CN111377906B - 取代的吡嗪化合物及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了作为腺苷受体拮抗剂的一类取代的吡嗪化合物、其制备方法、中间体、包含其的药物组合物以及其治疗用途。

Description

取代的吡嗪化合物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及作为腺苷受体拮抗剂的一类取代的吡嗪化合物、其制备方法、中间体、包含其的药物组合物以及其治疗用途。

背景技术

腺苷是一种体内抑制炎症和免疫应答的信号分子，细胞外腺苷主要有2种来源，即，细胞内腺苷的转运和细胞外腺嘌呤核苷的水解。腺苷能在多种类型的肿瘤组织中产生并在肿瘤微环境中维持较高水平。肿瘤微环境中腺苷产生的主要途径是在肿瘤细胞表面高表达的CD73酶可以催化AMP产生胞外腺苷，进而导致肿瘤微环境中腺苷维持高浓度。腺苷受体是一类G蛋白偶联受体(GPCRs)，该家族受体主要包括四种，分别为A1、A2a、A2b和A3受体。其中，A2a和A2b受体与激活腺苷酸环化酶的Gs蛋白偶联，刺激产生细胞内环磷酸腺苷(cAMP)的信号分子。

腺苷A2a受体表达于免疫***中的一些细胞表面，如T细胞、NK细胞、巨噬细胞和树突状细胞。肿瘤产生的腺苷能与肿瘤组织浸润免疫细胞表面的腺苷A2a受体相互作用，使免疫细胞内cAMP量升高，抑制免疫细胞攻击肿瘤的能力，使机体发生免疫耐受，进而使肿瘤细胞能够逃避机体的免疫监视，主要表现在两个方面：(1)阻断能杀伤肿瘤细胞的免疫细胞活化和发挥功能；(2)增加能抑制免疫细胞对肿瘤细胞应答的调节T细胞(T-regs)数量。肿瘤细胞利用这些机制来逃避免疫***的监视和攻击，提高自己的生存率。A2a受体基因敲除的小鼠可以加强CD8+T细胞抗肿瘤的免疫作用，显著抑制肿瘤的增殖，将黑色素瘤或淋巴瘤细胞移植到野生型小鼠体内比移植到腺苷A2a受体基因敲除小鼠体内更容易生长，并且腺苷A2a受体基因敲除小鼠对肿瘤疫苗有更好的应答。

腺苷A2a受体在免疫细胞上高水平表达，腺苷A2a受体的激活可以促使机体产生免疫耐受，促使肿瘤细胞“免疫逃逸”或“免疫抑制”的形成，为肿瘤的发生发展创造了有利条件。腺苷A2a受体拮抗剂直接靶向免疫细胞表面的腺苷A2a受体，抑制该受体的激活，进而抑制免疫细胞内cAMP的产生，消除由腺苷A2a受体激活介导的T细胞免疫功能抑制，达到肿瘤治疗的效果。因此，腺苷A2a受体拮抗剂作为肿瘤治疗药物在医药行业具有良好的应用前景。除肿瘤外，腺苷A2a受体还与帕金森病、阿尔茨海默病、AIDS脑症、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、多***萎缩症、脑缺血、注意力缺陷多动性障碍、睡眠障碍、焦虑性障碍、情绪障碍、癫痫、神经痛、偏头痛等疾病相关。

关于对腺苷A2a受体具有拮抗作用的化合物，Corvus公司的CPI-444目前处于I期临床研究，适应症是肿瘤。在此之前，CPI-444曾用于治疗中枢神经***疾病的临床试验中。另一方面，WO0162233和WO2002014282公开了氨基吡啶化合物对腺苷A2a受体具有拮抗作用，并公开了可做为帕金森病或老年痴呆药物的治疗剂。WO0162233、WO2003035639、WO2004016605和WO2005079801公开了氨基嘧啶化合物对腺苷A2a受体具有拮抗作用，并公开了可做为帕金森病或神经痛等疾病的治疗剂。WO2011095625公开了一种氨基三嗪化合物对腺苷A2a受体具有拮抗作用，并公开了可做为运动障碍、中风、或帕金森病的治疗剂。

因此，腺苷A2a受体拮抗剂作为药物在医药行业具有良好的应用前景，然而鲜有关于它们的抗肿瘤应用的研究。本领域需要开发用于***的腺苷A2a受体拮抗剂。

发明内容

本发明提供一类取代的吡嗪化合物，其具有腺苷受体拮抗活性，特别是相对于A1受体，其对A2a受体具有高选择性。本发明的作为腺苷受体拮抗剂、特别是A2a受体选择性拮抗剂的化合物具有良好的抗肿瘤活性。本发明的化合物还具有多种优异性质，例如良好的物理化学性质(例如溶解度、物理和/或化学稳定性)；良好的药物代谢动力学性质(例如良好的生物利用度、合适的血药浓度、半衰期和作用持续时间)；良好的安全性(较低的毒性和/或较少的副作用，较宽的治疗窗)。

本发明的一个方面提供化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中所述化合物具有式(I)的结构：

其中：

X为N或CR⁷；

R¹和R²各自独立地选自氢、C_1-6烷基、-C(O)-R^a、-C(O)OR^a、-C(O)-NR^aR^b、-S(O)_mOR^a和-S(O)_m-NR^aR^b；

R³选自氢、卤素、CN、OH、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_3-6环烷基、COOH、-C(O)O-C_1-6烷基、-C(O)-NR^cR^d、S(O)_mOH、-S(O)_mO-C_1-6烷基和-S(O)_m-NR^cR^d；

R⁴、R⁵和R⁶在每次出现时各自独立地选自氢、卤素、CN、OH、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基和C_1-6烷氧基；

R⁷选自氢、卤素、CN、OH、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基和C₁-6烷氧基；

R^a和R^b各自独立地选自氢、C_1-6烷基、C_3-6环烷基、羟基C_1-6烷基、C_1-6烷氧基-C_1-6烷基-和被5或6元杂芳基取代的C_1-6烷基；或者R^a和R^b连同它们共同连接的氮原子形成3至6元氮杂环基；

R^c和R^d各自独立地选自氢、C_1-6烷基、C_3-6环烷基、羟基C_1-6烷基、C_1-6烷氧基-C_1-6烷基-和被5或6元杂芳基取代的C_1-6烷基；或者R^c和R^d连同它们共同连接的氮原子形成3至6元氮杂环基；

m为1或2；

n为0、1或2；

p为0、1或2；且

q为0、1或2。

本发明的另一方面提供药物组合物，其包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药以及一种或多种药学上可接受的载体。

本发明的另一方面提供制备药物组合物的方法，所述方法包括将本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药以及一种或多种药学上可接受的载体组合。

本发明的另一方面提供本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药或者本发明的药物组合物在制备用于治疗个体的T细胞免疫功能抑制的药物中的用途。

本发明的另一方面提供本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药或者本发明的药物组合物，其用于治疗个体的T细胞免疫功能抑制。

本发明的另一方面提供治疗个体的T细胞免疫功能抑制的方法，所述方法包括有此需要的个体给药有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药或者本发明的药物组合物。

本发明的另一方面提供本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药或者本发明的药物组合物在制备用于治疗与腺苷受体相关的疾病的药物中的用途。

本发明的另一方面提供本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药或者本发明的药物组合物，其用于治疗与腺苷受体相关的疾病。

本发明的另一方面提供治疗与腺苷受体相关的疾病的方法，所述方法包括有此需要的个体给药有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药或者本发明的药物组合物。

本发明的另一方面提供制备本发明的化合物的方法。

定义

除非在下文中另有定义，本文中所用的所有技术术语和科学术语的含义与本领域技术人员通常所理解的相同。本文中使用的技术指在本领域中通常所理解的技术，包括那些对本领域技术人员理解的技术的变化或等同技术的替换。虽然相信以下术语对于本领域技术人员可以理解，但仍然阐述以下定义以更好地解释本发明。

术语“包括”、“包含”、“具有”、“含有”或“涉及”及其在本文中的其它变体形式为包含性的(inclusive)或开放式的，且不排除其它未列举的元素或方法步骤。

如本文中所使用，术语“烷基”定义为直链或支链的饱和脂肪族烃。在一些实施方案中，烷基具有1至12个，例如1至6个碳原子。例如，如本文中所使用，术语“C_1-6烷基”指1至6个碳原子的直链或支链的基团(例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基或正己基)，其任选地被1或多个(诸如1至3个)适合的取代基如卤素取代(此时该基团被称作“卤代烷基”)(例如CF₃、C₂F₅、CHF₂、CH₂F、CH₂CF₃、CH₂Cl或-CH₂CH₂CF₃等)。术语“C_1-4烷基”指1至4个碳原子的直链或支链的脂肪族烃链(即甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基)。

如本文中所使用，术语“烷氧基”是指具有“烷基-O-”结构的基团(其中烷基如上文所定义)，其任选地被1或多个(诸如1至3个)适合的取代基取代，所述取代基例如为卤素(此时该基团被称作“卤代烷氧基”)。如本文中所用使用，术语“C_1-6烷氧基”是指具有“C_1-6烷基-O-”结构的基团(其中C_1-6烷基如上文所定义)，例如C_1-4烷氧基、C_1-2烷氧基、C₁烷氧基、C₂烷氧基、C₃烷氧基、C₄烷氧基、C₅烷氧基或C₆烷氧基。具体的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、2-丁氧基、异丙氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、异戊基氧基、正己氧基等。

如本文中所使用，术语“环烷基”指饱和或不饱和的非芳族单环或多环(诸如双环)烃环(例如单环，诸如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基，或双环，包括螺环、稠合或桥连***(诸如双环[1.1.1]戊基、双环[2.2.1]庚基、双环[3.2.1]辛基或双环[5.2.0]壬基、十氢化萘基等)，其任选地被1或多个(诸如1至3个)适合的取代基取代。所述环烷基具有3至15个碳原子。例如，术语“C_3-6环烷基”指3至6个成环碳原子的饱和或不饱和的非芳族单环或多环(诸如双环)烃环(例如环丙基、环丁基、环戊基或环己基)，其任选地被1或多个(诸如1至3个)适合的取代基取代，例如甲基取代的环丙基。

如本文中所使用，术语“芳基”指具有共轭π电子***的全碳单环或稠合环多环芳族基团。例如，如本文中所使用，术语“C_6-14芳基”意指含有6至14个碳原子的芳族基团，诸如苯基或萘基。芳基任选地被1或多个(诸如1至3个)适合的取代基(例如卤素、-OH、-CN、-NO₂、C_1-6烷基等)取代。

如本文中所使用，术语“杂芳基”指一价单环、双环或三环芳族环系，其具有5、6、7、8、9、10、11、12、13或14个环原子，特别是1或2或3或4或5或6或9或10个碳原子，且其包含至少一个可以相同或不同的杂原子(所述杂原子是例如氧、氮或硫)，并且，另外在某些情况下可为苯并稠合的。特别地，杂芳基选自噻吩基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、***基、噻二唑基等，以及它们的苯并衍生物；或吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基等，以及它们的苯并衍生物。

如本文中所使用，术语“卤代”或“卤素”基团定义为包括F、Cl、Br或I。

如本文中所使用，术语“杂环基”指饱和或部分不饱和的单环或多环基团，其在环中具有2、3、4、5、6、7、8、9个碳原子和一个或多个(例如1个、2个、3个或4个)选自N、NR(R表示氢原子或取代基，例如但不限于烷基或环烷基)、O、C(＝O)、S、S(＝O)、S(＝O)₂的基团。特别地，3-10元杂环基为在环中具有3-10个碳原子及杂原子的基团，例如，其具有4至10、4至7、4至6、5至7以及5至6个碳原子及杂原子(分别称作4至10元、4至7元、4至6元、5至7元以及5至6元杂环基)，例如但不限于环氧乙烷基、氮丙啶基、氮杂环丁基、氧杂环丁基、四氢呋喃基、吡咯烷基、吡咯烷酮基、咪唑烷基、吡唑烷基、四氢吡喃基、哌啶基、吗啉基、二噻烷基(dithianyl)、硫吗啉基、哌嗪基、三噻烷基(trithianyl)等；以及它们的并环衍生物，例如但不限于吡咯烷基并环丙基、环戊基并氮杂环丙基、吡咯烷基并环丁基、吡咯烷基并吡咯烷基、吡咯烷基并哌啶基、吡咯烷基并哌嗪基、吡咯烷基并吗啉基并吗啉基；或螺环衍生物；或苯并衍生物或杂芳基并衍生物，例如但不限于

等。

如本文中所使用，术语“氮杂环基”指上文所述的杂环基，其中至少一个环成员为氮原子。如本文中所使用，术语“3至6元氮杂环基”指饱和或部分不饱和的具有3、4、5或6个环成员的单环杂环基团，其中至少一个环成员为氮原子，其还可任选地包含一个或多个(例如1个、2个或3个)选自N、NR(R表示氢原子或取代基，例如但不限于烷基或环烷基)、O、C＝O、S、S＝O和S(＝O)₂的环成员。在一些实施方案中，所述氮杂环基通过C原子与分子的其余部分连接；在一些实施方案中，所述氮杂环基，例如本文中关于R^a和R^b以及R^c和R^d所限定的“氮杂环基”，通过氮原子与分子的其余部分连接。特别地，3元氮杂环基的实例包括但不限于氮丙啶基；4元氮杂环基的实例包括但不限于氮杂环丁烷基和1,3-氧杂氮杂环丁烷基；5元氮杂环基的实例包括但不限于如吡咯基、四氢吡咯基、吡咯啉基、吡咯烷酮基、咪唑基、咪唑烷基、咪唑啉基、吡唑基、吡唑啉基；6元氮杂环基的实例包括但不限于哌啶基、吗啉基、硫吗啉基、哌嗪基。

术语“取代”指所指定的原子上的一个或多个(例如1个、2个、3个或4个)氢被所选择的基团代替，条件是未超过所指定的原子在当前情况下的正常原子价并且所述取代形成稳定的化合物。所选的替代基团数量是当这种组合形成稳定的化合物时才允许的。

如果取代基被描述为“任选地被取代”，则取代基可(1)未被取代或(2)被取代。如果取代基的碳被描述为任选地被取代基列表中的一个或多个取代，则碳上的一个或多个氢可单独和/或一起被独立地选择的任选的取代基替代。如果取代基的氮被描述为任选地被取代基列表中的一个或多个取代，则氮上的一个或多个氢可各自被独立地选择的任选的取代基替代。

如果取代基被描述为“独立地选自”，则各取代基可与另一(其他)取代基相同或不同。

如本文中所使用，术语“一个或多个”意指在合理条件下的1个或超过1个，例如2个、3个、4个、5个或10个。

除非指明，否则如本文中所使用，取代基的连接点可来自取代基的任意适宜位置。

当取代基的键显示为穿过环中键而未指定位置时，则这样的取代基可键连至该可取代的环中的任一适当的成环原子。

本发明还包括所有药学上可接受的同位素标记的化合物，其与本发明的化合物相同，除了一个或多个原子被具有相同原子序数但原子质量或质量数不同于在自然界中占优势的原子质量或质量数的原子替代。适合包含入本发明的化合物中的同位素的实例包括(但不限于)氢的同位素(例如氘(D，²H)、氚(T，³H))；碳的同位素(例如¹¹C、¹³C及¹⁴C)；氯的同位素(例如³⁶Cl)；氟的同位素(例如¹⁸F)；碘的同位素(例如¹²³I及¹²⁵I)；氮的同位素(例如¹³N及¹⁵N)；氧的同位素(例如¹⁵O、¹⁷O及¹⁸O)；磷的同位素(例如³²P)；及硫的同位素(例如³⁵S)。某些同位素标记的本发明的化合物可用于药物和/或底物组织分布研究(例如分析)中。本发明的药学上可接受的溶剂合物包括其中结晶溶剂可被同位素取代的那些，例如，D₂O、丙酮-d₆或DMSO-d₆。

术语“立体异构体”表示由于至少一个不对称中心形成的异构体。在具有一个或多个(例如1个、2个、3个或4个)不对称中心的化合物中，其可产生外消旋混合物、单一对映异构体、非对映异构体混合物和单独的非对映异构体。特定个别分子也可以几何异构体(顺式/反式)存在。类似地，本发明的化合物可以两种或更多种处于快速平衡的结构不同的形式的混合物(通常称作互变异构体)存在。互变异构体的代表性实例包括酮-烯醇互变异构体、苯酚-酮互变异构体、亚硝基-肟互变异构体、亚胺-烯胺互变异构体等。例如，二氢嘧啶基团在溶液中可以下列互变异构形式平衡存在：

要理解，本申请的范围涵盖所有这样的以任意比例(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％)的异构体或其混合物。

本文中可使用实线(-)、实楔形

或虚楔形

描绘本发明的化合物的碳-碳键。使用实线以描绘键连至不对称碳原子的键表示，包括该碳原子处的所有可能的立体异构体(例如，特定的对映异构体、外消旋混合物等)。使用实或虚楔形以描绘键连至不对称碳原子的键表示，存在所示的立体异构体。当存在于外消旋混合物中时，使用实及虚楔形以定义相对立体化学，而非绝对立体化学。除非另外指明，否则本发明的化合物可以为立体异构体(其包括顺式及反式异构体、光学异构体(例如R及S对映异构体)、非对映异构体、几何异构体、旋转异构体、构象异构体、阻转异构体及其混合物)的形式存在。本发明的化合物可表现一种以上类型的异构现象，且由其混合物(例如外消旋混合物及非对映异构体对)组成。

本发明涵盖本发明化合物的所有可能的结晶形式或多晶型物，其可为单一多晶型物或多于一种多晶型物的任意比例的混合物。

还应当理解，本发明的化合物可以游离形式存在用于治疗，或适当时，以其药学上可接受的衍生物形式存在。在本发明中，药学上可接受的衍生物包括但不限于，药学上可接受的盐、酯、溶剂合物、代谢物、同位素标记的化合物或前药，在将它们向需要其的患者给药后，能够直接或间接提供本发明的化合物或其代谢物或残余物。因此，当在本文中提及“本发明的化合物”时，也意在涵盖化合物的上述各种衍生物形式。

本发明的化合物的药学上可接受的盐包括其酸加成盐及碱加成盐。

适合的酸加成盐由形成药学可接受盐的酸来形成，包括适当的无机酸和有机酸。实例包括天冬氨酸盐、苯甲酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、延胡索酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、六氟磷酸盐、氢溴酸盐/溴化物、氢碘酸盐/碘化物、顺丁烯二酸盐、丙二酸盐、甲基硫酸盐、萘甲酸盐(naphthylate)、烟酸盐、硝酸盐、乳清酸盐、草酸盐、棕榈酸盐及其它类似的盐。

适合的碱加成盐由形成药学可接受盐的碱来形成，包括适当的无机碱和有机碱。实例包括铝盐、精氨酸盐、胆碱盐、二乙胺盐、赖氨酸盐、镁盐、葡甲胺盐、钾盐及其它类似的盐。

适合的盐的综述参见Stahl及Wermuth的“Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use”(Wiley-VCH,2002)。用于制备本发明的化合物的药学上可接受的盐的方法为本领域技术人员已知的。

如本文中所使用，术语“酯”意指衍生自本申请中各个通式化合物的酯，其包括生理上可水解的酯，可在生理条件下水解以释放游离酸或醇形式的本发明的化合物。本发明的化合物本身也可以是酯。

本发明的化合物可以溶剂合物(例如：水合物)的形式存在，其中本发明的化合物包含作为所述化合物晶格的结构要素的极性溶剂，特别是例如水、甲醇或乙醇。极性溶剂特别是水的量可以化学计量比或非化学计量比存在。

本领域技术人员会理解，由于氮需要可用的孤对电子来氧化成氧化物，因此并非所有的含氮杂环都能够形成N-氧化物；本领域技术人员会识别能够形成N-氧化物的含氮杂环。本领域技术人员还会认识到叔胺能够形成N-氧化物。用于制备杂环和叔胺的N-氧化物的合成方法是本领域技术人员熟知的，包括用过氧酸如过氧乙酸和间氯过氧苯甲酸(MCPBA)、过氧化氢、烷基过氧化氢如叔丁基过氧化氢、过硼酸钠和双环氧乙烷(dioxirane)如二甲基双环氧乙烷来氧化杂环和叔胺。这些用于制备N-氧化物的方法已在文献中得到广泛描述和综述，参见例如：T.L.Gilchrist,Comprehensive Organic Synthesis,vol.7,pp748-750；A.R.Katritzky和A.J.Boulton,Eds.,Academic Press；以及G.W.H.Cheeseman和E.S.G.Werstiuk，Advances in Heterocyclic Chemistry,vol.22,pp 390-392,A.R.Katritzky和A.J.Boulton,Eds.,Academic Press。

在本发明的范围内还包括本发明的化合物的代谢物，即在给药本发明的化合物时体内形成的物质。这样的产物可由例如被给药的化合物的氧化、还原、水解、酰胺化、脱酰胺化、酯化、酶解等产生。因此，本发明包括本发明的化合物的代谢物，包括通过使本发明的化合物与哺乳动物接触足以产生其代谢产物的时间的方法制得的化合物。

本发明在其范围内进一步包括本发明的化合物的前药，其为自身可具有药理学活性或无药理学活性的本发明的化合物的某些衍生物，其当被给药至身体中或其上时可通过例如水解裂解转化成具有期望活性的本发明的化合物。通常这样的前药会是所述化合物的官能团衍生物，其易于在体内转化成期望的治疗活性化合物。关于前药的使用的其他信息可参见“Pro-drugs as Novel Delivery Systems”，第14卷，ACS Symposium Series(T.Higuchi及V.Stella)及“Bioreversible Carriers in Drug Design,”PergamonPress,1987(E.B.Roche编辑，American Pharmaceutical Association)。本发明的前药可例如通过用本领域技术人员已知作为“前-部分(pro-moiety)(例如“Design ofProdrugs”，H.Bundgaard(Elsevier,1985)中所述)”的某些部分替代本发明的化合物中存在的适当官能团来制备。

本发明还涵盖含有保护基的本发明的化合物。在制备本发明的化合物的任何过程中，保护在任何有关分子上的敏感基团或反应基团可能是必需的和/或期望的，由此形成本发明的化合物的化学保护形式。这可以通过常规的保护基实现，例如，在ProtectiveGroups in Organic Chemistry,ed.J.F.W.McOmie,Plenum Press,1973；和T.W.Greene&P.G.M.Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley&Sons,1991中所述的那些保护基，这些参考文献通过援引加入本文。使用本领域已知的方法，在适当的后续阶段可以移除保护基。

如本文中所使用，术语“约”是指在所述数值的±10％范围内，例如±5％范围内或±2％范围内。

发明详细描述

化合物及其制备方法

本发明的一个方面提供化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中所述化合物具有式(I)的结构：

其中：

X为N或CR⁷；

R¹和R²各自独立地选自氢、C_1-6烷基、-C(O)-R^a、-C(O)OR^a、-C(O)-NR^aR^b、-S(O)_mOR^a和-S(O)_m-NR^aR^b；

R³选自氢、卤素、CN、OH、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_3-6环烷基、COOH、-C(O)O-C_1-6烷基、-C(O)-NR^cR^d、S(O)_mOH、-S(O)_mO-C_1-6烷基和-S(O)_m-NR^cR^d；

R⁴、R⁵和R⁶在每次出现时各自独立地选自氢、卤素、CN、OH、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基和C_1-6烷氧基；

R⁷选自氢、卤素、CN、OH、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基和C_1-6烷氧基；

R^a和R^b各自独立地选自氢、C_1-6烷基、C_3-6环烷基、羟基C_1-6烷基、C_1-6烷氧基-C_1-6烷基-和被5或6元杂芳基取代的C_1-6烷基；或者R^a和R^b连同它们共同连接的氮原子形成3至6元氮杂环基；

R^c和R^d各自独立地选自氢、C_1-6烷基、C_3-6环烷基、羟基C_1-6烷基、C_1-6烷氧基-C_1-6烷基-和被5或6元杂芳基取代的C_1-6烷基；或者R^c和R^d连同它们共同连接的氮原子形成3至6元氮杂环基；

m选自1或2；

n选自0、1或2；

p选自0、1或2；

q选自0、1或2。

在一些实施方案中，本发明提供上文所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中R¹选自氢、C_1-4烷基、-C(O)-R^a、-C(O)OR^a、-C(O)-NR^aR^b、-S(O)_mOR^a和-S(O)_m-NR^aR^b。

在优选的实施方案中，R¹选自氢和C_1-4烷基。优选地，R¹选自氢、甲基、乙基和异丙基。更优选地，R¹为氢。

在一些实施方案中，本发明提供上文所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中R^a和R^b各自独立地选自氢、C_1-4烷基、C_3-6环烷基、羟基C_1-4烷基、C_1-4烷氧基-C_1-4烷基-和被5或6元杂芳基取代的C_1-4烷基。

在优选的实施方案中，R^a和R^b各自独立地选自C_1-4烷基和被5或6元杂芳基取代的C_1-4烷基；

优选地，R^a和R^b各自独立地选自C_1-4烷基和被6元杂芳基取代的C_1-4烷基；

优选地，R^a和R^b各自独立地选自C_1-4烷基和被吡啶基取代的C_1-4烷基；

优选地，R^a和R^b各自独立地选自甲基、乙基、异丙基以及被吡啶基取代的甲基、乙基和异丙基；

优选地，R^a和R^b中的一个选自甲基、乙基、异丙基，另一个选自被吡啶基取代的甲基、乙基和异丙基；

优选地，R^a和R^b中的一个为甲基，另一个为被吡啶基取代的甲基；

更优选地，R^a和R^b中的一个为甲基，另一个为

在另一些实施方案中，R^a和R^b连同它们共同连接的氮原子形成4至6元氮杂环基。

在优选的实施方案中，R^a和R^b连同它们共同连接的氮原子形成5或6元氮杂环基；

优选地，R^a和R^b连同它们共同连接的氮原子形成6元氮杂环基；

更优选地，R^a和R^b连同它们共同连接的氮原子形成

更优选地，R^a和R^b连同它们共同连接的氮原子形成

在一些实施方案中，本发明提供上文所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中R²选自氢、C_1-4烷基、-C(O)-R^a、-C(O)OR^a、-C(O)-NR^aR^b、-S(O)_mOR^a和-S(O)_m-NR^aR^b。

在优选地实施方案中，R²选自氢、C_1-4烷基、-C(O)-NR^aR^b和-S(O)_m-NR^aR^b；

优选地，R²选自氢、甲基、乙基、异丙基、-C(O)-NR^aR^b和-S(O)_m-NR^aR^b；

优选地，R²选自氢、-C(O)-NR^aR^b和-S(O)_m-NR^aR^b；

更优选地，R²选自：

氢、

更优选地，R²选自：

氢、

更优选地，R²选自：

氢、

在一些实施方案中，本发明提供上文所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中R^c和R^d各自独立地选自氢、C_1-4烷基、C_3-6环烷基、羟基C_1-4烷基、C_1-4烷氧基-C_1-4烷基-和被5或6元杂芳基取代的C_1-4烷基；或者R^c和R^d连同它们共同连接的氮原子形成4至6元氮杂环基，优选5或6元氮杂环基。

在优选的实施方案中，R^c和R^d各自独立地选自氢和C_1-4烷基；优选地，R^c和R^d各自独立地选自氢、甲基、乙基和异丙基；

更优选地，R^c和R^d各自独立地选自氢和甲基。

在一些实施方案中，本发明提供上文所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中R³选自氢、卤素、CN、OH、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、C_3-6环烷基、COOH、-C(O)O-C_1-4烷基、-C(O)-NR^cR^d、S(O)_mOH、-S(O)_mO-C_1-4烷基和-S(O)_m-NR^cR^d。

在优选的实施方案中，R³选自氢、卤素、CN、OH、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基、COOH、-C(O)O-C_1-4烷基、-C(O)-NR^cR^d、S(O)_mOH、-S(O)_mO-C_1-4烷基和-S(O)_m-NR^cR^d；

优选地，R³选自氢、F、Cl、Br、I、CN、OH、甲基、乙基、异丙基、CH₂F、CHF₂、CF₃、COOH、-C(O)O-CH₃、-C(O)O-Et、-C(O)O-iPr、-C(O)O-tBu、-C(O)-NR^cR^d、S(O)_mOH、-S(O)_mO-CH₃、-S(O)_mO-Et、-S(O)_mO-iPr、-S(O)_mO-tBu和-S(O)_m-NR^cR^d；

优选地，R³选自氢、CN、COOH、-C(O)O-CH₃、-C(O)O-Et、-C(O)O-iPr、-C(O)O-tBu、-C(O)-NR^cR^d、S(O)_mOH、-S(O)_mO-CH₃、-S(O)_mO-Et、-S(O)_mO-iPr、-S(O)_mO-tBu和-S(O)_m-NR^cR^d；

优选地，R³选自氢、CN、COOH、-C(O)-NR^cR^d、S(O)_mOH和-S(O)_m-NR^cR^d；

优选地，R³选自氢、CN、COOH、-C(O)-NH₂、-C(O)-NH(C_1-4烷基)、S(O)_mOH、-S(O)_m-NH₂、-S(O)_m-NH(C_1-4烷基)；

更优选地，R³选自氢、CN、COOH、-C(O)-NH₂、-C(O)-NHCH₃、-C(O)-NH-Et、-C(O)-NH-iPr、S(O)_mOH、-S(O)_m-NH₂、-S(O)_m-NHCH₃、-S(O)_m-NH-Et、-S(O)_m-NH-iPr；

更优选地，R³选自氢、CN、COOH、-C(O)-NH₂和-C(O)-NHCH₃。

在一些实施方案中，本发明提供上文所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中：

R²选自：氢、-C(O)-NR^aR^b和-S(O)_m-NR^aR^b；

优选地选自：氢、

优选地选自：氢、

或者

更优选地选自氢、

并且

R³为氢；

在另一些实施方案中，本发明提供上文所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中：

R²为氢，并且

R³选自氢、卤素、CN、OH、COOH、-C(O)O-C_1-4烷基、-C(O)-NR^cR^d、S(O)_mOH、-S(O)_mO-C_1-4烷基和-S(O)_m-NR^cR^d；

优选地选自氢、CN、COOH、-C(O)-NH₂、-C(O)-NH(C_1-4烷基)、S(O)_mOH、-S(O)_m-NH₂、-S(O)_m-NH(C_1-4烷基)；

更优选地选自氢、CN、COOH、-C(O)-NH₂、-C(O)-NHCH₃、-C(O)-NH-Et、-C(O)-NH-iPr、S(O)_mOH、-S(O)_m-NH₂、-S(O)_m-NHCH₃、-S(O)_m-NH-Et、-S(O)_m-NH-iPr；或者

更优选地选自氢、CN、COOH、-C(O)-NH₂和-C(O)-NHCH₃。

在一些实施方案中，本发明提供上文所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中R⁴在每次出现时独立地选自氢、卤素、CN、OH、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基和C_1-4烷氧基。

在优选的实施方案中，R⁴在每次出现时独立地选自氢、F、Cl、Br、I、CN、OH、甲基、乙基、异丙基、CH₂F、CHF₂、CF₃、甲氧基、乙氧基和异丙氧基；

优选地，R⁴在每次出现时独立地选自氢、F、Cl、Br、I、CN和OH；

优选地，R⁴在每次出现时独立地选自F、Cl、Br和I；

更优选地，R⁴在每次出现时独立地为F。

在一些实施方案中，本发明提供上文所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中R⁵在每次出现时独立地选自氢、卤素、CN、OH、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基和C_1-4烷氧基。

在优选的实施方案中，R⁵在每次出现时独立地选自氢、F、Cl、Br、I、CN、OH、甲基、乙基、异丙基、CH₂F、CHF₂、CF₃、甲氧基、乙氧基和异丙氧基；

优选地，R⁵在每次出现时独立地选自氢、F、Cl、Br、I、CN、OH、甲基、乙基、异丙基、CH₂F、CHF₂、CF₃、甲氧基、乙氧基和异丙氧基；

更优选地，R⁵在每次出现时独立地为氢。

在一些实施方案中，本发明提供上文所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中R⁶在每次出现时独立地选自氢、卤素、CN、OH、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基和C_1-4烷氧基。

在优选的实施方案中，R⁶在每次出现时独立地选自氢、F、Cl、Br、I、CN、OH、甲基、乙基、异丙基、CH₂F、CHF₂、CF₃、甲氧基、乙氧基和异丙氧基；

优选地，R⁶在每次出现时独立地选自甲基、乙基、异丙基、CH₂F、CHF₂和CF₃；

优选地，R⁶在每次出现时独立地选自甲基、乙基和异丙基；

更优选地，R⁶在每次出现时独立地为甲基。

在一些实施方案中，本发明提供上文所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中X为N。

在另一些实施方案中，本发明提供上文所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中X为CR⁷。

在优选的实施方案中，R⁷选自氢、卤素、CN、OH、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基和C_1-4烷氧基；

优选地，R⁷选自氢、F、Cl、Br、I、CN、OH、甲基、乙基、异丙基、CH₂F、CHF₂、CF₃、甲氧基、乙氧基和异丙氧基；

更优选地，R⁷为氢。

在一些实施方案中，本发明提供上文所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中n为1或2，优选为1。

在一些实施方案中，本发明提供上文所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中p为0或1，优选为0。

在一些实施方案中，本发明提供上文所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中q为1或2，优选为1。

在一些实施方案中，本发明提供上文所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中所述化合物具有式(II)的结构：

其中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、n和p如上文所定义；

优选地，所述化合物具有式(III)的结构：

其中R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、n和p如上文所定义；

更优选地，所述化合物具有式(IV)的结构：

其中R²、R³、R⁴和R⁶如上文所定义；

在一些实施方案中，本发明提供上文所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中所述化合物选自：

在另一方面，本发明提供制备本发明的化合物的方法。

下文描述的反应路线举例说明了本发明的化合物的一般合成方法并且不具有限制性。

路线1

其中R⁵、R⁶、p和q如上文所定义；优选地，R⁵为H；优选地，R⁶为C₁-4烷基，优选为甲基；优选地，p为0；优选地，q为1；LG³为诸如卤素或磺酰基酯的离去基，例如Cl、Br、I、甲苯磺酸酯、三氟甲基磺酸酯、全氟丁基磺酸酯，优选Br；M²为-B(OH)₂、-Sn(C₁-4烷基)₃、-ZnCl、-ZnBr、-ZnI，优选为

第一步：使化合物1经环化反应生成化合物2；

例如，该反应可以在适合的铵盐(例如乙酸铵)的存在下，在活化的甲酸衍生物(例如原甲酸三乙酯)中，在例如60℃至140℃的温度下进行。

第二步：将化合物2转化为化合物3；

例如，所述转化反应可以在氮气保护下，在有机溶剂(例如甲苯、二甲苯、四氢呋喃、乙二醇二甲醚、1,4-二氧六环、N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜或N-甲基吡咯烷酮)中，在有机碱或无机碱(例如叔丁醇钠、叔丁醇钾、碳酸铯、碳酸钾、碳酸铯、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸氢钾、磷酸钾、醋酸钾)以及催化剂(例如钯催化剂，诸如三(二亚苄基丙酮)二钯、四(三苯基膦)钯、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯、[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物、二(三苯基膦)二氯化钯、醋酸钯)的存在下，在例如60℃至140℃的温度下，通过使化合物2与适合的试剂(例如硼酸酯，如联硼酸频哪醇酯

)反应来完成。

路线2

其中R¹、R²、R³、R⁴和n如上文所定义；优选地，R¹和R³各自为H；优选地，R⁴为卤素，优选F；优选地，n为1；LG¹和LG²各自为诸如卤素或磺酰基酯的离去基，例如Cl、Br、I、甲苯磺酸酯、三氟甲基磺酸酯、全氟丁基磺酸酯，优选Cl、Br或I；M¹为-B(OH)₂、-Sn(C₁-4烷基)₃、-ZnCl、-ZnBr、-ZnI、或

优选-B(OH)₂。

第一步：使化合物4与化合物5经亲核取代或偶联反应生成化合物6；

例如，该反应可以在氮气保护下，在有机溶剂(例如甲苯、二甲苯、四氢呋喃、乙二醇二甲醚、1,4-二氧六环、N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜或N-甲基吡咯烷酮)或其与水的混合体系中，在有机碱或无机碱(例如叔丁醇钠、叔丁醇钾、碳酸铯、碳酸钾、碳酸铯、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸氢钾、磷酸钾、醋酸钾)以及催化剂(例如钯催化剂，诸如三(二亚苄基丙酮)二钯、四(三苯基膦)钯、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯、[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物、二(三苯基膦)二氯化钯、醋酸钯)的存在下，在例如60℃至140℃的温度下进行。

第二步：使化合物6进行取代反应生成化合物7；

例如，该反应可以在有机溶剂(例如N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮、甲醇、乙醇、四氢呋喃、1,4-二氧六环)中，在例如室温的温度下，与适合的试剂(诸如N-溴代丁二酰亚胺)进行。

第三步：使化合物7与化合物3经偶联反应生成化合物8；

例如，该反应可以在氮气保护下，在有机溶剂(例如甲苯、二甲苯、四氢呋喃、乙二醇二甲醚、1,4-二氧六环、N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜或N-甲基吡咯烷酮)或其与水的混合体系中，在有机碱或无机碱(例如叔丁醇钠、叔丁醇钾、碳酸铯、碳酸钾、碳酸铯、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸氢钾、磷酸钾、醋酸钾)以及催化剂(例如钯催化剂，诸如三(二亚苄基丙酮)二钯、四(三苯基膦)钯、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯、[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物、二(三苯基膦)二氯化钯、醋酸钯)的存在下，在例如60℃至140℃的温度下进行。

第四步：使化合物8与化合物9经亲核取代生成式(II)的化合物。

例如，该反应可以在有机溶剂(例如二氯甲烷、四氢呋喃、1,4-二氧六环、***、乙腈)中，在有机碱(例如N,N-二异丙基乙胺、三乙胺、吡啶和4-二甲氨基吡啶)以及适合的试剂(诸如氯甲酸苯酯)的存在下，在例如室温的温度下进行。

路线3

其中R¹、R²、R⁴、R^c、R^d和n如上文所定义；优选地，R¹和R²各自为H；优选地，R⁴为卤素，优选F；优选地，n为1；LG¹和LG²各自为诸如卤素或磺酰基酯的离去基，例如Cl、Br、I、甲苯磺酸酯、三氟甲基磺酸酯、全氟丁基磺酸酯，优选Cl、Br或I；M¹为-B(OH)₂、-Sn(C₁₄烷基)₃、-ZnCl、-ZnBr、-ZnI、或

优选-B(OH)₂；Hal为卤素，例如Cl、Br或I，优选Br。

第一步：使化合物10与化合物5经亲核取代或偶联反应生成化合物11；

例如，该反应可以在氮气保护下，在有机溶剂(例如甲苯、二甲苯、四氢呋喃、乙二醇二甲醚、1,4-二氧六环、N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜或N-甲基吡咯烷酮)或其与水的混合体系中，在有机碱或无机碱(例如叔丁醇钠、叔丁醇钾、碳酸铯、碳酸钾、碳酸铯、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸氢钾、磷酸钾、醋酸钾)以及催化剂(例如钯催化剂，诸如三(二亚苄基丙酮)二钯、四(三苯基膦)钯、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯、[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物、二(三苯基膦)二氯化钯、醋酸钯)的存在下，在例如60℃至140℃的温度下进行。

第二步：使化合物11进行取代反应生成化合物12；

例如，该反应可以在有机溶剂(例如N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮、甲醇、乙醇、四氢呋喃、1,4-二氧六环)中，在例如室温的温度下，与适合的试剂(诸如N-溴代丁二酰亚胺)进行。

第三步：使化合物12与化合物3经偶联反应生成化合物13；

例如，该反应可以在氮气保护下，在有机溶剂(例如甲苯、二甲苯、四氢呋喃、乙二醇二甲醚、1,4-二氧六环、N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜或N-甲基吡咯烷酮)或其与水的混合体系中，在有机碱或无机碱(例如叔丁醇钠、叔丁醇钾、碳酸铯、碳酸钾、碳酸铯、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸氢钾、磷酸钾、醋酸钾)以及催化剂(例如钯催化剂，诸如三(二亚苄基丙酮)二钯、四(三苯基膦)钯、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯、[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物、二(三苯基膦)二氯化钯、醋酸钯)的存在下，在例如60℃至140℃的温度下进行。

第四步：使化合物13进行取代反应生成化合物14；

例如，该反应可以在有机溶剂(例如N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮、甲醇、乙醇、四氢呋喃、1,4-二氧六环)中，在例如室温的温度下，与适合的试剂(诸如N-溴代丁二酰亚胺)进行。

第五步：使化合物14与化合物15经偶联反应生成化合物16；

例如，该反应可以在氮气保护下，在有机溶剂(例如1,4-二氧六环、N,N-二甲基甲酰胺、甲醇、乙醇、甲苯)中，在催化剂(例如钯催化剂，诸如三(二亚苄基丙酮)二钯、四(三苯基膦)钯、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯、[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物、二(三苯基膦)二氯化钯、醋酸钯)的存在下，在加热(例如微波)下，在例如90℃至140℃的温度下进行。

第六步：使化合物16经水解反应生成化合物17；

例如，该反应可以在有机溶剂(例如甲醇、乙醇、异丙醇、乙二醇、1,4-二氧六环、二甲亚砜)或其与水的混合体系中，在无机碱(例如氢氧化钠、氢氧化钾)的存在下，在例如60℃至140℃的温度下进行。

第七步：使化合物17与化合物18经缩合反应生成式(II)的化合物。

例如，该反应可以在有机溶剂(例如四氢呋喃、二氯甲烷、1,4-二氧六环、N,N-二甲基甲酰胺)中，在缩合剂(例如N,N'-羰基二咪唑、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯、苯并***-1-基氧基三(二甲氨基)鏻六氟磷酸盐、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，优选N,N'-羰基二咪唑)的存在下，在例如室温的温度下进行。

在获得了该式(II)的化合物，特别是上文所述的式(IV)的化合物，优选其中R¹、R²和R³各自为H；R⁴为卤素，优选F；且R⁶为C_1-4烷基，优选为甲基的式(IV)的化合物后，可由此进一步合成本发明的其他化合物，例如其中R¹、R²、R³、R⁶具有上文所定义的其他含义的式(IV)的化合物。

药物组合物和治疗方法

如上文所述，如上文所述，腺苷A2a受体激活能够介导T细胞免疫功能抑制，并且与肿瘤的发生发展有关。本发明的发明人发现，本发明的化合物具有腺苷受体拮抗活性，特别是相对于A1受体，其对A2a受体具有高选择性。尽管不希望受任何理论的束缚，发明人相信，藉由这样的活性，本发明的化合物能够治疗T细胞免疫功能抑制(特别是由腺苷A2a受体激活介导的)和包括肿瘤在内的与腺苷受体(特别是腺苷A2a受体，更特别地是腺苷A2a受体激活)有关的疾病。

因此，本发明的另一方面提供药物组合物或药物制剂，其包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药以及一种或多种药学上可接受的载体。所述药物组合物用于治疗T细胞免疫功能抑制或与腺苷受体相关的疾病。

在一些实施方案中，所述药物组合物或药物制剂还可包含一种或多种其它治疗剂，例如用于治疗T细胞免疫功能抑制或与腺苷受体相关的疾病的其它治疗剂。

本发明的另一方面提供制备药物组合物或药物制剂的方法，所述方法包括将本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药以及一种或多种药学上可接受的载体组合。

本发明的另一方面提供本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药、本发明的药物组合物或者本发明的药物制剂在制备用于治疗个体的T细胞免疫功能抑制的药物中的用途。

本发明的另一方面提供本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药、本发明的药物组合物或者本发明的药物制剂，其用于治疗个体的T细胞免疫功能抑制。

本发明的另一方面提供治疗个体的T细胞免疫功能抑制的方法，所述方法包括有此需要的个体给药有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药、本发明的药物组合物或者本发明的药物制剂。

在这些方面的优选实施方案中，所述T细胞免疫功能抑制是由腺苷A2a受体激活介导的。

本发明的另一方面提供本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药、本发明的药物组合物或者本发明的药物制剂在制备用于治疗与腺苷受体相关的疾病的药物中的用途。

本发明的另一方面提供本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药、本发明的药物组合物或者本发明的药物制剂，其用于治疗与腺苷受体相关的疾病。

本发明的另一方面提供治疗与腺苷受体相关的疾病的方法，所述方法包括有此需要的个体给药有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药、本发明的药物组合物或者本发明的药物制剂。

在这些方面的优选实施方案中，所述腺苷受体为腺苷A2a受体。在优选实施方案中，所述疾病与腺苷A2a受体激活相关。优选地，所述疾病选自肿瘤，包括良性肿瘤和恶性肿瘤，优选恶性肿瘤。

如上文所述，已经开展了许多腺苷A2a受体拮抗剂用于治疗中枢神经***疾病的研究。例如，CPI-444曾用于治疗中枢神经***疾病的临床试验中。WO0162233和WO2002014282公开了具有腺苷A2a受体拮抗作用的氨基吡啶化合物可做为帕金森病或老年痴呆药物的治疗剂。WO0162233、WO2003035639、WO2004016605和WO2005079801公开了具有腺苷A2a受体拮抗作用的氨基嘧啶化合物可做为帕金森病或神经痛等疾病的治疗剂。WO2011095625公开了具有腺苷A2a受体拮抗作用的氨基三嗪化合物可做为运动障碍、中风、或帕金森病的治疗剂。这些研究表明，一方面，现有技术的腺苷A2a受体拮抗剂能够穿过血脑屏障；另一方面，本领域鲜有关于腺苷A2a受体拮抗剂的抗肿瘤应用的研究。而且，如果将这些现有技术公开的的活性化合物用于治疗个体的外周肿瘤，由于其穿过血脑屏障的能力，则很可能会对个体的中枢神经***造成损伤，产生严重的毒副作用。相反，本发明的一些化合物具有外周选择性，不会穿过血脑屏障而入脑，因而在对外周肿瘤发挥抗肿瘤效力时具有低的或没有中枢神经***毒副作用。这些化合物是外周肿瘤的治疗药物的良好候选。

因此，在优选的实施方案中，上文所述的肿瘤是外周良性肿瘤和外周恶性肿瘤，优选外周恶性肿瘤。

如本文中所用，术语“外周肿瘤”是指存在于中枢神经***之外的身体部位的肿瘤，包括良性肿瘤和恶性肿瘤，所述身体部位包括头颈部、四肢、皮肤、眼、耳、口、鼻、舌、唇、喉、咽、食道、内脏器官(例如支气管和肺、肾、肝、胆、胰、胃、小肠、大肠、肠系膜、腹膜、***、卵巢、子宫、输卵管、膀胱、输尿管、***、肾上腺等)和***(包括骨骼、血液、淋巴)，等等。

如本文中所用，术语“药学上可接受的载体”是指与治疗剂一同给药的稀释剂、辅剂、赋形剂或媒介物，并且其在合理的医学判断的范围内适于接触人类和/或其它动物的组织而没有过度的毒性、刺激、过敏反应或与合理的益处/风险比相应的其它问题或并发症。

在本发明的药物组合物或药物制剂中可使用的药学上可接受的载体包括但不限于无菌液体，例如水和油，包括那些石油、动物、植物或合成来源的油。适合的药学上可接受的载体的实例如在Remington’s Pharmaceutical Sciences(1990)中所述。

本发明的药物组合物或药物制剂可以***地作用和/或局部地作用。为此目的，它们可以适合的途径给药。对于这些给药途径，可以采用适合的剂型给药。

所述剂型包括但不限于片剂、胶囊剂、锭剂、硬糖剂、散剂、喷雾剂、乳膏剂、软膏剂、栓剂、凝胶剂、糊剂、洗剂、软膏剂、水性混悬剂、可注射溶液剂、酏剂、糖浆剂。

如本文中所使用的术语“有效量”指被给药后会在一定程度上缓解所治疗病症的一或多种症状的化合物的量。

可调整给药方案以提供最佳所需响应。例如，可以单次给药，可随时间施用数个分剂量，或可根据治疗情况按比例减少或增加剂量。要注意，剂量值可随病况的类型及严重性而变化，且可包括单次或多次剂量。要进一步理解，对于任何特定个体，具体的给药方案应是根据个体需要判断来随时间调整。

所给药的本发明的化合物的量会取决于所治疗的个体、病症或病况的严重程度、给药的频率、化合物的处置及处方医师的判断。一般而言，有效剂量在每日每kg体重约0.0001至约50mg。在一些情况下，不高于前述范围的下限的剂量水平可以是足够的，而在其它情况下，仍可在不引起任何有害副作用的情况下采用较大剂量，条件是首先将所述较大剂量分成数个较小剂量以在一整天中给药。

本发明的化合物在药物组合物或药物制剂中的含量或用量可以是约0.01mg至约1000mg。

除非另外说明，否则如本文中所使用，术语“治疗(treating)”意指逆转、减轻、抑制或消除这样的术语所应用的疾病或病症或者这样的疾病或病症的一或多种症状的进展，或预防这样的疾病或病症或者这样的疾病或病症的一或多种症状。

如本文中所用，术语“个体”包括人或非人动物。示例性的人个体包括患有疾病(例如本文所述的疾病)的人个体(称为患者)或正常个体。本发明中“非人动物”包括所有脊椎动物，例如非哺乳动物(例如鸟类、两栖动物、爬行动物)和哺乳动物，例如非人灵长类、家畜和/或驯化动物(例如绵羊、犬、猫、奶牛、猪等)。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

化合物的结构是通过核磁共振(¹H NMR)或质谱(MS)来确定的。¹H NMR是用JEOLEclipse400核磁仪的测定，测定溶剂为氘代甲醇(CD₃OD)、氘代氯仿(CDCl₃)或六氘代二甲基亚砜(DMSO-d₆)，内标为四甲基硅烷(TMS)，化学位移(δ)以10^-6(ppm)作为单位给出。

MS用Agilent生产的Agilent 6120B型Agilent(ESI)质谱仪测定。

制备高效液相色谱仪的制备方法：

仪器型号：Agilent 1260；色谱柱：Waters XBridge Prep C18OBD(19mm×150mm×5.0μm)；色谱柱温：25℃；流速：20.0mL/min；检测波长：214nm；洗脱梯度：(0min：10％A，90％B；16.0min：90％A，10％B)；流动相A：乙腈；流动相B：0.05％碳酸氢铵水溶液。

薄层色谱硅胶板(TLC)使用Merck产的铝板(20×20cm)，薄层层析分离纯化采用的是烟台新诺化工有限公司产GF 254(1mm)。

反应的监测采用薄层色谱法(TLC)或LC-MS，使用的展开剂体系有：二氯甲烷和甲醇体系，正己烷和乙酸乙酯体系，石油醚和乙酸乙酯体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节或者加入三乙胺等进行调节。

微波反应使用Biotage Initiator+(400W,RT～300℃)微波反应器。

柱层析一般使用200～300目硅胶为载体。洗脱剂的体系包括：二氯甲烷和甲醇体系，石油醚和乙酸乙酯体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的三乙胺进行调节。

实施例中无特殊说明，反应的温度为室温(20℃～35℃)；

本发明所使用的试剂购自Acros Organics、Aldrich Chemical Company、特伯化学等公司。

本申请中的缩写具有以下含义：

缩写	含义
		DMF	N,N-二甲基甲酰胺
DIPEA	N,N-二异丙基乙胺
		TLC	薄层色谱法
Pd(dppf)Cl<sub>2</sub>	[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯
		Et	乙基
iPr	异丙基
		tBu	叔丁基

中间体的制备：

中间体制备例1：4-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)喹唑啉的制备

第一步：6-溴-4-甲基喹唑啉的制备

将1-(2-氨基-5-溴苯基)乙酮(3g,14mmol)、原甲酸三乙酯(3.1g,21mmol)和乙酸铵(1.62g,21mmol)加入反应瓶中，于100℃反应过夜。反应完毕后，冷却至室温，浓缩反应液，剩余物用水稀释，并用乙酸乙酯萃取。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤。浓缩滤液，将剩余物用硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝1/3)，得到本步的标题化合物(2.6g，收率：83％)。

MS m/z(ESI):223.0[M+H]⁺。

第二步：4-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)喹唑啉的制备

在氮气氛围下，向6-溴-4-甲基喹唑啉(2g,8.9mmol)的1,4-二氧六环(50mL)溶液中依次加入联硼酸频哪醇酯(3.4g,13.5mmol)、醋酸钾(1.76g,16.9mmol)和Pd(dppf)Cl₂(0.65g,0.9mmol)，在80℃反应6小时。反应完毕后，冷却至室温，浓缩反应液，将剩余物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤。浓缩滤液，将剩余物用硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝1/2)，得到本步的标题化合物(2.1g，收率：87％)。

MS m/z(ESI):271.2[M+H]⁺。

本发明化合物的制备

实施例1：6-(4-氟苯基)-5-(4-甲基喹唑啉-6-基)吡嗪-2-胺的制备

第一步：6-(4-氟苯基)吡嗪-2-胺的制备

将6-氯吡嗪-2-胺(1g,7.72mmol)、(4-氟苯基)硼酸(1.40g,10.03mmol)和碳酸铯(5.03g,15.44mmol)依次加入1,4-二氧六环(30mL)和水(3mL)的混合物中，用氮气置换三次，然后加入Pd(dppf)Cl₂(284.1mg,0.39mmol)，于95℃反应12小时。反应完全后，静置反应液，过滤。浓缩滤液，将剩余物用硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝1/2)，得到本步的标题化合物(1.2g，收率：82.2％)。

MS m/z(ESI):190.1[M+H]⁺。

第二步：5-溴-6-(4-氟苯基)吡嗪-2-胺的制备

将6-(4-氟苯基)吡嗪-2-胺(1g,5.29mmol)溶于DMF(25mL)中，加入N-溴代丁二酰亚胺(940.8mg,5.29mmol)，于25℃反应2小时。将反应液倒入水中，搅拌10分钟后，用乙酸乙酯萃取三次。合并有机相并用饱和食盐水洗涤三次，在用无水硫酸钠干燥后过滤。浓缩滤液，将剩余物用硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝1/2)，得到本步的标题化合物(700mg，收率：49.4％)。

MS m/z(ESI):268.0[M+H]⁺。

第三步：6-(4-氟苯基)-5-(4-甲基喹唑啉-6-基)吡嗪-2-胺的制备

将5-溴-6-(4-氟苯基)吡嗪-2-胺(3.0g,11.2mmol)加入1,4-二氧六环(100mL)和水(20mL)的混合物中，然后依次加入4-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)喹唑啉(3.6g,13.4mmol)、碳酸钾(3.1g,22.4mmol)和Pd(dppf)Cl₂(0.4g,0.6mmol)，用氮气置换3次后，于100℃反应4小时。反应完毕后，冷却至室温，将反应液倒入水中，用乙酸乙酯萃取。合并有机相并用无水硫酸钠干燥，然后过滤。浓缩滤液，将剩余物用硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱剂：乙酸乙酯/石油醚＝3/1)，得到标题化合物(3.0g，收率：81％)。

MS m/z(ESI):332.1[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:9.06(s,1H),8.06(d,J＝9.2Hz,2H),7.84(d,J＝2.0Hz,2H),7.41-7.37(m,2H),7.15(t,J＝8.8Hz,2H),6.85(s,2H),2.69(s,3H)。

实施例2：3-(6-(4-氟苯基)-5-(4-甲基喹唑啉-6-基)吡嗪-2-基)-1-甲基-1-(吡啶-2-基甲基)脲的制备

将6-(4-氟苯基)-5-(4-甲基喹唑啉-6-基)吡嗪-2-胺(100.0mg,0.3mmol)溶于四氢呋喃(15mL)，在-40℃下加入DIPEA(0.6mL,3.2mmol)和氯甲酸苯酯(89.0mg,0.3mmol)，并于-40℃反应2小时。然后，加入N-甲基-1-(吡啶-2-基)甲胺(70.4mg,0.6mmol)，于0℃反应2小时。反应完毕后，浓缩反应液，将剩余物用硅胶柱层析色谱法纯化(洗脱剂：乙酸乙酯)，得到标题化合物(55.0mg，收率：37％)。

MS m/z(ESI):480.2[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:9.20(s,1H),9.10(s,1H),8.58(d,J＝4.0Hz,1H),8.23(d,J＝1.2Hz,1H),8.00-7.72(m,3H),7.58-7.42(m,3H),7.43-7.26(m,2H),7.18(t,J＝9.2Hz,2H),4.74(s,2H),3.08(s,3H),2.74(s,3H)。

实施例3：N-(6-(4-氟苯基)-5-(4-甲基喹唑啉-6-基)吡嗪-2-基)吗啉-4-甲酰胺的制备

用吗啉代替实施例2中的N-甲基-1-(吡啶-2-基)甲胺，以类似实施例2所述的方法，合成得到实施例3的标题化合物(110.0mg，收率：82％)。

MS m/z(ESI):445.2[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:9.85(s,1H),9.16(s,1H),9.10(s,1H),8.22(d,J＝1.6Hz,1H),7.92-7.87(m,2H),7.61-7.40(m,2H),7.20-7.17(m,2H),3.76-3.58(m,4H),3.59-3.45(m,4H),2.73(s,3H)。

实施例4：3-氨基-5-(4-氟苯基)-6-(4-甲基喹唑啉-6-基)吡嗪-2-腈的制备

第一步：3-溴-6-(4-氟苯基)-5-(4-甲基喹唑啉-6-基)吡嗪-2-胺的制备

将6-(4-氟苯基)-5-(4-甲基喹唑啉-6-基)吡嗪-2-胺(200.0mg,0.6mmol)溶于DMF(15mL)中，加入N-溴代丁二酰亚胺(107.4mg,0.6mmol)，于25℃反应2小时。将反应液倒入水中，过滤。滤饼用水洗涤，然后干燥，得到本步的标题化合物(220.0mg，收率：84％)。

MS m/z(ESI):410.0[M+H]⁺。

第二步：3-氨基-5-(4-氟苯基)-6-(4-甲基喹唑啉-6-基)吡嗪-2-腈的制备

将3-溴-6-(4-氟苯基)-5-(4-甲基喹唑啉-6-基)吡嗪-2-胺(0.9g，2.2mmol)和氰化亚铜(0.4g，4.4mmol)加入DMF(8mL)中，于120℃在微波中反应2小时。反应完成后，用水和乙酸乙酯萃取。合并有机相并用饱和食盐水洗涤，然后浓缩有机相，将得到的剩余物用高效液相色谱仪纯化，得到标题化合物(590.0mg，收率：71％)。

MS m/z(ESI):357.1[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:9.08(s,1H),8.12(d,J＝1.2Hz,1H),7.84-7.78(m,2H),7.69(s,2H),7.43(dd,J＝8.8,5.6Hz,2H),7.19(dd,J＝16.0,5.6Hz,2H),2.72(s,3H)。

实施例5：3-氨基-5-(4-氟苯基)-6-(4-甲基喹唑啉-6-基)吡嗪-2-羧酸的制备

将氢氧化钠(0.3g,7.50mmol)加入乙醇(2mL)和水(5mL)的混合物中，然后加入3-氨基-5-(4-氟苯基)-6-(4-甲基喹唑啉-6-基)吡嗪-2-腈(0.1g,0.3mmol)，并于100℃反应2小时。将反应液用乙酸乙酯萃取，并用1N的盐酸调节水相的pH值至2，然后浓缩。加入二氯甲烷稀释，然后过滤。浓缩滤液，将剩余物用硅胶薄层色谱制备板(展开剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化，得到标题化合物(20.0mg,收率：18％)。

MS m/z(ESI):376.1[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:9.08(s,1H),8.15(d,J＝1.2Hz,2H),7.81-7.76(m,2H),7.69(s,2H),7.43(dd,J＝8.8,5.6Hz,2H),7.22-7.18(m,2H),2.89(s,3H)。

实施例6：3-氨基-5-(4-氟苯基)-6-(4-甲基喹唑啉-6-基)吡嗪-2-甲酰胺的制备

将3-氨基-5-(4-氟苯基)-6-(4-甲基喹唑啉-6-基)吡嗪-2-羧酸(100.0mg，0.27mmol)和DIPEA(172.2mg，1.33mmol)加入四氢呋喃(30mL)中，然后加入氯化铵(71.3mg，1.33mmol)和苯并***-1-基氧基三(二甲氨基)鏻六氟磷酸盐(108.8mg，0.53mmol)，于25℃反应4小时。然后，浓缩反应液，将剩余物用高效液相色谱仪纯化，得到标题化合物(35mg，收率：33％)。

MS m/z(ESI):375.1[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:9.07(s,1H),8.32(s,1H),8.23(d,J＝1.6Hz,1H),8.00(dd,J＝8.8,2.0Hz,2H),7.89-7.64(m,3H),7.46(dd,J＝8.8,5.6Hz,2H),7.19(t,J＝8.8Hz,2H),2.75(s,3H)。

实施例7：3-氨基-5-(4-氟苯基)-N-甲基-6-(4-甲基喹唑啉-6-基)吡嗪-2-甲酰胺的制备

用2M的甲胺四氢呋喃溶液代替实施例6中的氯化铵，以类似实施例6所述的方法，合成得到实施例7的标题化合物(18.0mg，收率：11％)。

MS m/z(ESI):389.1[M+H]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:9.08(s,1H),8.81(d,J＝4.8Hz,1H),8.16(d,J＝1.6Hz,1H),8.06(dd,J＝8.8,2.0Hz,1H),7.86(d,J＝8.8Hz,3H),7.55-7.32(m,2H),7.30-7.03(m,2H),2.87(d,J＝4.8Hz,3H),2.72(s,3H)。

生物学测试

实验例1.对腺苷A1、A2a受体的竞争抑制常数(Ki)测定实验

试剂：

[³H]-DPCPX：PerkinElmer，NET974250UC

[³H]-CGS-21680：PerkinElmer，NET1021250UC

A1受体细胞膜(人源)：PerkinElmer，ES-010-M400UA

A2a受体细胞膜(人源)：PerkinElmer，RBHA2AM400UA

Microscint 20cocktail闪烁液：PerkinElmer，6013329

PEI(Poly ethyleneimine)：Sigma，P3143

CGS15943：Sigma，C199

仪器与耗材：

MicroBeta2Reader，PerkinElmer

Unifilter-96GF/C过滤板：Perkin Elmer，6005174

96孔板：Agilent，5042-1385

缓冲液：

A1实验缓冲液：25mM HEPES，5mM MgCl₂，1mM CaCl₂，100mM NaCl，pH 7.4。该缓冲液用于稀释A1受体细胞膜(人源)与[³H]-DPCPX。

A1洗涤缓冲液：25mM HEPES，5mM MgCl₂，1mM CaCl₂，100mM NaCl，pH 7.4。

A2a实验缓冲液：50mM Tris-HCl，10mM MgCl₂，1mM EDTA，pH7.4。该缓冲液用于稀释A2a受体细胞膜(人源)与[³H]-CGS-21680。

A2a洗涤缓冲液：50mM Tris-HCl，154mM NaCl，pH7.4。

实验方法：

采用A1实验缓冲液稀释A1受体细胞膜至0.025μg/μl，得到A1受体细胞膜稀释液；采用A2a实验缓冲液稀释A2a受体细胞膜至0.05μg/μl，得到A2a受体细胞膜稀释液。

以DMSO梯度稀释待测化合物和CGS15943。将各1μl的待测化合物、高值对照(0.5％DMSO)、低值对照(1000nM CGS15943)加至96孔板，然后向每孔加入100μl A1受体细胞膜稀释液(含2.5μg细胞膜)，得到A1检测板。将各1μl的待测化合物、高值对照(0.5％DMSO)、低值对照(1000nM CGS15943)加至96孔板，然后向每孔加入100μl A2a受体细胞膜稀释液(含5.0μg细胞膜)，得到A2a检测板。

在A1检测板中加入100μl放射性同位素标记配体[³H]-DPCPX(用A1实验缓冲液稀释，工作浓度1.0nM)。在A2a检测板中加入100μl放射性同位素标记配体[³H]-CGS-21680(用A2a实验缓冲液稀释，工作浓度6.0nM)，使用胶带封闭A1和A2a检测板，在室温下分别孵育1h和2h。

准备Unifilter-96GF/C过滤板，在Unifilter-96GF/C过滤板的每孔中加入50μl0.3％PEI，在室温下孵育不少于0.5h。

分别将孵育后的A1检测板和A2a检测板中的反应液转移至两块Unifilter-96GF/C过滤板中，并分别使用预冷的对应洗涤缓冲液洗涤，然后烘干过滤板。封闭过滤板底部后加入50μl Microscint 20cocktail闪烁液，然后封闭过滤板顶部，使用计数器MicroBeta2Reader读板。

数据分析：

使用如下公式计算抑制率：

抑制率％＝100-(实验孔信号值-低值对照孔信号平均值)/(高值对照孔信号平均值-低值对照孔信号平均值)*100。

采用XLfit拟合IC₅₀。Ki＝IC₅₀/(1+同位素浓度/Kd)；其中Kd为同位素标记的配体的解离常数。

结果详见表1：

表1.本发明化合物对腺苷A2a、A1受体的竞争抑制常数(Ki)

实施例编号	A1,Ki(nM)	A2a,Ki(nM)	A1/A2a,Ki比率
				1	202.4	3.5	58.6
2	1933.7	3.3	581.2
				3	326.0	5.2	62.9
4	132.8	1.7	78.3
				6	891.1	4.8	183.8
7	1036.5	8.8	117.7

表1中的数据表明，本发明化合物对腺苷A2a受体具有良好的亲和力，对腺苷A1受体的亲和力较弱。

实验例2：大鼠药代动力学(PK)研究

分别通过静脉(IV)和灌胃(PO)给予雄性SD大鼠本发明的化合物，以考察药代动力学特点。IV和PO的给药剂量分别是1mg/kg和5mg/kg，IV的溶媒为5％DMSO:5％Solutol:90％生理盐水，PO的溶媒为0.5％MC(甲基纤维素钠)。在IV给药前(0h)以及给药后0.083、0.25、0.5、1、2、4、6、8和24h等时间点收集血液，在PO给药前(0h)以及给药后0.25、0.5、1、2、4、6、8和24h等时间点收集血液，血液采用EDTA.K₂抗凝、离心后得到血浆样品，保存于-80℃。血浆样品经沉淀蛋白处理后进行LC-MS/MS分析。应用WinNonlin 6.3软件，采用非房室模型计算药代动力学参数，结果见表2和表3。

表2.IV给药的化合物在大鼠体内的药代动力学参数

如表2所示，通过以1mg/kg的剂量IV给药的实施例6的化合物在大鼠体内的暴露量(AUC_last)为1688h*ng/mL，对应的最大血药浓度(C_max)为951ng/mL，表明实施例6的化合物通过IV给药在大鼠体内具有优良的药物暴露量。

表3.PO给药的化合物在大鼠体内的药代动力学参数

如表3所示，通过以5mg/kg的剂量PO给药的实施例6的化合物在大鼠血液中的AUC_last为2802h*ng/mL，在大鼠血液中的C_max为525ng/mL，表明实施例6的化合物通过PO给药在大鼠血液***中具有优良的药物暴露量。

经计算，与静脉给药相比，大鼠口服化合物6的生物利用度为32.4％，表明本发明的化合物(例如实施例6的化合物)在大鼠体内具有优良的口服吸收效果。

除本文中描述的那些外，根据前述描述，本发明的多种修改对本领域技术人员而言会是显而易见的。这样的修改也意图落入所附权利要求书的范围内。本申请中所引用的各参考文献(包括所有专利、专利申请、期刊文章、书籍及任何其它公开)均以其整体援引加入本文。

Claims (62)

1.化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物具有式(I)的结构：

其中：

X为N；

R¹和R²各自独立地选自氢和-C(O)-NR^aR^b；

R³选自氢、CN、COOH、和-C(O)-NR^cR^d；

R⁴、R⁵和R⁶在每次出现时各自独立地选自氢、卤素、和C_1-6烷基；

R^a和R^b各自独立地选自氢、C_1-6烷基和被5或6元杂芳基取代的C_1-6烷基；或者R^a和R^b连同它们共同连接的氮原子形成3至6元氮杂环基；

R^c和R^d各自独立地选自氢和C_1-6烷基；

n为0、1或2；

p为0、1或2；且

q为0、1或2；

并且，当R¹、R²、R⁴、R⁵和R⁶均为氢时，R³不为氢或CN。

2.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R¹为氢。

3.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R^a和R^b各自独立地选自氢、C_1-4烷基和被5或6元杂芳基取代的C_1-4烷基；或者

R^a和R^b连同它们共同连接的氮原子形成4至6元氮杂环基。

4.如权利要求3所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R^a和R^b各自独立地选自C_1-4烷基和被5或6元杂芳基取代的C_1-4烷基。

5.如权利要求4所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R^a和R^b各自独立地选自C_1-4烷基和被6元杂芳基取代的C_1-4烷基。

6.如权利要求5所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R^a和R^b各自独立地选自C_1-4烷基和被吡啶基取代的C_1-4烷基。

7.如权利要求6所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R^a和R^b各自独立地选自甲基、乙基、异丙基以及被吡啶基取代的甲基、乙基和异丙基。

8.如权利要求7所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R^a和R^b中的一个选自甲基、乙基、异丙基，另一个选自被吡啶基取代的甲基、乙基和异丙基。

9.如权利要求8所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R^a和R^b中的一个为甲基，另一个为被吡啶基取代的甲基。

10.如权利要求9所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R^a和R^b中的一个为甲基，另一个为

11.如权利要求3所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R^a和R^b连同它们共同连接的氮原子形成5或6元氮杂环基。

12.如权利要求11所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R^a和R^b连同它们共同连接的氮原子形成6元氮杂环基。

13.如权利要求12所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R^a和R^b连同它们共同连接的氮原子形成

14.如权利要求13所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R^a和R^b连同它们共同连接的氮原子形成

15.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R²选自：

氢、

16.如权利要求15所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R²选自：

氢、

17.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R^c和R^d各自独立地选自氢和C_1-4烷基。

18.如权利要求17所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R^c和R^d各自独立地选自氢、甲基、乙基和异丙基。

19.如权利要求18所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R^c和R^d各自独立地选自氢和甲基。

20.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R³选自氢、CN、COOH、-C(O)-NH₂、和-C(O)-NH(C_1-4烷基)。

21.如权利要求20所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R³选自氢、CN、COOH、-C(O)-NH₂、-C(O)-NHCH₃、-C(O)-NH-Et和-C(O)-NH-iPr。

22.如权利要求21所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R³选自氢、CN、COOH、-C(O)-NH₂和-C(O)-NHCH₃。

23.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

R²选自：氢和-C(O)-NR^aR^b；并且

R³为氢；

或者

R²为氢，并且

R³选自氢、CN、COOH、-C(O)-NR^cR^d。

24.如权利要求23所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

R²选自：氢、

25.如权利要求24所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

R²选自氢、

26.如权利要求23所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

R³选自氢、CN、COOH、-C(O)-NH₂、-C(O)-NH(C_1-4烷基)。

27.如权利要求26所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

R³选自氢、CN、COOH、-C(O)-NH₂、-C(O)-NHCH₃、-C(O)-NH-Et、-C(O)-NH-iPr。

28.如权利要求27所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

R³选自氢、CN、COOH、-C(O)-NH₂和-C(O)-NHCH₃。

29.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R⁴在每次出现时独立地选自氢、卤素、C_1-4烷基。

30.如权利要求29所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R⁴在每次出现时独立地选自氢、F、Cl、Br、I、甲基、乙基、异丙基。

31.如权利要求30所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R⁴在每次出现时独立地选自氢、F、Cl、Br、I。

32.如权利要求31所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R⁴在每次出现时独立地选自F、Cl、Br和I。

33.如权利要求32所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R⁴在每次出现时独立地为F。

34.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R⁵在每次出现时独立地选自氢、卤素、C_1-4烷基。

35.如权利要求34所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R⁵在每次出现时独立地选自氢、F、Cl、Br、I、甲基、乙基、异丙基。

36.如权利要求35所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R⁵在每次出现时独立地为氢。

37.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R⁶在每次出现时独立地选自氢、卤素、C_1-4烷基。

38.如权利要求37所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R⁶在每次出现时独立地选自氢、F、Cl、Br、I、甲基、乙基、异丙基。

39.如权利要求38所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R⁶在每次出现时独立地选自甲基、乙基、异丙基。

40.如权利要求39所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R⁶在每次出现时独立地为甲基。

41.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中n为1或2。

42.如权利要求41所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中n为1。

43.如权利要求42所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中p为0或1。

44.如权利要求43所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中p为0。

45.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中q为1或2。

46.如权利要求45所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中q为1。

47.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物具有式(II)的结构：

其中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、n和p如权利要求1至46中任一项所定义。

48.如权利要求47所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物具有式(III)的结构：

其中R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、n和p如权利要求1至46中任一项所定义。

49.如权利要求48所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物具有式(IV)的结构：

其中R²、R³、R⁴和R⁶如权利要求1至46中任一项所定义。

50.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物选自：

51.药物组合物，其包含权利要求1至50中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，以及一种或多种药学上可接受的载体。

52.制备药物组合物的方法，所述方法包括将权利要求1至50中任一项的化合物或其药学上可接受的盐与一种或多种药学上可接受的载体组合。

53.权利要求1至50中任一项的化合物或其药学上可接受的盐或者权利要求51的药物组合物在制备用于治疗个体的T细胞免疫功能抑制的药物中的用途。

54.如权利要求53所述的用途，其中所述T细胞免疫功能抑制是由腺苷A2a受体激活介导的。

55.权利要求1至50中任一项的化合物或其药学上可接受的盐或者权利要求51的药物组合物在制备用于治疗与腺苷受体相关的疾病的药物中的用途。

56.如权利要求55所述的用途，其中所述腺苷受体为腺苷A2a受体。

57.如权利要求56所述的用途，其中所述疾病与腺苷A2a受体激活相关。

58.如权利要求57所述的用途，其中疾病选自肿瘤，包括良性肿瘤和恶性肿瘤。

59.如权利要求58所述的用途，其中疾病为恶性肿瘤。

60.如权利要求58所述的用途，其中所述肿瘤是外周良性肿瘤或外周恶性肿瘤。

61.如权利要求60所述的用途，其中所述肿瘤是外周恶性肿瘤。

62.如权利要求53至61中任一项所述的用途，其中所述药物为通过口服、静脉内、动脉内、皮下、腹膜内、肌内或经皮途径给药的药物。