CN112430552A - 烟草黑胫病、青枯病、根结线虫病用生防有机肥及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本申请公开了一种烟草黑胫病、青枯病、根结线虫病用生防有机肥及其制备方法，该有机肥具有生防功能可应用于烟草生产过程中，对黑胫病、青枯病、根结线虫病具有良好防效，是绿色、环保、高效的生防有机肥料。

Description

烟草黑胫病、青枯病、根结线虫病用生防有机肥及其制备方法

技术领域

本申请涉及一种烟草黑胫病、青枯病、根结线虫病用生防有机肥及其制备方法，属于生物肥料领域。

背景技术

多年来，曲靖烟草一直是诸多工业企业的主要原料供应基地，然而，由于曲靖烟农近年来普遍存在对土地劫掠式的耕作，片面追求产量的行为使得部分烟区植烟土壤综合肥力下降严重，青枯病、黑胫病等病害频发，土壤中青枯病、黑胫病病菌无法得到有效根除，继续长期种植烟草又会引发烟叶根结线虫病等病害频发，上述病菌与烟叶根结线虫病对烟草形成复合侵染，造成烟叶产量和质量大幅下降。

曲靖地区万寿菊种植始于1998年，历经近20年的发展，全市万寿菊种植面积逐年增加，鲜花产量和产值已成为曲靖市的经济支柱产业之一。万寿菊主要经济器官是菊花，摘除花朵后产生大量秸秆，但由于万寿菊秸秆中不仅木质素、纤维素含量高，直接还田降解难，而且含有多种挥发性化学成分，不能作为饲料使用。秸秆大部分就地焚烧或晒干后作农家燃料，秸秆未能有效利用，造成了资源的极大浪费，且对环境造成污染。

现有研究结论表明万寿菊的叶、根、花、秸秆等组织中含有对线虫具有抑制作用的活性物质，因此，利用万寿菊秸秆开发生产具有生防功能的有机肥对于烟叶生产具有重要意义。

发明内容

本申请提供了一种烟草黑胫病、青枯病、根结线虫病用生防有机肥及其制备方法，用于解决现有综合肥力较低的植烟土壤中烟草黑胫病菌、青枯病菌含量过高，根结线虫病与烟草黑胫病菌、青枯病菌复合感染，导致烟叶产量、质量大幅下降的技术问题。

本申请提供了一种生防黑胫病功能菌是枯草芽孢杆菌，所述菌株为菌株；所述菌株为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis，其保藏登记号为：CGMCC No.20141。

该菌株具有生防烟草黑胫病的功能，能有效减少值烟土壤中黑胫病菌的含量，从而有效改善在使用该菌剂的土壤上种植所得烟叶的质量，还能减少农药使用量，保护环境，减少污染，减少产品农残量。

该菌株的使用方法按现有防治烟草黑胫病的方法使用。在此不累述。

该菌株由云南省微生物发酵工程研究中心有限公司筛选获得。

本申请的另一方面提供了一种烟草黑胫病、青枯病、根结线虫病用生防有机肥，至少包含：含如上述菌株的生防黑胫病功能菌剂、生防青枯病功能菌剂、万寿菊秸秆；

所述生防青枯病功能菌剂中含菌株WSWFJ38；

所述菌株WSWFJ38保藏登记号为：CGMCC No.20143；所述菌株为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。

该有机肥以具有生防功能的菌剂及万寿菊秸秆为原料，制得肥料具有生防烟草黑胫病、青枯病、根结线虫病的作用，能有效打破三种病复合感染的问题，减少烟叶染病几率，提高烟叶质量和产量，减少化学农药的使用量，恢复植烟土壤的自我修复能力。

以上各菌剂所用菌株均为云南省微生物发酵工程研究中心有限公司筛选获得。

该有机肥还能充分利用万寿菊秸秆，减少焚烧量，减少环境污染，提高万寿菊秸秆回田使用率。

万寿菊秸秆能在有机肥中发挥有机物料的作用，提供作物生长所需的碳元素。

优选地，有机肥至少包含：所述万寿菊秸秆800～900份、所述生防黑胫病功能菌剂3～7.5份、所述生防青枯病功能菌剂3～7.5份。

按此比例添加各主要成分能获得较好的协同生防效果，实现对三种病同步降低的效果。

优选地，还包含：碳酸氢铵、菜籽枯饼。

通过增加菜籽枯饼能增加有机肥的蛋白质含量，提高有机物料含量，同时提高有机肥肥力。本发明碳酸氢铵的功效除为调节pH外，还可有效抑制土壤中根结线虫对植株根系的侵染，与腐熟万寿菊秸秆有机肥形成复合功效，增强生防有机肥对线虫的抑制能力。

优选地，包括：所述万寿菊秸秆800～900份、生防黑胫病功能菌剂3～7.5 份、生防青枯病功能菌剂3～7.5份、菜籽枯饼80～120份、腐熟菌剂2～5 份、硝酸铵12～30份、碳酸氢铵0～30份。

按此比例以以上物料作为原料生产的有机肥，能保证有机肥中各主要营养物质含量达标的同时，具有较好的生防效果，实现对3种烟草病的防治术效果。

为提高有机肥物料混合均匀性，所用万寿菊秸秆和油菜枯饼可以为粉碎后过20目筛物料。

本申请的另一方面还提供了一种如上述的烟草黑胫病、青枯病、根结线虫病用生防有机肥的制备方法，包括以下步骤：

步骤S100：按重称取发酵原料后混合均匀，堆肥发酵得到一次发酵产物；

步骤S200：陈化所述一次发酵产物得到半成品有机肥；

步骤S300：将生防黑胫病功能菌剂、生防青枯病功能菌剂喷洒至所述半成品有机肥表面，烘干后得到所述生防有机肥。

该发酵方法中通过在最终有机肥表面喷洒生防菌剂，能提高有机肥中生防菌剂含量，并能在施肥后在土壤中快速萌发定殖，快速实现对黑胫病、青枯病的防治效果，从而减少三种病复合感染的几率。

通过发酵、陈化、干燥能制得符合国家标准的有机肥。各步骤中所用具体参数可以按现有常用有机肥制备方法进行，在此不累述。

优选地，所述发酵原料包括：万寿菊秸秆、菜籽枯饼、腐熟菌剂、硝酸铵、碳酸氢铵、生防黑胫病功能菌剂、生防青枯病功能菌剂。

以以上物料混合后进行发酵，能提高生防菌剂在有机肥中含量和分布均匀性，同时生防菌剂还可以附着于发酵分解后的植物纤维上，提高施肥时菌剂利用率。

为提高有机肥物料混合均匀性，所用万寿菊秸秆和油菜枯饼可以为粉碎后过20目筛物料。

优选地，所述发酵原料包括：万寿菊秸秆800-900份，菜籽枯饼80-120 份、腐熟菌剂2-5份、硝酸铵12-30份、碳酸氢铵0-30份、生防黑胫病功能菌剂3-7.5份、生防青枯病功能菌剂3-7.5份。

按此比例混合上述物料进行发酵，能有效提高有机肥对以上三种烟草病的符合协同防治效果。

优选地，所述菜籽枯饼为油菜枯饼。采用该菜枯饼，能有效提高有机肥中蛋白质含量，增加施肥后肥田效果。

优选地，所述发酵原料的C/N为25-30:1，可以通过硝酸铵进行调整，按此碳氮比施肥能提高有机肥的施肥后对烟草的生长促进效果，提高烟叶产量和质量。

优选地，步骤S100中发酵条件为：物料含水量为50％-55％之间，pH 调节为5.0-7.5之间，至堆肥内温度达到40-65℃之间开始翻堆，并控制堆内发酵温度为55-70℃，发酵28-35天，期间每隔两天翻抛一次后。

按此条件发酵后，能有效分解万寿菊秸秆中所含大量植物纤维，提高秸秆的分解程度，提高土壤利用率。

优选地，所述步骤S200为在条垛式发酵槽内将物料堆成长为30-50 米，宽为6-10米，高0.5-0.8米的堆体，陈化堆贮7-10天，待温度降至30-40 度，保持一周以上不再升高。

优选地，所述步骤S300烘干为：在40-55℃下，烘干至物料含水量至 5％-8％止。采用该温度进行烘干40～55℃，能一方面减少生防功能微生物死亡及代谢产物失活，同时保留物料含水量为5％-8％，能有利于物料中孢子数量的稳定，不易导致功能微生物孢子提前萌发。从而提高施肥后有机肥所具有的生防效果的发挥。

所得有机肥成品中有机质、水份、pH按NY884-2012《生物有机肥》标准检测，发芽指数按DB53/T917-2019有机肥料腐熟度中碳氮比、自升温、铵硝比、发芽指数的测定方法要求检测。所得有机肥各项指标均能达到国标要求。

更优选地，制备方法包括以下步骤：

步骤一：原料准备。分别称取粉碎过筛万寿菊秸秆、油菜枯饼作为有机物料，称取硝酸铵作为调节C/N的原料。

步骤二：有机肥的发酵腐熟。按照重量份数计，称取粉碎过筛万寿菊粉碎秸秆800-900份，油菜枯饼80-120份、腐熟菌剂2-5份、硝酸铵12-30 份、碳酸氢铵0-30份、生防黑胫病功能菌剂3-7.5份、生防青枯病功能菌剂3-7.5份均匀混合后，调节物料水份为50％-55％之间，pH调节为5.0-7.5 之间，将物料堆贮至发酵槽，发酵温度至40-65℃开始翻堆，控制发酵温度为55-70℃，发酵物料的C/N为25-30:1，发酵28-35天后即为一次发酵产物，期间每隔两天翻抛一次，防止因物料局部温度过高导致腐熟不均匀或腐熟功能菌死亡。

步骤三：有机肥的陈化腐熟。利用步骤二所得产物，采用条垛式发酵槽将物料堆成长为30-50米，宽为6-10米，高0.5-0.8米的堆体，陈化堆贮7-10天，待温度降至30-40度，保持一周以上不再升高即制得半成品有机肥。

步骤四：生防有机肥制备及烘干。将步骤三所得半成品有机肥自动移至皮带输送机上，与此同时，将生防功能菌剂通过喷雾的形式均匀喷至有机肥表面经混合料斗混匀进入烘干机，烘干温度控制在40-55℃，待生防有机肥水分含量烘干至5％-8％。

步骤五，检测、称量、包装。将成品仓有机肥按NY884-2012《生物有机肥》标准检测，合格后转入计量称，称量并包装。

本申请能产生的有益效果包括：

1)本申请所提供的具有生防烟草黑胫病功能的菌株，该菌株对烟草黑胫病具有较好的生防作用，尤其适用于对过度耕种植烟土壤的改良，在减少化学农药施用量的情况下，有效减少烟叶染病几率，提高烟叶质量和产量，该菌株为枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis，其保藏登记号为：CGMCC No.20141。

2)本申请所提供的烟草黑胫病、青枯病、根结线虫病用生防有机肥，通过在有机肥中添加生防功能菌剂，将万寿菊秸秆生防有机肥的生防功效进一步提升，主要表现为黑胫病、青枯病的病情指数下降，极大地减轻了根结线虫的侵染，同时增强了植株的抗逆机能。能有效减少三种烟草病复合感染几率，提高对根结线虫病的防治效果，从而提高烟叶产量和质量，并减少化学农药的使用量，减少烟叶农残。

3)本申请所提供的烟草黑胫病、青枯病、根结线虫病用生防有机肥的制备方法，该生防有机肥经过二次发酵后可有效提高万寿菊腐熟秸秆杀线活性成分的转化，有效降低根结线虫的侵染。所得有机肥符合 NY884-2012《生物有机肥》的质量标准可用于农业生产。

生物保藏证明

具有生防烟草黑胫病功能的菌株为WSWFJ34，建议的分类命名：枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis，该菌株于2020年6月28日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为：北京市朝阳区北辰西路 1号院3号，保藏登记号为：CGMCC No.20141。

生防青枯病功能菌剂为菌株WSWFJ38，建议的分类命名：枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis，该菌株于2020年6月28日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院 3号，保藏登记号为：CGMCC No.20143。

附图说明

图1为本申请提供的烟草黑胫病、青枯病、根结线虫病用生防有机肥的制备方法工艺流程示意图；

具体实施方式

下面结合实施例详述本申请，但本申请并不局限于这些实施例。

参见图1，本申请提供的烟草黑胫病、青枯病、根结线虫病用生防有机肥的制备方法，包括以下步骤：

步骤一：原料准备。分别称取粉碎过筛的万寿菊秸秆、油菜枯饼作为有机物料，称取硝酸铵作为调节C/N的原料。

步骤二：有机肥的发酵腐熟。按照重量份数计，称取粉碎过筛万寿菊粉碎秸秆800-900份，油菜枯饼80-120份、腐熟菌剂2-5份、硝酸铵12-30 份、碳酸氢铵0-30份、生防黑胫病功能菌剂3-7.5份、生防青枯病功能菌剂3-7.5份均匀混合后，调节物料水份为50％-55％之间，pH调节为5.0-7.5 之间，将物料堆贮至发酵槽，发酵温度至40-65℃开始翻堆，控制发酵温度为55-70℃，发酵物料的C/N为25-30:1，发酵28-35天后即为一次发酵产物，期间每隔两天翻抛一次，防止因物料局部温度过高导致腐熟不均匀或腐熟功能菌死亡。

步骤三：有机肥的陈化腐熟。利用步骤二所得产物，采用条垛式发酵槽将物料堆成长为30-50米，宽为6-10米，高0.5-0.8米的堆体，陈化堆贮7-10天，待温度降至30-40度，保持一周以上不再升高即制得半成品有机肥。

步骤四：生防有机肥制备及烘干。将步骤三所得半成品有机肥自动移至皮带输送机上，与此同时，将生防功能菌剂通过喷雾的形式均匀喷至有机肥表面经混合料斗混匀进入烘干机，烘干温度控制在40-55℃，待生防有机肥水分含量烘干至5％-8％。

步骤五，检测、称量、包装。将成品仓有机肥按NY884-2012《生物有机肥》标准检测，合格后转入计量称，称量并包装。

实施例

如无特别说明，本申请的实施例中的原料、溶剂和助剂均通过商业途径购买，不进行处理。

实施例1具有生防烟草黑胫病功能的菌株

菌株WSWFJ34，枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis其保藏登记号为： CGMCCNo.20141，从云南省微生物发酵工程研究中心有限公司菌种库中筛选得到。

菌株WSWFJ34形态特征：在LB培养基上白色近圆形菌落，前期表面不光滑中间凸起，呈火山口形状，边缘锯齿状，菌落不透明。鉴定为枯草芽孢杆菌。

实施例2生防青枯病功能菌株

菌株WSWFJ38为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis，其保藏登记号为 CGMCCNo.20143。从云南省微生物发酵工程研究中心有限公司菌种库中筛选得到的生防菌株。

菌株WSWFJ38形态特征：在LB培养基上白色色近圆形菌落，前期表面褶皱凸起，后期表面较为平整，凸起较小，菌落不透明。鉴定为枯草芽孢杆菌。

实施例3～5制备烟草黑胫病、青枯病、根结线虫病用生防有机肥样品1～3

制备方法包括如下步骤：

步骤一，原料准备，分别称取粉碎至过20目筛的万寿菊秸秆、油菜枯饼作为有机物料，称取硝酸铵作为调节C/N的原料。

步骤二，有机肥的发酵腐熟。按照重量份数计，称取粉碎过筛万寿菊粉碎秸秆850份，油菜枯饼100份、腐熟菌剂3份、硝酸铵20份、碳酸氢铵 20份、生防黑胫病功能菌剂3.5份(含实施例1中所述菌株)、生防青枯病功能菌剂3.5份(含实施例2中所述菌株)均匀混合后，调节物料水份为54％， pH调节为6.5之间，将物料堆贮至发酵槽，发酵温度至55℃开始翻堆，控制发酵温度为60℃，发酵物料的C/N为26.3，发酵30天后即为一次发酵产物，期间每隔两天翻抛一次，防止因物料局部温度过高导致腐熟不均匀或腐熟功能菌死亡；

步骤三，有机肥的陈化腐熟。利用步骤二所得产物，采用条垛式发酵槽将物料堆成长为40米，宽为8米，高0.7米的堆体，陈化堆贮8天，待温度降至35度，保持一周以上不再升高即制得半成品有机肥。

步骤四，生防有机肥制备及烘干。将步骤三所得半成品有机肥自动移至皮带输送机上，与此同时，将生防功能菌剂通过喷雾的形式均匀喷至有机肥表面经混合料斗混匀进入烘干机，烘干温度控制在45℃，待生防有机肥水分含量烘干至6％即可。

步骤五，检测、称量、包装。将成品仓有机肥按NY884-2012《生物有机肥》标准检测，合格后转入计量称，称量并包装。

有机肥样品2～3制备参数、制备步骤、物料添加比例与样品1的区别如下表所示，其他未述内容与样品1的方法相同。

表万寿菊秸秆生防有机肥制备方法

按现有国标要求，采用现有检测方法对所得有机肥样品1进行检测，所得结果如表1所示。

表1有机肥样品1质量指标

由表1可知，以上指标表明有机肥样品1符合NY884-2012《生物有机肥》的质量标准，可用于农业生产。

对比例1

市售有机肥。所用市售有机肥为云南云叶化肥股份有限公司生产的万寿菊秸秆有机肥，该有机肥中不含生防黑胫病功能菌剂(含实施例1中所述菌株)、生防青枯病功能菌剂。其他与实施例4中制备方法相同。

有机肥样品1的腐熟度测定

使用有机肥样品1与对比例1中所用市售普通有机肥进行发芽率检测，排种50粒白菜种子，处理1为有机肥样品1浸出液；处理2为对比例1中市售普通有机肥浸出液；另设清水做为对照(CK)。

发芽率测定情况如表2所示：

表2万寿菊秸秆有机肥发芽率测定：

处理	平均发芽率	平均根长/cm	GI/％
				CK(清水)	96.33％	1.78	－
处理1	100.00％	2.15	125.39
				处理2	76.33％	1.47	65.44

从表2所示的发芽情况可知，本申请提供方法所得有机肥样品1的腐熟效果良好，不会烧根烧苗，对作物没有毒害作用；说明本申请提供方法及配方能制得能良好使用万寿菊秸秆的发酵有机肥。

有机肥样品2～3所得结果与样品1相似在此不累述。

对比例2

与实施例3的区别在于未在步骤四中对物料进行烘干处理，其他与实施例3相同。

对实施例3(烘干)与对比例1(未烘干)所得生防有机肥，分别按现有货架期检测，所得结果如表3。实施例4～5所得有机肥样品所得结果与实施例3相同，在此不累述。

表3实施例3(烘干)与对比例1(未烘干)所得生防有机肥货架期检测结果

由表3可见，采用本申请提供方法制得的有机肥样品1能有效延长有机肥的保存期，避免在存储期内芽孢提早萌发，降低有机肥销售质量。

实施例6含实施例1～2中所述菌株的生防功能菌剂防效验证试验

1.试验材料及方法

1.1试验地点

云南省微生物发酵工程研究中心有限公司温室大棚和露天试验地。

1.2.2试验材料

供试材料：云烟87，58％甲霜灵锰锌。

供试菌剂：青枯病生防功能菌剂(枯草芽孢杆菌其保藏登记号为 CGMCC NO20143)，黑胫病生防功能菌剂(枯草芽孢杆菌其保藏登记号为CGMCC NO 20141)。

1.2.3试验设计

将烟草种子置于塑料穴盘育苗后，将生长一致的三叶期烟草幼苗移栽至18*18的塑料花盆中继续培养(温度28-30℃)，待烟草植株生长至6-7 叶期时进行处理，生防菌处理组每株苗浇灌30ml供试菌株菌液，使菌液细菌密度维持在3.0-5.0*10⁸cuf/ml，对照组浇灌等体积清水。每个处理组25 株烟草苗，每个处理3次重复。供试菌株处理7d后浇灌青枯病病原菌，每株30ml，使其细菌密度维持在3.0-5.0*10⁷cuf/ml。病原菌处理后每天观察其生长状况和发病情况，30d后统计最终结果。

试验设置如下处理：

处理1：清水处理

处理2：先浇清水+后浇青枯病原菌

处理3：先浇生防青枯病功能菌剂+后浇青枯病病原菌

选取露天试验地烟草黑胫病连续发病的地块，设置4个处理，以药剂 58％甲霜灵锰锌(每袋兑水100kg)灌根为阳性对照，未进行任何药剂处理的为空白对照，3次重复，每小区种30株烟，所有处理随机区组排列。药剂处理浓度及用量参考药剂说明，烟苗移栽时灌根施用，施用2次；芽孢杆菌浓度为2*10⁸cfu/ml，60ml菌液灌根施用，共施用3次，烟苗移栽时第 1次灌根，后每隔10d灌1次。2019年4月27日移栽，田间栽培管理方法与当地一致，不施用其他杀菌剂，烟草进入旺长期后进行防效统计与分析。

处理1：清水

处理2：先浇清水+后浇黑胫病病原菌

处理3：先浇生防黑胫病功能菌剂+后浇黑胫病病原菌

处理4：先浇58％甲霜灵锰锌+后浇黑胫病病原菌

2结果与分析

2.1不同生防菌株对烟草青枯病的温室防效

所得结果列于表4中。

表4各处理对烟草青枯病的温室防治结果表

注：不同字母表示在a＝0.05显著下的差异

由表4可知，接种病原菌8天后，对照组烟株开始发病，植株底部叶片出现萎蔫现象，而试验组各处理的感病时间则相对有所推迟，病原菌接种后30天，对各处理的感病程度进行了统计分析，生防烟草青枯病功能菌剂处理对烟株青枯病的防效达42.51％。

2.2不同生防菌株对烟草黑胫病的田间防效

所得结果列于表5中。

表5不同生防菌株对烟草黑胫病的田间防效

处理	发病率％	病情指数	防治效果％
				处理1	13.66	6.73	-
处理2	22.33	5.0	8.5±0.55
				处理3	6.33	1.86	59.74±0.39
处理4	4.0	1.46	62.73±0.40

注：不同字母表示在a＝0.05显著下的差异

由表5可知，利用生防菌株作为生防潜力菌株开展烟草黑胫病小区试验，清水处理下烟株发病率接近22.3％，生防黑胫病功能菌剂处理防治效果达59.74与农药处理接近。

3.结论与讨论

综合以上结果可知：青枯病生防菌剂和黑胫病生防菌剂的整体防效分别达42.51％和59.74％，以上两种生防功能菌剂用于烟草生物防治领域具有良好的应用前景和实用性。

实施例7有机肥样品1的应用效果实验

1材料与方法

1.1试验时间及地点

2019年5月选择曲靖市越州镇马坊村具有严重烟草根结线虫发病史的烟田土壤(海拔2026.3m、E:103°0′2438″、N：25°41′13″)开展生防菌防治线虫盆栽试验，2019年4月在该地烟田(海拔2029.3m、E:103°0′2439″、N： 25°41′10″)开展生防有机肥防治线虫小区试验。试验地地势平坦，面积共为0.25hm²,土壤类型为红壤，pH5.08。

1.2供试材料

供试烟草品种为云烟97，万寿菊秸秆有机肥、万寿菊秸秆生防有机肥样品1、烟草专用复合肥(N-P₂O₅-K₂O＝15-8-25)，普通过磷酸钙(P₂O₅≥17％)，硫酸钾(K₂O≥50％)，以上肥料均由云南云叶化肥股份有限公司生产。

1.3试验设计

1.3.1烤烟栽培及施肥模式

栽培模式为起垄覆膜，株行距1.2m×0.6m，13890株/hm²。常规施肥为亩施纯氮6.0kg，氮、磷、钾比为1:1.5:3，万寿菊秸秆有机肥和生防功能有机肥在移栽前塘施，烟草专用复合肥、普钙和硫酸钾在移栽时中层环施。

1.3.2生防菌防治线虫盆栽试验设计

试验共设4个处理，将肥料与土混匀装盆，每盆装土5kg，水肥管理一致。在烟苗移栽时设置如下处理：

1不施用任何有机肥的处理作为对照；

2万寿菊秸秆有机肥200g/株穴施；

3万寿菊秸秆生防有机肥200g/株穴施(未烘干)；

4万寿菊秸秆生防有机肥200g/株穴施(烘干)。

试验对各处理分别设置6次重复。

1.3.3生防有机肥防治线虫小区试验设计

试验设置4个处理：

处理1，常规施肥；

处理2，常规施肥+万寿菊秸秆有机肥200kg/亩；

处理3，常规施肥+万寿菊秸秆生防有机肥(对比例2，未烘干)200kg/ 亩；

处理4，常规施肥+万寿菊秸秆生防有机肥样品1(烘干)200kg/亩。设置3次重复，每小区43.2m²，60株烟。各处理肥料用量参见表6。

表6各处理肥料用量

1.3.4调查方法

每小区选取15株烟，取根际土样混匀后，用蔗糖悬浮离心法对根结线虫虫口密度进行统计，烟草移栽后60天进行第2次取样检测根结线虫的虫口密度，计算各处理小区的线虫减退率校正防效。按照GB/T 23222—2008 的方法进行病害等级统计，农艺性状调查按照《中华人民共和国烟草行业标准YC/T 142-2010烟草农艺性状调查方法》进行。

线虫减退率校正防效＝[1-(处理前空白对照线虫密度×处理后小区线虫密度)/(处理后空白对照线虫密度×处理前小区线虫密度)]×100％ (1)

病情指数＝∑[(病级数×该病级株数)/(调查总数×最高级值)]×100％ (2)

防治效果＝[(对照区病情指数-处理区病情指数)/对照区病情指数]×100％ (3)

烟叶烘烤结束后称量各处理相应的烟叶干重，根据各处理质量、供试烟株数量和当年收购价格计算各处理经济性状。

1.3.5数据处理

利用Excel 2007进行数据统计，利用SPSS 19.0软件进行显著性检验， Duncan氏新复极差法进行多重比较。

2结果与分析

2.1不同生防有机肥处理对烟草根结线虫的防效

不同生防有机肥处理对烟草根结线虫的防效见表7。施用不同有机肥处理60天后，除处理一外，其余各处理线虫数量均有所下降，采收期对根系根结线虫发病情况进行统计，防效依此为处理四﹥处理三﹥处理二﹥处理一。

表7不同有机肥处理对烟株根际土壤中根结线虫减退率的影响

2.2不同生防有机肥处理对烟草根结线虫的防治效果

由8的结果可知：不同生防有机肥处理对小区试验烟株不同时期线虫防效的影响为，团棵期、旺长期、成熟期线虫防效由高到低依次为处理4 ﹥处理3﹥处理2﹥处理1，同时对青枯病、黑胫病的防效亦呈现此效果。

表8不同处理间烤烟病害发生情况及防效比较

结论

(1)本申请提供的生防有机肥样品1中功能微生物的存活数量决定了其生防效果，功能微生物有效孢子量越大其生防效果越佳，功能微生物孢子在有机肥中存活的较佳条件为3％-8％之间，青枯病、黑胫病及其他病害的发生率与根结线虫病的发生率呈正比，原因为青枯病、黑胫病及根结线虫等病害极易形成复合侵染。

(2)添加黑胫病、青枯病生防菌的功能有机肥样品1对病害的抑制有积极作用，利用万寿菊秸秆腐熟发酵的生防有机肥可广泛用于根结线虫病的防治。

有机肥样品2～3所得生防结果与样品1相同，在此不累述。

在本说明书中所谈到的“一个实施例”、“另一个实施例”、“实施例”、“优选实施例”等，指的是结合该实施例描述的具体特征、结构或者特点包括在本申请概括性描述的至少一个实施例中。在说明书中多个地方出现同种表述不是一定指的是同一个实施例。进一步来说，结合任一实施例描述一个具体特征、结构或者特点时，所要主张的是结合其他实施例来实现这种特征、结构或者特点也落在本申请的范围内。

尽管这里参照本申请的多个解释性实施例对本申请进行了描述，但是，应该理解，本领域技术人员可以设计出很多其他的修改和实施方式，这些修改和实施方式将落在本申请公开的原则范围和精神之内。更具体地说，在本申请公开说明书和权利要求的范围内，可以对主题组合布局的组成部件和/或布局进行多种变型和改进。除了对组成部件和/或布局进行的变形和改进外，对于本领域技术人员来说，其他的用途也将是明显的。

Claims (10)

1.一种具有生防烟草黑胫病功能的菌株，其特征在于，所述菌株为菌株WSWFJ34；所述菌株为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis，其保藏登记号为：CGMCC No.20141。

2.一种烟草黑胫病、青枯病、根结线虫病用生防有机肥，其特征在于，至少包含：含如权利要求1所述菌株的生防黑胫病功能菌剂、生防青枯病功能菌剂、万寿菊秸秆；

所述生防青枯病功能菌剂中含菌株WSWFJ38；

所述菌株WSWFJ38保藏登记号为：CGMCC No.20143；所述菌株为枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis。

3.根据权利要求2所述的生防有机肥，其特征在于，至少包含：所述万寿菊秸秆800～900份、所述生防黑胫病功能菌剂3～7.5份、所述生防青枯病功能菌剂3～7.5份。

4.根据权利要求2所述的生防有机肥，其特征在于，还包含：碳酸氢铵、菜籽枯饼。

5.根据权利要求4所述的生防有机肥，其特征在于，包括：所述万寿菊秸秆800～900份、生防黑胫病功能菌剂3～7.5份、生防青枯病功能菌剂3～7.5份、菜籽枯饼80～120份、腐熟菌剂2～5份、硝酸铵12～30份、碳酸氢铵0～30份。

6.一种如权利要求2～5中任一项所述的烟草黑胫病、青枯病、根结线虫病用生防有机肥的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤S100：按重称取发酵原料后混合均匀，堆肥发酵得到一次发酵产物；

步骤S200：陈化所述一次发酵产物得到半成品有机肥；

步骤S300：将生防黑胫病功能菌剂、生防青枯病功能菌剂喷洒至所述半成品有机肥表面，烘干后得到所述生防有机肥。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述发酵原料包括：万寿菊秸秆、菜籽枯饼、腐熟菌剂、硝酸铵、碳酸氢铵、生防黑胫病功能菌剂、生防青枯病功能菌剂；

优选地，所述发酵原料包括：万寿菊秸秆800-900份，菜籽枯饼80-120份、腐熟菌剂2-5份、硝酸铵12-30份、碳酸氢铵0-30份、生防黑胫病功能菌剂3-7.5份、生防青枯病功能菌剂3-7.5份；

优选地，所述菜籽枯饼为油菜枯饼。

8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述发酵原料的C/N为25-30:1；

所述步骤S100中发酵条件为：物料含水量为50％-55％之间，pH调节为5.0-7.5之间，至堆肥内温度达到40-65℃之间开始翻堆，并控制堆内发酵温度为55-70℃，发酵28-35天，期间每隔两天翻抛一次后。

9.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S200为在条垛式发酵槽内将物料堆成长为30-50米，宽为6-10米，高0.5-0.8米的堆体，陈化堆贮7-10天，待温度降至30-40度，保持一周以上不再升高。

10.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S300烘干为：在40-55℃下，烘干至物料含水量至5％-8％止。

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