CN112386642A

CN112386642A - 一种大风叶提取物及其制备方法和用途

Info

Publication number: CN112386642A
Application number: CN202011443420.9A
Authority: CN
Inventors: 苏启表
Original assignee: Guangdong Pharmaceutical University
Current assignee: Guangdong Pharmaceutical University
Priority date: 2020-12-11
Filing date: 2020-12-11
Publication date: 2021-02-23

Abstract

本发明公开了一种大风叶提取物及其制备方法和用途，大风叶为紫珠属马鞭草科植物大叶紫珠Callicarpa macrophylla Vahl的全株，大风叶提取物为大风叶水提物的乙醇洗脱部位，提取方法为：取大风叶粉碎成细粉，加入适量水加热提取2～4次，收集提取液浓缩至1.0～1.2g/m；再采用硅胶色谱柱对以上浓缩液进行柱层析分离，以不同浓度乙醇为流动相进行梯度洗脱，收集各洗脱物浓缩至浸膏。该大风叶提取物可以在制备治疗/预防高尿酸血症及其相关疾病或具有调节尿酸功能药物方面应用。本发明首次发现大风叶提取物具有明显的调节尿酸活性，具有制备预防或治疗高尿酸血症及其相关疾病的药物制剂的成药潜力，且药物制剂的制备方法简单，成本低，成药经济效益好。

Description

一种大风叶提取物及其制备方法和用途

技术领域

本发明属于中医药技术领域，具体涉及一种大风叶提取物及其制备方法和用途。

背景技术

尿酸是人类嘌呤化合物的终末代谢产物，嘌呤代谢紊乱导致高尿酸血症(HUA)。高尿酸血症是指在正常嘌呤饮食状态下，非同日两次空腹血尿酸水平男性高于420μmol/L，女性高于360μmol/L，即称为高尿酸血症。痛风(gout)是一种由于嘌呤代谢紊乱产生过多尿酸及(或)尿酸***减少致尿酸水平升高，并形成尿酸结晶沉积于关节、软组织、肾脏等引发的一组代谢性疾病。高尿酸血症通常被认为是痛风的标志，据统计约有5％～12％的高尿酸血症患者最终可发展为痛风。此外，近年的研究发现高尿酸血症不仅是痛风最重要的生化基础，而且与高血压、高脂血症、动脉粥样硬化、肥胖、胰岛素抵抗、肾病、炎症、感染性疾病的严重程度、肿瘤溶解综合征、更年期综合征、器官移植并发症和某些疑难病症（阻塞性睡眠呼吸暂停、原发性干燥综合征等）的发生密切相关，所以控制高尿酸血症对治疗痛风等严重代谢性疾病及与之相关的疾病具有重要意义。

目前，临床上用于抗高尿酸血症的药物主要涉及减少尿酸生成和增加尿酸***两方面。减少尿酸生成的药物有黄嘌呤氧化酶（Xanthine oxidase，XOD）抑制剂，主要有别嘌呤醇，但别嘌呤醇会引起过敏、肝肾损伤及骨髓抑制等不良反应，在一定程度上限制了其临床应用。fexbuxostat为黄嘌呤氧化酶/脱氢酶选择性抑制剂药，该药对适度肾损伤患者比别嘌呤醇有更好的安全性，但也有肝功能异常、胃肠道反应、关节痛和出疹等不良反应报道。促尿酸***药有丙磺舒、苯磺唑酮、苯溴马隆等，作用于肾近曲小管的尿酸盐转运体，从而抑制尿酸的重吸收。近来研究发现，苯溴马隆有引起暴发性肝炎的危险。因此，研究高效低毒的抗高尿酸血症药物已经迫在眉睫。近几年研究发现，中药对治疗高尿酸血症也有较好的效果，并显示较小或无的毒副作用。如：专利CN100464767C公开了由重量比为黄芪提取物1-8份，秦皮提取物0.3-3份和茶叶提取物0.1-2份与药物中允许的辅助成分共同组成的药物组合物，能控制痛风性关节炎的急性发作和长期治疗高尿酸血症，慢性尿酸性肾病，缓解关节疼痛，促进尿酸***，且毒副作用小。专利CN106822331B公开了以锁状多聚体多酚为主的荔枝皮提取物可有效降低血清中的尿酸水平，可用于制备治疗高尿酸血症及相关疾病的药物。专利CN104983758B公开了毛诃子提取物和毛诃子多酚具有抑制黄嘌呤氧化酶的活性，可有效的降低高尿酸血症模型小鼠血液中的尿酸浓度，具有治疗高尿酸血症的作用，同时对与高尿酸血症相关的代谢性病症：痛风可起到较好的疗效。等等。可见，蛮多中药材的提取物或中药复方制剂都具有制备治疗高尿酸血症药物的成药潜力，而且，中药具有副作用小、综合治疗能力强等优点，因此，开发中药材提取物的新用途，积极探索新的治疗高尿酸血症药物的潜在药物靶标，寻找新型的治疗高尿酸血症药物是当今临床亟需解决的重要问题。

大风叶为紫珠属马鞭草科植物大叶紫珠Callicarpa macrophylla Vahl的全株，主产于广东、广西等地。紫珠属植物共有190余种，中国约有46种，30种可作药用，其中24种有止血作用，目前国内外研究得较多的是杜虹花（Callicarpa formosana Rolfe）、裸花紫珠（Callicarpa nudiflora Hook. et Arn.）、紫珠（Callicarpa bodinieri Levl.）、木紫珠(Callicarpa arborea)，虽然大部分紫珠属植物都具有止血作用，但是由于植物不同，其所含的药用成分也不同，因此，在使用时要注意区分，避免用错药影响药效或者危及健康甚至生命。大风叶性平，味辛、苦，含缩合鞣质、黄酮类、中性树脂、糖类、羟基化合物及镁、钙和微量铁盐等；有止血、止痛、散瘀消炎的功效；用于衄血、咯血、胃肠出血、拔牙出血、子宫出血、跌打肿痛、风湿骨痛、上呼吸道感染、扁桃体炎等症。

现有关于大风叶的研究主要集中在生药鉴别、化学成分分析、活性成分提取、用于止血凝血等方面。大叶紫珠可治疗不同部位的出血，止血机理也有所不同，其对肾炎性血尿治疗的机理是通过降低血清IL-1水平，进一步抑制免疫炎性反应，从而缓解肾炎模型大鼠血尿症状（李淑兰,李文慧,刘宝生.大叶紫珠草对肾炎血尿模型大鼠尿红细胞和血清IL-1影响[J]，《西部医学》2010年9期）。大叶紫珠总黄酮（Total Flavonoids from Callicarpamacrophylla，TFCM）有一定的的体外抗氧化活性，能用于抑制鱼藤酮诱导SH-SY5Y细胞的损伤，其机制可能是与氧化应激及上调凋亡相关基因Mcl-1、下调Cleaved caspase-3的表达有关（刘小颖.大叶紫珠总黄酮抗氧化活性及抗鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞损伤机制的研究[D]，2015 - 武汉科技大学：生物学）。大叶紫珠水煎液可能通过激活内源性、外源性凝血***和调节TXB2、6-keto-PGF1a水平发挥止血作用（鲁合军.大叶紫珠对大鼠凝血功能及TXB2、6-keto-PGF1a表达的影响[D]，《中医学报》2017年6期）。专利CN 107383149 B公开了从紫珠草中快速提取熊果酸和紫珠萜酮的方法，将紫珠草粉碎后，经过醇提、石油醚进行萃取、大孔树脂柱吸附、结晶重结晶得到熊果酸和紫珠萜酮纯品。专利申请CN 104887865 A公开了一种治疗痛风的中药组合物，由下列原料药制备而成，均为重量份：忍冬藤12-16；过山枫9-17；猪苓6-12；铁线莲14-18；瑞香叶7-11；狐肉5-10；马钱子12-15；九里香根8-17；石楠根7-15；荠苨9-13；络石藤11-16；虎刺8-13；路路通7-12；紫珠草12-15；大叶仙茅6-10。专利申请CN 104887866 A公开了一种治疗痛风的中药方剂，由下列原料药制备而成，均为重量份：栀子12-16；铁线莲8-17；瑞香叶9-19；狐肉8-13；路路通7-12；九里香根11-15；猪苓6-12；杜松11-16；紫珠草9-13；络石藤9-17；虎刺12-15；石楠7-15；马钱子6-10；藁本7-11；大叶仙茅10-16。在以上两个专利申请文件中提到可以将紫株草用于治疗痛风的中药制剂中，但是在两个配方制剂中，紫株草只是起到辅助治疗的作用，在文件中也仅是提到紫株草具有止血和抗菌的作用，并且没有对得到的中药制剂进行治病机制分析。因此，目前还没有对大风叶是否具有调节尿酸、治疗高尿酸血症/痛风活性的相关研究，而且目前关于大风叶的药效和用途研究较少，所以，如何将大风叶扩大化使用，使之产生最大的功效，发挥出应有的效能，仍是医学医药研究的主攻方向。

发明内容

本发明的目的是提供一种大风叶提取物及其制备方法和用途，本发明首次发现大风叶提取物具有明显的调节尿酸活性，具有制备预防或治疗高尿酸血症及其相关疾病的药物制剂的成药潜力，且药物制剂的制备方法简单，成本低，成药经济效益好。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

大风叶提取物在制备治疗/预防高尿酸血症及其相关疾病药物或具有调节尿酸功能药物方面的用途。

大风叶提取物的制备方法步骤如下：

（1）取大风叶粉碎成细粉，加入适量水加热提取2～4次，收集提取液浓缩至1.0～1.2g/mL；

（2）采用硅胶色谱柱对以上浓缩液进行柱层析分离，以不同浓度乙醇为流动相进行梯度洗脱，收集各洗脱物浓缩至浸膏即得大风叶提取物。

以上步骤（1）具体的提取方法为：

（1）取大风叶粉碎成细粉，加入6～8倍质量蒸馏水先浸泡40～80min，然后加热至80～-100℃提取40～80min，过滤，收集滤液；

（2）滤渣再加入6～8倍质量蒸馏水加热至80～100℃提取40～80min，过滤，收集滤液；

（3）重复提取滤渣1～3次，合并多次提取得到的滤液浓缩至1.0～1.2g/mL，即得大风叶的水提物。

以上不同浓度乙醇是体积浓度为0～95%的乙醇。在0～95%的体积浓度中选取若干个浓度组成梯度洗脱液。

优选地，所述不同浓度乙醇是体积浓度为0%、30%、60%、75%、95%的乙醇。

优选地，选取由体积浓度为30～75%的乙醇洗脱得到的大风叶提取物制备治疗/预防高尿酸血症及其相关疾病药物或具有调节尿酸功能药物。

所述高尿酸血症及其相关疾病为由尿酸代谢失调引起的高血压、高脂血症、动脉粥样硬化、肥胖、胰岛素抵抗、肾病、炎症、感染性疾病、肿瘤溶解综合征、更年期综合征、器官移植并发症、阻塞性睡眠呼吸暂停和原发性干燥综合征等中的一种或多种。

所述的大风叶提取物选择性添加常规辅料，按照常规工艺制成临床可接受的用于治疗/预防高尿酸血症及其相关疾病或具有调节尿酸功能的药物制剂。

所述制剂包括片剂、胶囊剂、滴丸、颗粒剂等。

所述的常规辅料包括淀粉、乳糖、微晶纤维素、糊精、磷酸钙、聚乙二醇-4000、聚乙二醇-6000、羧甲基纤维素钠、羟丙纤维素或交联聚维酮等中一种以上。

本发明的有益效果是：

1、本发明首次发现大风叶提取物具有明显的调节尿酸活性，具有制备预防或治疗高尿酸血症及其相关疾病的药物制剂的成药潜力，为开发抗高尿酸血症创新药物提供了新的物质基础，具有潜在且巨大的社会效益和经济效益。

2、本发明的大风叶资源丰富，大风叶来源方便易得，可用于大风叶提取物的大量制备。虽然大风叶水提物或醇提物在高用量时也具有一定的抗高尿酸血症活性，但是用量大且活性低，因此，在本发明的大风叶制备方法中，将大风叶先经过多次水提合并提取液，得到大风叶水提物，再对大风叶水提物用不同浓度的乙醇进行洗脱得到不同的洗脱部位，最后收集对高尿酸血症及其相关疾病具有显著疗效的部位，极大程度提高了最终得到的大风叶提取物及其药物制剂调节尿酸的活性；而且整个提取制备方法简单易行、成本低、污染小，利于节能减排条件下的大规模生产，产业化前景好。

3、本发明分别通过研究大风叶提取物对次黄嘌呤引起高尿酸血症小鼠血清尿酸水平的影响以及大风叶提取物对尿酸钠诱导的大鼠足趾肿胀的影响，有力证明了本发明的大风叶提取物对高尿酸血症具有明显的调节尿酸活性。

4、本发明的大风叶提取物还具有止血、止痛、散瘀消炎的功效，可用于衄血、咯血、胃肠出血、拔牙出血、子宫出血、跌打肿痛、风湿骨痛、上呼吸道感染、扁桃体炎等症，可以在用于预防或治疗高尿酸血症或痛风的同时起到治疗其他合并症的效果。

5、将大风叶提取物与辅料混合制成片剂、胶囊剂、滴丸、颗粒剂等，这些制剂较为方便服用，能单独或者搭配其他药剂服用，通过内服能将药性通过血液快速输送至病症部位进行有效治疗。

具体实施方式

为了更加详细的介绍本发明，下面结合实施例，对本发明做进一步说明。

实施例1 大风叶水提物的制备

将大风叶粉碎成细粉，取大风叶细粉1kg，加入6L蒸馏水浸泡60min，然后加热至80℃提取60min，过滤，收集滤液；滤渣再加入6L蒸馏水加热至80℃提取60min，过滤，收集滤液；滤渣再加入6L蒸馏水加热至80℃提取60min，过滤，收集滤液；合并3次提取液，浓缩至1.0～1.2g/mL，即得。

实施例2 大风叶水提物的制备

将大风叶粉碎成细粉，取大风叶细粉1kg，加入7L蒸馏水浸泡60min，然后加热至90℃提取60min，过滤，收集滤液；滤渣再加入7L蒸馏水加热至90℃提取60min，过滤，收集滤液；滤渣再加入7L蒸馏水加热至90℃提取60min，过滤，收集滤液；合并3次提取液，浓缩至1.0～1.2g/mL，即得。

实施例3 大风叶水提物的制备

将大风叶粉碎成细粉，取大风叶细粉1kg，加入8L蒸馏水浸泡60min，然后加热至98℃提取60min，过滤，收集滤液；滤渣再加入8L蒸馏水加热至98℃提取60min，过滤，收集滤液；滤渣再加入8L蒸馏水加热至98℃提取60min，过滤，收集滤液；合并3次提取液，浓缩至1.0～1.2g/mL，即得。

实施例4 大风叶水提物的制备

将大风叶粉碎成细粉，取大风叶细粉1kg，加入8L蒸馏水浸泡80min，然后加热至80℃提取80min，过滤，收集滤液；滤渣再加入7L蒸馏水加热至90℃提取60min，过滤，收集滤液；滤渣再加入6L蒸馏水加热至98℃提取40min，过滤，收集滤液；合并3次提取液，浓缩至1.0～1.2g/mL，即得。

实施例5 大风叶水提物乙醇洗脱部位的制备

取采用实施例2的制备方法制备得到的大风叶水提物浓缩液，采用硅胶色谱柱进行柱层析分离，以体积浓度为0%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%的乙醇为流动相依次进行梯度洗脱，分别收集各洗脱物浓缩至浸膏即得大风叶提取物。

实施例6 大风叶水提物乙醇洗脱部位的制备

取采用实施例2的制备方法制备得到的大风叶水提物浓缩液，采用硅胶色谱柱进行柱层析分离，以体积浓度为0%、15%、30%、45%、60%、75%、90%的乙醇为流动相依次进行梯度洗脱，分别收集各洗脱物浓缩至浸膏即得大风叶提取物。

实施例7 大风叶水提物乙醇洗脱部位的制备

取采用实施例2的制备方法制备得到的大风叶水提物浓缩液，采用硅胶色谱柱进行柱层析分离，以体积浓度为0%、30%、60%、75%、95%的乙醇为流动相依次进行梯度洗脱，分别收集各洗脱物浓缩至浸膏即得大风叶提取物。

实施例8 大风叶水提物乙醇洗脱部位的制备

取采用实施例2的制备方法制备得到的大风叶水提物浓缩液，采用硅胶色谱柱进行柱层析分离，以体积浓度为15%、35%、55%、75%、95%的乙醇为流动相依次进行梯度洗脱，分别收集各洗脱物浓缩至浸膏即得大风叶提取物。

实施例9 大风叶醇提物的制备

将大风叶粉碎成细粉，取大风叶细粉1kg，加入6L体积浓度为60%的乙醇浸泡60min，然后加热回流提取60min，过滤，收集滤液；滤渣再加入6L体积浓度为60%的乙醇加热回流提取60min，过滤，收集滤液；滤渣再加入6L体积浓度为60%的乙醇加热回流提取60min，过滤，收集滤液；合并3次提取液，浓缩回收乙醇成膏，即得。

实施例10 大风叶提取物片剂的制备

【处方】由实施例7的方法制得的大风叶水提物的60%乙醇洗脱部位（取相当于大风叶药材3.5kg的量）、干淀粉600g；

【制备方法】将大风叶水提物的60%乙醇洗脱部位、干淀粉混匀，加入适量羧甲基纤维素钠、滑石粉，制成颗粒，干燥，压制成1000片，所得的大风叶提取物片，每片含大风叶3.5g。

以上所述的干淀粉、羧甲基纤维素钠和滑石粉均可在市场上购买得到。

实施例11 大风叶提取物胶囊的制备

【制备方法】将大风叶水提物的60%乙醇洗脱部位、干淀粉混匀，加入适量羧甲基纤维素钠、滑石粉，制成颗粒，干燥，装囊成1000粒，所得的大风叶提取物胶囊，每粒含大风叶3.5g。

实施例12 大风叶提取物颗粒剂的制备

【处方】由实施例7的方法制得的大风叶水提物的60%乙醇洗脱部位（取相当于大风叶药材10kg的量）、干淀粉1kg；

【制备方法】将大风叶水提物的60%乙醇洗脱部位、干淀粉混匀，加入适量羧甲基纤维素钠、滑石粉，制成颗粒，干燥，分装成1000袋，所得的大风叶提取物颗粒，每袋含大风叶10g。

药性试验

为了验证本发明大风叶提取物调节尿酸的活性，本申请人进行了以下试验：

1、大风叶提取物对次黄嘌呤引起高尿酸血症小鼠血清尿酸水平的影响

供试品：所述大风叶水提物均是由实施例2中所述方法制得的大风叶水提物，所述大风叶醇提物均是由实施例9中所述方法制得的大风叶醇提物，所述大风叶提取物均是由实施例7中所述方法制得的大风叶水提物的60%乙醇洗脱部位。

处理方法：小鼠120只，随机分为12组，每组10只，即正常组，模型组，阳性对照组（别嘌呤醇20mg.kg^-1），大风叶提取物高、中、低剂量组（分别相当于大风叶药材10g.kg^-1、5g.kg^-1和2.5g.kg^-1)，大风叶水提物高、中、低剂量组（分别相当于大风叶药材20g.kg^-1、10g.kg^-1和5g.kg^-1)，大风叶醇提物高、中、低剂量组（分别相当于大风叶药材20g.kg^-1、10g.kg^-1和5g.kg^-1)，灌胃给药，每天1次，正常组和模型组灌胃给予等体积蒸馏水，连续12d。末次给药1 h后，除正常组外，其他各组灌胃给予次黄嘌呤0.4g.kg^-1，2.5h后于各组小鼠眼球取血，3000r.min^-1离心10min，取血清，采用磷钨酸比色法测定血清尿酸含量。

结果：如表1 所示，与模型组相比较，大风叶提取物高、中剂量组以及大风叶水提物高剂量组、大风叶醇提物高剂量组小鼠的血清尿酸水平明显降低，比较有统计学意义（P＜0.05）。

2、大风叶提取物对尿酸钠诱导的大鼠足趾肿胀的影响

处理方法：大鼠90只，随机分为9组，每组10只，即正常组，模型组，阳性对照组（秋水仙碱0.5mg.kg^-1），大风叶提取物高、低剂量组（分别相当于大风叶药材10g.kg^-1和2.5g.kg^-1)，大风叶水提物高、低剂量组（分别相当于大风叶药材10g.kg^-1和2.5g.kg^-1)，大风叶醇提物高、低剂量组（分别相当于大风叶药材10g.kg^-1和2.5g.kg^-1)，灌胃给药，每天1次，正常组和模型组灌胃给予等体积蒸馏水，连续12d。末次给药1h后，正常组于大鼠右后足跖皮下注射0.15mL生理盐水，其他各组于大鼠右后足跖皮下注射0.15mL尿酸钠（100g.L^-1)致炎，分别于注射前后测定大鼠右后足跖周径。观察和测定注射后3、4、5、6h大鼠右后足跖的肿胀情况及其周径，计算其肿胀率。

足跖肿胀率=100*(t时间周径-t₀时间周径)/t₀时间周径。

结果：如表2 所示，与对照组比较，模型组大鼠足趾肿胀率显著增高；和模型组比较，大风叶提取物高剂量组（剂量为10g药材）大鼠在造模后3、4h的肿胀率显著降低，大风叶提取物低剂量组（剂量为2.5g药材）大鼠在造模后4h的肿胀率显著降低；大风叶水提物高剂量组（剂量为10g药材）大鼠在造模后4h的肿胀率显著降低，大风叶醇提物高剂量组（剂量为10g药材）大鼠在造模后4h的肿胀率显著降低，差异有统计学意义(P<0.05)。大风叶水提物低剂量组（剂量为2.5g药材）和大风叶醇提物低剂量组（剂量为2.5g药材）无显著影响。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.大风叶提取物在制备治疗/预防高尿酸血症及其相关疾病药物或具有调节尿酸功能药物方面的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述大风叶为紫珠属马鞭草科植物大叶紫珠的全株，大风叶提取物的制备方法步骤如下：

3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，步骤（1）具体的提取方法为：

（1）取大风叶粉碎成细粉，加入6～8倍质量蒸馏水先浸泡40～80min，然后加热至80～100℃提取40～80min，过滤，收集滤液；

4.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，步骤（2）中乙醇的体积浓度范围为0～95%。

5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述乙醇的体积浓度为0%、30%、60%、75%、95%。

6.根据权利要求4或5所述的用途，其特征在于，选取由体积浓度为30～75%的乙醇洗脱得到的大风叶提取物。

7.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，高尿酸血症及其相关疾病为由尿酸代谢失调引起的高血压、高脂血症、动脉粥样硬化、肥胖、胰岛素抵抗、肾病、炎症、感染性疾病、肿瘤溶解综合征、更年期综合征、器官移植并发症、阻塞性睡眠呼吸暂停和原发性干燥综合征中的一种或多种。

8.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述的大风叶提取物选择性添加常规辅料，按照常规工艺制成临床可接受的用于治疗/预防高尿酸血症及其相关疾病或具有调节尿酸功能的药物制剂。

9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述制剂包括片剂、胶囊剂、滴丸或颗粒剂。