CN110836974B - Flt3lg蛋白在制备肺腺癌术后预后评估试剂或者试剂盒中的应用 - Google Patents

Flt3lg蛋白在制备肺腺癌术后预后评估试剂或者试剂盒中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于生物医学技术领域，具体公开了一种FLT3LG蛋白在制备肺腺癌术后预后评估试剂或者试剂盒中的应用。本发明以FLT3LG蛋白作为标志物，通过免疫组织化学的方法检测肺腺癌组织标本，并判断肺腺癌患者的预后；FLT3LG蛋白肺腺癌中高表达，而在癌旁组织中低表达；FLT3LG蛋白在肺腺癌中的表达水平和患者生存期有关；高表达患者预后不好，生存时间短。FLT3LG蛋白表达水平不但与肺腺癌患者总生存期有关，也和患者无瘤生存期有关，FLT3LG蛋白高表达患者较早出现复发或转移；FLT3LG蛋白作为肺腺癌诊断和预后标志物，具有广阔的应用前景和较大的社会效益。

Description

FLT3LG蛋白在制备肺腺癌术后预后评估试剂或者试剂盒中的 应用
技术领域
本发明属于生物医学技术领域，具体涉及提供一种FLT3LG蛋白在制备肺腺癌术后预后评估试剂或者试剂盒中的应用。
背景技术
肺癌当前已成为世界范围内发病率及癌症死亡率最高的恶性肿瘤，严重威胁着人类的生命健康。在我国，目前肺癌已替代肝癌成为死亡率最高的恶性肿瘤，并占全部恶性肿瘤死亡总人数的22.7％，且其发病率及死亡率仍在迅速上升。据统计，在我国每年肺癌约致40万例人数死亡，肺癌已成为我国发病率及死亡率最高的恶性肿瘤。尽管近年来随着技术的发展，在肺癌诊断及治疗方面均有新的进展，但肺癌患者治疗后总5年生存率仍很不理想，仅20％左右。肺癌患者总5年生存率之所以很不理想，与大多数肺癌患者在诊断时已处于局部晚期或出现转移有关，导致其失去及时的干预及治疗机会，严重影响了患者的预后情况。因此，提高肺癌患者预后生存率的关键在于早期诊断及干预治疗。
肺腺癌是肺癌的一种，其是来源于肺组织中腺体上皮的恶性肿瘤，有多种生长方式，包括腺泡、***、细支气管肺泡或实性生长等。肺腺癌约占肺原发肿瘤的40％，其比例逐年增长，较容易发生于女性及不抽烟者。肺腺癌以周围型肺癌多见，早期无明显症状，随病情发展表现为咳嗽、咳血、胸痛等呼吸***症状，仍容易被忽视。晚期时出现症状与肿瘤的侵袭转移相关，如刺激胸膜产生胸腔积液、转移到骨关节带来疼痛，转移到头颅发生相应症状等。
当前，肺腺癌的诊断治疗策略从传统的TNM分期决定治疗方案，到根据患者不同基因分型从而进行的个体化靶向治疗。比如：对于表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的肺腺癌患者使用酪氨酸激酶抑制剂有较好的疗效，该突变在亚裔、女性的肺腺癌患者尤其多见。其中，EGFR基因的19号外显子缺失或21号L858R的点突变是较为常见的治疗有效的突变类型。因此，对EGFR基因的检测能够有效预测肺腺癌的靶向治疗效果。此外，对于间变性淋巴瘤激酶(ALK)基因重排、ROS肉瘤致癌因子－受体酪氨酸激酶(ROS1)突变好发于不吸烟的青年患者。其突变率不及EGFR，但也作为肺腺癌患者分子生物检测必不可少的指标，直接指导着患者的治疗方案。
但对于早中期肺腺癌患者的治疗，仍以手术为主，患者术后生存的预测无较好的指标。目前临床常用于肺癌的肿瘤血清标志物Cyfta21-1、CEA、CA125等并不能很好的反映肺癌患者术后的预后情况，而对于致癌基因(如Ras、myc、erb-b2等)或抑癌基因(p53、RB等)的检测亦不能对肺腺癌预后作特异性评估。因此，需要进一步探索能够预测肺腺癌患者术后预后情况的相关蛋白。
FLT3LG(Fms-related tyrosine kinase 3ligand)Fms相关的酪氨酸激酶3配体是一种人体内由FLT3LG基因编码的蛋白质。它与干细胞因子(SCF)和集落刺激因子1(CSF-1)在结构上同源。与其他生长因子起协同作用，FLT3LG刺激各种血细胞祖细胞的增殖和分化。例如，它是刺激树突状细胞生长的主要生长因子。此外，它对恶性肿瘤如骨肉瘤等预后评估有一定作用，但对肺癌预后评估未见文献报道。
发明内容
本发明提供了一种FLT3LG蛋白在制备肺腺癌术后预后评估试剂或者试剂盒中的应用，FLT3LG蛋白在肺腺癌中的表达水平和患者生存期、患者无瘤生存期有关，FLT3LG蛋白高表达患者生存时间短、较早出现复发或转移，FLT3LG蛋白作为肺腺癌诊断和预后标志物，具有广阔的应用前景和较大的社会效益。
本发明提供了一种FLT3LG蛋白在制备蛋白在制备肺腺癌术后预后评估试剂或者试剂盒中的应用。
优选的，上述应用中，将FLT3LG蛋白作为分子标记，利用FLT3LG一抗、HRP标记二抗以及免疫组化实验试剂，分析FLT3LG蛋白在肺腺癌组织中的表达量，根据FLT3LG蛋白表达量的高低来评估患者术后预后生存期。
优选的，上述应用中，FLT3LG一抗指兔抗人FLT3LG单克隆抗体，HRP标记二抗指辣根过氧化酶标记鼠抗兔IgG抗体。
优选的，上述应用中，免疫组化实验试剂包括二甲苯、乙醇、3％H2O2溶液、1％BSA封闭液、DAB显色试剂、苏木素。
优选的，上述应用中，在生物样品中检测FLT3LG蛋白表达量，所述的生物样品为***固定后石蜡包埋的肺腺癌组织。
优选的，上述应用中，检测FLT3LG蛋白在肺腺癌组织中的相对表达量的方法如下：
a)用甲醛固定标本，酒精脱水和二甲苯透明后石蜡包埋并切片；
b)50℃烘烤2h后，切片用二甲苯脱蜡，梯度酒***化；
c)体积分数3％H2O2孵育10min，蒸馏水冲洗、PBS缓冲液2次，每次5min
d)0.01M的柠檬酸缓冲液进行抗原修复，微波炉98℃加热10min；
e)冷却至室温后，PBS缓冲液2次，每次5min
f)体积分数1％BSA封闭1h后，一抗孵育：加兔抗人FLT3LG单克隆抗体，4℃冰箱过夜(至少12h)。
g)室温放置复温20min，PBS缓冲液2次，每次5min；
h)二抗孵育：加入相应的辣根过氧化酶标记鼠抗兔IgG抗体，37℃孵育30min；
i)PBS缓冲液2次，每次5min；DAB试剂盒进行显色1-10min；
j)自来水充分冲洗终止染色；苏木素进行复染10s；
k)梯度酒精脱水，二甲苯透明，封片后风干。
l)显微镜下观察结果，随机选取10个区域，进行评分；
m)根据染色强弱评分为0-3分，根据阳性细胞所占百分比评分为1-4分，两者相乘为染色指数，≥4分为FLT3LG蛋白高表达，<4分为低表达。
优选的，上述应用中，FLT3LG蛋白表达量升高则肺腺癌患者术后预后总生存期和无瘤生存期缩短。
与现有的技术相比，本发明提供的一种FLT3LG蛋白在制备肺腺癌术后预后评估试剂或者试剂盒中的应用，具有以下有益效果：
本发明的目的在于提供FLT3LG蛋白的新应用，特别是在制备肺腺癌预后评估试剂或试剂盒中的应用。
本发明经过广泛而深入的研究，首次发现，采用免疫组化方法检测FLT3LG蛋白在肺腺癌组织中的相对表达量，能够判断肺腺癌患者预后复发或转移及术后生存期，基于FLT3LG蛋白的相对表达量与肺腺癌的这种相关性，以该蛋白作为分子标记对其表达量进行检测可以用于指导肺腺癌的预后判断。
本发明的FLT3LG蛋白与肺腺癌相关性的发现为预测肺腺癌预后复发转移及术后生存期提供新的方法，对判断肺腺癌患者预后有重要价值，当免疫组化评分大于等于4分，肺腺癌患者易出现术后复发或转移，其生存时间较短。
本发明利用免疫组化技术对肺腺癌组织FLT3LG蛋白相对表达量进行检测，统计分析患者临床病理资料并结合随访信息，确定FLT3LG蛋白相对表达量与手术后肺腺癌患者预后存在相关性。FLT3LG蛋白可作为蛋白分子标记判断肺腺癌患者预后，对术后患者辅助治疗及病情监测也有一定的作用。
附图说明
图1是肺腺癌组织FLT3LG蛋白免疫组化染色阳性结果；
图2是肺腺癌组织FLT3LG蛋白免疫组化染色阴性结果；
图3是癌旁肺组织FLT3LG蛋白免疫组化染色阳性结果；
图4是癌旁肺组织FLT3LG蛋白免疫组化染色阴性结果；
图5是肺腺癌患者FLT3LG蛋白表达与总生存期的关系；
图6是肺腺癌患者FLT3LG蛋白表达与无瘤生存期的关系；
图7是KM-Plotter数据库分析肺腺癌中FLT3LG基因表达与预后的关系；
图8是KM-Plotter数据库分析肺鳞癌中FLT3LG基因表达与预后的关系。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明，但不应理解为本发明的限制。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
本发明提供一种FLT3LG蛋白在制备肺腺癌术后预后评估试剂盒中的应用。其中，“肺腺癌术后”指肺腺癌患者已接受手术治疗，“预后评估”指肿瘤手术切除后，预测患者存活时间及复发转移情况。FLT3LG蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码FLT3LG蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
为了证明本发明的效果，我们进行了相关研究：
一、研究方法
1.患者征集：收集2010年1月到2014年12月西安交通大学第一附属医院肺癌手术患者132例，术后证实为肺腺癌。其中男性69例，女性63例，年龄范围32岁至80岁(中位年龄为60.5岁)。本实验中非小细胞肺癌分期，根据患者术后病理描述，按照2017年国际抗癌联盟(UICC)第8版肺癌TNM分期进行。由于IV期患者不能从手术中获益，因此所收集标本为I期、II期、III期患者，无IV期患者。
2.患者入组条件：(1)所选取患者术前均未进行化疗、放疗及免疫治疗等任何抗肿瘤治疗方法治疗；(2)患者术后病理检查证实为肺腺癌；(3)患者未患有其它肿瘤，并无其余肿瘤病史；(4)患者手术方式为肺癌根治术(肺癌根治性切除术)；(5)经患者及其家属同意进行术后肺腺癌切除标本取材。
3.随访：总生存期(Overall survival，OS)是指从肺癌手术日期开始到患者死亡或失访的时间。最后一次随访日期为2018年12月。所有患者的生存期为1-95个月，其中，中位生存期是43.5个月。
4.免疫组织化学实验液体的配制
4.1梯度酒精溶液的配制：体积分数70％、80％、85％、90％、95％的酒精均应用无水乙醇和蒸馏水进行稀释配制。
4.2PBS缓冲溶液的配制：氯化钠12g，无水磷酸二氢钠(Na2HPO4)1.725g，无水磷酸氢二钾(K2HPO4)0.3g，氯化钾0.3g，应用蒸馏水配制成1200ml，调整pH值为7.2；
4.3柠檬酸缓冲液/抗原修复液的配制(0.01M)：柠檬酸A液：2.1g柠檬酸充分溶解于100ml蒸熘水中；柠檬酸三钠B液：2.9g柠檬酸三钠溶解于100ml蒸熘水中；依次抽取柠檬酸A液9ml和柠檬酸三钠B溶液41ml加入450ml蒸馏水中混匀，总量为500ml，即配成pH值为6.0的柠檬酸缓冲液，留存备用。
4.4封片剂：取4.2中的0.5ml PBS缓冲液与等体积甘油混匀后使用，需现配现用。
5.标本制作及免疫组织化学反应(一种检测FLT3LG蛋白在肺腺癌组织中的相对表达量的方法)
5.1标本固定：所有的离体肺腺癌标本均在3h内进行固定，固定液采用体积分数40％的甲醛(市售的甲醛试剂即可用)。
5.2制作蜡块：将手术室取的新鲜肺腺癌标本(大小约为1.0cm×1.0cm×0.2cm)用体积分数40％的甲醛室温25℃左右固定至少12h。随后用酒精脱水和二甲苯透明(85％乙醇5min、90％乙醇5min、95％乙醇5min、无水乙醇5min、第一次二甲苯浸泡10min、第二次二甲苯浸泡10min)并进行石蜡包埋。
5.3切片制作：使用手动石蜡切片机将切片切成厚度为4-6μm，置于40-45℃水中展开，借水的张力和水的温度，将略皱的蜡带自然展平。随后小心放入玻片中，随后将所有的玻片放入40℃的干燥箱过夜(至少12h)，随后放置于65℃的烤箱1.5h，最终放入37℃的恒温箱中过夜(至少12h)后，得到的石蜡切片于常温保存，随取随用。
5.4免疫组织化学实验步骤
a)烤片：将石蜡切片放置入烤箱50℃烘烤2h；
b)脱蜡：将石蜡切片放入二甲苯中脱蜡20min(第一次)，二甲苯脱蜡20min(第二次)；
c)水化：常规水化，即无水乙醇10min，95％酒精5min，80％酒精5min，70％酒精5min；
d)孵育：体积分数3％H2O2室温孵育10min，消除肿瘤组织内内源性过氧化物酶的活性；
e)冲洗：应用蒸馏水冲洗，PBS缓冲溶液浸泡两次，每次5min；
f)抗原修复：切片放入0.01M的柠檬酸抗原修复缓冲液中，微波炉98℃加热10min，取出后室温放置30min；
g)冲洗：应用PBS缓冲溶液冲洗两次，每次5min；
h)体积分数1％BSA封闭1h后，一抗孵育：加入相应浓度的兔抗人FLT3LG单克隆抗体(一抗，Abcame公司，货号：ab52648，1:100稀释)，放入湿盒中，盒中放入纱布及少量的水，放入4℃冰箱过夜(至少12h)；
i)复温：次日取出后室温放置复温20min；
j)冲洗：应用PBS缓冲溶液冲洗两次，每次5min；
k)二抗孵育：加入相应的辣根过氧化酶标记鼠抗兔IgG抗体(二抗，博奥森公司，货号：bs-0295M-HRP，1:500稀释)，37℃孵育30min；
l)冲洗：应用PBS缓冲溶液冲洗两次，每次5min；
m)显色：应用DAB试剂盒(包括A液和B液)进行显色，即避光情况下1ml蒸馏水中加入1滴DAB试剂盒A液，1滴DAB试剂盒B液，混合后滴入切片；
n)观察：显色30s后，每隔10s左右显微镜下观察染色情况，必要时可增加显色时间。染色时间1-10min。
o)终止染色：自来水充分冲洗；
p)复染：利用苏木素进行复染10s；
q)脱水：常规进行脱水，即应用80％酒精5min，95％酒精5min，100％酒精10min；
r)透明：二甲苯10min(第一次)，二甲苯10min(第二次)；
s)封片：滴入封片剂进行封片，放入风箱中风干；
t)观察：将切片放入显微镜下进行观察，每个切片组织随机选取10个区域进行观察并评分。
u)结果判断：
在本组实验中，肿瘤细胞FLT3LG免疫组化染色阳性结果表现为细胞胞浆出现特异性棕黄色颗粒，参见图1；组化染色阴性结果表现为细胞胞浆中几乎无特异性染色，参见图2。其中各例标本针对各指标在400×视野下随机选择10个高倍视野，并计算其阳性细胞所占百分比。阳性染色中，无色评分为0分；浅黄色评为1分；深黄色评为2分；棕黄色评为3分。规定无阳性细胞为0分；阳性细胞所占百分比<25％为1分；阳性细胞所占百分比在25％～50％之间为2分；阳性细胞所占百分比50％～75％为3分；阳性细胞所占百分比大于75％为4分。颜色评分与阳性细胞所占百分比评分相乘为染色指数，染色指数≥4分为肿瘤组织中FLT3LG蛋白高表达，染色指数<4分为肿瘤组织中FLT3LG蛋白低表达。
6.统计学方法分析
采用SPSS 20.0软件进行统计分析。在实验结果中，计数资料使用卡方检验方法统计。生存分析采用Kaplan-Meier法，差异显著性使用Log-Rank检验，生存曲线采用GraphPadPrism 5软件绘制。运用单因素及多因素Cox回归模型分析肺腺癌患者预后危险因素。P＜0.05认为有统计学意义。
二、研究结果
1.FLT3LG蛋白在肺腺癌组织和癌旁肺组织表达量的比较
图1是肺腺癌组织FLT3LG蛋白免疫组化染色阳性结果；图2是肺腺癌组织FLT3LG蛋白免疫组化染色阴性结果；图3是癌旁肺组织FLT3LG蛋白免疫组化染色阳性结果，图4是癌旁肺组织FLT3LG蛋白免疫组化染色阴性结果。在132例肺腺癌组织中，FLT3LG蛋白高表达70例(53％)，低表达62例(47％)；在82例癌旁肺组织中，FLT3LG蛋白高表达25例(37.8％)，低表达57例(62.2％)。从表1可看出，FLT3LG蛋白在肺腺癌组织中的表达显著高于癌旁肺组织(p<0.05)。
表1 FLT3LG蛋白在肺腺癌组织和癌旁肺组织的表达
Figure BDA0002264818440000101
2.在肺腺癌组织中FLT3LG蛋白的表达与临床病理资料的关系
表2是FLT3LG蛋白表达与临床病理资料及因素的关系，FLT3LG蛋白在肺腺癌组织中的表达均与是否发生***转移和肿瘤的TNM分期明显相关联(P<0.05)，而与性别，年龄，是否吸烟，肿瘤分化程度，肿瘤大小，肿瘤部位，肿瘤类型等无显著性相关(P>0.05)。
表2 FLT3LG蛋白表达与临床病理资料及因素的关系
Figure BDA0002264818440000111
3.FLT3LG的表达和肺腺癌患者预后的关系
我们使用Kaplan-Meier法对肺腺癌中FLT3LG高表达和低表达组进行生存分析，发现FLT3LG高表达患者(FLT3LG+)较低表达患者(FLT3LG-)的总生存时间(OS)明显缩短(图5)，Log rank检验二者差异具有统计学意义(P<0.001)。分析FLT3LG的表达和肺腺癌患者复发转移的关系，发现FLT3LG高表达肺腺癌患者(FLT3LG+)较低表达患者(FLT3LG-)，无瘤生存期(DFS)明显缩短(图6)，差异具有显著性(P＝0.001)，可见FLT3LG高表达较低表达患者更容易出现复发转移。
4.单因素及多因素Cox回归分析肺腺癌患者总生存期影响因素
我们对所有收集的临床病理资料因素逐个进行单因素生存分析，如表3所示，单因素分析中，肿瘤大小、***转移情况、TNM分期、FLT3LG蛋白表达情况对肺腺癌患者的预后总生存期影响有统计学意义(p<0.05)，这些因素均为肺腺癌患者总生存期影响因素。表4同时选择肿瘤大小、***转移情况、FLT3LG蛋白表达情况，(由于TNM分期由肿瘤大小和***转移情况决定，故多因素分析时剔除该因素)使用Cox多因素生存分析，发现FLT3LG蛋白表达情况、肿瘤大小、***转移为肺腺癌预后总生存期独立危险因素(p<0.05)。
表3 Cox单因素分析总生存期影响因素
Figure BDA0002264818440000121
表4 Cox多因素分析总生存期独立影响因素
Figure BDA0002264818440000131
5.单因素及多因素Cox回归分析肺腺癌患者无瘤生存期影响因素
表5所示，单因素分析中，肿瘤大小、***转移情况、TNM分期、FLT3LG蛋白表达情况对肺腺癌患者的无瘤生存期影响有统计学意义(p<0.05)，这些因素均为肺腺癌患者无瘤生存期影响因素。表6同时选择肿瘤大小、***转移情况、FLT3LG蛋白表达情况，使用Cox多因素生存分析，发现FLT3LG蛋白表达情况、肿瘤大小、***转移为肺腺癌无瘤生存期独立危险因素(p<0.05)。
表5 Cox单因素分析无瘤生存期影响因素
Figure BDA0002264818440000132
表6 Cox多因素分析总生存期独立影响因素
Figure BDA0002264818440000141
6.KM-Plotter数据库验证结果
通过KM-Plotter数据库(http://kmplot.com/analysis/)进行数据分析，在公共数据库中，进一步验证FLT3LG基因表达与肺腺癌的关系。结果参见图7、图8。其中，720例肺腺癌人群分析FLT3LG基因表达与患者预后的关系，可见332例高表达FLT3LG基因的患者较低表达的388例患者生存时间缩短，差异具有统计学意义(P<0.001)，且在此数据库中，FLT3LG高表达的相对危险系数为1.6(95％可信区间为1.27-2.02)。而分析524例肺鳞癌中FLT3LG基因表达与预后联系发现，251例高表达和273例低表达FLT3LG的肺鳞癌患者预后无显著性差异(P＝0.23)。说明FLT3LG基因表达量可以针对性预测肺腺癌患者术后的预后生存时间，与我们的实验结果FLT3LG蛋白表达预测肺腺癌患者术后的预后生存时间吻合。
尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。
序列表
<110> 西安交通大学医学院第一附属医院
<120> FLT3LG蛋白在制备肺腺癌术后预后评估试剂或者试剂盒中的应用
<160> 2
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 235
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Met Thr Val Leu Ala Pro Ala Trp Ser Pro Thr Thr Tyr Leu Leu Leu
1 5 10 15
Leu Leu Leu Leu Ser Ser Gly Leu Ser Gly Thr Gln Asp Cys Ser Phe
20 25 30
Gln His Ser Pro Ile Ser Ser Asp Phe Ala Val Lys Ile Arg Glu Leu
35 40 45
Ser Asp Tyr Leu Leu Gln Asp Tyr Pro Val Thr Val Ala Ser Asn Leu
50 55 60
Gln Asp Glu Glu Leu Cys Gly Gly Leu Trp Arg Leu Val Leu Ala Gln
65 70 75 80
Arg Trp Met Glu Arg Leu Lys Thr Val Ala Gly Ser Lys Met Gln Gly
85 90 95
Leu Leu Glu Arg Val Asn Thr Glu Ile His Phe Val Thr Lys Cys Ala
100 105 110
Phe Gln Pro Pro Pro Ser Cys Leu Arg Phe Val Gln Thr Asn Ile Ser
115 120 125
Arg Leu Leu Gln Glu Thr Ser Glu Gln Leu Val Ala Leu Lys Pro Trp
130 135 140
Ile Thr Arg Gln Asn Phe Ser Arg Cys Leu Glu Leu Gln Cys Gln Pro
145 150 155 160
Asp Ser Ser Thr Leu Pro Pro Pro Trp Ser Pro Arg Pro Leu Glu Ala
165 170 175
Thr Ala Pro Thr Ala Pro Gln Pro Pro Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu
180 185 190
Pro Val Gly Leu Leu Leu Leu Ala Ala Ala Trp Cys Leu His Trp Gln
195 200 205
Arg Thr Arg Arg Arg Thr Pro Arg Pro Gly Glu Gln Val Pro Pro Val
210 215 220
Pro Ser Pro Gln Asp Leu Leu Leu Val Glu His
225 230 235
<210> 2
<211> 708
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
atgacagtgc tggcgccagc ctggagccca acaacctatc tcctcctgct gctgctgctg 60
agctcgggac tcagtgggac ccaggactgc tccttccaac acagccccat ctcctccgac 120
ttcgctgtca aaatccgtga gctgtctgac tacctgcttc aagattaccc agtcaccgtg 180
gcctccaacc tgcaggacga ggagctctgc gggggcctct ggcggctggt cctggcacag 240
cgctggatgg agcggctcaa gactgtcgct gggtccaaga tgcaaggctt gctggagcgc 300
gtgaacacgg agatacactt tgtcaccaaa tgtgcctttc agcccccccc cagctgtctt 360
cgcttcgtcc agaccaacat ctcccgcctc ctgcaggaga cctccgagca gctggtggcg 420
ctgaagccct ggatcactcg ccagaacttc tcccggtgcc tggagctgca gtgtcagccc 480
gactcctcaa ccctgccacc cccatggagt ccccggcccc tggaggccac agccccgaca 540
gccccgcagc cccctctgct cctcctactg ctgctgcccg tgggcctcct gctgctggcc 600
gctgcctggt gcctgcactg gcagaggacg cggcggagga caccccgccc tggggagcag 660
gtgccccccg tccccagtcc ccaggacctg ctgcttgtgg agcactga 708

Claims (6)

1.一种检测FLT3LG蛋白在肺腺癌组织中表达量的试剂在制备肺腺癌术后预后评估试剂或者试剂盒中的应用。
2.根据权利要求1所述的一种检测FLT3LG蛋白在肺腺癌组织中表达量的试剂在制备肺腺癌术后预后评估试剂或者试剂盒中的应用，其特征在于，将FLT3LG蛋白作为分子标记，利用FLT3LG一抗、HRP标记二抗以及免疫组化实验试剂，分析FLT3LG蛋白在肺腺癌组织中的表达量，根据FLT3LG蛋白表达量的高低来评估患者术后预后生存期。
3.根据权利要求2所述的一种检测FLT3LG蛋白在肺腺癌组织中表达量的试剂在制备肺腺癌术后预后评估试剂或者试剂盒中的应用，其特征在于，FLT3LG一抗指兔抗人FLT3LG单克隆抗体，HRP标记二抗指辣根过氧化酶标记鼠抗兔IgG抗体。
4.根据权利要求2所述的一种检测FLT3LG蛋白在肺腺癌组织中表达量的试剂在制备肺腺癌术后预后评估试剂或者试剂盒中的应用，其特征在于，免疫组化实验试剂包括二甲苯、乙醇、3％H2O2溶液、1％BSA封闭液、DAB显色试剂、苏木素。
5.根据权利要求2所述的一种检测FLT3LG蛋白在肺腺癌组织中表达量的试剂在制备肺腺癌术后预后评估试剂或者试剂盒中的应用，其特征是，在生物样品中检测FLT3LG蛋白表达量，所述的生物样品为***固定后石蜡包埋的肺腺癌组织。
6.根据权利要求1所述的一种检测FLT3LG蛋白在肺腺癌组织中表达量的试剂在制备肺腺癌术后预后评估试剂或者试剂盒中的应用，其特征在于，FLT3LG蛋白表达量升高则肺腺癌患者术后预后总生存期和无瘤生存期缩短。
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