CN111329775A

CN111329775A - 异丁酰胺衍生物及其用途

Info

Publication number: CN111329775A
Application number: CN202010269783.9A
Authority: CN
Inventors: 滕景斌; 吴峰; 肖永堂
Original assignee: Fujian Lianke Technology Co Ltd
Current assignee: Fujian Lianke Technology Co Ltd
Priority date: 2020-04-08
Filing date: 2020-04-08
Publication date: 2020-06-26

Abstract

本发明涉及化妆品的技术领域，特别涉及一类异丁酰胺衍生物化合物及其用途；本发明通过制备具有抗组胺、抑制皮肤红斑、瘙痒、抑制透明质酸酶系列化合物，使得到的化合物可以用于制备化妆品试剂或药物试剂，本发明中的化妆品试剂和药物试剂没有特定限制。例如可以是柔肤化妆水、营养化妆水、按摩霜、润肤乳、凝胶、营养霜、面膜、啫喱类或沐浴露洗发水等洗去类型的化妆品，也可以是以类似乳霜、软膏、霜、贴膏或喷雾剂等药物制剂产品；作为敏感性皮肤使用，婴儿和儿童化妆品中也可以添加来降低刺激。

Description

异丁酰胺衍生物及其用途

技术领域

本发明涉及化妆品的技术领域，特别涉及一类异丁酰胺衍生物化合物及其用途。

背景技术

近年来，随着生活水平的提高，人们对皮肤的健康和护理越来越重视，由于环境的恶化，生活、工作压力的增大，以及过度使用化妆品，导致越来越多的人皮肤屏障受损，开始出现皮肤红斑、发痒等炎性症状。因此，人们迫切地需要具有明显抗炎效果、安全、无不良反应的化妆品来达到舒缓过敏症状的目的。

肥大细胞广泛分布于皮肤及内脏粘膜下的微血管周围，其胞内含有特定的胞质颗粒，其中贮存有炎症介质。已有的研究认为，肥大细胞驱动了速发型***反应，同时还参与了多种过敏性疾病的进程。在特应性皮炎等疾病的病变组织中，肥大细胞数目增多和脱颗粒是普遍的病理现象。而在变应性接触性皮炎中，肥大细胞参与了抗原递呈细胞的活化和迁移，其脱颗粒所释放的物质也介导了炎症初期的进程。肥大细胞表面表达大量的lgE Fc受体，在速发型***反应中，抗原再次侵入与Fc受体结合后，将快速引发肥大细胞释放炎症介质，并启动了炎症信号转导级联反应。肥大细胞将组胺、类胰蛋白酶等炎症介质释放到胞外，这个过程被称为脱颗粒。炎症介质的释放，直接介导肥大细胞引起的一系列免疫炎性反应。红斑很多情况下与尿布湿疹、粉刺、皮炎、湿疹和其他皮肤病症有关。特别是经过长期的紫外线照射，表现为皮肤粗糙、松弛、下垂，出现皱纹，皮沟加深，皮脊***，色素斑、老年斑和毛细血管扩张。

透明质酸酶是I型过敏反应的参与者，它与发炎、过敏有强相关性。可使***的间质分解，组织水肿，血管通透性增加，炎症加剧。这些作用与细菌及其产物的穿透和炎症迅速扩散有关。因此，抑制透明质酸酶的活性，既能使透明质酸不被分解以维持其正常的生理功能，又能达到抗炎、抗过敏的功效。在目前的化妆品中，缺乏能够有效保护肥大细胞，抑制炎症介质释放的抗炎舒缓产品。因此，针对现有产品的不足，需要提供一种能保护肥大细胞，并且具有抑制皮肤红斑、瘙痒、抑制透明质酸酶的产品是目前亟需解决的问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：如何通过合成一类化合物，使其具有抗组胺、抑制皮肤红斑、瘙痒、抑制透明质酸酶的功效，使其可用于制备化妆品试剂。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：

一类异丁酰胺衍生物作为化妆品或药物的用途，结构通式如下：

通式1

其中：

R表示为碳数为6-18的直链烷基；

R表示为碳数为6-18的直链烯烃烷基；

R为苯丙酰基、肉桂酰基、羟基苯丙酰基或羟基肉桂酰基

当R表示为苯丙酰基、肉桂酰基、羟基苯丙酰基或羟基肉桂酰基时，其R结构式如下：

本发明还提出将上述通式1化合物作为制备抑制由P物质诱导的，来自肥大细胞的组胺释放的化妆品试剂或者药物的用途。

本发明还提出将上述通式1化合物作为制备抑制皮肤瘙痒的化妆品试剂或者药物的用途。

本发明还提出将上述通式1化合物作为制备抑制皮肤红斑的化妆品试剂或者药物的用途。

本发明还提出将上述通式1化合物作为制备抑制透明质酸酶的化妆品试剂或者药物的用途。

本发明的有益效果在于：本发明通过制备具有抗炎功能的系列化合物，使得到的抗炎化合物可以用于制备化妆品试剂或药物试剂，本发明中的化妆品试剂和药物试剂没有特定限制。例如可以是柔肤化妆水、营养化妆水、按摩霜、润肤乳、凝胶、营养霜、面膜、啫喱类或沐浴露洗发水等洗去类型的化妆品，也可以是以类似乳霜、软膏、霜、贴膏或喷雾剂等药物制剂产品；作为敏感性皮肤使用，婴儿和儿童化妆品中也可以添加来降低刺激。

附图说明

图1为本发明实施例1制得的辛酰异丁胺的核磁氢谱图；

图2为本发明实施例1制得的辛酰异丁胺的核磁碳谱图；

图3为本发明实施例2制得的月桂酰异丁胺的核磁氢谱图；

图4为本发明实施例2制得的月桂酰异丁胺的核磁碳谱图；

图5为本发明实施例1制得的辛酰异丁胺的质谱图；

图6为本发明实施例2制得的月桂酰异丁胺的质谱图；

附图说明：图5-图6中，横坐标mass/charge为质荷比，纵坐标intensity为强度。

具体实施方式

为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式并配合附图予以说明。

本发明最关键的构思在于：合成一类化合物，使其具有保护肥大细胞，并且具有抑制皮肤红斑、瘙痒、抑制透明质酸酶的功效，使其可用于制备化妆品试剂。

本发明提出一类异丁酰胺衍生物作为化妆品或药物的用途，结构通式如下：

通式1

其中：

R表示为碳数为6-18的直链烷基；

R表示为碳数为6-18的直链烯烃烷基；

R表示为苯丙酰基、肉桂酰基、羟基苯丙酰基或羟基肉桂酰基。

实施例1

辛酰异丁胺的制备方法

49.5g异丁胺，93.3g三乙胺，用250ml二氯甲烷溶解，降温至-10℃，100g辛酰氯溶解于250ml二氯甲烷中，滴加至前述混合物中，滴加过程控制温度不超过0℃，滴加完成后，升温至室温，反应1h，向反应液中加入500ml水，分层，有机相用500ml水洗涤两遍，浓缩除去二氯甲烷，得101g淡黄色液体产物(温度低于35℃时凝固)，收率82.5％。

实施例2

月桂酰异丁胺的制备方法

36.8g异丁胺，69.4g三乙胺，用250ml二氯甲烷溶解，降温至-10℃，100g月桂酰氯溶解于250ml二氯甲烷中，滴加至前述混合物中，滴加过程控制温度不超过0℃，滴加完成后，升温至室温，反应1h，向反应液中加入500ml水，分层，有机相用500ml水洗涤两遍，浓缩除去二氯甲烷，得100g白色固体产物，收率86％。

实施例1制得的辛酰异丁胺核磁数据如下：

核磁氢谱(400MHz,DMSO-d6)δ：2.96(d，J＝8.0Hz，2H)，2.17(t，J＝12.0Hz，2H)，1.75(s，1H)，1.59(t，J＝12.0Hz，2H)，1.29(s，8H)，0.88(d，J＝8.0Hz，9H)。

核磁碳谱(100MHz,DMSO-d6)δ:174.5，46.6，36.0，31.7，29.1，29.0，28.4，26.0，22.5，19.6(2C)，13.5。

实施例2制得的月桂酰异丁胺核磁数据如下：

核磁氢谱(400MHz,DMSO-d6)δ：2.96(d，J＝8.0Hz，2H)，2.16(t，J＝16.0Hz，2H)，1.75(t，J＝12.0Hz，1H)，1.59(s，2H)，1.27(s，16H)，0.88(d，J＝8.0Hz，9H)。

核磁碳谱(100MHz,DMSO-d6)δ:174.6，46.6，35.9，31.9，29.6(3C)，29.2，29.1(2C)，28.4，25.9，22.5，19.5(2C)，13.4。

应用例1

本申请实施例1提供的辛酰异丁胺在化妆品中的应用，将辛酰异丁胺应用于膏霜中，配方表1所示：

表1

应用例2

本申请实施例2提供的月桂酰异丁胺在化妆品中的应用，将月桂酰异丁胺应用于抗敏精华液中，配方表2所示：

表2

一、抑制P物质诱导，肥大细胞释放组胺用途实验

1、肥大细胞脱颗粒实验

大鼠嗜碱性细胞白血病细胞株RBL-2H3。RBL-2H3具有肥大细胞的许多生物学特性，被认为是体外检测脱颗粒反应的最佳模型。用含有10％胎牛血清的DMEM培养液，于5％CO2，37℃条件下对细胞进行培养。传代时用0.25％胰酶消化约3min，用少量血清终止消化，吹打细胞使其成单个细胞。离心收集细胞，调整细胞浓度为5×104/ml，种于24孔板，1mL细胞悬液/孔，5％CO₂，37℃培养过夜使贴壁。培养24h后，每孔加入不同浓度的辛酰异丁胺溶液(溶剂为二甲基亚砜DMSO)20μL，加入相同体积的PBS作为正常对照组，另外加入5μM的氢化可的松作为阳性对照。30min后再分别加入终浓度为10μg/ml的P物质(引起肥大细胞脱颗粒的神经肽)20μL，继续培养1h后，弃去培养液，每孔中加入0.5％的中性红染液0.4mL，37℃染色3min，随机计数每100个肥大细胞中脱颗粒细胞数。设立3个复孔，重复3次实验取平均值。脱颗粒细胞百分比％＝脱颗粒细胞数/(脱颗粒细胞数+未脱颗粒细胞数)×100％。

2、组织胺释放试验

按照前述方法将RBL-2H3细胞培养在24孔板上，用PBS洗涤细胞两次，加入新的含有10％胎牛血清的DMEM培养基1mL，继续培养30min。每孔加入不同浓度的辛酰异丁胺溶液20μL(溶剂同上)，加入相同体积的PBS作为正常对照组，另外加入5μM的氢化可的松作为阳性对照。30min后再分别加入终浓度为10μg/mL的P物质20μL，继续培养1h。吸取细胞培养上清50μL，加入到低荧光本底的黑底96孔板中，随后加入50μl 0.1M的HCl，然后加入0.4MNaOH溶液25μL，振荡混匀后立即加入0.1％与邻苯二甲醛的甲醇溶液5μL，充分混匀并置室温下反应10min，加入0.5M HCl 25μL终止反应。所得反应产物置于多功能微孔酶标仪进行检测，激发波长为347nm发射波长为442nm。相应地，每孔细胞通过反复冻融后收集细胞裂解液，同法检测细胞内组织胺水平。根据标准曲线分别计算细胞上清和细胞中的组织胺含量。每孔细胞进行蛋白定量，平衡细胞数目差异。

结果表示为平均值±标准差，分别为3复孔，重复3次实验的结果。

RBL-2H3细胞分别用浓度(体积比)为0.5％、1.0％及1.5％的辛酰异丁胺溶液(测试组1、测试组2、测试组3)或氢化可的松(5μM)处理，分别测定对P物质引起的细胞脱颗粒、组胺释放的影响，结果见表3

表3

组别	剂量	脱颗粒率％	组胺释放率％
				空白对照组		5.87±0.15	0.79±0.27
P物质组	10μg/mL	21.64±3.14	11.26±2.34
				测试组1	0.5％	11.48±2.11	8.06±1.56
测试组2	1.0％	8.75±1.46	6.12±2.03
				测试组3	1.5％	6.31±2.01	4.09±1.61
氢化可的松组	5μM	6.01±1.22	3.68±1.35

由上表结果可见，与阴性对照组相比，P物质的脱颗粒率、组胺释放率均显著提高；与P物质组相比较，测试组的脱颗粒率、组胺释放率均显著降低，高剂量测试组3与氢化可的松组的效果相当。

二、皮肤红斑用途实验

以40名健康的成人作为对象，实施了皮肤刺激实验。其中患有粉刺、湿疹、其它皮肤病等的患者，以及孕妇、在哺乳期女性或者正服用避孕药、抗组胺药的人排除于受试者的选定。

作为试验物质使用了上述应用例1的乳膏，试验物质的涂敷是在受试者的背部进行封闭斑贴试验(closed patch test)，涂敷量为0.3g，测试组1涂敷辛酰异丁胺含量为0.5％的乳膏，测试组2涂敷月辛酰异丁胺含量为1.0％的乳膏，测试组3涂敷辛酰异丁胺含量为2.0％的乳膏，空白对照组不添加辛酰异丁胺的空白乳膏，所述空白乳膏除辛酰异丁胺外的其他组分含量一致。

贴附贴剂24小时后去除贴剂，在去除后的30分钟和24小时进行了检测。反应的检测是根据下述表所示的标准而进行的，其是从CTFA指南(1981)和Frosch&Kligman(1979)的检测标准演变而来的。其检测结果如下述表4-表5所示。

表4

表5

组别	有效物含量	分数	判断级别
				测试组1	0.5％月桂酰异丁胺	0.8	1
测试组2	1.0％月桂酰异丁胺	0.5	1
				测试组3	2.0％月桂酰异丁胺	0.2	1
空白对照组	无	1.5	2

实验表明，测试组1-3均为级别1，即无刺激性。

三、抑制皮肤瘙痒用途实验

取8周大的小鼠48只，雌雄各半，随机分为4组，每组12只，分为测试组1、测试组2、测试组3、空白对照组。给药前1d脱去小鼠腹部皮肤的毛备用，然后去毛处皮肤涂抹给药，对照组敷0.9％氯化钠注射液(0.3mL，分两次涂，每次0.2mL)，(添加不同月桂酰异丁胺含量的应用例2制得的精华液，均为0.3mL，分两次涂,每次0.2mL)，其中测试组1中的月桂酰异丁胺含量为0.5％，测试组2中的月桂酰异丁胺含量为1.0％，测试组3中的月桂酰异丁胺含量为2.0％，肤得安组涂肤得安药膏0.3g(厚度为2mm)。30min(各组均为先涂一次，15min再涂一次)。

然后各组小鼠尾静脉注射0.025％右旋糖酐5mL·kg^-1，即得小鼠瘙痒模型。以小鼠前爪搔头部、后爪搔躯干、嘴咬全身各部位作为瘙痒指征。

记录瘙痒潜伏期(注射结束至第1次搔抓开始的时间)、第1次挠痒后30min内小鼠瘙痒次数。以小鼠后肢持续搔抓注射部位至停止记作1次搔抓(连续播抓记作1次)。瘙痒次数：自瘙痒模型小鼠第1次发生挠痒动作起，记录30min内的挠痒总次数。

统计学方法

实验数据用SPSS21统计软件处理，数据以(x±s)表示，组间比较采用t检验。实验结果如表6所示。

表6

组别	小鼠数目(只)	首次瘙痒时间(s)	30min瘙痒次数(次)
				测试组1	12	170.56±23.65	12.34±1.45
测试组2	12	192.31±19.36	10.39±2.02
				测试组3	12	208.21±24.58	8.32±1.65
对照组	12	120.23±17.98	25.95±3.57

实验表面，实验组1-3的小鼠瘙痒次数明显降低，证明月桂酰异丁胺具有抑制皮肤瘙痒的作用。

四、体外透明质酸酶抑制实验

透明质酸酶是引起过敏反应的主要因素。过敏原初次侵入机体时，机体会产生抗体IgE，当过敏原再次入侵机体，会与肥大细胞表面的IgE抗体结合，从而启动活化信号，释放组胺，组胺在透明质酸酶的活化作用下产生过敏反应。因此抑制透明质酸酶的活性可以有效阻止过敏反应的发生。透明质酸酶与炎症反应、过敏反应有强的相关性。

体外抑制透明质酸酶活性的实验采用Elson-Morgan法，具体步骤如下：

将0.1mL的2.5mmol/LCaCl₂加入0.5mL的透明质酸酶(600U/mL)中，37℃保温20min；测试组1-3加入不同浓度辛酰异丁胺溶液(用DMOS溶解)，测试组1加入的辛酰异丁胺溶液中辛酰异丁胺(有效物)含量为0.2％，测试组2加入的辛酰异丁胺溶液中辛酰异丁胺含量为0.5％，测试组3加入的辛酰异丁胺溶液中辛酰异丁胺含量为1.0％，甘草酸二甲组中加入甘草酸二钾溶液1.0mL，37℃保温20min；加入0.4mg/mL透明质酸钠2mL，37℃保温40min；加入乙酰丙酮溶液1mL，置于沸水浴中加热15min，立即用冰水冷却5mim；最后加入Ehrlich试剂1.0mL，室温放置60min显色，于530nm处测定吸光度。

样品对透明质酸酶抑制率的测定计算公式为：

透明质酸酶抑制率(％)＝[(A-B)-(C-D)]/(A-B)*100

式中A表示：对照溶液的吸光度(用醋酸缓冲液代替样品液)；B表示：对照空白溶液的吸光度(用醋酸缓冲液代替样品液和酶液)；C表示：样品液的吸光度；D表示：样品空白液的吸光度(用醋酸缓冲溶液代替酶液)。

表7

编号	样品名称	有效物浓度	透明质酸酶抑制率(％)
				1	测试组1	0.2％	80.5
2	测试组2	0.5％	84.2
				3	测试组3	1.0％	90.1
4	空白对照组	--	11.3
				5	甘草酸二钾组	1.0％	45.3

从上表可以看出测试组1-3样品对透明质酸酶的抑制率均达到80％以上，1.0％浓度抑制效果最佳。

综上所述，本发明通过制备具有抗组胺、抑制皮肤红斑、瘙痒、抑制透明质酸酶系列化合物，使得到的化合物可以用于制备化妆品试剂或药物试剂，本发明中的化妆品试剂和药物试剂没有特定限制。例如可以是柔肤化妆水、营养化妆水、按摩霜、润肤乳、凝胶、营养霜、面膜、啫喱类或沐浴露洗发水等洗去类型的化妆品，也可以是以类似乳霜、软膏、霜、贴膏或喷雾剂等药物制剂产品；作为敏感性皮肤使用，婴儿和儿童化妆品中也可以添加来降低刺激。

以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims

1.异丁酰胺衍生物作为化妆品试剂或药物的用途，其特征在于，结构通式如下：

其中：

R表示为碳数为6-18的直链烷基。

2.权利要求1所述的异丁酰胺衍生物作为制备由P物质诱导的，来自肥大细胞的组胺释放抑制的化妆品试剂或者药物的用途。

3.权利要求1所述的异丁酰胺衍生物作为制备抑制皮肤瘙痒的化妆品试剂或者药物的用途。

4.权利要求1所述的异丁酰胺衍生物作为制备抑制皮肤红斑的化妆品试剂或者药物的用途。

5.权利要求1所述的异丁酰胺衍生物作为制备抑制透明质酸酶的化妆品试剂或者药物的用途。

6.权利要求1所述的异丁酰胺衍生物作为化妆品试剂或药物的用途，其特征在于，所述通式1中，所述R表示为碳数为6-18的直链烯烃烷基。

7.权利要求1所述的异丁酰胺衍生物作为化妆品试剂或药物的用途，其特征在于，所述通式1中，所述R表示为苯丙酰基、肉桂酰基、羟基苯丙酰基或羟基肉桂酰基；其R结构式如下：