CN111887261B - 一株贝莱斯芽孢杆菌在防治葵花菌核病害的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一株贝莱斯芽孢杆菌在防治葵花菌核病害的应用，本发明的贝莱斯芽孢杆菌菌剂能对引起向日葵菌核病菌的核盘菌（Sclerotiniasclerotiorum(Lib.)de Bary）拮抗效果明显，能防止或减轻向日葵菌核病的发生，促进向日葵稳产、增收，改善和提高向日葵的产量和品质。

Description

一株贝莱斯芽孢杆菌在防治葵花菌核病害的应用

技术领域

本发明属于微生物菌剂产品领域，具体涉及一株贝莱斯芽孢杆菌在防治葵花菌核病害上的应用。

背景技术

本发明公开一株贝莱斯芽孢杆菌在防治向日葵病害上的应用，属于植物病害生物防治技术领域。

向日葵是我国重要的油料作物，近年来我国向日葵产区受向日葵菌核病危害大，严重的甚至造成向日葵绝产绝收，影响向日葵产量及品质提升，阻碍向日葵产业的发展。

向日葵菌核病(Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)de Bary)称核盘菌，属子囊菌亚门真菌。病菌以菌核在土壤内、病残体中及种子间越冬。病原菌在0-37℃温度范围内均能生长，生长最适温度为25℃。向日葵菌核病在整个生育期均可发病，造成茎杆、茎基、花盘及种仁腐烂。常见的有根腐型、茎腐型、叶腐型及花腐型4种症状，其中根腐型、花腐型受害严重。春季低温、多雨茎腐重，花期多雨盘腐重。连作田土壤中菌核量大，病害重。

本发明所用向日葵菌核病菌是公司从内蒙古赤峰发病田块菌核上分离纯化获得的，经16S rDNA鉴定为向日葵菌核病(Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)de Bary)。常规防治方法采用轮作、种植抗病品种、清除烧毁田间病残体的方式进行预防及病菌扩散以及采用腐霉利、菌核净等化学农药拌种、花期喷洒纹枯利或农利灵等方法防治病害的发生。通常这些操作较为繁琐且化学农药会造成农药残留等问题，影响向日葵产量和品质的提升，化学防治会造成环境污染，不符合绿色可持续性发展的道路和方向。

微生物能有效防治植物病害的发生，同时利用拮抗微生物进行植物病害的防治符合绿色防控的发展方向，但目前未见有效的微生物制剂。

发明内容

本发明的目的是提供一株贝莱斯芽孢杆菌在防治葵花菌核病害上的应用。本发明的贝莱斯芽孢杆菌菌剂能对引起向日葵菌核病菌的核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)de Bary)拮抗效果明显，能防止或减轻向日葵菌核病的发生，促进向日葵稳产、增收，改善和提高向日葵的产量和品质。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一株贝莱斯芽孢杆菌在防治葵花菌核病害的应用，所述贝莱斯芽孢杆菌为(Bacillus velezensis)MES861，保藏日期：2018年12月12日，保藏单位名称及简称：中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)，保藏号：16857；将所述贝莱斯芽孢杆菌的菌剂防治葵花菌核病害。该菌种已在“专利CN201911378583.0贝莱斯芽孢杆菌MES861及其应用和产品”公开。

作为上述方案的进一步改进：

优选的，所述贝莱斯芽孢杆菌菌剂为贝莱斯芽孢杆菌菌粉，菌粉中有效活菌数不少于2.0×10¹⁰cfu/g。

优选的，所述贝莱斯芽孢杆菌菌粉经摇瓶培养、一级种子培养、二级种子培养、发酵、浓缩、喷雾干燥，制得对应菌粉，并按比例混合即得所述贝莱斯芽孢杆菌菌粉。

其中贝莱斯芽孢杆菌MES861菌粉的制备方法同专利CN201911378583.0贝莱斯芽孢杆菌MES861及其应用和产品。

优选的，将所述贝莱斯芽孢杆菌菌粉稀释后，可以做基肥沟施或者灌根于植株根部。

优选的，所述贝莱斯芽孢杆菌菌粉的稀释倍数为100-500倍。

该株贝莱斯芽孢杆菌MES861是2017年8月我公司研发人员从国药集团半夏种植基地土壤中分离获得。半夏根部土壤经稀释、划线培养、在28℃培养24小时后，经5次纯化后制成斜面菌种，挑取2支斜面送农村农业部微生物质检机构鉴定，确定为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)，在4℃和-80℃冰箱保藏。

发明原理：

贝莱斯芽孢杆菌可以分泌细菌胞外多糖、一些植物激素如植物生长素和其它挥发性有机化合物促进植物的生长，同时还能分泌抗菌肽、抗生素类物质如脂肽类抗生素、铁载体来抑制葵花菌核病病原菌的生长，使菌体变形破裂，不能正常生长。

有益效果

将本发明的菌剂用在秧苗期盆栽防治向日葵菌核病，防效明显，防治效果达80％以上，并且属于绿色环保制剂、安全无残留，取代农药或降低农药使用量，能解决农药对生态环境***造成的环境污染问题，同时还可以降低农业生产成本、提高作物产量及品质，大面积推广使用的前景十分广阔。

附图说明

图1为本发明贝莱斯芽孢杆菌MES861对向日葵菌核病的拮抗效果图；其中A为贝莱斯芽孢杆菌拮抗向日葵菌核病菌；B为仅接种向日葵菌核病对照。

具体实施方式

下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。

其中贝莱斯芽孢杆菌MES861菌粉的制备方法同专利CN201911378583.0贝莱斯芽孢杆菌MES861及其应用和产品。菌粉中有效活菌数不少于2.0×10¹⁰cfu/g。

实施例1

MES861微生物菌剂的制备，按照以下步骤进行：

①一级种子培养：将经试管斜面活化的菌株MES861进行安碚瓶培养，安碚瓶培养基为NB培养基。培养基配方为：蛋白胨8-13克，牛肉膏2-5克，氯化钠3-5克，琼脂19.5克，超纯水1000毫升，pH值为7.0-7.5。培养条件为：温度22℃-30℃，培养24h。

②发酵:在30m³扩发酵罐中装有20L液体贝莱斯芽孢杆菌发酵培养基，115℃-122℃湿热灭菌35-40min后冷却到35℃，将一级种子接种于贝莱斯芽孢杆菌液体发酵培养基中，控制罐压在0.02MPa-0.07MPa，在35℃培养26h；发酵所用培养基的原料及用量为:葡萄糖2％，酵母浸粉0.5％，氯化钾0.75％，pH值为7.0-7.5。

③至芽孢形成比例大于等于90％时，结束发酵，放罐；

④将上述发酵液与稳定剂复合制成液体制剂：

⑤将液体发酵液在喷干塔内进行浓缩喷干成粉末状，装入包装袋内。

检测计数，贝莱斯芽孢杆菌产品有效活菌数(CFU)≥2.0×10¹⁰个/g。

实施例2

贝莱斯芽孢杆菌MES861对向日葵菌核病的抑菌试验：

(一)试验时间和地点：2019年11月在公司研发中心实验室内进行。

(二)试验方法：

(1)供试菌种来源

向日葵菌核病菌分离自内蒙古赤峰市向日葵菌核病发病田，经公司研发人员培养、分离、纯化，经16S rDNA最终鉴定为向日葵菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)de Bary)，经致病力测定鉴定为强致病力。

(2)平板拮抗实验

制备PDA固体平板，用无菌接种针挑取一颗大小合适的病原菌菌核放在培养皿中间，烧红接种针，等接种针冷却后蘸取少量的贝莱斯芽孢杆菌MES861接种在距接种病原菌菌斑2.0厘米的四周，设置不接种贝莱斯芽孢杆菌只接种向日葵菌核病菌的处理为空白对照，每个处理设置三次重复。28℃恒温培养，待空白对照菌丝长满整个培养皿时，测量仅接种向日葵菌核病病菌的对照菌落面积(菌落半径)和接种MES861后病原菌的菌落面积(抑制菌落半径)，用拮抗效果表示。拮抗效果计算公式如下：

(3)拮抗效果

通过本实验发现贝莱斯芽孢杆菌MES861对向日葵菌核病的拮抗效果达82.17％；对照平均菌落半径为4.5cm，接种贝莱斯芽孢杆菌的平均菌落半径为1.9cm(如图1所示)。说明贝莱斯芽孢杆菌MES861对向日葵菌核病具有明显的抑制作用，具有防治向日葵菌核病的生防潜力。

实施例3

贝莱斯芽孢杆菌MES861对向日葵菌核病的盆栽防治效果：

(一)试验药剂

(1)微生物菌剂

实施例1制备的MES861固体制剂；

(2)化学药剂

50％腐霉利可湿性粉剂2000倍液(山东海讯生物化学有限公司)。

(3)空白对照

设置清水处理为空白对照。

(二)试验时间和地点

试验于2019年11月在公司技术部育苗室进行。

(三)试验方法

处理设置：向日葵品种为龙食葵2号，试验设置5个处理，分别为菌水比1:100、1:200、1:300、1:500和不加菌的对照处理。

实验方法：每个处理取4粒向日葵种子，放入培养皿里，加入10mL纯水浸没种子，在30℃培养箱里浸种并待向日葵种子露白后种植在育苗盆里生长，出苗后间苗并保留一株幼苗。观察变化。每隔3天浇40mL自来水或者40mL各浓度菌液，均匀浇在植株根部。30天后观察效果。

(四)结果

试验结果见表1，从结果可以看出，添加贝莱斯芽孢杆菌MES861菌粉的处理病情指数(8.21-8.35)显著低于空白对照处理后的病情指数(86.75)，而与化学药剂处理后的病情指数(7.19)差异不显著，MES861对向日葵菌核病的防治效果达90.37％-90.54％。说明贝莱斯芽孢杆菌MES861可作为防治向日葵菌核病的生防菌种，具有广阔的开发利用前景。

表1不同处理对向日葵菌核病的防治效果

处理	病情指数	防效(％)
			MES861菌水比1：100	8.21bc	90.54
MES861菌水比1：200	8.28bc	90.45
			MES861菌水比1：300	8.30bc	90.43
MES861菌水比1：500	8.35bc	90.37
			腐霉利	7.19b	91.71
空白对照	86.75a	0.00

以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的发明内容。

Claims (5)

1.一株贝莱斯芽孢杆菌在防治葵花菌核病害的应用，其特征是：所述贝莱斯芽孢杆菌为（Bacillus velezensis）MES861，保藏日期：2018年12月12日，保藏单位名称及简称：中国普通微生物菌种保藏管理中心（CGMCC），保藏号：16857；将所述贝莱斯芽孢杆菌的菌剂防治葵花菌核病害；

所述贝莱斯芽孢杆菌菌剂为贝莱斯芽孢杆菌菌粉，菌粉中有效活菌数不少于2.0×10¹⁰cfu/g。

2.根据权利要求1所述的一株贝莱斯芽孢杆菌在防治葵花菌核病害的应用，其特征是：所述贝莱斯芽孢杆菌经摇瓶培养、一级种子培养、二级种子培养、发酵、浓缩、喷雾干燥，制得对应菌粉。

3.根据权利要求1所述的一株贝莱斯芽孢杆菌在防治葵花菌核病害的应用，其特征是，将所述贝莱斯芽孢杆菌菌粉稀释后，喷洒至植株根部。

4.根据权利要求3所述的一株贝莱斯芽孢杆菌在防治葵花菌核病害的应用，其特征是，所述贝莱斯芽孢杆菌菌粉的稀释倍数为100-500倍。

5.根据权利要求3所述的一株贝莱斯芽孢杆菌在防治葵花菌核病害的应用，其特征是，喷洒至植株根部的天数为30天，间隔3天喷洒一次。

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