CN111116565B

CN111116565B - 2-芳基-4-（4-吡唑氧基）吡啶类化合物、其制备方法、药物组合物与应用

Info

Publication number: CN111116565B
Application number: CN202010247992.3A
Authority: CN
Inventors: 吴晓焜; 马洪艳; 李孟心; 雷桥仕
Original assignee: Zhongkelijian Pharmaceutical Guangzhou Co ltd
Current assignee: Zhongkelijian Pharmaceutical Guangzhou Co ltd
Priority date: 2020-04-01
Filing date: 2020-04-01
Publication date: 2020-07-14
Anticipated expiration: 2040-04-01
Also published as: CN111116565A

Abstract

本发明涉及一种2‑芳基‑4‑（4‑吡唑氧基）吡啶类化合物、其制备方法、药物组合物与应用。具体为具有如下所示结构通式的2‑芳基‑4‑（4‑吡唑氧基）吡啶类化合物、或其药学上可接受的盐。其能够作为治疗制剂，特别是作为TGF‑β信号通路抑制剂，在制备具有预防、减轻及治疗由TGF‑β信号通路紊乱介导的疾病的药物中具有良好的应用前景。

Description

2-芳基-4-（4-吡唑氧基）吡啶类化合物、其制备方法、药物组合物与应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，特别是2-芳基-4-（4-吡唑氧基）吡啶类化合物、其制备方法、药物组合物与应用。

背景技术

近年来，癌症治疗领域取得了不少重要进展，如癌症靶向疗法、免疫疗法及细胞移植疗法等为患者的生存和高质量生活带来了希望。然而，当前各种癌症疗法仍然存在诸多不足之处，如癌症免疫疗法中的PD-1/PD-L1药物的病人有效应答率非常低，只对10~20%的病人有效。因此，亟需对现有疗法特别是癌症治疗方案进行改进，增加患者的缓解率和生存率。

组织微环境为细胞个体及细胞间行为提供信息传导及加强连接，对于维持生物体内各项功能正常运行至关重要。在压力之下，组织微环境会发生改变，而且大量实验证据也表明组织微环境的紊乱和许多疾病息息相关。例如，组织微环境中转化生长因子-β（transforming growth factor-β, TGF-β）信号通路的失调就与癌症的发生和转移直接相关，其过度活跃也与癌症免疫疗法（如PD-1/PD-L1单克隆抗体药物）的治疗抵抗密切相关。针对组织微环境中的重要因子/信号通路，如TGF-β信号通路进行干预，是近年来医药研发领域的重要方向。

转化生长因子-β（transforming growth factor-β, TGF-β）信号通路参与多种细胞过程，包括细胞生长、迁移、分化、凋亡等，在生物体胚胎发育与组织器官形成、修复、免疫检查及成体稳态平衡中发挥重要作用。广义的TGF-β信号通路比较复杂，其中TGF-β/SMAD信号通路研究相对较为深入。TGF-β/SMAD信号通路由三种亚型（β1，β2，β3）游离配体通过与细胞表面的Ⅰ型和Ⅱ型TGF-β跨膜丝氨酸/苏氨酸激酶受体结合形成异源复合物激活受体特异的SMAD蛋白（R-SAMD），R-SAMD与公用SMAD（co-SMAD）结合后进入细胞核内并进一步同其它细胞因子相互作用共同调控基因的转录。TGF-β信号通路异常会导致许多疾病，如癌症、组织纤维化、软骨发育异常、肺动脉高血压等。特别地，在各种癌症晚期，肿瘤细胞及肿瘤内基质细胞通常通过过度激活TGF-β信号通路促进癌症的免疫逃逸和转移，导致癌症恶化及增加癌症治疗的难度。已有研究表明，抑制TGF-β信号通路能够有效增强癌症特别是实体瘤的免疫应答，同时也能减少肿瘤转移。初步试验也证实，TGF-β信号通路抑制剂与PD-1/PD-L1通路单克隆抗体联合给药在实验室中提高了实验动物的生存时间。因此，针对TGF-β信号通路开发安全有效的药物一直是生物医药领域的研究热点。

基于TGF-β信号通路的特征，TGF-β蛋白在细胞表面的I型受体（TGFβ receptor I，又称activin-like kinase 5，ALK5)是小分子靶向药物研发领域的理想靶点。通过小分子选择性靶向抑制ALK5蛋白对其下游信号转导蛋白Smad2/3的磷酸化，减弱或阻断TGF-β信号向细胞核内传播，调整TGF-β信号通路回复正常，从而治疗各种TGF-β信号通路介导的疾病。目前，已有一些小分子ALK5抑制剂进入临床实验阶段，如礼来公司的Galunisertib(LY2157299)和LY3200882、MedPacto合作开发的Vactosertib (TEW-7197)、劲方医药的GFH018、璎黎药业的YL-13027等。

发明内容

基于此，有必要提供一种2-芳基-4-（4-吡唑氧基）吡啶类化合物，其能够作为治疗制剂，特别是作为TGF-β信号通路抑制剂，在制备具有预防、减轻及治疗由TGF-β信号通路紊乱介导的疾病的药物中具有良好的应用前景。

具有如下所示结构通式的2-芳基-4-（4-吡唑氧基）吡啶类化合物、或其药学上可接受的盐：

其中，R²选自H、C1-C10直链或C3-C10支链烷基、C1-C10直链或C3-C10支链烷氧基、C3-C10环烷基、C2-C10环烷氧基、C5-C10芳基、C2-C10杂芳基；

R³选自卤素、C1-C5直链或C3-C5支链烷氧基、C2-C10环烷氧基、C5-C10芳基、C2-C10杂芳基中的一种或两种以上组合而成的基团；

Ar为至少一个R₀取代的C5-C15芳基或C2-C10杂芳基；其中，R₀分别独立地选自H、卤素、C1-C5直链或C3-C5支链烷基、C1-C5直链或C3-C5支链烷氧基、C2-C10氮杂环基、C2-C5杂芳基、酰胺基、-NH₂、-NH-、

、

、

、氰基、羟基、烯基中的一种或两种以上组合而成的基团，且相邻的C原子上的R₀基团可以连接成环。

在其中一个实施例中，Ar选自具有如下所示结构通式的基团：

n=1、2或3；

Ar₀选自C5-C10芳基、C2-C5杂芳基；

R₀分别独立地选自H、卤素、C1-C5直链或C3-C5支链烷基、C1-C5直链或C3-C5支链烷氧基、C2-C10氮杂环基、C2-C5杂芳基、酰胺基、-NH₂、-NH-、

、

、

在其中一个实施例中，Ar选自如下基团：

、

，其中，X分别独立地为C或N，且至少一个X为N。

在其中一个实施例中，R₀分别独立地选自如下基团：

-F、-Cl、-（C=O）NH₂、-（C=O）NHCH₃、-NHCH₂C（CH₃）OH、-OCH₃、

-NH（C=O）CH₃、-（C=O）N（CH₃）₂、-CN、-（C=O）OCH₃、-CF₃、

、

、或相邻的C原子上的两个R₀基团形成

。

在其中一个实施例中，R³选自C3-C7环烷氧基、C5-C7芳基与卤素组合而成的基团、C5-C7芳基与C1-C2烷氧基组合而成的基团。

在其中一个实施例中，R³选自如下基团：

、

、

。

在其中一个实施例中，R²选自H、C3-C5环烷基。

在其中一个实施例中，所述的2-芳基-4-（4-吡唑氧基）吡啶类化合物选自如下化合物：

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

。

本发明还提供所述2-芳基-4-（4-吡唑氧基）吡啶类化合物的制备方法，包括如下步骤：

（1）化合物1与卤代试剂反应，得化合物2，其中，X代表卤素；

（2）化合物2与2-溴-4-羟基吡啶进行取代反应，得化合物3；

（3）化合物3与N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛进行反应，得化合物4；

（4）化合物4与水合肼进行反应，得化合物5；

（5）化合物5与R₂-B（OH）₂进行偶联或取代反应，得化合物6；

（6）化合物6与Ar-B（OH）₂进行Suzuki偶联反应；

其中，R²、R³和Ar的定义同前所述。

（2）化合物2与2-溴-4-羟基吡啶进行取代反应，得化合物3；

（4）化合物4与水合肼进行反应，得化合物5；

（5）化合物5与R₂-B（OH）₂进行反应，得化合物6；

（6）化合物6与Cl-Ar₀-B（OH）₂进行Suzuki偶联反应，得化合物7；

（7）以化合物7进行偶联反应，将基团-Ar₀-Cl反应形成-Ar；

其中，R² 、R³、Ar和Ar₀的定义同前所述。

本发明还提供一种药物组合物，包含活性成分和药学上可接受的辅料，所述活性成分包含如上所述2-芳基-4-（4-吡唑氧基）吡啶类化合物、或其药学上可接受的盐。

本发明还提供如上所述2-芳基-4-（4-吡唑氧基）吡啶类化合物、或其药学上可接受的盐，或如上所述药物组合物在制备TGF-β信号通路抑制剂中的应用。

本发明还提供如上所述2-芳基-4-（4-吡唑氧基）吡啶类化合物、或其药学上可接受的盐，或如上所述药物组合物在制备具有防治TGF-β信号通路紊乱介导的癌症、感染性疾病、自身免疫性疾病、组织纤维化、软骨发育异常或肺动脉高血压功效的药物中的应用。

与现有技术相比较，本发明具有如下有益效果：

本发明通过研究发现一类新型的具有使TGF-β信号通路恢复正常作用的分子骨架结构，其为4-（4-吡唑氧基）吡啶，且在吡啶环上具有2-Ar取代，其作用机理为作为ALK5抑制剂对ALK5进行调控，从而使TGF-β信号通路恢复正常，达到干预（预防、减轻或治疗）相关的多种疾病的效果，这些疾病具体可如癌症、感染性疾病、自身免疫性疾病、组织纤维化、软骨发育异常或肺动脉高血压，具有良好的应用前景。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明的2-芳基-4-（4-吡唑氧基）吡啶类化合物、其制备方法、药物组合物与应用作进一步详细的说明。

芳基指至少包含一个芳香环的烃基，包括单环基团和多环的环***。杂芳基指包含至少一个杂芳环的烃基（含有杂原子），包括单环基团和多环的环***。这些多环的环可以具有两个或多个环，其中两个碳原子被两个相邻的环共享，即稠环。多环的这些环种，至少一个是芳香族的或杂芳香族的。对于本发明的目的，芳香族或杂芳香族环系不仅包括芳香基或杂芳香基的体系，而且，其中多个芳基或杂芳基也可以被短的非芳族单元间断，比如C、N或O原子。因此，比如9,9'-螺二芴，9,9-二芳基芴，三芳胺，二芳基醚等体系，对于该发明目的同样认为是芳基。

本发明的实施例提供具有如下所示结构通式的2-芳基-4-（4-吡唑氧基）吡啶类化合物、或其药学上可接受的盐：

、

、

如上结构通式具有4-（4-吡唑氧基）吡啶且在吡啶环上具有2-Ar取代的分子骨架，协同在特定的位点进行合适的R^1-3取代，能够达到优良的ALK5抑制作用，进而对ALK5进行调控，从而使TGF-β信号通路恢复正常，达到干预（预防、减轻或治疗）相关的多种疾病的效果。

所述“药学上可接受的盐”可为无机酸或有机酸盐，举例如盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、有机磺酸盐、枸橼酸盐、马来酸盐、草酸盐等。

在其中一个具体的实施例中，Ar选自具有如下所示结构通式的基团：

n=1、2或3；

Ar₀选自C5-C10芳基、C2-C5杂芳基；

、

、

在其中一个具体的实施例中，Ar选自如下基团（*代表取代位点）：

、

，其中，X分别独立地为C或N，且至少一个X为N。

在其中一个具体的实施例中，R₀分别独立地选自如下基团：

、

、或相邻的C原子上的两个R₀基团形成

。

在其中一个具体的实施例中，R³选自C3-C7环烷氧基、C5-C7芳基与卤素组合而成的基团、C5-C7芳基与C1-C2烷氧基组合而成的基团。更为具体地，R³选自卤素取代或C1-C2烷氧基取代的C5-C7芳基。

在其中一个具体的实施例中，R³选自如下基团：

、

、

。

在其中一个具体的实施例中，R²选自H、C3-C5环烷基。更为具体地，R²为环丙基。

在其中一个具体的实施例中，所述的2-芳基-4-（4-吡唑氧基）吡啶类化合物选自如下化合物：

、

、

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、

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、

、

。

本发明的实施例还提供所述2-芳基-4-（4-吡唑氧基）吡啶类化合物的制备方法，该方法原料易得，步骤简单，具体包括如下步骤：

（2）化合物2与2-溴-4-羟基吡啶进行取代反应，得化合物3；

（4）化合物4与水合肼进行反应，得化合物5；

（6）化合物6与Ar-B（OH）₂进行Suzuki偶联反应。

其中，R²、R³和Ar的定义同前所述。

（2）化合物2与2-溴-4-羟基吡啶进行取代反应，得化合物3；

（4）化合物4与水合肼进行反应，得化合物5；

（5）化合物5与R₂-B（OH）₂进行反应，得化合物6；

（7）以化合物7进行偶联反应，将基团-Ar₀-Cl反应形成-Ar。

其中，R² 、R³、Ar和Ar₀的定义同前所述。

本发明的实施例还提供一种药物组合物，包含活性成分和药学上可接受的辅料，所述活性成分包含如上所述2-芳基-4-（4-吡唑氧基）吡啶类化合物、或其药学上可接受的盐。

本发明的实施例还提供如上所述2-芳基-4-（4-吡唑氧基）吡啶类化合物、或其药学上可接受的盐，或如上所述药物组合物在制备TGF-β信号通路抑制剂中的应用。

本发明的实施例还提供如上所述2-芳基-4-（4-吡唑氧基）吡啶类化合物、或其药学上可接受的盐，或如上所述药物组合物在制备具有防治TGF-β信号通路紊乱介导的癌症、感染性疾病、自身免疫性疾病、组织纤维化、软骨发育异常或肺动脉高血压功效的药物中的应用。

如下为具体的实施例，除另有说明外，以下实施例中使用的初始原料、反应试剂等均为市售产品。实验中所用试剂及溶剂均按反应具体情况处理。

在以下实施例中，样品的分析数据由以下仪器测定：核磁共振由Bruker AMX-400型和Bruker AMX-500型核磁共振仪测定，TMS（四甲基硅烷）为内标，化学位移单位为ppm，耦合常数单位为Hz；质谱由Agilent1200/MSD质谱仪测定。

柱层析用硅胶200-300目（青岛海洋化工厂生产）；TLC硅胶板为烟台化工厂生产的HSGF-254型薄层层析预制板；石油醚沸程为60-90℃；采用紫外灯、碘缸和磷钼酸等显色。

本发明中使用的试剂缩写字母为本领域常用的表达方式，含义如下：

PE：石油醚，DCM：二氯甲烷，EA：乙酸乙酯，THF：四氢呋喃，MeOH：甲醇，DMF：N,N-二甲基甲酰胺，DME：乙二醇二甲醚，DMA：N,N-二甲基乙酰胺，DIEA：N,N-二异丙基乙胺，TEA：三乙胺，DCC：二环己基碳二亚胺，DMAP：4-N,N-二甲氨基吡啶, HOBt：1-羟基苯并***，EDC.HCl：1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐，Boc酸酐：二碳酸二叔丁酯。

实施例1（LEC002-079）

化合物1的合成路线：

步骤A：

往烧瓶中加入1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酮(5.00g, 39.01mmol)，用甲醇(50mL)溶解，室温搅拌中，另称取溴代丁二酰亚胺(6.90g，39.01mmol)，用甲醇(50mL)溶解后，缓慢加入反应液中，然后转置在油浴条件下，50℃下搅拌3h。然后冷却至室温，减压浓缩除去溶剂，将剩余物用硅胶色谱柱纯化（洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝4/1），得到目标产物1-a(7.80g, 收率：97.50%)，白色固体。

MS(m/z):208.01[M+H]。

步骤B：

往烧瓶中加入2-溴-4-羟基吡啶(3.00g, 17.24mmol)，中间体1-a(7.10g,34.48mmol)，碳酸钾(4.70g, 34.48mmol)和乙腈(30mL)。加毕，反应物在油浴条件下，60℃下搅拌5h。然后冷却至室温，减压浓缩除去溶剂，将剩余物用硅胶色谱柱纯化（洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝1/1），得到目标产物1-b(4.61g, 收率：89.20%)，棕色油状体。

MS(m/z):301.01[M+H]。

步骤C：

往烧瓶中加入中间体1-b(4.50g, 14.99mmol)，N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛(8.93g, 74.94mmol)。加毕，反应物在油浴条件下，105℃下搅拌3h。然后冷却至室温，减压浓缩除去溶剂，将剩余物用石油醚洗脱，得到目标产物1-c(5.07g, 收率：95.32%)，棕色固体。

MS(m/z):356.01[M+H]。

步骤D：

往烧瓶中加入中间体1-c(5.07g, 14.28mmol)，水合肼溶液(1.43g, 28.57mmol)和乙醇(30mL)，醋酸(10mL)。加毕，反应物在油浴条件下，50℃下搅拌6h。然后冷却至室温，浓缩除去溶剂，将剩余物加入饱和NaHCO₃溶液和乙酸乙酯，萃取三次，得到有机相用无水Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，剩余物用硅胶色谱柱纯化（洗脱剂：乙酸乙酯＝100%），得到目标产物1-d(4.15g, 收率：90.06%)，无色油状体。

MS(m/z):324.01[M+H]。

步骤E：

往烧瓶中加入醋酸铜(2.79g, 15.36mmol)，2,2'-联吡啶(2.40g，15.36mmol)和二氯乙烷(50mL)。加毕，反应物在油浴条件下，75℃下搅拌25min，然后冷却至室温，加入中间体1-d(4.15g, 12.80mmol)，环丙基硼酸(2.20g, 25.60mmol)和NaCO₃(2.71g,25.60mmol)，并从烧瓶底部鼓入空气，并在油浴条件下，75℃继续搅拌反应6h。然后冷却至室温，加入乙酸乙酯并过滤得到有机相，减压浓缩除去溶剂，剩余物用硅胶色谱柱纯化（洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝1/2），得到目标产物1-e(3.78g, 收率：81.25%)，无色固体。

1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.20 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.30 (s, 1H),7.02 (s, 1H), 6.85 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 3.97 (d, J = 11.2 Hz, 2H), 3.57 –3.55 (m, 1H), 3.41 (t, J = 11.7 Hz, 2H), 2.78 – 2.73 (m, 1H), 1.89 – 1.80 (m,2H), 1.71 (d, J = 14.8 Hz, 2H), 1.11 (s, 2H), 1.02 (d, J = 6.8 Hz, 2H)。

MS(m/z):364.10[M+H]。HPLC:90.22%。

步骤F：

往烧瓶中加入中间体1-e(0.20g, 0.54mmol)，3-乙酰胺基苯硼酸(0.14g,0.82mmol)，[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(0.44g, 0.05mmol)，碳酸钾(0.22g, 1.62mmol)和1.4-二氧六环(12mL)，水(3mL)。加毕，反应物在微波条件下，150℃搅拌反应30min，然后冷却至室温，加入NH₄Cl溶液和乙酸乙酯，萃取三次，得到有机相用无水Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，剩余物用硅胶色谱柱纯化（洗脱剂：乙酸乙酯＝100%），得到化合物1(0.14g, 收率：65.40%)，无色油状体。

1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.48 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.81 (s, 1H),7.68 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.38 (t, J = 7.9 Hz, 1H),7.32 (s, 1H), 7.29 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 6.78 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 3.96 (d, J= 13.8 Hz, 1H), 3.58 – 3.53 (m, 1H), 3.41 (t, J = 11.6 Hz, 2H), 2.84 – 2.78(m, 1H), 2.15 (s, 3H), 1.92 – 1.84 (m, 2H), 1.74 (d, J = 13.0 Hz, 2H), 1.13 –1.09 (m, 2H), 1.03 – 0.99 (m, 2H)。

MS(m/z):419.2[M+H]。HPLC:99.62%。

实施例2（LEC002-084）

实施例2的化合物可参照实施例1的制备流程得到，无色油状体。

1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.48 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.72 (d, J = 14.0Hz, 1H), 7.67 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.21 (s, 1H), 7.02 (t, J =8.5 Hz, 1H), 6.75 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 3.99 – 3.94 (m, 2H), 3.93 (s, 3H),3.66 – 3.51 (m, 1H), 3.41 (t, J = 11.8 Hz, 2H), 2.84 – 2.78 (m, 1H), 1.93 –1.85 (m, 2H), 1.74 (d, J = 11.7 Hz, 2H), 1.15 – 1.09 (m, 2H), 1.04 – 1.00 (m,2H)。

MS(m/z):410.2[M+H]。HPLC:98.92%。

实施例3（LEC002-085）

实施例3的化合物可参照实施例1的制备流程得到，无色油状体。

1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.49 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 8.41 (d, J = 5.1Hz, 1H), 8.03 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.88 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.54 – 7.44 (m,1H), 7.35 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.32 (s, 1H), 6.79 (dd, J = 5.6, 2.2 Hz, 1H),6.70 (s, 1H), 6.26 (s, 1H), 4.00 – 3.89 (m, 2H), 3.57 – 3.53 (m, 1H), 3.44 –3.34 (m, 2H), 2.83 – 2.76 (m, 1H), 1.93 – 1.79 (m, 2H), 1.77 – 1.64 (m, 2H),1.14 – 1.06 (m, 2H), 1.02 – 0.98 (m, 2H)。

MS(m/z):427.19[M+Na]。HPLC:99.22%。

实施例4（LEC002-086）

实施例4的化合物可参照实施例1的制备流程得到，无色油状体。

1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.53 (s, 1H), 8.00 (d, J = 7.1 Hz, 2H),7.90 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 7.33 (s, 2H), 6.83 (d, J = 14.2 Hz, 1H), 6.32 (s,1H), 6.09 (s, 1H), 3.95 (d, J = 11.1 Hz, 2H), 3.52 (d, J = 38.5 Hz, 1H), 3.40(t, J = 11.8 Hz, 2H), 2.81 (t, J = 10.1 Hz, 1H), 1.92 – 1.84 (m, 2H), 1.75 –1.66 (m, 2H), 1.24 (s, 2H), 1.11 (s, 2H)。

MS(m/z):405.2[M+H]。HPLC:99.35%。

实施例5（LEC002-088）

实施例5可参照实施例1的制备流程得到，无色油状体。

1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.53 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 7.99 – 7.90 (m,2H), 7.49 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.31 (s, 1H), 7.28(d, J = 2.2 Hz, 1H), 6.80 (dd, J = 5.6, 2.2 Hz, 1H), 3.95 (d, J = 11.3 Hz,2H), 3.58 – 3.54 (m, 1H), 3.40 (t, J = 11.7 Hz, 2H), 3.12 (s, 3H), 3.00 (s,3H), 2.83 – 2.78 (m, 1H), 1.90 – 1.83 (m, 2H), 1.73 (d, J = 13.0 Hz, 2H),1.14 – 1.06 (m, 2H), 1.02 – 0.98 (m, 2H)。

MS(m/z):433.3[M+H]。HPLC:96.71%。

实施例6（LEC002-089）

实施例6的化合物可参照实施例1的制备流程得到，无色油状体。

1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.57 (s, 1H), 8.53 (d, J = 5.6 Hz, 1H),8.16 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.08 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.54 (t, J = 7.8 Hz, 1H),7.36 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 6.80 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 3.97 (d, J = 1.9 Hz,2H), 3.94 (s, 3H), 3.59 – 3.55 (m, 1H), 3.41 (t, J = 11.7 Hz, 2H), 2.84 –2.97 (m, 1H), 1.91 – 1.84 (m, 2H), 1.75 (d, J = 13.0 Hz, 2H), 1.14 – 1.10 (m,2H), 1.04 – 1.00 (m, 2H)。

MS(m/z):442.2[M+Na]。HPLC:95.46%。

实施例7（LEC002-092）

实施例7的化合物可参照实施例1的制备流程得到，白色固体。

MS(m/z):388.2[M+H]。HPLC:98.03%。

实施例8（LEC002-106）

实施例8的化合物可参照实施例1的制备流程得到，无色油状体。

MS(m/z):406.24[M+H]。HPLC:98.41%。

实施例9（LEC002-114）

实施例9的化合物可参照实施例1的制备流程得到，无色油状体。

1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.55 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 8.05 (d, J = 8.2Hz, 2H), 7.72 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.33 (s, 2H), 6.84 (dd, J = 5.7, 2.3 Hz,1H), 3.98 – 3.96 (m, 2H), 3.60 – 3.55 (m, 1H), 3.41 (t, J = 10.8 Hz, 2H),2.89 – 2.76 (m, 1H), 1.94 – 1.85 (m, 2H), 1.75 (d, J = 13.1 Hz, 2H), 1.16 –1.08 (m, 2H), 1.07 – 0.98 (m, 2H)。

MS(m/z):430.20[M+H]。HPLC:96.94%。

实施例10（LEC002-115）

实施例10的化合物可参照实施例1的制备流程得到，无色油状体。

MS(m/z):431.22[M+H]。HPLC:96.33%。

实施例11（LEC002-117）

实施例11的化合物可参照实施例1的制备流程得到，无色油状体。

MS(m/z):381.21[M+H]。HPLC:94.48%。

实施例12（LEC002-122）

实施例12的化合物可参照实施例1的制备流程得到，白色固体。

1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.57 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 8.32 (d, J = 5.3Hz, 1H), 7.72 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.37 (d, J = 2.3 Hz, 1H),7.34 (s, 1H), 6.90 (dd, J = 5.6, 2.4 Hz, 1H), 3.97 (d, J = 14.0 Hz, 2H), 3.60– 3.56 (m, 1H), 3.41 (t, J = 10.7 Hz, 2H), 2.84 – 2.78 (m, 1H), 1.95 – 1.82(m, 2H), 1.79 – 1.68 (m, 2H), 1.19 – 1.10 (m, 2H), 1.06 – 1.02 (m, 2H)。

MS(m/z):381.17[M+H]。HPLC:98.00%。

实施例13（LEC002-146）

实施例13的化合物可参照实施例1的制备流程得到，无色油状体。

MS(m/z):442.2[M+Na]。HPLC:94.04%。

实施例14（LEC002-150）

实施例14的化合物可参照实施例1的制备流程得到，无色油状体。

MS(m/z):397.2[M+H]。HPLC:93.32%。

实施例15（LEC002-155）

往烧瓶中加入实施例14(0.10g, 0.25mmol)，1-氨基-2-甲基-2-丙醇(0.05g,0.55mmol)，醋酸钯(0.03g, 0.012mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(0.014g,0.025mmol)，碳酸铯(0.24g, 0.75mmol)和1.4-二氧六环(15mL)。加毕，反应物在微波条件下，150℃搅拌反应30min，然后冷却至室温，减压浓缩除去溶剂，剩余物用硅胶色谱柱纯化（洗脱剂：乙醇/二氯甲烷＝1/10），得到目标产物实施例15(0.05g, 收率：44.63%)，无色油状体。

MS(m/z):450.24[M+H]。HPLC:93.50%。

实施例16（LEC002-160-2）

实施例16的化合物可参照实施例1的制备流程得到，无色油状体。

1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.49 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 8.35 (s, 1H),8.03 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.92 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.63 (t, J = 7.5 Hz, 1H),7.56 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.37 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 7.16 (t,J = 7.5 Hz, 1H), 7.08 – 7.02 (m, 1H), 6.88 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 6.33 (s, 1H),5.74 (s, 1H), 3.76 – 3.68 (m, 1H), 1.31 – 1.26 (m, 2H), 1.14 – 1.10 (m, 2H)。

MS(m/z):437.12[M+Na]。HPLC:98.84%。

实施例17（LEC002-161）

实施例17的化合物可参照实施例1的制备流程得到，白色固体。

1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.42 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 12.6Hz, 1H), 7.60 (dd, J = 13.5, 7.8 Hz, 2H), 7.50 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.21(s, 1H), 7.13 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.05 – 6.99 (m, 2H), 6.79 (d, J = 5.4 Hz,1H), 3.93 (s, 3H), 3.72 – 3.68 (m, 1H), 1.26 – 1.21 (m, 2H), 1.11 – 1.07 (m,2H)。

MS(m/z):420.14[M+H]。HPLC:99.62%。

实施例18（LEC002-187）

实施例18的化合物可参照实施例1的制备流程得到，白色固体。

1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.51 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 7.97 (d, J = 8.3Hz, 2H), 7.89 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.46 (s, 1H), 7.36 (dd, J = 10.1, 2.1 Hz,2H), 7.30 (dd, J = 8.4, 1.9 Hz, 1H), 6.87 (dd, J = 5.7, 2.3 Hz, 1H), 6.80 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 6.21 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.82 (s, 3H), 3.68– 3.64 (m, 1H), 1.22 – 1.21 (m, 2H), 1.11 – 1.06 (m, 2H)。

MS(m/z):479.22[M+Na]。HPLC:98.83%。

实施例19（LEC002-195）

实施例19的化合物可参照实施例1的制备流程得到，白色固体。

MS(m/z):437.15[M+Na]。HPLC:93.20%。

实施例20（LEC002-196）

实施例20的化合物可参照实施例1的制备流程得到，无色油状体。

MS(m/z):407.09[M+H]。HPLC:94.95%。

实施例21（LEC015-004）

实施例21的化合物可参照实施例15的制备流程得到，白色固体。

1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.49 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 8.37 (d, J = 5.3Hz, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.61 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.52 (s, 1H),7.35 (s, 1H), 7.33 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 7.29 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 7.23 (s,1H), 7.14 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.07 – 6.99 (m, 1H), 6.91 (d, J = 5.2 Hz, 1H),3.83 – 3.57 (m, 5H), 2.56 – 2.47 (m, 4H), 2.35 (s, 3H), 1.27 – 1.21 (m, 2H),1.15 – 1.04 (m, 2H)。

MS(m/z):564.23[M+H]。HPLC:98.93%。

实施例22（LEC015-014）

实施例22的化合物可参照实施例15的制备流程得到，无色油状体。

1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.83 (s, 2H), 8.51 (d, J = 5.7 Hz, 1H),8.36 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 7.68 (dd, J = 5.3, 1.5 Hz, 1H), 7.63 (td, J = 7.5,1.7 Hz, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.50 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.30 – 7.27 (m, 1H),7.16 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.08 – 7.01 (m, 1H), 6.90 (dd, J = 5.7, 2.4 Hz,1H), 6.56 – 6.48 (m, 1H), 6.34 (dd, J = 16.9, 10.2 Hz, 1H), 5.84 (d, J = 11.1Hz, 1H), 3.75 – 3.71 (m, 1H), 1.29 – 1.27 (m, 2H), 1.14 – 1.07 (m, 2H)。

MS(m/z):442.18[M+H]。HPLC:97.44%。

生物学评价测试：

测试实施例1~22的化合物对TGF-βR1(ALK5)激酶活性的抑制作用。

采用以下实验方法测定化合物对TGF-βR1(ALK5)激酶活性的抑制作用：

通过LanthaScreen™Eu Kinase Binding Assay方法检测系列化合物对ALK5激酶的抑制活性，具体测试流程为：将化合物用DMSO配制成10mM的储存液，1:3梯度稀释，装载于384-PP（购自LABCYTE公司，P-05525）内备用；准备1X Kinase Buffer A稀释下列反应试剂；用微量移液***（购自LABCYTE公司，型号Echo520）在反应板（购自Perkin Elmer公司，型号ProxiPlate-384 Plus）中加入15nL化合物；每孔加入5μL ALK5 solution（购自ThermoScientific Forma公司，PV5837）；每孔再加入5μL Eu-Anti-GST Antibody solution（购自Thermo Scientific Forma公司，PV5594），振荡混匀15min；每孔加入5μL Kinase Tracer178 solution（购自Thermo Scientific Forma，PV5593），振荡混匀。总反应体系包含50mMTris(pH7.5)，150mM NaCl，0.5mM EDTA，0.02%Triton®X–100，2mM DTT，50%Glycerol，50mMHEPES(pH7.5)，10mM MgCl2，1mM EGTA，0.01%Brij-35，5nM ALK5，2nM Eu-Anti-GSTAntibody，20nM Kinase Tracer 178，0.1%DMSO。将反应板置于30℃孵育60min。使用多标记微孔板检测仪（购自PE公司，型号Envision MultilabelReader）进行测试。使用GraphPadPrism 5 Demo软件上进行数据分析。使用非线性回归模型计算相关化合物IC₅₀值，重复三次，取均值。

按照上述方法测得的实施例1~22的化合物对TGF-βR1(ALK5)激酶活性的IC₅₀值见下表1。

表1.化合物对ALK5激酶活性抑制的IC₅₀值

由表1可知，本发明的化合物对TGF-βR1(ALK5)激酶活性有明显抑制作用，其中以实施例1、2、4、13、14、16、17、19、20和21的化合物抑制作用更佳。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。