CN112279903B - 一种提高水稻穗期稻瘟病抗性的基因及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种提高水稻穗期稻瘟病抗性的基因及其用途。提高水稻穗期稻瘟病抗性的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1的第108位碱基‑第797位碱基序列所示，编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明首次从稻瘟病持久抗性品种三黄占2号中成功克隆到提高水稻穗期稻瘟病抗性的基因，利用Camv35S启动子构建超表达Os03g0694000基因的水稻转化载体。该载体转化水稻后能大幅提高Os03g0694000基因的表达量，伴随着表达量的提高，转化植株的穗期稻瘟病抗性有明显的提高，并且转基因植株在生长状态及农艺性状上没有明显的改变。本发明超表达Os03g0694000基因的技术可以应用于水稻的基因遗传工程育种和生产实践中，提高水稻的穗期稻瘟病抗性，从而保障目前粮食短缺的情况下水稻的生产安全。

Description

一种提高水稻穗期稻瘟病抗性的基因及其用途

技术领域：

本发明属于水稻领域，具体涉及一种提高水稻穗期稻瘟病抗性的基因及其用途。

背景技术：

稻瘟病按发生的部位主要分为叶瘟和穗瘟，穗瘟对水稻产量的危害最为严重。利用品种的抗性，开展稻瘟病抗性育种被认为是最经济、有效和环境友好的防治途径。

研究表明，水稻的稻瘟病抗性分为两大类，分别是由主效抗病基因控制的质量抗性和由数量性状位点控制的数量抗性。近年来，利用主效抗性基因已培育出了许多水稻稻瘟病抗病品种。但是，由主效基因控制的质量抗性表现为水稻寄主与稻瘟病菌的不亲和性，具有小种专化性。这些品种大面积或长时间推广应用时，一旦遇到新的小种或病原菌毒性变异时就容易丧失其抗病性，以致大部分抗病品种推广应用2～3年后即丧失其稻瘟病抗性。而由多个微效基因控制的数量抗性表现为寄主与病菌的亲和性，抑制稻瘟病菌繁殖，延缓发病进程，在形态上表现为叶片的病斑数少、病斑小。由于数量抗性的小种专化性不强，或由于其微效多基因的性质不容易被稻瘟病菌克服，因此数量抗性被认为与水稻稻瘟病持久抗性紧密相关，已成为研究的热点和前沿。

发明内容：

本发明的第一个目的是提供提高水稻穗期稻瘟病抗性的功能蛋白。

本发明的提高水稻穗期稻瘟病抗性的功能蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明的第二个目的是提供编码上述功能蛋白的提高水稻穗期稻瘟病抗性的基因。

优选，所述的提高水稻穗期稻瘟病抗性的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1的第108位碱基-第797位碱基序列所示。应当理解，考虑到密码子的简并性，在不改变氨基酸序列的前提下，对上述编码基因的核苷酸序列进行修改，也属于本发明的保护范围内。

本发明的第三个目的是提高水稻穗期稻瘟病抗性的基因在提高水稻穗期稻瘟病抗性中的应用。

优选，是在水稻中超表达上述提高水稻穗期稻瘟病抗性的基因从而提高水稻穗期稻瘟病抗性。

本发明首次从稻瘟病持久抗性品种三黄占2号(SHZ-2)中成功克隆到提高水稻穗期稻瘟病抗性的基因-Os03g0694000基因，利用Camv35S启动子构建超表达Os03g0694000基因的水稻转化载体。该载体转化水稻后能大幅提高Os03g0694000基因的表达量，伴随着表达量的提高，转化植株的穗期稻瘟病抗性有明显的提高，并且转基因植株在生长状态及农艺性状上没有明显的改变。因此，本发明超表达Os03g0694000基因的技术可以应用于水稻的基因遗传工程育种，并能够应用于生产实践中，提高水稻的穗期稻瘟病抗性，从而保障目前粮食短缺的情况下水稻的生产安全。

附图说明：

图1是PHQSN载体图谱；

图2是转基因植株中Os03g0694000基因表达水平检测，其中CK表示野生型日本晴，OE3、OE4、OE6是转基因植株；

图3是过表达Os03g0694000基因使水稻植株的穗瘟抗性增强，其中CK表示野生型日本晴，OE3、OE4是转基因植株。

具体实施方式：

以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

实施例1：

1.Os03g0694000基因的克隆，超表达载体构建

取水稻品种SHZ-2的幼穗部位，用TriZol Reagent(Invitrogen公司，其货号为：15596026)提取叶片总RNA，采用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测总RNA的纯度及量，取1μg的总RNA做起始逆转录反应，所采用的逆转录酶为PrimeScript(TAKARA公司)，逆转录反应的步骤参考该逆转录酶的使用说明。以逆转录产物为模板，采用引物F:CGGAATTC(EcoR1酶切位点)TGTCACTGCGCTTCTTTCCTAG和R:GAAGATCT(BglII酶切位点)ACACCATGAAAATGCTCTCGGA进行PCR扩增，PCR所用的聚合酶为KOD FX(Toyobo公司)。反应体系为50uL，按照KOD FX的说明书配制PCR反应体系。反应条件为：94℃5min；94℃30sec，60℃30sec，68℃60sec，35个循环；68℃10min。PCR扩增获得约823bp的片段。采用琼脂糖凝胶电泳回收该片段后，用EcoR1和BglII对PCR片段和pHQS N载体(载体图如图1所示，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示)分别进行双酶切，酶切后分别回收目标片段和载体片段，用T4连接酶(NEB公司)16℃连接16小时，连接体系为：T4连接酶1uL，10Xbuffer 1uL，Os03g0694000基因酶切片段6ul(200ng)，pHQSN载体酶切片段2uL(50ng)。取1uL连接产物，用电击法转化到大肠杆菌DH5α中，转化产物涂布卡那霉素抗性的LB固体培养基。37℃培养过夜，挑10个单克隆进行提取质粒，酶切鉴定。选择两个阳性克隆进行测序检测，测序发现，扩增片段序列全长823个碱基，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，包含一个开放阅读框，为690个碱基(atggagcacagcttcaaaaccatagcagctggagtggtgatcgtcgtgctgctcctgcagcaggcgcccgtgctgattcgggccaccgacgcggaccctctccaggacttctgcgtcgccgacctcgacagcaaggtcacggtgaacgggcacgcgtgcaagccggcgtcggccgccggcgacgagttcctcttctcctccaagattgccacgggcggcgacgtgaacgctaacccgaacggctccaacgtcacggagctcgacgtcgccgagtggcccggcgtcaacacgctcggcgtgtccatgaaccgcgtcgacttcgcgcccggcggcaccaacccgccgcacatccacccgcgcgccaccgaggtcggcatcgtgctccgcggcgagctcctcgtcggcatcatcggcaccctcgacaccgggaacaggtactactccaaggtggtccgtgccggcgagacgttcgtcatcccgagggggctcatgcacttccagttcaacgttggcaagacggaggccaccatggtggtgtccttcaacagccagaaccccggcatcgtcttcgtcccgctcacattgttcggctccaacccgcccatcccgacgccggtgcttgtcaaggcgcttcgcgtggatgctggtgtagttgagctgctcaagtccaagttcaccggcgggtactaa)，即为Os03g0694000基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1的第108位碱基-第797位碱基序列所示，编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。并获得携带有Os03g0694000基因的超表达载体pHQSN，命名为：超表达载体pHQSN-OE，其是将Os03g0694000基因片段***到超表达载体pHQSN的Camv35S启动子下游的EcoR1和BglII的酶切位点之间。

2、Os03g0694000基因的转化

采用农杆菌EHA105介导的遗传转化方法将超表达载体pHQSN-OE转入正常粳稻品种日本晴中。转化原代(T₀代)通过PCR及定量PCR检测(F:CGCGCTTCTTTCCTAGTTTCCTT；R:CTGAAGCTGTGCTCCATTGTTG；产物长度：118bp)，从DNA水平和RNA水平鉴定阳性转化植株。阳性植株自交得到转基因1代(T₁代)株系，每个株系选择10株经PCR检测为阳性的植株繁种，得到T₂代植株，T₂代株系再进行PCR检测，找到来源于不同T₀代植株的T₂代纯合株系3个(OE3、OE4、OE6)。对3个株系的幼苗叶片进行荧光定量PCR，检测目标基因Os03g0694000的表达量，以野生型结果为对照。

荧光定量PCR鉴定Os03g0694000基因在转基因植株中过表达效果程序如下：

取PCR检测阳性的转基因植株(OE3、OE4、OE6)三叶期幼苗叶片进行总RNA提取采用的试剂为TriZol Reagent(Invitrogen公司，其货号为：15596026)，根据该试剂的说明书的步骤进行，并用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测总RNA的纯度及量，取1μg的总RNA做起始逆转录反应，所采用的逆转录酶为PrimeScript(Takara公司)，逆转录反应的步骤参考该逆转录酶的使用说明。以逆转录产物为模板，采用引物OsOXO4qF(CGCGCTTCTTTCCTAGTTTCCTT)和OsOXO4qR(CTGAAGCTGTGCTCCATTGTTG)引物对检测Os03g0694000基因的表达情况，采用水稻持家基因EF1a基因的EF1aqF(TTTCACTCTTGGTGTGAAGCAGAT)和EF1aqR(GACTTCCTTCACGATTTCATCGTAA)引物对检测水稻EF1a基因的表达作为内参，以野生型日本晴作为对照。检测结果见图2。结果证明3个转基因植株系相对于野生型，Os03g0694000基因的表达量都大幅度。

3.Os03g0694000基因超表达转基因植株穗期稻瘟病抗性鉴定

把上述纯合的3个超表达转基因T₂代株系(OE3、OE4、OE6)和野生型日本晴植株的种子在37℃萌发，2天后将发芽的种子播种到蓝色小盆，10天后选生长状态一致的小苗种入塑料桶，待水稻抽穗1-2天后，用棉花包裹穗子的中上部分，注入2毫升浓度为1×10⁶个/mL的Magnaporthe oryzae菌株GD08-T13孢子悬浮液，然后用锡箔纸包住棉花，期间每2个小时对接种的穗子进行2-3分钟的喷雾保湿。3周后，测量接种病菌的穗子长度以及感染病菌的穗子长度，计算穗子感染的比例对材料的抗病性进行评估。实验进行3次生物学重复。

结果如表1和图3显示，稻瘟病病菌对野生型植株穗子主轴的平均侵染率达83.23％，但是在3个超表达株系中，稻瘟病病菌对穗子主轴的侵染率分别是32.36％、35.25％和34.11％。证明Os03g0694000基因过表达转基因植株穗期稻瘟病抗性明显高于野生型。

表1

株系名称	调查植株数量	主轴侵染百分比	与CK比较的P值
				CK	12	83.23±8.36
OsOXO4(OE3)	12	32.36±5.78	1.85E-13
				OsOXO4(OE4)	15	35.25±5.32	2.03E-14
OsOXO4(OE6)	17	34.11±6.90	1.62594E-14

综上所述，水稻品种SHZ-2的基因Os03g0694000是水稻穗期抗稻瘟病的功能基因，超表达基因Os03g0694000的转基因植株，其穗期稻瘟病抗性有明显的提高，并且转基因植株在生长状态及农艺性状上没有明显的改变。

序列表

<110> 广东省农业科学院水稻研究所

<120> 一种提高水稻穗期稻瘟病抗性的基因及其用途

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 823

<212> DNA

<213> 水稻三黄占2号(Oryza sativa L)

<400> 1

tgtcactgcg cttctttcct agtttccttc tcaattctca ttctcaaaag agaatatatt 60

gagctgatcg agctagatat atagaagcac tagctagttg atcaacaatg gagcacagct 120

tcaaaaccat agcagctgga gtggtgatcg tcgtgctgct cctgcagcag gcgcccgtgc 180

tgattcgggc caccgacgcg gaccctctcc aggacttctg cgtcgccgac ctcgacagca 240

aggtcacggt gaacgggcac gcgtgcaagc cggcgtcggc cgccggcgac gagttcctct 300

tctcctccaa gattgccacg ggcggcgacg tgaacgctaa cccgaacggc tccaacgtca 360

cggagctcga cgtcgccgag tggcccggcg tcaacacgct cggcgtgtcc atgaaccgcg 420

tcgacttcgc gcccggcggc accaacccgc cgcacatcca cccgcgcgcc accgaggtcg 480

gcatcgtgct ccgcggcgag ctcctcgtcg gcatcatcgg caccctcgac accgggaaca 540

ggtactactc caaggtggtc cgtgccggcg agacgttcgt catcccgagg gggctcatgc 600

acttccagtt caacgttggc aagacggagg ccaccatggt ggtgtccttc aacagccaga 660

accccggcat cgtcttcgtc ccgctcacat tgttcggctc caacccgccc atcccgacgc 720

cggtgcttgt caaggcgctt cgcgtggatg ctggtgtagt tgagctgctc aagtccaagt 780

tcaccggcgg gtactaatta atccgagagc attttcatgg tgt 823

<210> 2

<211> 229

<212> PRT

<213> 水稻三黄占2号(Oryza sativa L)

<400> 2

Met Glu His Ser Phe Lys Thr Ile Ala Ala Gly Val Val Ile Val Val

1 5 10 15

Leu Leu Leu Gln Gln Ala Pro Val Leu Ile Arg Ala Thr Asp Ala Asp

20 25 30

Pro Leu Gln Asp Phe Cys Val Ala Asp Leu Asp Ser Lys Val Thr Val

35 40 45

Asn Gly His Ala Cys Lys Pro Ala Ser Ala Ala Gly Asp Glu Phe Leu

50 55 60

Phe Ser Ser Lys Ile Ala Thr Gly Gly Asp Val Asn Ala Asn Pro Asn

65 70 75 80

Gly Ser Asn Val Thr Glu Leu Asp Val Ala Glu Trp Pro Gly Val Asn

85 90 95

Thr Leu Gly Val Ser Met Asn Arg Val Asp Phe Ala Pro Gly Gly Thr

100 105 110

Asn Pro Pro His Ile His Pro Arg Ala Thr Glu Val Gly Ile Val Leu

115 120 125

Arg Gly Glu Leu Leu Val Gly Ile Ile Gly Thr Leu Asp Thr Gly Asn

130 135 140

Arg Tyr Tyr Ser Lys Val Val Arg Ala Gly Glu Thr Phe Val Ile Pro

145 150 155 160

Arg Gly Leu Met His Phe Gln Phe Asn Val Gly Lys Thr Glu Ala Thr

165 170 175

Met Val Val Ser Phe Asn Ser Gln Asn Pro Gly Ile Val Phe Val Pro

180 185 190

Leu Thr Leu Phe Gly Ser Asn Pro Pro Ile Pro Thr Pro Val Leu Val

195 200 205

Lys Ala Leu Arg Val Asp Ala Gly Val Val Glu Leu Leu Lys Ser Lys

210 215 220

Phe Thr Gly Gly Tyr

225

<210> 3

<211> 9928

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

agagatagat ttgtagagag agactggtga tttcagcgtg tcctctccaa atgaaatgaa 60

cttccttata tagaggaagg tcttgcgaag gatagtggga ttgtgcgtca tcccttacgt 120

cagtggagat atcacatcaa tccacttgct ttgaagacgt ggttggaacg tcttcttttt 180

ccacgatgct cctcgtgggt gggggtccat ctttgggacc actgtcggca gaggcatctt 240

gaacgatagc ctttccttta tcgcaatgat ggcatttgta ggtgccacct tccttttcta 300

ctgtcctttt gatgaagtga cagatagctg ggcaatggaa tccgaggagg tttcccgata 360

ttaccctttg ttgaaaagtc tcaatagccc tttggtcttc tgagactgta tctttgatat 420

tcttggagta gacgagagtg tcgtgctcca ccatgttatc acatcaatcc acttgctttg 480

aagacgtggt tggaacgtct tctttttcca cgatgctcct cgtgggtggg ggtccatctt 540

tgggaccact gtcggcagag gcatcttgaa cgatagcctt tcctttatcg caatgatggc 600

atttgtaggt gccaccttcc ttttctactg tccttttgat gaagtgacag atagctgggc 660

aatggaatcc gaggaggttt cccgatatta ccctttgttg aaaagtctca atagcccttt 720

ggtcttctga gactgtatct ttgatattct tggagtagac gagagtgtcg tgctccacca 780

tgttgggccc ggcgcgccaa gcttgcatgc ctgcaggtcc ccagattagc cttttcaatt 840

tcagaaagaa tgctaaccca cagatggtta gagaggctta cgcagcaggt ctcatcaaga 900

cgatctaccc gagcaataat ctccaggaaa tcaaatacct tcccaagaag gttaaagatg 960

cagtcaaaag attcaggact aactgcatca agaacacaga gaaagatata tttctcaaga 1020

tcagaagtac tattccagta tggacgattc aaggcttgct tcacaaacca aggcaagtaa 1080

tagagattgg agtctctaaa aaggtagttc ccactgaatc aaaggccatg gagtcaaaga 1140

ttcaaataga ggacctaaca gaactcgccg taaagactgg cgaacagttc atacagagtc 1200

tcttacgact caatgacaag aagaaaatct tcgtcaacat ggtggagcac gacacacttg 1260

tctactccaa aaatatcaaa gatacagtct cagaagacca aagggcaatt gagacttttc 1320

aacaaagggt aatatccgga aacctcctcg gattccattg cccagctatc tgtcacttta 1380

ttgtgaagat agtggaaaag gaaggtggct cctacaaatg ccatcattgc gataaaggaa 1440

aggccatcgt tgaagatgcc tctgccgaca gtggtcccaa agatggaccc ccacccacga 1500

ggagcatcgt ggaaaaagaa gacgttccaa ccacgtcttc aaagcaagtg gattgatgtg 1560

atatctccac tgacgtaagg gatgacgcac aatcccacta tccttcgcaa gacccttcct 1620

ctatataagg aagttcattt catttggaga gaacacgggg gactctagaa catggatccc 1680

tacagggtaa atttctagtt tttctccttc attttcttgg ttaggaccct tttctctttt 1740

tatttttttg agctttgatc tttctttaaa ctgatctatt ttttaattga ttggttatgg 1800

tgtaaatatt acatagcttt aactgataat ctgattactt tatttcgtgt gtctatgatg 1860

atgatgatag ttacagaacc gtcgacggat ccccgggaat tctaagagga gtccaccatg 1920

gtagatctga ctagtgttaa cgctagccac caccaccacc accacgtgtg aattacaggt 1980

gaccagctcg aatttccccg atcgttcaaa catttggcaa taaagtttct taagattgaa 2040

tcctgttgcc ggtcttgcga tgattatcat ataatttctg ttgaattacg ttaagcatgt 2100

aataattaac atgtaatgca tgacgttatt tatgagatgg gtttttatga ttagagtccc 2160

gcaattatac atttaatacg cgatagaaaa caaaatatag cgcgcaaact aggataaatt 2220

atcgcgcgcg gtgtcatcta tgttactaga tcgggaatta aactatcagt gtttgacagg 2280

atatattggc gggtaaacct aagagaaaag agcgtttatt agaataacgg atatttaaaa 2340

gggcgtgaaa aggtttatcc gttcgtccat ttgtatgtgc atgccaacca cagggttccc 2400

ctcgggatca aagtactttg atccaacccc tccgctgcta tagtgcagtc ggcttctgac 2460

gttcagtgca gccgtcttct gaaaacgaca tgtcgcacaa gtcctaagtt acgcgacagg 2520

ctgccgccct gcccttttcc tggcgttttc ttgtcgcgtg ttttagtcgc ataaagtaga 2580

atacttgcga ctagaaccgg agacattacg ccatgaacaa gagcgccgcc gctggcctgc 2640

tgggctatgc ccgcgtcagc accgacgacc aggacttgac caaccaacgg gccgaactgc 2700

acgcggccgg ctgcaccaag ctgttttccg agaagatcac cggcaccagg cgcgaccgcc 2760

cggagctggc caggatgctt gaccacctac gccctggcga cgttgtgaca gtgaccaggc 2820

tagaccgcct ggcccgcagc acccgcgacc tactggacat tgccgagcgc atccaggagg 2880

ccggcgcggg cctgcgtagc ctggcagagc cgtgggccga caccaccacg ccggccggcc 2940

gcatggtgtt gaccgtgttc gccggcattg ccgagttcga gcgttcccta atcatcgacc 3000

gcacccggag cgggcgcgag gccgccaagg cccgaggcgt gaagtttggc ccccgcccta 3060

ccctcacccc ggcacagatc gcgcacgccc gcgagctgat cgaccaggaa ggccgcaccg 3120

tgaaagaggc ggctgcactg cttggcgtgc atcgctcgac cctgtaccgc gcacttgagc 3180

gcagcgagga agtgacgccc accgaggcca ggcggcgcgg tgccttccgt gaggacgcat 3240

tgaccgaggc cgacgccctg gcggccgccg agaatgaacg ccaagaggaa caagcatgaa 3300

accgcaccag gacggccagg acgaaccgtt tttcattacc gaagagatcg aggcggagat 3360

gatcgcggcc gggtacgtgt tcgagccgcc cgcgcacgtc tcaaccgtgc ggctgcatga 3420

aatcctggcc ggtttgtctg atgccaagct ggcggcctgg ccggccagct tggccgctga 3480

agaaaccgag cgccgccgtc taaaaaggtg atgtgtattt gagtaaaaca gcttgcgtca 3540

tgcggtcgct gcgtatatga tgcgatgagt aaataaacaa atacgcaagg ggaacgcatg 3600

aaggttatcg ctgtacttaa ccagaaaggc gggtcaggca agacgaccat cgcaacccat 3660

ctagcccgcg ccctgcaact cgccggggcc gatgttctgt tagtcgattc cgatccccag 3720

ggcagtgccc gcgattgggc ggccgtgcgg gaagatcaac cgctaaccgt tgtcggcatc 3780

gaccgcccga cgattgaccg cgacgtgaag gccatcggcc ggcgcgactt cgtagtgatc 3840

gacggagcgc cccaggcggc ggacttggct gtgtccgcga tcaaggcagc cgacttcgtg 3900

ctgattccgg tgcagccaag cccttacgac atatgggcca ccgccgacct ggtggagctg 3960

gttaagcagc gcattgaggt cacggatgga aggctacaag cggcctttgt cgtgtcgcgg 4020

gcgatcaaag gcacgcgcat cggcggtgag gttgccgagg cgctggccgg gtacgagctg 4080

cccattcttg agtcccgtat cacgcagcgc gtgagctacc caggcactgc cgccgccggc 4140

acaaccgttc ttgaatcaga acccgagggc gacgctgccc gcgaggtcca ggcgctggcc 4200

gctgaaatta aatcaaaact catttgagtt aatgaggtaa agagaaaatg agcaaaagca 4260

caaacacgct aagtgccggc cgtccgagcg cacgcagcag caaggctgca acgttggcca 4320

gcctggcaga cacgccagcc atgaagcggg tcaactttca gttgccggcg gaggatcaca 4380

ccaagctgaa gatgtacgcg gtacgccaag gcaagaccat taccgagctg ctatctgaat 4440

acatcgcgca gctaccagag taaatgagca aatgaataaa tgagtagatg aattttagcg 4500

gctaaaggag gcggcatgga aaatcaagaa caaccaggca ccgacgccgt ggaatgcccc 4560

atgtgtggag gaacgggcgg ttggccaggc gtaagcggct gggttgtctg ccggccctgc 4620

aatggcactg gaacccccaa gcccgaggaa tcggcgtgac ggtcgcaaac catccggccc 4680

ggtacaaatc ggcgcggcgc tgggtgatga cctggtggag aagttgaagg ccgcgcaggc 4740

cgcccagcgg caacgcatcg aggcagaagc acgccccggt gaatcgtggc aagcggccgc 4800

tgatcgaatc cgcaaagaat cccggcaacc gccggcagcc ggtgcgccgt cgattaggaa 4860

gccgcccaag ggcgacgagc aaccagattt tttcgttccg atgctctatg acgtgggcac 4920

ccgcgatagt cgcagcatca tggacgtggc cgttttccgt ctgtcgaagc gtgaccgacg 4980

agctggcgag gtgatccgct acgagcttcc agacgggcac gtagaggttt ccgcagggcc 5040

ggccggcatg gccagtgtgt gggattacga cctggtactg atggcggttt cccatctaac 5100

cgaatccatg aaccgatacc gggaagggaa gggagacaag cccggccgcg tgttccgtcc 5160

acacgttgcg gacgtactca agttctgccg gcgagccgat ggcggaaagc agaaagacga 5220

cctggtagaa acctgcattc ggttaaacac cacgcacgtt gccatgcagc gtacgaagaa 5280

ggccaagaac ggccgcctgg tgacggtatc cgagggtgaa gccttgatta gccgctacaa 5340

gatcgtaaag agcgaaaccg ggcggccgga gtacatcgag atcgagctag ctgattggat 5400

gtaccgcgag atcacagaag gcaagaaccc ggacgtgctg acggttcacc ccgattactt 5460

tttgatcgat cccggcatcg gccgttttct ctaccgcctg gcacgccgcg ccgcaggcaa 5520

ggcagaagcc agatggttgt tcaagacgat ctacgaacgc agtggcagcg ccggagagtt 5580

caagaagttc tgtttcaccg tgcgcaagct gatcgggtca aatgacctgc cggagtacga 5640

tttgaaggag gaggcggggc aggctggccc gatcctagtc atgcgctacc gcaacctgat 5700

cgagggcgaa gcatccgccg gttcctaatg tacggagcag atgctagggc aaattgccct 5760

agcaggggaa aaaggtcgaa aaggtctctt tcctgtggat agcacgtaca ttgggaaccc 5820

aaagccgtac attgggaacc ggaacccgta cattgggaac ccaaagccgt acattgggaa 5880

ccggtcacac atgtaagtga ctgatataaa agagaaaaaa ggcgattttt ccgcctaaaa 5940

ctctttaaaa cttattaaaa ctcttaaaac ccgcctggcc tgtgcataac tgtctggcca 6000

gcgcacagcc gaagagctgc aaaaagcgcc tacccttcgg tcgctgcgct ccctacgccc 6060

cgccgcttcg cgtcggccta tcgcggccgc tggccgctca aaaatggctg gcctacggcc 6120

aggcaatcta ccagggcgcg gacaagccgc gccgtcgcca ctcgaccgcc ggcgcccaca 6180

tcaaggcacc ctgcctcgcg cgtttcggtg atgacggtga aaacctctga cacatgcagc 6240

tcccggagac ggtcacagct tgtctgtaag cggatgccgg gagcagacaa gcccgtcagg 6300

gcgcgtcagc gggtgttggc gggtgtcggg gcgcagccat gacccagtca cgtagcgata 6360

gcggagtgta tactggctta actatgcggc atcagagcag attgtactga gagtgcacca 6420

tatgcggtgt gaaataccgc acagatgcgt aaggagaaaa taccgcatca ggcgctcttc 6480

cgcttcctcg ctcactgact cgctgcgctc ggtcgttcgg ctgcggcgag cggtatcagc 6540

tcactcaaag gcggtaatac ggttatccac agaatcaggg gataacgcag gaaagaacat 6600

gtgagcaaaa ggccagcaaa aggccaggaa ccgtaaaaag gccgcgttgc tggcgttttt 6660

ccataggctc cgcccccctg acgagcatca caaaaatcga cgctcaagtc agaggtggcg 6720

aaacccgaca ggactataaa gataccaggc gtttccccct ggaagctccc tcgtgcgctc 6780

tcctgttccg accctgccgc ttaccggata cctgtccgcc tttctccctt cgggaagcgt 6840

ggcgctttct catagctcac gctgtaggta tctcagttcg gtgtaggtcg ttcgctccaa 6900

gctgggctgt gtgcacgaac cccccgttca gcccgaccgc tgcgccttat ccggtaacta 6960

tcgtcttgag tccaacccgg taagacacga cttatcgcca ctggcagcag ccactggtaa 7020

caggattagc agagcgaggt atgtaggcgg tgctacagag ttcttgaagt ggtggcctaa 7080

ctacggctac actagaagga cagtatttgg tatctgcgct ctgctgaagc cagttacctt 7140

cggaaaaaga gttggtagct cttgatccgg caaacaaacc accgctggta gcggtggttt 7200

ttttgtttgc aagcagcaga ttacgcgcag aaaaaaagga tctcaagaag atcctttgat 7260

cttttctacg gggtctgacg ctcagtggaa cgaaaactca cgttaaggga ttttggtcat 7320

gcattctagg tactaaaaca attcatccag taaaatataa tattttattt tctcccaatc 7380

aggcttgatc cccagtaagt caaaaaatag ctcgacatac tgttcttccc cgatatcctc 7440

cctgatcgac cggacgcaga aggcaatgtc ataccacttg tccgccctgc cgcttctccc 7500

aagatcaata aagccactta ctttgccatc tttcacaaag atgttgctgt ctcccaggtc 7560

gccgtgggaa aagacaagtt cctcttcggg cttttccgtc tttaaaaaat catacagctc 7620

gcgcggatct ttaaatggag tgtcttcttc ccagttttcg caatccacat cggccagatc 7680

gttattcagt aagtaatcca attcggctaa gcggctgtct aagctattcg tatagggaca 7740

atccgatatg tcgatggagt gaaagagcct gatgcactcc gcatacagct cgataatctt 7800

ttcagggctt tgttcatctt catactcttc cgagcaaagg acgccatcgg cctcactcat 7860

gagcagattg ctccagccat catgccgttc aaagtgcagg acctttggaa caggcagctt 7920

tccttccagc catagcatca tgtccttttc ccgttccaca tcataggtgg tccctttata 7980

ccggctgtcc gtcattttta aatataggtt ttcattttct cccaccagct tatatacctt 8040

agcaggagac attccttccg tatcttttac gcagcggtat ttttcgatca gttttttcaa 8100

ttccggtgat attctcattt tagccattta ttatttcctt cctcttttct acagtattta 8160

aagatacccc aagaagctaa ttataacaag acgaactcca attcactgtt ccttgcattc 8220

taaaacctta aataccagaa aacagctttt tcaaagttgt tttcaaagtt ggcgtataac 8280

atagtatcga cggagccgat tttgaaaccg cggtgatcac aggcagcaac gctctgtcat 8340

cgttacaatc aacatgctac cctccgcgag atcatccgtg tttcaaaccc ggcagcttag 8400

ttgccgttct tccgaatagc atcggtaaca tgagcaaagt ctgccgcctt acaacggctc 8460

tcccgctgac gccgtcccgg actgatgggc tgcctgtatc gagtggtgat tttgtgccga 8520

gctgccggtc ggggagctgt tggctggctg gtggcaggat atattgtggt gtaaacaaat 8580

tgacgcttag acaacttaat aacacattgc ggacgttttt aatgtactga attaacgccg 8640

aattaattcg ggggatctgg attttagtac tggattttgg ttttaggaat tagaaatttt 8700

attgatagaa gtattttaca aatacaaata catactaagg gtttcttata tgctcaacac 8760

atgagcgaaa ccctatagga accctaattc ccttatctgg gaactactca cacattatta 8820

tggagaaact cgagcttgtc gatcgacaga tccggtcggc atctactcta tttctttgcc 8880

ctcggacgag tgctggggcg tcggtttcca ctatcggcga gtacttctac acagccatcg 8940

gtccagacgg ccgcgcttct gcgggcgatt tgtgtacgcc cgacagtccc ggctccggat 9000

cggacgattg cgtcgcatcg accctgcgcc caagctgcat catcgaaatt gccgtcaacc 9060

aagctctgat agagttggtc aagaccaatg cggagcatat acgcccggag tcgtggcgat 9120

cctgcaagct ccggatgcct ccgctcgaag tagcgcgtct gctgctccat acaagccaac 9180

cacggcctcc agaagaagat gttggcgacc tcgtattggg aatccccgaa catcgcctcg 9240

ctccagtcaa tgaccgctgt tatgcggcca ttgtccgtca ggacattgtt ggagccgaaa 9300

tccgcgtgca cgaggtgccg gacttcgggg cagtcctcgg cccaaagcat cagctcatcg 9360

agagcctgcg cgacggacgc actgacggtg tcgtccatca cagtttgcca gtgatacaca 9420

tggggatcag caatcgcgca tatgaaatca cgccatgtag tgtattgacc gattccttgc 9480

ggtccgaatg ggccgaaccc gctcgtctgg ctaagatcgg ccgcagcgat cgcatccata 9540

gcctccgcga ccggttgtag aacagcgggc agttcggttt caggcaggtc ttgcaacgtg 9600

acaccctgtg cacggcggga gatgcaatag gtcaggctct cgctaaactc cccaatgtca 9660

agcacttccg gaatcgggag cgcggccgat gcaaagtgcc gataaacata acgatctttg 9720

tagaaaccat cggcgcagct atttacccgc aggacatatc cacgccctcc tacatcgaag 9780

ctgaaagcac gagattcttc gccctccgag agctgcatca ggtcggagac gctgtcgaac 9840

ttttcgatca gaaacttctc gacagacgtc gcggtgagtt caggcttttt catatctcat 9900

tgccccccgg gatctgcgaa agctcgag 9928

Claims (3)

1.提高水稻穗期稻瘟病抗性的基因在提高水稻穗期感染Magnaporthe oryzae菌株GD08-T13引起的稻瘟病抗性中的应用，所述的提高水稻穗期稻瘟病抗性的基因是编码氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的功能蛋白的提高水稻穗期稻瘟病抗性的基因。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的提高水稻穗期稻瘟病抗性的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1的第108位碱基-第797位碱基序列所示。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，是在水稻中超表达提高水稻穗期稻瘟病抗性的基因从而提高水稻穗期稻瘟病抗性。

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