 발색 후, 1규정 황산을 1웰당 100㎕ 첨가하여 반응을 정지시키고, 흡광도계를 사용하여 450㎚와 595㎚의 흡광도값을 측정한 결과, 서열번호 66의 아미노산 서열을 포함하지 않는 CAPRIN-1의 부분 서열에는 전혀 반응하지 않고, 서열번호 66의 아미노산 서열에만 마우스 모노클로날 항체 #14는 특이적으로 반응했다. 따라서, 서열번호 66의 폴리펩티드가 마우스 항인간 CAPRIN-1 항체 #14의 에피토프 영역을 포함하고 있는 것이 확인되었다.
실시예 3: 암 세포 상에서의 CAPRIN-1 단백질의 발현 해석
이어서, CAPRIN-1 유전자의 발현이 많이 확인된 인간 유방암 세포주 8종(ZR75-1, MCF7, T47D, SK-BR-3, MDA-MB-157, BT-20, MDA-MB-231V 및 MRK-nu-1)에 대해서 그 세포 표면 상에 CAPRIN-1 단백질이 발현되어 있는지의 여부를 조사했다. 각 인간 유방암 세포주에 대해서 각각 5×105세포를 1.5㎖의 마이크로 원심 튜브로 원심분리했다. 이에 실시예 2의 (4)에서 조제한 마우스-닭 항인간 CAPRIN-1 모노클로날 항체(#12) 2㎍(5㎕)을 첨가하고, 95㎕의 0.1% 소 태아 혈청을 포함하는 PBS를 더 첨가하여 혼합하고, 얼음 상에서 1시간 정치했다. PBS로 세정한 후, 2㎕의 Alexa488 표식 염소 항마우스 IgG 항체(Life technologies제) 및 98㎕의 0.1% 소 태아 혈청(FBS)을 포함하는 PBS를 첨가하여 혼합하고, 얼음 상에서 30시간 정치했다. PBS로 세정 후, Becton, Dickinson and Company의 FACS 캘리버로 형광 강도를 측정했다. 한편, 상기와 마찬가지의 조작을 마우스-닭 항인간 CAPRIN-1 모노클로날 항체(#12) 대신에 마우스 IgG1을 사용하여 행하고, 대조군으로 했다. 그 결과, 마우스-닭 항인간 CAPRIN-1 모노클로날 항체(#12)가 첨가된 세포는 대조군에 비하여 어느 암 세포도 형광 강도가 35% 이상 강했다. 이 점으로부터 상기 인간 암 세포주의 세포막 표면 상에 CAPRIN-1 단백질이 발현되고 있는 것이 확인되었다. 한편, 상기 형광 강도의 증강률은 각 세포에 있어서의 평균 형광 강도(MFI값)의 증가율로 나타내어지고, 이하의 계산식에 의해 산출했다.
평균 형광 강도의 증가율(형광 강도의 증강률)(%)=((항CAPRIN-1 항체를 반응시킨 세포의 MFI값)-(대조군 MFI값))/(대조군 MFI값)×100.
또한, 마찬가지의 상기 방법을 사용하여 신장암 세포주 3종(Caki-1, Caki-2 및 A498), 방광암 세포주(T24), 난소암 세포주(SKOV3), 폐암 세포주(QG56), 전립선암 세포주(PC3), 자궁경부암 세포주(Hela), 섬유육종 세포주(HT1080), 뇌종양 세포주 2종(T98G 및 U87MG), 위암 세포주(MNK28), 대장암 세포주(Lovo) 및 췌장암 세포주(Capan-2, MIAPaCa-2, Panc-1 및 BxPC-3)에 대해서 형광 강도를 측정한 결과, 대조군에 비하여 어느 암 세포도 형광 강도가 35% 이상 강했다.
또한, 실시예 2의 (6)에서 취득된 인간-닭 키메라 항인간 CAPRIN-1 모노클로날 항체(#13) 또는 실시예 2의 (7)에서 취득된 마우스 항인간 CAPRIN-1 모노클로날 항체(#14)를 사용했을 경우에도 상기 결과와 마찬가지로 암 세포 표면에서의 CAPRIN-1의 발현이 확인되었다.
실시예 4: CAPRIN-1 검출에 최적인 항체의 선발
(1) 인간 유방암 조직을 사용한 항체의 선발
파라핀 포매된 인간 유방암 조직 어레이(Medical & Biological Laboratories Co., Ltd.제)의 유방암 조직 31 검체를 사용하여 면역 조직 화학 염색을 행했다. 인간 유방암 조직 어레이를 60℃에서 3시간 처리 후, 크실렌을 채운 염색병에 넣어 5분마다 크실렌을 교체하는 조작을 3회 행했다. 이어서, 에탄올 및 PBS-T를 사용하여 크실렌과 마찬가지의 조작을 행했다. 0.05% Tween20을 포함하는 10mM 시트르산 완충액(pH 6.0)을 채운 염색병에 인간 유방암 조직 어레이를 넣고, 125℃에서 5분간 처리 후, 실온에서 40분 이상 정치했다. 절편 주위의 여분의 수분을 킴와이프로 닦아내고, DAKOPEN(DAKO Company제)으로 둘러싸고, Peroxidase Block(DAKO Company제)을 적량 적하했다. 실온에서 5분간 정치 후, PBS-T를 채운 염색병에 넣어서 5분마다 PBS-T를 교체하는 조작을 3회 행했다. 블록킹액으로서 10% FBS를 포함하는 PBS-T 용액을 넣고, 모이스트 챔버 내에서 실온에서 1시간 정치했다. 이어서, 실시예 2에서 제작한 마우스 항인간 CAPRIN-1 모노클로날 항체 #8 또는 #14를 각각 5% FBS를 포함하는 PBS-T 용액으로 10㎍/㎖로 조제한 용액을 넣고, 모이스트 챔버 내에서 4℃에서 밤새 정치했다. PBS-T로 10분간 3회 세정을 행한 후, Peroxidase Labelled Polymer Conjugated(DAKO Company제) 적량 적하하고, 모이스트 챔버 내에서 실온에서 30분간 정치했다. PBS-T로 10분간 3회 세정을 행한 후, DAB 발색액(DAKO Company제)을 넣고, 실온에서 10분 정도 정치한 후, 발색액을 버리고, PBS-T로 10분간 3회 세정을 행했다. 증류수로 린싱한 후, 70%, 80%, 90%, 95%, 100%의 각 에탄올 용액에 순서대로 1분간씩 넣고, 최후에 크실렌 중에서 밤새 정치했다. 슬라이드 유리를 인출하여 Glycergel Mounting Medium(DAKO Company제)으로 봉입 후, 관찰을 행했다. 조직에 있어서의 CAPRIN-1의 발현량은 이하의 기준에 따라서 판정했다. 양성 소견을 나타내는 슬라이드를 선택하고, CAPRIN-1 염색상을 확인했다. 우선, 광학 현미경의 4배 대물 렌즈를 사용하여 조직 내의 암 세포의 CAPRIN-1 염색상, 양성 염색의 강도, 양성 세포율을 관찰했다. 이어서, 대물 렌즈를 10배 또는 20배로 스위칭하여 양성 소견이 세포막이나 세포질에 국재하고 있는지를 검색했다. 이상의 방법에 의해 검출 결과를 판정하고, 스코어 0~3으로 분류했다. 스코어의 상세는 이하와 같다.
· 스코어 0(CAPRIN-1 과잉 발현 없음): 세포막에 양성 염색 없음 또는 세포막의 양성 염색이 있는 암 세포의 비율이 10% 미만이다.
· 스코어 1(CAPRIN-1 과잉 발현 없음): 거의 식별할 수 없는 정도의 희미한 세포막의 염색이 있는 암 세포의 비율이 10% 이상이며, 암 세포는 세포막만이 부분적으로 염색되어 있다.
· 스코어 2(CAPRIN-1 과잉 발현 있음): 약~중 정도의 완전한 세포막의 양성 염색이 있는 암 세포의 비율이 10% 이상 또는 강한 완전한 세포막의 양성 염색이 있는 암 세포의 비율이 10% 이상 30% 이하이다.
· 스코어 3(CAPRIN-1 과잉 발현 있음): 강한 완전한 세포막의 양성 염색이 있는 암 세포가 30% 이상이다.
측정 결과가 스코어 2 또는 3일 경우에 CAPRIN-1 양성의 암 조직으로 판정했다.
그 결과, 어느 항체를 사용해도 유방암 조직 중에 CAPRIN-1의 발현을 확인할 수 있었다. 항체 #8을 사용한 면역 조직 화학 염색의 결과에서는 스코어 2가 14검체, 스코어 3이 1검체이며, CAPRIN-1 양성의 검체수는 15검체이었던 점에 대해서 항체 #14를 사용한 면역 조직 화학 염색의 결과에서는 스코어 2가 18검체, 스코어 3이 8검체이며, CAPRIN-1 양성의 검체수는 26검체이었다. 따라서, 인간 암 조직을 사용한 CAPRIN-1의 검출에는 항체 #14를 선택했다
(2) 항체 #14를 사용한 면역 조직 화학 염색법에 의한 인간 각종 정상 조직 상의 CAPRIN-1의 검출
인간 정상 조직 어레이(BIOMAX, Inc.제)(뇌, 갑상선, 폐, 비장, 신장, 식도, 위, 대장, 췌장, 근육, 피부, 타액선, 난소, 자궁, 유선, 태반, 골수, 정소 및 전립선의 조직을 포함)를 사용하여 면역 조직 화학 염색을 행했다. 절편 주위의 여분의 수분을 킴와이프로 닦아내고, DAKOPEN(DAKO Company제)으로 둘러싸고, Peroxidase Block(DAKO Company제)을 적량 적하했다. 실온에서 5분간 정치 후, PBS-T를 채운 염색병에 넣어서 5분마다 PBS-T를 교체하는 조작을 3회 행했다. 블록킹액으로서 10% FBS를 포함하는 PBS-T 용액을 넣고, 모이스트 챔버 내에서 실온에서 1시간 정치했다. 이어서, 실시예 2에서 제작한 마우스 항인간 CAPRIN-1 모노클로날 항체 #14를 5% FBS를 포함하는 PBS-T 용액으로 10㎍/㎖로 조제한 용액을 넣고, 모이스트 챔버 내에 4℃에서 밤새 정치했다. PBS-T로 10분간 3회 세정을 행한 후, Peroxidase Labelled Polymer Conjugated(DAKO Company제)를 적량 적하하고, 모이스트 챔버 내에서 실온에서 30분간 정치했다. PBS-T로 10분간 3회 세정을 행한 후, DAB 발색액(DAKO Company제)을 넣고, 실온에서 10분 정도 정치한 후, 발색액을 버리고, PBS-T로 10분간 3회 세정을 행했다. 증류수로 린싱한 후, 70%, 80%, 90%, 95%, 100%의 각 에탄올 용액에 순서대로 1분간씩 넣고, 최후에 크실렌 중에서 밤새 정치했다. 슬라이드 유리를 인출하여 Glycergel Mounting Medium(DAKO Company제)으로 봉입 후, 관찰을 행했다.
조직에 있어서의 CAPRIN-1의 발현량은 이하의 기준에 따라서 판정했다. 양성 소견을 나타내는 슬라이드를 선택하여 CAPRIN-1 염색상을 확인했다. 우선, 광학 현미경의 4배 대물 렌즈를 사용하여 조직 내의 암 세포의 CAPRIN-1 염색상, 양성 염색의 강도, 양성 세포율을 관찰했다. 이어서, 대물 렌즈를 10배 또는 20배로 스위칭하여 양성 소견이 세포막이나 세포질에 국재하고 있는지를 검색했다. 이상의 방법에 의해 검출 결과를 판정하고, 스코어 0~3으로 분류했다. 스코어의 상세는 이하와 같다.
· 스코어 0(CAPRIN-1 과잉 발현 없음): 세포막에 양성 염색 없음 또는 세포막의 양성 염색이 있는 암 세포의 비율이 10% 미만이다.
· 스코어 1(CAPRIN-1 과잉 발현 없음): 거의 식별할 수 없는 정도의 희미한 세포막의 염색이 있는 암 세포의 비율이 10% 이상이며, 암 세포는 세포막만이 부분적으로 염색되어 있다.
· 스코어 2(CAPRIN-1 과잉 발현 있음): 약~중 정도의 완전한 세포막의 양성 염색이 있는 암 세포의 비율이 10% 이상 또는 강한 완전한 세포막의 양성 염색이 있는 암 세포의 비율이 10% 이상 30% 이하이다.
· 스코어 3(CAPRIN-1 과잉 발현 있음): 강한 완전한 세포막의 양성 염색이 있는 암 세포의 비율이 30% 이상이다. 스코어 2 및 3을 CAPRIN-1 양성의 암 조직으로 판정한다.
자궁 및 전립선에서 스코어 1이었지만, 그 이외의 조직은 모두 스코어 0이었다. 따라서, 인간 정상 조직에 CAPRIN-1의 발현은 확인되지 않았다.
(3) 마우스 항인간 CAPRIN-1 항체 #14를 사용한 면역 조직 화학 염색법에 의한 인간 각종 암 조직 상의 CAPRIN-1 단백질의 검출
파라핀 포매된 인간 암 조직 어레이(BIOMAX, Inc.제)의 각종 암 조직을 사용하여 면역 조직 화학 염색을 행했다. 인간 암 조직 어레이를 60℃에서 3시간 처리 후, 크실렌을 채운 염색병에 넣어서 5분마다 크실렌을 교체하는 조작을 3회 행했다. 이어서, 에탄올 및 PBS-T로 크실렌과 마찬가지의 조작을 행했다. 0.05% Tween20을 포함하는 10mM 시트르산 완충액(pH 6.0)을 채운 염색병에 인간 암 조직 어레이를 넣고, 125℃에서 5분간 처리 후, 실온에서 40분 이상 정치했다. 절편 주위의 여분의 수분을 킴와이프로 닦아내고, DAKOPEN(DAKO Company제)으로 둘러싸고, Peroxidase Block(DAKO Company제)을 적량 적하했다. 실온에서 5분간 정치 후, PBS-T를 채운 염색병에 넣어서 5분마다 PBS-T를 교체하는 조작을 3회 행했다. 블록킹액으로서 10% FBS를 포함하는 PBS-T 용액을 넣고, 모이스트 챔버 내에서 실온에서 1시간 정치했다. 이어서, 실시예 2에서 제작한 마우스 항인간 CAPRIN-1 모노클로날 항체 #14를 5% FBS를 포함하는 PBS-T 용액으로 10㎍/㎖로 조제한 용액을 넣고, 모이스트 챔버 내에 4℃에서 밤새 정치했다. PBS-T로 10분간 3회 세정을 행한 후, Peroxidase Labelled Polymer Conjugated(DAKO Company제)를 적량 적하하고, 모이스트 챔버 내에서 실온에서 30분간 정치했다. PBS-T로 10분간 3회 세정을 행한 후, DAB 발색액(DAKO Company제)을 넣고, 실온에서 10분정도 정치한 후, 발색액을 버리고, PBS-T로 10분간 3회 세정을 행했다. 증류수로 린싱하고, 70%, 80%, 90%, 95%, 100%의 각 에탄올 용액에 순서대로 1분간씩 넣고, 최후에 크실렌 중에서 밤새 정치했다. 슬라이드 유리를 인출하여 Glycergel Mounting Medium(DAKO Company제)으로 봉입 후, 관찰을 행했다.
조직에 있어서의 CAPRIN-1의 발현량은 이하의 기준에 따라서 판정했다. 양성 소견을 나타내는 슬라이드를 선택하여 CAPRIN-1 단백질 염색상을 확인했다. 우선, 광학 현미경의 4배 대물 렌즈를 사용하여 조직 내의 암 세포의 CAPRIN-1 염색상, 양성 염색의 강도, 양성 세포율을 관찰했다. 이어서, 대물 렌즈를 10배 또는 20배로 스위칭하여 양성 소견이 세포막이나 세포질에 국재하고 있는지를 검색했다. 이상의 방법에 의해 검출 결과를 판정하여 스코어 0~3으로 분류했다. 스코어의 상세는 이하와 같다.
· 스코어 0(CAPRIN-1 과잉 발현 없음): 세포막에 양성 염색 없음 또는 세포막의 양성 염색이 있는 암 세포의 비율이 10% 미만이다.
· 스코어 1(CAPRIN-1 과잉 발현 없음): 거의 식별할 수 없는 정도의 희미한 세포막의 염색이 있는 암 세포의 비율이 10% 이상이며, 암 세포는 세포막만이 부분적으로 염색되어 있다.
· 스코어 2(CAPRIN-1 과잉 발현 있음): 약~중 정도의 완전한 세포막의 양성 염색이 있는 암 세포의 비율이 10% 이상 또는 강한 완전한 세포막의 양성 염색이 있는 암 세포의 비율이 10% 이상 30% 이하이다.
· 스코어 3(CAPRIN-1 과잉 발현 있음): 강한 완전한 세포막의 양성 염색이 있는 암 세포의 비율이 30% 이상이다.
측정 결과가 스코어 2 및 3이었을 경우에 CAPRIN-1 양성의 암 조직으로 판정했다.
그 결과, CAPRIN-1은 뇌종양 조직 22검체 중 16검체(64%)로, 폐암 조직 32검체 중 19검체(59%)로, 자궁암 조직 21검체 중 18검체(86%)로, 식도암 조직 16검체 중 10검체(63%)로, 신장암 조직 30검체 중 27검체(90%)로, 간암 조직 17검체 중 14검체(82%)로, 갑상선암 조직 15검체 중 11검체(73%)로, 위암 조직 14검체 중 10검체(71%)로, 췌장암 조직 19검체 중 17검체(89%)로, 전립선암 조직 13검체 중 13검체(100%)로, 방광암 조직 14검체 중 12검체(86%)로, 대장암 조직 14검체 중 11검체(79%)로, 피부암 조직 30검체 중 24검체(80%) 및 유방암 조직 21검체 중 16검체(76%)로 각각 양성인 것이 확인되었다.
(4) 마우스 항인간 CAPRIN-1 항체 #14를 사용한 면역 조직 화학 염색법에 의한 개 유방암 조직 상의 CAPRIN-1 단백질의 검출
병리 진단으로 악성 유방암으로 진단된 개의 동결된 유방암 조직 100검체를 사용하여 면역 조직 화학 염색을 행했다. 동결 개 유방암 조직을 클라이오스탯(LEICA Camera AG제)을 사용하여 10~20㎛로 박절(薄切)하여 슬라이드 유리에 올리고, 슬라이드 유리채로 헤어 드라이어로 30분간 풍건시켜 박절 조직이 올려진 슬라이드 유리를 제작했다. 이어서, PBS-T(0.05% Tween20을 포함하는 생리 식염수)을 채운 염색병에 넣어서 5분마다 PBS-T를 교체하는 조작을 3회 행했다. 절편 주위의 여분의 수분을 킴와이프로 닦아내고, DAKOPEN(DAKO Company제)으로 둘러싼 후, 블록킹액으로서 10% 소 태아 혈청을 포함하는 PBS-T 용액을 넣고, 모이스트 챔버 내에서 실온에서 1시간 정치했다. 이어서, 실시예 2에서 제작한 마우스 항인간 CAPRIN-1 모노클로날 항체 #8 또는 #14를 각각 블록킹액으로 10㎍/㎖로 조제한 용액을 넣고, 모이스트 챔버 내에서 4℃ 하에서 밤새 정치했다. PBS-T로 10분간 3회 세정을 행한 후, 블록킹액에서 250배로 희석한 MOM 바이오틴 표식 항IgG 항체(VECTASTAIN Company제)를 넣고, 모이스트 챔버 내에 실온에서 1시간 정치했다. PBS-T로 10분간 3회 세정을 행한 후, 아비딘 바이오틴 ABC 시약(VECTASTAIN Company제)을 넣고, 모이스트 챔버 내에서 실온에서 5분간 정치했다. PBS-T로 10분간 3회 세정을 행한 후, DAB 발색액(DAB 10㎎+30% H2O2 10㎕/0.05M Tris-HCl(pH 7.6) 50㎖)을 넣고, 모이스트 챔버 내에 실온에서 30분간 정치했다. 증류수로 린싱하고, 헤마톡실린 시약(DAKO Company제)을 넣고, 실온에서 1분간 정치 후, 증류수로 린싱했다. 70%, 80%, 90%, 95%, 100%의 각 에탄올 용액에 순서대로 1분간씩 넣은 후, 크실렌 중에서 밤새 정치했다. 슬라이드 유리를 인출하여 Glycergel Mounting Medium(DAKO Company제)으로 봉입 후, 관찰을 행했다. 조직에 있어서의 CAPRIN-1의 발현량은 이하의 기준에 따라서 판정했다. 양성 소견을 나타내는 슬라이드를 선택하여 CAPRIN-1 염색상을 확인했다. 우선, 광학 현미경의 4배 대물 렌즈를 사용하여 조직 내의 암 세포의 CAPRIN-1 염색상, 양성 염색의 강도, 양성 세포율을 관찰했다. 이어서, 대물 렌즈를 10배 또는 20배로 스위칭하여 양성 소견이 세포막이나 세포질에 국재하고 있는지를 검색했다. 이상의 방법에 의해 검출 결과를 판정하고, 스코어 0~3으로 분류했다. 스코어의 상세는 이하와 같다.
· 스코어 0(CAPRIN-1 과잉 발현 없음): 세포막에 양성 염색 없음 또는 세포막의 양성 염색이 있는 암 세포가 10% 미만이다.
· 스코어 1(CAPRIN-1 과잉 발현 없음): 거의 식별할 수 없는 정도의 희미한 세포막의 염색이 있는 암 세포가 10% 이상이며, 암 세포는 세포막만이 부분적으로 염색되어 있다.
· 스코어 2(CAPRIN-1 과잉 발현 있음): 약~중 정도의 완전한 세포막의 양성 염색이 있는 암 세포가 10% 이상 또는 강한 완전한 세포막의 양성 염색이 있는 암 세포가 10% 이상 30% 이하이다.
· 스코어 3(CAPRIN-1 과잉 발현 있음): 강한 완전한 세포막의 양성 염색이 있는 암 세포가 30% 이상이다.
측정 결과가 스코어 2 및 3이었을 경우에 양성으로 하고, CAPRIN-1 표적약 투여에 의한 유효한 치료 효과가 얻어지는 담암견 조직으로 판정했다.
그 결과 어느 항체를 사용해도 개 유방암 조직 중에 CAPRIN-1의 발현을 확인할 수 있었다. 구체적으로는 항체 #8을 사용한 면역 조직 화학 염색의 결과에서는 스코어 2가 69검체, 스코어 3이 11검체이며, CAPRIN-1 양성의 검체수는 80검체(80%)이었던 것에 대해서 항체 #14를 사용한 면역 조직 화학 염색의 결과에서는 스코어 2가 46검체, 스코어 3이 36검체이며, CAPRIN-1 양성의 검체수는 82검체(82%)이었다.
(5) 마우스 항인간 CAPRIN-1 항체 #14를 사용한 면역 조직 화학 염색법에 의한 고양이 유방암 조직 상의 CAPRIN-1의 검출
병리 진단으로 악성 유방암으로 진단된 고양이의 동결된 유방암 조직 30검체를 사용하여 면역 조직 화학 염색을 행했다. 동결 고양이 암 조직을 클라이오스탯(LEICA Camera AG제)을 사용하여 10~20㎛로 박절하여 슬라이드 유리에 올리고, 슬라이드 유리채로 헤어 드라이어로 30분간 풍건시켜 박절 조직이 올려진 슬라이드 유리 제작했다. 이어서, PBS-T(0.05% Tween20을 포함하는 생리 식염수)를 채운 염색병에 넣어서 5분마다 PBS-T를 교체하는 조작을 3회 행했다. 절편 주위의 여분의 수분을 킴와이프로 닦아내고, DAKOPEN(DAKO Company제)으로 둘러싼 후, 블록킹액으로서 10% 소 태아 혈청을 포함하는 PBS-T 용액을 넣고, 모이스트 챔버 내에서 실온에서 1시간 정치했다. 이어서, 실시예 2에서 제작한 마우스 항인간 CAPRIN-1 모노클로날 항체 #8 또는 #14를 각각 블록킹액으로 10㎍/㎖로 조제한 용액을 넣고, 모이스트 챔버 내에서 4℃ 하에서 밤새 정치했다. PBS-T로 10분간 3회 세정을 행한 후, 블록킹액으로 250배로 희석한 MOM 바이오틴 표식 항IgG 항체(VECTASTAIN Company제)를 넣고, 모이스트 챔버 내에 실온에서 1시간 정치했다. PBS-T로 10분간 3회 세정을 행한 후, 아비딘 바이오틴 ABC 시약(VECTASTAIN Company제)을 넣고, 모이스트 챔버 내에서 실온에서 5분간 정치했다. PBS-T로 10분간 3회 세정을 행한 후, DAB 발색액(DAB 10㎎+30% H2O2 10㎕/0.05M Tris-HCl(pH 7.6)50㎖)을 넣고, 모이스트 챔버 내에 실온에서 30분간 정치했다. 증류수로 린싱하고, 헤마톡실린 시약(DAKO Company제)을 넣어서 실온에서 1분간 정치 후, 증류수로 린싱했다. 70%, 80%, 90%, 95%, 100%의 각 에탄올 용액에 순서대로 1분간씩 넣은 후, 크실렌 중에서 밤새 정치했다. 슬라이드 유리를 인출하여 Glycergel Mounting Medium(DAKO Company제)으로 봉입 후, 관찰을 행했다. 조직에 있어서의 CAPRIN-1의 발현량은 이하의 기준에 따라서 판정했다. 양성 소견을 나타내는 슬라이드를 선택하여 CAPRIN-1 염색상을 확인했다. 우선, 광학 현미경의 4배 대물 렌즈를 사용하여 조직 내의 암 세포의 CAPRIN-1 염색상, 양성 염색의 강도, 양성 세포율을 관찰했다. 이어서, 대물 렌즈를 10배 또는 20배로 스위칭하여 양성 소견이 세포막이나 세포질에 국재하고 있는지를 검색했다. 이상의 방법에 의해 검출 결과를 판정하고, 스코어 0~3으로 분류했다. 스코어의 상세는 이하와 같다.
· 스코어 0(CAPRIN-1 과잉 발현 없음): 세포막에 양성 염색 없음 또는 세포막의 양성 염색이 있는 암 세포의 비율이 10% 미만이다.
· 스코어 1(CAPRIN-1 과잉 발현 없음): 거의 식별할 수 없는 정도의 희미한 세포막의 염색이 있는 암 세포의 비율이 10% 이상이며, 암 세포는 세포막만이 부분적으로 염색되어 있다.
· 스코어 2(CAPRIN-1 과잉 발현 있음): 약~중 정도의 완전한 세포막의 양성 염색이 있는 암 세포의 비율이 10% 이상 또는 강한 완전한 세포막의 양성 염색이 있는 암 세포의 비율이 10% 이상 30% 이하이다.
· 스코어 3(CAPRIN-1 과잉 발현 있음): 강한 완전한 세포막의 양성 염색이 있는 암 세포의 비율이 30% 이상이다.
측정 결과가 스코어 2 및 3이었을 경우에 양성으로 하고, CAPRIN-1 표적약 투여에 의한 유효한 치료 효과가 얻어지는 담암 고양이 조직으로 판정했다.
그 결과, 어느 항체를 사용해도 고양이 유방암 조직 중에 CAPRIN-1의 발현을 확인할 수 있었다. 구체적으로는 항체 #8을 사용한 면역 조직 화학 염색의 결과에서는 스코어 2가 20검체, 스코어 3이 4검체이며, CAPRIN-1 양성의 검체수는 24검체(80%)인 것에 대하여 항체 #14를 사용한 면역 조직 화학 염색의 결과에서는 스코어 2가 18검체, 스코어 3이 9검체이며, CAPRIN-1 양성의 검체수는 27검체(90%)이었다.
실시예 5: 암의 시료를 사용한 CAPRIN-1의 발현 평가와 CAPRIN-1에 대한 항체에 의한 항종양 효과의 상관성-Ⅰ
(1) 면역 조직 화학 염색법에 의한 마우스 암 세포를 이식한 담암 마우스 유래 암 조직을 사용한 CAPRIN-1의 검출
26마리의 Balb/c 마우스(Japan SLC, Inc.제)의 배부 피하에 마우스 유래의 암 세포 2종(B16F10 및 EMT-6)을 각각 5마리씩 이식하고, 종양이 직경 7㎜ 정도의 크기가 될 때까지 성장시켰다. 암 세포 2종을 이식한 마우스의 2개의 군으로부터 각 3마리씩 선발하여 종양 덩어리를 잘라내고, PBS 중에서 종양 덩어리를 절개하고, 4% 파라포름알데히드(PFA)를 포함하는 0.1M 인산 완충액(pH 7.4)으로 밤새 환류 고정했다. 환류액을 버리고, PBS로 각 장기의 조직 표면을 헹구고, 10% 수크로오스를 포함하는 PBS 용액을 50㎖용적의 원심 튜브에 넣고, 그 중에 암 조직을 넣어서 4℃에서 2시간 로터를 사용하여 진탕했다. 20% 수크로오스를 포함하는 PBS 용액으로 교체하고, 4℃에서 암 조직이 잠길 때까지 정치 후, 30% 수크로오스를 포함하는 PBS 용액으로 교체하고, 4℃에서 암 조직이 잠길 때까지 정치했다. 암 조직을 인출하여 필요한 부분을 수술용 메스로 잘라냈다. 이어서, OCT 콤파운드(Tissue Tek Company제)를 걸어서 조직 표면에 융합시킨 후, 클라이오몰드에 조직을 배치했다. 드라이아이스 상에 클라이오몰드를 두어 급속 동결시킨 후, 클라이오스탯(LEICA Camera AG제)을 사용하여 10~20㎛로 박절하여 슬라이드 유리에 올리고, 슬라이드 유리채로 헤어 드라이어로 30분간 풍건시켜 박절 조직이 올려진 슬라이드 유리를 제작했다. 다음 날, PBS(-)로 3회 세정했다. 블록킹액으로서 5% 염소 혈청을 포함하는 PBS(-)를 넣고, 모이스트 챔버 내에서 실온에서 1시간 정치했다. 이어서, 실시예 2에서 제작한 마우스 항인간 CAPRIN-1 모노클로날 항체 #8 또는 모노클로날 항체 #14를 포함하는 PBS(-) 용액으로 10㎍/㎖로 조제한 용액을 넣고, 모이스트 챔버 내에 4℃에서 밤새 정치했다. PBS(-)로 5분간 5회 세정을 행한 후, Peroxidase Labelled Polymer Conjugated(DAKO Company제)를 적량 적하하고, 모이스트 챔버 내에서 실온에서 30분간 정치했다. PBS-T로 5분간 6회 세정을 행한 후, DAB 발색액(DAKO Company제)을 넣고, 실온에서 10분 정도 정치한 후, 발색액을 버리고, PBS(-)로 5분간 3회 세정을 행한 후, Glycergel Mounting Medium(DAKO Company제)으로 봉입 후, 관찰을 행했다. 실시예 4에 기재된 바와 같이 스코어 분류한 결과, 항체 #8을 사용한 면역 조직 화학 염색의 결과, 멜라노마 유래의 세포 B16F10 및 유방암 유래의 세포 EMT-6 모두 스코어 1이며, CAPRIN-1 발현은 검출되지 않았다. 한편, 항체 #14를 사용한 결과에서는 암 세포 B16F10에 대해서는 스코어 1이었지만, 암 세포 EMT-6에 대해서는 스코어 3이었다.
(2) CAPRIN-1에 대한 항체에 의한 항종양 효과
인간-닭 키메라 항인간 CAPRIN-1 모노클로날 항체 #13을 사용하여 상기 (1)에서 제작한 담암 마우스를 사용한 항종양 효과를 검토했다. B16F10 및 EMT-6의 각 암 세포를 이식한 담암 마우스 중 각 5마리의 담암 마우스에 대하여 항체 #13을 1마리당 200㎍(200㎕)씩 복강내 투여했다. 그 후, 2일간 합계 3회, 동량의 항체를 각 담암 마우스의 복강에 투여하고, 매일 종양의 크기를 계측하여 #13 항체의 항종양 효과를 관찰했다(검토군). 한편, 나머지 5마리의 담암 마우스에 대하여 항체 대신에 PBS(-)를 투여하고, 이것을 대조군으로 했다.
항종양 효과의 관찰의 결과, 항체 #13을 투여한 검토군에 있어서 암 세포B16F10을 이식한 마우스에서는 항체 투여 개시시의 종양 체적을 100%로 했을 경우에 4일째, 6일째, 8일째, 11일째에는 각각 약 150%, 200%, 370%, 630%까지 종양 체적이 증대했다. 한편, 검토군 중 암 세포 EMT-6을 이식한 마우스에서는 항체 투여 개시시의 종양 체적을 100%로 했을 경우에 종양 체적이 4일째에는 51%까지 퇴축되고, 6일째에는 31% 정도, 8일째에는 9%까지 퇴축되고, 10~14일째까지는 종양은 거의 완전히 퇴축되었다. 또한, PBS(-)를 투여한 대조군에서는 어느 종양 이식군에서도 4일째, 6일째, 8일째, 11일째에는 각각 약 230%, 290%, 470%, 800%까지 종양이 증대했다.
이상의 결과로부터 항체 #8을 사용했을 경우, CAPRIN-1의 발현 측정 결과와 항체의 항종양 활성에 의한 암 치료 효과는 상관이 보이지 않지만, 항체 #14를 사용했을 경우에는 CAPRIN-1의 발현 측정 결과와 상기 항체의 항종양 활성에 의한 암 치료 효과에는 상관성이 보였다. 즉, EMT-6을 이식한 암 조직에서의 항체 #14에 의한 CAPRIN-1의 발현량 측정 결과는 스코어 3이며, CAPRIN-1의 과잉 발현이 확인되고, 또한 상기 항체의 투여에 의한 항종양 활성에 의거하는 약리 효과도 확인되었다. 한편, B16F10을 이식한 암 조직에서의 항체 #14에 의한 CAPRIN-1의 발현량 측정 결과는 스코어 1이며, CAPRIN-1의 발현이 보이지 않고, 또한 항종양 활성을 갖는 항체 #13을 암 세포 B16F10을 이식한 담암 마우스에 투여해도 약리 효과는 얻어지지 않았다.
이상의 결과로부터 본 발명의 CAPRIN-1에 특이적으로 결합하는 항체인 #14를 사용하여 암 조직 중의 CAPRIN-1을 검출하고, 그 발현량이 높다고 판정된 암 또는 개체에 본 발명에 관한 항CAPRIN-1 항체를 투여함으로써 그 항체의 항종양 효과에 의거하는 높은 치료 효과가 얻어지는 것이 나타내어졌다.
실시예 6: 암의 시료를 사용한 CAPRIN-1의 발현 평가와 CAPRIN-1에 대한 항체에 의한 항종양 효과의 상관성-Ⅱ
(1) 면역 조직 화학 염색법에 의한 마우스 암 세포를 이식한 담암 마우스 유래의 암 조직을 사용한 CAPRIN-1의 검출
26마리의 Balb/c 마우스(Japan SLC, Inc.제)의 배부 피하에 마우스 유래의 암 세포 2종(B16 및 CT26)을 각각 5마리씩 이식하고, 종양이 직경 7㎜ 정도의 크기가 될 때까지 성장시켰다. 암 세포 2종을 이식한 마우스의 2개의 군으로부터 각 3마리씩 선발하여 종양 덩어리를 잘라내고, PBS 중에서 종양 덩어리를 절개하고, 4% 파라포름알데히드(PFA)를 포함하는 0.1M 인산 완충액(pH 7.4)으로 밤새 환류 고정했다. 환류액을 버리고, PBS로 각 장기의 조직 표면을 헹구고, 10% 수크로오스를 포함하는 PBS 용액을 50㎖용적의 원심 튜브에 넣고, 그 중에 암 조직을 넣어서 4℃에서 2시간 로터를 사용하여 진탕했다. 20% 수크로오스를 포함하는 PBS 용액으로 교체하고, 4℃에서 암 조직이 잠길 때까지 정치 후, 30% 수크로오스를 포함하는 PBS 용액으로 교체하고, 4℃에서 암 조직이 잠길 때까지 정치했다. 암 조직을 인출하여 필요한 부분을 수술용 메스로 잘라냈다. 이어서, OCT 콤파운드(Tissue Tek Company제)를 걸어서 조직 표면에 융합시킨 후, 클라이오몰드에 조직을 배치했다. 드라이아이스 상에 클라이오몰드를 두어서 급속 동결시킨 후, 클라이오스탯(LEICA Camera AG제)을 사용하여 10~20㎛로 박절하여 슬라이드 유리에 올리고, 슬라이드 유리채로 헤어 드라이어로 30분간 풍건시켜 박절 조직이 올려진 슬라이드 유리를 제작했다. 다음 날, PBS(-)로 3회 세정했다. 블록킹액으로서 5% 염소 혈청을 포함하는 PBS(-)를 넣고, 모이스트 챔버 내에서 실온에서 1시간 정치했다. 이어서, 실시예 2에서 제작한 마우스 항인간 CAPRIN-1 모노클로날 항체 #8 또는 모노클로날 항체 #14를 포함하는 PBS(-) 용액에서 10㎍/㎖로 조제한 용액을 넣고, 모이스트 챔버 내에 4℃에서 밤새 정치했다. PBS(-)에서 5분간 5회 세정을 행한 후, Peroxidase Labelled Polymer Conjugated(DAKO Company제)를 적량 적하하고, 모이스트 챔버 내에서 실온에서 30분간 정치했다. PBS-T로 5분간 6회 세정을 행한 후, DAB 발색액(DAKO Company제)을 넣고, 실온에서 10분 정도 정치한 후, 발색액을 버리고, PBS(-)로 5분간 3회 세정을 행한 후, Glycergel Mounting Medium(DAKO Company제)으로 봉입 후, 관찰을 행했다. 실시예 4에 기재된 바와 같이 스코어 분류한 결과, 항체 #8을 사용한 면역 조직 화학 염색의 결과, 멜라노마 세포 B16은 스코어 0, 대장암 세포 CT26은 스코어 1이며, CAPRIN-1 발현은 검출되지 않았다. 한편, 항체 #14를 사용한 결과에서는 암 세포 B16에 대하여는 스코어 0이었지만, 암 세포 CT26에 대하여는 스코어 2이며 양성이었다.
(2) CAPRIN-1에 대한 항체에 의한 항종양 효과
인간-닭 키메라 항인간 CAPRIN-1 모노클로날 항체 #13을 사용하여 상기 (1)에서 제작한 담암 마우스를 사용한 항종양 효과를 검토했다. B16 및 CT26의 각 암 세포를 이식한 담암 마우스 중 각 5마리의 담암 마우스에 대하여 항체 #13을 1마리당 200㎍(200㎕)씩 복강내 투여했다. 그 후, 2일간 합계 3회, 동량의 항체를 각 담암 마우스의 복강에 투여하고, 매일 종양의 크기를 계측하여 #13 항체의 항종양 효과를 관찰했다(검토군). 한편, 나머지 5마리의 담암 마우스에 대하여 항체 대신에 PBS(-)를 투여하고, 이것을 대조군으로 했다.
항종양 효과의 관찰의 결과, 항체 #13을 투여한 검토군에 있어서 암 세포 B16을 이식한 마우스에서는 항체 투여 개시시의 종양 체적을 100%로 했을 경우에 4일째, 6일째, 8일째, 11일째에는 각각 약 170%, 220%, 390%, 680%까지 종양 체적이 증대했다. 한편, 검토군 중 암 세포 CT26을 이식한 마우스에서는 항체 투여 개시시의 종양 체적을 100%로 했을 경우에 종양 체적이 4일째에는 65%까지 퇴축되고, 6일째에는 41% 정도, 8일째에는 17%까지 퇴축되고, 10~14일째까지는 종양이 거의 완전히 퇴축되었다. 또한, PBS(-)를 투여한 대조군에서는 어느 종양 이식 군에서도 4일째, 6일째, 8일째, 11일째에는 각각 약 230%, 290%, 470%, 800%까지 종양이 증대했다.
이상의 결과로부터 항체 #8을 사용했을 경우, CAPRIN-1의 발현 측정 결과와 항체의 항종양 활성에 의한 암 치료 효과는 상관이 보이지 않지만, 항체 #14를 사용했을 경우에는 CAPRIN-1의 발현 측정 결과와 상기 항체의 항종양 활성에 의한 암 치료 효과에는 상관성이 보였다. 즉, CT26을 이식한 암 조직에서의 항체 #14에 의한 CAPRIN-1의 발현량 측정 결과는 스코어 2이며, CAPRIN-1의 과잉 발현이 확인되고, 또한 상기 항체의 투여에 의한 항종양 활성에 의거하는 약리 효과도 확인되었다. 한편, B16을 이식한 암 조직에서의 항체 #14에 의한 CAPRIN-1의 발현량 측정 결과는 스코어 0이며, CAPRIN-1의 발현이 보이지 않고, 또한 항종양 활성을 갖는 항체 #13을 암 세포 B16을 이식한 담암 마우스에 투여해도 약리 효과는 얻어지지 않았다.
이상의 결과로부터 본 발명의 CAPRIN-1에 특이적으로 결합하는 항체인 #14를 사용하여 암 조직 중의 CAPRIN-1을 검출하고, 그 발현량이 높다고 판정된 암 또는 개체에 본 발명에 관한 항CAPRIN-1 항체를 투여함으로써 그 항체의 항종양 효과에 의거하는 높은 치료 효과가 얻어지는 것이 나타내어졌다.
본 발명은 암의 진단을 위해서, 및 CAPRIN-1에 특이적인 치료약 등의 CAPRIN-1 표적약의 투여를 결정하기 위해서 이용할 수 있다.
본 명세서에서 인용한 모든 간행물, 특허 및 특허 출원을 그대로 참고로서 본 명세서에 포함하는 것으로 한다.
서열번호 31~36, 38~42 : 프라이머
SEQUENCE LISTING
<110> Toray Industries, Inc.
<120> Method for detecting cancer
<130> PH-5624-PCT
<150> JP 2012-160763
<151> 2012-07-19
<160> 71
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 5562
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> CDS
<222> (190)..(2319)
<400> 1
cagagggctg ctggctggct aagtccctcc cgctcccggc tctcgcctca ctaggagcgg 60
ctctcggtgc agcgggacag ggcgaagcgg cctgcgccca cggagcgcgc gacactgccc 120
ggaagggacc gccacccttg ccccctcagc tgcccactcg tgatttccag cggcctccgc 180
gcgcgcacg atg ccc tcg gcc acc agc cac agc ggg agc ggc agc aag tcg 231
Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser
1 5 10
tcc gga ccg cca ccg ccg tcg ggt tcc tcc ggg agt gag gcg gcc gcg 279
Ser Gly Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala
15 20 25 30
gga gcc ggg gcc gcc gcg ccg gct tct cag cac ccc gca acc ggc acc 327
Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gln His Pro Ala Thr Gly Thr
35 40 45
ggc gct gtc cag acc gag gcc atg aag cag att ctc ggg gtg atc gac 375
Gly Ala Val Gln Thr Glu Ala Met Lys Gln Ile Leu Gly Val Ile Asp
50 55 60
aag aaa ctt cgg aac ctg gag aag aaa aag ggt aag ctt gat gat tac 423
Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr
65 70 75
cag gaa cga atg aac aaa ggg gaa agg ctt aat caa gat cag ctg gat 471
Gln Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gln Asp Gln Leu Asp
80 85 90
gcc gtt tct aag tac cag gaa gtc aca aat aat ttg gag ttt gca aaa 519
Ala Val Ser Lys Tyr Gln Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys
95 100 105 110
gaa tta cag agg agt ttc atg gca cta agt caa gat att cag aaa aca 567
Glu Leu Gln Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gln Asp Ile Gln Lys Thr
115 120 125
ata aag aag aca gca cgt cgg gag cag ctt atg aga gaa gaa gct gaa 615
Ile Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gln Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu
130 135 140
cag aaa cgt tta aaa act gta ctt gag cta cag tat gtt ttg gac aaa 663
Gln Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gln Tyr Val Leu Asp Lys
145 150 155
ttg gga gat gat gaa gtg cgg act gac ctg aaa caa ggt ttg aat gga 711
Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu Lys Gln Gly Leu Asn Gly
160 165 170
gtg cca ata ttg tcc gaa gag gag ttg tca ttg ttg gat gaa ttc tat 759
Val Pro Ile Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr
175 180 185 190
aag cta gta gac cct gaa cgg gac atg agc ttg agg ttg aat gaa cag 807
Lys Leu Val Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gln
195 200 205
tat gaa cat gcc tcc att cac ctg tgg gac ctg ctg gaa ggg aag gaa 855
Tyr Glu His Ala Ser Ile His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu
210 215 220
aaa cct gta tgt gga acc acc tat aaa gtt cta aag gaa att gtt gag 903
Lys Pro Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Val Leu Lys Glu Ile Val Glu
225 230 235
cgt gtt ttt cag tca aac tac ttt gac agc acc cac aac cac cag aat 951
Arg Val Phe Gln Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gln Asn
240 245 250
ggg ctg tgt gag gaa gaa gag gca gcc tca gca cct gca gtt gaa gac 999
Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Ala Val Glu Asp
255 260 265 270
cag gta cct gaa gct gaa cct gag cca gca gaa gag tac act gag caa 1047
Gln Val Pro Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gln
275 280 285
agt gaa gtt gaa tca aca gag tat gta aat aga cag ttc atg gca gaa 1095
Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gln Phe Met Ala Glu
290 295 300
aca cag ttc acc agt ggt gaa aag gag cag gta gat gag tgg aca gtt 1143
Thr Gln Phe Thr Ser Gly Glu Lys Glu Gln Val Asp Glu Trp Thr Val
305 310 315
gaa acg gtt gag gtg gta aat tca ctc cag cag caa cct cag gct gca 1191
Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gln Gln Gln Pro Gln Ala Ala
320 325 330
tcc cct tca gta cca gag ccc cac tct ttg act cca gtg gct cag gca 1239
Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gln Ala
335 340 345 350
gat ccc ctt gtg aga aga cag cga gta caa gac ctt atg gca caa atg 1287
Asp Pro Leu Val Arg Arg Gln Arg Val Gln Asp Leu Met Ala Gln Met
355 360 365
cag ggt ccc tat aat ttc ata cag gat tca atg ctg gat ttt gaa aat 1335
Gln Gly Pro Tyr Asn Phe Ile Gln Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn
370 375 380
cag aca ctt gat cct gcc att gta tct gca cag cct atg aat cca aca 1383
Gln Thr Leu Asp Pro Ala Ile Val Ser Ala Gln Pro Met Asn Pro Thr
385 390 395
caa aac atg gac atg ccc cag ctg gtt tgc cct cca gtt cat tct gaa 1431
Gln Asn Met Asp Met Pro Gln Leu Val Cys Pro Pro Val His Ser Glu
400 405 410
tct aga ctt gct cag cct aat caa gtt cct gta caa cca gaa gcg aca 1479
Ser Arg Leu Ala Gln Pro Asn Gln Val Pro Val Gln Pro Glu Ala Thr
415 420 425 430
cag gtt cct ttg gta tca tcc aca agt gag ggg tac aca gca tct caa 1527
Gln Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gln
435 440 445
ccc ttg tac cag cct tct cat gct aca gag caa cga cca cag aag gaa 1575
Pro Leu Tyr Gln Pro Ser His Ala Thr Glu Gln Arg Pro Gln Lys Glu
450 455 460
cca att gat cag att cag gca aca atc tct tta aat aca gac cag act 1623
Pro Ile Asp Gln Ile Gln Ala Thr Ile Ser Leu Asn Thr Asp Gln Thr
465 470 475
aca gca tca tca tcc ctt cct gct gcg tct cag cct caa gta ttt cag 1671
Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gln Pro Gln Val Phe Gln
480 485 490
gct ggg aca agc aaa cct tta cat agc agt gga atc aat gta aat gca 1719
Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly Ile Asn Val Asn Ala
495 500 505 510
gct cca ttc caa tcc atg caa acg gtg ttc aat atg aat gcc cca gtt 1767
Ala Pro Phe Gln Ser Met Gln Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val
515 520 525
cct cct gtt aat gaa cca gaa act tta aaa cag caa aat cag tac cag 1815
Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gln Gln Asn Gln Tyr Gln
530 535 540
gcc agt tat aac cag agc ttt tct agt cag cct cac caa gta gaa caa 1863
Ala Ser Tyr Asn Gln Ser Phe Ser Ser Gln Pro His Gln Val Glu Gln
545 550 555
aca gag ctt cag caa gaa cag ctt caa aca gtg gtt ggc act tac cat 1911
Thr Glu Leu Gln Gln Glu Gln Leu Gln Thr Val Val Gly Thr Tyr His
560 565 570
ggt tcc cca gac cag tcc cat caa gtg act ggt aac cac cag cag cct 1959
Gly Ser Pro Asp Gln Ser His Gln Val Thr Gly Asn His Gln Gln Pro
575 580 585 590
cct cag cag aac act gga ttt cca cgt agc aat cag ccc tat tac aat 2007
Pro Gln Gln Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn Gln Pro Tyr Tyr Asn
595 600 605
agt cgt ggt gtg tct cgt gga ggc tcc cgt ggt gct aga ggc ttg atg 2055
Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met
610 615 620
aat gga tac cgg ggc cct gcc aat gga ttc aga gga gga tat gat ggt 2103
Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly
625 630 635
tac cgc cct tca ttc tct aac act cca aac agt ggt tat aca cag tct 2151
Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Thr Gln Ser
640 645 650
cag ttc agt gct ccc cgg gat tac tct ggc tat caa cgg gat gga tat 2199
Gln Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gln Arg Asp Gly Tyr
655 660 665 670
cag cag aat ttc aag cga ggc tct ggg cag agt gga cca cgg gga gcc 2247
Gln Gln Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gln Ser Gly Pro Arg Gly Ala
675 680 685
cca cga ggt cgt gga ggg ccc cca aga ccc aac aga ggg atg ccg caa 2295
Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gln
690 695 700
atg aac act cag caa gtg aat taa tctgattcac aggattatgt ttaatcgcca 2349
Met Asn Thr Gln Gln Val Asn
705
aaaacacact ggccagtgta ccataatatg ttaccagaag agttattatc tatttgttct 2409
ccctttcagg aaacttattg taaagggact gttttcatcc cataaagaca ggactacaat 2469
tgtcagcttt ctattacctg gatatggaag gaaactattt ttactctgca tgttctgtcc 2529
taagcgtcat cttgagcctt gcacatgata ctcagattcc tcacccttgc ttaggagtaa 2589
aacaatatac tttacagggt gataataatc tccatagtta tttgaagtgg cttgaaaaag 2649
gcaagattga cttttatgac attggataaa atctacaaat cagccctcga gttattcaat 2709
gataactgac aaactaaatt atttccctag aaaggaagat gaaaggagtg gagtgtggtt 2769
tggcagaaca actgcatttc acagcttttc cagttaaatt ggagcactga acgttcagat 2829
gcataccaaa ttatgcatgg gtcctaatca cacatataag gctggctacc agctttgaca 2889
cagcactgtt catctggcca aacaactgtg gttaaaaaca catgtaaaat gctttttaac 2949
agctgatact gtataagaca aagccaagat gcaaaattag gctttgattg gcactttttg 3009
aaaaatatgc aacaaatatg ggatgtaatc cggatggccg cttctgtact taatgtgaaa 3069
tatttagata cctttttgaa cacttaacag tttctttgag acaatgactt ttgtaaggat 3129
tggtactatc tatcattcct tatgacatgt acattgtctg tcactaatcc ttggattttg 3189
ctgtattgtc acctaaattg gtacaggtac tgatgaaaat ctctagtgga taatcataac 3249
actctcggtc acatgttttt ccttcagctt gaaagctttt ttttaaaagg aaaagatacc 3309
aaatgcctgc tgctaccacc cttttcaatt gctatctttt gaaaggcacc agtatgtgtt 3369
ttagattgat ttccctgttt cagggaaatc acggacagta gtttcagttc tgatggtata 3429
agcaaaacaa ataaaacgtt tataaaagtt gtatcttgaa acactggtgt tcaacagcta 3489
gcagcttatg tgattcaccc catgccacgt tagtgtcaca aattttatgg tttatctcca 3549
gcaacatttc tctagtactt gcacttatta tcttttgtct aatttaacct taactgaatt 3609
ctccgtttct cctggaggca tttatattca gtgataattc cttcccttag atgcataggg 3669
agagtctcta aatttgatgg aaatggacac ttgagtagtg acttagcctt atgtactctg 3729
ttggaatttg tgctagcagt ttgagcacta gttctgtgtg cctaggaagt taatgctgct 3789
tattgtctca ttctgacttc atggagaatt aatcccacct ttaagcaaag gctactaagt 3849
taatggtatt ttctgtgcag aaattaaatt ttattttcag catttagccc aggaattctt 3909
ccagtaggtg ctcagctatt taaaaacaaa actattctca aacattcatc attagacaac 3969
tggagttttt gctggttttg taacctacca aaatggatag gctgttgaac attccacatt 4029
caaaagtttt gtagggtggt gggaaatggg ggatcttcaa tgtttatttt aaaataaaat 4089
aaaataagtt cttgactttt ctcatgtgtg gttgtggtac atcatattgg aagggttaac 4149
ctgttacttt ggcaaatgag tatttttttg ctagcacctc cccttgcgtg ctttaaatga 4209
catctgcctg ggatgtacca caaccatatg ttacctgtat cttaggggaa tggataaaat 4269
atttgtggtt tactgggtaa tccctagatg atgtatgctt gcagtcctat ataaaactaa 4329
atttgctatc tgtgtagaaa ataatttcat gacatttaca atcaggactg aagtaagttc 4389
ttcacacagt gacctctgaa tcagtttcag agaagggatg ggggagaaaa tgccttctag 4449
gttttgaact tctatgcatt agtgcagatg ttgtgaatgt gtaaaggtgt tcatagtttg 4509
actgtttcta tgtatgtttt ttcaaagaat tgttcctttt tttgaactat aatttttctt 4569
tttttggtta ttttaccatc acagtttaaa tgtatatctt ttatgtctct actcagacca 4629
tatttttaaa ggggtgcctc attatggggc agagaacttt tcaataagtc tcattaagat 4689
ctgaatcttg gttctaagca ttctgtataa tatgtgattg cttgtcctag ctgcagaagg 4749
ccttttgttt ggtcaaatgc atattttagc agagtttcaa ggaaatgatt gtcacacatg 4809
tcactgtagc ctcttggtgt agcaagctca catacaaaat acttttgtat atgcataata 4869
taaatcatct catgtggata tgaaacttct tttttaaaac ttaaaaaggt agaatgttat 4929
tgattacctt gattagggca gttttatttc cagatcctaa taattcctaa aaaatatgga 4989
aaagtttttt ttcaatcatt gtaccttgat attaaaacaa atatccttta agtatttcta 5049
atcagttagc ttctacagtt cttttgtctc cttttatatg cagctcttac gtgggagact 5109
tttccactta aaggagacat agaatgtgtg cttattctca gaaggttcat taactgaggt 5169
gatgagttaa caactagttg agcagtcagc ttcctaagtg ttttaggaca tttgttcatt 5229
atattttccg tcatataact agaggaagtg gaatgcagat aagtgccgaa ttcaaaccct 5289
tcattttatg tttaagctcc tgaatctgca ttccacttgg gttgttttta agcattctaa 5349
attttagttg attataagtt agatttcaca gaatcagtat tgcccttgat cttgtccttt 5409
ttatggagtt aacggggagg aagacccctc aggaaaacga aagtaaattg ttaaggctca 5469
tcttcatacc tttttccatt ttgaatccta caaaaatact gcaaaagact agtgaatgtt 5529
taaaattaca ctagattaaa taatatgaaa gtc 5562
<210> 2
<211> 709
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 2
Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly
1 5 10 15
Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala
20 25 30
Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gln His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala
35 40 45
Val Gln Thr Glu Ala Met Lys Gln Ile Leu Gly Val Ile Asp Lys Lys
50 55 60
Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gln Glu
65 70 75 80
Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gln Asp Gln Leu Asp Ala Val
85 90 95
Ser Lys Tyr Gln Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu
100 105 110
Gln Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gln Asp Ile Gln Lys Thr Ile Lys
115 120 125
Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gln Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gln Lys
130 135 140
Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gln Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly
145 150 155 160
Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu Lys Gln Gly Leu Asn Gly Val Pro
165 170 175
Ile Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu
180 185 190
Val Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gln Tyr Glu
195 200 205
His Ala Ser Ile His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro
210 215 220
Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Val Leu Lys Glu Ile Val Glu Arg Val
225 230 235 240
Phe Gln Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gln Asn Gly Leu
245 250 255
Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Ala Val Glu Asp Gln Val
260 265 270
Pro Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gln Ser Glu
275 280 285
Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gln Phe Met Ala Glu Thr Gln
290 295 300
Phe Thr Ser Gly Glu Lys Glu Gln Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr
305 310 315 320
Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gln Gln Gln Pro Gln Ala Ala Ser Pro
325 330 335
Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gln Ala Asp Pro
340 345 350
Leu Val Arg Arg Gln Arg Val Gln Asp Leu Met Ala Gln Met Gln Gly
355 360 365
Pro Tyr Asn Phe Ile Gln Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gln Thr
370 375 380
Leu Asp Pro Ala Ile Val Ser Ala Gln Pro Met Asn Pro Thr Gln Asn
385 390 395 400
Met Asp Met Pro Gln Leu Val Cys Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg
405 410 415
Leu Ala Gln Pro Asn Gln Val Pro Val Gln Pro Glu Ala Thr Gln Val
420 425 430
Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gln Pro Leu
435 440 445
Tyr Gln Pro Ser His Ala Thr Glu Gln Arg Pro Gln Lys Glu Pro Ile
450 455 460
Asp Gln Ile Gln Ala Thr Ile Ser Leu Asn Thr Asp Gln Thr Thr Ala
465 470 475 480
Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gln Pro Gln Val Phe Gln Ala Gly
485 490 495
Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly Ile Asn Val Asn Ala Ala Pro
500 505 510
Phe Gln Ser Met Gln Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro
515 520 525
Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gln Gln Asn Gln Tyr Gln Ala Ser
530 535 540
Tyr Asn Gln Ser Phe Ser Ser Gln Pro His Gln Val Glu Gln Thr Glu
545 550 555 560
Leu Gln Gln Glu Gln Leu Gln Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser
565 570 575
Pro Asp Gln Ser His Gln Val Thr Gly Asn His Gln Gln Pro Pro Gln
580 585 590
Gln Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn Gln Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg
595 600 605
Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly
610 615 620
Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg
625 630 635 640
Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Thr Gln Ser Gln Phe
645 650 655
Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gln Arg Asp Gly Tyr Gln Gln
660 665 670
Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gln Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg
675 680 685
Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gln Met Asn
690 695 700
Thr Gln Gln Val Asn
705
<210> 3
<211> 3553
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> CDS
<222> (190)..(2274)
<400> 3
cagagggctg ctggctggct aagtccctcc cgctcccggc tctcgcctca ctaggagcgg 60
ctctcggtgc agcgggacag ggcgaagcgg cctgcgccca cggagcgcgc gacactgccc 120
ggaagggacc gccacccttg ccccctcagc tgcccactcg tgatttccag cggcctccgc 180
gcgcgcacg atg ccc tcg gcc acc agc cac agc ggg agc ggc agc aag tcg 231
Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser
1 5 10
tcc gga ccg cca ccg ccg tcg ggt tcc tcc ggg agt gag gcg gcc gcg 279
Ser Gly Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala
15 20 25 30
gga gcc ggg gcc gcc gcg ccg gct tct cag cac ccc gca acc ggc acc 327
Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gln His Pro Ala Thr Gly Thr
35 40 45
ggc gct gtc cag acc gag gcc atg aag cag att ctc ggg gtg atc gac 375
Gly Ala Val Gln Thr Glu Ala Met Lys Gln Ile Leu Gly Val Ile Asp
50 55 60
aag aaa ctt cgg aac ctg gag aag aaa aag ggt aag ctt gat gat tac 423
Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr
65 70 75
cag gaa cga atg aac aaa ggg gaa agg ctt aat caa gat cag ctg gat 471
Gln Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gln Asp Gln Leu Asp
80 85 90
gcc gtt tct aag tac cag gaa gtc aca aat aat ttg gag ttt gca aaa 519
Ala Val Ser Lys Tyr Gln Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys
95 100 105 110
gaa tta cag agg agt ttc atg gca cta agt caa gat att cag aaa aca 567
Glu Leu Gln Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gln Asp Ile Gln Lys Thr
115 120 125
ata aag aag aca gca cgt cgg gag cag ctt atg aga gaa gaa gct gaa 615
Ile Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gln Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu
130 135 140
cag aaa cgt tta aaa act gta ctt gag cta cag tat gtt ttg gac aaa 663
Gln Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gln Tyr Val Leu Asp Lys
145 150 155
ttg gga gat gat gaa gtg cgg act gac ctg aaa caa ggt ttg aat gga 711
Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu Lys Gln Gly Leu Asn Gly
160 165 170
gtg cca ata ttg tcc gaa gag gag ttg tca ttg ttg gat gaa ttc tat 759
Val Pro Ile Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr
175 180 185 190
aag cta gta gac cct gaa cgg gac atg agc ttg agg ttg aat gaa cag 807
Lys Leu Val Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gln
195 200 205
tat gaa cat gcc tcc att cac ctg tgg gac ctg ctg gaa ggg aag gaa 855
Tyr Glu His Ala Ser Ile His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu
210 215 220
aaa cct gta tgt gga acc acc tat aaa gtt cta aag gaa att gtt gag 903
Lys Pro Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Val Leu Lys Glu Ile Val Glu
225 230 235
cgt gtt ttt cag tca aac tac ttt gac agc acc cac aac cac cag aat 951
Arg Val Phe Gln Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gln Asn
240 245 250
ggg ctg tgt gag gaa gaa gag gca gcc tca gca cct gca gtt gaa gac 999
Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Ala Val Glu Asp
255 260 265 270
cag gta cct gaa gct gaa cct gag cca gca gaa gag tac act gag caa 1047
Gln Val Pro Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gln
275 280 285
agt gaa gtt gaa tca aca gag tat gta aat aga cag ttc atg gca gaa 1095
Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gln Phe Met Ala Glu
290 295 300
aca cag ttc acc agt ggt gaa aag gag cag gta gat gag tgg aca gtt 1143
Thr Gln Phe Thr Ser Gly Glu Lys Glu Gln Val Asp Glu Trp Thr Val
305 310 315
gaa acg gtt gag gtg gta aat tca ctc cag cag caa cct cag gct gca 1191
Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gln Gln Gln Pro Gln Ala Ala
320 325 330
tcc cct tca gta cca gag ccc cac tct ttg act cca gtg gct cag gca 1239
Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gln Ala
335 340 345 350
gat ccc ctt gtg aga aga cag cga gta caa gac ctt atg gca caa atg 1287
Asp Pro Leu Val Arg Arg Gln Arg Val Gln Asp Leu Met Ala Gln Met
355 360 365
cag ggt ccc tat aat ttc ata cag gat tca atg ctg gat ttt gaa aat 1335
Gln Gly Pro Tyr Asn Phe Ile Gln Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn
370 375 380
cag aca ctt gat cct gcc att gta tct gca cag cct atg aat cca aca 1383
Gln Thr Leu Asp Pro Ala Ile Val Ser Ala Gln Pro Met Asn Pro Thr
385 390 395
caa aac atg gac atg ccc cag ctg gtt tgc cct cca gtt cat tct gaa 1431
Gln Asn Met Asp Met Pro Gln Leu Val Cys Pro Pro Val His Ser Glu
400 405 410
tct aga ctt gct cag cct aat caa gtt cct gta caa cca gaa gcg aca 1479
Ser Arg Leu Ala Gln Pro Asn Gln Val Pro Val Gln Pro Glu Ala Thr
415 420 425 430
cag gtt cct ttg gta tca tcc aca agt gag ggg tac aca gca tct caa 1527
Gln Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gln
435 440 445
ccc ttg tac cag cct tct cat gct aca gag caa cga cca cag aag gaa 1575
Pro Leu Tyr Gln Pro Ser His Ala Thr Glu Gln Arg Pro Gln Lys Glu
450 455 460
cca att gat cag att cag gca aca atc tct tta aat aca gac cag act 1623
Pro Ile Asp Gln Ile Gln Ala Thr Ile Ser Leu Asn Thr Asp Gln Thr
465 470 475
aca gca tca tca tcc ctt cct gct gcg tct cag cct caa gta ttt cag 1671
Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gln Pro Gln Val Phe Gln
480 485 490
gct ggg aca agc aaa cct tta cat agc agt gga atc aat gta aat gca 1719
Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly Ile Asn Val Asn Ala
495 500 505 510
gct cca ttc caa tcc atg caa acg gtg ttc aat atg aat gcc cca gtt 1767
Ala Pro Phe Gln Ser Met Gln Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val
515 520 525
cct cct gtt aat gaa cca gaa act tta aaa cag caa aat cag tac cag 1815
Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gln Gln Asn Gln Tyr Gln
530 535 540
gcc agt tat aac cag agc ttt tct agt cag cct cac caa gta gaa caa 1863
Ala Ser Tyr Asn Gln Ser Phe Ser Ser Gln Pro His Gln Val Glu Gln
545 550 555
aca gag ctt cag caa gaa cag ctt caa aca gtg gtt ggc act tac cat 1911
Thr Glu Leu Gln Gln Glu Gln Leu Gln Thr Val Val Gly Thr Tyr His
560 565 570
ggt tcc cca gac cag tcc cat caa gtg act ggt aac cac cag cag cct 1959
Gly Ser Pro Asp Gln Ser His Gln Val Thr Gly Asn His Gln Gln Pro
575 580 585 590
cct cag cag aac act gga ttt cca cgt agc aat cag ccc tat tac aat 2007
Pro Gln Gln Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn Gln Pro Tyr Tyr Asn
595 600 605
agt cgt ggt gtg tct cgt gga ggc tcc cgt ggt gct aga ggc ttg atg 2055
Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met
610 615 620
aat gga tac cgg ggc cct gcc aat gga ttc aga gga gga tat gat ggt 2103
Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly
625 630 635
tac cgc cct tca ttc tct aac act cca aac agt ggt tat aca cag tct 2151
Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Thr Gln Ser
640 645 650
cag ttc agt gct ccc cgg gat tac tct ggc tat caa cgg gat gga tat 2199
Gln Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gln Arg Asp Gly Tyr
655 660 665 670
cag cag aat ttc aag cga ggc tct ggg cag agt gga cca cgg gga gcc 2247
Gln Gln Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gln Ser Gly Pro Arg Gly Ala
675 680 685
cca cga ggt aat att ttg tgg tgg tga tcctagctcc taagtggagc 2294
Pro Arg Gly Asn Ile Leu Trp Trp
690
ttctgttctg gccttggaag agctgttaat agtctgcatg ttaggaatac atttatcctt 2354
tccagacttg ttgctaggga ttaaatgaaa tgctctgttt ctaaaactta atcttggacc 2414
caaattttaa tttttgaatg atttaatttt ccctgttact atataaactg tcttgaaaac 2474
tagaacatat tctcttctca gaaaaagtgt ttttccaact gaaaattatt tttcaggtcc 2534
taaaacctgc taaatgtttt taggaagtac ttactgaaac atttttgtaa gacatttttg 2594
gaatgagatt gaacatttat ataaatttat tattcctctt tcattttttt gaaacatgcc 2654
tattatattt tagggccaga caccctttaa tggccggata agccatagtt aacatttaga 2714
gaaccattta gaagtgatag aactaatgga atttgcaatg ccttttggac ctctattagt 2774
gatataaata tcaagttatt tctgactttt aaacaaaact cccaaattcc taacttattg 2834
agctatactt aaaaaaaatt acaggtttag agagtttttt gtttttcttt tactgttgga 2894
aaactacttc ccattttggc aggaagttaa cctatttaac aattagagct agcatttcat 2954
gtagtctgaa attctaaatg gttctctgat ttgagggagg ttaaacatca aacaggtttc 3014
ctctattggc cataacatgt ataaaatgtg tgttaaggag gaattacaac gtactttgat 3074
ttgaatacta gtagaaactg gccaggaaaa aggtacattt ttctaaaaat taatggatca 3134
cttgggaatt actgacttga ctagaagtat caaaggatgt ttgcatgtga atgtgggtta 3194
tgttctttcc caccttgtag catattcgat gaaagttgag ttaactgata gctaaaaatc 3254
tgttttaaca gcatgtaaaa agttatttta tctgttaaaa gtcattatac agttttgaat 3314
gttatgtagt ttctttttaa cagtttaggt aataaggtct gttttcattc tggtgctttt 3374
attaattttg atagtatgat gttacttact actgaaatgt aagctagagt gtacactaga 3434
atgtaagctc catgagagca ggtaccttgt ctgtcttctc tgctgtatct attcccaacg 3494
cttgatgatg gtgcctggca catagtaggc actcaataaa tatttgttga atgaatgaa 3553
<210> 4
<211> 694
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 4
Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly
1 5 10 15
Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala
20 25 30
Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gln His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala
35 40 45
Val Gln Thr Glu Ala Met Lys Gln Ile Leu Gly Val Ile Asp Lys Lys
50 55 60
Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gln Glu
65 70 75 80
Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gln Asp Gln Leu Asp Ala Val
85 90 95
Ser Lys Tyr Gln Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu
100 105 110
Gln Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gln Asp Ile Gln Lys Thr Ile Lys
115 120 125
Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gln Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gln Lys
130 135 140
Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gln Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly
145 150 155 160
Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu Lys Gln Gly Leu Asn Gly Val Pro
165 170 175
Ile Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu
180 185 190
Val Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gln Tyr Glu
195 200 205
His Ala Ser Ile His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro
210 215 220
Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Val Leu Lys Glu Ile Val Glu Arg Val
225 230 235 240
Phe Gln Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gln Asn Gly Leu
245 250 255
Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Ala Val Glu Asp Gln Val
260 265 270
Pro Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gln Ser Glu
275 280 285
Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gln Phe Met Ala Glu Thr Gln
290 295 300
Phe Thr Ser Gly Glu Lys Glu Gln Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr
305 310 315 320
Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gln Gln Gln Pro Gln Ala Ala Ser Pro
325 330 335
Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gln Ala Asp Pro
340 345 350
Leu Val Arg Arg Gln Arg Val Gln Asp Leu Met Ala Gln Met Gln Gly
355 360 365
Pro Tyr Asn Phe Ile Gln Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gln Thr
370 375 380
Leu Asp Pro Ala Ile Val Ser Ala Gln Pro Met Asn Pro Thr Gln Asn
385 390 395 400
Met Asp Met Pro Gln Leu Val Cys Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg
405 410 415
Leu Ala Gln Pro Asn Gln Val Pro Val Gln Pro Glu Ala Thr Gln Val
420 425 430
Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gln Pro Leu
435 440 445
Tyr Gln Pro Ser His Ala Thr Glu Gln Arg Pro Gln Lys Glu Pro Ile
450 455 460
Asp Gln Ile Gln Ala Thr Ile Ser Leu Asn Thr Asp Gln Thr Thr Ala
465 470 475 480
Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gln Pro Gln Val Phe Gln Ala Gly
485 490 495
Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly Ile Asn Val Asn Ala Ala Pro
500 505 510
Phe Gln Ser Met Gln Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro
515 520 525
Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gln Gln Asn Gln Tyr Gln Ala Ser
530 535 540
Tyr Asn Gln Ser Phe Ser Ser Gln Pro His Gln Val Glu Gln Thr Glu
545 550 555 560
Leu Gln Gln Glu Gln Leu Gln Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser
565 570 575
Pro Asp Gln Ser His Gln Val Thr Gly Asn His Gln Gln Pro Pro Gln
580 585 590
Gln Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn Gln Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg
595 600 605
Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly
610 615 620
Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg
625 630 635 640
Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Thr Gln Ser Gln Phe
645 650 655
Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gln Arg Asp Gly Tyr Gln Gln
660 665 670
Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gln Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg
675 680 685
Gly Asn Ile Leu Trp Trp
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<212> DNA
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<220>
<221> CDS
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gtcacaaata acttggagtt tgcaaaagaa ttacagagga gtttc atg gca tta agt 57
Met Ala Leu Ser
1
caa gat att cag aaa aca ata aag aag act gca cgt cgg gag cag ctt 105
Gln Asp Ile Gln Lys Thr Ile Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gln Leu
5 10 15 20
atg aga gag gaa gcg gaa caa aaa cgt tta aaa act gta ctt gag ctc 153
Met Arg Glu Glu Ala Glu Gln Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu
25 30 35
cag tat gtt ttg gac aaa ttg gga gat gat gaa gtg aga act gac ctg 201
Gln Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu
40 45 50
aag caa ggt ttg aat gga gtg cca ata ttg tct gaa gaa gaa ttg tcg 249
Lys Gln Gly Leu Asn Gly Val Pro Ile Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser
55 60 65
ttg ttg gat gaa ttc tac aaa tta gca gac cct gaa cgg gac atg agc 297
Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser
70 75 80
ttg agg ttg aat gag cag tat gaa cat gct tcc att cac ctg tgg gac 345
Leu Arg Leu Asn Glu Gln Tyr Glu His Ala Ser Ile His Leu Trp Asp
85 90 95 100
ttg ctg gaa gga aag gaa aag tct gta tgt gga aca acc tat aaa gca 393
Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala
105 110 115
cta aag gaa att gtt gag cgt gtt ttc cag tca aat tac ttt gac agc 441
Leu Lys Glu Ile Val Glu Arg Val Phe Gln Ser Asn Tyr Phe Asp Ser
120 125 130
act cac aac cac cag aat ggg cta tgt gag gaa gaa gag gca gcc tca 489
Thr His Asn His Gln Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser
135 140 145
gca cct aca gtt gaa gac cag gta gct gaa gct gag cct gag cca gca 537
Ala Pro Thr Val Glu Asp Gln Val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala
150 155 160
gaa gaa tac act gaa caa agt gaa gtt gaa tca aca gag tat gta aat 585
Glu Glu Tyr Thr Glu Gln Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn
165 170 175 180
aga caa ttt atg gca gaa aca cag ttc agc agt ggt gaa aag gag cag 633
Arg Gln Phe Met Ala Glu Thr Gln Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gln
185 190 195
gta gat gag tgg acg gtc gaa aca gtg gag gtg gtg aat tca ctc cag 681
Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gln
200 205 210
cag caa cct cag gct gcg tct cct tca gta cca gag ccc cac tct ttg 729
Gln Gln Pro Gln Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu
215 220 225
act ccg gtg gct cag gca gat ccc ctt gtg aga aga cag cga gtc cag 777
Thr Pro Val Ala Gln Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gln Arg Val Gln
230 235 240
gac ctt atg gcg cag atg cag ggg ccc tat aat ttc ata cag gat tca 825
Asp Leu Met Ala Gln Met Gln Gly Pro Tyr Asn Phe Ile Gln Asp Ser
245 250 255 260
atg ctg gat ttt gaa aac cag aca ctc gat cct gcc att gta tct gca 873
Met Leu Asp Phe Glu Asn Gln Thr Leu Asp Pro Ala Ile Val Ser Ala
265 270 275
cag cct atg aat ccg aca caa aac atg gac atg ccc cag ctg gtt tgc 921
Gln Pro Met Asn Pro Thr Gln Asn Met Asp Met Pro Gln Leu Val Cys
280 285 290
cct cca gtt cat tct gaa tct aga ctt gct caa cct aat caa gtt cct 969
Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gln Pro Asn Gln Val Pro
295 300 305
gta caa cca gaa gct aca cag gtt cct ttg gtt tca tcc aca agt gag 1017
Val Gln Pro Glu Ala Thr Gln Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu
310 315 320
ggg tat aca gca tct caa ccc ttg tac cag cct tct cat gct aca gag 1065
Gly Tyr Thr Ala Ser Gln Pro Leu Tyr Gln Pro Ser His Ala Thr Glu
325 330 335 340
caa cga cca caa aag gaa cca att gac cag att cag gca aca atc tct 1113
Gln Arg Pro Gln Lys Glu Pro Ile Asp Gln Ile Gln Ala Thr Ile Ser
345 350 355
tta aat aca gac cag act aca gcg tca tca tcc ctt ccg gct gct tct 1161
Leu Asn Thr Asp Gln Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser
360 365 370
cag cct cag gta ttc cag gct ggg aca agc aaa cca tta cat agc agt 1209
Gln Pro Gln Val Phe Gln Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser
375 380 385
gga atc aat gta aat gca gct cca ttc caa tcc atg caa acg gtg ttc 1257
Gly Ile Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gln Ser Met Gln Thr Val Phe
390 395 400
aat atg aat gcc cca gtt cct cct gtt aat gaa cca gaa act ttg aaa 1305
Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys
405 410 415 420
caa caa aat cag tac cag gcc agt tat aac cag agc ttt tct agt cag 1353
Gln Gln Asn Gln Tyr Gln Ala Ser Tyr Asn Gln Ser Phe Ser Ser Gln
425 430 435
cct cac caa gta gaa caa aca gag gga tgc cgc aaa tga acactcagca 1402
Pro His Gln Val Glu Gln Thr Glu Gly Cys Arg Lys
440 445
agtgaattaa tctgattcac aggattatgt ttaaacgcca aaaacacact ggccagtgta 1462
ccataatatg ttaccagaag agttattatc tatttgttct ccctttcagg aaacttattg 1522
taaagggact gttttcatcc cataaagaca ggactacaat tgtcagcttt atattacctg 1582
gaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaa 1605
<210> 6
<211> 448
<212> PRT
<213> Canis familiaris
<400> 6
Met Ala Leu Ser Gln Asp Ile Gln Lys Thr Ile Lys Lys Thr Ala Arg
1 5 10 15
Arg Glu Gln Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gln Lys Arg Leu Lys Thr
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Val Leu Glu Leu Gln Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val
35 40 45
Arg Thr Asp Leu Lys Gln Gly Leu Asn Gly Val Pro Ile Leu Ser Glu
50 55 60
Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu
65 70 75 80
Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gln Tyr Glu His Ala Ser Ile
85 90 95
His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr
100 105 110
Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu Ile Val Glu Arg Val Phe Gln Ser Asn
115 120 125
Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gln Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu
130 135 140
Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu Asp Gln Val Ala Glu Ala Glu
145 150 155 160
Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gln Ser Glu Val Glu Ser Thr
165 170 175
Glu Tyr Val Asn Arg Gln Phe Met Ala Glu Thr Gln Phe Ser Ser Gly
180 185 190
Glu Lys Glu Gln Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val
195 200 205
Asn Ser Leu Gln Gln Gln Pro Gln Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu
210 215 220
Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gln Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg
225 230 235 240
Gln Arg Val Gln Asp Leu Met Ala Gln Met Gln Gly Pro Tyr Asn Phe
245 250 255
Ile Gln Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gln Thr Leu Asp Pro Ala
260 265 270
Ile Val Ser Ala Gln Pro Met Asn Pro Thr Gln Asn Met Asp Met Pro
275 280 285
Gln Leu Val Cys Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gln Pro
290 295 300
Asn Gln Val Pro Val Gln Pro Glu Ala Thr Gln Val Pro Leu Val Ser
305 310 315 320
Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gln Pro Leu Tyr Gln Pro Ser
325 330 335
His Ala Thr Glu Gln Arg Pro Gln Lys Glu Pro Ile Asp Gln Ile Gln
340 345 350
Ala Thr Ile Ser Leu Asn Thr Asp Gln Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu
355 360 365
Pro Ala Ala Ser Gln Pro Gln Val Phe Gln Ala Gly Thr Ser Lys Pro
370 375 380
Leu His Ser Ser Gly Ile Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gln Ser Met
385 390 395 400
Gln Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro
405 410 415
Glu Thr Leu Lys Gln Gln Asn Gln Tyr Gln Ala Ser Tyr Asn Gln Ser
420 425 430
Phe Ser Ser Gln Pro His Gln Val Glu Gln Thr Glu Gly Cys Arg Lys
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<212> DNA
<213> Canis familiaris
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(2154)
<400> 7
atg ccg tcg gcc acc agc ctc agc gga agc ggc agc aag tcg tcg ggc 48
Met Pro Ser Ala Thr Ser Leu Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly
1 5 10 15
ccg ccg ccc ccg tcg ggt tcc tcc ggg agc gag gcg gcg gcg gcg gcg 96
Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ala Ala
20 25 30
ggg gcg gcg ggg gcg gcg ggg gcc ggg gcg gct gcg ccc gcc tcc cag 144
Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gln
35 40 45
cac ccc gcg acc ggc acc ggc gct gtc cag acc gag gcc atg aag cag 192
His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gln Thr Glu Ala Met Lys Gln
50 55 60
atc ctc ggg gtg atc gac aag aaa ctc cgg aac ctg gag aag aaa aag 240
Ile Leu Gly Val Ile Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys
65 70 75 80
ggc aag ctt gat gat tac cag gaa cga atg aac aaa ggg gaa agg ctt 288
Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gln Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu
85 90 95
aat caa gat cag ctg gat gcc gta tct aag tac cag gaa gtc aca aat 336
Asn Gln Asp Gln Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gln Glu Val Thr Asn
100 105 110
aac ttg gag ttt gca aaa gaa tta cag agg agt ttc atg gca tta agt 384
Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gln Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser
115 120 125
caa gat att cag aaa aca ata aag aag act gca cgt cgg gag cag ctt 432
Gln Asp Ile Gln Lys Thr Ile Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gln Leu
130 135 140
atg aga gag gaa gcg gaa caa aaa cgt tta aaa act gta ctt gag ctc 480
Met Arg Glu Glu Ala Glu Gln Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu
145 150 155 160
cag tat gtt ttg gac aaa ttg gga gat gat gaa gtg aga act gac ctg 528
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165 170 175
aag caa ggt ttg aat gga gtg cca ata ttg tct gaa gaa gaa ttg tcg 576
Lys Gln Gly Leu Asn Gly Val Pro Ile Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser
180 185 190
ttg ttg gat gaa ttc tac aaa tta gca gac cct gaa cgg gac atg agc 624
Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser
195 200 205
ttg agg ttg aat gag cag tat gaa cat gct tcc att cac ctg tgg gac 672
Leu Arg Leu Asn Glu Gln Tyr Glu His Ala Ser Ile His Leu Trp Asp
210 215 220
ttg ctg gaa gga aag gaa aag tct gta tgt gga aca acc tat aaa gca 720
Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala
225 230 235 240
cta aag gaa att gtt gag cgt gtt ttc cag tca aat tac ttt gac agc 768
Leu Lys Glu Ile Val Glu Arg Val Phe Gln Ser Asn Tyr Phe Asp Ser
245 250 255
act cac aac cac cag aat ggg cta tgt gag gaa gaa gag gca gcc tca 816
Thr His Asn His Gln Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser
260 265 270
gca cct aca gtt gaa gac cag gta gct gaa gct gag cct gag cca gca 864
Ala Pro Thr Val Glu Asp Gln Val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala
275 280 285
gaa gaa tac act gaa caa agt gaa gtt gaa tca aca gag tat gta aat 912
Glu Glu Tyr Thr Glu Gln Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn
290 295 300
aga caa ttt atg gca gaa aca cag ttc agc agt ggt gaa aag gag cag 960
Arg Gln Phe Met Ala Glu Thr Gln Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gln
305 310 315 320
gta gat gag tgg acg gtc gaa aca gtg gag gtg gtg aat tca ctc cag 1008
Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gln
325 330 335
cag caa cct cag gct gcg tct cct tca gta cca gag ccc cac tct ttg 1056
Gln Gln Pro Gln Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu
340 345 350
act ccg gtg gct cag gca gat ccc ctt gtg aga aga cag cga gtc cag 1104
Thr Pro Val Ala Gln Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gln Arg Val Gln
355 360 365
gac ctt atg gcg cag atg cag ggg ccc tat aat ttc ata cag gat tca 1152
Asp Leu Met Ala Gln Met Gln Gly Pro Tyr Asn Phe Ile Gln Asp Ser
370 375 380
atg ctg gat ttt gaa aac cag aca ctc gat cct gcc att gta tct gca 1200
Met Leu Asp Phe Glu Asn Gln Thr Leu Asp Pro Ala Ile Val Ser Ala
385 390 395 400
cag cct atg aat ccg aca caa aac atg gac atg ccc cag ctg gtt tgc 1248
Gln Pro Met Asn Pro Thr Gln Asn Met Asp Met Pro Gln Leu Val Cys
405 410 415
cct cca gtt cat tct gaa tct aga ctt gct caa cct aat caa gtt cct 1296
Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gln Pro Asn Gln Val Pro
420 425 430
gta caa cca gaa gct aca cag gtt cct ttg gtt tca tcc aca agt gag 1344
Val Gln Pro Glu Ala Thr Gln Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu
435 440 445
ggg tat aca gca tct caa ccc ttg tac cag cct tct cat gct aca gag 1392
Gly Tyr Thr Ala Ser Gln Pro Leu Tyr Gln Pro Ser His Ala Thr Glu
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caa cga cca caa aag gaa cca att gac cag att cag gca aca atc tct 1440
Gln Arg Pro Gln Lys Glu Pro Ile Asp Gln Ile Gln Ala Thr Ile Ser
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tta aat aca gac cag act aca gcg tca tca tcc ctt ccg gct gct tct 1488
Leu Asn Thr Asp Gln Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser
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cag cct cag gta ttc cag gct ggg aca agc aaa cca tta cat agc agt 1536
Gln Pro Gln Val Phe Gln Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser
500 505 510
gga atc aat gta aat gca gct cca ttc caa tcc atg caa acg gtg ttc 1584
Gly Ile Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gln Ser Met Gln Thr Val Phe
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aat atg aat gcc cca gtt cct cct gtt aat gaa cca gaa act ttg aaa 1632
Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys
530 535 540
caa caa aat cag tac cag gcc agt tat aac cag agc ttt tct agt cag 1680
Gln Gln Asn Gln Tyr Gln Ala Ser Tyr Asn Gln Ser Phe Ser Ser Gln
545 550 555 560
cct cac caa gta gaa caa aca gac ctt cag caa gaa cag ctt caa aca 1728
Pro His Gln Val Glu Gln Thr Asp Leu Gln Gln Glu Gln Leu Gln Thr
565 570 575
gtg gtt ggc act tac cat ggt tcc cag gac cag ccc cac caa gtg act 1776
Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gln Asp Gln Pro His Gln Val Thr
580 585 590
ggt aac cat cag cag cct ccc cag cag aac act gga ttt cca cgt agc 1824
Gly Asn His Gln Gln Pro Pro Gln Gln Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser
595 600 605
agt cag ccc tat tac aat agt cgt ggt gtg tct cgt ggt ggt tcc cgt 1872
Ser Gln Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg
610 615 620
ggt gct aga ggc tta atg aat gga tac agg ggc cct gcc aat gga ttc 1920
Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe
625 630 635 640
aga gga gga tat gat ggt tac cgc cct tca ttc tct aac act cca aac 1968
Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn
645 650 655
agt ggt tat aca cag tct cag ttc agt gct ccc cgg gac tac tct ggc 2016
Ser Gly Tyr Thr Gln Ser Gln Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly
660 665 670
tat cag cgg gat gga tat cag cag aat ttc aag cga ggc tct ggg cag 2064
Tyr Gln Arg Asp Gly Tyr Gln Gln Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gln
675 680 685
agt gga cca cgg gga gcc cca cga ggt cgt gga ggg ccc cca aga ccc 2112
Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro
690 695 700
aac aga ggg atg ccg caa atg aac act cag caa gtg aat taa 2154
Asn Arg Gly Met Pro Gln Met Asn Thr Gln Gln Val Asn
705 710 715
tctgattcac aggattatgt ttaaacgcca aaaacacact ggccagtgta ccataatatg 2214
ttaccagaag agttattatc tatttgttct ccctttcagg aaacttattg taaagggact 2274
gttttcatcc cataaagaca ggactacaat tgtcagcttt atattacctg gatatggaag 2334
gaaactattt ttattctgca tgttcttcct aagcgtcatc ttgagccttg cacatgatac 2394
tcagattcct cacccttgct taggagtaaa acataataca ctttacaggg tgatatctcc 2454
atagttattt gaagtggctt ggaaaaagca agattaactt ctgacattgg ataaaaatca 2514
acaaatcagc cctagagtta ttcaaatggt aattgacaaa aactaaaata tttcccttcg 2574
agaaggagtg gaatgtggtt tggcagaaca actgcatttc acagcttttc cggttaaatt 2634
ggagcactaa acgtttagat gcataccaaa ttatgcatgg gcccttaata taaaaggctg 2694
gctaccagct ttgacacagc actattcatc ctctggccaa acaactgtgg ttaaacaaca 2754
catgtaaatt gctttttaac agctgatact ataataagac aaagccaaaa tgcaaaaatt 2814
gggctttgat tggcactttt tgaaaaatat gcaacaaata tgggatgtaa tctggatggc 2874
cgcttctgta cttaatgtga agtatttaga tacctttttg aacacttaac agtttcttct 2934
gacaatgact tttgtaagga ttggtactat ctatcattcc ttataatgta cattgtctgt 2994
cactaatcct cagatcttgc tgtattgtca cctaaattgg tacaggtact gatgaaaata 3054
tctaatggat aatcataaca ctcttggtca catgtttttc ctgcagcctg aaggttttta 3114
aaagaaaaag atatcaaatg cctgctgcta ccaccctttt aaattgctat cttttgaaaa 3174
gcaccagtat gtgttttaga ttgatttccc tattttaggg aaatgacaga cagtagtttc 3234
agttctgatg gtataagcaa aacaaataaa acatgtttat aaaagttgta tcttgaaaca 3294
ctggtgttca acagctagca gcttatgtgg ttcaccccat gcattgttag tgtttcagat 3354
tttatggtta tctccagcag ctgtttctgt agtacttgca tttatctttt gtctaaccct 3414
aatattctca cggaggcatt tatattcaaa gtggtgatcc cttcacttag acgcataggg 3474
agagtcacaa gtttgatgaa gaggacagtg tagtaattta tatgctgttg gaatttgtgc 3534
tagcagtttg agcactagtt ctgtgtgcct atgaacttaa tgctgcttgt catattccac 3594
tttgacttca tggagaatta atcccatcta ctcagcaaag gctatactaa tactaagtta 3654
atggtatttt ctgtgcagaa attgaatttt gttttattag catttagcta aggaattttt 3714
ccagtaggtg ctcagctact aaagaaaaac aaaaacaaga cacaaaacta ttctcaaaca 3774
ttcattgtta gacaactgga gtttttgctg gttttgtaac ctactaaaat ggataggctg 3834
ttgaacattc cacattcaaa agttttttgt agggtggtgg ggaagggggg gtgtcttcaa 3894
tgtttatttt aaaataaaat aagttcttga cttttctcat gtgtggttgt ggtacatcat 3954
attggaaggg ttatctgttt acttttgcaa atgagtattt ctcttgctag cacctcccgt 4014
tgtgcgcttt aaatgacatc tgcctgggat gtaccacaac catatgttag ctgtatttta 4074
tggggaatag ataaaatatt cgtggtttat tgggtaatcc ctagatgtgt atgcttacaa 4134
tcctatatat aaaactaaat 4154
<210> 8
<211> 717
<212> PRT
<213> Canis familiaris
<400> 8
Met Pro Ser Ala Thr Ser Leu Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly
1 5 10 15
Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ala Ala
20 25 30
Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gln
35 40 45
His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gln Thr Glu Ala Met Lys Gln
50 55 60
Ile Leu Gly Val Ile Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys
65 70 75 80
Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gln Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu
85 90 95
Asn Gln Asp Gln Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gln Glu Val Thr Asn
100 105 110
Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gln Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser
115 120 125
Gln Asp Ile Gln Lys Thr Ile Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gln Leu
130 135 140
Met Arg Glu Glu Ala Glu Gln Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu
145 150 155 160
Gln Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu
165 170 175
Lys Gln Gly Leu Asn Gly Val Pro Ile Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser
180 185 190
Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser
195 200 205
Leu Arg Leu Asn Glu Gln Tyr Glu His Ala Ser Ile His Leu Trp Asp
210 215 220
Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala
225 230 235 240
Leu Lys Glu Ile Val Glu Arg Val Phe Gln Ser Asn Tyr Phe Asp Ser
245 250 255
Thr His Asn His Gln Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser
260 265 270
Ala Pro Thr Val Glu Asp Gln Val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala
275 280 285
Glu Glu Tyr Thr Glu Gln Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn
290 295 300
Arg Gln Phe Met Ala Glu Thr Gln Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gln
305 310 315 320
Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gln
325 330 335
Gln Gln Pro Gln Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu
340 345 350
Thr Pro Val Ala Gln Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gln Arg Val Gln
355 360 365
Asp Leu Met Ala Gln Met Gln Gly Pro Tyr Asn Phe Ile Gln Asp Ser
370 375 380
Met Leu Asp Phe Glu Asn Gln Thr Leu Asp Pro Ala Ile Val Ser Ala
385 390 395 400
Gln Pro Met Asn Pro Thr Gln Asn Met Asp Met Pro Gln Leu Val Cys
405 410 415
Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gln Pro Asn Gln Val Pro
420 425 430
Val Gln Pro Glu Ala Thr Gln Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu
435 440 445
Gly Tyr Thr Ala Ser Gln Pro Leu Tyr Gln Pro Ser His Ala Thr Glu
450 455 460
Gln Arg Pro Gln Lys Glu Pro Ile Asp Gln Ile Gln Ala Thr Ile Ser
465 470 475 480
Leu Asn Thr Asp Gln Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser
485 490 495
Gln Pro Gln Val Phe Gln Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser
500 505 510
Gly Ile Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gln Ser Met Gln Thr Val Phe
515 520 525
Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys
530 535 540
Gln Gln Asn Gln Tyr Gln Ala Ser Tyr Asn Gln Ser Phe Ser Ser Gln
545 550 555 560
Pro His Gln Val Glu Gln Thr Asp Leu Gln Gln Glu Gln Leu Gln Thr
565 570 575
Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gln Asp Gln Pro His Gln Val Thr
580 585 590
Gly Asn His Gln Gln Pro Pro Gln Gln Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser
595 600 605
Ser Gln Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg
610 615 620
Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe
625 630 635 640
Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn
645 650 655
Ser Gly Tyr Thr Gln Ser Gln Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly
660 665 670
Tyr Gln Arg Asp Gly Tyr Gln Gln Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gln
675 680 685
Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro
690 695 700
Asn Arg Gly Met Pro Gln Met Asn Thr Gln Gln Val Asn
705 710 715
<210> 9
<211> 4939
<212> DNA
<213> Canis familiaris
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(2109)
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Met Pro Ser Ala Thr Ser Leu Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly
1 5 10 15
ccg ccg ccc ccg tcg ggt tcc tcc ggg agc gag gcg gcg gcg gcg gcg 96
Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ala Ala
20 25 30
ggg gcg gcg ggg gcg gcg ggg gcc ggg gcg gct gcg ccc gcc tcc cag 144
Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gln
35 40 45
cac ccc gcg acc ggc acc ggc gct gtc cag acc gag gcc atg aag cag 192
His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gln Thr Glu Ala Met Lys Gln
50 55 60
atc ctc ggg gtg atc gac aag aaa ctc cgg aac ctg gag aag aaa aag 240
Ile Leu Gly Val Ile Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys
65 70 75 80
ggc aag ctt gat gat tac cag gaa cga atg aac aaa ggg gaa agg ctt 288
Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gln Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu
85 90 95
aat caa gat cag ctg gat gcc gta tct aag tac cag gaa gtc aca aat 336
Asn Gln Asp Gln Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gln Glu Val Thr Asn
100 105 110
aac ttg gag ttt gca aaa gaa tta cag agg agt ttc atg gca tta agt 384
Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gln Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser
115 120 125
caa gat att cag aaa aca ata aag aag act gca cgt cgg gag cag ctt 432
Gln Asp Ile Gln Lys Thr Ile Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gln Leu
130 135 140
atg aga gag gaa gcg gaa caa aaa cgt tta aaa act gta ctt gag ctc 480
Met Arg Glu Glu Ala Glu Gln Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu
145 150 155 160
cag tat gtt ttg gac aaa ttg gga gat gat gaa gtg aga act gac ctg 528
Gln Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu
165 170 175
aag caa ggt ttg aat gga gtg cca ata ttg tct gaa gaa gaa ttg tcg 576
Lys Gln Gly Leu Asn Gly Val Pro Ile Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser
180 185 190
ttg ttg gat gaa ttc tac aaa tta gca gac cct gaa cgg gac atg agc 624
Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser
195 200 205
ttg agg ttg aat gag cag tat gaa cat gct tcc att cac ctg tgg gac 672
Leu Arg Leu Asn Glu Gln Tyr Glu His Ala Ser Ile His Leu Trp Asp
210 215 220
ttg ctg gaa gga aag gaa aag tct gta tgt gga aca acc tat aaa gca 720
Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala
225 230 235 240
cta aag gaa att gtt gag cgt gtt ttc cag tca aat tac ttt gac agc 768
Leu Lys Glu Ile Val Glu Arg Val Phe Gln Ser Asn Tyr Phe Asp Ser
245 250 255
act cac aac cac cag aat ggg cta tgt gag gaa gaa gag gca gcc tca 816
Thr His Asn His Gln Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser
260 265 270
gca cct aca gtt gaa gac cag gta gct gaa gct gag cct gag cca gca 864
Ala Pro Thr Val Glu Asp Gln Val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala
275 280 285
gaa gaa tac act gaa caa agt gaa gtt gaa tca aca gag tat gta aat 912
Glu Glu Tyr Thr Glu Gln Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn
290 295 300
aga caa ttt atg gca gaa aca cag ttc agc agt ggt gaa aag gag cag 960
Arg Gln Phe Met Ala Glu Thr Gln Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gln
305 310 315 320
gta gat gag tgg acg gtc gaa aca gtg gag gtg gtg aat tca ctc cag 1008
Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gln
325 330 335
cag caa cct cag gct gcg tct cct tca gta cca gag ccc cac tct ttg 1056
Gln Gln Pro Gln Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu
340 345 350
act ccg gtg gct cag gca gat ccc ctt gtg aga aga cag cga gtc cag 1104
Thr Pro Val Ala Gln Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gln Arg Val Gln
355 360 365
gac ctt atg gcg cag atg cag ggg ccc tat aat ttc ata cag gat tca 1152
Asp Leu Met Ala Gln Met Gln Gly Pro Tyr Asn Phe Ile Gln Asp Ser
370 375 380
atg ctg gat ttt gaa aac cag aca ctc gat cct gcc att gta tct gca 1200
Met Leu Asp Phe Glu Asn Gln Thr Leu Asp Pro Ala Ile Val Ser Ala
385 390 395 400
cag cct atg aat ccg aca caa aac atg gac atg ccc cag ctg gtt tgc 1248
Gln Pro Met Asn Pro Thr Gln Asn Met Asp Met Pro Gln Leu Val Cys
405 410 415
cct cca gtt cat tct gaa tct aga ctt gct caa cct aat caa gtt cct 1296
Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gln Pro Asn Gln Val Pro
420 425 430
gta caa cca gaa gct aca cag gtt cct ttg gtt tca tcc aca agt gag 1344
Val Gln Pro Glu Ala Thr Gln Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu
435 440 445
ggg tat aca gca tct caa ccc ttg tac cag cct tct cat gct aca gag 1392
Gly Tyr Thr Ala Ser Gln Pro Leu Tyr Gln Pro Ser His Ala Thr Glu
450 455 460
caa cga cca caa aag gaa cca att gac cag att cag gca aca atc tct 1440
Gln Arg Pro Gln Lys Glu Pro Ile Asp Gln Ile Gln Ala Thr Ile Ser
465 470 475 480
tta aat aca gac cag act aca gcg tca tca tcc ctt ccg gct gct tct 1488
Leu Asn Thr Asp Gln Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser
485 490 495
cag cct cag gta ttc cag gct ggg aca agc aaa cca tta cat agc agt 1536
Gln Pro Gln Val Phe Gln Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser
500 505 510
gga atc aat gta aat gca gct cca ttc caa tcc atg caa acg gtg ttc 1584
Gly Ile Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gln Ser Met Gln Thr Val Phe
515 520 525
aat atg aat gcc cca gtt cct cct gtt aat gaa cca gaa act ttg aaa 1632
Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys
530 535 540
caa caa aat cag tac cag gcc agt tat aac cag agc ttt tct agt cag 1680
Gln Gln Asn Gln Tyr Gln Ala Ser Tyr Asn Gln Ser Phe Ser Ser Gln
545 550 555 560
cct cac caa gta gaa caa aca gac ctt cag caa gaa cag ctt caa aca 1728
Pro His Gln Val Glu Gln Thr Asp Leu Gln Gln Glu Gln Leu Gln Thr
565 570 575
gtg gtt ggc act tac cat ggt tcc cag gac cag ccc cac caa gtg act 1776
Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gln Asp Gln Pro His Gln Val Thr
580 585 590
ggt aac cat cag cag cct ccc cag cag aac act gga ttt cca cgt agc 1824
Gly Asn His Gln Gln Pro Pro Gln Gln Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser
595 600 605
agt cag ccc tat tac aat agt cgt ggt gtg tct cgt ggt ggt tcc cgt 1872
Ser Gln Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg
610 615 620
ggt gct aga ggc tta atg aat gga tac agg ggc cct gcc aat gga ttc 1920
Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe
625 630 635 640
aga gga gga tat gat ggt tac cgc cct tca ttc tct aac act cca aac 1968
Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn
645 650 655
agt ggt tat aca cag tct cag ttc agt gct ccc cgg gac tac tct ggc 2016
Ser Gly Tyr Thr Gln Ser Gln Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly
660 665 670
tat cag cgg gat gga tat cag cag aat ttc aag cga ggc tct ggg cag 2064
Tyr Gln Arg Asp Gly Tyr Gln Gln Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gln
675 680 685
agt gga cca cgg gga gcc cca cga ggt aat att ttg tgg tgg tga 2109
Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Asn Ile Leu Trp Trp
690 695 700
tcctagctcc taagtggagc ttctgttctg gccttggaag agctgttcca tagtctgcat 2169
gtaggttaca tgttaggaat acatttatca ttaccagact tgttgctagg gattaaatga 2229
aatgctctgt ttctaaaact tctcttgaac ccaaatttaa ttttttgaat gactttccct 2289
gttactatat aaattgtctt gaaaactaga acatttctcc tcctcagaaa aagtgttttt 2349
ccaactgcaa attatttttc aggtcctaaa acctgctaaa tgtttttagg aagtacttac 2409
tgaaacattt ttgtaagaca tttttggaat gagattgaac atttatataa atttattatt 2469
attcctcttt catttttgaa catgcatatt atattttagg gtcagaaatc ctttaatggc 2529
caaataagcc atagttacat ttagagaacc atttagaagt gatagaacta actgaaattt 2589
caatgccttt ggatcattaa tagcgatata aatttcaaat tgtttctgac ttttaaataa 2649
aacatccaaa atcctaacta acttcctgaa ctatatttaa aaattacagg tttaaggagt 2709
ttctggtttt ttttctctta ccataggaaa actgtttcct gtttggccag gaagtcaacc 2769
tgtgtaataa ttagaagtag catttcatat gatctgaagt tctaaatggt tctctgattt 2829
aagggaagtt aaattgaata ggtttcctct agttattggc cataacatgt ataaaatgta 2889
tattaaggag gaatacaaag tactttgatt tcaatgctag tagaaactgg ccagcaaaaa 2949
ggtgcatttt atttttaaat taatggatca cttgggaatt actgacttga agtatcaaag 3009
gatatttgca tgtgaatgtg ggttatgttc tttctcacct tgtagcatat tctatgaaag 3069
ttgagttgac tggtagctaa aaatctgttt taacagcatg taaaaagtta ttttatctgt 3129
tacaagtcat tatacaattt tgaatgttat gtagtttctt tttaacagtt taggtaacaa 3189
ggtctgtttt tcattctggt gcttttatta attttgatag tatgatgtta cttactactg 3249
aaatgtaagc tagagtgtac actagaatgt aagctccatg agagcaggta ccttgtctgt 3309
cttcactgct gtatctattt ccaacgcctg atgacagtgc ctgacacata gtaggcactc 3369
aataaatact tgttgaatga atgaatgaat gagtactggt ggaatactcc attagctcta 3429
ctcttctttt agctagagaa catgagcaaa tttgcgcatg acaacttcca ggacaggtga 3489
acactgaaga attgacctct taaacctaat aatgtggtga caagctgccc acatgcttct 3549
tgacttcaga tgaaaatctg cttgaaggca aagcaaataa tatttgaaag aaaaaccaaa 3609
tgccattttt gtcttctagg tcgtggaggg cccccaagac ccaacagagg gatgccgcaa 3669
atgaacactc agcaagtgaa ttaatctgat tcacaggatt atgtttaaac gccaaaaaca 3729
cactggccag tgtaccataa tatgttacca gaagagttat tatctatttg ttctcccttt 3789
caggaaactt attgtaaagg gactgttttc atcccataaa gacaggacta caattgtcag 3849
ctttatatta cctggatatg gaaggaaact atttttattc tgcatgttct tcctaagcgt 3909
catcttgagc cttgcacatg atactcagat tcctcaccct tgcttaggag taaaacataa 3969
tacactttac agggtgatat ctccatagtt atttgaagtg gcttggaaaa agcaagatta 4029
acttctgaca ttggataaaa atcaacaaat cagccctaga gttattcaaa tggtaattga 4089
caaaaactaa aatatttccc ttcgagaagg agtggaatgt ggtttggcag aacaactgca 4149
tttcacagct tttccggtta aattggagca ctaaacgttt agatgcatac caaattatgc 4209
atgggccctt aatataaaag gctggctacc agctttgaca cagcactatt catcctctgg 4269
ccaaacaact gtggttaaac aacacatgta aattgctttt taacagctga tactataata 4329
agacaaagcc aaaatgcaaa aattgggctt tgattggcac tttttgaaaa atatgcaaca 4389
aatatgggat gtaatctgga tggccgcttc tgtacttaat gtgaagtatt tagatacctt 4449
tttgaacact taacagtttc ttctgacaat gacttttgta aggattggta ctatctatca 4509
ttccttataa tgtacattgt ctgtcactaa tcctcagatc ttgctgtatt gtcacctaaa 4569
ttggtacagg tactgatgaa aatatctaat ggataatcat aacactcttg gtcacatgtt 4629
tttcctgcag cctgaaggtt tttaaaagaa aaagatatca aatgcctgct gctaccaccc 4689
ttttaaattg ctatcttttg aaaagcacca gtatgtgttt tagattgatt tccctatttt 4749
agggaaatga cagacagtag tttcagttct gatggtataa gcaaaacaaa taaaacatgt 4809
ttataaaagt tgtatcttga aacactggtg ttcaacagct agcagcttat gtggttcacc 4869
ccatgcattg ttagtgtttc agattttatg gttatctcca gcagctgttt ctgtagtact 4929
tgcatttatc 4939
<210> 10
<211> 702
<212> PRT
<213> Canis familiaris
<400> 10
Met Pro Ser Ala Thr Ser Leu Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly
1 5 10 15
Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ala Ala
20 25 30
Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gln
35 40 45
His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gln Thr Glu Ala Met Lys Gln
50 55 60
Ile Leu Gly Val Ile Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys
65 70 75 80
Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gln Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu
85 90 95
Asn Gln Asp Gln Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gln Glu Val Thr Asn
100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
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165 170 175
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180 185 190
Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser
195 200 205
Leu Arg Leu Asn Glu Gln Tyr Glu His Ala Ser Ile His Leu Trp Asp
210 215 220
Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala
225 230 235 240
Leu Lys Glu Ile Val Glu Arg Val Phe Gln Ser Asn Tyr Phe Asp Ser
245 250 255
Thr His Asn His Gln Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser
260 265 270
Ala Pro Thr Val Glu Asp Gln Val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala
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Glu Glu Tyr Thr Glu Gln Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn
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Arg Gln Phe Met Ala Glu Thr Gln Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gln
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Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gln
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Gln Gln Pro Gln Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu
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Thr Pro Val Ala Gln Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gln Arg Val Gln
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Asp Leu Met Ala Gln Met Gln Gly Pro Tyr Asn Phe Ile Gln Asp Ser
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Gln Pro Met Asn Pro Thr Gln Asn Met Asp Met Pro Gln Leu Val Cys
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Gln Arg Pro Gln Lys Glu Pro Ile Asp Gln Ile Gln Ala Thr Ile Ser
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Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ala Ala
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ggg gcg gcg ggg gcg gcg ggg gcc ggg gcg gct gcg ccc gcc tcc cag 144
Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gln
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ggc aag ctt gat gat tac cag gaa cga atg aac aaa ggg gaa agg ctt 288
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100 105 110
aac ttg gag ttt gca aaa gaa tta cag agg agt ttc atg gca tta agt 384
Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gln Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser
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caa gat att cag aaa aca ata aag aag act gca cgt cgg gag cag ctt 432
Gln Asp Ile Gln Lys Thr Ile Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gln Leu
130 135 140
atg aga gag gaa gcg gaa caa aaa cgt tta aaa act gta ctt gag ctc 480
Met Arg Glu Glu Ala Glu Gln Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu
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aag caa ggt ttg aat gga gtg cca ata ttg tct gaa gaa gaa ttg tcg 576
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ttg ctg gaa gga aag gaa aag tct gta tgt gga aca acc tat aaa gca 720
Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala
225 230 235 240
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gca cct aca gtt gaa gac cag gta gct gaa gct gag cct gag cca gca 864
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gaa gaa tac act gaa caa agt gaa gtt gaa tca aca gag tat gta aat 912
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Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gln
325 330 335
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Leu Asn Thr Asp Gln Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser
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cct cac caa gta gaa caa aca gac ctt cag caa gaa cag ctt caa aca 1728
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cataaagaca ggactacaat tgtcagcttt atattacctg gatatggaag gaaactattt 2250
ttattctgca tgttcttcct aagcgtcatc ttgagccttg cacatgatac tcagattcct 2310
cacccttgct taggagtaaa acataataca ctttacaggg tgatatctcc atagttattt 2370
gaagtggctt ggaaaaagca agattaactt ctgacattgg ataaaaatca acaaatcagc 2430
cctagagtta ttcaaatggt aattgacaaa aactaaaata tttcccttcg agaaggagtg 2490
gaatgtggtt tggcagaaca actgcatttc acagcttttc cggttaaatt ggagcactaa 2550
acgtttagat gcataccaaa ttatgcatgg gcccttaata taaaaggctg gctaccagct 2610
ttgacacagc actattcatc ctctggccaa acaactgtgg ttaaacaaca catgtaaatt 2670
gctttttaac agctgatact ataataagac aaagccaaaa tgcaaaaatt gggctttgat 2730
tggcactttt tgaaaaatat gcaacaaata tgggatgtaa tctggatggc cgcttctgta 2790
cttaatgtga agtatttaga tacctttttg aacacttaac agtttcttct gacaatgact 2850
tttgtaagga ttggtactat ctatcattcc ttataatgta cattgtctgt cactaatcct 2910
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aatcataaca ctcttggtca catgtttttc ctgcagcctg aaggttttta aaagaaaaag 3030
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gtgttttaga ttgatttccc tattttaggg aaatgacaga cagtagtttc agttctgatg 3150
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<221> CDS
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aat atg aat gcc cca gtt cct cct gtt aat gaa cca gaa act ttg aaa 1632
Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys
530 535 540
caa caa aat cag tac cag gcc agt tat aac cag agc ttt tct agt cag 1680
Gln Gln Asn Gln Tyr Gln Ala Ser Tyr Asn Gln Ser Phe Ser Ser Gln
545 550 555 560
cct cac caa gta gaa caa aca gac ctt cag caa gaa cag ctt caa aca 1728
Pro His Gln Val Glu Gln Thr Asp Leu Gln Gln Glu Gln Leu Gln Thr
565 570 575
gtg gtt ggc act tac cat ggt tcc cag gac cag ccc cac caa gtg act 1776
Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gln Asp Gln Pro His Gln Val Thr
580 585 590
ggt aac cat cag cag cct ccc cag cag aac act gga ttt cca cgt agc 1824
Gly Asn His Gln Gln Pro Pro Gln Gln Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser
595 600 605
agt cag ccc tat tac aat agt cgt ggt gtg tct cgt ggt ggt tcc cgt 1872
Ser Gln Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg
610 615 620
ggt gct aga ggc tta atg aat gga tac agg ggc cct gcc aat gga ttc 1920
Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe
625 630 635 640
aga gga gga tat gat ggt tac cgc cct tca ttc tct aac act cca aac 1968
Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn
645 650 655
agt ggt tat aca cag tct cag ttc agt gct ccc cgg gac tac tct ggc 2016
Ser Gly Tyr Thr Gln Ser Gln Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly
660 665 670
tat cag cgg gat gga tat cag cag aat ttc aag cga ggc tct ggg cag 2064
Tyr Gln Arg Asp Gly Tyr Gln Gln Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gln
675 680 685
agt gga cca cgg gga gcc cca cga ggt cgt gga ggg ccc cca aga ccc 2112
Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro
690 695 700
aac aga ggg atg ccg caa atg aac act cag caa gtg aat taa 2154
Asn Arg Gly Met Pro Gln Met Asn Thr Gln Gln Val Asn
705 710 715
tctgattcac aggattatgt ttaaacgcca aaaacacact ggccagtgta ccataatatg 2214
ttaccagaag agttattatc tatttggact gttttcatcc cataaagaca ggactacaat 2274
tgtcagc 2281
<210> 14
<211> 717
<212> PRT
<213> Canis familiaris
<400> 14
Met Pro Ser Ala Thr Ser Leu Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly
1 5 10 15
Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ala Ala
20 25 30
Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gln
35 40 45
His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gln Thr Glu Ala Met Lys Gln
50 55 60
Ile Leu Gly Val Ile Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys
65 70 75 80
Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gln Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu
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Asn Gln Asp Gln Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gln Glu Val Thr Asn
100 105 110
Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gln Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser
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Gln Asp Ile Gln Lys Thr Ile Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gln Leu
130 135 140
Met Arg Glu Glu Ala Glu Gln Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu
145 150 155 160
Gln Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu
165 170 175
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Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser
195 200 205
Leu Arg Leu Asn Glu Gln Tyr Glu His Ala Ser Ile His Leu Trp Asp
210 215 220
Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala
225 230 235 240
Leu Lys Glu Ile Val Glu Arg Val Phe Gln Ser Asn Tyr Phe Asp Ser
245 250 255
Thr His Asn His Gln Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser
260 265 270
Ala Pro Thr Val Glu Asp Gln Val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala
275 280 285
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Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gln
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435 440 445
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450 455 460
Gln Arg Pro Gln Lys Glu Pro Ile Asp Gln Ile Gln Ala Thr Ile Ser
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Leu Asn Thr Asp Gln Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser
485 490 495
Gln Pro Gln Val Phe Gln Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser
500 505 510
Gly Ile Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gln Ser Met Gln Thr Val Phe
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530 535 540
Gln Gln Asn Gln Tyr Gln Ala Ser Tyr Asn Gln Ser Phe Ser Ser Gln
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Pro His Gln Val Glu Gln Thr Asp Leu Gln Gln Glu Gln Leu Gln Thr
565 570 575
Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gln Asp Gln Pro His Gln Val Thr
580 585 590
Gly Asn His Gln Gln Pro Pro Gln Gln Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser
595 600 605
Ser Gln Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg
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Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe
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Ser Gly Tyr Thr Gln Ser Gln Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly
660 665 670
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675 680 685
Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro
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Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser
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Glu Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gln His Pro Met Thr
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ggc acc ggg gct gtc cag acc gag gcc atg aag cag att ctc ggg gtg 255
Gly Thr Gly Ala Val Gln Thr Glu Ala Met Lys Gln Ile Leu Gly Val
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Ile Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp
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aaa aca ata aag aag aca gca cgt cgg gag cag ctt atg aga gag gaa 495
Lys Thr Ile Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gln Leu Met Arg Glu Glu
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Ala Glu Gln Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gln Tyr Val Leu
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Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu Lys Gln Gly Leu
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ttc tac aaa tta gca gac cct gaa cga gac atg agc ttg agg ttg aat 687
Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn
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Lys Glu Lys Pro Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu Ile
220 225 230
gtt gag cgt gtt ttc cag tca aac tac ttt gac agc acc cac aac cac 831
Val Glu Arg Val Phe Gln Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His
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Gln Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val
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gaa gac cag gca gct gaa gct gaa cct gag cca gtg gaa gaa tat act 927
Glu Asp Gln Ala Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Val Glu Glu Tyr Thr
270 275 280
gaa caa aat gag gtt gaa tca aca gag tat gta aat aga caa ttt atg 975
Glu Gln Asn Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gln Phe Met
285 290 295
gca gaa aca cag ttc agc agt ggt gaa aag gag cag gta gat gat tgg 1023
Ala Glu Thr Gln Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gln Val Asp Asp Trp
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aca gtt gaa aca gtt gag gtg gta aat tca ctc cag cag caa cct cag 1071
Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gln Gln Gln Pro Gln
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Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala
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Gln Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gln Arg Val Gln Asp Leu Met Ala
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Gln Met Gln Gly Pro Tyr Asn Phe Ile Gln Asp Ser Met Leu Asp Phe
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Glu Asn Gln Thr Leu Asp Pro Ala Ile Val Ser Ala Gln Pro Met Asn
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cca gca cag aac atg gac ata ccc cag ctg gtt tgc cct cca gtt cat 1311
Pro Ala Gln Asn Met Asp Ile Pro Gln Leu Val Cys Pro Pro Val His
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Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gln Pro Asn Gln Val Ser Val Gln Pro Glu
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gct aca cag gtt cct ttg gtt tca tcc aca agt gag gga tat aca gca 1407
Ala Thr Gln Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala
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tct caa ccc ttg tac caa cct tct cat gct act gac caa cga cca caa 1455
Ser Gln Pro Leu Tyr Gln Pro Ser His Ala Thr Asp Gln Arg Pro Gln
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Lys Glu Pro Ile Asp Gln Ile Gln Ala Thr Ile Ser Leu Asn Thr Asp
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cag act aca gca tca tca tcc ctt cct gct gct tct cag cct caa gtg 1551
Gln Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gln Pro Gln Val
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ttc cag gct ggg aca agc aaa cct tta cat agc agt gga atc aat gta 1599
Phe Gln Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly Ile Asn Val
495 500 505
aat gca gct cca ttc caa tcc atg caa acg gta ttc aat atg aat gcc 1647
Asn Ala Ala Pro Phe Gln Ser Met Gln Thr Val Phe Asn Met Asn Ala
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Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gln Gln Asn Gln
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Tyr Gln Ala Ser Tyr Asn Gln Ser Phe Ser Ser Gln Pro His Gln Val
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gaa caa aca gag ctt cag caa gaa cag ctt caa aca gtg gtt ggc act 1791
Glu Gln Thr Glu Leu Gln Gln Glu Gln Leu Gln Thr Val Val Gly Thr
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tat cat ggt tct cag gac cag ccc cat caa gtg act ggt aac cac cag 1839
Tyr His Gly Ser Gln Asp Gln Pro His Gln Val Thr Gly Asn His Gln
575 580 585
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Gln Pro Pro Gln Gln Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn Gln Pro Tyr
590 595 600
tac aac agt cgt ggt gtg tct cgt gga ggt tcc cgt ggt gct aga ggc 1935
Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly
605 610 615
ttg atg aat gga tac aga gga cct gct aat gga ttc aga gga gga tat 1983
Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr
620 625 630
gat ggt tac cgc cct tca ttc tct act aac act cca aac agt ggt tat 2031
Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Thr Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr
635 640 645 650
aca caa tct caa ttc agt gct ccc cgg gac tac tct ggc tat cag cgg 2079
Thr Gln Ser Gln Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gln Arg
655 660 665
gat gga tat cag cag aat ttc aag cga ggc tct ggg cag agt gga cca 2127
Asp Gly Tyr Gln Gln Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gln Ser Gly Pro
670 675 680
cgg gga gcc cca cga ggt cgt gga ggg ccc cca aga ccc aac aga ggg 2175
Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly
685 690 695
atg ccg caa atg aac act cag caa gtg aat taa tctgattcac aggattatgt 2228
Met Pro Gln Met Asn Thr Gln Gln Val Asn
700 705
ttaatcgcca aaaacacact ggccagtgta ccataatatg ttaccagaag agttattatc 2288
tatttgttct ccctttcagg aaacttattg taaagggact gttttcatcc cataaagaca 2348
ggactacaat tgtcagcttt atattacctg gatatggaag gaaactattt ttactctgca 2408
tgttctgtcc taagcgtcat cttgagcctt gcacatgata ctcagattcc tcacccttgc 2468
ttaggagtaa aacataatat actttaatgg ggtgatatct ccatagttat ttgaagtggc 2528
ttggataaag caagactgac ttctgacatt ggataaaatc tacaaatcag ccctagagtc 2588
attcagtggt aactgacaaa actaaaatat ttcccttgaa aggaagatgg aaggagtgga 2648
gtgtggtttg gcagaacaac tgcatttcac agcttttcca cttaaattgg agcactgaac 2708
atttagatgc ataccgaatt atgcatgggc cctaatcaca cagacaaggc tggtgccagc 2768
cttaggcttg acacggcagt gttcaccctc tggccagacg actgtggttc aagacacatg 2828
taaattgctt tttaacagct gatactgtat aagacaaagc caaaatgcaa aattaggctt 2888
tgattggcac ttttcgaaaa atatgcaaca attaagggat ataatctgga tggccgcttc 2948
tgtacttaat gtgaaatatt tagatacctt tcaaacactt aacagtttct ttgacaatga 3008
gttttgtaag gattggtagt aaatatcatt ccttatgacg tacattgtct gtcactaatc 3068
cttggatctt gctgtattgt cacctaaatt ggtacaggta ctgatgaaaa tctaatggat 3128
aatcataaca ctcttggtta catgtttttc ctgcagcctg aaagttttta taagaaaaag 3188
acatcaaatg cctgctgctg ccaccctttt aaattgctat cttttgaaaa gcaccagtat 3248
gtgttttaga ttgatttccc tattttaggg aaatgacagt cagtagtttc acttctgatg 3308
gtataagcaa acaaataaaa catgtttata aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3368
aaaaaaaaaa aaaaaaaa 3386
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<211> 708
<212> PRT
<213> Bos taurus
<400> 16
Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly
1 5 10 15
Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Asn Glu Ala Gly Ala Gly Ala
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Ala Ala Pro Ala Ser Gln His Pro Met Thr Gly Thr Gly Ala Val Gln
35 40 45
Thr Glu Ala Met Lys Gln Ile Leu Gly Val Ile Asp Lys Lys Leu Arg
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Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gln Glu Arg Met
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Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gln Asp Gln Leu Asp Ala Val Ser Lys
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Tyr Gln Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gln Arg
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Ser Phe Met Ala Leu Ser Gln Asp Ile Gln Lys Thr Ile Lys Lys Thr
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Ala Arg Arg Glu Gln Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gln Lys Arg Leu
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Lys Thr Val Leu Glu Leu Gln Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp
145 150 155 160
Glu Val Arg Thr Asp Leu Lys Gln Gly Leu Asn Gly Val Pro Ile Leu
165 170 175
Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp
180 185 190
Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gln Tyr Glu His Ala
195 200 205
Ser Ile His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys
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Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu Ile Val Glu Arg Val Phe Gln
225 230 235 240
Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gln Asn Gly Leu Cys Glu
245 250 255
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275 280 285
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Ser Gly Glu Lys Glu Gln Val Asp Asp Trp Thr Val Glu Thr Val Glu
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Arg Arg Gln Arg Val Gln Asp Leu Met Ala Gln Met Gln Gly Pro Tyr
355 360 365
Asn Phe Ile Gln Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gln Thr Leu Asp
370 375 380
Pro Ala Ile Val Ser Ala Gln Pro Met Asn Pro Ala Gln Asn Met Asp
385 390 395 400
Ile Pro Gln Leu Val Cys Pro Pro Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala
405 410 415
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435 440 445
Pro Ser His Ala Thr Asp Gln Arg Pro Gln Lys Glu Pro Ile Asp Gln
450 455 460
Ile Gln Ala Thr Ile Ser Leu Asn Thr Asp Gln Thr Thr Ala Ser Ser
465 470 475 480
Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gln Pro Gln Val Phe Gln Ala Gly Thr Ser
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515 520 525
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530 535 540
Gln Ser Phe Ser Ser Gln Pro His Gln Val Glu Gln Thr Glu Leu Gln
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Gln Glu Gln Leu Gln Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gln Asp
565 570 575
Gln Pro His Gln Val Thr Gly Asn His Gln Gln Pro Pro Gln Gln Asn
580 585 590
Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn Gln Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val
595 600 605
Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg
610 615 620
Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser
625 630 635 640
Phe Ser Thr Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Thr Gln Ser Gln Phe Ser
645 650 655
Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gln Arg Asp Gly Tyr Gln Gln Asn
660 665 670
Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gln Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly
675 680 685
Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gln Met Asn Thr
690 695 700
Gln Gln Val Asn
705
<210> 17
<211> 3150
<212> DNA
<213> Equus caballus
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(1917)
<400> 17
atg gag ggc aag ctc gat gat tac caa gag cga atg aac aaa gga gaa 48
Met Glu Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gln Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu
1 5 10 15
agg ctt aat cag gat cag ctg gat gct gtg tct aag tac cag gaa gtc 96
Arg Leu Asn Gln Asp Gln Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gln Glu Val
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aca aat aac ttg gag ttt gcg aaa gaa ttg cag agg agt ttc atg gcg 144
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gag ctg cag tat gtt ttg gac aaa ttg gga gat gaa gaa gtg cga act 288
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85 90 95
gac ctg aaa caa ggt ttg aat gga gtg cca ata ctc tct gaa gaa gag 336
Asp Leu Lys Gln Gly Leu Asn Gly Val Pro Ile Leu Ser Glu Glu Glu
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ttg tcg ctg ttg gat gag ttc tac aag tta gca gac cct gta cgg gac 384
Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Val Arg Asp
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atg agc ttg agg ttg aat gag cag tat gag cat gcc tcc att cac ctg 432
Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gln Tyr Glu His Ala Ser Ile His Leu
130 135 140
tgg gac ttg ctg gaa ggg aag gaa aaa tct gtc tgt gga aca acc tat 480
Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr
145 150 155 160
aaa gct ctg agg gaa att gtt gag cgt gtt ttc cag tcc aac tac ttt 528
Lys Ala Leu Arg Glu Ile Val Glu Arg Val Phe Gln Ser Asn Tyr Phe
165 170 175
gac agc acc cac aac cac cag aat ggg ctc tgt gag gag gaa gag gct 576
Asp Ser Thr His Asn His Gln Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala
180 185 190
acc tca gct cca aca gct gaa gac cag gga gct gaa gct gaa cct gag 624
Thr Ser Ala Pro Thr Ala Glu Asp Gln Gly Ala Glu Ala Glu Pro Glu
195 200 205
cca gca gaa gaa tac act gaa caa agt gaa gtt gaa tca aca gag tat 672
Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gln Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr
210 215 220
gta aat aga cag ttt atg gca gaa gcg cag ttc agt ggt gag aag gag 720
Val Asn Arg Gln Phe Met Ala Glu Ala Gln Phe Ser Gly Glu Lys Glu
225 230 235 240
cag gtg gat gag tgg aca gtc gag acg gtc gag gtg gta aat tca ctc 768
Gln Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu
245 250 255
cag cag caa cct cag gct gca tct cct tca gta ccg gag ccc cac tct 816
Gln Gln Gln Pro Gln Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser
260 265 270
ttg act cca gtg gct cag gca gat ccc ctt gtg aga aga cag cga gta 864
Leu Thr Pro Val Ala Gln Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gln Arg Val
275 280 285
cag gac ctt atg gcg caa atg cag ggg ccc tat aat ttc ata cag gat 912
Gln Asp Leu Met Ala Gln Met Gln Gly Pro Tyr Asn Phe Ile Gln Asp
290 295 300
tca atg ctg gat ttt gaa aac cag aca ctt gat cct gcc att gta tct 960
Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gln Thr Leu Asp Pro Ala Ile Val Ser
305 310 315 320
gca cag cct atg aat cca gca cag aat atg gac atg ccc cag ctg gtt 1008
Ala Gln Pro Met Asn Pro Ala Gln Asn Met Asp Met Pro Gln Leu Val
325 330 335
tgc cct cca gtt cat gct gaa tct aga ctt gct caa cct aat caa gtt 1056
Cys Pro Pro Val His Ala Glu Ser Arg Leu Ala Gln Pro Asn Gln Val
340 345 350
cct gta caa cca gaa gct aca cag gtt cct ttg gtt tca tcc aca agt 1104
Pro Val Gln Pro Glu Ala Thr Gln Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser
355 360 365
gag ggg tat aca gca tct cag ccc ttg tac cag cct tct cat gct aca 1152
Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gln Pro Leu Tyr Gln Pro Ser His Ala Thr
370 375 380
gag caa cga ccg caa aag gaa ccg act gac cag atc cag gca aca atc 1200
Glu Gln Arg Pro Gln Lys Glu Pro Thr Asp Gln Ile Gln Ala Thr Ile
385 390 395 400
tct tta aat aca gac cag act aca gca tca tca tcc ctt cct gct gct 1248
Ser Leu Asn Thr Asp Gln Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala
405 410 415
tct cag cct cag gtg ttc cag gct ggg aca agc aaa cct tta cac agc 1296
Ser Gln Pro Gln Val Phe Gln Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser
420 425 430
agt ggg atc aat gta aat gca gcg cca ttc cag tcc atg caa acg gtg 1344
Ser Gly Ile Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gln Ser Met Gln Thr Val
435 440 445
ttc aac atg aat gcc ccg gtt cct cct gtt aat gaa cca gaa act tta 1392
Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu
450 455 460
aaa cag caa aat cag tac cag gcc agc tat aac cag agc ttt tcc agt 1440
Lys Gln Gln Asn Gln Tyr Gln Ala Ser Tyr Asn Gln Ser Phe Ser Ser
465 470 475 480
ccg cct cac caa gta gag cag aca gag ctt ccg caa gag cag ctt cag 1488
Pro Pro His Gln Val Glu Gln Thr Glu Leu Pro Gln Glu Gln Leu Gln
485 490 495
acg gtg gtt ggt act tac cat gct tcc caa gac cag ccc cat caa gtg 1536
Thr Val Val Gly Thr Tyr His Ala Ser Gln Asp Gln Pro His Gln Val
500 505 510
acc ggt aac cac cag cag cct ccc cag cag aac act ggg ttt cca cgt 1584
Thr Gly Asn His Gln Gln Pro Pro Gln Gln Asn Thr Gly Phe Pro Arg
515 520 525
agc agt cag ccc tat tac aac agt cgt ggt gtg tct cgt gga ggc tcc 1632
Ser Ser Gln Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser
530 535 540
cgt ggt gct aga ggc ttg atg aat gga tac agg ggc cct gcc aat gga 1680
Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly
545 550 555 560
ttc aga gga gga tat gat ggt tac cgc cct tcg ttc tct aac act cca 1728
Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro
565 570 575
aac agc ggt tac aca cag tct cag ttc agt gct ccc cgg gac tac tct 1776
Asn Ser Gly Tyr Thr Gln Ser Gln Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser
580 585 590
ggc tat cag cgg gat gga tat cag cag aat ttc aag cga ggc tct ggg 1824
Gly Tyr Gln Arg Asp Gly Tyr Gln Gln Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly
595 600 605
cag agt gga ccc cgg gga gcc cca cga ggt cgt gga ggg ccc cca aga 1872
Gln Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg
610 615 620
ccc aac aga ggg atg ccg caa atg aac act cag caa gtg aat taa 1917
Pro Asn Arg Gly Met Pro Gln Met Asn Thr Gln Gln Val Asn
625 630 635
tctgattcac aggattatct ttaatcgcca aaacacactg gccagtgtac cataatatgt 1977
taccagaaga gttattatct atttgttctc cctttcagga aacttattgt aaagggactg 2037
ttttcatccc ataaagacag gactacagtt gtcagcttta tattacctgg atatggaagg 2097
aaactatttt tactctgcat gttctgtcct aagcgtcatc ttgagccttg cacatgatac 2157
tcagattcct ttcccttgct taggagtaaa acataatata ctttatgggg tgataatatc 2217
tccatagtta tttgaagtgg cttggaaaaa gcaagattga cttttgacat tggataaaat 2277
ctacaaatca gccctagagt ttcatggtca ttcacaaaac taaaatattt cccttgaaag 2337
gaagatggaa ggactggagt gtggtttggc agaacaactg catttcacag cttttcctat 2397
taaattggag cactgaatgt taaatgcata ccaaattatg catgggccct taatcacaca 2457
tacatggcta ccagctttga cacagcacta ttcatcctct ggccaaacga ctgtggttaa 2517
aaacacgtgt aaattgcttt ttaacagctg atactgtaaa agacaaagct aaaatgcaaa 2577
attaggcttt cattggcact tttcgaaaaa tatgcaacaa atttgggatg taatctggat 2637
ggccacttct gtacttaatg tgaagtattt agataccttt ttgaacactt aacagtttct 2697
tcgacaatga cttttgtaag gattggtagt atatatcatt ccttatgaca tacattgtct 2757
gttgctaatc cttggatctt gctgtattgt cacctaaatt ggtacaggta ctgatgaaaa 2817
tctctcatgg ataaacctaa cactcttcgt cacatgtttt tcctgcagcc tgaaggtttt 2877
taaaaggaaa agatatcaaa tgcctgctgc taccaccctt ttaaattgct atcttttgaa 2937
aagcaccagt atgtgttttt agattgattt ccctatttta gggaaatgac agtcagtagt 2997
ttcagttctg atggtataag caaagcaaat aaaacgtgtt tataaaagtt gtatcttgaa 3057
acactggtgt tcaacagcta gcagcttctg tggttcaccc cctgccttgt tagtgttacc 3117
catttatggt tatctccagc agcaatttct cta 3150
<210> 18
<211> 638
<212> PRT
<213> Equus caballus
<400> 18
Met Glu Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gln Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu
1 5 10 15
Arg Leu Asn Gln Asp Gln Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gln Glu Val
20 25 30
Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gln Arg Ser Phe Met Ala
35 40 45
Leu Ser Gln Asp Ile Gln Lys Thr Ile Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu
50 55 60
Gln Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gln Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu
65 70 75 80
Glu Leu Gln Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Glu Glu Val Arg Thr
85 90 95
Asp Leu Lys Gln Gly Leu Asn Gly Val Pro Ile Leu Ser Glu Glu Glu
100 105 110
Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Val Arg Asp
115 120 125
Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gln Tyr Glu His Ala Ser Ile His Leu
130 135 140
Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Val Cys Gly Thr Thr Tyr
145 150 155 160
Lys Ala Leu Arg Glu Ile Val Glu Arg Val Phe Gln Ser Asn Tyr Phe
165 170 175
Asp Ser Thr His Asn His Gln Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala
180 185 190
Thr Ser Ala Pro Thr Ala Glu Asp Gln Gly Ala Glu Ala Glu Pro Glu
195 200 205
Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gln Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr
210 215 220
Val Asn Arg Gln Phe Met Ala Glu Ala Gln Phe Ser Gly Glu Lys Glu
225 230 235 240
Gln Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu
245 250 255
Gln Gln Gln Pro Gln Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser
260 265 270
Leu Thr Pro Val Ala Gln Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gln Arg Val
275 280 285
Gln Asp Leu Met Ala Gln Met Gln Gly Pro Tyr Asn Phe Ile Gln Asp
290 295 300
Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gln Thr Leu Asp Pro Ala Ile Val Ser
305 310 315 320
Ala Gln Pro Met Asn Pro Ala Gln Asn Met Asp Met Pro Gln Leu Val
325 330 335
Cys Pro Pro Val His Ala Glu Ser Arg Leu Ala Gln Pro Asn Gln Val
340 345 350
Pro Val Gln Pro Glu Ala Thr Gln Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser
355 360 365
Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gln Pro Leu Tyr Gln Pro Ser His Ala Thr
370 375 380
Glu Gln Arg Pro Gln Lys Glu Pro Thr Asp Gln Ile Gln Ala Thr Ile
385 390 395 400
Ser Leu Asn Thr Asp Gln Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala
405 410 415
Ser Gln Pro Gln Val Phe Gln Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser
420 425 430
Ser Gly Ile Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gln Ser Met Gln Thr Val
435 440 445
Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu
450 455 460
Lys Gln Gln Asn Gln Tyr Gln Ala Ser Tyr Asn Gln Ser Phe Ser Ser
465 470 475 480
Pro Pro His Gln Val Glu Gln Thr Glu Leu Pro Gln Glu Gln Leu Gln
485 490 495
Thr Val Val Gly Thr Tyr His Ala Ser Gln Asp Gln Pro His Gln Val
500 505 510
Thr Gly Asn His Gln Gln Pro Pro Gln Gln Asn Thr Gly Phe Pro Arg
515 520 525
Ser Ser Gln Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser
530 535 540
Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly
545 550 555 560
Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro
565 570 575
Asn Ser Gly Tyr Thr Gln Ser Gln Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser
580 585 590
Gly Tyr Gln Arg Asp Gly Tyr Gln Gln Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly
595 600 605
Gln Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg
610 615 620
Pro Asn Arg Gly Met Pro Gln Met Asn Thr Gln Gln Val Asn
625 630 635
<210> 19
<211> 6181
<212> DNA
<213> Mus musculus
<220>
<221> CDS
<222> (179)..(2302)
<400> 19
gctggctggc taagtccctc ccgcgccggc tcttgtccca ctaggagcag ctcagagccg 60
cggggacagg gcgaagcggc ctgcgcccac ggagcgcacg tctctgttct caacgcagca 120
ccacccttgc ccccctcggc tgcccactcc agacgtccag cggctccgcg cgcgcacg 178
atg ccc tcg gcc acc agc cac agc gga agc ggc agc aaa tcg tcg gga 226
Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly
1 5 10 15
ccg ccg ccg ccg tcc ggt tcc tcc ggg agt gag gcg gcg gcc ggg gca 274
Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala
20 25 30
gct gcg ccg gct tct cag cat ccg gca acc ggc acc ggc gcc gtc cag 322
Ala Ala Pro Ala Ser Gln His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gln
35 40 45
acc gag gcc atg aag cag att ctc ggc gta atc gac aag aaa ctt cgg 370
Thr Glu Ala Met Lys Gln Ile Leu Gly Val Ile Asp Lys Lys Leu Arg
50 55 60
aac ctg gag aag aaa aag ggt aaa ctt gat gat tac cag gaa cga atg 418
Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gln Glu Arg Met
65 70 75 80
aat aaa ggg gaa agg ctc aat caa gac cag ctg gat gcc gta tct aag 466
Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gln Asp Gln Leu Asp Ala Val Ser Lys
85 90 95
tac cag gaa gtc aca aat aat ttg gag ttt gca aag gaa tta cag agg 514
Tyr Gln Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gln Arg
100 105 110
agt ttc atg gca tta agt caa gat att cag aaa aca ata aag aag aca 562
Ser Phe Met Ala Leu Ser Gln Asp Ile Gln Lys Thr Ile Lys Lys Thr
115 120 125
gca cgt cgg gaa cag ctt atg aga gaa gaa gca gaa cag aag cgc tta 610
Ala Arg Arg Glu Gln Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gln Lys Arg Leu
130 135 140
aaa act gta ctt gag tta cag tat gta ttg gat aag ctg gga gat gat 658
Lys Thr Val Leu Glu Leu Gln Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp
145 150 155 160
gat gtg aga aca gat ctg aaa caa ggt ttg agt gga gtg cca ata ttg 706
Asp Val Arg Thr Asp Leu Lys Gln Gly Leu Ser Gly Val Pro Ile Leu
165 170 175
tct gag gag gag ttg tca ttg ctg gat gag ttc tac aag ctc gta gat 754
Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Asp
180 185 190
cct gag cgt gac atg agt tta agg tta aat gag cag tat gaa cat gcc 802
Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gln Tyr Glu His Ala
195 200 205
tca att cac ttg tgg gat ttg ctg gaa ggg aaa gaa aag cct gtg tgt 850
Ser Ile His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys
210 215 220
gga aca acc tat aaa gct cta aag gaa att gtt gag cgt gtt ttc cag 898
Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu Ile Val Glu Arg Val Phe Gln
225 230 235 240
tca aac tac ttt gat agc act cac aat cat caa aat ggg ttg tgt gag 946
Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gln Asn Gly Leu Cys Glu
245 250 255
gag gaa gag gcg gct tca gcg ccc aca gtg gag gac cag gta gct gaa 994
Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu Asp Gln Val Ala Glu
260 265 270
gct gaa cct gag cca gcg gaa gaa tac aca gag caa agt gag gtt gaa 1042
Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gln Ser Glu Val Glu
275 280 285
tca aca gag tat gtc aat agg cag ttc atg gca gaa aca cag ttc agc 1090
Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gln Phe Met Ala Glu Thr Gln Phe Ser
290 295 300
agt ggt gag aag gag caa gtg gat gag tgg aca gtt gaa aca gtt gag 1138
Ser Gly Glu Lys Glu Gln Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu
305 310 315 320
gtt gta aac tca ctc cag cag caa cct cag gct gcg tcc cct tca gtc 1186
Val Val Asn Ser Leu Gln Gln Gln Pro Gln Ala Ala Ser Pro Ser Val
325 330 335
cca gag ccc cac tct ttg act cca gtg gct cag tca gat cca ctt gtg 1234
Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gln Ser Asp Pro Leu Val
340 345 350
aga agg cag cgt gta caa gat ctt atg gca caa atg caa ggg ccc tat 1282
Arg Arg Gln Arg Val Gln Asp Leu Met Ala Gln Met Gln Gly Pro Tyr
355 360 365
aat ttc ata cag gat tca atg ttg gat ttt gaa aat cag acg ctt gat 1330
Asn Phe Ile Gln Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gln Thr Leu Asp
370 375 380
cct gcc att gta tcc gca cag cct atg aac cct acc cag aac atg gat 1378
Pro Ala Ile Val Ser Ala Gln Pro Met Asn Pro Thr Gln Asn Met Asp
385 390 395 400
atg cct cag ctg gtt tgc cct cag gtt cat tct gaa tct aga ctt gcc 1426
Met Pro Gln Leu Val Cys Pro Gln Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala
405 410 415
caa tct aat caa gtt cct gta caa cca gaa gcc aca cag gtt cct ttg 1474
Gln Ser Asn Gln Val Pro Val Gln Pro Glu Ala Thr Gln Val Pro Leu
420 425 430
gtt tca tcc aca agt gag ggg tat aca gca tct cag ccc ttg tac cag 1522
Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gln Pro Leu Tyr Gln
435 440 445
cca tct cat gct acg gag cag cgg ccg cag aaa gag cca atg gat cag 1570
Pro Ser His Ala Thr Glu Gln Arg Pro Gln Lys Glu Pro Met Asp Gln
450 455 460
att cag gca aca ata tct ttg aat aca gac cag act aca gca tcc tca 1618
Ile Gln Ala Thr Ile Ser Leu Asn Thr Asp Gln Thr Thr Ala Ser Ser
465 470 475 480
tcc ctt cct gct gct tct cag cct caa gtg ttc cag gct ggg aca agt 1666
Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gln Pro Gln Val Phe Gln Ala Gly Thr Ser
485 490 495
aaa cct ttg cac agc agt gga atc aat gta aat gca gct cca ttc cag 1714
Lys Pro Leu His Ser Ser Gly Ile Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gln
500 505 510
tcc atg caa acg gtg ttc aat atg aat gct cca gtc cct cct gct aat 1762
Ser Met Gln Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Ala Asn
515 520 525
gaa cca gaa acg tta aaa caa cag agt cag tac cag gcc act tat aac 1810
Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gln Gln Ser Gln Tyr Gln Ala Thr Tyr Asn
530 535 540
cag agt ttt tcc agt cag cct cac caa gtg gaa caa aca gag ctt caa 1858
Gln Ser Phe Ser Ser Gln Pro His Gln Val Glu Gln Thr Glu Leu Gln
545 550 555 560
caa gac caa ctg caa acg gtg gtt ggc act tac cat gga tcc cag gac 1906
Gln Asp Gln Leu Gln Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gln Asp
565 570 575
cag cct cat caa gtg cct ggt aac cac cag caa ccc cca cag cag aac 1954
Gln Pro His Gln Val Pro Gly Asn His Gln Gln Pro Pro Gln Gln Asn
580 585 590
act ggc ttt cca cgt agc agt cag cct tat tac aac agt cgt ggg gta 2002
Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gln Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val
595 600 605
tct cga gga ggg tct cgt ggt gcc aga ggc ttg atg aat gga tac agg 2050
Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg
610 615 620
ggc cct gcc aat gga ttt aga gga gga tat gat ggt tac cgc cct tca 2098
Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser
625 630 635 640
ttc tcg aac act cca aac agt ggt tat tca cag tct cag ttc act gct 2146
Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gln Ser Gln Phe Thr Ala
645 650 655
ccc cgg gac tac tct ggt tac cag cgg gat gga tat cag cag aat ttc 2194
Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gln Arg Asp Gly Tyr Gln Gln Asn Phe
660 665 670
aag cga ggc tct ggg cag agt gga cca cgg gga gcc cca cga ggt cgt 2242
Lys Arg Gly Ser Gly Gln Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg
675 680 685
gga ggg ccc cca aga ccc aac aga ggg atg ccg caa atg aac act cag 2290
Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gln Met Asn Thr Gln
690 695 700
caa gtg aat taa tgtgatacac aggattatgt ttaatcgcca aaaacacact 2342
Gln Val Asn
705
ggccagtgta ccataatatg ttaccagaag agttattatc tatttgttct ccctttcagg 2402
aaacttattg taaagggact gttttcatcc cataaagaca ggactgcaat tgtcagcttt 2462
acattacctg gatatggaag gaaactattt ttattctgca tgttctgtcc taagcgtcat 2522
cttgagcctt gcacacaata caatactcag attcctcacc cttgcttagg agtaaaacat 2582
tatatactta tggggtgata atatctccat agttagttga agtggcttgg aaaaaaaatg 2642
caagattgaa tttttgacct tggataaaat ctacaatcag ccctagaact attcagtggt 2702
aattgacaaa gttaaagcat tttctttgaa aggaagatgg aaggagtgga gtgtggttta 2762
gcaaaactgc atttcatagc tttcccatta aattggagca ccgacagatt aaaagcatac 2822
caaattatgc atgggtcctt actcacacaa gtgaggctgg ctaccagcct tgacatagca 2882
ctcactagtc ttctggccaa acgactgtga ttaaaacaca tgtaaattgc tctttagtag 2942
tggatactgt gtaagacaaa gccaaattgc aaatcaggct ttgattggct cttctggaaa 3002
atatgcatca aatatggggg ataatctgga tgggctgctg ctgtgctcaa tgtgaactat 3062
ttagatacct ttggaacact taacagtttc tctgaacaat gacttacatg gggattggtc 3122
ctgtttgtca ttcctcacca taattgcatt gtcatcacta atccttggat cttgctgtat 3182
tgttactcaa attggtaata ggtactgatg gaaatcgcta atggatggat aatcataaca 3242
cttttggtca catgttttct cctgcagcct gaaagttctt aaagaaaaag atatcaaatg 3302
cctgctgcta ccaccctttt aaattgctat ctttagaaaa gcaccggtat gtgttttaga 3362
ttcatttccc tgttttaggg aaatgacagg cagtagtttc agttctgatg gcaaaacaaa 3422
taaaaacatg tttctaaaag ttgtatcttg aaacactggt gttcaacagc tagcagctaa 3482
agtaattcaa cccatgcatt gctagtgtca cagcctttgg ttatgtctag tagctgtttc 3542
tgaagtattt tcatttatct tttgtcaaat ttaaccctgt ttgaattctc tcctttcctc 3602
aaggagacac ttatgttcaa agtgttgatt ctttgcctta ggtgcataga gagtagacag 3662
tttggagatg gaaaggttag cagtgactta gccatatgtt ctgtgttgga atttgtgcta 3722
gcagtttgag cactagctct gcgtgcctat gaactgaatg ctgcttgtcc cattccattt 3782
tatgtcatgg agaaataatt ccacttggta acacaaaggc taagttaatg ttattttctg 3842
tacagaaatt aaattttact tttagccttt tgtaaacttt tttttttttt ttccaagccg 3902
gtatcagcta ctcaaaacaa ttctcagata ttcatcatta gacaactgga gtttttgctg 3962
gttttgtagc ctactaaaac tgctgaggct gttgaacatt ccacattcaa aagttttgta 4022
gggtggtgga taatggggaa gcttcaatgt ttattttaaa ataaataaaa taagttcttg 4082
acttttctca tgtgtggtta tggtacatca tattggaagg gttatctgtt tacttttgcc 4142
aagactattt tgccagcacc tacacttgtg tgctttaaaa gacaactacc tgggatgtac 4202
cacaaccata tgttaattgt attttattgg gatggataaa atgtttgtgg tttattggat 4262
aatccctaga tggtgtgtta cgtgtgtaga atataatttt atgatagtaa gaaagcaaaa 4322
ttgaagaaaa taagtttagt attgaatttg agttctgaag tgaattcagg gaatgtctca 4382
cgtttcgggc ttctacccaa agtgtagggc agaaggtgta aaagttgttt gtagtttgac 4442
ttgtttattt tttaagttgc ttattccttt caacagcaac atatcattag ctgtcattct 4502
accattgcag ttctagtgag ttttaacgtc tgcattcaag actgttttaa aagcaacctc 4562
actggacaga gaactgctaa agtcttttcc ttaagatctg agtctttgtt actcagtatc 4622
ttctataata tgcaaatgct tgtctagagg cagaagacct tttgtttggt caagtgtgta 4682
ttttaccaga gtacagggaa ctgatggtcc tacatgtctc ttagtgtagt aagactataa 4742
aatcttttgt acatgcacaa ttcacagtat gtttagatac cacgtgtata atgccccccc 4802
ctcccccagg tagcatgcca ttgatgactt tttgcttagg gccattttat taccagggcc 4862
ttaatattcc taaaaagatg attttttttc atcctttctc ctcttttgat cattgtatct 4922
tgatattaaa aacatgacct tccaatgatt gtagtaaatt aacttctata gttcttttgt 4982
ctctatatgt attcatatat atgctattgt atagagactt caaggagaca tggagatgca 5042
tgcttattct caggttcatt cactaaggtg cttggcagac aaccagtttc taagtgcaga 5102
atgtagttaa gcagcttcat atatgtgcca ggcaatttgt tttgttaaat tttcatctac 5162
ttaaggaaat agggtattgt agcttaggct gatcataccc ttcatttcaa ccttaagctc 5222
tcaacctgca tccatccgac ttgagctatt aagtacttta gttttatcga gtataagtta 5282
acagaaaaag taaattaagc tttgccttta ctattttgaa tttatataca ttctggaaaa 5342
acttagaaac tgttgtatat ttcattagat taaattatat gaaaatgtga ttgtttatag 5402
caaagcctgt gagttgcata caccctaagg aaaactcctt aagtgctcct tgaagagaga 5462
agaaacaatt ctgggtctgg tctttttaag aacaaagcta gactactgta tgttagcact 5522
gtacattaat agtctgttgt gaagcttgag cagtttcctg catagccttg atccttcacc 5582
gttggcattg aaaatagcag tatccctgat gtacttaaaa cttaaagtca ggttttggta 5642
tatttatttg taagtcttaa tttcctctaa atactatatc tctttagcga gacaacctga 5702
aatttattag cacatttggg tatctcttgc ttggcattat ggccagtgtt aactattcag 5762
tggtgaaaaa attacccctc aagacactgg agtgacccca gatgtgtgta gtaagtggca 5822
tggttcaact gtgtggttaa tgataaatat atgacttagt cggtatgatc tggaaagact 5882
tgattgaaag ataattcagc tgacataagg atgagtgagg agtggcaaac tggataaaag 5942
agtcaagaga cctgtattcc agtgactcct gttttgttta agcattagca agatctgtct 6002
ggggaaactg gatagggcag ttttcttcca tgtttagttt ttgtctcaac atttggaagc 6062
tattgaaggt tttaaaatgg tgtgtattgt ttttttttgg ggggggggtg gccagaatag 6122
tgggtcatct aataaaactg ccatttaaaa gatcaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaa 6181
<210> 20
<211> 707
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 20
Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly
1 5 10 15
Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala
20 25 30
Ala Ala Pro Ala Ser Gln His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gln
35 40 45
Thr Glu Ala Met Lys Gln Ile Leu Gly Val Ile Asp Lys Lys Leu Arg
50 55 60
Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gln Glu Arg Met
65 70 75 80
Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gln Asp Gln Leu Asp Ala Val Ser Lys
85 90 95
Tyr Gln Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gln Arg
100 105 110
Ser Phe Met Ala Leu Ser Gln Asp Ile Gln Lys Thr Ile Lys Lys Thr
115 120 125
Ala Arg Arg Glu Gln Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gln Lys Arg Leu
130 135 140
Lys Thr Val Leu Glu Leu Gln Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp
145 150 155 160
Asp Val Arg Thr Asp Leu Lys Gln Gly Leu Ser Gly Val Pro Ile Leu
165 170 175
Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Asp
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Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gln Tyr Glu His Ala
195 200 205
Ser Ile His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys
210 215 220
Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu Ile Val Glu Arg Val Phe Gln
225 230 235 240
Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gln Asn Gly Leu Cys Glu
245 250 255
Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu Asp Gln Val Ala Glu
260 265 270
Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gln Ser Glu Val Glu
275 280 285
Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gln Phe Met Ala Glu Thr Gln Phe Ser
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Ser Gly Glu Lys Glu Gln Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu
305 310 315 320
Val Val Asn Ser Leu Gln Gln Gln Pro Gln Ala Ala Ser Pro Ser Val
325 330 335
Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gln Ser Asp Pro Leu Val
340 345 350
Arg Arg Gln Arg Val Gln Asp Leu Met Ala Gln Met Gln Gly Pro Tyr
355 360 365
Asn Phe Ile Gln Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gln Thr Leu Asp
370 375 380
Pro Ala Ile Val Ser Ala Gln Pro Met Asn Pro Thr Gln Asn Met Asp
385 390 395 400
Met Pro Gln Leu Val Cys Pro Gln Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala
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Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gln Pro Leu Tyr Gln
435 440 445
Pro Ser His Ala Thr Glu Gln Arg Pro Gln Lys Glu Pro Met Asp Gln
450 455 460
Ile Gln Ala Thr Ile Ser Leu Asn Thr Asp Gln Thr Thr Ala Ser Ser
465 470 475 480
Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gln Pro Gln Val Phe Gln Ala Gly Thr Ser
485 490 495
Lys Pro Leu His Ser Ser Gly Ile Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gln
500 505 510
Ser Met Gln Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Ala Asn
515 520 525
Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gln Gln Ser Gln Tyr Gln Ala Thr Tyr Asn
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Gln Ser Phe Ser Ser Gln Pro His Gln Val Glu Gln Thr Glu Leu Gln
545 550 555 560
Gln Asp Gln Leu Gln Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gln Asp
565 570 575
Gln Pro His Gln Val Pro Gly Asn His Gln Gln Pro Pro Gln Gln Asn
580 585 590
Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gln Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val
595 600 605
Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg
610 615 620
Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser
625 630 635 640
Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gln Ser Gln Phe Thr Ala
645 650 655
Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gln Arg Asp Gly Tyr Gln Gln Asn Phe
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Lys Arg Gly Ser Gly Gln Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg
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Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly
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Ser Lys Ser Ser Gly Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu
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Ala Ala Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gln His Pro Ala Thr Gly
30 35 40
acc ggc gcc gtc cag acc gag gcc atg aag cag att ctc ggc gta atc 315
Thr Gly Ala Val Gln Thr Glu Ala Met Lys Gln Ile Leu Gly Val Ile
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gac aag aaa ctt cgg aac ctg gag aag aaa aag ggt aaa ctt gat gat 363
Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp
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Tyr Gln Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gln Asp Gln Leu
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gat gcc gta tct aag tac cag gaa gtc aca aat aat ttg gag ttt gca 459
Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gln Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala
95 100 105
aag gaa tta cag agg agt ttc atg gca tta agt caa gat att cag aaa 507
Lys Glu Leu Gln Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gln Asp Ile Gln Lys
110 115 120
aca ata aag aag aca gca cgt cgg gaa cag ctt atg aga gaa gaa gca 555
Thr Ile Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gln Leu Met Arg Glu Glu Ala
125 130 135
gaa cag aag cgc tta aaa act gta ctt gag tta cag tat gta ttg gat 603
Glu Gln Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gln Tyr Val Leu Asp
140 145 150 155
aag ctg gga gat gat gat gtg aga aca gat ctg aaa caa ggt ttg agt 651
Lys Leu Gly Asp Asp Asp Val Arg Thr Asp Leu Lys Gln Gly Leu Ser
160 165 170
gga gtg cca ata ttg tct gag gag gag ttg tca ttg ctg gat gag ttc 699
Gly Val Pro Ile Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe
175 180 185
tac aag ctc gta gat cct gag cgt gac atg agt tta agg tta aat gag 747
Tyr Lys Leu Val Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu
190 195 200
cag tat gaa cat gcc tca att cac ttg tgg gat ttg ctg gaa ggg aaa 795
Gln Tyr Glu His Ala Ser Ile His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys
205 210 215
gaa aag cct gtg tgt gga aca acc tat aaa gct cta aag gaa att gtt 843
Glu Lys Pro Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu Ile Val
220 225 230 235
gag cgt gtt ttc cag tca aac tac ttt gat agc act cac aat cat caa 891
Glu Arg Val Phe Gln Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gln
240 245 250
aat ggg ttg tgt gag gag gaa gag gcg gct tca gcg ccc aca gtg gag 939
Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu
255 260 265
gac cag gta gct gaa gct gaa cct gag cca gcg gaa gaa tac aca gag 987
Asp Gln Val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu
270 275 280
caa agt gag gtt gaa tca aca gag tat gtc aat agg cag ttc atg gca 1035
Gln Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gln Phe Met Ala
285 290 295
gaa aca cag ttc agc agt ggt gag aag gag caa gtg gat gag tgg aca 1083
Glu Thr Gln Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gln Val Asp Glu Trp Thr
300 305 310 315
gtt gaa aca gtt gag gtt gta aac tca ctc cag cag caa cct cag gct 1131
Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gln Gln Gln Pro Gln Ala
320 325 330
gcg tcc cct tca gtc cca gag ccc cac tct ttg act cca gtg gct cag 1179
Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gln
335 340 345
tca gat cca ctt gtg aga agg cag cgt gta caa gat ctt atg gca caa 1227
Ser Asp Pro Leu Val Arg Arg Gln Arg Val Gln Asp Leu Met Ala Gln
350 355 360
atg caa ggg ccc tat aat ttc ata cag gat tca atg ttg gat ttt gaa 1275
Met Gln Gly Pro Tyr Asn Phe Ile Gln Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu
365 370 375
aat cag acg ctt gat cct gcc att gta tcc gca cag cct atg aac cct 1323
Asn Gln Thr Leu Asp Pro Ala Ile Val Ser Ala Gln Pro Met Asn Pro
380 385 390 395
acc cag aac atg gat atg cct cag ctg gtt tgc cct cag gtt cat tct 1371
Thr Gln Asn Met Asp Met Pro Gln Leu Val Cys Pro Gln Val His Ser
400 405 410
gaa tct aga ctt gcc caa tct aat caa gtt cct gta caa cca gaa gcc 1419
Glu Ser Arg Leu Ala Gln Ser Asn Gln Val Pro Val Gln Pro Glu Ala
415 420 425
aca cag gtt cct ttg gtt tca tcc aca agt gag ggg tat aca gca tct 1467
Thr Gln Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser
430 435 440
cag ccc ttg tac cag cca tct cat gct acg gag cag cgg ccg cag aaa 1515
Gln Pro Leu Tyr Gln Pro Ser His Ala Thr Glu Gln Arg Pro Gln Lys
445 450 455
gag cca atg gat cag att cag gca aca ata tct ttg aat aca gac cag 1563
Glu Pro Met Asp Gln Ile Gln Ala Thr Ile Ser Leu Asn Thr Asp Gln
460 465 470 475
act aca gca tcc tca tcc ctt cct gct gct tct cag cct caa gtg ttc 1611
Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gln Pro Gln Val Phe
480 485 490
cag gct ggg aca agt aaa cct ttg cac agc agt gga atc aat gta aat 1659
Gln Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly Ile Asn Val Asn
495 500 505
gca gct cca ttc cag tcc atg caa acg gtg ttc aat atg aat gct cca 1707
Ala Ala Pro Phe Gln Ser Met Gln Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro
510 515 520
gtc cct cct gct aat gaa cca gaa acg tta aaa caa cag agt cag tac 1755
Val Pro Pro Ala Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gln Gln Ser Gln Tyr
525 530 535
cag gcc act tat aac cag agt ttt tcc agt cag cct cac caa gtg gaa 1803
Gln Ala Thr Tyr Asn Gln Ser Phe Ser Ser Gln Pro His Gln Val Glu
540 545 550 555
caa aca gag ctt caa caa gac caa ctg caa acg gtg gtt ggc act tac 1851
Gln Thr Glu Leu Gln Gln Asp Gln Leu Gln Thr Val Val Gly Thr Tyr
560 565 570
cat gga tcc cag gac cag cct cat caa gtg cct ggt aac cac cag caa 1899
His Gly Ser Gln Asp Gln Pro His Gln Val Pro Gly Asn His Gln Gln
575 580 585
ccc cca cag cag aac act ggc ttt cca cgt agc agt cag cct tat tac 1947
Pro Pro Gln Gln Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gln Pro Tyr Tyr
590 595 600
aac agt cgt ggg gta tct cga gga ggg tct cgt ggt gcc aga ggc ttg 1995
Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu
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atg aat gga tac agg ggc cct gcc aat gga ttt aga gga gga tat gat 2043
Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp
620 625 630 635
ggt tac cgc cct tca ttc tcg aac act cca aac agt ggt tat tca cag 2091
Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gln
640 645 650
tct cag ttc act gct ccc cgg gac tac tct ggt tac cag cgg gat gga 2139
Ser Gln Phe Thr Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gln Arg Asp Gly
655 660 665
tat cag cag aat ttc aag cga ggc tct ggg cag agt gga cca cgg gga 2187
Tyr Gln Gln Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gln Ser Gly Pro Arg Gly
670 675 680
gcc cca cga ggt cgt gga ggg ccc cca aga ccc aac aga ggg atg ccg 2235
Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro
685 690 695
caa atg aac act cag caa gtg aat taa tgtgatacac aggattatgt 2282
Gln Met Asn Thr Gln Gln Val Asn
700 705
ttaatcgcca aaaacacact ggccagtgta ccataatatg ttaccagaag agttattatc 2342
tatttgttct ccctttcagg aaacttattg taaagggact gttttcatcc cataaagaca 2402
ggactgcaat tgtcagcttt acattacctg gatatggaag gaaactattt ttattctgca 2462
tgttctgtcc taagcgtcat cttgagcctt gcacacaata caatactcag attcctcacc 2522
cttgcttagg agtaaaacat tatatactta tggggtgata atatctccat agttagttga 2582
agtggcttgg aaaaaaaatg caagattgaa tttttgacct tggataaaat ctacaatcag 2642
ccctagaact attcagtggt aattgacaaa gttaaagcat tttctttgaa aggaagatgg 2702
aaggagtgga gtgtggttta gcaaaactgc atttcatagc tttcccatta aattggagca 2762
ccgacagatt aaaagcatac caaattatgc atgggtcctt actcacacaa gtgaggctgg 2822
ctaccagcct tgacatagca ctcactagtc ttctggccaa acgactgtga ttaaaacaca 2882
tgtaaattgc tctttagtag tggatactgt gtaagacaaa gccaaattgc aaatcaggct 2942
ttgattggct cttctggaaa atatgcatca aatatggggg ataatctgga tgggctgctg 3002
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gcaccggtat gtgttttaga ttcatttccc tgttttaggg aaatgacagg cagtagtttc 3362
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gacaactgga gtttttgctg gttttgtagc ctactaaaac tgctgaggct gttgaacatt 3962
ccacattcaa aagttttgta gggtggtgga taatggggaa gcttcaatgt ttattttaaa 4022
ataaataaaa taagttcttg acttttctca tgtgtggtta tggtacatca tattggaagg 4082
gttatctgtt tacttttgcc aagactattt tgccagcacc tacacttgtg tgctttaaaa 4142
gacaactacc tgggatgtac cacaaccata tgttaattgt attttattgg gatggataaa 4202
atgtttgtgg tttattggat aatccctaga tggtgtgtta cgtgtgtaga atataatttt 4262
atgatagtaa gaaagcaaaa ttgaagaaaa taagtttagt attgaatttg agttctgaag 4322
tgaattcagg gaatgtctca cgtttcgggc ttctacccaa agtgtagggc agaaggtgta 4382
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agtctttgtt actcagtatc ttctataata tgcaaatgct tgtctagagg cagaagacct 4622
tttgtttggt caagtgtgta ttttaccaga gtacagggaa ctgatggtcc tacatgtctc 4682
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tttgttaaat tttcatctac ttaaggaaat agggtattgt agcttaggct gatcataccc 5162
ttcatttcaa ccttaagctc tcaacctgca tccatccgac ttgagctatt aagtacttta 5222
gttttatcga gtataagtta acagaaaaag taaattaagc tttgccttta ctattttgaa 5282
tttatataca ttctggaaaa acttagaaac tgttgtatat ttcattagat taaattatat 5342
gaaaatgtga ttgtttatag caaagcctgt gagttgcata caccctaagg aaaactcctt 5402
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gactactgta tgttagcact gtacattaat agtctgttgt gaagcttgag cagtttcctg 5522
catagccttg atccttcacc gttggcattg aaaatagcag tatccctgat gtacttaaaa 5582
cttaaagtca ggttttggta tatttatttg taagtcttaa tttcctctaa atactatatc 5642
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Ala Arg Arg Glu Gln Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gln Lys Arg Leu
130 135 140
Lys Thr Val Leu Glu Leu Gln Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp
145 150 155 160
Asp Val Arg Thr Asp Leu Lys Gln Gly Leu Ser Gly Val Pro Ile Leu
165 170 175
Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Asp
180 185 190
Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gln Tyr Glu His Ala
195 200 205
Ser Ile His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys
210 215 220
Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu Ile Val Glu Arg Val Phe Gln
225 230 235 240
Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gln Asn Gly Leu Cys Glu
245 250 255
Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu Asp Gln Val Ala Glu
260 265 270
Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gln Ser Glu Val Glu
275 280 285
Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gln Phe Met Ala Glu Thr Gln Phe Ser
290 295 300
Ser Gly Glu Lys Glu Gln Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu
305 310 315 320
Val Val Asn Ser Leu Gln Gln Gln Pro Gln Ala Ala Ser Pro Ser Val
325 330 335
Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gln Ser Asp Pro Leu Val
340 345 350
Arg Arg Gln Arg Val Gln Asp Leu Met Ala Gln Met Gln Gly Pro Tyr
355 360 365
Asn Phe Ile Gln Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gln Thr Leu Asp
370 375 380
Pro Ala Ile Val Ser Ala Gln Pro Met Asn Pro Thr Gln Asn Met Asp
385 390 395 400
Met Pro Gln Leu Val Cys Pro Gln Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala
405 410 415
Gln Ser Asn Gln Val Pro Val Gln Pro Glu Ala Thr Gln Val Pro Leu
420 425 430
Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gln Pro Leu Tyr Gln
435 440 445
Pro Ser His Ala Thr Glu Gln Arg Pro Gln Lys Glu Pro Met Asp Gln
450 455 460
Ile Gln Ala Thr Ile Ser Leu Asn Thr Asp Gln Thr Thr Ala Ser Ser
465 470 475 480
Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gln Pro Gln Val Phe Gln Ala Gly Thr Ser
485 490 495
Lys Pro Leu His Ser Ser Gly Ile Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gln
500 505 510
Ser Met Gln Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Ala Asn
515 520 525
Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gln Gln Ser Gln Tyr Gln Ala Thr Tyr Asn
530 535 540
Gln Ser Phe Ser Ser Gln Pro His Gln Val Glu Gln Thr Glu Leu Gln
545 550 555 560
Gln Asp Gln Leu Gln Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gln Asp
565 570 575
Gln Pro His Gln Val Pro Gly Asn His Gln Gln Pro Pro Gln Gln Asn
580 585 590
Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gln Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val
595 600 605
Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg
610 615 620
Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser
625 630 635 640
Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gln Ser Gln Phe Thr Ala
645 650 655
Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gln Arg Asp Gly Tyr Gln Gln Asn Phe
660 665 670
Lys Arg Gly Ser Gly Gln Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg
675 680 685
Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gln Met Asn Thr Gln
690 695 700
Gln Val Asn
705
<210> 23
<211> 6114
<212> DNA
<213> Mus musculus
<220>
<221> CDS
<222> (139)..(2235)
<400> 23
cccaccgcgc gcgcgcgtag ccgcctgccc gcccgcccgc tgcgcgtttt gtcccgcgtc 60
tctccccgtc cgtctcctga cttgctggtc ttgtccttcc ctcccgcttt tttcctctcc 120
tctcttctcg gtctaaag atg ccc tcg gcc acc agc cac agc gga agc ggc 171
Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly
1 5 10
agc aaa tcg tcg gga ccg ccg ccg ccg tcc ggt tcc tcc ggg agt gag 219
Ser Lys Ser Ser Gly Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu
15 20 25
gcg gcg gcc ggg gca gct gcg ccg gct tct cag cat ccg gca acc ggc 267
Ala Ala Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gln His Pro Ala Thr Gly
30 35 40
acc ggc gcc gtc cag acc gag gcc atg aag cag att ctc ggc gta atc 315
Thr Gly Ala Val Gln Thr Glu Ala Met Lys Gln Ile Leu Gly Val Ile
45 50 55
gac aag aaa ctt cgg aac ctg gag aag aaa aag ggt aaa ctt gat gat 363
Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp
60 65 70 75
tac cag gaa cga atg aat aaa ggg gaa agg ctc aat caa gac cag ctg 411
Tyr Gln Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gln Asp Gln Leu
80 85 90
gat gcc gta tct aag tac cag gaa gtc aca aat aat ttg gag ttt gca 459
Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gln Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala
95 100 105
aag gaa tta cag agg agt ttc atg gca tta agt caa gat att cag aaa 507
Lys Glu Leu Gln Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gln Asp Ile Gln Lys
110 115 120
aca ata aag aag aca gca cgt cgg gaa cag ctt atg aga gaa gaa gca 555
Thr Ile Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gln Leu Met Arg Glu Glu Ala
125 130 135
gaa cag aag cgc tta aaa act gta ctt gag tta cag tat gta ttg gat 603
Glu Gln Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gln Tyr Val Leu Asp
140 145 150 155
aag ctg gga gat gat gat gtg aga aca gat ctg aaa caa ggt ttg agt 651
Lys Leu Gly Asp Asp Asp Val Arg Thr Asp Leu Lys Gln Gly Leu Ser
160 165 170
gga gtg cca ata ttg tct gag gag gag ttg tca ttg ctg gat gag ttc 699
Gly Val Pro Ile Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe
175 180 185
tac aag ctc gta gat cct gag cgt gac atg agt tta agg tta aat gag 747
Tyr Lys Leu Val Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu
190 195 200
cag tat gaa cat gcc tca att cac ttg tgg gat ttg ctg gaa ggg aaa 795
Gln Tyr Glu His Ala Ser Ile His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys
205 210 215
gaa aag cct gtg tgt gga aca acc tat aaa gct cta aag gaa att gtt 843
Glu Lys Pro Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu Ile Val
220 225 230 235
gag cgt gtt ttc cag tca aac tac ttt gat agc act cac aat cat caa 891
Glu Arg Val Phe Gln Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gln
240 245 250
aat ggg ttg tgt gag gag gaa gag gcg gct tca gcg ccc aca gtg gag 939
Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu
255 260 265
gac cag gta gct gaa gct gaa cct gag cca gcg gaa gaa tac aca gag 987
Asp Gln Val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu
270 275 280
caa agt gag gtt gaa tca aca gag tat gtc aat agg cag ttc atg gca 1035
Gln Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gln Phe Met Ala
285 290 295
gaa aca cag ttc agc agt ggt gag aag gag caa gtg gat gag tgg aca 1083
Glu Thr Gln Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gln Val Asp Glu Trp Thr
300 305 310 315
gtt gaa aca gtt gag gtt gta aac tca ctc cag cag caa cct cag gct 1131
Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gln Gln Gln Pro Gln Ala
320 325 330
gcg tcc cct tca gtc cca gag ccc cac tct ttg act cca gtg gct cag 1179
Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gln
335 340 345
tca gat cca ctt gtg aga agg cag cgt gta caa gat ctt atg gca caa 1227
Ser Asp Pro Leu Val Arg Arg Gln Arg Val Gln Asp Leu Met Ala Gln
350 355 360
atg caa ggg ccc tat aat ttc ata cag acg ctt gat cct gcc att gta 1275
Met Gln Gly Pro Tyr Asn Phe Ile Gln Thr Leu Asp Pro Ala Ile Val
365 370 375
tcc gca cag cct atg aac cct acc cag aac atg gat atg cct cag ctg 1323
Ser Ala Gln Pro Met Asn Pro Thr Gln Asn Met Asp Met Pro Gln Leu
380 385 390 395
gtt tgc cct cag gtt cat tct gaa tct aga ctt gcc caa tct aat caa 1371
Val Cys Pro Gln Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gln Ser Asn Gln
400 405 410
gtt cct gta caa cca gaa gcc aca cag gtt cct ttg gtt tca tcc aca 1419
Val Pro Val Gln Pro Glu Ala Thr Gln Val Pro Leu Val Ser Ser Thr
415 420 425
agt gag ggg tat aca gca tct cag ccc ttg tac cag cca tct cat gct 1467
Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gln Pro Leu Tyr Gln Pro Ser His Ala
430 435 440
acg gag cag cgg ccg cag aaa gag cca atg gat cag att cag gca aca 1515
Thr Glu Gln Arg Pro Gln Lys Glu Pro Met Asp Gln Ile Gln Ala Thr
445 450 455
ata tct ttg aat aca gac cag act aca gca tcc tca tcc ctt cct gct 1563
Ile Ser Leu Asn Thr Asp Gln Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala
460 465 470 475
gct tct cag cct caa gtg ttc cag gct ggg aca agt aaa cct ttg cac 1611
Ala Ser Gln Pro Gln Val Phe Gln Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His
480 485 490
agc agt gga atc aat gta aat gca gct cca ttc cag tcc atg caa acg 1659
Ser Ser Gly Ile Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gln Ser Met Gln Thr
495 500 505
gtg ttc aat atg aat gct cca gtc cct cct gct aat gaa cca gaa acg 1707
Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Ala Asn Glu Pro Glu Thr
510 515 520
tta aaa caa cag agt cag tac cag gcc act tat aac cag agt ttt tcc 1755
Leu Lys Gln Gln Ser Gln Tyr Gln Ala Thr Tyr Asn Gln Ser Phe Ser
525 530 535
agt cag cct cac caa gtg gaa caa aca gag ctt caa caa gac caa ctg 1803
Ser Gln Pro His Gln Val Glu Gln Thr Glu Leu Gln Gln Asp Gln Leu
540 545 550 555
caa acg gtg gtt ggc act tac cat gga tcc cag gac cag cct cat caa 1851
Gln Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gln Asp Gln Pro His Gln
560 565 570
gtg cct ggt aac cac cag caa ccc cca cag cag aac act ggc ttt cca 1899
Val Pro Gly Asn His Gln Gln Pro Pro Gln Gln Asn Thr Gly Phe Pro
575 580 585
cgt agc agt cag cct tat tac aac agt cgt ggg gta tct cga gga ggg 1947
Arg Ser Ser Gln Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly
590 595 600
tct cgt ggt gcc aga ggc ttg atg aat gga tac agg ggc cct gcc aat 1995
Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn
605 610 615
gga ttt aga gga gga tat gat ggt tac cgc cct tca ttc tcg aac act 2043
Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr
620 625 630 635
cca aac agt ggt tat tca cag tct cag ttc act gct ccc cgg gac tac 2091
Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gln Ser Gln Phe Thr Ala Pro Arg Asp Tyr
640 645 650
tct ggt tac cag cgg gat gga tat cag cag aat ttc aag cga ggc tct 2139
Ser Gly Tyr Gln Arg Asp Gly Tyr Gln Gln Asn Phe Lys Arg Gly Ser
655 660 665
ggg cag agt gga cca cgg gga gcc cca cga ggt cgt gga ggg ccc cca 2187
Gly Gln Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro
670 675 680
aga ccc aac aga ggg atg ccg caa atg aac act cag caa gtg aat taa 2235
Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gln Met Asn Thr Gln Gln Val Asn
685 690 695
tgtgatacac aggattatgt ttaatcgcca aaaacacact ggccagtgta ccataatatg 2295
ttaccagaag agttattatc tatttgttct ccctttcagg aaacttattg taaagggact 2355
gttttcatcc cataaagaca ggactgcaat tgtcagcttt acattacctg gatatggaag 2415
gaaactattt ttattctgca tgttctgtcc taagcgtcat cttgagcctt gcacacaata 2475
caatactcag attcctcacc cttgcttagg agtaaaacat tatatactta tggggtgata 2535
atatctccat agttagttga agtggcttgg aaaaaaaatg caagattgaa tttttgacct 2595
tggataaaat ctacaatcag ccctagaact attcagtggt aattgacaaa gttaaagcat 2655
tttctttgaa aggaagatgg aaggagtgga gtgtggttta gcaaaactgc atttcatagc 2715
tttcccatta aattggagca ccgacagatt aaaagcatac caaattatgc atgggtcctt 2775
actcacacaa gtgaggctgg ctaccagcct tgacatagca ctcactagtc ttctggccaa 2835
acgactgtga ttaaaacaca tgtaaattgc tctttagtag tggatactgt gtaagacaaa 2895
gccaaattgc aaatcaggct ttgattggct cttctggaaa atatgcatca aatatggggg 2955
ataatctgga tgggctgctg ctgtgctcaa tgtgaactat ttagatacct ttggaacact 3015
taacagtttc tctgaacaat gacttacatg gggattggtc ctgtttgtca ttcctcacca 3075
taattgcatt gtcatcacta atccttggat cttgctgtat tgttactcaa attggtaata 3135
ggtactgatg gaaatcgcta atggatggat aatcataaca cttttggtca catgttttct 3195
cctgcagcct gaaagttctt aaagaaaaag atatcaaatg cctgctgcta ccaccctttt 3255
aaattgctat ctttagaaaa gcaccggtat gtgttttaga ttcatttccc tgttttaggg 3315
aaatgacagg cagtagtttc agttctgatg gcaaaacaaa taaaaacatg tttctaaaag 3375
ttgtatcttg aaacactggt gttcaacagc tagcagctaa agtaattcaa cccatgcatt 3435
gctagtgtca cagcctttgg ttatgtctag tagctgtttc tgaagtattt tcatttatct 3495
tttgtcaaat ttaaccctgt ttgaattctc tcctttcctc aaggagacac ttatgttcaa 3555
agtgttgatt ctttgcctta ggtgcataga gagtagacag tttggagatg gaaaggttag 3615
cagtgactta gccatatgtt ctgtgttgga atttgtgcta gcagtttgag cactagctct 3675
gcgtgcctat gaactgaatg ctgcttgtcc cattccattt tatgtcatgg agaaataatt 3735
ccacttggta acacaaaggc taagttaatg ttattttctg tacagaaatt aaattttact 3795
tttagccttt tgtaaacttt tttttttttt ttccaagccg gtatcagcta ctcaaaacaa 3855
ttctcagata ttcatcatta gacaactgga gtttttgctg gttttgtagc ctactaaaac 3915
tgctgaggct gttgaacatt ccacattcaa aagttttgta gggtggtgga taatggggaa 3975
gcttcaatgt ttattttaaa ataaataaaa taagttcttg acttttctca tgtgtggtta 4035
tggtacatca tattggaagg gttatctgtt tacttttgcc aagactattt tgccagcacc 4095
tacacttgtg tgctttaaaa gacaactacc tgggatgtac cacaaccata tgttaattgt 4155
attttattgg gatggataaa atgtttgtgg tttattggat aatccctaga tggtgtgtta 4215
cgtgtgtaga atataatttt atgatagtaa gaaagcaaaa ttgaagaaaa taagtttagt 4275
attgaatttg agttctgaag tgaattcagg gaatgtctca cgtttcgggc ttctacccaa 4335
agtgtagggc agaaggtgta aaagttgttt gtagtttgac ttgtttattt tttaagttgc 4395
ttattccttt caacagcaac atatcattag ctgtcattct accattgcag ttctagtgag 4455
ttttaacgtc tgcattcaag actgttttaa aagcaacctc actggacaga gaactgctaa 4515
agtcttttcc ttaagatctg agtctttgtt actcagtatc ttctataata tgcaaatgct 4575
tgtctagagg cagaagacct tttgtttggt caagtgtgta ttttaccaga gtacagggaa 4635
ctgatggtcc tacatgtctc ttagtgtagt aagactataa aatcttttgt acatgcacaa 4695
ttcacagtat gtttagatac cacgtgtata atgccccccc ctcccccagg tagcatgcca 4755
ttgatgactt tttgcttagg gccattttat taccagggcc ttaatattcc taaaaagatg 4815
attttttttc atcctttctc ctcttttgat cattgtatct tgatattaaa aacatgacct 4875
tccaatgatt gtagtaaatt aacttctata gttcttttgt ctctatatgt attcatatat 4935
atgctattgt atagagactt caaggagaca tggagatgca tgcttattct caggttcatt 4995
cactaaggtg cttggcagac aaccagtttc taagtgcaga atgtagttaa gcagcttcat 5055
atatgtgcca ggcaatttgt tttgttaaat tttcatctac ttaaggaaat agggtattgt 5115
agcttaggct gatcataccc ttcatttcaa ccttaagctc tcaacctgca tccatccgac 5175
ttgagctatt aagtacttta gttttatcga gtataagtta acagaaaaag taaattaagc 5235
tttgccttta ctattttgaa tttatataca ttctggaaaa acttagaaac tgttgtatat 5295
ttcattagat taaattatat gaaaatgtga ttgtttatag caaagcctgt gagttgcata 5355
caccctaagg aaaactcctt aagtgctcct tgaagagaga agaaacaatt ctgggtctgg 5415
tctttttaag aacaaagcta gactactgta tgttagcact gtacattaat agtctgttgt 5475
gaagcttgag cagtttcctg catagccttg atccttcacc gttggcattg aaaatagcag 5535
tatccctgat gtacttaaaa cttaaagtca ggttttggta tatttatttg taagtcttaa 5595
tttcctctaa atactatatc tctttagcga gacaacctga aatttattag cacatttggg 5655
tatctcttgc ttggcattat ggccagtgtt aactattcag tggtgaaaaa attacccctc 5715
aagacactgg agtgacccca gatgtgtgta gtaagtggca tggttcaact gtgtggttaa 5775
tgataaatat atgacttagt cggtatgatc tggaaagact tgattgaaag ataattcagc 5835
tgacataagg atgagtgagg agtggcaaac tggataaaag agtcaagaga cctgtattcc 5895
agtgactcct gttttgttta agcattagca agatctgtct ggggaaactg gatagggcag 5955
ttttcttcca tgtttagttt ttgtctcaac atttggaagc tattgaaggt tttaaaatgg 6015
tgtgtattgt ttttttttgg ggggggggtg gccagaatag tgggtcatct aataaaactg 6075
ccatttaaaa gatcaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaa 6114
<210> 24
<211> 698
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 24
Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly
1 5 10 15
Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala
20 25 30
Ala Ala Pro Ala Ser Gln His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gln
35 40 45
Thr Glu Ala Met Lys Gln Ile Leu Gly Val Ile Asp Lys Lys Leu Arg
50 55 60
Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gln Glu Arg Met
65 70 75 80
Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gln Asp Gln Leu Asp Ala Val Ser Lys
85 90 95
Tyr Gln Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gln Arg
100 105 110
Ser Phe Met Ala Leu Ser Gln Asp Ile Gln Lys Thr Ile Lys Lys Thr
115 120 125
Ala Arg Arg Glu Gln Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gln Lys Arg Leu
130 135 140
Lys Thr Val Leu Glu Leu Gln Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp
145 150 155 160
Asp Val Arg Thr Asp Leu Lys Gln Gly Leu Ser Gly Val Pro Ile Leu
165 170 175
Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Asp
180 185 190
Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gln Tyr Glu His Ala
195 200 205
Ser Ile His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys
210 215 220
Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu Ile Val Glu Arg Val Phe Gln
225 230 235 240
Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gln Asn Gly Leu Cys Glu
245 250 255
Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu Asp Gln Val Ala Glu
260 265 270
Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gln Ser Glu Val Glu
275 280 285
Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gln Phe Met Ala Glu Thr Gln Phe Ser
290 295 300
Ser Gly Glu Lys Glu Gln Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu
305 310 315 320
Val Val Asn Ser Leu Gln Gln Gln Pro Gln Ala Ala Ser Pro Ser Val
325 330 335
Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gln Ser Asp Pro Leu Val
340 345 350
Arg Arg Gln Arg Val Gln Asp Leu Met Ala Gln Met Gln Gly Pro Tyr
355 360 365
Asn Phe Ile Gln Thr Leu Asp Pro Ala Ile Val Ser Ala Gln Pro Met
370 375 380
Asn Pro Thr Gln Asn Met Asp Met Pro Gln Leu Val Cys Pro Gln Val
385 390 395 400
His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gln Ser Asn Gln Val Pro Val Gln Pro
405 410 415
Glu Ala Thr Gln Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr
420 425 430
Ala Ser Gln Pro Leu Tyr Gln Pro Ser His Ala Thr Glu Gln Arg Pro
435 440 445
Gln Lys Glu Pro Met Asp Gln Ile Gln Ala Thr Ile Ser Leu Asn Thr
450 455 460
Asp Gln Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gln Pro Gln
465 470 475 480
Val Phe Gln Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly Ile Asn
485 490 495
Val Asn Ala Ala Pro Phe Gln Ser Met Gln Thr Val Phe Asn Met Asn
500 505 510
Ala Pro Val Pro Pro Ala Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gln Gln Ser
515 520 525
Gln Tyr Gln Ala Thr Tyr Asn Gln Ser Phe Ser Ser Gln Pro His Gln
530 535 540
Val Glu Gln Thr Glu Leu Gln Gln Asp Gln Leu Gln Thr Val Val Gly
545 550 555 560
Thr Tyr His Gly Ser Gln Asp Gln Pro His Gln Val Pro Gly Asn His
565 570 575
Gln Gln Pro Pro Gln Gln Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gln Pro
580 585 590
Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg
595 600 605
Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly
610 615 620
Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr
625 630 635 640
Ser Gln Ser Gln Phe Thr Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gln Arg
645 650 655
Asp Gly Tyr Gln Gln Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gln Ser Gly Pro
660 665 670
Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly
675 680 685
Met Pro Gln Met Asn Thr Gln Gln Val Asn
690 695
<210> 25
<211> 3548
<212> DNA
<213> Mus musculus
<220>
<221> CDS
<222> (179)..(2257)
<400> 25
gctggctggc taagtccctc ccgcgccggc tcttgtccca ctaggagcag ctcagagccg 60
cggggacagg gcgaagcggc ctgcgcccac ggagcgcacg tctctgttct caacgcagca 120
ccacccttgc ccccctcggc tgcccactcc agacgtccag cggctccgcg cgcgcacg 178
atg ccc tcg gcc acc agc cac agc gga agc ggc agc aaa tcg tcg gga 226
Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly
1 5 10 15
ccg ccg ccg ccg tcc ggt tcc tcc ggg agt gag gcg gcg gcc ggg gca 274
Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala
20 25 30
gct gcg ccg gct tct cag cat ccg gca acc ggc acc ggc gcc gtc cag 322
Ala Ala Pro Ala Ser Gln His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gln
35 40 45
acc gag gcc atg aag cag att ctc ggc gta atc gac aag aaa ctt cgg 370
Thr Glu Ala Met Lys Gln Ile Leu Gly Val Ile Asp Lys Lys Leu Arg
50 55 60
aac ctg gag aag aaa aag ggt aaa ctt gat gat tac cag gaa cga atg 418
Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gln Glu Arg Met
65 70 75 80
aat aaa ggg gaa agg ctc aat caa gac cag ctg gat gcc gta tct aag 466
Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gln Asp Gln Leu Asp Ala Val Ser Lys
85 90 95
tac cag gaa gtc aca aat aat ttg gag ttt gca aag gaa tta cag agg 514
Tyr Gln Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gln Arg
100 105 110
agt ttc atg gca tta agt caa gat att cag aaa aca ata aag aag aca 562
Ser Phe Met Ala Leu Ser Gln Asp Ile Gln Lys Thr Ile Lys Lys Thr
115 120 125
gca cgt cgg gaa cag ctt atg aga gaa gaa gca gaa cag aag cgc tta 610
Ala Arg Arg Glu Gln Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gln Lys Arg Leu
130 135 140
aaa act gta ctt gag tta cag tat gta ttg gat aag ctg gga gat gat 658
Lys Thr Val Leu Glu Leu Gln Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp
145 150 155 160
gat gtg aga aca gat ctg aaa caa ggt ttg agt gga gtg cca ata ttg 706
Asp Val Arg Thr Asp Leu Lys Gln Gly Leu Ser Gly Val Pro Ile Leu
165 170 175
tct gag gag gag ttg tca ttg ctg gat gag ttc tac aag ctc gta gat 754
Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Asp
180 185 190
cct gag cgt gac atg agt tta agg tta aat gag cag tat gaa cat gcc 802
Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gln Tyr Glu His Ala
195 200 205
tca att cac ttg tgg gat ttg ctg gaa ggg aaa gaa aag cct gtg tgt 850
Ser Ile His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys
210 215 220
gga aca acc tat aaa gct cta aag gaa att gtt gag cgt gtt ttc cag 898
Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu Ile Val Glu Arg Val Phe Gln
225 230 235 240
tca aac tac ttt gat agc act cac aat cat caa aat ggg ttg tgt gag 946
Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gln Asn Gly Leu Cys Glu
245 250 255
gag gaa gag gcg gct tca gcg ccc aca gtg gag gac cag gta gct gaa 994
Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu Asp Gln Val Ala Glu
260 265 270
gct gaa cct gag cca gcg gaa gaa tac aca gag caa agt gag gtt gaa 1042
Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gln Ser Glu Val Glu
275 280 285
tca aca gag tat gtc aat agg cag ttc atg gca gaa aca cag ttc agc 1090
Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gln Phe Met Ala Glu Thr Gln Phe Ser
290 295 300
agt ggt gag aag gag caa gtg gat gag tgg aca gtt gaa aca gtt gag 1138
Ser Gly Glu Lys Glu Gln Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu
305 310 315 320
gtt gta aac tca ctc cag cag caa cct cag gct gcg tcc cct tca gtc 1186
Val Val Asn Ser Leu Gln Gln Gln Pro Gln Ala Ala Ser Pro Ser Val
325 330 335
cca gag ccc cac tct ttg act cca gtg gct cag tca gat cca ctt gtg 1234
Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gln Ser Asp Pro Leu Val
340 345 350
aga agg cag cgt gta caa gat ctt atg gca caa atg caa ggg ccc tat 1282
Arg Arg Gln Arg Val Gln Asp Leu Met Ala Gln Met Gln Gly Pro Tyr
355 360 365
aat ttc ata cag gat tca atg ttg gat ttt gaa aat cag acg ctt gat 1330
Asn Phe Ile Gln Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gln Thr Leu Asp
370 375 380
cct gcc att gta tcc gca cag cct atg aac cct acc cag aac atg gat 1378
Pro Ala Ile Val Ser Ala Gln Pro Met Asn Pro Thr Gln Asn Met Asp
385 390 395 400
atg cct cag ctg gtt tgc cct cag gtt cat tct gaa tct aga ctt gcc 1426
Met Pro Gln Leu Val Cys Pro Gln Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala
405 410 415
caa tct aat caa gtt cct gta caa cca gaa gcc aca cag gtt cct ttg 1474
Gln Ser Asn Gln Val Pro Val Gln Pro Glu Ala Thr Gln Val Pro Leu
420 425 430
gtt tca tcc aca agt gag ggg tat aca gca tct cag ccc ttg tac cag 1522
Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gln Pro Leu Tyr Gln
435 440 445
cca tct cat gct acg gag cag cgg ccg cag aaa gag cca atg gat cag 1570
Pro Ser His Ala Thr Glu Gln Arg Pro Gln Lys Glu Pro Met Asp Gln
450 455 460
att cag gca aca ata tct ttg aat aca gac cag act aca gca tcc tca 1618
Ile Gln Ala Thr Ile Ser Leu Asn Thr Asp Gln Thr Thr Ala Ser Ser
465 470 475 480
tcc ctt cct gct gct tct cag cct caa gtg ttc cag gct ggg aca agt 1666
Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gln Pro Gln Val Phe Gln Ala Gly Thr Ser
485 490 495
aaa cct ttg cac agc agt gga atc aat gta aat gca gct cca ttc cag 1714
Lys Pro Leu His Ser Ser Gly Ile Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gln
500 505 510
tcc atg caa acg gtg ttc aat atg aat gct cca gtc cct cct gct aat 1762
Ser Met Gln Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Ala Asn
515 520 525
gaa cca gaa acg tta aaa caa cag agt cag tac cag gcc act tat aac 1810
Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gln Gln Ser Gln Tyr Gln Ala Thr Tyr Asn
530 535 540
cag agt ttt tcc agt cag cct cac caa gtg gaa caa aca gag ctt caa 1858
Gln Ser Phe Ser Ser Gln Pro His Gln Val Glu Gln Thr Glu Leu Gln
545 550 555 560
caa gac caa ctg caa acg gtg gtt ggc act tac cat gga tcc cag gac 1906
Gln Asp Gln Leu Gln Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gln Asp
565 570 575
cag cct cat caa gtg cct ggt aac cac cag caa ccc cca cag cag aac 1954
Gln Pro His Gln Val Pro Gly Asn His Gln Gln Pro Pro Gln Gln Asn
580 585 590
act ggc ttt cca cgt agc agt cag cct tat tac aac agt cgt ggg gta 2002
Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gln Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val
595 600 605
tct cga gga ggg tct cgt ggt gcc aga ggc ttg atg aat gga tac agg 2050
Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg
610 615 620
ggc cct gcc aat gga ttt aga gga gga tat gat ggt tac cgc cct tca 2098
Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser
625 630 635 640
ttc tcg aac act cca aac agt ggt tat tca cag tct cag ttc act gct 2146
Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gln Ser Gln Phe Thr Ala
645 650 655
ccc cgg gac tac tct ggt tac cag cgg gat gga tat cag cag aat ttc 2194
Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gln Arg Asp Gly Tyr Gln Gln Asn Phe
660 665 670
aag cga ggc tct ggg cag agt gga cca cgg gga gcc cca cga ggt aat 2242
Lys Arg Gly Ser Gly Gln Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Asn
675 680 685
ata ttg tgg tgg tga tcctagctcc tatgtggagc ttctgttctg gccttggaag 2297
Ile Leu Trp Trp
690
aactgttcat agtccgcatg taggttacat gttaggaata catttatctt ttccagactt 2357
gttgctaaag attaaatgaa atgctctgtt tctaaaattt catcttgaat ccaaatttta 2417
atttttgaat gactttccct gctgttgtct tcaaaatcag aacattttct ctgcctcaga 2477
aaagcgtttt tccaactgga aatttatttt tcaggtctta aaacctgcta aatgttttta 2537
ggaagtacct actgaaactt tttgtaagac atttttggaa cgagcttgaa catttatata 2597
aatttattac cctctttgat ttttgaaaca tgcatattat atttaggctg agaagccctt 2657
caaatggcca gataagccac agttttagct agagaaccat ttagaattga cataactaat 2717
ctaaacttga acacttttag gaccaatgtt agtgttctaa ataccaacat atttctgatg 2777
tttaaacaga tctcccaaat tcttaggacc ttgatgtcat taaaatttag aatgacaagc 2837
ttaagaggct ttagtttcat ttgtttttca agtaatgaaa aataatttct tacatgggca 2897
gatagttaat ttgttgaaca attacaggta gcatttcatg taatctgatg ttctaaatgg 2957
ttctcttatt gaaggaggtt aaagaattag gtttcttaca gtttttggct ggccatgaca 3017
tgtataaaat gtatattaag gaggaattat aaagtacttt aatttgaatg ctagtggcaa 3077
ttgatcatta agaaagtact ttaaagcaaa aggttaatgg gtcatctggg aaaaatactg 3137
aagtatcaaa ggtatttgca tgtgaatgtg ggttatgttc ttctatccca ccttgtagca 3197
tattctatga aagttgagtt aaatgatagc taaaatatct gtttcaacag catgtaaaaa 3257
gttattttaa ctgttacaag tcattataca attttgaatg ttctgtagtt tctttttaac 3317
agtttaggta caaaggtctg ttttcattct ggtgcttttt attaattttg atagtatgat 3377
gtcacttcct attgaaatgt aagctagcgt gtaccttaga atgtgagctc catgagagca 3437
ggtaccttgt ttgtcttcac tgctgtatct attcccaacg cctcatgaca gtgcctggca 3497
catagtaggc actcaataaa tacttgttga atgaatgaaa aaaaaaaaaa a 3548
<210> 26
<211> 692
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 26
Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly
1 5 10 15
Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala
20 25 30
Ala Ala Pro Ala Ser Gln His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gln
35 40 45
Thr Glu Ala Met Lys Gln Ile Leu Gly Val Ile Asp Lys Lys Leu Arg
50 55 60
Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gln Glu Arg Met
65 70 75 80
Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gln Asp Gln Leu Asp Ala Val Ser Lys
85 90 95
Tyr Gln Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gln Arg
100 105 110
Ser Phe Met Ala Leu Ser Gln Asp Ile Gln Lys Thr Ile Lys Lys Thr
115 120 125
Ala Arg Arg Glu Gln Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gln Lys Arg Leu
130 135 140
Lys Thr Val Leu Glu Leu Gln Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp
145 150 155 160
Asp Val Arg Thr Asp Leu Lys Gln Gly Leu Ser Gly Val Pro Ile Leu
165 170 175
Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Asp
180 185 190
Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gln Tyr Glu His Ala
195 200 205
Ser Ile His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys
210 215 220
Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu Ile Val Glu Arg Val Phe Gln
225 230 235 240
Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gln Asn Gly Leu Cys Glu
245 250 255
Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu Asp Gln Val Ala Glu
260 265 270
Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gln Ser Glu Val Glu
275 280 285
Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gln Phe Met Ala Glu Thr Gln Phe Ser
290 295 300
Ser Gly Glu Lys Glu Gln Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu
305 310 315 320
Val Val Asn Ser Leu Gln Gln Gln Pro Gln Ala Ala Ser Pro Ser Val
325 330 335
Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gln Ser Asp Pro Leu Val
340 345 350
Arg Arg Gln Arg Val Gln Asp Leu Met Ala Gln Met Gln Gly Pro Tyr
355 360 365
Asn Phe Ile Gln Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gln Thr Leu Asp
370 375 380
Pro Ala Ile Val Ser Ala Gln Pro Met Asn Pro Thr Gln Asn Met Asp
385 390 395 400
Met Pro Gln Leu Val Cys Pro Gln Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala
405 410 415
Gln Ser Asn Gln Val Pro Val Gln Pro Glu Ala Thr Gln Val Pro Leu
420 425 430
Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gln Pro Leu Tyr Gln
435 440 445
Pro Ser His Ala Thr Glu Gln Arg Pro Gln Lys Glu Pro Met Asp Gln
450 455 460
Ile Gln Ala Thr Ile Ser Leu Asn Thr Asp Gln Thr Thr Ala Ser Ser
465 470 475 480
Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gln Pro Gln Val Phe Gln Ala Gly Thr Ser
485 490 495
Lys Pro Leu His Ser Ser Gly Ile Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gln
500 505 510
Ser Met Gln Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Ala Asn
515 520 525
Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gln Gln Ser Gln Tyr Gln Ala Thr Tyr Asn
530 535 540
Gln Ser Phe Ser Ser Gln Pro His Gln Val Glu Gln Thr Glu Leu Gln
545 550 555 560
Gln Asp Gln Leu Gln Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gln Asp
565 570 575
Gln Pro His Gln Val Pro Gly Asn His Gln Gln Pro Pro Gln Gln Asn
580 585 590
Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gln Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val
595 600 605
Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg
610 615 620
Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser
625 630 635 640
Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gln Ser Gln Phe Thr Ala
645 650 655
Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gln Arg Asp Gly Tyr Gln Gln Asn Phe
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Lys Arg Gly Ser Gly Gln Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Asn
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Ile Leu Trp Trp
690
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<211> 3508
<212> DNA
<213> Mus musculus
<220>
<221> CDS
<222> (139)..(2217)
<400> 27
cccaccgcgc gcgcgcgtag ccgcctgccc gcccgcccgc tgcgcgtttt gtcccgcgtc 60
tctccccgtc cgtctcctga cttgctggtc ttgtccttcc ctcccgcttt tttcctctcc 120
tctcttctcg gtctaaag atg ccc tcg gcc acc agc cac agc gga agc ggc 171
Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly
1 5 10
agc aaa tcg tcg gga ccg ccg ccg ccg tcc ggt tcc tcc ggg agt gag 219
Ser Lys Ser Ser Gly Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu
15 20 25
gcg gcg gcc ggg gca gct gcg ccg gct tct cag cat ccg gca acc ggc 267
Ala Ala Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gln His Pro Ala Thr Gly
30 35 40
acc ggc gcc gtc cag acc gag gcc atg aag cag att ctc ggc gta atc 315
Thr Gly Ala Val Gln Thr Glu Ala Met Lys Gln Ile Leu Gly Val Ile
45 50 55
gac aag aaa ctt cgg aac ctg gag aag aaa aag ggt aaa ctt gat gat 363
Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp
60 65 70 75
tac cag gaa cga atg aat aaa ggg gaa agg ctc aat caa gac cag ctg 411
Tyr Gln Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gln Asp Gln Leu
80 85 90
gat gcc gta tct aag tac cag gaa gtc aca aat aat ttg gag ttt gca 459
Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gln Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala
95 100 105
aag gaa tta cag agg agt ttc atg gca tta agt caa gat att cag aaa 507
Lys Glu Leu Gln Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gln Asp Ile Gln Lys
110 115 120
aca ata aag aag aca gca cgt cgg gaa cag ctt atg aga gaa gaa gca 555
Thr Ile Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gln Leu Met Arg Glu Glu Ala
125 130 135
gaa cag aag cgc tta aaa act gta ctt gag tta cag tat gta ttg gat 603
Glu Gln Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu Leu Gln Tyr Val Leu Asp
140 145 150 155
aag ctg gga gat gat gat gtg aga aca gat ctg aaa caa ggt ttg agt 651
Lys Leu Gly Asp Asp Asp Val Arg Thr Asp Leu Lys Gln Gly Leu Ser
160 165 170
gga gtg cca ata ttg tct gag gag gag ttg tca ttg ctg gat gag ttc 699
Gly Val Pro Ile Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe
175 180 185
tac aag ctc gta gat cct gag cgt gac atg agt tta agg tta aat gag 747
Tyr Lys Leu Val Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu
190 195 200
cag tat gaa cat gcc tca att cac ttg tgg gat ttg ctg gaa ggg aaa 795
Gln Tyr Glu His Ala Ser Ile His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys
205 210 215
gaa aag cct gtg tgt gga aca acc tat aaa gct cta aag gaa att gtt 843
Glu Lys Pro Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu Ile Val
220 225 230 235
gag cgt gtt ttc cag tca aac tac ttt gat agc act cac aat cat caa 891
Glu Arg Val Phe Gln Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gln
240 245 250
aat ggg ttg tgt gag gag gaa gag gcg gct tca gcg ccc aca gtg gag 939
Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu
255 260 265
gac cag gta gct gaa gct gaa cct gag cca gcg gaa gaa tac aca gag 987
Asp Gln Val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu
270 275 280
caa agt gag gtt gaa tca aca gag tat gtc aat agg cag ttc atg gca 1035
Gln Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gln Phe Met Ala
285 290 295
gaa aca cag ttc agc agt ggt gag aag gag caa gtg gat gag tgg aca 1083
Glu Thr Gln Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gln Val Asp Glu Trp Thr
300 305 310 315
gtt gaa aca gtt gag gtt gta aac tca ctc cag cag caa cct cag gct 1131
Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu Gln Gln Gln Pro Gln Ala
320 325 330
gcg tcc cct tca gtc cca gag ccc cac tct ttg act cca gtg gct cag 1179
Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gln
335 340 345
tca gat cca ctt gtg aga agg cag cgt gta caa gat ctt atg gca caa 1227
Ser Asp Pro Leu Val Arg Arg Gln Arg Val Gln Asp Leu Met Ala Gln
350 355 360
atg caa ggg ccc tat aat ttc ata cag gat tca atg ttg gat ttt gaa 1275
Met Gln Gly Pro Tyr Asn Phe Ile Gln Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu
365 370 375
aat cag acg ctt gat cct gcc att gta tcc gca cag cct atg aac cct 1323
Asn Gln Thr Leu Asp Pro Ala Ile Val Ser Ala Gln Pro Met Asn Pro
380 385 390 395
acc cag aac atg gat atg cct cag ctg gtt tgc cct cag gtt cat tct 1371
Thr Gln Asn Met Asp Met Pro Gln Leu Val Cys Pro Gln Val His Ser
400 405 410
gaa tct aga ctt gcc caa tct aat caa gtt cct gta caa cca gaa gcc 1419
Glu Ser Arg Leu Ala Gln Ser Asn Gln Val Pro Val Gln Pro Glu Ala
415 420 425
aca cag gtt cct ttg gtt tca tcc aca agt gag ggg tat aca gca tct 1467
Thr Gln Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser
430 435 440
cag ccc ttg tac cag cca tct cat gct acg gag cag cgg ccg cag aaa 1515
Gln Pro Leu Tyr Gln Pro Ser His Ala Thr Glu Gln Arg Pro Gln Lys
445 450 455
gag cca atg gat cag att cag gca aca ata tct ttg aat aca gac cag 1563
Glu Pro Met Asp Gln Ile Gln Ala Thr Ile Ser Leu Asn Thr Asp Gln
460 465 470 475
act aca gca tcc tca tcc ctt cct gct gct tct cag cct caa gtg ttc 1611
Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gln Pro Gln Val Phe
480 485 490
cag gct ggg aca agt aaa cct ttg cac agc agt gga atc aat gta aat 1659
Gln Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly Ile Asn Val Asn
495 500 505
gca gct cca ttc cag tcc atg caa acg gtg ttc aat atg aat gct cca 1707
Ala Ala Pro Phe Gln Ser Met Gln Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro
510 515 520
gtc cct cct gct aat gaa cca gaa acg tta aaa caa cag agt cag tac 1755
Val Pro Pro Ala Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gln Gln Ser Gln Tyr
525 530 535
cag gcc act tat aac cag agt ttt tcc agt cag cct cac caa gtg gaa 1803
Gln Ala Thr Tyr Asn Gln Ser Phe Ser Ser Gln Pro His Gln Val Glu
540 545 550 555
caa aca gag ctt caa caa gac caa ctg caa acg gtg gtt ggc act tac 1851
Gln Thr Glu Leu Gln Gln Asp Gln Leu Gln Thr Val Val Gly Thr Tyr
560 565 570
cat gga tcc cag gac cag cct cat caa gtg cct ggt aac cac cag caa 1899
His Gly Ser Gln Asp Gln Pro His Gln Val Pro Gly Asn His Gln Gln
575 580 585
ccc cca cag cag aac act ggc ttt cca cgt agc agt cag cct tat tac 1947
Pro Pro Gln Gln Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gln Pro Tyr Tyr
590 595 600
aac agt cgt ggg gta tct cga gga ggg tct cgt ggt gcc aga ggc ttg 1995
Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu
605 610 615
atg aat gga tac agg ggc cct gcc aat gga ttt aga gga gga tat gat 2043
Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp
620 625 630 635
ggt tac cgc cct tca ttc tcg aac act cca aac agt ggt tat tca cag 2091
Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gln
640 645 650
tct cag ttc act gct ccc cgg gac tac tct ggt tac cag cgg gat gga 2139
Ser Gln Phe Thr Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gln Arg Asp Gly
655 660 665
tat cag cag aat ttc aag cga ggc tct ggg cag agt gga cca cgg gga 2187
Tyr Gln Gln Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gln Ser Gly Pro Arg Gly
670 675 680
gcc cca cga ggt aat ata ttg tgg tgg tga tcctagctcc tatgtggagc 2237
Ala Pro Arg Gly Asn Ile Leu Trp Trp
685 690
ttctgttctg gccttggaag aactgttcat agtccgcatg taggttacat gttaggaata 2297
catttatctt ttccagactt gttgctaaag attaaatgaa atgctctgtt tctaaaattt 2357
catcttgaat ccaaatttta atttttgaat gactttccct gctgttgtct tcaaaatcag 2417
aacattttct ctgcctcaga aaagcgtttt tccaactgga aatttatttt tcaggtctta 2477
aaacctgcta aatgttttta ggaagtacct actgaaactt tttgtaagac atttttggaa 2537
cgagcttgaa catttatata aatttattac cctctttgat ttttgaaaca tgcatattat 2597
atttaggctg agaagccctt caaatggcca gataagccac agttttagct agagaaccat 2657
ttagaattga cataactaat ctaaacttga acacttttag gaccaatgtt agtgttctaa 2717
ataccaacat atttctgatg tttaaacaga tctcccaaat tcttaggacc ttgatgtcat 2777
taaaatttag aatgacaagc ttaagaggct ttagtttcat ttgtttttca agtaatgaaa 2837
aataatttct tacatgggca gatagttaat ttgttgaaca attacaggta gcatttcatg 2897
taatctgatg ttctaaatgg ttctcttatt gaaggaggtt aaagaattag gtttcttaca 2957
gtttttggct ggccatgaca tgtataaaat gtatattaag gaggaattat aaagtacttt 3017
aatttgaatg ctagtggcaa ttgatcatta agaaagtact ttaaagcaaa aggttaatgg 3077
gtcatctggg aaaaatactg aagtatcaaa ggtatttgca tgtgaatgtg ggttatgttc 3137
ttctatccca ccttgtagca tattctatga aagttgagtt aaatgatagc taaaatatct 3197
gtttcaacag catgtaaaaa gttattttaa ctgttacaag tcattataca attttgaatg 3257
ttctgtagtt tctttttaac agtttaggta caaaggtctg ttttcattct ggtgcttttt 3317
attaattttg atagtatgat gtcacttcct attgaaatgt aagctagcgt gtaccttaga 3377
atgtgagctc catgagagca ggtaccttgt ttgtcttcac tgctgtatct attcccaacg 3437
cctcatgaca gtgcctggca catagtaggc actcaataaa tacttgttga atgaatgaaa 3497
aaaaaaaaaa a 3508
<210> 28
<211> 692
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 28
Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly
1 5 10 15
Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala
20 25 30
Ala Ala Pro Ala Ser Gln His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Val Gln
35 40 45
Thr Glu Ala Met Lys Gln Ile Leu Gly Val Ile Asp Lys Lys Leu Arg
50 55 60
Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gln Glu Arg Met
65 70 75 80
Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gln Asp Gln Leu Asp Ala Val Ser Lys
85 90 95
Tyr Gln Glu Val Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gln Arg
100 105 110
Ser Phe Met Ala Leu Ser Gln Asp Ile Gln Lys Thr Ile Lys Lys Thr
115 120 125
Ala Arg Arg Glu Gln Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gln Lys Arg Leu
130 135 140
Lys Thr Val Leu Glu Leu Gln Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp
145 150 155 160
Asp Val Arg Thr Asp Leu Lys Gln Gly Leu Ser Gly Val Pro Ile Leu
165 170 175
Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Asp
180 185 190
Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gln Tyr Glu His Ala
195 200 205
Ser Ile His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys
210 215 220
Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu Ile Val Glu Arg Val Phe Gln
225 230 235 240
Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gln Asn Gly Leu Cys Glu
245 250 255
Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu Asp Gln Val Ala Glu
260 265 270
Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gln Ser Glu Val Glu
275 280 285
Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gln Phe Met Ala Glu Thr Gln Phe Ser
290 295 300
Ser Gly Glu Lys Glu Gln Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu
305 310 315 320
Val Val Asn Ser Leu Gln Gln Gln Pro Gln Ala Ala Ser Pro Ser Val
325 330 335
Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gln Ser Asp Pro Leu Val
340 345 350
Arg Arg Gln Arg Val Gln Asp Leu Met Ala Gln Met Gln Gly Pro Tyr
355 360 365
Asn Phe Ile Gln Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gln Thr Leu Asp
370 375 380
Pro Ala Ile Val Ser Ala Gln Pro Met Asn Pro Thr Gln Asn Met Asp
385 390 395 400
Met Pro Gln Leu Val Cys Pro Gln Val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala
405 410 415
Gln Ser Asn Gln Val Pro Val Gln Pro Glu Ala Thr Gln Val Pro Leu
420 425 430
Val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gln Pro Leu Tyr Gln
435 440 445
Pro Ser His Ala Thr Glu Gln Arg Pro Gln Lys Glu Pro Met Asp Gln
450 455 460
Ile Gln Ala Thr Ile Ser Leu Asn Thr Asp Gln Thr Thr Ala Ser Ser
465 470 475 480
Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gln Pro Gln Val Phe Gln Ala Gly Thr Ser
485 490 495
Lys Pro Leu His Ser Ser Gly Ile Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gln
500 505 510
Ser Met Gln Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Ala Asn
515 520 525
Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gln Gln Ser Gln Tyr Gln Ala Thr Tyr Asn
530 535 540
Gln Ser Phe Ser Ser Gln Pro His Gln Val Glu Gln Thr Glu Leu Gln
545 550 555 560
Gln Asp Gln Leu Gln Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gln Asp
565 570 575
Gln Pro His Gln Val Pro Gly Asn His Gln Gln Pro Pro Gln Gln Asn
580 585 590
Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gln Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val
595 600 605
Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg
610 615 620
Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser
625 630 635 640
Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gln Ser Gln Phe Thr Ala
645 650 655
Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gln Arg Asp Gly Tyr Gln Gln Asn Phe
660 665 670
Lys Arg Gly Ser Gly Gln Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Asn
675 680 685
Ile Leu Trp Trp
690
<210> 29
<211> 2109
<212> DNA
<213> Gallus gallus
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(2109)
<400> 29
atg ccc tcg gct acc aac ggc acc atg gcg agc agc agc ggg aag gcg 48
Met Pro Ser Ala Thr Asn Gly Thr Met Ala Ser Ser Ser Gly Lys Ala
1 5 10 15
ggc ccg ggc ggc aac gag cag gcc ccg gcg gcg gca gcg gcg gcc ccg 96
Gly Pro Gly Gly Asn Glu Gln Ala Pro Ala Ala Ala Ala Ala Ala Pro
20 25 30
cag gcg tcg ggc ggc agc atc acc tcg gtt cag acc gag gcc atg aag 144
Gln Ala Ser Gly Gly Ser Ile Thr Ser Val Gln Thr Glu Ala Met Lys
35 40 45
cag atc ttg gga gtg atc gac aaa aag ctc cgc aac ctc gag aag aaa 192
Gln Ile Leu Gly Val Ile Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys
50 55 60
aag agc aaa ctt gac gat tac cag gaa cga atg aac aag ggg gaa cgt 240
Lys Ser Lys Leu Asp Asp Tyr Gln Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
cta aat caa gat caa ctg gat gca gtg tca aaa tac cag gaa gtg aca 288
Leu Asn Gln Asp Gln Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gln Glu Val Thr
85 90 95
aat aac ctg gaa ttc gct aaa gaa ctg cag agg agc ttt atg gca ctg 336
Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gln Arg Ser Phe Met Ala Leu
100 105 110
agc caa gat atc cag aaa aca ata aaa aag acg gct cgc agg gag cag 384
Ser Gln Asp Ile Gln Lys Thr Ile Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gln
115 120 125
ctg atg aga gaa gag gct gag cag aag cgt tta aag act gtg cta gag 432
Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gln Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu
130 135 140
ctg cag ttc att ttg gac aag ttg ggt gac gat gaa gtg cgc agt gac 480
Leu Gln Phe Ile Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Ser Asp
145 150 155 160
ttg aaa caa gga tca aat gga gta ccg gta ctg aca gag gag gaa ctg 528
Leu Lys Gln Gly Ser Asn Gly Val Pro Val Leu Thr Glu Glu Glu Leu
165 170 175
aca atg ctg gat gaa ttt tac aag cta gtt tac cct gaa agg gac atg 576
Thr Met Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Tyr Pro Glu Arg Asp Met
180 185 190
aac atg agg ttg aat gag cag tat gag caa gca tct gtt cac ctg tgg 624
Asn Met Arg Leu Asn Glu Gln Tyr Glu Gln Ala Ser Val His Leu Trp
195 200 205
gac tta ctg gaa ggg aag gaa aaa ccc gtt tgt gga aca acc tat aaa 672
Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys
210 215 220
gcc ctg aag gag gtt gtt gaa cgt att ctt caa act agt tac ttt gat 720
Ala Leu Lys Glu Val Val Glu Arg Ile Leu Gln Thr Ser Tyr Phe Asp
225 230 235 240
agc acc cat aac cat cag aac ggg tta tgt gag gaa gaa gag gca gca 768
Ser Thr His Asn His Gln Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala
245 250 255
ccc aca cct gca gta gaa gac act gta gca gaa gct gag cct gat cca 816
Pro Thr Pro Ala Val Glu Asp Thr Val Ala Glu Ala Glu Pro Asp Pro
260 265 270
gca gaa gaa ttt act gaa cct act gaa gtt gaa tcg act gag tat gta 864
Ala Glu Glu Phe Thr Glu Pro Thr Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val
275 280 285
aac aga caa ttc atg gca gag act cag ttc agc agt agt gag aag gaa 912
Asn Arg Gln Phe Met Ala Glu Thr Gln Phe Ser Ser Ser Glu Lys Glu
290 295 300
cag gta gat gag tgg aca gtt gaa acg gtt gag gtt gta aat tca ctg 960
Gln Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu
305 310 315 320
cag caa caa aca caa gct aca tct cct cca gtt cct gaa cct cat aca 1008
Gln Gln Gln Thr Gln Ala Thr Ser Pro Pro Val Pro Glu Pro His Thr
325 330 335
ctc act act gtg gct caa gca gat cct ctt gtt aga aga cag aga gta 1056
Leu Thr Thr Val Ala Gln Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gln Arg Val
340 345 350
cag gac ctt atg gcc cag atg cag ggt cca tat aac ttc atg cag gac 1104
Gln Asp Leu Met Ala Gln Met Gln Gly Pro Tyr Asn Phe Met Gln Asp
355 360 365
tct atg ctg gag ttt gag aac cag aca ctt gat cct gcc att gta tct 1152
Ser Met Leu Glu Phe Glu Asn Gln Thr Leu Asp Pro Ala Ile Val Ser
370 375 380
gca cag ccc atg aat cca gca cag aat ttg gac atg ccg caa atg gtc 1200
Ala Gln Pro Met Asn Pro Ala Gln Asn Leu Asp Met Pro Gln Met Val
385 390 395 400
tgc cct cca gtt cat act gag tca aga ctt gcc cag cct aat caa gtt 1248
Cys Pro Pro Val His Thr Glu Ser Arg Leu Ala Gln Pro Asn Gln Val
405 410 415
cct gtg caa cca gaa gct acg cag gtt ccc ttg gtt tca tct aca agt 1296
Pro Val Gln Pro Glu Ala Thr Gln Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser
420 425 430
gag gga tat aca gcc tcc cag ccc atg tat cag cct tct cat acc aca 1344
Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gln Pro Met Tyr Gln Pro Ser His Thr Thr
435 440 445
gag caa cgg cca cag aag gaa tcc att gac cag att cag gct tca atg 1392
Glu Gln Arg Pro Gln Lys Glu Ser Ile Asp Gln Ile Gln Ala Ser Met
450 455 460
tca ctg aat gca gac cag acc ccg tca tca tca tca ctt ccc act gca 1440
Ser Leu Asn Ala Asp Gln Thr Pro Ser Ser Ser Ser Leu Pro Thr Ala
465 470 475 480
tcc cag ccg caa gtt ttc caa gct gga tct agc aaa cct ttg cat agc 1488
Ser Gln Pro Gln Val Phe Gln Ala Gly Ser Ser Lys Pro Leu His Ser
485 490 495
agc gga atc aat gtt aat gca gct cca ttc caa tcc atg caa aca gta 1536
Ser Gly Ile Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gln Ser Met Gln Thr Val
500 505 510
ttc aac atg aat gca cct gtt cct cct gtt aat gag cca gaa gcc ctt 1584
Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Ala Leu
515 520 525
aag caa caa aat cag tac cag gcc agt tac aac cag agt ttc tcc aat 1632
Lys Gln Gln Asn Gln Tyr Gln Ala Ser Tyr Asn Gln Ser Phe Ser Asn
530 535 540
cag cca cac caa gta gaa caa tca gat ctt cag caa gaa cag ctc cag 1680
Gln Pro His Gln Val Glu Gln Ser Asp Leu Gln Gln Glu Gln Leu Gln
545 550 555 560
aca gtg gtt ggt act tac cat ggt tct ccg gac cag acc cat caa gtg 1728
Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Pro Asp Gln Thr His Gln Val
565 570 575
gca gga aac cac cag caa cct ccc cag cag aat act gga ttt cca cgc 1776
Ala Gly Asn His Gln Gln Pro Pro Gln Gln Asn Thr Gly Phe Pro Arg
580 585 590
aac agt cag cct tat tac aac agt cgg gga gtg tct cgt ggt gga tca 1824
Asn Ser Gln Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser
595 600 605
cgt ggg act cgt gga ttg atg aat ggt tac agg gga cct gca aat gga 1872
Arg Gly Thr Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly
610 615 620
ttt aga gga gga tat gat ggc tac cgt cct tca ttt tcc aac act ccg 1920
Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro
625 630 635 640
aac agt ggt tac acg cag ccc caa ttt aat gct cct cga gat tat tca 1968
Asn Ser Gly Tyr Thr Gln Pro Gln Phe Asn Ala Pro Arg Asp Tyr Ser
645 650 655
aac tac cag cgg gat gga tat cag cag aac ttc aaa cgt ggt tct gga 2016
Asn Tyr Gln Arg Asp Gly Tyr Gln Gln Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly
660 665 670
caa agt ggg cct cgg gga gct cct cga ggt cgt gga ggg ccc cca aga 2064
Gln Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg
675 680 685
cca aac aga ggg atg cct caa atg aac gct cag caa gtg aat taa 2109
Pro Asn Arg Gly Met Pro Gln Met Asn Ala Gln Gln Val Asn
690 695 700
<210> 30
<211> 702
<212> PRT
<213> Gallus gallus
<400> 30
Met Pro Ser Ala Thr Asn Gly Thr Met Ala Ser Ser Ser Gly Lys Ala
1 5 10 15
Gly Pro Gly Gly Asn Glu Gln Ala Pro Ala Ala Ala Ala Ala Ala Pro
20 25 30
Gln Ala Ser Gly Gly Ser Ile Thr Ser Val Gln Thr Glu Ala Met Lys
35 40 45
Gln Ile Leu Gly Val Ile Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys
50 55 60
Lys Ser Lys Leu Asp Asp Tyr Gln Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Leu Asn Gln Asp Gln Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gln Glu Val Thr
85 90 95
Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gln Arg Ser Phe Met Ala Leu
100 105 110
Ser Gln Asp Ile Gln Lys Thr Ile Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gln
115 120 125
Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gln Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu Glu
130 135 140
Leu Gln Phe Ile Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Ser Asp
145 150 155 160
Leu Lys Gln Gly Ser Asn Gly Val Pro Val Leu Thr Glu Glu Glu Leu
165 170 175
Thr Met Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Tyr Pro Glu Arg Asp Met
180 185 190
Asn Met Arg Leu Asn Glu Gln Tyr Glu Gln Ala Ser Val His Leu Trp
195 200 205
Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys
210 215 220
Ala Leu Lys Glu Val Val Glu Arg Ile Leu Gln Thr Ser Tyr Phe Asp
225 230 235 240
Ser Thr His Asn His Gln Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala
245 250 255
Pro Thr Pro Ala Val Glu Asp Thr Val Ala Glu Ala Glu Pro Asp Pro
260 265 270
Ala Glu Glu Phe Thr Glu Pro Thr Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val
275 280 285
Asn Arg Gln Phe Met Ala Glu Thr Gln Phe Ser Ser Ser Glu Lys Glu
290 295 300
Gln Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu Val Val Asn Ser Leu
305 310 315 320
Gln Gln Gln Thr Gln Ala Thr Ser Pro Pro Val Pro Glu Pro His Thr
325 330 335
Leu Thr Thr Val Ala Gln Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gln Arg Val
340 345 350
Gln Asp Leu Met Ala Gln Met Gln Gly Pro Tyr Asn Phe Met Gln Asp
355 360 365
Ser Met Leu Glu Phe Glu Asn Gln Thr Leu Asp Pro Ala Ile Val Ser
370 375 380
Ala Gln Pro Met Asn Pro Ala Gln Asn Leu Asp Met Pro Gln Met Val
385 390 395 400
Cys Pro Pro Val His Thr Glu Ser Arg Leu Ala Gln Pro Asn Gln Val
405 410 415
Pro Val Gln Pro Glu Ala Thr Gln Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser
420 425 430
Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gln Pro Met Tyr Gln Pro Ser His Thr Thr
435 440 445
Glu Gln Arg Pro Gln Lys Glu Ser Ile Asp Gln Ile Gln Ala Ser Met
450 455 460
Ser Leu Asn Ala Asp Gln Thr Pro Ser Ser Ser Ser Leu Pro Thr Ala
465 470 475 480
Ser Gln Pro Gln Val Phe Gln Ala Gly Ser Ser Lys Pro Leu His Ser
485 490 495
Ser Gly Ile Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gln Ser Met Gln Thr Val
500 505 510
Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Ala Leu
515 520 525
Lys Gln Gln Asn Gln Tyr Gln Ala Ser Tyr Asn Gln Ser Phe Ser Asn
530 535 540
Gln Pro His Gln Val Glu Gln Ser Asp Leu Gln Gln Glu Gln Leu Gln
545 550 555 560
Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Pro Asp Gln Thr His Gln Val
565 570 575
Ala Gly Asn His Gln Gln Pro Pro Gln Gln Asn Thr Gly Phe Pro Arg
580 585 590
Asn Ser Gln Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser
595 600 605
Arg Gly Thr Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly
610 615 620
Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro
625 630 635 640
Asn Ser Gly Tyr Thr Gln Pro Gln Phe Asn Ala Pro Arg Asp Tyr Ser
645 650 655
Asn Tyr Gln Arg Asp Gly Tyr Gln Gln Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly
660 665 670
Gln Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg
675 680 685
Pro Asn Arg Gly Met Pro Gln Met Asn Ala Gln Gln Val Asn
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<210> 31
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> T3 primer
<400> 31
aattaaccct cactaaaggg 20
<210> 32
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> T7 primer
<400> 32
taatacgact cactatagg 19
<210> 33
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> primer
<400> 33
aaggtttgaa tggagtgc 18
<210> 34
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> primer
<400> 34
tgctcctttt caccactg 18
<210> 35
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> GAPDH primer
<400> 35
gggctgcttt taactctg 18
<210> 36
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> GAPDH primer
<400> 36
ccaggaaatg agcttgac 18
<210> 37
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> peptides
<400> 37
Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gln
1 5 10
<210> 38
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> primer
<400> 38
aggtsharct gcagsagtcw gg 22
<210> 39
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> primer
<400> 39
ctcgagttaa ttcacttgct gag 23
<210> 40
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 40
ggtaccattc acttgctgag tg 22
<210> 41
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 41
gagctcatgc cctcggccac cag 23
<210> 42
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 42
ctcgagttaa ttcacttgct gag 23
<210> 43
<211> 14
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 43
Arg Asn Leu Gln Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gln
1 5 10
<210> 44
<211> 148
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 44
Met Glu Trp Ser Gly Val Phe Ile Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly
1 5 10 15
Val Leu Ser Glu Val Gln Leu His Gln Phe Gly Ala Glu Leu Val Lys
20 25 30
Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe
35 40 45
Thr Asp Tyr Asn Met Asp Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu
50 55 60
Glu Trp Ile Gly Asp Ile Asn Pro Asn Tyr Asp Ser Thr Ser Tyr Asn
65 70 75 80
Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser
85 90 95
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Arg Ser Tyr Asp Tyr Glu Gly Phe Ala Tyr
115 120 125
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Pro
130 135 140
Pro Ser Val Tyr
145
<210> 45
<211> 132
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 45
Ala Val Leu Arg Cys Ser Arg Gly Leu Leu Val Ile Trp Ile Ser Asp
1 5 10 15
Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Thr Ala Gly Glu
20 25 30
Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Trp Ser Val
35 40 45
Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Arg Gln Pro
50 55 60
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ile Arg Glu Ser Trp Val Pro
65 70 75 80
Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
85 90 95
Ser Asn Val His Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Asn
100 105 110
His Gly Ser Phe Leu Pro Ser Arg Ser Glu Gln Val Pro Ser Trp Arg
115 120 125
Ser Asn Asn Arg
130
<210> 46
<211> 117
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 46
Arg Thr Thr Ser His Met Asp Ser Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro
1 5 10 15
Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg
20 25 30
Ala Ser Gly Asn Ile His Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln
35 40 45
Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp
50 55 60
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser
65 70 75 80
Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys
85 90 95
Gln His Phe Trp Ser Thr Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu
100 105 110
Ile Lys Gln Ser Asp
115
<210> 47
<211> 94
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 47
Ser Gly Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser
1 5 10 15
Asn Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu
20 25 30
Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe
35 40 45
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val
50 55 60
Glu Thr Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp
65 70 75 80
Pro Tyr Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gln
85 90
<210> 48
<211> 105
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 48
Gly Leu Phe Cys Ser Val Glu Arg Cys His Tyr Gln Leu Gln Ser Ser
1 5 10 15
Gln Asn Leu Leu Ser Ile Val Asn Arg Tyr His Tyr Met Ser Gly Asn
20 25 30
Pro Pro Lys Leu Leu Val Tyr Pro Ala Leu Leu Ile Tyr Glu Ala Ser
35 40 45
Ile Thr Lys Ser Cys Val Pro Asp Arg Phe Thr Arg Ser Gly Ser Gly
50 55 60
Thr Asn Phe Thr Leu Thr Ile Asn Phe Val His Ala Asp Asp Leu Ile
65 70 75 80
Phe Tyr Tyr Cys Gln His Asn Arg Gly Ser Phe Leu Pro Ser Ser Ser
85 90 95
Val Gln Val Pro Arg Arg Arg Ser Asn
100 105
<210> 49
<211> 100
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 49
Asp Ile Leu Gln Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Thr Met Asn
1 5 10 15
Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Asn Leu Glu Trp Ile Gly Leu Ile
20 25 30
Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly Lys
35 40 45
Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu
50 55 60
Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Trp
65 70 75 80
Gly Val Trp Ser Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
85 90 95
Val Ser Ser Lys
100
<210> 50
<211> 90
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 50
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Arg Thr Ala
1 5 10 15
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Arg Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile
20 25 30
Tyr Leu Ala Ser Asn Arg Asp Thr Gly Leu Pro Asp Arg Phe Pro Gly
35 40 45
Arg Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile Thr Asn Val Gln Ser
50 55 60
Glu Asp Leu Glu Asp Tyr Phe Cys Leu Gln His Cys Asn Tyr Pro Asn
65 70 75 80
Glu Phe Arg Gly Cys Thr Lys Val Pro Ile
85 90
<210> 51
<211> 116
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 51
Leu Gln Glu Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala Ser Val Lys
1 5 10 15
Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp Met Gln
20 25 30
Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Ala Ile
35 40 45
Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Arg Tyr Thr Gln Lys Phe Lys Gly Lys
50 55 60
Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu
65 70 75 80
Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly
85 90 95
Glu Tyr Gly Asn Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Asn
115
<210> 52
<211> 100
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 52
Thr Ser Asp Ala Ser Leu Gly Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala
1 5 10 15
Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly
20 25 30
Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly
35 40 45
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu
50 55 60
Thr Ile Ser Ser Leu Glu Tyr Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu
65 70 75 80
Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu
85 90 95
Ile Lys Gln Lys
100
<210> 53
<211> 108
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 53
Ala Trp Leu Ser Gln Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys
1 5 10 15
Asp Thr Tyr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu
20 25 30
Trp Ile Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Asp Pro
35 40 45
Lys Phe Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr
50 55 60
Ala Tyr Leu Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr
65 70 75 80
Tyr Cys Ala Arg Pro Ile His Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser Leu Ala Tyr
85 90 95
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Lys
100 105
<210> 54
<211> 104
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 54
Glu Phe His Ala Val Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg
1 5 10 15
Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr
20 25 30
Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser
35 40 45
Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg
50 55 60
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala
65 70 75 80
Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Gly Arg Ser Glu Val
85 90 95
Val Pro Ser Trp Arg Ser Asn Lys
100
<210> 55
<211> 109
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 55
Pro Arg Ala Ser Leu Gly Val Ser Glu Thr Leu Leu Cys Thr Ser Gly
1 5 10 15
Phe Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly
20 25 30
Lys Ala Leu Glu Trp Leu Gly Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr
35 40 45
Thr Thr Glu Tyr Ser Ala Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg
50 55 60
Asp Asn Ser Gln Ser Ile Leu Tyr Leu Gln Met Asn Thr Leu Arg Ala
65 70 75 80
Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Asn Trp Ala Phe Asp
85 90 95
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Lys
100 105
<210> 56
<211> 94
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 56
Ser Gly Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser
1 5 10 15
Asn Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu
20 25 30
Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe
35 40 45
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val
50 55 60
Glu Thr Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp
65 70 75 80
Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gln
85 90
<210> 57
<211> 111
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 57
Pro Ala Cys Leu Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser
1 5 10 15
Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro
20 25 30
Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu Gly Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly
35 40 45
Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser
50 55 60
Arg Asp Asn Ser Gln Ser Ile Leu Tyr Leu Gln Met Asn Thr Leu Arg
65 70 75 80
Ala Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Pro Leu Leu Tyr
85 90 95
Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
100 105 110
<210> 58
<211> 102
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 58
Arg Leu Pro Phe Tyr Ser Leu Glu Gln Arg Ala Thr Ile Ser Tyr Arg
1 5 10 15
Ala Ser Lys Asn Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Asn
20 25 30
Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Val Ser
35 40 45
Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
50 55 60
Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala
65 70 75 80
Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ile Arg Glu Leu Thr Arg Ser Glu Leu Val
85 90 95
Pro Ser Trp Lys Ser Asn
100
<210> 59
<211> 109
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 59
Pro Arg Ala Ser Leu Gly Val Ser Glu Thr Leu Leu Cys Thr Ser Gly
1 5 10 15
Phe Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly
20 25 30
Lys Ala Leu Glu Trp Leu Gly Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr
35 40 45
Thr Thr Glu Tyr Ser Ala Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg
50 55 60
Asp Asn Ser Gln Ser Ile Leu Tyr Leu Gln Met Asn Thr Leu Arg Ala
65 70 75 80
Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Asn Trp Ala Phe Asp
85 90 95
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Lys
100 105
<210> 60
<211> 94
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 60
Ser Gly Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser
1 5 10 15
Asn Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu
20 25 30
Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe
35 40 45
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val
50 55 60
Glu Thr Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp
65 70 75 80
Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gln
85 90
<210> 61
<211> 58
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 61
Val Phe Gln Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gln Asn Gly
1 5 10 15
Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Ala Val Glu Asp Gln
20 25 30
Val Pro Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gln Ser
35 40 45
Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg
50 55
<210> 62
<211> 15
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 62
Tyr Thr Glu Gln Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg
1 5 10 15
<210> 63
<211> 12
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 63
Phe Thr Ser Gly Glu Lys Glu Gln Val Asp Glu Trp
1 5 10
<210> 64
<211> 128
<212> PRT
<213> Gallus gallus
<400> 64
Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Met Ser Arg Gly
1 5 10 15
Gly Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gln Met Asn Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val
35 40 45
Ala Ala Ile Asn Lys Phe Gly Asn Ser Thr Gly His Gly Ala Ala Val
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Val Arg
65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Phe Cys
85 90 95
Thr Lys His Ala Tyr Gly Tyr Cys Gly Ser Gly Thr Trp Cys Ala Ala
100 105 110
Gly Glu Ile Asp Ala Trp Gly His Gly Thr Glu Val Ile Val Ser Ser
115 120 125
<210> 65
<211> 108
<212> PRT
<213> Gallus gallus
<400> 65
Gln Ala Ala Ser Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Glu Ile Thr Cys Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Ser Tyr Gly Trp
20 25 30
Phe Gln Gln Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Val Ile Tyr Tyr
35 40 45
Asn Asn Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Lys
50 55 60
Ser Gly Ser Thr Gly Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala Asp Asp
65 70 75 80
Glu Ala Val Tyr Tyr Cys Gly Ser Gly Asp Ser Thr Asp Thr Ala Val
85 90 95
Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105
<210> 66
<211> 12
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 66
Gln Gln Pro Gln Ala Ala Ser Pro Ser Val Pro Glu
1 5 10
<210> 67
<211> 240
<212> DNA
<213> Gallus gallus
<400> 67
accatgagcc cactcgtctc ctccctcctg ctcctggccg ccctgccagg tgagggcgct 60
gtggggctct atggggctct atggggtctc agcggggctc tgcgggctca atgggggcca 120
aagggggggt ctgcgggctc tatggggggg tcaacggggg gtctcacggg gggccggctc 180
cgcgaggccg tgtggcggcg gctccgtcag cgctttctgt ccttccccac agggcgcgcc 240
<210> 68
<211> 1807
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 68
ctttctgggg caggccaggc ctgaccttgg ctttggggca gggagggggc taaggtgagg 60
caggtggcgc cagccaggtg cacacccaat gcccatgagc ccagacactg gacgctgaac 120
ctcgcggaca gttaagaacc caggggcctc tgcgccctgg gcccagctct gtcccacacc 180
gcggtcacat ggcaccacct ctcttgcagc ctccaccaag ggcccatcgg tcttccccct 240
ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc ctgggctgcc tggtcaagga 300
ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc gccctgacca gcggcgtgca 360
caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc ctcagcagcg tggtgaccgt 420
gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac gtgaatcaca agcccagcaa 480
caccaaggtg gacaagaaag ttggtgagag gccagcacag ggagggaggg tgtctgctgg 540
aagccaggct cagcgctcct gcctggacgc atcccggcta tgcagcccca gtccagggca 600
gcaaggcagg ccccgtctgc ctcttcaccc ggaggcctct gcccgcccca ctcatgctca 660
gggagagggt cttctggctt tttccccagg ctctgggcag gcacaggcta ggtgccccta 720
acccaggccc tgcacacaaa ggggcaggtg ctgggctcag acctgccaag agccatatcc 780
gggaggaccc tgcccctgac ctaagcccac cccaaaggcc aaactctcca ctccctcagc 840
tcggacacct tctctcctcc cagattccag taactcccaa tcttctctct gcagagccca 900
aatcttgtga caaaactcac acatgcccac cgtgcccagg taagccagcc caggcctcgc 960
cctccagctc aaggcgggac aggtgcccta gagtagcctg catccaggga caggccccag 1020
ccgggtgctg acacgtccac ctccatctct tcctcagcac ctgaactcct ggggggaccg 1080
tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 1140
gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac 1200
gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc 1260
acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag 1320
tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa 1380
gccaaaggtg ggacccgtgg ggtgcgaggg ccacatggac agaggccggc tcggcccacc 1440
ctctgccctg agagtgaccg ctgtaccaac ctctgtccct acagggcagc cccgagaacc 1500
acaggtgtac accctgcccc catcccggga tgagctgacc aagaaccagg tcagcctgac 1560
ctgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca 1620
gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct 1680
ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc 1740
cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtctccggg 1800
taaatga 1807
<210> 69
<211> 567
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 69
cagaatggct gcaaagagct ccaacaaaac aatttagaac tttattaagg aataggggga 60
agctaggaag aaactcaaaa catcaagatt ttaaatacgc ttcttggtct ccttgctata 120
attatctggg ataagcatgc tgttttctgt ctgtccctaa catgccctgt gattatccgc 180
aaacaacaca cccaagggca gaactttgtt acttaaacac catcctgttt gcttctttcc 240
tcaggaactg tggctgcacc atctgtcttc atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa 300
tctggaactg cctctgttgt gtgcctgctg aataacttct atcccagaga ggccaaagta 360
cagtggaagg tggataacgc cctccaatcg ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag 420
gacagcaagg acagcaccta cagcctcagc agcaccctga cgctgagcaa agcagactac 480
gagaaacaca aagtctacgc ctgcgaagtc acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca 540
aagagcttca acaggggaga gtgttag 567
<210> 70
<211> 114
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 70
Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Met Arg Leu Ser Cys Val
1 5 10 15
Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ser Trp Phe Asn Trp Val Arg Gln
20 25 30
Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Glu Ile Arg Leu Thr Ser
35 40 45
Asp Asn Tyr Ala Ile Tyr Tyr Ala Glu Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr
50 55 60
Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ser Val Tyr Leu Gln Met Asn Asn
65 70 75 80
Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Ile Tyr Tyr Cys Thr Arg Pro Glu Thr
85 90 95
Ala Arg Ala Thr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 71
<211> 118
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 71
Pro Ala Ser Thr Ser Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu
1 5 10 15
Pro Val Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln
20 25 30
Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln
35 40 45
Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Val Leu Ile Tyr Lys Val Phe Asn Arg
50 55 60
Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp
65 70 75 80
Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Phe Gln Gly Ser His Val Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr
100 105 110
Lys Leu Asn Gln Thr Gly
115
Claims (17)
- 서열번호 66에 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드에 대하여 면역학적 반응성을 갖는 항체 또는 그 항원 결합성 단편을 사용하여 항원 항체 반응에 의해 생체 시료 중의 CAPRIN-1의 발현량을 측정하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 암의 검출 방법.
- 제 1 항에 있어서,
측정해야 할 상기 CAPRIN-1은
(a) 서열목록의 서열번호 2~30 중 짝수의 서열번호에 나타내어지는 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 또는
(b) 서열목록의 서열번호 2~30 중 짝수의 서열번호에 나타내어지는 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드와 85% 이상의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드인 것을 특징으로 하는 암의 검출 방법. - 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
상기 생체 시료는 인간, 개 또는 고양이 유래인 것을 특징으로 하는 암의 검출 방법. - 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
상기 생체 시료는 개 유래이며, 측정해야 할 상기 CAPRIN-1은 서열번호 6, 8, 10, 12 또는 14에 나타내어지는 아미노산 서열을 갖는 것을 특징으로 하는 암의 검출 방법. - 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
상기 생체 시료는 인간 유래이며, 측정해야 할 상기 CAPRIN-1은 서열번호 2 또는 4에 나타내어지는 아미노산 서열을 갖는 것을 특징으로 하는 암의 검출 방법. - 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
측정된 CAPRIN-1 발현량은 건강한 개체와 비교하여 높을 경우에 암 치료약으로서의 상기 항체의 표적이 되는 암의 존재가 나타내어지는 것을 특징으로 하는 암의 검출 방법. - 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
상기 CAPRIN-1의 발현량의 측정은 면역학적 분석법을 사용하여 행하는 것을 특징으로 하는 암의 검출 방법. - 제 7 항에 있어서,
상기 면역학적 분석법은 ELISA 및 면역 조직 화학 염색법 중 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 암의 검출 방법. - 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
상기 시료는 체액, 조직 또는 세포인 것을 특징으로 하는 암의 검출 방법. - 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
상기 암은 유방암, 뇌종양, 식도암, 위암, 폐암, 간암, 신장암, 갑상선암, 비장암, 췌장암, 대장암, 피부암, 난소암, 자궁암, 전립선암, 방광암, 정소암, 골육종 및 섬유육종으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1개의 암인 것을 특징으로 하는 암의 검출 방법. - 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
상기 항체 또는 그 항원 결합성 단편은 서열번호 70에 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 71에 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄 가변 영역을 갖는 모노클로날 항체 또는 그 항원 결합성 단편인 것을 특징으로 하는 암의 검출 방법. - 서열번호 66에 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드에 대하여 면역학적 반응성을 갖는 항체 또는 그 항원 결합성 단편을 포함하는 것을 특징으로 하는 암 진단약.
- 제 12 항에 있어서,
상기 항체 또는 그 항원 결합성 단편은 서열번호 70에 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 71에 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄 가변 영역을 갖는 모노클로날 항체 또는 그 항원 결합성 단편인 것을 특징으로 하는 암 진단약. - CAPRIN-1 표적약을 생체 시료가 유래하는 개체에 투여하는데 적합한 암 치료약으로서 선택하는데 필요한 정보를 제공하기 위해,
서열번호 66에 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드에 대하여 면역학적 반응성을 갖는 항체 또는 그 항원 결합성 단편을 사용하는 것을 특징으로 하는 생체 시료 중의 CAPRIN-1의 발현량을 측정하는 방법. - 제 14 항에 있어서,
상기 CAPRIN-1 표적약은 CAPRIN-1과 면역학적 반응성을 갖는 항체 또는 그 항원 결합성 단편인 것을 특징으로 하는 생체 시료 중의 CAPRIN-1의 발현량을 측정하는 방법. - 서열번호 66에 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드에 대하여 면역학적 반응성을 갖는 항체 또는 그 항원 결합성 단편을 포함하는 것을 특징으로 하는 암 진단용 키트.
- 제 16 항에 있어서,
상기 항체 또는 그 항원 결합성 단편은 서열번호 70에 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 71에 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 경쇄 가변 영역을 갖는 모노클로날 항체 또는 그 항원 결합성 단편인 것을 특징으로 하는 암 진단용 키트.
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