CN111351870A - 一种肠易激综合征血清代谢标记物组合及其诊断试剂盒 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种肠易激综合征血清代谢标记物组合，该肠易激综合征血清代谢标记物组合可用于肠易激综合征的体外诊断，能协助临床医生判断患者是否患肠易激综合征，并且这些代谢标记物还有希望应用用于肠易激综合征的治疗靶点，提高临床病人的治疗效果。本发明还公开了肠易激综合征的诊断试剂盒，该试剂盒是基于阳性对照和阴性对照的血清样本进行液相色谱质谱联用代谢组学分析方法对丰度数据进行分析的原理构建的，经验证该试剂盒具有较高的检出率和较高的准确度，可以全面、综合地体现肠易激综合征患者的血清代谢标记物差异状况，可用于肠易激综合征的早期发现，为患者争取时间，尽早开始治疗，提高临床治疗效果。

Description

一种肠易激综合征血清代谢标记物组合及其诊断试剂盒

技术领域

本发明涉及体外诊断技术领域，具体涉及一种肠易激综合征血清代谢标记物组合及其诊断试剂盒。

背景技术

肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)是全球最常见的功能性胃肠道紊乱疾病之一，是以腹痛、腹胀、胀气、排便习惯改变、间歇性腹泻和/或便秘为临床表现，而缺乏胃肠道结构和生化异常的肠道功能紊乱性疾病。

按主要排便症状将IBS患者分三类：便秘主导型IBS(IBS-C)，腹泻主导型IBS(IBS-D)和腹泻与便秘症状交替型IBS(IBS-M)。IBS的汇总患病率为11％，不同地区之间差异较大，在发达国家达到12％-20％，在所有消化不良患者中占超过50％。然而，仅有少部分患者会就诊。在满足IBS诊断标准的人群中，约有40％未得到正式诊断。在美国，在所有转诊胃肠病科的病例中，IBS占25％-50％。在英国，IBS与重要的医疗保健支出相关，估计每年花费接近3.2亿英镑。美国在IBS上的医疗保健花费估计为每年80亿美元。IBS不仅导致医疗保健花费增加，还是导致旷工的第二大原因，同时还会严重影响患者的生活质量。IBS患者常有焦虑、紧张、抑郁等心理异常。同时精神心理应激也可诱发或加重IBS症状，说明精神心理因素与IBS有密切的关系。可见，IBS已形成一个重要的公共健康问题。

内脏敏感性和消化道通透性增高是IBS重要的病理生理机制,但确切的致病机制至今仍不清楚,目前认为与结肠动力异常、内脏敏感性增高、脑肠轴功能异常、炎症、免疫、饮食、肠道菌群失调等因素相关。目前最新诊断标准，罗马IV诊断标准，对IBS的定义为，在最近3个月内腹痛反复发作，平均每周至少1日，且至少伴有以下2项特征：腹痛与排便有关、伴排便频率改变或伴粪便性状(外观)改变。前提条件是患者没有任何可能导致这些症状的结构性或生化性疾病。因此，该标准需要有大量病史，且只在没有可另行解释症状的异常肠部解剖学或代谢过程时才可靠。另外，由于IBS的症状与很多其它肠部病患相似或相同，这也增加了IBS的鉴别诊断难度，妨碍疾病的早期发现和有效治疗。由于确切的致病机制至今仍不清楚，没有特异性生物、放射照相、内窥镜检查或生理的生物标记能用来鉴定该疾病。本发明通过检测血清代谢助学，全面、综合地体现肠易激综合征患者的血清代谢产物差异状况，可用于肠易激综合征的早期发现，为患者争取时间，尽早开始治疗，提高临床治疗效果。

代谢组学是涉及代谢产物的化学过程的科学研究，是继基因组学和蛋白质组学之后发展起来的一门学科，是***生物学的重要组成部分。与基因组学和蛋白质组学相比，代谢组学是要涉及研究每一个代谢组分的共性、特性和规律。尽管目前与此目标相距甚远，但研究人员仍然坚信，与基因组学和蛋白质组学相比，代谢组学与生理学的联系更加紧密。疾病导致机体病理生理过程变化，最终引起代谢产物发生相应的改变，通过对某些代谢产物进行分析，并与正常人的代谢产物比较，寻找疾病的生物标记物，将提供一种较好的疾病诊断方法。

研究发现肠易激综合征与胆汁酸代谢有着密切的关联，在患者的机体中代谢谱会发生变化，利用代谢组底端放大的特点找到肠易激综合征特征代谢物进行建模分析，以此提高肠易激综合征诊断效率，为肠易激综合征的体外诊断提供了一种新的思路。但目前现有的方法中，其代谢组学模型构建方法所用变量为高通量检测所得全部变量或变量数较多，尽管具有全面性但是灵敏度和特异度不够。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种肠易激综合征血清代谢标记物组合。该组合是通过对阳性对照和阴性对照的血清样本进行色谱质谱联用代谢组学分析，得到的原始代谢指纹图谱，可以全面、综合地体现肠易激综合征病人及健康人之间的血清代谢产物的变异状况，找到肠易激综合征的诊断标记物，为肠易激综合征的诊断和治疗提供有利的技术支持。

本发明的目的之二在于提供肠易激综合征诊断试剂盒。

本发明的目的之一采用如下技术方案实现：

一种肠易激综合征血清代谢标记物组合，由以下血清差异代谢物中的至少2种组成：甘油磷酸-N-花生四烯基乙醇胺(Glycerophospho-N-Arachidonoyl Ethanolamine)、月桂酰辅酶A(Lauroyl-CoA)、2E-十四酰辅酶A(2E-tetradecenoyl-CoA)、十四酰辅酶A(Tetradecanoyl-CoA)、硬脂酰胺(Stearamide)、葡萄糖神经酰胺(Glucosylceramide(d18:1/16:0))、猕猴桃碱(Actinidine)、L-精氨酸(L-Arginine)、二甲基色胺(N,N-Dimethyltryptamine)、1-苯乙胺(1-Phenylethylamine)、吡哆胺-5'-磷酸(Pyridoxamine-5'-Phosphate)、4,7,10,13-十六碳四烯酸(4,7,10,13-hexadecatetraenoic acid)、牛磺鹅去氧胆酸盐-3-硫酸盐(Taurochenodeoxycholate-3-sulfate)、(9Z,11E,13E,15Z)-4-氧代-9,11,13,15-十八碳四烯酸((9Z,11E,13E,15Z)-4-Oxo-9,11,13,15-octadecatetraenoic acid)、硬脂酸(Stearic acid)、PGF2α乙醇酰胺(PGF2αEthanolamide)、鸟嘌呤(Guanine)、花生四烯酸乙醇胺(Anandamide(22:6,n-3))、胆红素(Bilirubin)、羧甲基吡啶(Carboxynorspermidine)、磷酸胆碱(Phosphorylcholine)、二氢尿嘧啶(Dihydrouracil)、孕烯醇酮硫酸盐(Pregnenolone sulfate)、四氢脱氧皮质酮(Tetrahydrodeoxycorticosterone)、γ-生育三烯酚(γ-Tocotrienol)、27-去甲胆甾烷醇(27-Norcholestanehexol)、PC(9:0)、2-羟基炔雌醇(2-Hydroxyethinylestradiol)、10-氧代-十九烷酸(10-oxo-nonadecanoic acid)、十二烷二酸(Dodecanedioic acid)、草酰乙酸(Oxaloacetate)、5-甲基硫代甲基纤维素1-磷酸酯(5-Methylthioribulose 1-phosphate)和1-萘胺(1-Naphthylamine)。

以上血清代谢标记物是依次采用秩和检验及多重检验校正和偏最小二乘判别分析比较健康人对照与肠易激综合征患者代谢物谱的差异，从而确定的。

进一步地，由以下血清差异代谢物中的至少两种组成：二氢尿嘧啶(Dihydrouracil)、鸟嘌呤(Guanine)、吡哆胺-5'-磷酸(Pyridoxamine-5'-Phosphate)、4,7,10,13-十六碳四烯酸(4,7,10,13-hexadecatetraenoic acid)、硬脂酸(Stearic acid)、硬脂酰胺(Stearamide)、2-羟基炔雌醇(2-Hydroxyethinylestradiol)、PC(9:0)、(9Z,11E,13E,15Z)-4-氧代-9,11,13,15-十八碳烯酸((9Z,11E,13E,15Z)-4-Oxo-9,11,13,15-octadecatetraenoic acid)、10-氧代-十九烷酸(10-oxo-nonadecanoic acid)、胆红素(Bilirubin)、四氢脱氧皮质酮(Tetrahydrodeoxycorticosterone)、PGF2α乙醇酰胺(PGF2αEthanolamide)、孕烯醇酮硫酸盐(Pregnenolone sulfate)、γ-生育三烯酚(γ-Tocotrienol)、27-去甲胆甾烷醇(27-Norcholestanehexol)、牛磺鹅去氧胆酸盐-3-硫酸盐(Taurochenodeoxycholate-3-sulfate)和葡萄糖神经酰胺(Glucosylceramide(d18:1/16:0))。

以上优选的代谢物组合，是采用随机森林模型对特异性代谢物进行进一步评估，筛选出更为重要的代谢标记物并构建肠易激综合征判别模型。一方面去除掉无关变量的干扰，提高了模型的灵敏度以及特异性，另一方面也简化了验证集的检测方法，只需检测筛选的变量组合即可，提高了检测效率。

进一步地，由以下血清差异代谢物组成：二氢尿嘧啶(Dihydrouracil)、鸟嘌呤(Guanine)、吡哆胺-5'-磷酸(Pyridoxamine-5'-Phosphate)、4,7,10,13-十六碳四烯酸(4,7,10,13-hexadecatetraenoic acid)、硬脂酸(Stearic acid)、硬脂酰胺(Stearamide)、2-羟基炔雌醇(2-Hydroxyethinylestradiol)、PC(9:0)、(9Z,11E,13E,15Z)-4-氧代-9,11,13,15-十八碳烯酸((9Z,11E,13E,15Z)-4-Oxo-9,11,13,15-octadecatetraenoic acid)、10-氧代-十九烷酸(10-oxo-nonadecanoic acid)、胆红素(Bilirubin)、四氢脱氧皮质酮(Tetrahydrodeoxycorticosterone)、PGF2α乙醇酰胺(PGF2αEthanolamide)、孕烯醇酮硫酸盐(Pregnenolone sulfate)、γ-生育三烯酚(γ-Tocotrienol)、27-去甲胆甾烷醇(27-Norcholestanehexol)、牛磺鹅去氧胆酸盐-3-硫酸盐(Taurochenodeoxycholate-3-sulfate)和葡萄糖神经酰胺(Glucosylceramide(d18:1/16:0))。

本发明的目的之二采用如下技术方案实现：

一种肠易激综合征诊断试剂盒，包含数据分析单元，所述数据分析单元用于分析血清样品中上述的肠易激综合征血清代谢标记物组合的丰度数据。

进一步地，所述数据分析单元用于分析待测血清样本相对于阳性对照的血清样本、阴性对照的血清样本中所述肠易激综合征血清代谢标记物组合的相对丰度数据。

进一步地，所述阴性对照的血清样本来源于无IBS疾病史、神经退行性疾病、心血管疾病、代谢紊乱、胃肠疾病和胃肠道手术史、脑颅和胆囊切除手术史的健康正常体检者。优选地，阴性对照的血清样本数n>60。

进一步地，所述阳性对照的血清样本来源于经IBS诊断标准采用罗马IV诊断标准确诊的肠易激综合征患者。优选地，阳性对照的血清样本数n>200。

进一步地，所述丰度数据包括经液相色谱质谱联用分析得到的保留时间(RT)、质荷比(m/z)以及响应值在内的丰度数据矩阵。

进一步地，还包括随机森林分类器模型。

进一步地，所述随机森林分类器模型根据阳性对照的血清样本、阴性对照的血清样本的血清代谢标记物丰度数据建立的分类器模型对待测血清样本分类判断。

根据本发明所述血清代谢标记物组合制备肠易激综合征诊断试剂盒，可以全面、综合地体现肠易激综合征患者的代谢产物差异状况，可用于肠易激综合征的早期发现，为患者争取时间，尽早开始治疗，提高临床治疗效果。

相比现有技术，本发明的有益效果在于：

本发明提供的肠易激综合征血清代谢标记物可以全面、综合地体现肠易激综合征病人及健康人之间差异，以上血清代谢标记物可通过液相色谱质谱联用分析得出丰度数据，并基于阳性对照的血清样本和阴性对照的血清样本中相对应的血清代谢标记物组合进行综合性比较以得到相对丰度数据，最终经随机森林分类器模型可分有效地筛选出肠易激综合征高风险样本，为肠易激综合征的诊断和治疗提供有利的技术支持。

本发明的提供的肠易激综合征诊断该试剂盒是基于阳性对照和阴性对照的血清样本进行液相色谱质谱联用代谢组学分析方法对丰度数据进行的分析的的原理构建的，经验证该试剂盒具有较高的检出率和较高的准确度，可用于肠易激综合征的患病风险评估。

附图说明

图1为实施例3得到的差异血清代谢物的箱线图；

图2为实施例3得到的差异血清代谢物在多维PLS-DA模型的变量权重(VIP)值的条形图；

图3为实施例4得到18个血清代谢物的重要性评分；

图4为实施例4的训练集血清样本得到的ROC曲线图；

图5为实施例4的验证集血清样本得到的ROC曲线图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。

以下是本发明具体的实施例，在下述实施例中所采用的原材料、设备等除特殊限定外均可以通过购买方式获得。

以下具体实施方式中，作为阳性对照的血清样本和作为阴性对照的血清样本均来源于广州中医药大学和香港浸会大学的附属中医院。阴性对照的血清样本来源于无IBS疾病史、神经退行性疾病、心血管疾病、代谢紊乱、胃肠疾病和胃肠道手术史、脑颅和胆囊切除手术史的健康正常体检者。阳性对照的血清样本来源于经IBS诊断标准采用罗马IV诊断标准确诊的肠易激综合征患者。

本发明的血清代谢标记物是通过以下步骤得到的：

1)收集阳性对照的血清样本和阴性对照血清样本，由不低于200例的阳性对照血清样本和不低于60例的阴性对照血清样本组成训练集、由不低于60例的阳性对照血清样本和不低于10例的阴性对照血清样本组成验证集；

2)通过色谱质谱联用代谢组学分析方法分析鉴定训练集的血清样本的代谢物，得到原始代谢指纹图谱；

3)将原始代谢指纹图谱进行预处理转化为包括保留时间(RT)、质荷比(m/z)以及响应值在内的代谢物丰度数据矩阵，并进行归一化及标准化处理，得到预处理后的数据；

4)将预处理后的数据，在十折交叉验证偏最小二乘判别分析(PLS-DA)模型的变量权重VIP值大于1，变化倍数<0.8或>1.2非参检验且经FDR多重检验校正后Q值小于0.05的选择标准下，得到差异性代谢物，搜索代谢物二级质谱数据库(HMDB，METLIN以及Massbank数据库)，比较质谱的质荷比，筛选出能注释到数据库的差异代谢物；

5)采用随机森林方法进一步筛选重要差异代谢标记物，构建肠易激综合征判别模型，并通过验证集进行模型评估。

实施例1：血清样本制作

1)训练集：

阳性对照血清样本259例，阴性对照血清样本66例；均采集空腹血清样本。

2)验证集：

阳性对照血清样本84例，阴性对照血清样本14例；均采集空腹血清样本。

3)样本前处理

分别自训练集或验证集取50μL血清样本与200μL含氯苯丙氨酸(5μg/mL，水溶)的冷甲醇混合混合，涡流震荡30s，静置20min；用13000rpm冷冻离心10min，取200μL上清液蒸干；再用200μL乙腈复溶(98:2，v/v)。

实施例2：丰度数据测定

液相色谱质谱联用(LC/MS)测定实施例1得到的血清样本的丰度数据，其中，液相色谱采用Agilent 1290超高效液相色谱仪，质谱分析采用Agilent 6543四极杆-飞行时间串联质谱仪，分别在正离子电喷雾电离模式(ES+)和负离子电喷雾电离模式(ES-)模式将***调谐至最优的灵敏度和分辨率。

液相色谱条件为：Agilent ACQUITY UPLC BEH C₁₈柱(2.1×50mm,1.7μm)，流速：0.35mL/min，柱温：30℃。流动相A：水(0.1％甲酸)，B：乙腈(0.1％甲酸)，梯度洗脱程序为0-1min：5％B，2-12min：5％～100％B，12-15min：100％B。

飞行时间质谱条件为：ESI离子源，采用正负离子同时扫描模式。毛细管电压3000V，数据采集范围：100-1000m/z。

实施例3：筛选差异代谢物

将训练集血清样本通过LC-MS进行代谢物全谱分析测定，得到原始代谢指纹图谱。将原始代谢谱图使用R软件平台下的XCMS软件包进行预处理并转化为包括保留时间、质荷比以及响应值在内的数据矩阵，并进行归一化以及标准化处理，用于后期统计分析。代谢物的定性方法为：搜索代谢物二级质谱数据库(HMDB，METLIN以及Massbank数据库)，比较质谱的质荷比m/z。

如图1和图2中所示，通过多维PLS-DA模型提供的变量权重VIP值(VIP＞1)及Mann-WhitneyU检验所提供的P值经FDR校验后的Q值(Q＜0.05)的选择标准，从训练集样本中得到用于区分肠易激综合征及健康人对照的33种差异性代谢物：甘油磷酸-N-花生四烯基乙醇胺(Glycerophospho-N-Arachidonoyl Ethanolamine)、月桂酰辅酶A(Lauroyl-CoA)、2E-十四酰辅酶A(2E-tetradecenoyl-CoA)、十四酰辅酶A(Tetradecanoyl-CoA)、硬脂酰胺(Stearamide)、葡萄糖神经酰胺(Glucosylceramide(d18:1/16:0))、猕猴桃碱(Actinidine)、L-精氨酸(L-Arginine)、二甲基色胺(N,N-Dimethyltryptamine)、1-苯乙胺(1-Phenylethylamine)、吡哆胺-5'-磷酸(Pyridoxamine-5'-Phosphate)、4,7,10,13-十六碳四烯酸(4,7,10,13-hexadecatetraenoic acid)、牛磺鹅去氧胆酸盐-3-硫酸盐(Taurochenodeoxycholate-3-sulfate)、(9Z,11E,13E,15Z)-4-氧代-9,11,13,15-十八碳四烯酸((9Z,11E,13E,15Z)-4-Oxo-9,11,13,15-octadecatetraenoic acid)、硬脂酸(Stearic acid)、PGF2α乙醇酰胺(PGF2αEthanolamide)、鸟嘌呤(Guanine)、花生四烯酸乙醇胺(Anandamide(22:6,n-3))、胆红素(Bilirubin)、羧甲基吡啶(Carboxynorspermidine)、磷酸胆碱(Phosphorylcholine)、二氢尿嘧啶(Dihydrouracil)、孕烯醇酮硫酸盐(Pregnenolone sulfate)、四氢脱氧皮质酮(Tetrahydrodeoxycorticosterone)、γ-生育三烯酚(γ-Tocotrienol)、27-去甲胆甾烷醇(27-Norcholestanehexol)、PC(9:0)、2-羟基炔雌醇(2-Hydroxyethinylestradiol)、10-氧代-十九烷酸(10-oxo-nonadecanoic acid)、十二烷二酸(Dodecanedioic acid)、草酰乙酸(Oxaloacetate)、5-甲基硫代甲基纤维素1-磷酸酯(5-Methylthioribulose 1-phosphate)和1-萘胺(1-Naphthylamine)。

实施例4：验证差异代谢物

通过十折交叉验证的随机森林选择误差最小时所需变量数，最终确定纳入模型的重要代谢物个数。通过对训练集血清样本的丰度数据分析获得随机森林分类器，以及每个肠易激综合征患病风险血清代谢标记物在该分类器中重要性评分，结果如图3所示。随机森林模型根据血清代谢标记物丰度计算该样本不同类别Probability值的大小，即可判断该样本肠易激综合征患病风险，其中截点值为0.5，大于该截点值的Probability指示所述该样本受试者患有肠易激综合征。

发现其中18个代谢物，分别为二氢尿嘧啶(Dihydrouracil)、鸟嘌呤(Guanine)、吡哆胺-5'-磷酸(Pyridoxamine-5'-Phosphate)、4,7,10,13-十六碳四烯酸(4,7,10,13-hexadecatetraenoic acid)、硬脂酸(Stearic acid)、硬脂酰胺(Stearamide)、2-羟基炔雌醇(2-Hydroxyethinylestradiol)、PC(9:0)、(9Z,11E,13E,15Z)-4-氧代-9,11,13,15-十八碳烯酸((9Z,11E,13E,15Z)-4-Oxo-9,11,13,15-octadecatetraenoic acid)、10-氧代-十九烷酸(10-oxo-nonadecanoic acid)、胆红素(Bilirubin)、四氢脱氧皮质酮(Tetrahydrodeoxycorticosterone)、PGF2α乙醇酰胺(PGF2αEthanolamide)、孕烯醇酮硫酸盐(Pregnenolone sulfate)、γ-生育三烯酚(γ-Tocotrienol)、27-去甲胆甾烷醇(27-Norcholestanehexol)、牛磺鹅去氧胆酸盐-3-硫酸盐(Taurochenodeoxycholate-3-sulfate)和葡萄糖神经酰胺(Glucosylceramide(d18:1/16:0))，该18个代谢物作为肠易激综合征血清代谢标记物组合的作用尤为重要。

随后应用临床诊断性能曲线(ROC曲线)对以上得到的18种血清代谢标记物组合在肠易激综合征患者阳性对照血清样本进行评价，结果如图4所示。应用ROC曲线得到了满意的结果，对于训练集血清样本AUC＝0.9985，95％置信区间(CIs):0.9967-1.0000。

使用验证集的血清样本对通过训练集得到的这18个血清代谢标记物组合对肠易激综合征的预测概率参数进行验证，结果如图5和表1所示。用预测的概率来构建ROC曲线，得到的AUC＝0.9983(95％CIs:0.9943-1.0000)。

表1验证集的血清样本对预测概率参数的验证结果

预测概率大于0.5作为阳性判定标准，从表1的验证集的数据表明，验证集中的14阴性对照仅1例出现假阳性，而阳性对照血清样本中，84例中，仅出现1例假阴性，即本申请提供的18种血清代谢标记物的组合，能以较高的检出率和较高的准确度，判断患者患肠易激综合征的风险的高低。

该18种血清代谢标记物的组合，是很好的肠易激综合征诊断标记物，可用于临床诊断中，能协助临床医生判断患者是否患肠易激综合征，并且这些代谢物还可能用于肠易激综合征的治疗靶点，提高临床病人的治疗效果。

以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所做的均等变换和修改，都应该涵盖在本发明的范围内。

Claims (10)

1.一种肠易激综合征血清代谢标记物组合，其特征在于，由以下血清差异代谢物中的至少两种组成：甘油磷酸-N-花生四烯基乙醇胺、月桂酰辅酶A、2E-十四酰辅酶A、十四酰辅酶A、硬脂酰胺、葡萄糖神经酰胺、猕猴桃碱、L-精氨酸、二甲基色胺、1-苯乙胺、吡哆胺-5'-磷酸、4,7,10,13-十六碳四烯酸、牛磺鹅去氧胆酸盐-3-硫酸盐、(9Z,11E,13E,15Z)-4-氧代-9,11,13,15-十八碳四烯酸、硬脂酸、PGF2α乙醇酰胺、鸟嘌呤、花生四烯酸乙醇胺、胆红素、羧甲基吡啶、磷酸胆碱、二氢尿嘧啶、孕烯醇酮硫酸盐、四氢脱氧皮质酮、γ-生育三烯酚、27-去甲胆甾烷醇、PC(9:0)、2-羟基炔雌醇、10-氧代-十九烷酸、十二烷二酸、草酰乙酸、5-甲基硫代甲基纤维素1-磷酸酯和1-萘胺。

2.如权利要求1所述的肠易激综合征血清代谢标记物组合，其特征在于，由以下血清差异代谢物中的至少两种组成：二氢尿嘧啶、鸟嘌呤、吡哆胺-5'-磷酸、4,7,10,13-十六碳四烯酸、硬脂酸、硬脂酰胺、2-羟基炔雌醇、PC(9:0)、(9Z,11E,13E,15Z)-4-氧代-9,11,13,15-十八碳烯酸、10-氧代-十九烷酸、胆红素、四氢脱氧皮质酮、PGF2α乙醇酰胺、孕烯醇酮硫酸盐、γ-生育三烯酚、27-去甲胆甾烷醇、牛磺鹅去氧胆酸盐-3-硫酸盐和葡萄糖神经酰胺。

3.如权利要求1所述的肠易激综合征血清代谢标记物组合，其特征在于，由以下血清差异代谢物组成：二氢尿嘧啶、鸟嘌呤、吡啶氧五磷酸、4,7,10,13-十六碳四烯酸、硬脂酸、硬脂酰胺、2-羟基炔雌醇、PC(9:0)、(9Z,11E,13E,15Z)-4-氧代-9,11,13,15-十八碳烯酸、10-氧代-十九烷酸、胆红素、四氢脱氧皮质酮、PGF2α乙醇酰胺、孕烯醇酮硫酸盐、γ-生育三烯酚、27-去甲胆甾烷醇、牛磺鹅去氧胆酸盐-3-硫酸盐和葡萄糖神经酰胺。

4.一种肠易激综合征诊断试剂盒，其特征在于，包含数据分析单元，所述数据分析单元用于分析血清样品中权利要求1-3任一项所述的肠易激综合征血清代谢标记物组合的丰度数据。

5.如权利要求4所述的肠易激综合征诊断试剂盒，其特征在于，所述数据分析单元用于分析待测血清样本相对于阳性对照的血清样本、阴性对照的血清样本中所述肠易激综合征血清代谢标记物组合的相对丰度数据。

6.如权利要求5所述的肠易激综合征诊断试剂盒，其特征在于，所述阴性对照的血清样本来源于无IBS疾病史、神经退行性疾病、心血管疾病、代谢紊乱、胃肠疾病和胃肠道手术史、脑颅和胆囊切除手术史的健康正常体检者。

7.如权利要求5所述的肠易激综合征诊断试剂盒，其特征在于，所述阳性对照的血清样本来源于经IBS诊断标准采用罗马IV诊断标准确诊的肠易激综合征患者。

8.如权利要求5所述的肠易激综合征诊断试剂盒，其特征在于，所述丰度数据包括经液相色谱质谱联用分析得到的保留时间(RT)、质荷比(m/z)以及响应值在内的丰度数据矩阵。

9.如权利要求5所述的肠易激综合征诊断试剂盒，其特征在于，还包括随机森林分类器模型。

10.如权利要求9所述的肠易激综合征诊断试剂盒，其特征在于，所述随机森林分类器模型根据阳性对照的血清样本、阴性对照的血清样本的血清代谢标记物丰度数据建立分类器模型对待测血清样本分类判断。

Images