CN110944720A - 红毛丹提取物的新的美容化妆用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及植物红毛丹提取物通过维持和/或增加细胞活力和/或ATP合成和/或线粒体活性和/或通过减少细胞衰老和/或细胞损伤来减少污染对皮肤和/或皮肤附属物，有利的是毛发的有害影响的美容化妆用途。红毛丹提取物增加皮肤颜色的光泽。

Description

红毛丹提取物的新的美容化妆用途
本发明涉及红毛丹(Nephelium lappaceum)植物提取物的美容化妆用途。
在美容化妆和皮肤病学领域，环境对人皮肤的影响是重要的问题。除了UV对皮肤的有害影响外，污染物对皮肤和毛发也有负面影响。已知的污染物包括废气(已成为大城市的主要问题)、重金属和细颗粒以及多环芳烃，例如苯并芘或苯并蒽。
在皮肤中，这些污染物将特别导致颗粒沉积在表皮表面，并且除其它后果外，还会导致暗沉皮肤颜色。这些污染物还会使毛发更脆弱，并且导致脱发。当它们沉积在头皮表面时，它们也可能引起瘙痒和刺激。美容化妆领域中现有的活性成分可以对抗污染。但是在该领域中对替代成分的需求正在不断增加。
植物红毛丹，也称作红毛丹树，是在东南亚，特别是在马来西亚和印度尼西亚发现的树。它是一种高10至20米的树，可产生大量果实。这种果实以其感官特性而闻名，并且含有糖、维生素C和铁。干燥的根或叶的煎剂用于抗发热。
红毛丹植物在美容化妆组合物中的用途是众所周知的。因此，申请JP2002145730描述了具有抗氧化作用，使皮肤变白以及具有保湿性质的种子提取物。然而，该申请没有特别描述或公开所述植物的提取物减少污染的有害影响的用途。
此外，Thitilertdecha和Rakariyatham(Scientia Horticulturae,129,247-252,2011)描述了红毛丹植物的几个部分，其含有鞣花单宁并且具有抗氧化活性。然而，该文献教导了优选使用果皮而不是所述植物的其它部分，因为其具有更好的抗自由基活性。相同的教导源自Sekar等人(International Journal of Pharmaceutical Sciences andResearch,8(3),1056-1065,2017)，其显示，当该植物用作抗氧化剂时，优选使用红毛丹的果皮。此外，Sekar等人没有公开红毛丹提取物可以用于对抗污染的有害影响，即减少污染物对皮肤和/或皮肤附属物的不美观和/或不舒服的作用。
最后，申请EP3069763公开了用于抗氧化目的的美容化妆组合物，其包含多酚抗氧化剂。此外，该申请没有公开任何红毛丹提取物，也没有公开Thitilertdecha和Rakariyatham中公开的任何酚化合物。
申请CN105534812公开了对皮肤具有抗炎、抗衰老和保湿性质的组合物，所述组合物包含几种植物提取物的混合物，包括红毛丹树。但是，没有公开红毛丹树植物的部分。
申请WO 201118278公开了红毛丹树籽油在美容化妆组合物中用于补水目的的用途，并且更通常用于角蛋白材料、特别是毛发的护理。但是，该申请没有公开红毛丹提取物对抗污染对皮肤和/或毛发的有害影响的用途。
就本申请人所知，没有现有技术描述或建议使用红毛丹提取物来减少污染对皮肤和/或皮肤附属物，优选毛发的有害影响。
根据本发明的提取物是红毛丹提取物。提取物的原产国是越南。申请人令人惊奇地发现，这种提取物具有减少污染引起的有害影响的功效。
根据本发明的提取物的优点在于其对于预防和/或抵抗污染对皮肤和毛发的影响是有效的。这种提取物的另一个优点是，它既可以通过减少皮肤和毛发表面的附着来减少污染的影响，又可以通过刺激多种有助于防止这些污染物的靶标来增加细胞新陈代谢，特别是毛发的细胞新陈代谢。
它是化学稳定的提取物，不具有致敏特性，并且可以在工业规模上容易生产。最后，它是用于皮肤和/或皮肤附属物，有利的是毛发的增强活力和去污活性成分。
它可以增加皮肤和/或皮肤附属物，有利的是毛发的颜色的光泽。
因此，本发明的第一个目的涉及红毛丹植物提取物减少污染对皮肤和/或皮肤附属物，有利的是毛发的有害影响的美容化妆用途。
本文的术语“美容化妆用途”旨在表示非药物用途，因此其不用于治疗目的，因为根据本发明的提取物旨在应用于健康的、非病理性皮肤的全部或部分区域。表述“健康的皮肤的区域”旨在表示应用根据本发明的提取物的皮肤的区域，并且该区域被皮肤科医生称为“非病理性”的区域，即没有感染、疤痕、皮肤疾病、炎症或障碍(例如念珠菌病、脓疱病、银屑病、湿疹、痤疮或皮炎)或伤口或损伤和/或其它皮肤病的区域。
因此，皮肤包括整个身体和/或面部，包括头皮。
本文中的“皮肤附属物”旨在表示体毛、睫毛和头发，并且优选头发。
根据本发明的提取物的美容化妆用途可以是口服或局部的，优选局部的。当提取物口服施用时，其形式为膳食补充剂、粉末、凝胶胶囊剂、胶囊剂或凝胶剂。因此，它可以包含在营养组合物中。
在本发明的一个实施方案中，根据本发明的提取物的美容化妆用途包括将提取物或包含该提取物的美容化妆组合物局部应用于人身体和/或面部的全部或部分，选自腿、足、腋下、手、大腿、胃、胸、颈、臂、躯干、背和面部，有利的是面部，非常有利的是头皮和/或皮肤附属物，有利的是毛发。
根据本发明的提取物是局部可接受的提取物，术语“局部可接受的”是指不刺激皮肤或毛发，无毒并且不会引起过敏反应的提取物。“局部应用”旨在表示在皮肤和/或皮肤附属物，优选毛发的表面上直接应用或喷雾提取物或含有该提取物的美容化妆组合物。
在本发明的一个实施方案中，根据本发明的提取物用于通过维持和/或增加细胞活力和/或ATP合成和/或线粒体活性和/或通过减少细胞损伤和/或细胞衰老，有利地通过增加细胞活力和/或ATP合成和/或线粒体活性，非常有利地通过增加细胞活力和/或ATP合成来减少污染的有害影响。
“减少污染的有害影响”旨在表示减少污染物对皮肤，有利的是头皮，和/或皮肤附属物，有利的是毛发的不美观和/或不舒适的影响。这些作用不同于抗氧化活性。因此，对于本发明的目的，红毛丹提取物不用作抗氧化剂和/或抗自由基。
“不美观和/或不舒适的影响”在本文中旨在表示皮肤和/或皮肤附属物的刺激和/或发红和/或暗沉和/或失去颜色光泽和/或敏感的感觉，不需要治疗性处理，特别不是皮肤病学治疗。更优选地，它们是皮肤，更有利的是头皮和/或皮肤附属物的刺激和/或发红的感觉；和/或暗沉颜色和/或皮肤颜色失去光泽的感觉；和/或皮肤，更有利的是头皮和/或皮肤附属物敏感。
“污染物”旨在表示废气和/或香烟烟雾和/或灰尘和/或污染物，特别是煤颗粒、二氧化碳、一氧化碳、二氧化硫、一氧化氮、臭氧、重金属例如镉、汞、镍、铅、铬、钡、铜、钛，选自PM 2.5和PM 10的细颗粒，以及多环芳烃例如苯并芘或苯并蒽。
术语“增加ATP合成”在本文中精确地旨在表示与不存在根据本发明的提取物下测得的ATP水平相比，在存在根据本发明的提取物下，在非病理性皮肤的成纤维细胞中ATP合成增加至少2％，优选至少5％，有利地至少15％，优选至少25％，更优选至少40％。在本发明的一个特别有利的实施方案中，这种增加是在根据实施例1a)制备的种子提取物的存在下，更有利的是通过在例如实施例2a)中所述的条件下的酶促方法测量。
在本发明的可选择的实施方案中，“增加ATP合成”旨在表示与不存在根据本发明的提取物下测得的ATP水平相比，在存在根据本发明的提取物下，在非病理性毛囊***成纤维细胞中ATP合成增加至少15％，优选至少25％，更优选至少40％。在本发明的一个特别有利的实施方案中，这种增加是在根据实施例1a)制备的种子提取物的存在下，更有利的是通过在例如实施例2b)中所述的条件下的酶促方法测量。
线粒体活性的增加旨在表示与不存在根据本发明的提取物下测得的线粒体活性水平相比，在存在根据本发明的提取物下，有利的是在正常，即非病理性毛发***成纤维细胞中，更有利的是存在根据实施例1a)制备的种子提取物下，所述活性增加至少15％，优选至少30％，更优选至少40％。优选的是，所述活性通过在实施例3中所述的条件下在琥珀酸脱氢酶存在下还原MTT(3-[4,5-二甲基噻唑-2-基]-2,5-二苯基四唑
Figure BDA0002374482850000041
溴化物)后的光密度来测量。
为了本发明的目的，“减少细胞衰老”旨在表示与在不存在根据本发明的提取物下在所述成纤维细胞中测量的自发荧光相比，在存在根据本发明的提取物下，成纤维细胞自发荧光减少至少10％，优选至少20％。有利的是，在毛囊***成纤维细胞，更有利的是新***模型中，更优选在根据实施例1a)制备的种子提取物存在下，测量自发荧光。非常有利的是，在实施例4的条件下，通过流式细胞术测量自发荧光。
为了本发明的目的，“增加细胞活力”旨在表示与不存在根据本发明的提取物下检测到的水平相比，在存在根据本发明的提取物下，细胞活力增加为微囊细胞活力的至少5％，有利的是至少10％，更有利的是至少20％。优选的是，增加是在根据实施例1a)制备的种子提取物存在下，更有利的是在通过实施例6a)中所述的条件下的比色法测量。
为了本发明的目的，“减少细胞损伤”旨在表示与不存在根据本发明的提取物下测得的细胞裂解水平相比，在存在根据本发明的提取物下，微囊细胞裂解，有利的是毛囊的微囊细胞裂解减少至少5％，优选至少10％，更优选至少40％。在本发明的一个有利的实施方案中，这是在根据实施例1a)制备的种子提取物存在下测得的细胞损伤的减少。更有利的是，该减少通过在实施例6b)中所述的条件下，在乳酸脱氢酶存在下的比色法测量。因此，根据本发明，减少细胞损伤并不意味着减少细胞氧化，因为根据本发明的红毛丹提取物不用作抗氧化剂和/或抗自由基剂。
可选择的是，“减少细胞损伤”是指与不存在根据本发明的提取物下测得的所述降解相比，在存在根据本发明的提取物下，并且优选在存在根据实施例1a)制备的种子提取物下，通过减少毛发纤维的一种或多种组分降解至少2％，有利的是至少5％，更有利的是至少10％，非常有利的是至少15％来减少对毛发纤维的损伤，所述组分选自角蛋白、维生素、铁、锌、氨基酸，并且有利的是色氨酸。有利的是，该减少通过评估毛发纤维，优选脱色的毛发纤维的色氨酸含量，更优选通过显微镜和图像分析或通过荧光光谱法或荧光法测量荧光来测量。
在本发明的一个可选择的实施方案中，提取物通过在皮肤和/或皮肤附属物，有利的是毛发中减少污染物，并且优选细颗粒和/或多环芳烃和/或煤颗粒和/或灰尘，优选多环芳烃和/或细颗粒的粘附和/或渗透，优选粘附，来减少污染的有害影响。
因此，与不存在根据本发明的提取物下测得的污染物粘附的百分比相比，在存在根据本发明的提取物下，当所述百分比减少至少2％，优选至少5％，更优选至少10％时，提取物将以减少污染物的粘附的有效量存在。在一个特别有利的实施方案中，提取物将是种子提取物，优选在实施例1a)中所述的条件下制备的种子提取物。可选择的是，它将是根据实施例1h)制备的种子提取物。
污染物可以沉积在毛发束上，并且它们的作用可以例如通过使用所谓的污染室(释放出废气和颗粒)来测量。在本发明的一个有利的实施方案中，毛发束将暴露于污染物，并且其作用将通过显微镜和图像分析来测量。
在本发明的一个特别有利的实施方案中，在红毛丹种子提取物，优选根据实施例1a)的提取物的存在下，污染物粘附的减少将通过测量先前用实施例1a)的种子提取物处理的在几束毛发纤维上的残留污染物颗粒的密度(μm)来评估。
在本发明的一个可选择的实施方案中，残留污染物颗粒的密度(μm)将在脱色的毛发束纤维(因此其对污染物更敏感)上测量，先前用本发明的种子提取物，优选根据实施例1a)的种子处理，或先前未处理。
在本发明的一个可选择的实施方案中，根据本发明的提取物通过减少在污染物存在下增加的细胞自发荧光来减少污染的有害影响，所述污染物例如为本发明的目的而定义的，有利的是苯并芘。因此，有利的是，当与苯并芘存在下检测的自发荧光水平相比，减少至少35％，优选至少45％，非常优选至少70％时，本发明的提取物是减少在苯并芘存在下增加的细胞自发荧光的有效量。更优选的是，自发荧光将在真皮***成纤维细胞中测量，有利的是在种子提取物存在下，非常有利的是在实施例1a)中所述的条件下制备的种子提取物存在下，例如实施例5中描述的。
在本发明的另一个可选择的实施方案中，提取物通过减少在污染物(例如为本发明的目的而定义的，有利的是苯并芘)存在下增加的细胞粒度来减少污染的有害影响。优选的是，当与苯并芘存在下测得的细胞粒度水平相比，该减少为至少30％，优选至少35％，更优选至少40％时，本发明的提取物为减少在苯并芘存在下增加的细胞粒度的有效量。有利的是，该粒度在真皮***成纤维细胞中测定，有利的是在种子提取物存在下，非常有利的是在实施例1a)中所述的条件下制备的种子提取物存在下，例如在实施例5中描述的。
在本发明的另一个可选择的实施方案中，提取物通过增加在污染物，有利的是苯并芘存在下减少的细胞体积来减少污染的有害影响。因此，当与在苯并芘存在下检测到的细胞体积相比，该增加为至少1％，优选至少2％时，本发明的提取物是增加在苯并芘存在下减少的细胞体积的有效量。有利的是，该体积在真皮***成纤维细胞中测量，有利的是在种子提取物存在下，非常有利的是在实施例1a)中所述的条件下制备的种子提取物存在下。
在本发明的另一个可选择的实施方案中，提取物通过减少在污染物(例如为本发明的目的而定义的，有利的是苯并芘)存在下增加的细胞凋亡来减少的污染的有害影响。优选的是，当与在苯并芘存在下检测到的细胞凋亡水平相比，该减少为至少0.5％，优选至少1％时，本发明的提取物为减少在苯并芘存在下增加的细胞凋亡的有效量。有利的是，该凋亡在真皮***成纤维细胞中测量，有利的是在种子提取物存在下，非常有利的是在实施例1a)中所述的条件下制备的种子提取物存在下。
在本发明的另一个可选择的实施方案中，与不存在根据本发明的提取物测得的总蛋白质含量相比，所述提取物通过增加至少2％，优选至少5％，更优选至少10％，并且非常优选至少15％总蛋白质含量来减少污染对皮肤的有害影响，所述总蛋白质含量是在存在重金属，有利的是汞和/或镉下，并且在根据本发明的提取物存在下培养的皮肤成纤维细胞中测量。优选的是，在实施例1a)中所述的条件下制备种子提取物。
有利的是，通过Bradford方法测量总蛋白质。
在本发明的另一个可选择的实施方案中，提取物通过减少热休克蛋白标志物，有利的是HSP27(其在例如根据本发明所定义的污染物并且有利的是香烟烟雾存在下表达增加)的表达来减少污染对皮肤，有利的是头皮，和/或皮肤附属物，有利地是毛发的有害影响。
因此，根据本发明的提取物用作皮肤和/或皮肤附属物，优选毛发的活力增强剂和/或去污剂，优选去污剂。根据本发明的提取物可以增加皮肤附属物，有利的是毛发的颜色的光泽和/或颜色的均匀性和/或防止皮肤和/或皮肤附属物，有利的是毛发的颜色的光泽和/或均匀性的丧失。
特别的是，其将用作皮肤，有利的是头皮的舒缓剂。
在一个特别有利的实施方案中，提取物通过增加ATP合成用于增加皮肤和/或皮肤附属物，有利的是毛发的颜色的光泽，和/或颜色的均匀性和/或防止颜色的光泽和/或均匀性的丧失。
可以在体内测量皮肤和/或皮肤附属物，优选毛发的颜色的光泽和/或颜色的均匀性的增加。因此，在本发明的一个实施方案中，术语“增加皮肤肤色的光泽”旨在表示与不包含提取物的安慰剂霜剂相比，在应用包含根据本发明的提取物的霜剂后，皮肤的暗沉肤色和/或泛黄减少至少1％，优选至少2％，更优选至少4％。有利的是，在15天、28天和/或56天后，更有利地在女性人群的一半面部上测量颜色光泽的增加。在本发明的一个有利的实施方案中，通过测量皮肤的发光，有利地通过测量参数L*来评估颜色的光泽的增加。所述参数可以通过选自比色法或图像分析的几种技术来测量。有利的是，参数L*将通过比色法测量。
在本发明的一个可选择的实施方案中，通过临床评估来测量颜色的光泽。可以使用
Figure BDA0002374482850000081
型的仪器或通过图像分析进行。有利的是，将通过图像分析来进行。
根据本发明的提取物可以是红毛丹植物的全部或部分，选自树皮、叶、枝、茎、整个果实、果肉、种子、果皮和根。优选的是，提取物选自叶、果肉、种子和/或果皮。非常优选的是，它是红毛丹植物的种子提取物。
为了本发明的目的，“种子提取物”旨在表示包含种子，有利的是仅包含种子的红毛丹植物的全部或部分的任何提取物。因此，在本发明的一个优选实施方案中，种子提取物不包括果皮或果肉。因此，种子提取物不是水果提取物。本文中的“果皮”旨在表示水果的外层。提取物可以通过本领域技术人员已知的多种提取方法获得，所述方法选自浸渍，热煎熬，通过研磨(包括超声研磨)，使用混合器，或者该提取物可以通过在亚临界或超临界条件(二氧化碳)下在水中提取而获得。优选地，提取通过浸渍进行。
提取可以使用干物质或新鲜物质，有利的是干物质，以相对于物质和提取溶剂的总重量的0.1％-20％重量，有利的是1％-20％重量，非常有利的是5％-15％重量，更有利的是10％-15％重量，甚至更有利的是10％重量的量进行。
提取可以在4℃至300℃的温度范围进行。在本发明的一个优选的实施方案中，提取将在4℃至25℃的温度进行，更优选在4℃至20℃的温度，更有利地在室温，即约20℃进行。
在本发明的一个可选择的实施方案中，提取将在100℃至300℃的温度范围，有利的是120℃至250℃，更有利的是120℃，在亚临界条件下在水中进行。提取可以在单一给定温度或连续升高的温度进行。在本发明的一个有利的实施方案中，提取将在120℃的单一温度进行。在可选择的实施方案中，根据100℃-200℃例如120℃、140℃、然后160℃，或者110℃、130℃，然后150℃，再或者120℃、145℃、然后170℃的三种递增温度梯度进行。
术语在“亚临界条件”下提取旨在表示在水存在下、在高于100℃的温度和低于221巴的压力的条件下提取，使得水保持液态，但粘度和表面张力低于在室温水的粘度和表面张力，增加水的介电常数。
因此，提取压力将包括在150巴至250巴、优选在200巴至221巴，有利的是在压力提取高压釜中。
在本发明的另一个实施方案中，提取物可以通过在超临界条件(CO2)下在共溶剂存在下提取而获得。有利的是，共溶剂将是乙醇。
在另一个可选择的实施方案中，提取将在碳酸C6-C16二烷基酯溶剂的存在下，例如在申请FR 1757173中描述的进行，该文献引入本文作为参考。
提取可以进行30分钟至24小时，优选30分钟至12小时，更优选1小时至5小时，并且更有利的是1小时至2小时。非常有利的是，提取将进行2小时。
根据本发明的提取物可以通过在溶剂或溶剂混合物中，优选在质子极性溶剂，并且有利的是在水、醇、二醇、多元醇、水/醇、水/二醇或水/多元醇混合物(例如与乙醇、甘油和/或丁二醇和/或其它二醇(例如木糖醇和/或丙二醇等)混合的水)中，比例为99/1至1/99(w/w)，有利的是在作为唯一溶剂的水中提取而获得。
特别的是，提取物通过水性提取获得。对于本发明的目的，“通过水性提取获得的提取物”旨在表示相对于水性溶液、甚至更有利的是不含二醇的水性溶液、并且特别是不含醇的水性溶液、更特别是仅含水的水性溶液的总重量，通过用含有大于60％重量、有利的是至少70％重量、特别是至少80％重量、更特别是至少90％重量、特别是至少95％重量的水的水性溶液提取而获得的任何提取物。
在一个特别的实施方案中，提取物是在作为唯一溶剂的水中制备的红毛丹种子提取物。
在可选择的实施方案中，提取物是红毛丹种子油提取物。在这种情况下，提取物可以特别地通过在超临界条件(CO2)下提取或通过在碳酸C6-C16二烷基酯溶剂中提取或通过在庚烷中提取而获得。
在本发明的另一个可选择的实施方案中，提取可以在非离子表面活性剂的存在下进行，所述非离子表面活性剂优选选自：BASF的在商品名
Figure BDA0002374482850000101
1200UP下出售的月桂基葡糖苷，或者辛基/癸基葡糖苷(
Figure BDA0002374482850000102
810UP)，优选辛基/癸基葡糖苷(
Figure BDA0002374482850000103
810UP)。相对于提取物的总重量，非离子表面活性剂的按重量计浓度可以为0.5％至5％重量、有利的是0.5％至1％重量、更有利的是将为1％重量。
因此，在本发明的第一个实施方案中，通过在20℃的温度将相对于溶剂和材料的总重量的10重量％的量的研磨种子浸渍2小时来获得提取物。在实施例1a)中所述的条件下，将获得的粗提取物离心，倾析，然后过滤。
在本发明的第二个实施方案中，通过在20℃的温度将相对于溶剂和材料的总重量的5％重量的量的研磨种子浸渍在作为溶剂的水中24小时来获得提取物。在实施例1b)中所述的条件下，将粗提取物离心，倾析，然后过滤。
在本发明的第三个实施方案中，通过在20℃的温度将20重量％的量的研磨种子在作为溶剂的水中浸渍2小时来获得提取物。然后在实施例1c)中所述的条件下，将提取物离心，倾析，过滤，然后喷雾干燥，在麦芽糖糊精存在下，麦芽糖糊精最终量为相对于最终提取物的总重量的80重量％。
在本发明的第四个实施方案中，通过在80℃的温度将相对于材料和溶剂的总重量的10重量％的量的研磨种子在水:乙醇混合物(80:20；v/v)中浸渍1小时来获得提取物。然后在实施例1d)中所述的条件下，将提取物离心，倾析，过滤，并且喷雾干燥，在麦芽糖糊精存在下，麦芽糖糊精最终量为相对于最终提取物的总重量的80重量％。
在第五个实施方案中，通过在20℃的温度将相对于果皮和作为唯一溶剂的水的总重量的10％重量的量红毛丹干果皮浸渍1小时来获得提取物。将获得的提取物倾析并且离心，然后过滤上清液。在实施例1e)中所述的条件下，提取物为粉末形式。
在第六个实施方案中，通过在80℃的温度以相对于果肉和水的总重量的10％重量的量的红毛丹果肉开始在作为唯一溶剂的水中浸渍1小时进行提取。将粗提取物倾析，离心，然后过滤，在实施例1f)中所述的条件下。
在第七个实施方案中，在80℃的温度使用相对于叶和水的总重量的10％重量的量的红毛丹干叶进行提取1小时。将粗提取物倾析，离心，然后过滤，在实施例1g)中所述的条件下。
在第八个实施方案中，在实施例1h)中所述的超临界CO2条件下，使用10％重量的量的干红毛丹种子进行提取。
在第九个实施方案中，在20℃的温度使用相对于果皮和作为唯一溶剂的水的总重量的5％重量的量的干果皮进行提取1小时。将获得的提取物倾析并且离心，然后过滤上清液，在实施例1i)中所述的条件下。
有利的是，根据本发明，提取物将在0.45μm的截止阈值过滤。另外的脱色和/或除臭步骤可以在提取的任何阶段以及根据本领域技术人员已知的技术对提取物进行。特别的是，提取物可以用活性炭脱色。
然后在实施例1a)和1b)、1d)至1i)中所述的条件下获得的提取物可以通过蒸发溶剂浓缩，或者例如通过冷冻干燥或在麦芽糖糊精存在下通过喷雾干燥来干燥。然后提取物将是粉末形式。
因此，在本发明的一个特别的实施方案中，在相对于所获得的粉末的总重量的20％至90％、优选40％至80％、更优选70％至80％重量浓度的麦芽糖糊精存在下，将根据实施例1a)和1b)、1d)至1i)所获得的提取物进行喷雾干燥。
因此，在本发明的一个特别有利的实施方案中，提取物的使用通过增加细胞活力和/或ATP合成和/或线粒体活性和/或通过减少细胞损伤和/或细胞衰老，更优选通过增加ATP合成，来减少污染对皮肤，有利地对头皮和/或皮肤附属物，有利地对毛发的有害影响。优选在这种情况下，提取物为叶、种子、果皮和/或果肉提取物，更优选种子提取物。
根据本发明的提取物可以以美容化妆活性成分的形式单独使用，或者以包含在美容化妆组合物中的形式使用。
当它以美容化妆成分的形式单独使用时，优选将其溶于含有甘油的水性溶液中，相对于包含提取物的水性溶液的总重量，有利地以60％-90％，更有利的是70％-85％，非常有利的是80％重量的浓度存在。然后，提取物是液体形式。
在本发明的一个可选择的实施方案中，将提取物溶解和/或稀释在溶剂中，特别是极性溶剂，例如水、醇、多元醇、二醇(例如戊二醇和/或丁二醇和/或己二醇和/或辛二醇(caprylyl glycol))或其混合物，优选水-二醇混合物，更优选其含有二醇，选自己二醇、辛二醇及其混合物。有利的是，将所获得的提取物稀释和/或溶解在含有己二醇的水性溶液中，特别是相对于美容化妆成分的总重量，含有0.1％至10％重量的己二醇、优选0.5％至5％重量的己二醇的水性溶液。有利的是，将所获得的提取物稀释和/或溶解在含有辛二醇的水性溶液中，特别是相对于包含提取物的水性溶液的总重量，含有0.01％至5％重量的辛二醇、优选0.1％至1％重量的辛二醇的水性溶液。
特别的是，根据本发明的其中溶解有红毛丹提取物的水性溶液包含黄原胶，特别是相对于水性溶液的总重量，0.01％至5％重量的黄原胶；更特别是相对于包含提取物的水性溶液的总重量，0.1％至1％重量的黄原胶。
有利的是，根据本发明的其中溶解有红毛丹提取物的溶液包含己二醇、辛二醇和黄原胶。
因此，本发明的另一个主题涉及根据本发明的提取物在包含至少一种美容化妆可接受的赋形剂的美容化妆组合物中减少污染对皮肤，有利地对头皮和/或皮肤附属物，有利的是毛发的有害影响中的用途。术语“可接受的”旨在表示美容化妆赋形剂或对皮肤无刺激性的赋形剂，其不引起过敏反应并且是化学上稳定的。
因此，美容化妆组合物用于减少污染对皮肤和/或皮肤附属物，有利地对毛发的有害影响。
包含根据本发明的提取物，优选叶、果皮、果肉和/或种子提取物，非常优选种子提取物的美容化妆组合物可以用作活力增强和/或去污的美容化妆组合物，有利的是去污的美容化妆组合物，更有利地用于毛发。
组合物可以局部或口服施用。在本发明的一个有利的实施方案中，所述美容化妆组合物将局部应用，有利地应用于人体的全部或部分，选自腿、足、腋下、手、大腿、胃、胸、颈、臂、躯干、背和面部，有利的是面部，非常有利的是头皮和/或皮肤附属物，有利的是毛发。
在本发明的一个实施方案中，相对于组合物的总重量，根据本发明的提取物在美容化妆组合物中按照以下浓度存在：1×10-4％至10％、优选1×10-4％至5％并且更优选1×10-3％至3％重量。
一种或多种赋形剂可以选自表面活性剂和/或乳化剂、防腐剂、缓冲剂、螯合剂、变性剂、遮光剂、pH调节剂、还原剂、稳定剂、增稠剂、胶凝剂、成膜聚合物、填充剂、控油剂(mattifying agents)、光泽剂、颜料、染料、香料及其混合物。CTFA(Cosmetic IngredientHandbook，第二版(1992))描述了适用于本发明的多种美容化妆赋形剂。
有利的是，一种或多种赋形剂选自聚甘油、酯、纤维素聚合物和衍生物、羊毛脂衍生物、磷脂、乳铁蛋白、乳过氧化物酶、基于蔗糖的稳定剂、维生素E及其衍生物、黄原胶、天然和合成蜡、植物油、甘油三酯、不皂化物、植物甾醇、硅酮、蛋白质水解物、甜菜碱、氨基氧化物(aminoxides)、植物提取物、蔗糖酯、二氧化钛、甘氨酸和对羟基苯甲酸酯，并且更优选选自硬脂基聚氧乙烯(2)醚、硬脂基聚氧乙烯(21)醚、乙二醇-15硬脂醚、鲸蜡硬脂醇、苯氧乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、丁二醇、辛二醇、天然生育酚、甘油、二羟鲸蜡基磷酸钠、异丙基羟基酮醚、硬脂酸乙二醇酯、三异壬精(triisononanoine)、椰油酸辛酯、聚丙烯酰胺、异构烷烃、月桂基聚氧乙烯(7)醚、卡波姆、丙二醇、己二醇、甘油、红没药醇、二甲硅油、氢氧化钠、PEG 30-二聚羟基硬脂酸酯、癸酸/辛酸甘油三酯、辛酸鲸蜡硬脂酯、己二酸二丁酯、葡萄籽油、霍霍巴油、硫酸镁、EDTA、环状聚二甲基硅氧烷、黄原胶、柠檬酸、月桂基硫酸钠、蜡和矿物油、异硬脂酸异硬脂酯、二壬酸丙二醇酯、异硬脂酸丙二醇酯、PEG 8、蜂蜡、氢化棕榈心油的甘油酯、羊毛脂油、芝麻油、乳酸鲸蜡酯、羊毛脂醇、蓖麻油、二氧化钛、乳糖、蔗糖、低密度聚乙烯、等渗盐水溶液及其混合物。
美容化妆组合物可以选自水性或油性溶液剂、霜剂或水性凝胶剂或油性凝胶剂(特别是沐浴凝胶剂)、乳(milk)、乳剂、微乳剂或纳米乳剂(其特别是水包油或油包水或多重的或基于硅酮的)、面膜、精华(serum)、洗剂、液体皂、润肤皂条(dermatological bar)、软膏剂、泡沫剂、贴剂、无水产品(优选为液体、膏状或固体)、洗发水。有利的是，其是洗发水。
美容化妆组合物还可以包含具有相同性质并且可能诱导与根据本发明的提取物协同作用的其它美容化妆物质，或具有互补作用的美容化妆物质。
已知用于保护皮肤免于毒性分子渗透，或用作排毒剂或去污剂的美容化妆物质特别包括刺槐(Caesalpinia spinosa)提取物和角叉菜(Chondrus crispus)或角叉菜(Kappaphycus striatum)的水解提取物。还可以提及本申请人以名称ArganylTM出售的摩洛哥坚果油提取物或以名称PurisoftTM和PuricareTM出售的辣木(Moringa oleifera)种子提取物。
组合物中可以存在其它类型的活性剂，例如抗衰老成分和/或漂白活性剂，抗污染成分和/或促进颜色光泽的成分。
这些例如可以是以名称DN-AgeTM出售的翅荚决明(Cassia alata)的叶提取物和/或作为抗氧化活性剂以名称LitchidermTM出售的荔枝的提取物，作为脱糖剂以名称CollRepairTM出售的丹参(Salvia miltiorhizza)提取物和烟酰胺的组合，以名称Lox-AgeTM出售的菊苣的抗皱提取物，以名称NeurobioxTM出售的千叶蓍(Achilleamillefolium)的提取物，以名称PerlauraTM出售的拳参(Polygonum bistorta)的提取物，以名称HyalufixTM出售的高良姜的提取物，以名称DelinerTM出售的谷物提取物或申请人以名称EpigenistTM出售的地下沃安齐贾(Voandzeia subterranea)的提取物，或者促进皮肤紧致的活性剂，例如以名称DermicanTM出售的合成四肽，以名称LinefactorTM出售的黄葵(Hibiscus abelmoschus)的提取物，以名称ProteasylTM出售的豌豆的纯化提取物，以名称ElestanTM出售的Manilkara multinervis的提取物，申请人以名称ArgassentialTM出售的摩洛哥坚果的果肉提取物。也可以将以名称DermagenistTM出售的马郁兰(Origanummajorana)植物的提取物和/或以名称CollaliftTM18出售的非洲桃花心木(Khayasenegalensis)的提取物添加到美容化妆组合物中。
本发明的另一个目的是美容化妆护理方法，该方法包括局部或口服施用根据本发明的提取物或包含其的美容化妆组合物，以增加细胞活力和/或ATP合成和/或线粒体活性和/或减少细胞损伤和/或减少细胞衰老，和/或减少污染对皮肤，有利的是对头皮和/或皮肤附属物，有利的是对毛发的有害影响。优选的是，施用是局部应用。
在本发明的一个实施方案中，美容化妆护理方法包括将根据本发明的提取物或包含其的组合物局部应用于人体的全部或部分，选自腿、足、腋下、手、大腿、胃、胸、颈、臂、躯干、背和脸部，有利的是脸部，非常有利的是头皮和/或皮肤附属物，有利的是毛发。
实施例涉及本发明的描述并且在下面给出。给出这些实施例仅用于示例目的，而不以任何方式限制本发明的范围。每个实施例均具有通用范围。这些实施例是本发明的整体组成部分，并且从包括实施例在内的全部描述出发，任何特征显然比任何现有技术都具有新颖性，这是本发明的整体组成部分。
最后，除非另有说明，否则在实施例中，温度以摄氏度表示，百分比是重量/体积，压力是大气压。
实施例1：制备根据本发明的红毛丹提取物的方法
实施例1a)：在20℃的温度，将相对于溶剂和种子总重量的10％重量的量的红毛丹的研磨种子在作为溶剂的水中浸渍2小时。将粗提取物离心，倾析，然后过滤。
实施例1b)：在20℃的温度，将相对于溶剂和种子总重量的5％重量的量的红毛丹的研磨种子在作为溶剂的水中浸渍24小时。将粗提取物离心，倾析，然后过滤。
实施例1c)：在20℃的温度，将相对于溶剂和种子总重量的20％重量的量的红毛丹的研磨种子在作为溶剂的水中浸渍2小时。将粗提取物离心，倾析，然后过滤。将提取物喷雾干燥，在麦芽糖糊精的存在下，最终麦芽糖糊精的量为相对于最终提取物总重量的80％重量。
实施例1d)：在80℃的温度，将相对于溶剂和种子总重量的10％重量的量的红毛丹的研磨种子在作为溶剂的乙醇:水混合物(80:20v/v)中浸渍1小时。将粗提取物离心，倾析，然后过滤。将提取物喷雾干燥，在麦芽糖糊精的存在下，最终麦芽糖糊精的量为相对于最终提取物总重量的80％重量。
实施例1e)：通过在80℃的温度浸渍1小时，将相对于果皮和作为溶剂的水的总重量的10％重量的量的红毛丹干果皮进行提取。将获得的提取物倾析并且离心，然后将上清液过滤。提取物为粉末形式。
实施例1f)：通过由相对于果肉和水的总重量的10％重量的量的红毛丹果肉开始，在80℃的温度，在作为唯一溶剂的水中浸渍1小时，进行提取。将粗提取物倾析，离心，然后过滤。
实施例1g)：通过在20℃的温度浸渍1小时，将相对于叶和作为唯一溶剂的水的总重量的10％重量的量的红毛丹干叶进行提取。将获得的提取物倾析并且离心，然后将上清液过滤。提取物为粉末形式。
实施例1h)：将10％的量的干种子在作为共溶剂的乙醇(10％)的存在下，在超临界CO2条件下提取。
实施例1i)：通过在20℃的温度浸渍1小时，将相对于果皮和作为唯一溶剂的水的总重量的5％重量的量的干燥果皮进行提取。将获得的提取物倾析并且离心，然后过滤上清液。提取物为液体形式。
实施例2：在红毛丹提取物的存在下ATP合成增加的示例
实施例2a)皮肤成纤维细胞中ATP的合成
方案：将正常，即非病理性的人成纤维细胞在包含DMEM和10％胎牛血清的生长培养基上于37℃(CO2＝5％，95％相对湿度)温育6天。用具有或不具有(对照)根据本发明的提取物的Hanks盐水溶液代替培养基。温育24小时后，将细胞在UVA下照射，然后返回在37℃培养24小时。
用DMSO提取细胞ATP，并且通过酶促法(荧光素/荧光素酶复合物；ATP生物发光试剂盒ROCHE Diagnostics)对提取的等分试样进行分析。
结果(SD：标准偏差)：
表1
MEAN SD
对照 100 7
实施例1a)的红毛丹种子提取物1％(v/v) 139 3
实施例1e)的红毛丹果皮提取物0.1％(v/v) 108 7
实施例1f)的红毛丹果肉提取物0.5％(v/v) 107 5
实施例1g)的红毛丹叶提取物1％(v/v) 105 2
结论：与对照相比，果肉、种子、叶和果皮提取物显示出ATP合成增加，对皮肤具有增强活力和去污的作用。
实施例2b)毛囊***成纤维细胞中的ATP合成
方案：将来自毛囊***的非病理性人成纤维细胞在DMEM培养基中培养24小时，然后用根据本发明的红毛丹含水种子提取物处理6天，最终体积浓度为相对于培养基总体积的0.03％和0.01％。在不存在根据本发明的提取物下培养相同的培养基(对照)。通过酶促法(荧光素/荧光素酶复合物；ATP生物发光试剂盒ROCHE Diagnostics)在6天结束时测量ATP的量。
表2
MEAN SD
对照 100 7
实施例1a)的红毛丹种子提取物0.03％(v/v) 138 6
实施例1a)的红毛丹种子提取物0.1％(v/v) 139 3
结论：与对照相比，种子提取物显示ATP合成增加。因此，种子提取物对头皮和/或皮肤附属物，优选毛发具有增强活力和去污作用，因此可以增加颜色的光泽和/或颜色的均匀性和/或防止颜色的光泽和/或均匀性丧失。
实施例3：根据本发明的提取物使毛发***成纤维细胞的线粒体代谢活性增加的 示例
方案：将非病理性人毛囊***成纤维细胞培养24小时，然后用红毛丹含水种子提取物处理6天，最终体积浓度为相对于培养基总体积的0.1％和0.3％。在不存在根据本发明的提取物下培养相同的培养基(对照)。在琥珀酸脱氢酶存在下，通过MTT(3-[4,5-二甲基噻唑-2-基]-2,5-二苯基四唑
Figure BDA0002374482850000181
溴化物)还原来测量成纤维细胞线粒体活性。用DMSO提取获得的沉淀物，然后在540nm测量DMSO溶液的光密度。
结果：表3
MEAN SD
对照 100 2
实施例1a)的红毛丹种子提取物0.1％(v/v) 121 4
实施例1a)的红毛丹种子提取物0.3％(v/v) 145 4
结论：与对照相比，红毛丹含水种子提取物显示毛囊***成纤维细胞的线粒体活性增加至少15％，最高达到47％。该线粒体活性参与减少由污染对头皮和/或皮肤附属物，优选毛发造成的有害影响，以及增加颜色的光泽和/或颜色的均匀性和/或防止颜色的光泽和/或均匀性丧失。
实施例4：新***细胞模型中的自发荧光参数的降低
方案：将正常的非病理性人成纤维细胞悬浮于DMEM培养基中，该培养基包含根据实施例1a)制备的根据本发明的种子提取物，最终体积浓度为相对于培养基的总体积的1％。在不存在根据本发明的提取物下培养相同的培养基(对照)。离心后，将聚集物在37℃(5％CO2)温育5天。将聚集物在PBS缓冲液中冲洗，然后将细胞在含EDTA的蛋白酶混合物中裂解。
使用C6流式细胞仪(Becton-Dickinson UK)(585nm+/-20nm)测定细胞自发荧光。结果表示为相对于对照的％。
结果：表4
MEAN SD
对照 100 8
实施例1a)的红毛丹种子提取物1％(v/v) 74 2
结论：种子提取物显示出具有减少成纤维细胞自发荧光至少20％的能力，因此减少毛囊***中的成纤维细胞衰老。
实施例5：本发明的提取物对抗污染物苯并芘的保护作用
方案：通过在生长因子溶液(0.2％v/v)存在下于基础培养基中培养所述成纤维细胞来制备非病理性人真皮***成纤维细胞的悬浮液，在其中加入苯并芘(BaP)，最终浓度为5或10μmol/L的最终培养基，因此最终浓度为0.5％(w/v培养基)的根据实施例1a)制备的红毛丹种子提取物或不含提取物(对照)。将悬浮液离心(5分钟，200g)，然后将得到的聚集物在37℃(5％CO2)温育5天。
为了分析细胞自发荧光(表5)和细胞粒度(表6)，温育5天后回收聚集物，用磷酸盐缓冲盐水(PBS)缓冲液冲洗，然后通过在37℃的温度，在蛋白酶和EDTA的混合物中温育1小时而脱位。然后通过流式细胞术分析获得的细胞悬浮液。在585nm测量自发荧光。细胞自发荧光和细胞粒度的增加是成纤维细胞降解的特征，并且证明了所分析污染物的作用。
细胞自发荧光结果(n＝2)：
表5
Figure BDA0002374482850000191
结论：苯并芘使成纤维细胞的自发荧光度增加至少191％。相反，在污染物存在下添加红毛丹种子提取物可通过将仅存在苯并芘的情况下检测到的自发荧光程度降低至少35％来抵消这种降解，这表明该提取物可有效抵抗由苯并芘诱导的细胞降解。
细胞粒度结果(n＝3)：
表6
Figure BDA0002374482850000192
Figure BDA0002374482850000201
结论：向培养基中加入苯并芘使聚集物的粒径增加至少9％。相反，同时加入红毛丹种子提取物将在污染物存在下检测到的粒径减小至少31％，这表明该提取物可有效抵抗苯并芘诱导的细胞降解。
实施例6：根据本发明的提取物对微囊作用的示例
重建微囊的方法：
微囊模型由3D共培养的***成纤维细胞、毛囊外鞘的角质形成细胞和黑素细胞组成。通过允许不同类型细胞之间的神经、表皮和间充质相互作用的整合，该细胞模型是最接近毛囊的重建器官分子。将微囊培养。将非病理性***成纤维细胞培养3天。然后将黑素细胞和来自毛囊外鞘的角质形成细胞添加到新***中，形成微囊。培养24小时后，加入红毛丹含水种子提取物。在不存在根据本发明的提取物下培养相同的培养基(对照)。处理48小时后，对培养基和微囊进行采样以进行测试。
实施例6a)微囊中细胞活力的增加
方案：
通过PrestoBlue(Thermo Fisher Scientific)方法测量微囊细胞活力。该比色法基于活细胞对刃天青试剂的还原和荧光发射。在处理48小时后进行测量。该值以被未处理对照标准化后的平均值％表示。
结果：表7
MEAN SD
对照 100 6.7
实施例1a)的红毛丹种子提取物0.02％(v/v) 118.0 6.5
结论：根据本发明的种子提取物能够增加微囊细胞活力，因此它是减少由污染，特别是头皮和/或皮肤附属物，优选毛发污染引起的应激的活性提取物。
实施例6b)减少微囊中的细胞损伤
方案：在乳酸脱氢酶存在下，通过比色法测量细胞损伤，从而可以通过测量培养基中受损细胞中乳酸脱氢酶活性来定量提取物的细胞毒性。细胞膜损伤和细胞裂解的增加导致与裂解细胞的数量成比例的乳酸脱氢酶活性的增加。在甲
Figure BDA0002374482850000212
存在下说明了该活性，其量通过测量光密度(500nm)来评估。处理48小时后，在最终体积浓度为相对于培养基的总体积的0.02％的根据本发明的提取物存在下或没有提取物存在下(对照)，在培养基中进行测量。
结果：表8
MEAN SD
对照 100 15.9
实施例1a)的红毛丹种子提取物0.02％(v/v) 58.0 16.3
结论：根据本发明的种子提取物能够通过产生活性提取物以减少污染的有害影响，特别是对头皮和皮肤附属物，优选对毛发的有害影响而减少细胞损伤。
实施例7.包含红毛丹提取物的美容化妆成分的实施例
红毛丹种子提取物(实施例1c) 20％总重量
麦芽糖糊精 80％总重量
实施例8.包含根据本发明的提取物的美容化妆组合物的实施例
下面的组合物根据本领域技术人员已知的方法制备，特别是关于要混合在一起的多个相的方法。指示的量为相对于组合物总重量的重量百分比。
实施例8a)：身体和面部精华：
Figure BDA0002374482850000211
实施例8b)：面部精华
Figure BDA0002374482850000221

Claims (12)

1.红毛丹提取物减少污染对皮肤，有利的是头皮，和/或皮肤附属物，有利的是毛发的有害影响的美容化妆用途。
2.根据权利要求1的用途，其特征在于红毛丹提取物是叶、果肉、果皮和/或种子提取物，优选种子提取物。
3.根据权利要求1或2中任一项的用途，其特征在于提取物是通过在溶剂或溶剂混合物中提取而获得的，所述溶剂或溶剂混合物优选是质子极性溶剂，并且有利的是在水、醇、二醇、多元醇、水/醇、水/二醇或水/多元醇的混合物(例如与乙醇、甘油和/或丁二醇和/或其它二醇例如木糖醇和/或丙二醇等混合的水)，99/1至1/99(w/w)，有利的是在作为唯一溶剂的水中。
4.根据权利要求1至3中任一项的用途，其特征在于提取物减少污染物对皮肤，有利的是头皮，和/或皮肤附属物，有利的是毛发的不美观和/或不舒适的表现。
5.根据权利要求1至4中任一项的用途，其特征在于提取物减少皮肤和/或皮肤附属物的刺激和/或发红的感觉，和/或皮肤颜色暗沉和/或颜色光泽丧失，和/或皮肤和/或皮肤附属物敏感。
6.根据权利要求1至5中任一项的用途，其用于增加细胞活力和/或ATP合成和/或线粒体活性和/或减少细胞衰老和/或细胞损伤。
7.根据权利要求1至6中任一项的提取物的用途，其特征在于用途为局部应用。
8.根据权利要求1至7中任一项的提取物的用途，其特征在于提取物存在于美容化妆组合物中，所述美容化妆组合物包含至少一种美容化妆可接受的赋形剂，最终浓度为相对于美容化妆组合物的总重量的1×10-4％重量至10％重量，优选1×10-4％重量至5％重量，更优选1×10-3％重量至3％重量。
9.根据权利要求1至8中任一项的提取物的用途，其作为皮肤和/或皮肤附属物，有利的是毛发的活力增强剂和/或去污剂。
10.根据权利要求1至9中任一项的提取物的用途，其特征在于提取物存在于美容化妆组合物中，选自水性或油性溶液剂，霜剂或水性凝胶剂或油性凝胶剂，特别是沐浴凝胶剂，乳，乳剂，微乳剂或纳米乳剂，其特别是水包油或油包水或多重或基于硅酮的，面膜，精华，洗剂，液体皂，润肤皂条，软膏剂，泡沫剂，贴剂，无水产品，优选其是液体、糊状或固体，洗发水。
11.美容化妆护理方法，该方法包括局部或口服施用根据权利要求1至10中任一项的提取物或含有其的美容化妆组合物，以增加细胞活力和/或ATP合成和/或线粒体活性和/或减少细胞衰老和/或减少污染对皮肤，有利的是头皮，和/或皮肤附属物，有利的是毛发的有害影响。
12.根据权利要求11的美容化妆护理方法，其特征在于其包括局部应用于人体的全部或部分，选自腿、足、腋下、手、大腿，胃、胸、颈、臂、躯干、背和面部，有利的是面部，非常有利的是头皮，和/或皮肤附属物，有利的是毛发。
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