CN110831628A - 用于治疗过敏性眼病的方法和组合物 - Google Patents

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Abstract

本公开文本提供了用于治疗过敏性眼病(例如过敏性结膜炎、角膜结膜炎或巨***性结膜炎)的方法。具体地，本公开文本提供了用于通过给予与人Siglec‑8结合的抗体或包含所述抗体的组合物来治疗过敏性眼病的方法。本公开文本还提供了包含与人Siglec‑8结合的抗体的制品或试剂盒，所述制品或试剂盒用于治疗过敏性眼病。

Description

用于治疗过敏性眼病的方法和组合物
相关申请的交叉引用
本申请要求于2017年5月5日提交的美国临时申请序列号62/502,479的优先权，其公开内容通过引用以其整体并入本文。
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技术领域
本公开文本涉及用于通过给予与人Siglec-8结合的抗体和包含所述抗体的组合物来治疗过敏性眼病(例如过敏性结膜炎、角膜结膜炎或巨***性结膜炎)的方法。
背景技术
过敏性眼病代表一些最常见的眼病。在过去的几十年中，患有过敏性眼病的人数有所增加，现在被认为影响了至少15％至20％的人口(La Rosa,M.等人(2013)Ital.J.Pediatr.39:18)。症状的严重程度范围从结膜刺激、发红、肿胀到白内障和视力丧失。
过敏性眼病包括许多具有不同作用机制的特定临床实体。认为涉及IgE和非IgE介导的机制，以及多种细胞因子、趋化因子和信号传导途径(La Rosa,M.等人(2013)Ital.J.Pediatr.39:18)。在某些形式的过敏性眼病诸如特应性角膜结膜炎中观察到肥大细胞增生和嗜酸性粒细胞的存在(Morgan,S.J.等人(1991)Eye 5:729-735)，其可导致白内障和视觉丧失的发展。
仍然需要靶向过敏性眼病的潜在炎症的新型治疗方法。
本文中引用的所有参考文献，包括专利申请、专利出版物和科学文献均通过引用以其整体并入本文，如同每个单独的参考文献被具体地且单独地指示通过引用并入。
发明内容
为了满足该和其他需求，本公开文本尤其涉及通过给予与人Siglec-8结合的抗体和/或包含所述抗体的组合物来治疗或预防过敏性眼病(例如过敏性结膜炎、角膜结膜炎或巨***性结膜炎)的方法。
因此，本公开文本的某些方面涉及用于治疗或预防个体的过敏性眼病的方法，其包括向所述个体给予有效量的与人Siglec-8结合的抗体。
本公开文本的其他方面涉及用于治疗或预防个体的过敏性眼病的方法，其包括向所述个体给予有效量的包含与人Siglec-8结合的抗体的组合物。
在一些实施方案中，所述个体患有过敏性结膜炎。在一些实施方案中，所述个体患有季节性过敏性结膜炎。在一些实施方案中，所述个体患有常年性过敏性结膜炎。在一些实施方案中，所述个体患有特应性角膜结膜炎。在一些实施方案中，所述个体患有春季角膜结膜炎。在一些实施方案中，所述个体患有巨***性结膜炎。在一些实施方案中，所述个体使用隐形眼镜。在一些实施方案中，与未患过敏性眼病的个体相比，所述个体的至少一部分结膜中的炎症增加。在一些实施方案中，与未患过敏性眼病的个体相比，所述个体的至少一部分结膜中的肥大细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和/或淋巴细胞的数量增加。在一些实施方案中，从所述个体获得的结膜刮除物包括嗜酸性粒细胞。在一些实施方案中，与未患过敏性眼病的个体相比，从所述个体获得的血清或眼泪样品中的IgE增加。在一些实施方案中，向所述个体给予的使用过敏原进行的表皮或皮内过敏测试导致过敏反应。在一些实施方案中，与给予所述组合物或抗体之前的基线水平相比，所述个体中的一种或多种症状减少。在一些实施方案中，与给予所述组合物或抗体之前的基线水平相比，所述个体的以下项中一个或多个减少：结膜瘙痒、结膜发红、结膜肿胀、眼溢液、溃疡、流泪、眼睑肥大、痂皮、睑球粘连、眼周湿疹、睫毛脱落、畏光、角膜炎、巨***和白内障。在一些实施方案中，所述组合物或抗体通过静脉输注给予。在一些实施方案中，所述组合物或抗体通过皮下注射给予。
在本文所述的方法(例如上文)的一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H2，以及(iii)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；和/或其中所述轻链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-L2，以及(iii)包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ IDNO:6的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含选自SEQ ID NO:16或21的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包含重链Fc区，其包含人IgG Fc区。在一些实施方案中，所述人IgG Fc区包含人IgG1。在一些实施方案中，所述人IgG Fc区包含人IgG4。在一些实施方案中，所述抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:75的氨基酸序列；和/或轻链，所述轻链包含选自SEQ ID NO:76或77的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H2，以及(iii)包含选自SEQ ID NO:67-70的氨基酸序列的HVR-H3；和/或其中所述轻链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-L2，以及(iii)包含SEQ IDNO:71的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含选自SEQ ID NO:11-14的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含选自SEQ ID NO:23-24的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含选自SEQ ID NO:2-14的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含选自SEQ ID NO:16-24的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含选自SEQ ID NO:2-10的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含选自SEQ ID NO:16-22的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包含：(a)重链可变区，所述重链可变区包含：(1)包含选自SEQ ID NO:26-29的氨基酸序列的HC-FR1；(2)包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的HVR-H1；(3)包含选自SEQ ID NO:31-36的氨基酸序列的HC-FR2；(4)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H2；(5)包含选自SEQ ID NO:38-43的氨基酸序列的HC-FR3；(6)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；以及(7)包含选自SEQ IDNO:45-46的氨基酸序列的HC-FR4，和/或(b)轻链可变区，所述轻链可变区包含：(1)包含选自SEQ ID NO:48-49的氨基酸序列的LC-FR1；(2)包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的HVR-L1；(3)包含选自SEQ ID NO:51-53的氨基酸序列的LC-FR2；(4)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-L2；(5)包含选自SEQ ID NO:55-58的氨基酸序列的LC-FR3；(6)包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-L3；以及(7)包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的LC-FR4。在一些实施方案中，所述抗体包含：(a)重链可变区，所述重链可变区包含：(1)包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列的HC-FR1；(2)包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的HVR-H1；(3)包含氨基酸序列SEQID NO:34的HC-FR2；(4)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H2；(5)包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的HC-FR3；(6)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；以及(7)包含SEQID NO:45的氨基酸序列的HC-FR4；和/或(b)轻链可变区，所述轻链可变区包含：(1)包含SEQID NO:48的氨基酸序列的LC-FR1；(2)包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的HVR-L1；(3)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的LC-FR2；(4)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-L2；(5)包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的LC-FR3；(6)包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-L3；以及(7)包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的LC-FR4。在一些实施方案中，所述抗体包含：(a)重链可变区，所述重链可变区包含：(1)包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列的HC-FR1；(2)包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的HVR-H1；(3)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的HC-FR2；(4)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H2；(5)包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的HC-FR3；(6)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；以及(7)包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的HC-FR4；和/或(b)轻链可变区，所述轻链可变区包含：(1)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的LC-FR1；(2)包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的HVR-L1；(3)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的LC-FR2；(4)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-L2；(5)包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的LC-FR3；(6)包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-L3；以及(7)包含SEQ IDNO:60的氨基酸序列的LC-FR4。在一些实施方案中，所述抗体包含：重链可变区，所述重链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列的HVR-H2，以及(iii)包含SEQ ID NO:94的氨基酸序列的HVR-H3；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ IDNO:100的氨基酸序列的HVR-L2，以及(iii)包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列的HVR-L3；重链可变区，所述重链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:89的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ IDNO:92的氨基酸序列的HVR-H2，以及(iii)包含SEQ ID NO:95的氨基酸序列的HVR-H3；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:98的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列的HVR-L2，以及(iii)包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列的HVR-L3；或重链可变区，所述重链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:90的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:93的氨基酸序列的HVR-H2，以及(iii)包含SEQ ID NO:96的氨基酸序列的HVR-H3；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:102的氨基酸序列的HVR-L2，以及(iii)包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，所述抗体包含：重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:106的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:109的氨基酸序列；重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:107的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:110的氨基酸序列；重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:108的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ IDNO:111的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，所述抗体是IgG1抗体。在一些实施方案中，所述抗体已经被工程化以改善抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)活性。在一些实施方案中，所述抗体在Fc区中包含改善ADCC活性的至少一个氨基酸取代。在一些实施方案中，所述抗体的至少一条或两条重链是未岩藻糖基化的。在一些实施方案中，所述抗体是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。在一些实施方案中，所述抗体包含选自Fab、Fab'-SH、Fv、scFv和(Fab')2片段的抗体片段。
在本文所述的方法(例如上文)的一些实施方案中，所述抗体包含Fc区和与所述Fc区连接的N-糖苷连接的碳水化合物链，其中所述组合物中抗体的小于50％的N-糖苷连接的碳水化合物链含有岩藻糖残基。在一些实施方案中，所述组合物中抗体的N-糖苷连接的碳水化合物链基本上均不包含岩藻糖残基。在一些实施方案中，所述抗体与人Siglec-8和非人灵长类动物Siglec-8结合。在一些实施方案中，所述非人灵长类动物是狒狒。在一些实施方案中，所述抗体与人Siglec-8的结构域1中的表位结合，其中结构域1包含SEQ ID NO:112的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体与人Siglec-8的结构域3中的表位结合，其中结构域3包含SEQ ID NO:114的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体与和抗体4F11相同的表位结合。在一些实施方案中，所述抗体与人Siglec-8的结构域2或结构域3中的表位结合。在一些实施方案中，结构域2包含SEQ ID NO:113的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体与和抗体1C3相同的表位结合。在一些实施方案中，结构域3包含SEQ ID NO:114的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体与和抗体1H10的相同表位结合。在一些实施方案中，所述抗体与人Siglec-8的结构域1中的表位结合，并与抗体4F11竞争结合Siglec-8。在一些实施方案中，所述抗体不与抗体2E2竞争结合Siglec-8。在一些实施方案中，所述抗体不是抗体2E2。在一些实施方案中，结构域1包含SEQ ID NO:112的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包含重链Fc区，其包含人IgG Fc区。在一些实施方案中，所述人IgG Fc区包含人IgG1 Fc区。在一些实施方案中，所述人IgG1 Fc区是未岩藻糖基化的。在一些实施方案中，所述人IgG Fc区包含人IgG4 Fc区。在一些实施方案中，所述人IgG4 Fc区包含氨基酸取代S228P，其中所述氨基酸残基按照Kabat中的EU索引编号。在一些实施方案中，所述抗体耗尽血液嗜酸性粒细胞和/或抑制肥大细胞活化。
在本文所述的方法(例如上文)的一些实施方案中，所述组合物或抗体与用于治疗或预防过敏性眼病的一种或多种另外的治疗剂组合给予。在一些实施方案中，所述一种或多种另外的治疗剂选自皮质类固醇、抗组胺药、酮替芬、氮卓斯汀、依匹斯汀、贝司他汀(bepostatine)、环孢菌素(cyclosporine)和非甾体抗炎剂(NSAID)。
在本文所述的方法(例如上文)的一些实施方案中，所述个体是人类。在一些实施方案中，所述抗体在包含所述抗体和药学上可接受的载体的药物组合物中。
本公开文本的其他方面涉及一种制品，所述制品包含：包含如下组合物的药剂，所述组合物包含与人Siglec-8结合的抗体；以及包装插页，所述包装插页包含关于根据上述实施方案中任一项在有需要的个体中给予所述药剂的说明书。
应当理解，可以组合本文描述的各实施方案的一个、一些或所有性质以形成本公开文本的其他实施方案。本公开文本的这些和其他方面对于本领域技术人员而言将变得清楚。本公开文本的这些和其他实施方案由随后的具体实施方式进一步进行描述。
具体实施方式
I.定义
应当理解，本公开文本不限于特定的组合物或生物***，其当然可以变化。还应理解，本文所用术语仅用于描述特定实施方案的目的，而并不旨在是限制性的。如在本说明书和所附权利要求书中所用的，单数形式的“一个”、“一种”和“所述”包括复数指示物，除非上下文另有明确指示。因此，例如，提及“一种分子”任选地包括两种或更多种此类分子的组合等。
如本文所用的术语“约”是指本技术领域的技术人员容易知道的相应值的通常误差范围。本文对“约”某一值或参数的提及包括(并描述)针对所述值或参数本身的实施方案。
应当理解，本公开文本的方面和实施方案包括“包含方面和实施方案”、“由方面和实施方案组成”和“基本上由方面和实施方案组成”。
术语“抗体”包括多克隆抗体、单克隆抗体(包括具有免疫球蛋白Fc区的全长抗体)、具有多表位特异性的抗体组合物、多特异性抗体(例如，双特异性抗体、双抗体和单链分子)、以及抗体片段(例如，Fab、F(ab')2和Fv)。术语“免疫球蛋白”(Ig)在本文中与“抗体”可互换使用。
基本的4链抗体单元是异四聚体的糖蛋白，其由两条相同的轻(L)链和两条相同的重(H)链构成。IgM抗体由5个基本的异四聚体单元连同另外的称为J链的多肽组成，并且含有10个抗原结合位点，而IgA抗体包含2-5个基本的4链单元，其可以聚合以与J链相组合形成多价组合体(assemblage)。在IgG的情况下，所述4链单元通常为约150,000道尔顿。每条L链通过一个共价二硫键与H链连接，而两条H链通过一个或多个二硫键相互连接，这取决于H链同种型。每条H和L链还具有规则间隔的链内二硫桥键。每条H链在N末端具有可变结构域(VH)，随后是每条α和γ链的三个恒定结构域(CH)以及μ和ε同种型的四个CH结构域。每条L链在N末端具有可变结构域(VL)，随后是在其另一端的恒定结构域。所述VL与所述VH对齐并且所述CL与重链的首个恒定结构域(CH1)对齐。据信特定的氨基酸残基在轻链和重链可变结构域之间形成界面。VH和VL的配对一起形成单个抗原结合位点。关于不同类别抗体的结构和性质，参见例如Basic and Clinical Immunology,第8版,Daniel P.Sties,Abba I.Terr和Tristram G.Parsolw(编辑),Appleton&Lange,Norwalk,CT,1994,第71页和第6章。
基于它们恒定域的氨基酸序列，可以将来自任何脊椎动物物种的L链分配到两种清楚区分的类型(称为κ和λ)之一。取决于其重链恒定结构域(CH)的氨基酸序列，可以将免疫球蛋白分配到不同的类别或同种型。存在五类免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，具有分别称为α、δ、ε、γ和μ的重链。基于CH序列和功能的差异相对较小，γ和α类别被进一步分为亚类，例如，人表达以下亚类：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。IgG1抗体可以以多种多态性变体存在，称作同种异型(综述见Jefferis和Lefranc 2009.mAbs第1卷第4期1-7)，它们任一均适合于在本公开文本中使用。人群中的常见同种异型变体就是那些通过字母a、f、n、z表示的。
“分离的”抗体指已经从其产生环境(例如天然或重组)的组分中鉴定、分开和/或回收的抗体。在一些实施方案中，分离的多肽与来自其产生环境的所有其他组分都没有关联。其产生环境的污染组分(诸如由重组转染细胞产生的组分)是典型地会干扰抗体的研究、诊断或治疗用途的材料，并且可包括酶、激素和其他蛋白质溶质或非蛋白质溶质。在一些实施方案中，所述多肽被纯化：(1)至大于95重量％的抗体，如通过例如Lowry方法测定的，并且在一些实施方案中，至大于99重量％；(2)至通过使用转杯式测序仪足以获得N末端或内部氨基酸序列的至少15个残基的程度，或(3)至使用考马斯蓝或银染在非还原或还原条件下通过SDS-PAGE测得的同质性。分离的抗体包括重组细胞内原位抗体，因为抗体的天然环境的至少一种组分将不存在。然而，分离的多肽或抗体通常通过至少一个纯化步骤来制备。
如本文所用的术语“单克隆抗体”是指从基本上同质的抗体群获得的抗体，即，除了可能少量存在的可能的天然存在的突变和/或翻译后修饰(例如，异构化、酰胺化)之外，构成该群体的各个抗体是相同的。在一些实施方案中，单克隆抗体在重链和/或轻链处具有C末端切割。例如，在重链和/或轻链的C末端切割1、2、3、4或5个氨基酸残基。在一些实施方案中，所述C末端切割从重链去除C末端赖氨酸。在一些实施方案中，单克隆抗体在重链和/或轻链处具有N末端切割。例如，在重链和/或轻链的N末端切割1、2、3、4或5个氨基酸残基。在一些实施方案中，单克隆抗体是高度特异性的，针对单一抗原性位点。在一些实施方案中，单克隆抗体是高度特异性的，针对多个抗原性位点(诸如双特异性抗体或多特异性抗体)。修饰语“单克隆的”指示抗体的特征是从基本上同质的抗体群获得，并且不应解释为需要通过任何特定方法产生抗体。例如，有待依照本公开文本使用的单克隆抗体可通过多种技术来制备，包括例如杂交瘤法、重组DNA法、噬菌体展示技术、及用于在具有部分或全部的人免疫球蛋白基因座或编码人免疫球蛋白序列的基因的动物中生成人或类人抗体的技术。
术语“裸抗体”指未与细胞毒性部分或放射性标记缀合的抗体。
术语“全长抗体”、“完整抗体(intact antibody)”或“整个抗体(wholeantibody)”可互换使用，以指代基本上完整形式的抗体，与抗体片段相反。具体地，整个抗体包括具有重链和轻链(包括Fc区)的抗体。恒定结构域可以是天然序列恒定结构域(例如，人天然序列恒定结构域)或其氨基酸序列变体。在一些情况下，所述完整抗体可以具有一种或多种效应物功能。
“抗体片段”包含完整抗体的一部分、所述完整抗体的抗原结合区和/或可变区。抗体片段的例子包括Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段；双抗体；线性抗体(参见美国专利号5,641,870，实施例2；Zapata等人，Protein Eng.8(10):1057-1062[1995])；单链抗体分子及由抗体片段形成的多特异性抗体。
抗体的木瓜蛋白酶消化产生两个相同的抗原结合片段，称为“Fab”片段，和残留的“Fc”片段，这一名称反映了容易结晶的能力。Fab片段由整条L链连同H链的可变区结构域(VH)和一条重链的首个恒定结构域(CH1)组成。就抗原结合而言，每个Fab片段是单价的，即，它具有单个抗原结合位点。抗体的胃蛋白酶处理产生单个大的F(ab')2片段，其大致对应于具有不同抗原结合活性的两个二硫键连接的Fab片段，并且仍然能够交联抗原。Fab'片段与Fab片段的不同之处在于在所述CH1结构域的羧基末端具有一些另外的残基，包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab'-SH是本文中Fab'的名称，其中恒定结构域的一个或多个半胱氨酸残基带有游离巯基。F(ab')2抗体片段最初是作为Fab'片段对产生的，它们之间具有铰链半胱氨酸。抗体片段的其他化学偶联也是已知的。
Fc片段包含通过二硫键保持在一起的两条H链的羧基末端部分。抗体的效应物功能由Fc区中的序列决定，该区域也由在某些类型的细胞上发现的Fc受体(FcR)识别。
“Fv”是含有完全抗原识别和结合位点的最小抗体片段。此片段由紧密非共价缔合的一个重链可变区结构域和一个轻链可变区结构域的二聚体组成。从这两个结构域的折叠中发出六个高变环(各自来自H和L链的3个环)，其贡献氨基酸残基用于抗原结合并向抗体赋予抗原结合特异性。然而，即使单个可变结构域(或仅包含三个对抗原具有特异性的HVR的一半Fv)也具有识别和结合抗原的能力，尽管其亲和力低于整个结合位点。
“单链Fv”，也缩写成“sFv”或“scFv”，是包含连接成单个多肽链的VH和VL抗体结构域的抗体片段。在一些实施方案中，sFv多肽还包含VH和VL结构域之间的多肽接头，其使sFv能够形成用于抗原结合的希望的结构。关于sFv的综述，参见Pluckthun,The Pharmacologyof Monoclonal Antibodies,第113卷,Rosenburg和Moore编辑,Springer-Verlag,NewYork,第269-315页(1994)。
本公开文本的抗体的“功能片段”包含完整抗体的一部分，通常包括所述完整抗体的抗原结合或可变区或保留或具有修饰的FcR结合能力的抗体的Fv区。抗体片段的例子包括线性抗体、单链抗体分子和由抗体片段形成的多特异性抗体。
本文的单克隆抗体具体包括“嵌合”抗体(免疫球蛋白)，其中重链和/或轻链的一部分与衍生自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而所述重链和/或轻链的其余部分与衍生自另一物种或属于另一种抗体类别或亚类的抗体以及此类抗体的片段中的相应序列相同或同源，只要它们表现出希望的生物活性(美国专利号4,816,567；Morrison等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851-6855(1984))。本文中的目的嵌合抗体包括
Figure BDA0002353550440000101
抗体，其中该抗体的抗原结合区衍生自通过例如用目的抗原免疫猕猴而产生的抗体。如本文所用，“人源化抗体”用作“嵌合抗体”的子集。
非人(例如鼠类)抗体的“人源化”形式是包含衍生自非人免疫球蛋白的最小序列的嵌合抗体。在一个实施方案中，人源化抗体是人免疫球蛋白(受体抗体)，其中来自受体的HVR的残基被来自具有希望的特异性、亲和力和/或能力的诸如小鼠、大鼠、兔或非人灵长类动物的非人物种(供体抗体)的HVR的残基替代。在一些情况下，人免疫球蛋白的FR残基被相应的非人残基替代。此外，人源化抗体可以包含在受体抗体或供体抗体中未发现的残基。可以进行这些修饰以进一步完善抗体性能，诸如结合亲和力。通常，人源化抗体将包含基本上所有至少一个(并且典型地两个)可变结构域，其中所有或基本上所有高变环对应于非人免疫球蛋白序列的那些，并且所有或基本上所有FR区是人免疫球蛋白序列的那些，尽管所述FR区可以包括一个或多个单个FR残基取代，其改善抗体性能，诸如结合亲和力、异构化、免疫原性等。在一些实施方案中，FR中这些氨基酸取代的数目是在H链中不超过6，并且在L链中不超过3。所述人源化抗体任选地也将包含免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分，典型地是人免疫球蛋白恒定区的至少一部分。关于进一步的细节，参见例如Jones等人,Nature321:522-525(1986)；Riechmann等人,Nature332:323-329(1988)；以及Presta,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596(1992)。还可参见例如Vaswani和Hamilton,Ann.Allergy,Asthma&Immunol.1:105-115(1998)；Harris,Biochem.Soc.Transactions23:1035-1038(1995)；Hurle和Gross,Curr.Op.Biotech.5:428-433(1994)；和美国专利号6,982,321和7,087,409。在一些实施方案中，人源化抗体针对单一抗原性位点。在一些实施方案中，人源化抗体针对多个抗原性位点。一种替代性人源化方法描述于美国专利号7,981,843和美国专利申请公开号2006/0134098。
抗体的“可变区”或“可变结构域”是指抗体重链或轻链的氨基末端结构域。重链和轻链的可变结构域可以分别称为“VH”和“VL”。这些结构域通常是抗体中最可变的部分(相对于同一类别的其他抗体)并含有抗原结合位点。
当在本文中使用时，术语“高变区”、“HVR”或“HV”是指抗体可变结构域的区域，其在序列上是高变的和/或形成结构上确定的环。通常，抗体包含六个HVR：三个在VH中(H1、H2、H3)，三个在VL中(L1、L2、L3)。在天然抗体中，H3和L3展示这六个HVR的最大多样性，而且认为特别是H3在赋予抗体完善特异性中发挥独特作用。参见例如Xu等人Immunity 13:37-45(2000)；Johnson和Wu,Methods in Molecular Biology 248:1-25(Lo编辑,HumanPress,Totowa,NJ,2003))。事实上，仅由重链组成的天然存在的骆驼科动物抗体在不存在轻链时是有功能的且稳定的。参见例如Hamers-Casterman等人,Nature 363:446-448(1993)和Sheriff等人,Nature Struct.Biol.3:733-736(1996)。
本文使用并且涵盖许多HVR描绘。作为Kabat互补决定区(CDR)的HVR是以序列变异性为基础的，而且是最常用的(Kabat等人,Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest,第5版Public Health Service,National Institute of Health,Bethesda,MD(1991))。Chothia HVR替代地指结构环的位置(Chothia and Lesk J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。“接触(contact)”HVR是基于对可用的复杂晶体结构的分析。下文示出了来自这些HVR中每一个的残基。
Figure BDA0002353550440000121
除非另有指示，否则可变结构域残基(HVR残基和框架区残基)是根据上文Kabat等人编号的。
“框架”或“FR”残基是除如本文定义的HVR残基之外的那些可变结构域残基。
表述“如Kabat中的可变结构域残基编号”或“如Kabat中的氨基酸位置编号”及其变体是指上文Kabat等人中的用于抗体的编译的重链可变结构域或轻链可变结构域的编号***。使用此编号***，实际线性氨基酸序列可含有较少或另外的氨基酸，其对应于可变结构域的FR或HVR的缩短或***。例如，重链可变结构域可以包括在H2的残基52之后的单个氨基酸***(根据Kabat的残基52a)和重链FR残基82之后***的残基(例如，根据Kabat的残基82a、82b和82c等)。通过在抗体序列同源性区域与“标准”Kabat编号序列比对，可以确定给定抗体的残基的Kabat编号。
出于本文目的，“受体人框架”是包含衍生自人免疫球蛋白框架或人共有框架的VL或VH框架的氨基酸序列的框架。“衍生自”人免疫球蛋白框架或人共有框架的受体人框架可以包含其相同的氨基酸序列，或者它可以含有预先存在的氨基酸序列变化。在一些实施方案中，预先存在的氨基酸变化的数目为10或更少、9或更少、8或更少、7或更少、6或更少、5或更少、4或更少、3或更少或者2或更少。
关于参考多肽序列的“氨基酸序列同一性百分比(％)”定义为在用以实现最大百分比序列同一性并且不将任何保守取代视为序列同一性的一部分而比对序列和引入缺口(如果需要)后，候选序列中与所述参考多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。用于确定氨基酸序列同一性百分比的目的的比对可以本领域技术范围内的多种方式来实现，例如，使用公众可获得的计算机软件，诸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可以确定用于比对序列的适当参数，包括对所比较序列的全长实现最大比对所需的任何算法。例如，给定氨基酸序列A对/与/相对于给定氨基酸序列B的氨基酸序列一致性％(或者这可以用短语表示为对/与/相对于给定氨基酸序列B具有或包含特定％氨基酸序列一致性的给定氨基酸序列A)计算如下：
分数X/Y乘100
其中X是由序列在该程序的A和B比对中评分为相同匹配的氨基酸残基数，且其中Y是B中的氨基酸残基总数。应当理解，若氨基酸序列A的长度与氨基酸序列B的长度不相等，则A相对于B的氨基酸序列同一性％将不等于B相对于A的氨基酸序列同一性％。
与特定多肽或特定多肽上的表位“结合”或“特异性结合”或者对其“特异”的抗体是与该特定多肽或特定多肽上的表位结合且基本上不与任何其他多肽或多肽表位结合的抗体。在一些实施方案中，如通过本领域已知方法(例如酶联免疫吸附测定(ELISA))测量的，本文所述抗Siglec-8抗体(例如与人Siglec-8结合的抗体)对无关的非Siglec-8多肽的结合小于所述抗体对Siglec-8的结合的约10％。在一些实施方案中，与Siglec-8结合的抗体(例如与人Siglec-8结合的抗体)具有≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤2nM、≤1nM、≤0.7nM、≤0.6nM、≤0.5nM、≤0.1nM、≤0.01nM或≤0.001nM(例如10-8M或更少，例如10-8M至10-13M，例如10-9M至10-13M)的解离常数(Kd)。
术语“抗Siglec-8抗体”或“与人Siglec-8结合的抗体”指与人Siglec-8的多肽或表位结合而基本上不与无关的非Siglec-8多肽的任何其他多肽或表位结合的抗体。
如本文所用，术语“Siglec-8”指人Siglec-8蛋白。所述术语还包括天然存在的Siglec-8变体，包括剪接变体或等位基因变体。一个示例性人Siglec-8的氨基酸序列示于SEQ ID NO:72中。另一个示例性人Siglec-8的氨基酸序列示于SEQ ID NO:73中。在一些实施方案中，人Siglec-8蛋白包含与免疫球蛋白Fc区融合的人Siglec-8细胞外结构域。一个示例性的融合至免疫球蛋白Fc区的人Siglec-8细胞外结构域的氨基酸序列示于SEQ IDNO:74中。SEQ ID NO:74中下划线的氨基酸序列指示Siglec-8 Fc融合蛋白氨基酸序列的Fc区。
人Siglec-8氨基酸序列
GYLLQVQELVTVQEGLCVHVPCSFSYPQDGWTDSDPVHGYWFRAGDRPYQDAPVATNNPDREVQAETQGRFQLLGDIWSNDCSLSIRDARKRDKGSYFFRLERGSMKWSYKSQLNYKTKQLSVFVTALTHRPDILILGTLESGHSRNLTCSVPWACKQGTPPMISWIGASVSSPGPTTARSSVLTLTPKPQDHGTSLTCQVTLPGTGVTTTSTVRLDVSYPPWNLTMTVFQGDATASTALGNGSSLSVLEGQSLRLVCAVNSNPPARLSWTRGSLTLCPSRSSNPGLLELPRVHVRDEGEFTCRAQNAQGSQHISLSLSLQNEGTGTSRPVSQVTLAAVGGAGATALAFLSFCIIFIIVRSCRKKSARPAAGVGDTGMEDAKAIRGSASQGPLTESWKDGNPLKKPPPAVAPSSGEEGELHYATLSFHKVKPQDPQGQEATDSEYSEIKIHKRETAETQACLRNHNPSSKEVRG(SEQ ID NO:72)
人Siglec-8氨基酸序列
GYLLQVQELVTVQEGLCVHVPCSFSYPQDGWTDSDPVHGYWFRAGDRPYQDAPVATNNPDREVQAETQGRFQLLGDIWSNDCSLSIRDARKRDKGSYFFRLERGSMKWSYKSQLNYKTKQLSVFVTALTHRPDILILGTLESGHPRNLTCSVPWACKQGTPPMISWIGASVSSPGPTTARSSVLTLTPKPQDHGTSLTCQVTLPGTGVTTTSTVRLDVSYPPWNLTMTVFQGDATASTALGNGSSLSVLEGQSLRLVCAVNSNPPARLSWTRGSLTLCPSRSSNPGLLELPRVHVRDEGEFTCRAQNAQGSQHISLSLSLQNEGTGTSRPVSQVTLAAVGGAGATALAFLSFCIIFIIVRSCRKKSARPAAGVGDTGMEDAKAIRGSASQGPLTESWKDGNPLKKPPPAVAPSSGEEGELHYATLSFHKVKPQDPQGQEATDSEYSEIKIHKRETAETQACLRNHNPSSKEVRG(SEQ ID NO:73)
Siglec-8 Fc融合蛋白氨基酸序列
GYLLQVQELVTVQEGLCVHVPCSFSYPQDGWTDSDPVHGYWFRAGDRPYQDAPVATNNPDREVQAETQGRFQLLGDIWSNDCSLSIRDARKRDKGSYFFRLERGSMKWSYKSQLNYKTKQLSVFVTALTHRPDILILGTLESGHSRNLTCSVPWACKQGTPPMISWIGASVSSPGPTTARSSVLTLTPKPQDHGTSLTCQVTLPGTGVTTTSTVRLDVSYPPWNLTMTVFQGDATASTALGNGSSLSVLEGQSLRLVCAVNSNPPARLSWTRGSLTLCPSRSSNPGLLELPRVHVRDEGEFTCRAQNAQGSQHISLSLSLQNEGTGTSRPVSQVTLAAVGGIEGRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPK PKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCK VSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVL DSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:74)
“诱导凋亡”的或“凋亡性的”抗体指那些根据标准凋亡测定而确定的，诱导程序性细胞死亡的抗体，所述测定诸如膜联蛋白V结合、DNA断裂、细胞收缩、内质网扩张、细胞断裂、和/或膜囊泡(称作凋亡小体)形成。例如，本公开文本的抗Siglec-8抗体(例如与人Siglec-8结合的抗体)的凋亡活性可通过膜联蛋白V对细胞染色来示出。
抗体“效应物功能”指那些归因于抗体Fc区(天然序列Fc区或氨基酸序列变体Fc区)且随抗体同种型而变化的生物学活性。抗体效应物功能的例子包括：C1q结合和补体依赖性细胞毒性；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)；吞噬作用；细胞表面受体(例如B细胞受体)下调；和B细胞活化。
“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”或“ADCC”指其中结合到某些细胞毒性细胞(例如自然杀伤(NK)细胞、嗜中性粒细胞和巨噬细胞)上存在的Fc受体(FcR)上的分泌Ig使得这些细胞毒性效应细胞能够与携带抗原的靶细胞特异性结合，随后用细胞毒素杀死靶细胞的细胞毒性形式。所述抗体“武装”细胞毒性细胞，而且是通过此机制杀死靶细胞所要求的。介导ADCC的原代细胞NK细胞仅表达FcγRIII，而单核细胞表达FcγRI、FcγRII和FcγRIII。Ravetch和Kinet,Annu.Rev.Immunol.9:457-92(1991)的第464页表3总结了造血细胞上的Fc表达。在一些实施方案中，本文所述抗Siglec-8抗体(例如与人Siglec-8结合的抗体)增强ADCC。为了评估目的分子的ADCC活性，可进行体外ADCC测定，诸如美国专利号5,500,362或5,821,337所述的。用于此类测定的有用效应细胞包括外周血单核细胞(PBMC)和自然杀伤(NK)细胞。可替代地或另外地，可以在体内(例如在动物模型中，诸如Clynes等人,PNASUSA 95:652-656(1998)中公开的动物模型中)评估目的分子的ADCC活性。改变ADCC活性和其他抗体性质的其他Fc变体包括Ghetie等人,Nat Biotech.15:637-40,1997；Duncan等人,Nature 332:563-564,1988；Lund等人,J.Immunol 147:2657-2662,1991；Lund等人,MolImmunol 29:53-59,1992；Alegre等人,Transplantation 57:1537-1543,1994；Hutchins等人,Proc Natl.Acad Sci USA92:11980-11984,1995；Jefferis等人,Immunol Lett.44:111-117,1995；Lund等人,FASEB J9:115-119,1995；Jefferis等人,Immunol Lett 54:101-104,1996；Lund等人,J Immunol 157:4963-4969,1996；Armour等人,Eur J Immunol29:2613-2624,1999；Idusogie等人,J Immunol 164:4178-4184,200；Reddy等人,J Immunol164:1925-1933,2000；Xu等人,Cell Immunol 200:16-26,2000；Idusogie等人,J Immunol166:2571-2575,2001；Shields等人,J Biol Chem 276:6591-6604,2001；Jefferis等人,Immunol Lett 82:57-65.2002；Presta等人,Biochem Soc Trans 30:487-490,2002；Lazar等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 103:4005-4010,2006；美国专利号5,624,821；5,885,573；5,677,425；6,165,745；6,277,375；5,869,046；6,121,022；5,624,821；5,648,260；6,194,551；6,737,056；6,821,505；6,277,375；7,335,742和7,317,091披露的那些。
本文的术语“Fc区”用于定义免疫球蛋白重链的C末端区，包括天然序列Fc区和变体Fc区。尽管免疫球蛋白重链的Fc区的边界可以变化，但是人IgG重链Fc区通常被定义为从位置Cys226或从Pro230处的氨基酸残基延伸至其羧基末端。用于本公开文本的抗体的合适的天然序列Fc区包括人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。可以引入单个氨基酸取代(根据Kabat编号的S228P；称为IgG4Pro)以消除在重组IgG4抗体中观察到的异质性。参见Angal,S.等人(1993)Mol Immunol 30,105-108。
“未岩藻糖基化的”或“缺乏岩藻糖的”抗体指包含如下Fc区的糖基化抗体变体，其中附接至Fc区的碳水化合物结构具有减少的岩藻糖或缺乏岩藻糖。在一些实施方案中，具有减少的岩藻糖或缺乏岩藻糖的抗体具有改善的ADCC功能。相对于细胞系中产生的相同抗体上岩藻糖的量，未岩藻糖基化的或缺乏岩藻糖的抗体具有减少的岩藻糖。在一些实施方案中，本文中考虑的未岩藻糖基化的或缺乏岩藻糖的抗体组合物是如下组合物，其中少于约50％的附接至组合物中抗体的Fc区的N连接的聚糖包含岩藻糖。
术语“岩藻糖基化”或“岩藻糖基化的”指附接至抗体的肽主链的寡糖内存在岩藻糖残基。具体而言，岩藻糖基化的抗体在附接至抗体Fc区的N连接的寡糖之一或二者中最内部N-乙酰基葡糖胺(GlcNAc)残基处(例如人IgG1 Fc结构域的位置Asn 297(Fc区残基的EU编号))包含α(l,6)连接的岩藻糖。由于免疫球蛋白中的微小序列变异，Asn297也可以位于第297位上游或下游约+3个氨基酸，即在第294位与第300位之间。
“岩藻糖基化的程度”是岩藻糖基化的寡糖相对于通过本领域已知方法鉴定的所有寡糖的百分比，例如在经N-糖苷酶F治疗的抗体组合物中通过基质辅助激光解吸-电离飞行时间质谱术(MALDI TOF MS)评估的。在“完全岩藻糖基化的抗体”的组合物中，基本上所有寡糖包含岩藻糖残基，即是岩藻糖基化的。在一些实施方案中，完全岩藻糖基化的抗体的组合物具有至少约90％的岩藻糖基化的程度。因此，此类组合物中的单个抗体典型地在Fc区的两个N连接的寡糖的每一个中包含岩藻糖残基。相反，在“完全未岩藻糖基化的”抗体的组合物中，寡糖基本上均不是岩藻糖基化的，而且此类组合物中的单个抗体在Fc区的两个N连接的寡糖的每一个中不含有岩藻糖残基。在一些实施方案中，完全未岩藻糖基化的抗体的组合物具有少于约10％的岩藻糖基化的程度。在“部分岩藻糖基化的抗体”的组合物中，只有部分寡糖包含岩藻糖。此类组合物中的单个抗体在Fc区的N连接的寡糖无一、任一或二者中可包含岩藻糖残基，前提是所述组合物并非包含在Fc区的N连接的寡糖中缺乏岩藻糖残基的基本上所有单个抗体，也并非包含在Fc区的N连接的寡糖二者中含有岩藻糖残基的基本上所有单个抗体。在一个实施方案中，部分岩藻糖基化的抗体的组合物具有约10％至约80％(例如约50％至约80％、约60％至约80％、或约70％至约80％)的岩藻糖基化的程度。
如本文所用，“结合亲和力”指在分子(例如抗体)的单一结合位点与其结合配偶体(例如抗原)之间非共价相互作用的强度。在一些实施方案中，抗体对Siglec-8(其可以是二聚体，诸如本文所述的Siglec-8-Fc融合蛋白)的结合亲和力通常可以通过解离常数(Kd)来表示。亲和力可以通过本领域已知的常见方法(包括本文所述的那些)测量。
如本文所用，“结合亲合力”指分子(例如抗体)的多个结合位点与其结合配偶体(例如抗原)的结合强度。
编码本文的抗体的“分离的”核酸分子是已经鉴定且与生成它的环境中通常与之相关的至少一种污染核酸分子分开的核酸分子。在一些实施方案中，所述分离的核酸与同产生环境相关的所有组分都没有关联。编码本文的多肽和抗体的分离的核酸分子的形式不同于其在自然界中发现的形式或环境。因此，分离的核酸分子与编码本文的天然存在于细胞中的多肽和抗体的核酸不同。
术语“药物配制品”指使得活性成分的生物活性有效的形式，并且不含对所述配制品所给予的个体具有不可接受的毒性的另外的组分的配制品。此类配制品是无菌的。
本文所用的“载体”包括药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂，它们在所采用的剂量和浓度对暴露于其的细胞或哺乳动物是无毒的。通常，生理学上可接受的载体是pH缓冲水溶液。生理学上可接受的载体的例子包括缓冲液，诸如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖醇，诸如甘露醇或山梨醇；成盐抗衡离子，诸如钠；和/或非离子表面活性剂，诸如TWEENTM、聚乙二醇(PEG)和PLURONICSTM。
如本文所用，术语“治疗(treatment和treating)”指设计用于在临床病理学的进程中改变所治疗个体或细胞的自然进程的临床干预。希望的治疗效果包括降低疾病进展速率、改善或缓和疾病状态、消退或者预后改进。如果一种或多种与疾病(例如过敏性眼病)相关的症状得到减轻或消除，则说例如个体得到成功“治疗”。例如，如果治疗导致提高患有疾病的那些人的生活质量、减少治疗疾病所需的其他药物的剂量、减少疾病复发的频率、减轻疾病的严重性、延缓疾病的发展或进展，和/或延长个体的存活时间，则个体成功地得到“治疗”。
如本文所用，“与……结合”或“与……组合”是指除了另一种治疗模态之外还给予一种治疗模态。因此，“与……结合”或“与……组合”是指在向个体给予另一种治疗模态之前、期间或之后给予一种治疗模态。
如本文所用，术语“预防(prevention和preventing)”包括就个体中疾病的发生或复发而言提供防范。个体可能易患疾病、对疾病易感、或有患疾病的风险但尚未被诊断出患有该疾病。在一些实施方案中，使用本文所述的抗Siglec-8抗体(例如与人Siglec-8结合的抗体)来延缓疾病(例如过敏性眼病)的发展。
如本文所用，“有风险”发生疾病(例如过敏性眼病)的个体可以具有或没有可检测疾病或疾病症状，而且可以在本文所述的治疗方法之前展示或不展示可检测疾病或疾病症状。如本领域已知，“有风险”表示个体具有一项或多项风险因素，它们是与病症(例如过敏性眼病)的发展有关的可测量参数。具有一项或多项这些风险因素的个体具有比没有一项或多项这些风险因素的个体更高的疾病发展概率。
“有效量”指至少在必需的剂量和时间上有效实现希望的或指示的效果(包括治疗或预防结果)的量。有效量可在一次或多次给予中提供。“治疗有效量”至少是实现特定疾病的可测量改善所需的最小浓度。本文的治疗有效量可以根据诸如患者的疾病状态、年龄、性别和体重及所述抗体在个体中引发希望的应答的能力等因素而变化。治疗有效量还可以是其中治疗上有益的效果超过抗体的任何毒性或有害影响的量。“预防有效量”指在必需的剂量和时间上有效实现希望的预防结果的量。典型地但不是必需地，因为在疾病之前或疾病的早期阶段在个体中使用预防剂量，所以预防有效量可小于治疗有效量。
“长期”给予指与短期模式相反，以连续模式给予一种或多种药剂，从而将初始治疗效果(活性)维持较长一段时间。“间歇”给予指不是无间断连续进行的治疗，而是本质上周期性的。
术语“包装插页”用于指通常包括在治疗产品的商业包装中的说明书，所述说明书包含关于使用此类治疗产品的适应症、用法、剂量、给予、组合疗法、禁忌症和/或警告的信息。
如本文所用，“个体”或“受试者”是哺乳动物。出于治疗目的的“哺乳动物”包括人、家畜和农场动物，以及动物园、运动或宠物动物，诸如狗、马、兔、牛、猪、仓鼠、沙鼠、小鼠、雪貂、大鼠、猫等。在一些实施方案中，所述个体或受试者是人。
II.方法
本文提供了用于治疗和/或预防个体中的过敏性眼病(例如过敏性结膜炎、角膜结膜炎或巨***性结膜炎)的方法，其包括向所述个体给予有效量的本文所述的与人Siglec-8结合的抗体(例如，抗Siglec-8抗体)或包含所述抗体的组合物。在一些实施方案中，所述抗体在包含所述抗体和药学上可接受的载体的药物组合物中。在一些实施方案中，所述个体是人。
A.过敏性眼病
本公开文本的某些方面涉及患有过敏性眼病(例如，过敏性结膜炎、角膜结膜炎或巨***性结膜炎)的个体。在一些实施方案中，所述个体患有过敏性结膜炎。在一些实施方案中，所述个体患有特应性角膜结膜炎。在一些实施方案中，所述个体患有春季角膜结膜炎。在一些实施方案中，所述个体患有巨***性结膜炎。
在一些实施方案中，所述个体已被诊断患有过敏性结膜炎。在一些实施方案中，所述个体处于患过敏性结膜炎的风险下。过敏性结膜炎是指以结膜中的I型超敏反应(即，IgE介导的)的过敏反应为特征的多种过敏性眼病。季节性和常年性形式都是已知的，包括季节性过敏性结膜炎、常年性过敏性结膜炎(例如，特应性结膜炎或特应性角膜结膜炎)和春季角膜结膜炎。
在一些实施方案中，所述个体已经被诊断患有特应性或春季角膜结膜炎或处于患特应性或春季角膜结膜炎的风险下。两种形式的角膜结膜炎都以眼表的过敏性炎症为特征，包括瘙痒、发红、肿胀和溢液。春季角膜结膜炎患者典型地在上睑结膜上也出现巨***，而特应性角膜结膜炎可能存在或可能不存在巨***(La Rosa,M.等人(2013)Ital.J.Pediatr.39:18)。春季角膜结膜炎仅在温暖的天气中可见，而特应性角膜结膜炎几乎没有观察到季节变化。
在一些实施方案中，该个体已被诊断患有巨***结膜炎或处于患巨***结膜炎的风险下。巨***结膜炎的特征是***肥大(例如上睑结膜)。通常，刺激和IgE的产生是由于隐形眼镜的使用而引起的，例如，由于蛋白质积累和/或机械刺激。
过敏性眼病的症状可包括但不限于结膜瘙痒、结膜发红、结膜肿胀、眼溢液、溃疡(例如角膜溃疡)、流泪、眼睑肥大、痂皮、睑球粘连、眼周湿疹、睫毛脱落、畏光、角膜炎、巨***、眼痛、异物感和白内障。
本文可互换使用的术语“参考”或“参考值”可以指在未患过敏性眼病的个体(或在这类个体的组中)的值或症状的测量或表征。“参考值”可以是绝对值；相对值；具有上限和/或下限的值；一系列的值；平均值；中位值；均值；或与基线值相比的值。类似地，“基线值”可以是绝对值；相对值；具有上限和/或下限的值；一系列的值；平均值；中位值；均值；或与参考值相比的值。可以从一个个体、两个不同的个体或一组个体(例如，一组两个、三个、四个、五个或更多个个体)获得参考值。在一些实施方案中，参考值指本领域中的标准或基准值。在一些实施方案中，参考值指从一个或多个个体(例如未患过敏性眼病)重新计算的值。
在一些实施方案中，从所述个体获得的结膜刮除物包括嗜酸性粒细胞。检查结膜刮除物中是否存在嗜酸性粒细胞可用于诊断过敏性眼病(例如，春季角膜结膜炎，如Bonini,S.等人(2004)Eye 18:345-351所述)；然而，嗜酸性粒细胞浸润可存在于不能被浅表刮擦触及的较深结膜组织中(参见Abelson,M.B.等人(1983)Arch.Ophthalmol.101:555-556)。
在一些实施方案中，与未患过敏性眼病的个体相比，从所述个体获得的血清样品中的IgE增加。在一些实施方案中，与未患过敏性眼病的个体相比，从所述个体获得的眼泪样品中的IgE增加。测量眼泪样品中IgE水平的技术在本领域中是已知的；参见例如总泪液IgE的
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免疫色谱测试(Hitachi Chemical Co.)。用于测量血清样品中IgE水平的技术在本领域中也是已知的(例如，夹心放射免疫测定)，并且已经描述了从各个年龄段的患者获得的血清样品中平均IgE浓度的正常范围(参见Homburger HA:Allergicdiseases.Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods.第21版.NewYork,WB Saunders Company,2007,第961-971页)。
在一些实施方案中，向所述个体给予的使用过敏原进行的表皮或皮内过敏测试导致过敏反应。用于表皮(例如皮肤点刺、划痕、穿刺或斑贴测试)和皮内(例如真皮内)过敏测试的方法是本领域已知的。典型地，将少量的一种或多种过敏原(例如，通过表皮或皮内途径，诸如针刺或注射)引入皮肤的一小区域，然后由医师监测过敏反应(例如，发红、肿胀、瘙痒、形成风团等)。在一些实施方案中，过敏反应指示IgE介导的反应。对于过敏性眼病，可以关于对空气中的过敏原(包括但不限于尘螨、宠物皮屑和花粉)的超敏反应进行表皮或皮内过敏测试。
B.对治疗的反应
在一些实施方案中，与给予所述抗体之前的基线水平相比，向本文所述的个体(例如，患有过敏性眼病的个体)给予与人Siglec-8结合的有效量的本文所述的抗体(例如抗Siglec-8抗体)减轻了个体的一种或多种(例如，一种或多种、两种或更多种、三种或更多种、四种或更多种等)症状。
本文可互换使用的术语“基线”或“基线值”可指在给予疗法(例如抗Siglec-8抗体)之前或在给予疗法开始时症状的测量或表征。可以将基线值与参考值进行比较，以确定本文中考虑的过敏性眼病症状的减轻或改善。可以从一个个体、两个不同的个体或一组个体(例如，一组两个、三个、四个、五个或更多个个体)获得参考值和/或基线值。
患有过敏性眼病的个体对治疗的反应可以通过本领域已知的方法来评估。例如，对患有过敏性眼病(例如过敏性结膜炎、角膜结膜炎或巨***性结膜炎)的个体的治疗的反应可以是本文所述的其任何症状的减轻或改善。过敏性眼病的症状可包括但不限于结膜瘙痒、结膜发红、结膜肿胀、眼溢液、溃疡、流泪、眼睑肥大、痂皮、睑球粘连、眼周湿疹、睫毛脱落、畏光、角膜炎、巨***和白内障。对治疗的反应可能导致个体过敏性眼病(例如过敏性结膜炎、角膜结膜炎或巨***性结膜炎)的完全缓解(CR)、部分缓解(PR)或临床改善(CI)。
用于测量对过敏性眼病(例如过敏性结膜炎、角膜结膜炎或巨***性结膜炎)的治疗的反应的技术是本领域已知的。例如，用于测量对治疗的反应的技术可以包括但不限于一种或多种临床症状(例如，如上文所述)的减轻、结膜刮除术(例如，用于检测嗜酸性粒细胞)、以及血清和/或眼泪样品中的IgE测试。在一些实施方案中，过敏性结膜炎症状(ACS)问卷用于评估与过敏性眼病(例如过敏性结膜炎、角膜结膜炎或巨***性结膜炎)相关的症状。
C.给药
为了预防或治疗疾病，活性剂的适当剂量将取决于待治疗的疾病类型(如上文所定义的)、疾病的严重程度和病程、给予药剂用于预防还是治疗目的、先前疗法、个体的临床史和对药剂的反应以及主治医师的判断。所述药剂适合于在一次或一系列的治疗中给予所述个体。在一些实施方案中，本文所述的抗Siglec-8抗体(例如与人Siglec-8结合的抗体)的给予之间的间隔为约一个月或更长。在一些实施方案中，给予之间的间隔为约两个月、约三个月、约四个月、约五个月、约六个月或更长。如本文所用，给予之间的间隔指一次给予抗体和下一次给予抗体之间的时间段。如本文所用，约一个月的间隔包括四周。因此，在一些实施方案中，给予之间的间隔为约四周、约五周、约六周、约七周、约八周、约九周、约十周、约十一周、约十二周、约十六周、约二十周、约二十四周或更长。在一些实施方案中，所述治疗包括多次给予所述抗体，其中给予之间的间隔可以变化。例如，第一次给予和第二次给予之间的间隔为约一个月，而后续给予之间的间隔为约三个月。在一些实施方案中，第一次给予和第二次给予之间的间隔为约一个月，第二次给予和第三次给予之间的间隔为约两个月，而后续给予之间的间隔为约三个月。在一些实施方案中，本文所述的抗Siglec-8抗体(例如与人Siglec-8结合的抗体)以固定剂量给予。在一些实施方案中，以每剂约0.1mg至约1800mg的剂量将本文所述的抗Siglec-8抗体(例如与人Siglec-8结合的抗体)给予至个体。在一些实施方案中，以每剂约0.1mg、0.5mg、1mg、5mg、10mg、20mg、30mg、40mg、50mg、60mg、70mg、80mg、90mg、100mg、150mg、200mg、250mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg、550mg、600mg、650mg、700mg、750mg、800mg、850mg、900mg、950mg、1000mg、1100mg、1200mg、1300mg、1400mg、1500mg、1600mg、1700mg和1800mg任一的剂量将抗Siglec-8抗体(例如与人Siglec-8结合的抗体)给予个体。在一些实施方案中，以每剂约150mg至约450mg的剂量将本文所述的抗Siglec-8抗体(例如与人Siglec-8结合的抗体)给予至个体。在一些实施方案中，以每剂约150mg、200mg、250mg、300mg、350mg、400mg和450mg任一的剂量将抗Siglec-8抗体(例如与人Siglec-8结合的抗体)给予个体。在一些实施方案中，以每剂约0.1mg/kg至约20mg/kg的剂量将本文所述的抗Siglec-8抗体(例如与人Siglec-8结合的抗体)给予至个体。在一些实施方案中，以每剂约0.01mg/kg至约10mg/kg的剂量将本文所述的抗Siglec-8抗体(例如与人Siglec-8结合的抗体)给予至个体。在一些实施方案中，以约0.1mg/kg至约10mg/kg或约1.0mg/kg至约10mg/kg的剂量将本文所述的抗Siglec-8抗体(例如与人Siglec-8结合的抗体)给予至个体。在一些实施方案中，以约0.1mg/kg、0.5mg/kg、1.0mg/kg、1.5mg/kg、2.0mg/kg、2.5mg/kg、3.0mg/kg、3.5mg/kg、4.0mg/kg、4.5mg/kg、5.0mg/kg、5.5mg/kg、6.0mg/kg、6.5mg/kg、7.0mg/kg、7.5mg/kg、8.0mg/kg、8.5mg/kg、9.0mg/kg、9.5mg/kg或10.0mg/kg任一的剂量将本文所述的抗Siglec-8抗体给予至个体。可使用上文所述任何给药频率。上述的任何给药频率可以用于本文所述的组合物的方法或用途中。可以使用本文所述的任何方法或测定，以每周至每三个月之间的间隔评估本文所述的抗体(例如与人Siglec-8结合的抗体)的治疗疗效。在一些实施方案中，给予与人Siglec-8结合的抗体后，大约每一个月、大约每两个月、大约每三个月、大约每四个月、大约每五个月、大约每六个月或更长时间评估治疗疗效(例如一种或多种症状的减轻或改善)。在一些实施方案中，大约每一周、大约每两周、大约每三周、大约每四周、大约每五周、大约每六周、大约每七周、大约每八周、大约每九周、大约每十周、大约每十一周、大约每十二周、大约每十六周、大约每二十周、大约每二十四周或更长时间评估治疗疗效(例如一种或多种症状的减轻或改善)。
在某些实施方案中，通过静脉输注将多达3.0mg/kg剂量的本文所述的抗Siglec-8抗体(例如与人Siglec-8结合的抗体)每月给予至个体。在某些实施方案中，通过皮下注射将多达3.0mg/kg剂量的本文所述的抗Siglec-8抗体(例如与人Siglec-8结合的抗体)每月给予至个体。在某些实施方案中，通过静脉输注将多达3.0mg/kg剂量的本文所述的抗Siglec-8抗体(例如与人Siglec-8结合的抗体)每四周给予至个体。在某些实施方案中，通过皮下注射将多达3.0mg/kg剂量的本文所述的抗Siglec-8抗体(例如与人Siglec-8结合的抗体)每四周给予至个体
与人Siglec-8结合的本文所述的抗体可以在本文所述的方法中单独使用或与其他药剂组合使用。例如，可以将与人Siglec-8结合的抗体与一种或多种(例如，一种或多种、两种或更多种、三种或更多种、四种或更多种等)另外的治疗剂共同给予，用于治疗和/或预防过敏性眼病(例如过敏性结膜炎、角膜结膜炎或巨***性结膜炎)。本文考虑的治疗剂包括但不限于皮质类固醇(例如布***、***、氢化可的松、甲基***龙、***龙或***)、抗组胺药(例如盐酸左卡巴汀或奥洛他定)、酮替芬、氮卓斯汀、依匹斯汀、贝司他汀、环孢菌素、以及非甾体抗炎剂(NSAID)。
上述此类组合疗法包括组合给予(其中两种或更多种治疗剂包括在相同或分开的配制品中)和分开给予，在这种情况下，本公开文本的抗体的给予可以在给予一种或多种其他治疗剂之前、同时和/或之后发生。在一些实施方案中，本文所述的抗Siglec-8抗体的给予和一种或多种另外的治疗剂的给予在彼此之间约一个月、约两个月、约三个月、约四个月、约五个月或约六个月内发生。在一些实施方案中，本文所述的抗Siglec-8抗体的给予和一种或多种另外的治疗剂的给予在彼此之间约一周、约两周或约三周内发生。在一些实施方案中，本文所述的抗Siglec-8抗体的给予和一种或多种另外的治疗剂的给予在彼此之间约一天、约两天、约三天、约四天、约五天或约六天内发生。
抗Siglec8抗体和/或一种或多种另外的治疗剂可以通过本领域已知的任何合适的给药途径来给药，包括但不限于通过口服给药、舌下给药、经颊给药、局部给药、直肠给药、通过吸入、经皮给药、皮下注射、皮内注射、静脉内(IV)注射、动脉内注射、肌内注射、心内注射、骨内注射、腹膜内注射、经粘膜给药、***给药、玻璃体内给药、关节内给药、关节周围给药、局部给药、表皮给药或其任何组合。
D.抗体
本公开文本的某些方面提供了与人Siglec-8结合的分离的抗体(例如与人Siglec-8结合的激动剂抗体)。在一些实施方案中，本文所述的抗Siglec-8抗体具有一个或多个以下特征：(1)结合人Siglec-8；(2)结合人Siglec-8的细胞外结构域；(3)以比小鼠抗体2E2和/或小鼠抗体2C4更高的亲和力结合人Siglec-8；(4)以比小鼠抗体2E2和/或小鼠抗体2C4更高的亲合力结合人Siglec-8；(5)在热位移测定中的Tm约为70℃-72℃或更高；(6)岩藻糖基化的程度降低或未岩藻糖基化的；(7)结合在嗜酸性粒细胞上表达的人Siglec-8并诱导嗜酸性粒细胞凋亡；(8)结合在肥大细胞上表达的人Siglec-8，并耗尽或减少肥大细胞的数量；(9)结合在肥大细胞上表达的人Siglec-8，并抑制肥大细胞的FcεRI依赖性活性(例如，组胺释放、PGD2释放、Ca2+通量和/或β-氨基己糖苷酶释放等)；(10)已经被工程化以改善ADCC活性；(11)结合在肥大细胞上表达的人Siglec-8，并通过ADCC活性(在体外和/或体内)杀死肥大细胞；(12)与人和非人灵长类动物的Siglec-8结合；(13)与人Siglec-8的结构域1、结构域2和/或结构域3结合，或与包含人Siglec-8的结构域1、结构域2和/或结构域3的Siglec-8多肽结合(例如本文所述的融合蛋白)；以及(14)耗尽活化的嗜酸性粒细胞，所述活化的嗜酸性粒细胞的EC50小于小鼠抗体2E2或2C4的EC50。美国专利号9,546,215和/或WO 2015089117中所述的任何抗体可以在本文提供的方法、组合物和试剂盒中找到用途。
在一方面，本公开文本提供了与人Siglec-8结合的抗体。在一些实施方案中，所述人Siglec-8包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述人Siglec-8包含SEQID NO:73的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗体与在肥大细胞上表达的人Siglec-8结合，并耗尽或减少肥大细胞的数量。在一些实施方案中，本文所述的抗体与在肥大细胞上表达的人Siglec-8结合，并抑制肥大细胞介导的活性。
在一方面，本发明提供了与人Siglec-8结合的抗体。在一些实施方案中，所述人Siglec-8包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述人Siglec-8包含SEQID NO:73的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗体与人Siglec-8的结构域1中的表位结合，其中结构域1包含SEQ ID NO:112的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗体与人Siglec-8的结构域2中的表位结合，其中结构域2包含SEQ ID NO:113的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗体与人Siglec-8的结构域3中的表位结合，其中结构域3包含SEQ ID NO:114的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗体与包含SEQ IDNO:116的氨基酸的融合蛋白结合，但是不与包含SEQ ID NO:115的氨基酸的融合蛋白结合。在一些实施方案中，本文所述的抗体与包含SEQ ID NO:117的氨基酸的融合蛋白结合，但是不与包含SEQ ID NO:115的氨基酸的融合蛋白结合。在一些实施方案中，本文所述的抗体与包含SEQ ID NO:117的氨基酸的融合蛋白结合，但是不与包含SEQ ID NO:116的氨基酸的融合蛋白结合。在一些实施方案中，本文所述的抗体与人Siglec-8的细胞外结构域中的线性表位结合。在一些实施方案中，本文所述的抗体与人Siglec-8的细胞外结构域中的构象表位结合。在一些实施方案中，本文所述的抗体与在嗜酸性粒细胞上表达的人Siglec-8结合，并诱导嗜酸性粒细胞凋亡。在一些实施方案中，本文所述的抗体与在肥大细胞上表达的人Siglec-8结合，并耗尽肥大细胞。在一些实施方案中，本文所述的抗体与在肥大细胞上表达的人Siglec-8结合，并抑制肥大细胞介导的活性。在一些实施方案中，本文所述的抗体与在肥大细胞上表达的人Siglec-8结合，并通过ADCC活性杀死肥大细胞。在一些实施方案中，本文所述的抗体耗尽肥大细胞并抑制肥大细胞活化。在一些实施方案中，本文的抗体耗尽活化的嗜酸性粒细胞并抑制肥大细胞活化。在一些实施方案中，本文的抗体(例如未岩藻糖基化的抗Siglec-8抗体)耗尽血液嗜酸性粒细胞并抑制肥大细胞活化。
本文提供了分离的抗Siglec-8抗体，其与人Siglec-8和非人灵长类动物Siglec-8结合。具有灵长类动物交叉反应性的抗体的鉴定对于非人灵长类动物中抗Siglec-8抗体的临床前测试将是有用的。在一方面，本发明提供了与非人灵长类动物Siglec-8结合的抗体。在一方面，本发明提供了与人Siglec-8和非人灵长类动物Siglec-8结合的抗体。在一些实施方案中，所述非人灵长类动物Siglec-8包含SEQ ID NO:118的氨基酸序列或其一部分。在一些实施方案中，所述非人灵长类动物Siglec-8包含SEQ ID NO:119的氨基酸序列或其一部分。在一些实施方案中，所述非人灵长类动物是(例如东非狒狒)。在一些实施方案中，所述与人Siglec-8和非人灵长类动物Siglec-8结合的抗体与人Siglec-8的结构域1中的表位结合。在另一个实施方案中，人Siglec-8的结构域1包含SEQ ID NO:112的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述与人Siglec-8和非人灵长类动物Siglec-8结合的抗体与人Siglec-8的结构域3中的表位结合。在另一个实施方案中，人Siglec-8的结构域3包含SEQ ID NO:114的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述与人Siglec-8和非人灵长类动物Siglec-8结合的抗体是人源化抗体、嵌合抗体或人抗体。在一些实施方案中，所述与人Siglec-8和非人灵长类动物Siglec-8结合的抗体是鼠抗体。在一些实施方案中，与人Siglec-8和非人灵长类动物Siglec-8结合的抗体是人IgG1抗体。
在一方面，本文所述的抗Siglec-8抗体是单克隆抗体。在一方面，本文所述的抗Siglec-8抗体是抗体片段(包括抗原结合片段)，例如，Fab、Fab'-SH、Fv、scFv或(Fab')2片段。在一方面，本文所述的抗Siglec-8抗体包含抗体片段(包括抗原结合片段)，例如，Fab、Fab'-SH、Fv、scFv或(Fab')2片段。在一方面，本文所述的抗Siglec-8抗体是嵌合、人源化或人抗体。在一方面，本文所述的任何抗Siglec-8抗体被纯化。
在一方面，提供了与鼠2E2抗体和鼠2C4抗体竞争结合Siglec-8的抗Siglec-8抗体。还提供了与和鼠2E2抗体和鼠2C4抗体相同的表位结合的抗Siglec-8抗体。针对Siglec-8、2E2和2C4抗体的鼠抗体描述于美国专利号8,207,305；美国专利号8,197,811，美国专利号7,871,612，和美国专利号7,557,191。
在一方面，提供了与本文所述的任何抗Siglec-8抗体(例如HEKA、HEKF、1C3、1H10、4F11、2C4、2E2)竞争结合Siglec-8的抗Siglec-8抗体。还提供了与和本文所述的任何抗Siglec-8抗体(例如HEKA、HEKF、1C3、1H10、4F11、2C4、2E2)相同的表位结合的抗Siglec-8抗体。
在本公开文本的一方面，提供了编码抗Siglec-8抗体的多核苷酸。在某些实施方案中，提供了包含编码抗Siglec-8抗体的多核苷酸的载体。在某些实施方案中，提供了包含此类载体的宿主细胞。在本公开文本的另一方面，提供了包含抗Siglec-8抗体或编码抗Siglec-8抗体的多核苷酸的组合物。在某些实施方案中，本公开文本的组合物是用于治疗过敏性眼病(例如过敏性结膜炎、角膜结膜炎或巨***性结膜炎)的药物配制品。在某些实施方案中，本公开文本的组合物是用于预防过敏性眼病(例如过敏性结膜炎、角膜结膜炎或巨***性结膜炎)的药物配制品。
在一方面，本文提供了抗Siglec-8抗体，其包含鼠抗体2C4的1、2、3、4、5或6个HVR序列。在一方面，本文提供了抗Siglec-8抗体，其包含鼠抗体2E2的1、2、3、4、5或6个HVR序列。在一些实施方案中，所述HVR是Kabat CDR或Chothia CDR。
在一方面，本文提供了抗Siglec-8抗体，其包含鼠抗体1C3的1、2、3、4、5或6个HVR序列。在一方面，本文提供了抗Siglec-8抗体，其包含鼠抗体4F11的1、2、3、4、5或6个HVR序列。在一方面，本文提供了抗Siglec-8抗体，其包含鼠抗体1H10的1、2、3、4、5或6个HVR序列。在一些实施方案中，所述HVR是Kabat CDR或Chothia CDR。
在一些实施方案中，本文所述的抗体与人Siglec-8的结构域1中的表位结合，其中结构域1包含SEQ ID NO:112的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗体与人Siglec-8的结构域2中的表位结合，其中结构域2包含SEQ ID NO:113的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗体与人Siglec-8的结构域3中的表位结合，其中结构域3包含SEQID NO:114的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本文所述的抗体与包含SEQ ID NO:116的氨基酸的融合蛋白结合，但是不与包含SEQ ID NO:115的氨基酸的融合蛋白结合。在一些实施方案中，本文所述的抗体与包含SEQ ID NO:117的氨基酸的融合蛋白结合，但是不与包含SEQ ID NO:115的氨基酸的融合蛋白结合。在一些实施方案中，本文所述的抗体与包含SEQ ID NO:117的氨基酸的融合蛋白结合，但是不与包含SEQ ID NO:116的氨基酸的融合蛋白结合。
在另一方面，本文提供了抗Siglec-8抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列的HVR-H2，以及(iii)包含SEQ ID NO:94的氨基酸序列的HVR-H3；和/或轻链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:100的氨基酸序列的HVR-L2，以及(iii)包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，本文所述的抗体与人Siglec-8的结构域2中的表位结合，其中结构域2包含SEQ IDNO:113的氨基酸序列。
在另一方面，本文提供了抗Siglec-8抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:89的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:92的氨基酸序列的HVR-H2，以及(iii)包含SEQ ID NO:95的氨基酸序列的HVR-H3；和/或轻链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:98的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列的HVR-L2，以及(iii)包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，本文所述的抗体与人Siglec-8的结构域3中的表位结合，其中结构域3包含SEQ IDNO:114的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗体与人Siglec-8和非人灵长类动物Siglec-8结合。
在另一方面，本文提供了抗Siglec-8抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:90的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:93的氨基酸序列的HVR-H2，以及(iii)包含SEQ ID NO:96的氨基酸序列的HVR-H3；和/或轻链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:102的氨基酸序列的HVR-L2，以及(iii)包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，本文所述的抗体与人Siglec-8的结构域1中的表位结合，其中结构域1包含SEQ IDNO:112的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所述的抗体与人Siglec-8和非人灵长类动物Siglec-8结合。
在一方面，本文提供了抗Siglec-8抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H2，以及(iii)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；和/或其中所述轻链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-L2，以及(iii)包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-L3。
在一方面，本文提供了抗Siglec-8抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H2，以及(iii)包含SEQ ID NO:67-70的氨基酸序列的HVR-H3；和/或其中所述轻链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ IDNO:65的氨基酸序列的HVR-L2，以及(iii)包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-L3。
在一方面，本文提供了抗Siglec-8抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H2，以及(iii)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；和/或其中所述轻链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-L2，以及(iii)包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，本文提供了抗Siglec-8抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H2，以及(iii)包含SEQ ID NO:67-70的氨基酸序列的HVR-H3；和/或其中所述轻链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ IDNO:65的氨基酸序列的HVR-L2，以及(iii)包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，本文提供了抗Siglec-8抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列的HVR-H2，以及(iii)包含SEQ ID NO:94的氨基酸序列的HVR-H3；和/或轻链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:100的氨基酸序列的HVR-L2，以及(iii)包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，本文提供了抗Siglec-8抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:89的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:92的氨基酸序列的HVR-H2，以及(iii)包含SEQ ID NO:95的氨基酸序列的HVR-H3；和/或轻链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:98的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列的HVR-L2，以及(iii)包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列的HVR-L3。
在另一方面，本文提供了抗Siglec-8抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:90的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:93的氨基酸序列的HVR-H2，以及(iii)包含SEQ ID NO:96的氨基酸序列的HVR-H3；和/或轻链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:102的氨基酸序列的HVR-L2，以及(iii)包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列的HVR-L3。
本文所述的抗Siglec-8抗体可包含任何合适的框架可变结构域序列，前提是所述抗体保留与人Siglec-8结合的能力。如本文所用，重链框架区称为“HC-FR1-FR4”，而轻链框架区称为“LC-FR1-FR4”。在一些实施方案中，所述抗Siglec-8抗体包含SEQ ID NO:26、34、38和45的重链可变结构域框架序列(分别为HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3和HC-FR4)。在一些实施方案中，所述抗Siglec-8抗体包含SEQ ID NO:48、51、55和60的轻链可变结构域框架序列(分别为LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3和LC-FR4)。在一些实施方案中，所述抗Siglec-8抗体包含SEQ ID NO:48、51、58和60的轻链可变结构域框架序列(分别为LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3和LC-FR4)。
在一个实施方案中，抗Siglec-8抗体包含重链可变结构域，其包含框架序列和高变区，其中所述框架序列分别包含HC-FR1-HC-FR4序列SEQ ID NO:26-29(HC-FR1)、SEQ IDNO:31-36(HC-FR2)、SEQ ID NO:38-43(HC-FR3)和SEQ ID NO:45或46(HC-FR4)；HVR-H1包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列；HVR-H2包含SEQ ID No:62的氨基酸序列；以及HVR-H3包含SEQID No:63的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗Siglec-8抗体包含重链可变结构域，其包含框架序列和高变区，其中所述框架序列分别包含HC-FR1-HC-FR4序列SEQ ID NO:26-29(HC-FR1)、SEQ ID NO:31-36(HC-FR2)、SEQ ID NO:38-43(HC-FR3)和SEQ ID NO:45或46(HC-FR4)；HVR-H1包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列；HVR-H2包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列；以及HVR-H3包含选自SEQ ID NO:67-70的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗Siglec-8抗体包含轻链可变结构域，其包含框架序列和高变区，其中所述框架序列分别包含LC-FR1-LC-FR4序列SEQ ID NO:48或49(LC-FR1)、SEQ ID NO:51-53(LC-FR2)、SEQ ID NO:55-58(LC-FR3)和SEQ ID NO:60(LC-FR4)；HVR-L1包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；HVR-L2包含SEQ IDNO:65的氨基酸序列；以及HVR-L3包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗Siglec-8抗体包含轻链可变结构域，其包含框架序列和高变区，其中所述框架序列分别包含LC-FR1-LC-FR4序列SEQ ID NO:48或49(LC-FR1)、SEQ ID NO:51-53(LC-FR2)、SEQ IDNO:55-58(LC-FR3)和SEQ ID NO:60(LC-FR4)；HVR-L1包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列；HVR-L2包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列；以及HVR-L3包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列。在这些抗体的一个实施方案中，所述重链可变结构域包含选自SEQ ID NO:2-10的氨基酸序列，且所述轻链可变结构域包含选自SEQ ID NO:16-22的氨基酸序列。在这些抗体的一个实施方案中，所述重链可变结构域包含选自SEQ ID NO:2-10的氨基酸序列，且所述轻链可变结构域包含选自SEQ ID NO:23或24的氨基酸序列。在这些抗体的一个实施方案中，所述重链可变结构域包含选自SEQ ID NO:11-14的氨基酸序列，且所述轻链可变结构域包含选自SEQ ID NO:16-22的氨基酸序列。在这些抗体的一个实施方案中，所述重链可变结构域包含选自SEQ ID NO:11-14的氨基酸序列，且所述轻链可变结构域包含选自SEQ ID NO:23或24的氨基酸序列。在这些抗体的一个实施方案中，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列，且所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列。在这些抗体的一个实施方案中，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列，且所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述重链HVR序列包含下述：
a)HVR-H1(IYGAH(SEQ ID NO:61))；
b)HVR-H2(VIWAGGSTNYNSALMS(SEQ ID NO:62))；以及
c)HVR-H3(DGSSPYYYSMEY(SEQ ID NO:63)；DGSSPYYYGMEY(SEQ ID NO:67)；DGSSPYYYSMDY(SEQ ID NO:68)；DGSSPYYYSMEV(SEQ ID NO:69)；或DGSSPYYYGMDV(SEQ IDNO:70))。
在一些实施方案中，所述重链HVR序列包含下述：
a)HVR-H1(SYAMS(SEQ ID NO:88)；DYYMY(SEQ ID NO:89)；或SSWMN(SEQ ID NO:90))；
b)HVR-H2(IISSGGSYTYYSDSVKG(SEQ ID NO:91)；RIAPEDGDTEYAPKFQG(SEQ ID NO:92)；或QIYPGDDYTNYNGKFKG(SEQ ID NO:93))；以及c)HVR-H3(HETAQAAWFAY(SEQ ID NO:94)；EGNYYGSSILDY(SEQ ID NO:95)；或LGPYGPFAD(SEQ ID NO:96))。
在一些实施方案中，所述重链FR序列包含下述：
a)HC-FR1(EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLT(SEQ ID NO:26)；
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLT(SEQ ID NO:27)；
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIS(SEQ ID NO:28)；或
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLT(SEQ ID NO:29))；
b)HC-FR2(WVRQAPGKGLEWVS(SEQ ID NO:31)；WVRQAPGKGLEWLG(SEQ ID NO:32)；WVRQAPGKGLEWLS(SEQ ID NO:33)；WVRQAPGKGLEWVG(SEQ ID NO:34)；WIRQPPGKGLEWIG(SEQID NO:35)；或WVRQPPGKGLEWLG(SEQ ID NO:36))；
c)HC-FR3(RFTISKDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:38)；
RLSISKDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:39)；
RLTISKDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:40)；
RFSISKDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:41)；
RVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR(SEQ ID NO:42)；或
RLSISKDNSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCAR(SEQ ID NO:43))；以及
d)HC-FR4(WGQGTTVTVSS(SEQ ID NO:45)；或WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:46))。
在一些实施方案中，所述轻链HVR序列包含下述：
a)HVR-L1(SATSSVSYMH(SEQ ID NO:64))；
b)HVR-L2(STSNLAS(SEQ ID NO:65))；以及
c)HVR-L3(QQRSSYPFT(SEQ ID NO:66)；或QQRSSYPYT(SEQ ID NO:71))。
在一些实施方案中，所述轻链HVR序列包含下述：
a)HVR-L1(SASSSVSYMH(SEQ ID NO:97)；RASQDITNYLN(SEQ ID NO:98)；或SASSSVSYMY(SEQ ID NO:99))；
b)HVR-L2(DTSKLAY(SEQ ID NO:100)；FTSRLHS(SEQ ID NO:101)；或DTSSLAS(SEQID NO:102))；以及
c)HVR-L3(QQWSSNPPT(SEQ ID NO:103)；QQGNTLPWT(SEQ ID NO:104)；或QQWNSDPYT(SEQ ID NO:105))。
在一些实施方案中，所述抗体包含：
重链可变区，所述重链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列的HVR-H2，以及(iii)包含SEQ ID NO:94的氨基酸序列的HVR-H3；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:100的氨基酸序列的HVR-L2，以及(iii)包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列的HVR-L3；
重链可变区，所述重链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:89的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:92的氨基酸序列的HVR-H2，以及(iii)包含SEQ ID NO:95的氨基酸序列的HVR-H3；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:98的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列的HVR-L2，以及(iii)包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列的HVR-L3；或
重链可变区，所述重链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:90的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:93的氨基酸序列的HVR-H2，以及(iii)包含SEQ ID NO:96的氨基酸序列的HVR-H3；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:102的氨基酸序列的HVR-L2，以及(iii)包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列的HVR-L3。
在一些实施方案中，所述轻链FR序列包含下述：
a)LC-FR1(EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC(SEQ ID NO:48)；或EIILTQSPATLSLSPGERATLSC(SEQ ID NO:49))；
b)LC-FR2(WFQQKPGQAPRLLIY(SEQ ID NO:51)；WFQQKPGQAPRLWIY(SEQ ID NO:52)；或WYQQKPGQAPRLLIY(SEQ ID NO:53))；
c)LC-FR3(GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC(SEQ ID NO:55)；
GVPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYC(SEQ ID NO:56)；
GVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC(SEQ ID NO:57)；或
GIPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYC(SEQ ID NO:58))；以及
d)LC-FR4(FGPGTKLDIK(SEQ ID NO:60))。
在一些实施方案中，本文提供了与人Siglec-8结合的抗Siglec-8抗体(例如人源化抗Siglec-8抗体)，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述抗体包含：
(a)重链可变结构域，其包含：
(1)包含选自SEQ ID NO:26-29的氨基酸序列的HC-FR1；
(2)包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的HVR-H1；
(3)包含选自SEQ ID NO:31-36的氨基酸序列的HC-FR2；
(4)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H2；
(5)包含选自SEQ ID NO:38-43的氨基酸序列的HC-FR3；
(6)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；以及
(7)包含选自SEQ ID NO:45-46的氨基酸序列的HC-FR4，
和/或
(b)轻链可变结构域，其包含：
(1)包含选自SEQ ID NO:48-49的氨基酸序列的LC-FR1；
(2)包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的HVR-L1；
(3)包含选自SEQ ID NO:51-53的氨基酸序列的LC-FR2；
(4)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-L2；
(5)包含选自SEQ ID NO:55-58的氨基酸序列的LC-FR3；
(6)包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-L3；以及
(7)包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的LC-FR4。
在一方面，本文提供了抗Siglec-8抗体，其包含选自SEQ ID NO:2-10的重链可变结构域和/或包含选自SEQ ID NO:16-22的轻链可变结构域。在一方面，本文提供了抗Siglec-8抗体，其包含选自SEQ ID NO:2-14的重链可变结构域和/或包含选自SEQ ID NO:16-24的轻链可变结构域。在一方面，本文提供了抗Siglec-8抗体，其包含选自SEQ ID NO:2-10的重链可变结构域和/或包含选自SEQ ID NO:23或24的轻链可变结构域。在一方面，本文提供了抗Siglec-8抗体，其包含选自SEQ ID NO:11-14的重链可变结构域和/或包含选自SEQ ID NO:16-22的轻链可变结构域。在一方面，本文提供了抗Siglec-8抗体，其包含选自SEQ ID NO:11-14的重链可变结构域和/或包含选自SEQ ID NO:23或24的轻链可变结构域。在一方面，本文提供了抗Siglec-8抗体，其包含SEQ ID NO:6的重链可变结构域和/或包含选自SEQ ID NO:16或21的轻链可变结构域。
在一方面，本文提供了抗Siglec-8抗体，其包含选自SEQ ID NO:106-108的重链可变结构域和/或包含选自SEQ ID NO:109-111的轻链可变结构域。在一方面，本文提供了抗Siglec-8抗体，其包含SEQ ID NO:106的重链可变结构域和/或包含SEQ ID NO:109的轻链可变结构域。在一方面，本文提供了抗Siglec-8抗体，其包含SEQ ID NO:107的重链可变结构域和/或包含SEQ ID NO:110的轻链可变结构域。在一方面，本文提供了抗Siglec-8抗体，其包含SEQ ID NO:108的重链可变结构域和/或包含SEQ ID NO:111的轻链可变结构域。
在一些实施方案中，本文提供了抗Siglec-8抗体，其包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与选自SEQ ID NO:2-14的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文提供了抗Siglec-8抗体，其包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与选自SEQ IDNO:106-108的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列相对于参考序列含有取代、***或缺失，但是包含该氨基酸序列的抗体保留与人Siglec-8结合的能力。在一些实施方案中，所述取代、***或缺失(例如1、2、3、4或5个氨基酸)在HVR以外的区域中(即在FR中)发生。在一些实施方案中，抗Siglec-8抗体包含重链可变结构域，其包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗Siglec-8抗体包含重链可变结构域，其包含选自SEQ ID NO:106-108的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本文提供了抗Siglec-8抗体，其包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与选自SEQ ID NO:16-24的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文提供了抗Siglec-8抗体，其包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与选自SEQ IDNO:109-111的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列相对于参考序列含有取代、***或缺失，但是包含该氨基酸序列的抗体保留与人Siglec-8结合的能力。在一些实施方案中，所述取代、***或缺失(例如1、2、3、4或5个氨基酸)在HVR以外的区域中(即在FR中)发生。在一些实施方案中，抗Siglec-8抗体包含轻链可变结构域，其包含SEQ ID NO:16或21的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗Siglec-8抗体包含重链可变结构域，其包含选自SEQ ID NO:109-111的氨基酸序列。
在一方面，本公开文本提供抗Siglec-8抗体，其包含(a)选自表1中所示的那些的一种、两种或三种VH HVR和/或(b)选自表1中所示的那些的一种、两种或三种VL HVR。
在一方面，本公开文本提供抗Siglec-8抗体，其包含(a)选自表2中所示的那些的一种、两种或三种VH HVR和/或(b)选自表2中所示的那些的一种、两种或三种VL HVR。
在一方面，本公开文本提供抗Siglec-8抗体，其包含(a)选自表3中所示的那些的一种、两种、三种或四种VH FR和/或(b)选自表3中所示的那些的一种、两种、三种或四种VLFR。
在一些实施方案中，本文提供了抗Siglec-8抗体，其包含表4所示抗体的重链可变结构域和/或轻链可变结构域，例如，HAKA抗体、HAKB抗体、HAKC抗体等。
表1.抗体的HVR的氨基酸序列
Figure BDA0002353550440000371
表2.来自鼠1C3、1H10和4F11抗体的HVR的氨基酸序列
Figure BDA0002353550440000382
表3.抗体的FR的氨基酸序列
Figure BDA0002353550440000383
Figure BDA0002353550440000401
表4.抗体可变区的氨基酸序列
Figure BDA0002353550440000421
Figure BDA0002353550440000431
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存在五类免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，具有分别称为α、δ、ε、γ和μ的重链。所述γ和α类别被进一步分为亚类，例如，人表达以下亚类：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。IgG1抗体可以以多种多态性变体存在，称作同种异型(综述见Jefferis和Lefranc2009.mAbs第1卷第4期1-7)，它们任一均适合于在本文一些实施方案中使用。人群中的常见同种异型变体就是那些通过字母a、f、n、z或其组合表示的。在本文的任一实施方案中，所述抗体可包含重链Fc区，所述重链Fc区包含人IgG Fc区。在另一个实施方案中，所述人IgG Fc区包含人IgG1或IgG4。在一些实施方案中，该抗体是IgG1抗体。在一些实施方案中，该抗体是IgG4抗体。在一些实施方案中，所述人IgG4包含氨基酸取代S228P，其中氨基酸残基根据Kabat中的EU索引编号。在一些实施方案中，所述人IgG1包含SEQ ID NO:78的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述人IgG4包含SEQ ID NO:79的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本文提供了抗Siglec-8抗体，其包含重链，所述重链包含SEQID NO:75的氨基酸序列；和/或轻链，所述轻链包含选自SEQ ID NO:76或77的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体可以包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:87的氨基酸序列；和/或轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:76的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗Siglec-8抗体诱导活化的嗜酸性粒细胞的凋亡。在一些实施方案中，所述抗Siglec-8抗体诱导静息嗜酸性粒细胞的凋亡。在一些实施方案中，所述抗Siglec-8抗体耗尽活化的嗜酸性粒细胞并抑制肥大细胞活化。在一些实施方案中，所述抗Siglec-8抗体耗尽或减少肥大细胞并抑制肥大细胞活化。在一些实施方案中，所述抗Siglec-8抗体耗尽或减少肥大细胞的数量。在一些实施方案中，所述抗Siglec-8抗体通过ADCC活性杀死肥大细胞。在一些实施方案中，所述抗体耗尽或减少组织中表达Siglec-8的肥大细胞。在一些实施方案中，所述抗体耗尽或减少生物流体中表达Siglec-8的肥大细胞。
1.抗体亲和力
在一些方面，与小鼠抗体2E2和/或小鼠抗体2C4相比，本文所述的抗Siglec-8抗体以约相同或更高的亲和力和/或更高的亲合力与人Siglec-8结合。在某些实施方案中，本文提供的抗Siglec-8抗体具有≤1μM、≤150nM、≤100nM、≤50nM、≤10nM、≤1nM、≤0.1nM、≤0.01nM或≤0.001nM(例如10-8M或更少、例如10-8M至10-13M、例如10-9M至10-13M)的解离常数(Kd)。在一些实施方案中，本文所述的抗Siglec-8抗体以比小鼠抗体2E2和/或小鼠抗体2C4高约1.5倍、约2倍、约3倍、约4倍、约5倍、约6倍、约7倍、约8倍、约9倍或约10倍的亲和力与人Siglec-8结合。在一些实施方案中，所述抗Siglec-8抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含选自SEQID NO:16或21的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述抗Siglec-8抗体的结合亲和力可以通过表面等离子体共振测定来确定。例如，Kd或Kd值可以通过在25℃下使用BIAcoreTM-2000或BIAcoreTM-3000(BIAcore,Inc.，Piscataway，N.J.)以固定的抗原CM5芯片以约10个反应单位(RU)来测量。简单来说，根据供应商的说明书，用N-乙基-N'-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)激活羧甲基化葡聚糖生物传感器芯片(CM5，
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Inc.)。用10mM乙酸钠，pH 4.8稀释捕获抗体(例如抗人Fc)，之后以30μl/分钟的流速注射，并用抗Siglec-8抗体进一步固定。对于动力学测量，于25℃以大约25μl/min的流速在含0.05％Tween 20的PBS(PBST)中注射二聚体Siglec-8的两倍连续稀释液。使用简单的一对一Langmuir结合模型(
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评价软件3.2版)通过同时拟合结合和解离传感图来计算结合速率(kon)和解离速率(koff)。以比率koff/kon来计算平衡解离常数(Kd)。参见例如Chen,Y.等人,(1999)J.Mol.Biol.293:865-881。
在另一个实施方案中，可以使用生物层干涉法来测定抗Siglec-8抗体针对Siglec-8的亲和力。在示例性测定中，将带Siglec-8-Fc标签的蛋白固定到抗人捕获传感器上，并与渐增浓度的小鼠、嵌合、或人源化抗Siglec-8 Fab片段一起孵育，以使用诸如例如Octet Red 384***(ForteBio)等仪器获得亲和力测量。
例如，抗Siglec-8抗体的结合亲和力还可以通过Munson等人,Anal.Biochem.,107:220(1980)所述的Scatchard分析使用相关领域公知的标准技术来测定。还参见Scatchard,G.,Ann.N.Y.Acad.Sci.51:660(1947)。
2.抗体亲合力
在一些实施方案中，所述抗Siglec-8抗体的结合亲合力可以通过表面等离子体共振测定来测定。例如，Kd或Kd值可以通过使用BIAcore T100来测量。将捕获抗体(例如山羊抗人Fc和山羊抗小鼠Fc)固定在CM5芯片上。可以用抗人或抗小鼠抗体固定流动池。于某个温度以某个流速进行测定，例如于25℃以30μl/min的流速。以多种浓度在测定缓冲液中稀释二聚体Siglec-8，例如范围为15nM至1.88pM的浓度。捕获抗体，并进行高效注射，随后解离。用缓冲液例如50mM甘氨酸pH 1.5来再生流动池。以空参考池和多次测定缓冲液注射作为空白，并用1:1全局拟合参数分析结果。
3.竞争测定
可以使用竞争测定来测定两种抗体是否通过识别相同的或空间重叠的表位而结合相同表位或一种抗体竞争性抑制另一种抗体结合抗原。这些测定是本领域已知的。典型地，在多孔板上固定抗原或抗原表达细胞，并测量未标记抗体阻断已标记抗体结合的能力。此类竞争测定的常用标记是放射性标记或酶标记。在一些实施方案中，本文所述的抗Siglec-8抗体与本文所述的2E2抗体竞争结合一种细胞(例如肥大细胞)的细胞表面上存在的表位。在一些实施方案中，本文所述的抗Siglec-8抗体与包含含有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链可变结构域和含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链可变区的抗体竞争结合细胞(例如肥大细胞)的细胞表面上存在的表位。在一些实施方案中，本文所述的抗Siglec-8抗体与本文所述的2C4抗体竞争结合一种细胞(例如肥大细胞)的细胞表面上存在的表位。在一些实施方案中，本文所述的抗Siglec-8抗体与包含含有SEQ ID NO:2(如美国专利号8,207,305中找到的)的氨基酸序列的重链可变结构域和含有SEQ ID NO:4(如美国专利号8,207,305中找到的)的氨基酸序列的轻链可变区的抗体竞争结合细胞(例如肥大细胞)的细胞表面上存在的表位。
4.热稳定性
在一些方面，本文所述的抗Siglec-8在热转移测定中具有至少约70℃、至少约71℃、或至少约72℃的解链温度(Tm)。在示例性热转移测定中，在qPCR热循环仪中将包含人源化抗Siglec-8抗体的样品与荧光染料(Sypro Orange)一起孵育71个循环，每个循环升高1℃，以测定Tm。在一些实施方案中，与小鼠2E2抗体和/或小鼠2C4抗体相比，所述抗Siglec-8抗体具有相似或更高的Tm。在一些实施方案中，所述抗Siglec-8抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含选自SEQ ID NO:16或21的氨基酸序列。在一些实施方案中，与嵌合2C4抗体相比，所述抗Siglec-8抗体具有相同或更高的Tm。在一些实施方案中，与具有包含SEQ ID NO:84的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:85的氨基酸序列的轻链的抗体相比，抗Siglec-8抗体具有相同或更高的Tm。
5.生物学活性测定
在一些实施方案中，本文所述的抗Siglec-8抗体耗尽肥大细胞。用于评估细胞凋亡的测定是本领域公知的，例如用膜联蛋白V染色和TUNNEL测定。
在一些实施方案中，本文所述的抗Siglec-8抗体诱导ADCC活性。在一些实施方案中，本文所述的抗Siglec-8抗体通过ADCC活性杀死表达Siglec-8的肥大细胞。在一些实施方案中，组合物包含未岩藻糖基化的(即无岩藻糖基化的)抗Siglec-8抗体。在一些实施方案中，与包含部分岩藻糖基化的抗Siglec-8抗体的组合物相比，包含未岩藻糖基化的本文所述抗Siglec-8抗体的组合物增强ADCC活性。用于评估ADCC活性的测定是本领域公知的且在本文中进行了描述。在示例性测定中，使用效应细胞和靶细胞来测量ADCC活性。效应细胞的例子包括自然杀伤(NK)细胞、大颗粒淋巴细胞(LGL)、淋巴因子活化的杀伤(LAK)细胞和包含NK和LGL的PBMC，或在细胞表面上具有Fc受体的白细胞，诸如嗜中性细胞、嗜酸性粒细胞和巨噬细胞。效应细胞可以从包括患有目的疾病(例如过敏性眼病)的个体的任何来源分离。靶细胞是在细胞表面上表达要评估的抗体能识别的抗原的任何细胞。此类靶细胞的一种例子是在细胞表面上表达Siglec-8的肥大细胞。此类靶细胞的另一种例子是在细胞表面(例如Ramos 2C10)上表达Siglec-8的细胞系(例如Ramos细胞系)。用使得细胞裂解得以检测的试剂标记靶细胞。用于标记的试剂的例子包括放射性物质，诸如铬酸钠(Na2 51CrO4)。参见例如，Immunology,14,181(1968)；J.Immunol.Methods.,172,227(1994)；以及J.Immunol.Methods.,184,29(1995)。
在评估抗Siglec-8抗体对肥大细胞的ADCC和凋亡活性的另一个示例性测定中，根据已发表的方案从人组织或生物流体中分离出人肥大细胞(Guhl等人,Biosci.Biotechnol.Biochem.,2011,75:382-384；Kulka等人,Current Protocols inImmunology,2001,(John Wiley&Sons,Inc.))，或从人类造血干细胞中分化得到人肥大细胞(例如由Yokoi等人,J Allergy Clin Immunol.,2008,121:499-505所述)。将纯化的肥大细胞重悬在无菌96孔U型底板中的完全RPMI培养基中，并在存在或不存在抗Siglec-8抗体的情况下，以在0.0001ng/ml与10μg/ml之间的浓度孵育30分钟。在有或没有纯化的自然杀伤(NK)细胞或新鲜PBL的情况下，将样品再孵育4至48小时，以诱导ADCC。使用荧光缀合的抗体检测肥大细胞(CD117和FcεR1)，使用膜联蛋白-V和7AAD区分活细胞和死细胞或濒死细胞，并通过流式细胞术分析细胞凋亡或ADCC对细胞的杀伤作用。膜联蛋白-V和7AAD染色是按照制造商的说明进行的。
在一些方面，本文所述的抗Siglec-8抗体抑制肥大细胞介导的活性。已经使用肥大细胞类胰蛋白酶作为总肥大细胞数目和活化的生物标记物。例如，可以测量血液或尿液中的总的和有活性的类胰蛋白酶以及组胺、N-甲基组胺、和11-β-***素F2以评估肥大细胞的减少。一种示例性肥大细胞活性测定参见例如美国专利申请公开号US 20110293631。
E.抗体制备
本文所述的抗体(例如，与人Siglec-8结合的抗体)使用本领域中用于生成抗体的可用技术来制备，下述各节更为详细地描述了其示例性方法。
1.抗体片段
本公开文本涵盖抗体片段。抗体片段可以通过传统方式来生成，诸如酶促消化、或者通过重组技术。在某些情况下，使用抗体片段而不是整个抗体有优势。关于某些抗体片段的综述，参见Hudson等人(2003)Nat.Med.9:129-134。
已经开发了用于产生抗体片段的多种技术。传统上，通过蛋白水解消化完整抗体来衍生这些片段(参见例如Morimoto等人,Journal of Biochemical and BiophysicalMethods 24:107-117(1992)；以及Brennan等人,Science 229:81(1985))。然而，现在可直接由重组宿主细胞产生这些片段。Fab、Fv和ScFv抗体片段都可在大肠杆菌中表达和由大肠杆菌分泌，如此容许容易地产生大量的这些片段。可从上文讨论的抗体噬菌体库中分离抗体片段。可替代地，可直接从大肠杆菌回收Fab'-SH片段并化学偶联以形成F(ab')2片段(Carter等人,Bio/Technology 10:163-167(1992))。根据另一种方法，可直接从重组宿主细胞培养物分离F(ab')2片段。具有增加的体内半衰期包含补救受体结合表位残基的Fab和F(ab')2片段描述于美国专利用于产生抗体片段的其他技术对于熟练从业人员会是显而易见的。在某些实施方案中，抗体是单链Fv片段(scFv)。参见WO 93/16185；美国专利号5,571,894；以及5,587,458。Fv和scFv是具有缺少恒定区的完整结合位点的唯一类型；如此，它们可能适于在体内使用时降低非特异性结合。可构建scFv融合蛋白以生成效应蛋白在scFv的氨基或羧基末端的融合物。参见Antibody Engineering,编辑Borrebaeck,上文。所述抗体片段也可以是“线性抗体”，例如，如美国专利号US 5,641,870所述。此类线性抗体可以是单特异性的或双特异性的。
2.人源化抗体
本公开文本涵盖人源化抗体。用于人源化非人抗体的各种方法是本领域已知的。例如，人源化抗体可具有一个或多个从非人来源引入的氨基酸残基。这些非人氨基酸残基通常被称为“输入”残基，其典型地取自“输入”可变结构域。基本上可遵循Winter的方法进行人源化(Jones等人(1986)Nature 321:522-525；Riechmann等人(1988)Nature 332:323-327；Verhoeyen等人(1988)Science 239:1534-1536)，通过用高变区序列取代人抗体的相应序列。因此，此类“人源化”抗体是嵌合抗体(美国专利号4,816,567)，其中显著少于完整的人可变结构域用非人物种的相应序列取代。在实践中，人源化抗体典型地是如下人抗体，其中有些高变区残基和可能的一些FR残基用啮齿动物抗体类似位点的残基取代。
用于制备人源化抗体的人轻链和重链二者可变结构域的选择对于降低抗原性可能是重要的。根据所谓的“最佳拟合”方法，用啮齿动物(例如小鼠)抗体的可变结构域序列对已知人可变结构域序列的整个文库进行筛选。然后接受与啮齿动物最接近的人序列作为人源化抗体的人框架(Sims等人(1993)J.Immunol.151:2296；Chothia等人(1987)J.Mol.Biol.196:901。另一种方法使用由特定轻链或重链亚组的所有人抗体的共有序列衍生的特定框架。相同框架可用于数种不同的人源化抗体(Carter等人(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:4285；Presta等人(1993)J.Immunol.,151:2623。
通常还希望的是，抗体在人源化后保留对抗原的高亲和力和其他有利的生物学性质。为了达到此目的，根据一种方法，通过使用亲本序列和人源化序列的三维模型分析亲本序列和各种概念性人源化产物的过程来制备人源化抗体。普遍可获得免疫球蛋白三维模型，这是本领域技术人员所熟悉的。还可获得说明和展示所选候选免疫球蛋白序列的可能三维构象结构的计算机程序。通过检查这些展示容许分析残基在候选免疫球蛋白序列发挥功能中的可能作用，即分析影响候选免疫球蛋白结合其抗原的能力的残基。通过这种方式，可以从受体序列和输入序列中选出FR残基并组合，从而得到希望的抗体特征，诸如对一种或多种靶抗原的亲和力增加。通常，高变区残基直接且最实质地涉及对抗原结合的影响。
3.人类抗体
本公开文本的人抗Siglec-8抗体可以通过结合选自人衍生噬菌体展示库的一个或多个Fv克隆可变结构序列与已知的一个或多个人恒定结构域序列来构建。可替代地，可以通过杂交瘤方法来生成本公开文本的人单克隆抗Siglec-8抗体。已经描述了用于产生人单克隆抗体的人骨髓瘤和小鼠-人异源骨髓瘤细胞系，例如通过Kozbor J.Immunol.,133:3001(1984)；Brodeur等人,Monoclonal Antibody Production Techniques andApplications,第51-63页(Marcel Dekker,Inc.,New York,1987)；以及Boerner等人,J.Immunol.,147:86(1991)。
有可能产生在不存在内源免疫球蛋白产生的情况下能够在免疫后产生人抗体完整组库的转基因动物(例如小鼠)。例如，已经描述了嵌合和种系突变小鼠中抗体重链连接区(JH)基因的纯合缺失导致内源抗体产生的完全抑制。在此类种系突变小鼠中转移人种系免疫球蛋白基因阵列会导致在抗原激发后产生人抗体。参见例如Jakobovits等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:2551(1993)；Jakobovits等人,Nature,362:255(1993)；Bruggermann等人,Year in Immunol.,7:33(1993)。
基因改组也可用于自非人(例如啮齿动物)抗体衍生人抗体，其中人抗体具有与起始非人抗体相似的亲和力和特异性。根据这种方法(其也称为“表位印迹”)，通过如本文描述的噬菌体展示技术获得的非人抗体片段的重链或轻链可变区被人V结构域基因组库替代，产生非人链/人链scFv或Fab嵌合体群。用抗原进行的选择导致如下非人链/人链嵌合scFv或Fab的分离，其中人链在一级噬菌体展示克隆中消除相应的非人链后恢复了抗原结合位点，即表位决定人链配偶体的选择。在重复该过程以替代剩余非人链时，得到人抗体(参见PCT WO 93/06213，公布于1993年4月1日)。与传统的通过CDR移植进行的非人抗体的人源化不同，此技术提供完全人抗体，它们不含非人起源的FR或CDR残基。
4.双特异性抗体
双特异性抗体指对至少两种不同抗原具有结合特异性的单克隆抗体。在某些实施方案中，双特异性抗体是人抗体或人源化抗体。在某些实施方案中，结合特异性之一针对Siglec-8，且结合特异性之另一针对任何其他抗原。在某些实施方案中，双特异性抗体可结合Siglec-8的两种不同表位。双特异性抗体还可用于将细胞毒剂定位于表达Siglec-8的细胞。可将双特异性抗体制备成全长抗体或抗体片段(例如F(ab')2双特异性抗体)。
用于构建双特异性抗体的方法是本领域已知的参见Milstein和Cuello,Nature,305:537(1983)，公布于1993年5月13日的WO 93/08829，以及Traunecker等人,EMBO J.,10:3655(1991)。关于生成双特异性抗体的进一步详情参见例如Suresh等人,Methods inEnzymology,121:210(1986)。双特异性抗体包括交联或“异源缀合”抗体。例如，异源缀合物中的一种抗体可以与亲合素偶联，另一种抗体与生物素偶联。可使用任何便利的交联方法来制备异源缀合抗体。合适的交联剂是本领域公知的，且连同许多交联技术一起披露于美国专利号4,676,980。
5.单结构域抗体
在一些实施方案中，本公开文本的抗体是单结构域抗体。单结构域抗体是包含抗体的重链可变结构域的全部或一部分或者轻链可变结构域的全部或一部分的单个多肽链。在某些实施方案中，单结构域抗体是人单结构域抗体(Domantis,Inc.,Waltham,Mass.；参见例如美国专利号6,248,516B1)。在一个实施方案中，单结构域抗体由抗体的重链可变结构域的全部或一部分组成。
6.抗体变体
在一些实施方案中，考虑了本文所述抗体的一种或多种氨基酸序列修饰。例如，可能希望改善抗体的结合亲和力和/或其他生物学性质。抗体的氨基酸序列变体可以是通过将适当变化引入编码抗体的核苷酸序列或通过肽合成制备的。此类修饰包括例如抗体氨基酸序列内的残基缺失和/或***和/或取代。可进行缺失、***和取代的任何组合以获得最终的构建体，前提是最终的构建体具有希望的特征。可在制备序列时将氨基酸改变引入主题抗体的氨基酸序列中。
用于鉴定抗体中作为优选诱变位置的某些残基或区域的有用方法称为“丙氨酸扫描诱变”，如Cunningham和Wells(1989)Science,244:1081-1085所述。在此，鉴定残基或靶残基组(例如，带电荷的残基，诸如arg、asp、his、lys、和glu)并用中性或带负电的氨基酸(诸如，丙氨酸或聚丙氨酸)替代以影响氨基酸与抗原的相互作用。然后通过在或对取代位点引入更多或其他变体，完善对取代展示功能敏感性的氨基酸位置。因此，尽管用于引入氨基酸序列变异的位点是预先决定的，然而突变本身的本质不必预先决定。例如，为了分析指定位点处突变的性能，在靶密码子或区域进行丙氨酸扫描或随机诱变，并针对希望的活性筛选所表达的免疫球蛋白。
氨基酸序列***包括氨基和/或羧基末端融合，长度范围从一个残基到含有一百个或更多个残基的多肽，以及单个或多个氨基酸残基的序列内***。末端***物的例子包括具有N末端甲硫氨酰基残基的抗体。抗体分子的其他***变体包括将抗体的N或C末端与酶或增加抗体血清半衰期的多肽融合。
在一些实施方案中，单克隆抗体在重链和/或轻链处具有C末端切割。例如，在重链和/或轻链的C末端切割1、2、3、4或5个氨基酸残基。在一些实施方案中，所述C末端切割从重链去除C末端赖氨酸。在一些实施方案中，单克隆抗体在重链和/或轻链处具有N末端切割。例如，在重链和/或轻链的N末端切割1、2、3、4或5个氨基酸残基。在一些实施方案中，单克隆抗体的截短形式可以通过重组技术制备。
在某些实施方案中，本公开文本的抗体发生了改变以提高或降低抗体糖基化的程度。多肽的糖基化典型的或是N连接的或是O连接的。N连接指碳水化合物部分附接至天冬酰胺残基的侧链。三肽序列天冬酰胺-X-丝氨酸和天冬酰胺-X-苏氨酸(其中X是除脯氨酸外的任何氨基酸)是用于将碳水化合物部分酶促附接至天冬酰胺侧链的识别序列。因此，多肽中这些三肽序列任一的存在产生了潜在的糖基化位点。O连接的糖基化指将糖类N-乙酰半乳糖胺、半乳糖或木糖之一附接至羟基氨基酸，最常见的是丝氨酸或苏氨酸，但也可使用5-羟脯氨酸或5-羟赖氨酸。
向抗体中添加或缺失糖基化位点可通过改变氨基酸序列从而创建或消除一个或多个上述三肽序列(用于N连接的糖基化位点)而便利地完成。所述改变还可通过将原始抗体的序列(用于O连接的糖基化位点)中添加、缺失、或取代一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基来进行。
若抗体包含Fc区，则可改变附接至其上的碳水化合物。例如，美国专利申请号US2003/0157108(Presta,L.)中描述了有缺乏岩藻糖的成熟碳水化合物结构附接至抗体Fc区的抗体。还参见US 2004/0093621(Kyowa Hakko Kogyo Co.,Ltd.)。WO 2003/011878(Jean-Mairet等人)和美国专利号6,602,684(Umana等人)中提到了在附接至抗体Fc区的碳水化合物中有平分型N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)的抗体。WO 1997/30087(Patel等人)中报告了在附接至抗体Fc区的寡糖中有至少一个半乳糖残基的抗体。关于有改变的碳水化合物附接至其Fc区的抗体还参见WO 1998/58964(Raju,S.)和WO 1999/22764(Raju,S.)。关于具有修饰的糖基化的抗原结合分子还可参见US 2005/0123546(Umana等人)。
在某些实施方案中，糖基化变体包含Fc区，其中附接至Fc区的碳水化合物结构缺乏岩藻糖。此类变体具有改善的ADCC功能。任选地，Fc区还包含进一步改善ADCC的一处或多处氨基酸取代，例如Fc区第298位、第333位和/或第334位的取代(残基的Eu编号)。涉及“脱岩藻糖基化的”或“缺乏岩藻糖的”抗体的出版物的例子包括：US 2003/0157108；WO 2000/61739；WO 2001/29246；US 2003/0115614；US 2002/0164328；US 2004/0093621；US 2004/0132140；US 2004/0110704；US 2004/0110282；US 2004/0109865；WO 2003/085119；WO2003/084570；WO 2005/035586；WO 2005/035778；WO 2005/053742；Okazaki等人J.Mol.Biol.336:1239-1249(2004)；Yamane-Ohnuki等人Biotech.Bioeng.87:614(2004)。生成脱岩藻糖基化的抗体的细胞系的例子包括蛋白质岩藻糖化缺陷的Lec13 CHO细胞(Ripka等人Arch.Biochem.Biophys.249:533-545(1986)；美国专利申请号US 2003/0157108A1，Presta,L；以及WO 2004/056312 A1，Adams等人，尤其是实施例11)和敲除细胞系，诸如α-1,6-岩藻糖基转移酶基因、FUT8、敲除的CHO细胞(Yamane-Ohnuki等人Biotech.Bioeng.87:614(2004))和过表达β1,4-N-乙酰基葡糖胺基转移酶III(GnT-III)和高尔基μ-甘露糖苷酶II(ManII)的细胞。
本文中考虑了相对于在野生型CHO细胞中产生的相同抗体上岩藻糖的量，具有降低的岩藻糖的抗体。例如，所述抗体的岩藻糖的量比如果由天然CHO细胞(例如产生天然糖基化样式的CHO细胞，诸如含有天然FUT8基因的CHO细胞)产生的其他情况下所具有的量要低。在某些实施方案中，本文提供的抗Siglec-8抗体是如下的抗体，其中所述抗体上少于约50％、40％、30％、20％、10％、5％或1％的N连接的聚糖包含岩藻糖。在某些实施方案中，本文提供的抗Siglec-8抗体是如下的抗体，其中所述抗体上N连接的聚糖均不包含岩藻糖，即其中所述抗体完全没有岩藻糖或没有岩藻糖或是未岩藻糖基化的或是非岩藻糖基化的。如通过MALDI-TOF质谱术测量的，例如如描述于WO 2008/077546的，可以通过相对于附接至Asn297的所有糖结构(例如复合的、杂合的和高甘露糖的结构)的总和，计算Asn297处糖链内岩藻糖的平均量来测定岩藻糖量。Asn297指位于Fc区中的约第297位(Fc区残基的Eu编号)的天冬酰胺残基；然而，Asn297也可以由于抗体中的微小序列变异而位于第297位上游或下游约±3个氨基酸，即在第294位与第300位之间。在一些实施方案中，所述抗体的至少一条或两条重链是未岩藻糖基化的。
在一个实施方案中，所述抗体进行了改变以改善其血清半衰期。如例如美国专利号5,739,277中所述，为了增加抗体的血清半衰期，可以将补救受体结合表位掺入抗体(尤其是抗体片段)。如本文所用，术语“补救受体结合表位”指IgG分子(例如IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4)Fc区中负责增加IgG分子体内血清半衰期的表位(US 2003/0190311；美国专利号6,821,505；美国专利号6,165,745；美国专利号5,624,821；美国专利号5,648,260；美国专利号6,165,745；美国专利号5,834,597)。
另一个类型的变体是氨基酸取代变体。这些变体在抗体分子中有至少一个氨基酸残基用不同残基替代。进行取代诱变的目的位点包括高变区，但是也考虑了FR改变。保守取代示于表5中“优选取代”标题下。如果这样的取代导致希望的生物学活性变化，则可以将在表5中命名为“示例性取代”的、或如在下文进一步参考氨基酸类别所述的更多实质性改变引入，并且筛选产物。
表5.
Figure BDA0002353550440000561
Figure BDA0002353550440000571
对抗体生物学性质的实质性修饰可通过选择对维持以下方面的效果差异显著的取代来实现：(a)取代区域中多肽主链的结构，例如片或螺旋构象，(b)靶位点处分子的电荷或疏水性，或(c)侧链的体积。根据其侧链性质的相似性，可将氨基酸如下分组(A.L.Lehninger,Biochemistry,第二版,第73-75页,Worth Publishers,New York(1975))：
(1)非极性的：Ala(A)、Val(V)、Leu(L)、Ile(I)、Pro(P)、Phe(F)、Trp(W)、Met(M)
(2)不带电荷的极性的：Gly(G)、Ser(S)、Thr(T)、Cys(C)、Tyr(Y)、Asn(N)、Gln(Q)
(3)酸性的：Asp(D)、Glu(E)
(4)碱性的：Lys(K)、Arg(R)、His(H)
可替代地，基于共同的侧链性质，天然存在的残基可如下分组：
(1)疏水性的：正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；
(2)中性亲水性的：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；
(3)酸性的：Asp、Glu；
(4)碱性的：His、Lys、Arg；
(5)影响链取向的残基：Gly、Pro；
(6)芳香族的：Trp、Tyr、Phe。
非保守取代将需要将这些类别之一的成员交换为另一类别。此类取代残基还可以引入保守取代位点中，或引入剩余(非保守)位点中。
一个类型的取代变体涉及取代亲本抗体(例如人源化或人抗体)的一个或多个高变区残基。通常，选择用于进一步开发的所得一种或多种变体相对于生成它们的亲本抗体会具有经修饰的(例如改善的)生物学性质。用于生成此类取代变体的一种便利方法涉及使用噬菌体展示的亲和力成熟。简而言之，将数个高变区位点(例如6-7个位点)突变，在各个位点产生所有可能的氨基酸取代。如此生成的抗体展示在丝状噬菌体颗粒上，作为与各个颗粒内包装的噬菌体外壳蛋白(例如M13基因III产物)至少一部分的融合物。然后对噬菌体展示的变体筛选其生物学活性(例如结合亲和力)。为了鉴定用于修饰的候选高变区位点，可进行扫描诱变(例如丙氨酸扫描)以鉴定对抗原结合具有重要贡献的高变区残基。可替代地或另外地，分析抗原-抗体复合物的晶体结构以鉴定抗体和抗原之间的接触点可能是有益的。此类接触残基及邻近残基是根据本领域已知的技术(包括本文详述的技术)进行取代的候选物。一旦生成此类变体，使用本领域已知的技术(包括本文所述的技术)对该组变体进行筛选，可选择在一种或多种相关测定中具有优良性质的抗体用于进一步的开发。
编码抗体氨基酸序列变体的核酸分子可通过本领域已知的多种方法来制备。这些方法包括但不限于从天然来源分离(在天然存在氨基酸序列变体的情况中)，或者通过对较早制备的变体或非变体版本的抗体进行寡核苷酸介导的(或定点)诱变、PCR诱变和盒式诱变来制备。
可能需要在本公开文本抗体的Fc区中引入一处或多处氨基酸修饰，由此生成Fc区变体。Fc区变体可包含在一个或多个氨基酸位置(包括铰链半胱氨酸的位置)包含氨基酸修饰(例如取代)的人Fc区序列(例如人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc区)。在一些实施方案中，所述Fc区变体包含人IgG4 Fc区。在另一个实施方案中，所述人IgG4 Fc区包含氨基酸取代S228P，其中氨基酸残基是根据Kabat中的EU索引编号的。
根据本说明书和本领域的教导，考虑了在一些实施方案中，本公开文本的抗体与野生型对应抗体相比可包含一处或多处改变(在例如Fc区中)。与它们的野生型对应物相比，这些抗体仍会基本上保留治疗功效所需要的相同特性。例如，认为可以在Fc区中进行会导致C1q结合和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)改变(即或是增强或是削弱)的某些改变，例如WO 99/51642中所述。还参见关注Fc区变体其他例子的Duncan&Winter Nature 322:738-40(1988)；美国专利号5,648,260；美国专利号5,624,821；以及WO 94/29351。WO 00/42072(Presta)和WO 2004/056312(Lowman)描述了对FcR的结合改善或降低的抗体变体。这些专利出版物的内容具体地通过引用并入本文。还参见Shields等人J.Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001)。US 2005/0014934 A1(Hinton等人)中描述了具有增加的半衰期并且与新生儿Fc受体(FcRn)的结合改善的抗体，所述抗体负责将母体IgG转移至胎儿(Guyer等人,J.Immunol.117:587(1976)以及Kim等人,J.Immunol.24:249(1994))。这些抗体包含其中具有一个或多个取代的Fc区，所述一个或多个取代改善Fc区与FcRn的结合。具有改变的Fc区氨基酸序列且C1q结合能力升高或降低的多肽变体描述于美国专利号6,194,551B1、WO 99/51642。这些专利出版物的内容具体地通过引用并入本文。还参见Idusogie等人J.Immunol.164:4178-4184(2000)。
7.载体、宿主细胞和重组方法
为了重组产生本公开文本的抗体，分离编码它的核酸，并将其***可复制载体，用于进一步克隆(DNA扩增)或表达。可使用常规程序容易地分离编码抗体的DNA并测序(例如使用能够与编码抗体重链和轻链的基因特异性结合的寡核苷酸探针)。许多载体是可用的。载体的选择部分取决于将要使用的宿主细胞。通常，宿主细胞是原核或真核(通常是哺乳动物)起源的。应当理解，任何同种型的恒定区可用于此目的，包括IgG、IgM、IgA、IgD和IgE恒定区，而且此类恒定区可以从任何人或动物物种获得。
使用原核宿主细胞生成抗体：
a)载体构建
可使用标准重组技术来获得编码本公开文本抗体多肽组分的多核苷酸序列。可从抗体产生细胞(诸如杂交瘤细胞)分离希望的多核苷酸序列并测序。可替代地，可使用核苷酸合成仪或PCR技术合成多核苷酸。一旦获得，将编码多肽的序列***能够在原核宿主中复制并表达异源多核苷酸的重组载体。为了本公开文本的目的，可使用本领域可获得的且已知的许多载体。适当载体的选择将主要取决于将要***载体的核酸的大小和将要用载体转化的特定宿主细胞。取决于其功能(扩增或表达异源多核苷酸，或二者兼之)及其与它在其中驻留的特定宿主细胞的相容性，每种载体含有多种组分。所述载体组分通常包括但不限于：复制起点、选择标记基因、启动子、核糖体结合位点(RBS)、信号序列、异源核酸***片段、和转录终止序列。
通常，包含衍生自与宿主细胞相容物种的复制子和控制序列的质粒载体与这些宿主一起使用。载体通常携带复制位点，以及能够在转化细胞中提供表型选择的标志序列。例如，典型地用衍生自大肠杆菌物种的质粒pBR322转化大肠杆菌。pBR322包含编码氨苄青霉素(Amp)和四环素(Tet)抗性的基因，并且由此提供轻松鉴定转化细胞的方式。pBR322、其衍生物、或其他微生物质粒或噬菌体还可包含或经修饰而包含可被微生物生物体用于表达内源蛋白质的启动子。Carter等人，美国专利号5,648,237中详细描述了用于表达特定抗体的pBR322衍生物的例子。
另外，可将包含与宿主微生物相容的复制子和控制序列的噬菌体载体用作这些宿主的转化载体。例如，可使用噬菌体诸如λGEM.TM.-11来构建可用于转化易感宿主细胞(诸如大肠杆菌LE392)的重组载体。
本公开文本的表达载体可包含两对或多对启动子-顺反子，它们编码每一种多肽组分。启动子是位于顺反子上游(5')的非翻译调节序列，它调控顺反子的表达。原核启动子典型地分成两类：诱导型的和组成型的。诱导型启动子指响应培养条件的变化(例如营养物的存在与否或温度变化)而启动受其控制的顺反子的升高水平转录的启动子。
被多种潜在宿主细胞识别的大量启动子是公知的。通过限制酶消化切下源DNA中的启动子并将分离的启动子序列***本公开文本的载体，由此可将选择的启动子与编码轻链或重链的顺反子DNA可操作连接。天然启动子序列和许多异源启动子都可用于指导靶基因的扩增和/或表达。在一些实施方案中，使用异源启动子，因为与天然靶多肽启动子相比，它们通常容许所表达靶基因的更高转录和更高产量。
适用于原核宿主的启动子包括PhoA启动子、β-半乳糖苷酶和乳糖启动子***、色氨酸(trp)启动子***、和杂合启动子(诸如tac或trc启动子)。然而，在细菌中有功能的其他启动子(诸如其他已知的细菌或噬菌体启动子)也是合适的。它们的核苷酸序列已经发表，由此熟练工作人员能够使用提供任何所需限制位点的接头或衔接头将它们与编码靶轻链和重链的顺反子可操作连接(Siebenlist等人(1980)Cell 20:269)。
在本公开文本的一方面，重组载体内的每个顺反子都包含指导所表达多肽穿膜易位的分泌信号序列组分。通常，信号序列可以是载体的组分，或者它可以是***载体的靶多肽DNA的一部分。为了本公开文本而选择的信号序列应当是受到宿主细胞识别并加工(即被信号肽酶切割)的信号序列。对于不识别并加工异源多肽的天然信号序列的原核宿主细胞，将信号序列用原核信号序列取代，所述原核序列选自例如碱性磷酸酶、青霉素酶、Ipp、或热稳定的肠毒素II(STII)前导序列、LamB、PhoE、PelB、OmpA和MBP。在本公开文本的一个实施方案中，所述表达***的两个顺反子中都使用的信号序列是STII信号序列或其变体。
在另一方面，构件本公开文本的免疫球蛋白的产生可在宿主细胞的细胞质中发生，因此不需要在每个顺反子内存在分泌信号序列。在这方面，免疫球蛋白轻链和重链在细胞质内表达、折叠和装配而形成功能性免疫球蛋白。某些宿主菌株(例如大肠杆菌trxB菌株)提供有利于二硫键形成的细胞质条件，从而容许所表达蛋白质亚基的正确折叠和装配。Proba and Pluckthun Gene,159:203(1995)。
本公开文本的抗体还可使用如下表达***来产生，其中所表达多肽组分的数量比率可以受到调控，从而将分泌且正确装配的本公开文本抗体的产量最大化。这种调控是至少部分通过同时调控多肽组分的翻译强度而实现的。
Simmons等人，美国专利号5,840,523中公开了用于调控翻译强度的一种技术。它在顺反子内利用翻译起始区(TIR)的变体。对于指定TIR，可创建具有一定范围翻译强度的一系列氨基酸或核酸序列变体，由此提供针对特定链的希望的表达水平调整此因素的方便方式。可通过常规诱变技术导致能改变氨基酸序列的密码子变化来生成TIR变体。在某些实施方案中，核苷酸序列中的变化是沉默的。TIR中的改变可包括例如Shine-Dalgarno序列的数目或间距的改变及信号序列中的改变。用于生成突变型信号序列的一种方法是在编码序列的开端生成不改变信号序列氨基酸序列的“密码子库”(即变化是沉默的)。这可通过改变每个密码子的第三个核苷酸位置来实现；另外，一些氨基酸(诸如亮氨酸、丝氨酸和精氨酸)具有多种第一个和第二个位置，这可在建库中增加复杂性。诱变的方法在Yansura等人(1992)METHODS:A Companion to Methods in Enzymol.4:151-158中有详细描述。
在一个实施方案中，对于载体中的每个顺反子，生成具有一定范围TIR强度的一组载体。这个有限集合提供了每条链的表达水平以及希望的抗体产物的产量在各种TIR强度组合下的比较。可通过量化报道基因的表达水平来测定TIR强度，如Simmons等人，美国专利号5,840,523中有详细描述。基于翻译强度的比较，选择希望的个别TIR在本公开文本的表达载体构建体中进行组合。
适用于表达本公开文本抗体的原核宿主细胞包括古细菌和真细菌，诸如革兰氏阴性或革兰氏阳性生物体。有用细菌的例子包括埃希氏菌属(例如大肠埃希氏菌)、芽孢杆菌属(例如枯草芽孢杆菌)、肠杆菌属、假单胞菌属物种(例如铜绿假单胞菌)、鼠伤寒沙门氏菌、粘质沙雷氏菌、克雷伯氏菌属、变形菌属、志贺氏菌属、根瘤菌属、透明颤菌属或副球菌属。在一个实施方案中，使用革兰氏阴性细胞。在一个实施方案中，使用大肠杆菌细胞作为本公开文本的宿主。大肠杆菌菌株的例子包括菌株W3110(Bachmann,Cellular andMolecular Biology,第2卷(Washington,D.C.:American Society for Microbiology,1987),第1190-1219页；ATCC保藏号27,325)及其衍生物，包括具有基因型W3110ΔfhuA(ΔtonA)ptr3 lac Iq lacL8ΔompTΔ(nmpc-fepE)degP41 kanR的菌株33D3(美国专利号5,639,635)。其他菌株及其衍生物(诸如大肠杆菌294(ATCC 31,446)、大肠杆菌B、大肠杆菌λ1776(ATCC 31,537)和大肠杆菌RV308(ATCC 31,608))也是合适的。这些例子只是说明而非限制。本领域已知用于构建具有指定基因型的任何上述细菌衍生物的方法，例如Bass等人,Proteins,8:309-314(1990)中所述。通常必需考虑复制子在细菌细胞中的可复制性来选择适当的细菌。例如，在使用公知的质粒(诸如pBR322、pBR325、pACYC177或pKN410)来提供复制子时，大肠杆菌、沙雷氏菌属或沙门氏菌属物种可能适合于用作宿主。典型地，宿主细胞应当分泌最小量的蛋白水解酶，而且可能希望在细胞培养中掺入额外的蛋白酶抑制剂。
b)抗体产生
用上述表达载体转化宿主细胞，并在为了诱导启动子，选择转化子或扩增编码希望的序列的基因而适当修饰的常规营养培养基中进行培养。
转化即将DNA引入原核宿主，使得DNA能够进行复制，或是作为染色体外元件或是通过染色体成分。根据所用宿主细胞，使用适于这些细胞的标准技术进行转化。采用氯化钙的钙处理通常用于含有坚固细胞壁屏障的细菌细胞。另一种转化方法采用聚乙二醇/DMSO。使用的又另一个技术是电穿孔。
在本领域已知的且适于培养选定宿主细胞的培养基中培养用于培养本公开文本多肽的原核细胞。合适的培养基的例子包括添加了必需营养补充物的luria broth(LB)培养基。在一些实施方案中，所述培养基还含有基于表达载体的构建而选择的选择剂，以选择性容许含有表达载体的原核细胞生长。例如，向用于表达氨苄青霉素抗性基因的细胞的生长的培养基中添加氨苄青霉素。
在碳、氮和无机磷酸盐来源以外，还可包括适当浓度的任何必需补充物，或是单独引入或是作为与另一种补充物或培养基的混合物，诸如复合氮源。任选地，培养基可含有一种或多种还原剂所述还原剂选自谷胱甘肽、半胱氨酸、胱胺、巯基乙酸盐、二硫赤藓糖醇和二硫苏糖醇。
在合适的温度培养原核宿主细胞。在某些实施方案中，对于大肠杆菌生长，生长的温度范围为约20℃至约39℃、约25℃至约37℃、或约30℃。主要取决于宿主生物体的培养基的pH可以是范围为约5至约9的任何pH。在某些实施方案中，对于大肠杆菌，pH为约6.8至约7.4、或约7.0。
如果本公开文本的表达载体中使用诱导型启动子，则在适于激活启动子的条件下诱导蛋白质表达。在本公开文本的一方面，使用PhoA启动子来控制多肽的转录。因此，为了诱导，在磷酸盐限制培养基中培养转化的宿主细胞。在某些实施方案中，磷酸盐限制培养基是C.R.A.P培养基(参见例如Simmons等人,J.Immunol.Methods(2002),263:133-147)。根据所采用的载体构建体，可采用多种其他诱导物，正如本领域所知的。
在一个实施方案中，所表达的本公开文本多肽分泌到宿主细胞的周质中并从中回收。蛋白质回收典型地涉及破坏微生物，通常通过诸如渗压震扰、超声处理或裂解等方式。一旦细胞遭到破坏，可通过离心或过滤清除细胞碎片或整个细胞。可以通过例如亲和树脂层析进一步纯化蛋白质。可替代地，蛋白质可能转运到培养基中并从中分离。可从培养物清除细胞，并将培养物上清液过滤和浓缩，用于进一步纯化所产生的蛋白质。可使用公知的方法(诸如聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和Western印迹测定)进一步分离和鉴定所表达的多肽。
在本公开文本的一方面，通过发酵过程大量进行抗体产生。多种大规模补料-分批发酵程序可用于产生重组蛋白。大规模发酵具有至少1000升的容量，在某些实施方案中是约1,000至100,000升的容量。这些发酵罐使用搅拌器叶轮来分配氧和营养物，尤其是葡萄糖。小规模发酵通常指在体积容量不超过约100升的发酵罐中进行的发酵，范围可以是约1升至约100升。
在发酵过程中，典型地在将细胞在合适条件下培养至希望密度(例如OD550约180-220，在此阶段细胞处于早期稳定期)后启动蛋白质表达的诱导。如本领域已知和如上所述，根据所采用的载体构建体，可使用多种诱导物。可在诱导前将细胞培养较短的时间。通常将细胞诱导约12-50小时，但是可使用更长或更短的诱导时间。
为了提高本公开文本多肽的产量和质量，可修改多项发酵条件。例如，为了改善所分泌抗体多肽的正确装配和折叠，可使用过表达伴侣蛋白(诸如Dsb蛋白(DsbA、DsbB、DsbC、DsbD和/或DsbG)或FkpA(具有伴侣活性的肽基脯氨酰-顺式,反式-异构酶))的另外的载体来共转化宿主原核细胞。已经证明伴侣蛋白促进在细菌宿主细胞中生成的异源蛋白质的正确折叠和溶解度。Chen等人(1999)J.Biol.Chem.274:19601-19605；Georgiou等人,美国专利号6,083,715；Georgiou等人,美国专利号6,027,888；Bothmann和Pluckthun(2000)J.Biol.Chem.275:17100-17105；Ramm和Pluckthun(2000)J.Biol.Chem.275:17106-17113；Arie等人(2001)Mol.Microbiol.39:199-210。
为了将表达的异源蛋白质(尤其是对蛋白水解敏感的异源蛋白质)的蛋白水解降至最低，可将蛋白水解酶缺陷的某些宿主菌株用于本公开文本。例如，可修饰宿主细胞菌株，在编码已知细菌蛋白酶(诸如蛋白酶III、OmpT、DegP、Tsp、蛋白酶I、蛋白酶Mi、蛋白酶V、蛋白酶VI及其组合)的基因中实现一种或多种遗传突变。可以获得一些大肠杆菌蛋白酶缺陷菌株，其描述于例如Joly等人(1998),上文；Georgiou等人,美国专利号5,264,365；Georgiou等人,美国专利号5,508,192；Hara等人,Microbial Drug Resistance,2:63-72(1996)。
在一个实施方案中，在本公开文本的表达***中使用蛋白水解酶缺陷且经过过表达一种或多种伴侣蛋白的质粒转化的大肠杆菌菌株作为宿主细胞。
c)抗体纯化
在一个实施方案中，进一步纯化本文中产生的抗体蛋白质以获得基本上同质的制剂，用于进一步的测定和使用。可采用本领域已知的标准蛋白质纯化方法。下面的程序是合适纯化程序的示例：免疫亲和或离子交换柱上的分级、乙醇沉淀、反相HPLC、二氧化硅或阳离子交换树脂诸(诸如DEAE)上的层析、层析聚焦、SDS-PAGE、硫酸铵沉淀和使用例如Sephadex G-75的凝胶过滤。
在一方面，将固定在固相上的蛋白质A用于本公开文本抗体产物的免疫亲和纯化。蛋白质A是来自金黄色葡萄球菌的41kD细胞壁蛋白质，它以高亲和力结合抗体Fc区。Lindmark等人(1983)J.Immunol.Meth.62:1-13。蛋白质A固定其上的固相可以是具有玻璃或二氧化硅表面的柱子，或者可控孔径玻璃柱或硅酸柱。在一些应用中，所述柱子以诸如甘油等试剂包被，用以有可能防止污染物的非特异性粘附。
作为纯化的第一步，可以将衍生自如上所述细胞培养物的制备物施加到蛋白A固定的固相上，使得目的抗体特异性结合蛋白质A。然后洗涤固相以清除与固相非特异性结合的污染物。最后通过洗脱从固相回收目的抗体。
使用真核宿主细胞生成抗体：
用于真核宿主细胞的载体通常包括一种或多种如下非限制性组分：信号序列、复制起点、一种或多种标记基因、增强子元件、启动子和转录终止序列。
a)信号序列组分
在真核宿主细胞中使用的载体还可在目的成熟蛋白质或多肽的N末端包含信号序列或具有特异性切割位点的其他多肽。可以选择受到宿主细胞识别并加工(即被信号肽酶切割)的异源信号序列。在哺乳动物细胞表达中，可利用哺乳动物信号序列以及病毒分泌前导序列，例如单纯疱疹病毒gD信号。将这些前体区的DNA以符合阅读框的方式连接至编码抗体的DNA。
b)复制起点
通常，哺乳动物表达载体不需要复制起点组分。例如，SV40起点典型地可能只因包含早期启动子才使用。
c)选择基因组分
表达和克隆载体可包含选择基因，也称为选择性标记。典型的选择基因编码如下蛋白质：(a)赋予对抗生素或其他毒素(例如氨苄青霉素、新霉素、甲氨蝶呤或四环素)的抗性，(b)补足相应的营养缺陷，或(c)提供不能从复合培养基获得的关键营养物。
选择方案的一个例子利用药物来阻止宿主细胞的生长。经异源基因成功转化的那些细胞产生赋予药物抗性的蛋白质，因而幸免于选择方案。此类显性选择的例子使用药物新霉素、霉酚酸和潮霉素。
适于哺乳动物细胞的选择性标记的另一个例子是能够鉴定有能力摄取抗体核酸的细胞的选择性标记，诸如DHFR、胸苷激酶、金属硫蛋白I和II、灵长类动物金属硫蛋白基因、腺苷脱氨酶、鸟氨酸脱羧酶等。
例如，在一些实施方案中，首先通过将所有转化子在含有甲氨蝶呤(Mtx，DHFR的竞争性拮抗剂)的培养基中进行培养来鉴定经DHFR选择基因转化的细胞。在一些实施方案中，在采用野生型DHFR时，适当的宿主细胞是DHFR活性缺陷的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系(例如ATCC CRL-9096)。
可替代地，可通过在含有针对选择性标记的选择剂(诸如氨基糖苷抗生素例如卡那霉素、新霉素或G418)的培养基中进行细胞生长来选择经编码抗体、野生型DHFR蛋白和另一种选择性标记(诸如氨基糖苷3'-磷酸转移酶(APH)的DNA序列转化或共转化的宿主细胞(特别是包含内源DHFR的野生型宿主)。参见美国专利号4,965,199。宿主细胞可包括NS0、CHOK1、CHOK1SV或衍生物，包括谷氨酰胺合成酶(GS)缺陷的细胞系。使用GS作为哺乳动物细胞的选择性标记的方法描述于美国专利号5,122,464和美国专利号5,891,693。
d)启动子组分
表达和克隆载体通常含有受到宿主生物体识别的启动子，且与编码目的多肽(例如抗体)的核酸可操作连接。已知真核细胞的启动子序列。例如，事实上，所有真核基因都具有富含AT区，它位于起始转录的位点上游约25至30个碱基处。在许多基因的转录起点上游70至80个碱基处发现的另一种序列是CNCAAT区，其中N可以是任何核苷酸。在大多数真核基因的3'端是AATAAA序列，它可能是向编码序列的3'端添加poly A尾的信号。在某些实施方案中，任何或所有这些序列可以适合于***真核表达载体中。
在哺乳动物宿主细胞中自载体转录受到例如从病毒(诸如多瘤病毒、禽痘病毒、腺病毒(诸如2型腺病毒)、牛***瘤病毒、禽类肉瘤病毒、巨细胞病毒、逆转录病毒、乙肝病毒和猿猴病毒40(SV40))基因组获得的启动子、异源哺乳动物启动子(例如肌动蛋白启动子或免疫球蛋白启动子)、热休克启动子的控制，条件是这些启动子与宿主细胞***相容。
方便的以SV40限制性片段的形式获得SV40病毒的早期和晚期启动子，所述片段还包含SV40病毒复制起点。方便的以HindIII E限制性片段的形式获得人巨细胞病毒的立即早期启动子。美国专利号4,419,446中披露了使用牛***瘤病毒作为载体在哺乳动物宿主中表达DNA的***。美国专利号4,601,978中描述了该***的修改。还参见Reyes等人,Nature 297:598-601(1982)，其描述了关于在小鼠细胞中在来自单纯疱疹病毒的胸苷激酶启动子的控制下表达人β-干扰素cDNA。可替代地，可使用劳氏肉瘤病毒长末端重复序列作为启动子。
e)增强子元件组分
常常通过在载体中***增强子序列来提高高等真核细胞对编码本公开文本抗体的DNA的转录。现在已知来自哺乳动物基因(球蛋白、弹性蛋白酶、白蛋白、甲胎蛋白和胰岛素)的许多增强子序列。然而，典型地，使用来自真核细胞病毒的增强子。例子包括SV40复制起点晚期侧的增强子(bp 100-270)、人巨细胞病毒早期启动子增强子、小鼠巨细胞病毒早期启动子增强子、多瘤病毒复制起点晚期侧的增强子和腺病毒增强子。关于激活真核启动子的增强子元件还可参见Yaniv,Nature 297:17-18(1982)。增强子可剪接到载体中，位于抗体多肽编码序列的5'或3'位置，但是通常位于启动子的5'位点。
f)转录终止组分
在真核宿主细胞中使用的表达载体还可含有终止转录和稳定mRNA所必需的序列。此类序列通常可从真核或病毒DNA或cDNA非翻译区的5'端和偶尔的3'端获得。这些区域包含在编码抗体的mRNA的非翻译部分中转录成聚腺苷酸化片段的核苷酸区段。一种有用的转录终止组分是牛生长激素聚腺苷酸化区。参见WO 94/11026及其中公开的表达载体。
g)宿主细胞的选择和转化
适于克隆或表达本文载体中的DNA的宿主细胞包括本文所述的高等真核细胞，包括脊椎动物宿主细胞。脊椎动物细胞在培养(组织培养)中的繁殖已经成为常规程序。有用哺乳动物宿主细胞系的例子有经SV40转化的猴肾CV1系(COS-7，ATCC CRL 1651)；人胚肾系(293细胞或为悬浮培养而亚克隆的293细胞，Graham等人,J.Gen Virol.36:59(1977))；幼仓鼠肾细胞(BHK，ATCC CCL 10)；中国仓鼠卵巢细胞/-DHFR(CHO,Urlaub等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216(1980))；小鼠塞托利细胞(TM4,Mather,Biol.Reprod.23:243-251(1980))；猴肾细胞(CV1，ATCC CCL 70)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76，ATCC CRL-1587)；人***细胞(HELA，ATCC CCL 2)；犬肾细胞(MDCK，ATCC CCL 34)；大鼠肝细胞(BRL 3A，ATCC CRL 1442)；人肺细胞(W138，ATCC CCL 75)；人肝细胞(Hep G2，HB8065)；小鼠乳瘤(MMT 060562，ATCC CCL51)；TRI细胞(Mather等人,AnnalsN.Y.Acad.Sci.383:44-68(1982))；MRC 5细胞；FS4细胞；CHOK1细胞；CHOK1SV细胞或其衍生物和人肝细胞瘤系(Hep G2)。
为了产生抗体，用上文所述的表达或克隆载体转化宿主细胞，并在为了诱导启动子、选择转化子或扩增编码希望的序列的基因而适当修饰的常规营养培养基中进行培养。
h)培养宿主细胞
可在多种培养基中培养用于产生本公开文本抗体的宿主细胞。可商购的培养基诸如哈氏F10(Ham's F10，Sigma)、最低要素培养基((MEM)，Sigma)、RPMI-1640(Sigma)和杜尔贝科氏改良伊格培养基((DMEM)，Sigma)适于培养宿主细胞。另外，可使用下列文献中所述的任何培养基作为宿主细胞的培养基：Ham等人,Meth.Enz.58:44(1979)，Barnes等人,Anal.Biochem.102:255(1980)，美国专利号4,767,704；4,657,866；4,927,762；4,560,655；或5,122,469；WO 90/03430；WO 87/00195；或美国专利复审30,985。任何这些培养基可根据需要补充激素和/或其他生长因子(诸如胰岛素、运铁蛋白或表皮生长因子)、盐(诸如氯化钠、钙、镁和磷酸盐)、缓冲液(诸如HEPES)、核苷酸(诸如腺苷和胸苷)、抗生素(诸如GENTAMYCINTM药物)、痕量元素(定义为通常以微摩尔范围的终浓度存在的无机化合物)和葡萄糖或等效能源。还可以适当浓度包括本领域技术人员将知的任何其他补充物。培养条件(诸如温度、pH等)是先前选择进行表达的宿主细胞所使用的那些条件，且对于普通技术人员是清楚的。
i)抗体的纯化
在使用重组技术时，可在细胞内产生抗体，或者直接分泌到培养基中。如果在细胞内产生抗体，则第一步可以通过例如离心或超滤清除微粒碎片、或是宿主细胞或是裂解片段。如果抗体分泌到培养基中，则可以首先使用商品化蛋白质浓缩滤器(例如Amicon或Millipore Pellicon超滤单元)浓缩来自这些表达***的上清液。可在任何上述步骤中包括蛋白酶抑制剂诸如PMSF以抑制蛋白水解，而且可包括抗生素以防止外来污染物的生长。
可使用例如羟磷灰石层析、凝胶电泳、透析和亲和层析(亲和层析是一种便利的技术)来纯化从细胞制备的抗体组合物。蛋白质A作为亲和配体的适用性取决于抗体中存在的任何免疫球蛋白Fc结构域的种类和同种型。蛋白质A可用于纯化基于人γ1、γ2或γ4重链的抗体(Lindmark等人,J.Immunol.Methods 62:1-13(1983))。蛋白质G推荐用于所有小鼠同种型和人γ3(Guss等人,EMBO J.5:15671575(1986))。亲和配体所附接的基质可以是琼脂糖，但是可使用其他基质。机械稳定的基质诸如可控孔径玻璃或聚(苯乙烯二乙烯)苯能获得比琼脂糖更快的流速和更短的加工时间。若抗体包含CH3结构域，则可使用BakerbondABXTM树脂(J.T.Baker，Phillipsburg，N.J.)进行纯化。取决于待回收的抗体，也可使用其他蛋白质纯化技术(诸如离子交换柱上的分级、乙醇沉淀、反相HPLC、二氧化硅上的层析、肝素SEPHAROSETM上的层析、阴离子或阳离子交换树脂(诸如聚天冬氨酸柱)上的层析、层析聚焦、SDS-PAGE和硫酸铵沉淀。
在任何一个或多个初步纯化步骤之后，可将包含目的抗体和污染物的混合物进行进一步的纯化，例如低pH疏水相互作用层析，使用pH约2.5-4.5之间的洗脱缓冲液，在低盐浓度(例如约0-0.25M盐)进行。
通常，用于制备供研究、测试和临床使用的抗体的各种方法是本领域已完善建立的、与上文所述方法是一致的和/或本领域技术人员认为对于特定的目的抗体是适当的。
未岩藻糖基化的抗体的产生
本文中提供用于制备岩藻糖基化的程度降低的抗体的方法。例如，本文中考虑的方法包括但不限于使用蛋白质岩藻糖基化缺陷的细胞系(例如Lec13 CHO细胞、α-1,6-岩藻糖基转移酶基因敲除CHO细胞、过表达β1,4-N-乙酰基葡糖胺基转移酶III且进一步过表达高尔基μ-甘露糖苷酶II的细胞等)，及在用于产生抗体的细胞培养基中添加一种或多种岩藻糖类似物。参见Ripka等人Arch.Biochem.Biophys.249:533-545(1986)；美国专利申请号US 2003/0157108 A1,Presta,L；WO 2004/056312 A1；Yamane-Ohnuki等人Biotech.Bioeng.87:614(2004)；以及美国专利号8,574,907。另外的用于降低抗体岩藻糖含量的技术包括美国专利申请公开号2012/0214975中所述的Glymaxx技术。另外的用于降低抗体的岩藻糖含量的技术还包括在用于产生抗体的细胞培养基中添加一种或多种糖苷酶抑制剂。糖苷酶抑制剂包括α-葡萄糖苷酶I、α-葡萄糖苷酶II和α-甘露糖苷酶I。在一些实施方案中，糖苷酶抑制剂是α-甘露糖苷酶I的抑制剂(例如几夫碱)。
如本文所用，“核心岩藻糖基化”指在N连接的聚糖的还原性末端对N-乙酰基葡糖胺(“GlcNAc”)添加岩藻糖(“岩藻糖基化”)。还提供通过此类方法产生的抗体及其组合物。
在一些实施方案中，结合至Fc区(或结构域)的复合N-糖苷连接的糖链的岩藻糖基化是降低的。如本文所用，“复合N-糖苷连接的糖链”典型地结合至天冬酰胺297(根据Kabat编号)，尽管复合N-糖苷连接的糖链也可以连接至其他天冬酰胺残基。“复合N-糖苷连接的糖链”排除高甘露糖型糖链，其中在核心结构的非还原性末端只掺入甘露糖，但是包括1)复合型，其中核心结构的非还原性末端侧具有一个或多个半乳糖-N-乙酰基葡糖胺(也称作“gal-GlcNAc”)分支且Gal-GlcNAc的非还原性末端侧任选具有唾液酸、两分型N-乙酰基葡糖胺，诸如此类；或2)杂合型，其中核心结构的非还原性末端侧具有高甘露糖N-糖苷连接的糖链和复合N-糖苷连接的糖链两种分支。
在一些实施方案中，“复合N-糖苷连接的糖链”包括复合型，其中核心结构的非还原性末端侧具有零个、一个或多个半乳糖-N-乙酰基葡糖胺(也称作“gal-GlcNAc”)的分支且Gal-GlcNAc的非还原性末端侧任选进一步具有诸如唾液酸、两分型N-乙酰基葡糖胺，诸如此类的结构。
根据本方法，一种或多种复合N-糖苷连接的糖链中典型地只掺入极小量的岩藻糖。例如，在各种实施方案中，组合物中少于约60％、少于约50％、少于约40％、少于约30％、少于约20％、少于约15％、少于约10％、少于约5％或少于约1％的抗体具有岩藻糖所致的核心岩藻糖基化。在一些实施方案中，组合物中的基本上无一(即少于约0.5％)抗体具有岩藻糖所致核心岩藻糖基化。在一些实施方案中，组合物中多于约40％、多于约50％、多于约60％、多于约70％、多于约80％、多于约90％、多于约91％、多于约92％、多于约93％、多于约94％、多于约95％、多于约96％、多于约97％、多于约98％、或多于约99％的抗体是未岩藻糖基化的。
在一些实施方案中，本文中提供如下的抗体，其中基本上无一(即少于约0.5％)N-糖苷连接的碳水化合物链含有岩藻糖残基。在一些实施方案中，本文中提供如下的抗体，其中抗体重链至少一条或两条是未岩藻糖基化的。
如上所述，可以利用多种哺乳动物宿主-表达载体***来表达抗体。在一些实施方案中，所述培养基未补充岩藻糖。在一些实施方案中，对所述培养基添加有效量的岩藻糖类似物。在此上下文中，“有效量”指类似物足以将岩藻糖掺入抗体复合N-糖苷-连接的糖链降低至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％或至少约50％的量。在一些实施方案中，与在岩藻糖类似物缺失下培养的宿主细胞产生的抗体相比，通过本方法生成的抗体包含至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％或至少约50％非核心岩藻糖基化的蛋白(例如不存在核心岩藻糖基化)。
可以例如如实施例中描述的测定岩藻糖没有结合至糖链的还原性末端中的N-乙酰基葡糖胺的糖链对岩藻糖结合至糖链的还原性末端中的N-乙酰基葡糖胺的糖链的含量(例如比率)。其他方法包括肼解或酶消化(参见例如Biochemical ExperimentationMethods 23:Method for Studying Glycoprotein Sugar Chain(Japan ScientificSocieties Press),Reiko Takahashi编辑(1989))，荧光标记或放射性同位素标记释放的糖链，然后通过层析分出已标记的糖链。还有，可以通过用HPAEC-PAD法分析链来测定释放的糖链的组合物(参见例如J.Liq Chromatogr.6:1557(1983))。(通常参见美国专利申请公开号2004/0110282)。
III.组合物
在一些方面，本文中还提供包含本文所述任何抗Siglec-8抗体(例如与Siglec-8结合的抗体)的组合物(例如药物组合物)。在一些方面，本文中提供包含本文所述抗Siglec-8抗体的组合物，其中所述抗体包含Fc区和连接至所述Fc区的N-糖苷连接的碳水化合物链，其中少于约50％的所述N-糖苷连接的碳水化合物链含有岩藻糖残基。在一些实施方案中，所述抗体包含Fc区和与Fc区连接的N-糖苷连接的碳水化合物链，其中少于约45％、约40％、约35％、约30％、约25％、约20％或约15％的N-糖苷连接的碳水化合物链含有岩藻糖残基。在一些方面，本文中提供包含本文所述抗Siglec-8抗体的组合物，其中所述抗体包含Fc区和连接至所述Fc区的N-糖苷连接的碳水化合物链，其中N-糖苷连接的碳水化合物链基本上均不含有岩藻糖残基。
通过将具有希望的纯度的活性成分与任选的药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂(Remington:The Science and Practice of Pharmacy,第20版,Lippincott Williams&Wiklins,Pub.,Gennaro编辑,Philadelphia,Pa.2000)混合来制备治疗配制品，供贮存用。可接受的载体、赋形剂或稳定剂在所采用的剂量和浓度对接受者是无毒的，而且包括缓冲液、抗氧化剂(包括抗坏血酸、甲硫氨酸、维生素E、偏亚硫酸氢钠)；防腐剂、等渗调节剂、稳定剂、金属复合物(例如Zn-蛋白质复合物)；螯合剂(诸如EDTA)和/或非离子表面活性剂。
可以使用缓冲液来将pH控制在优化治疗功效的范围内，尤其在稳定性依赖于pH的情况中。缓冲液可以以范围为约50mM至约250mM的浓度存在。适于与本公开文本一起使用的缓冲液包括有机酸和无机酸两者及其盐。例如，柠檬酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、富马酸盐、葡糖酸盐、草酸盐、乳酸盐、乙酸盐。另外，缓冲液可以由组氨酸和三甲胺盐(诸如Tris)构成。
可以添加防腐剂来防止微生物生长，而且典型地以约0.2％-1.0％(w/v)的范围存在。用于本公开文本的合适防腐剂包括十八烷基二甲基苄基氯化铵；六甲氯铵；苯扎卤铵(例如，苯扎氯铵、苯扎溴铵、苯扎碘铵)、苄索氯铵；硫柳汞、苯酚、丁醇或苄基醇；对羟基苯甲酸烷基酯，诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇、3-戊醇和间甲酚。
存在等渗剂(有时称为“稳定剂”)以调节或维持组合物中液体的等渗性。当与大的带电生物分子(诸如蛋白质和抗体)一起使用时，它们通常被称为“稳定剂”，因为它们可以与氨基酸侧链的带电基团相互作用，从而减少分子间和分子内相互作用的可能性。等渗剂可以以约0.1％至约25％(以重量计)、或约1至约5％之间的任何量存在，其中考虑了其他成分的相对量。在一些实施方案中，等渗剂包括多羟基糖醇、三羟基的或更高级的糖醇，诸如甘油、赤藓糖醇、阿糖醇、木糖醇、山梨醇和甘露醇。
另外的赋形剂包括可以充当以下项中一个或多个的药剂：(1)膨胀剂，(2)溶解度增强剂，(3)稳定剂以及(4)防止变性或粘附到容器壁上的药剂。此类赋形剂包括：多元糖醇(上面列举的)；氨基酸，诸如丙氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸、赖氨酸、鸟氨酸、亮氨酸、2-苯丙氨酸、谷氨酸、苏氨酸等；有机糖或糖醇，诸如蔗糖、乳糖、乳糖醇、海藻糖、水苏糖、甘露糖、山梨糖、木糖、核糖、核糖醇、肌肉肌糖、肌肉肌醇、半乳糖、半乳糖醇、甘油、环醇(例如肌醇)、聚乙二醇；含硫还原剂，诸如脲、谷胱甘肽、硫辛酸、硫代乙醇酸钠、硫代甘油、α-单硫代甘油和硫代硫酸钠；低分子量蛋白质，诸如人血清白蛋白、牛血清白蛋白、明胶或其他免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；单糖(例如，木糖、甘露糖、果糖、葡萄糖；二糖(例如，乳糖、麦芽糖、蔗糖)；三糖，诸如棉子糖；以及多糖，诸如糊精或葡聚糖。
存在非离子表面活性剂或洗涤剂(也称为“润湿剂”)以帮助溶解所述治疗剂以及保护所述治疗性蛋白免受搅动诱导的聚集，这也允许所述配制品暴露于剪切表面应力而不引起所述活性治疗蛋白或抗体的变性。非离子表面活性剂以约0.05mg/ml至约1.0mg/ml，或约0.07mg/ml至约0.2mg/ml范围存在。在一些实施方案中，非离子型表面活性剂以约0.001％至约0.1％w/v或约0.01％至约0.1％w/v或约0.01％至约0.025％w/v的范围存在。
合适的非离子表面活性剂包括聚山梨醇酯(20、40、60、65、80等)，泊洛沙姆(polyoxamer)(184、188等)，
Figure BDA0002353550440000721
多元醇，聚氧乙烯脱水山梨糖醇单醚(等)，聚桂醇400，聚烃氧40硬脂酸酯，聚氧乙烯氢化蓖麻油10、50和60，甘油单硬脂酸酯，蔗糖脂肪酸酯，甲基纤维素和羧甲基纤维素。可以使用的阴离子洗涤剂包括十二烷基硫酸钠、二辛基磺基琥珀酸钠和二辛基磺酸钠。阳离子洗涤剂包括苯扎氯铵或苄索氯铵。
为了配制品用于体内给药，它们必须是无菌的。通过无菌滤膜过滤，可以使得所述配制品变成无菌的。通常将本文中的治疗性组合物置入具有无菌存取口的容器中，例如具有皮下注射针可刺穿的塞子的静脉内溶液袋或小瓶。
给药途径是根据已知且可接受的方法，诸如通过单次或多次推注或者以合适的方式长时间输注，例如通过皮下、静脉内、腹膜内、肌肉内、动脉内、病灶内或关节内途径注射或输注，局部给药，吸入或通过持续释放或延长释放方式。
本文中的配制品还可以含有超过一种的所治疗特定适应症所必需的活性化合物，优选那些活性互补且彼此没有不利影响的。此类活性化合物适合以对于预定目的有效的量组合存在。
IV.制品或试剂盒
在另一方面，提供了包含本文所述的抗Siglec-8抗体(例如，与人Siglec-8结合的抗体)的制品或试剂盒。所述制品或试剂盒还可包含关于将所述抗体用在本公开文本的方法中的说明书。因此，在某些实施方案中，所述制品或试剂盒包含关于将与人Siglec-8结合的抗Siglec-8抗体用在治疗和/或预防个体的过敏性眼病(例如过敏性结膜炎、角膜结膜炎或巨***性结膜炎)的方法中的说明书，所述方法包括向所述个体给予有效量的与人Siglec-8结合的抗Siglec-8抗体。在某些实施方案中，所述制品包含：药剂，所述药剂包含与人Siglec-8结合的抗体；以及包装插页，所述包装插页包含关于在有需要的个体中给予所述药剂以治疗和/或预防个体的过敏性眼病(例如过敏性结膜炎、角膜结膜炎或巨***性结膜炎)的说明书。在一些实施方案中，包装插页进一步指示与给予所述药剂之前的基线水平相比，所述治疗在减轻患有过敏性眼病(例如过敏性结膜炎、角膜结膜炎或巨***性结膜炎)的个体中的一种或多种症状有效。在一些实施方案中，在给予包含抗体的所述药剂之前，诊断出所述个体患有过敏性眼病(例如过敏性结膜炎、角膜结膜炎或巨***性结膜炎)。在某些实施方案中，所述个体是人。
所述制品或试剂盒还可包含容器。合适的容器包括例如瓶、小瓶(例如双室小瓶)、注射器(诸如单室或双室注射器)和试管。所述容器可以用各种材料(诸如玻璃或塑料)制成。所述容器装有所述配制品。
所述制品或试剂盒还可包含在容器上的或与所述容器相关联的标签或包装插页，其可指示关于重建和/或使用配制品的指导说明。所述标签或包装插页可进一步指示所述配制品可用于或旨在用于皮下、静脉内或其他方式的给药以治疗和/或预防个体的过敏性眼病(例如过敏性结膜炎、角膜结膜炎或巨***性结膜炎)。所述装有配制品的容器可以是单次使用的小瓶或多次使用的小瓶，其容许重建配制品的重复给药。所述制品或试剂盒还可包含含有合适的稀释剂的第二容器。所述制品或试剂盒可进一步包含从商业、治疗和用户角度来看希望的其他材料，包括其他缓冲液、稀释剂、过滤器、针、注射筒和印有使用说明书的包装插页。
在一个具体的实施方案中，本公开文本提供用于单剂给药单位的试剂盒。此类试剂盒包含治疗性抗体的水性配制品的容器，包括单室或多室预装填注射器。示例性预装填注射器可以自Vetter GmbH,Ravensburg,Germany获得。
在另一个实施方案中，本文提供了制品或试剂盒，其包含本文中所述的用于在自动注射器装置中给予的配制品。自动注射器可以描述成在激活后无需另外的来自患者或给药者的必需动作就会递送其内容物的注射装置。当递送速率必须恒定且递送时间大于少许片刻的时候，它们特别适于治疗性配制品的自我药疗。
在另一方面，提供了包含本文所述的抗Siglec-8抗体(例如，与人Siglec-8结合的抗体)的制品或试剂盒。所述制品或试剂盒还可包含关于将所述抗体用在本公开文本的方法中的说明书。因此，在某些实施方案中，所述制品或试剂盒包含关于将与人Siglec-8结合的抗Siglec-8抗体用在治疗或预防个体的过敏性眼病(例如过敏性结膜炎、角膜结膜炎或巨***性结膜炎)的方法中的说明书，所述方法包括向所述个体给予有效量的与人Siglec-8结合的抗Siglec-8抗体。在某些实施方案中，所述制品或试剂盒包含：药剂，所述药剂包含与人Siglec-8结合的抗体；以及包装插页，所述包装插页包含关于在有需要的个体中给予所述药剂以治疗和/或预防个体的过敏性眼病(例如过敏性结膜炎、角膜结膜炎或巨***性结膜炎)的说明书。
本公开文本还提供了一种制品或试剂盒，其包含本文所述的抗Siglec-8抗体(例如与人Siglec-8结合的抗体)与一种或多种另外的药剂(例如第二药剂)的组合，用于治疗或预防个体的过敏性眼病(例如过敏性结膜炎、角膜结膜炎或巨***性结膜炎)。所述制品或试剂盒还可包含关于将抗体与一种或多种另外的药剂组合用在本公开文本的方法中的说明书。例如，本文的制品或试剂盒任选地还包含容器，所述容器包含第二药剂，其中所述抗Siglec-8抗体是第一药剂，并且所述制品或试剂盒还包括标签或包装插页上的关于以有效量的第二药剂治疗所述个体的说明书。因此，在某些实施方案中，所述制品或试剂盒包含关于将与人Siglec-8结合的抗Siglec-8抗体与一种或多种另外的药剂组合用在治疗或预防个体的过敏性眼病(例如过敏性结膜炎、角膜结膜炎或巨***性结膜炎)的方法中的说明书。在某些实施方案中，所述制品或试剂盒包含：药剂，所述药剂包含与人Siglec-8结合的抗体(例如，第一药剂)、一种或多种另外的药剂；以及包装插页，所述包装插页包含关于将所述第一药剂与一种或多种另外的药剂(例如第二药剂)组合给药的说明书。在一些实施方案中，所述一种或多种其他治疗剂可包括但不限于皮质类固醇(例如布***、***、氢化可的松、甲基***龙、***龙或***)、抗组胺药(例如盐酸左卡巴汀或奥洛他定)、酮替芬、氮卓斯汀、依匹斯汀、贝司他汀、环孢菌素、以及非甾体抗炎剂(NSAID)。
应当理解，本文所述的方面和实施方案仅用于说明目的，并且根据它们进行的各种修改或变化将为本领域技术人员知晓，并且应包括在本申请的精神和范围内以及所附权利要求书的范围内。
实施例
通过参考下述实施例，会更加全面地理解本公开文本。然而，实施例不应被解读为限制本公开文本的范围。应当理解，本文所述的实施例和实施方案仅用于说明目的，并且根据它们进行的各种修改或变化将为本领域技术人员知晓，并且应包括在本申请的精神和范围内以及所附权利要求书的范围内。
实施例1：在过敏性结膜炎的体内小鼠模型中评估抗Siglec-8抗体
已经建立了用于研究各种过敏性眼病的动物模型(参见，例如，Groneberg,D.A.等人(2003)Allergy 58:1101-1113)，包括用于过敏性结膜炎的小鼠模型(Giavina-Bianchi,P.等人(2008)Acta Ophthalmol.86:670-675)。为了在过敏性结膜炎的鼠类模型中评估抗Siglec-8抗体的作用，通过全身给予过敏原致敏Siglec-8转基因小鼠，随后进行眼部过敏原激发，随后在激发后15min与24小时之间的时间间隔进行结膜炎的临床评估，以观察早期和晚期炎性反应。
如下进行了Giavina-Bianchi,P.等人(2008)Acta Ophthalmol.86:670-675描述的C57Bl/6小鼠的“Der p”模型。在第0天，用由屋尘螨(D.pteronyssinus)提取物(“Der p”)提取物制备的溶液免疫小鼠。10天后，进行眼部激发以诱导过敏性结膜炎。
眼部激发后20min至24小时进行临床分析和实验室分析材料的收集。具体来说，在小鼠的后腿底部和下腹部皮下给予含有5-500微克过敏原的免疫溶液。
剂量的四分之一注入每条后腿，其余一半注入腹部。致敏后十天，每只眼睛用两滴过敏原溶液(4-5微克/微升)激发小鼠。在激发后20min与24小时之间的间隔，检查小鼠结膜水肿、眼睑水肿、结膜充血和流泪。分析组织和分泌物的细胞因子以及包括肥大细胞和嗜酸性粒细胞在内的炎性细胞的存在。为了评估抗Siglec-8抗体的活性，在眼部激发前一天或三天通过腹膜内(ip)给予来给予剂量水平为0.1-5.0mg/kg的抗体或同种型对照抗体，或者从致敏时起每周两次给药。
对于卵清蛋白诱导的结膜炎，通过腹膜内给予0.1mg卵清蛋白与1mg氢氧化铝佐剂和0.3mg百日咳毒素致敏Siglec-8转基因小鼠，在第4天通过皮下给予(sc)50微克卵清蛋白加强，并通过在第17天用0.75mg卵清蛋白进行眼部激发来激发，根据Izushi,K.等人(2002)Eur.J.Pharmacol.440:79-82描述的方法。如上文所述进行抗Siglec-8抗体治疗、临床分析和实验室分析。
对于豚草诱导的结膜炎，通过在第0天皮下给予50微克豚草提取物和5mg氢氧化铝来致敏Siglec-8转基因小鼠，并在第9天用1.25mg豚草提取物进行眼部激发，如Magone,M.T.等人(1998)Clin.Immunol.Immunopathol.87(1):75-84所述。如上文所述进行抗Siglec-8抗体治疗、临床分析和实验室分析。
实施例2：评估抗-Siglec-8抗体治疗在患有或不患有特应性角膜结膜炎(AKC)、春季角膜结膜炎(VKC)和常年性过敏性结膜炎(PAC)的患者中的疗效和安全性的开放标签试点研究的结构
在过去的几十年中，患有过敏性眼病的人数有所增加，现在被认为影响了至少15％至20％的人口(La Rosa,M.等人(2013)Ital.J.Pediatr.39:18)。过敏性眼病包括许多具有不同作用机制的特定临床实体。这项研究被设计为测试抗Siglec-8抗体治疗在AKC、VKC或PAC患者中的安全性和疗效。
总计约30位受试者每月静脉输注6剂抗Siglec-8抗体HEKA(未岩藻糖基化IgG1)，剂量最高为3mg/kg。使用不良事件通用术语标准(CTCAE)4.03版评估临床实验室参数和不良事件。收集不良事件，从首次研究药物输注时开始并且在第309天(±7天)或在提前终止(ET)访视时结束。嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞的绝对外周血细胞计数在给药前第-1天开始测量，并在第309天或ET访视时结束。使用过敏性结膜炎症状(ACS)问卷来评估与AKC、VKC或PAC相关的症状，并且在从筛选到第309天或ET访视的整个研究期间每个受试者每天都要完成该问卷。
纳入标准包括：
(a)年龄(≥18岁且≤80岁)；
(b)确认AKC、VKC或PAC的诊断，并且对于以下症状中的至少一种，根据筛选期内完成的所有每日ACS问卷计算得出的平均症状评分≥3(每日最少必须完成14份ACS问卷)：
1.瘙痒
2.畏光
3.眼痛
4.异物感
5.眼溢液
(c)局部使用皮质类固醇和/或全身使用皮质类固醇治疗过敏性结膜炎(AKC、VKC或PAC)的历史；
(d)在筛选之前的14天内以及整个筛选期间内，一个或多个稳定剂量的得到允许的AKC、VKC或PAC药物；并承诺在整个研究参与期间保持一个或多个相同剂量的AKC、VKC或PAC药物(除非由于不可预见的医疗需要而调整剂量)；
(e)阴性筛选ova和寄生虫试验；和
(f)妊娠试验阴性(女性)。
排除标准包括：
(a)除子宫颈原位癌、早期***癌或非黑素瘤皮肤癌以外的恶性病史；
(b)在首次服用抗体前48小时内使用隐形眼镜；
(c)参与一项同时进行的干预性研究，最后一次干预发生在给予研究药物之前的30天内(或对于生物制品，则为90天或5个半衰期，以较长者为准)；
(d)在过去6个月内以化疗或放疗进行治疗；
(e)在6个月筛选期内治疗临床上明显的蠕虫寄生虫感染；
(f)在筛选前30天内使用(或5个半衰期，以较长者为准)或在筛选期间使用局部减充血剂、局部血管收缩剂、局部钙调神经磷酸酶抑制剂、局部皮质类固醇、奥马珠单抗、度匹鲁单抗、全身性免疫抑制药物或全身性皮质类固醇与每日剂量>10mg***或等同物(允许用于特应性皮炎的局部皮质类固醇、用于鼻炎的皮质类固醇鼻喷雾剂和用于过敏性哮喘的吸入性皮质类固醇)；
(g)在研究开始治疗之前的30天内、在治疗期间内接种减毒活疫苗，或预期在研究药物给药后5个半衰期(4个月)内接种疫苗；
(h)在筛选时，肝炎血清学检查结果为阳性，但接种疫苗的患者或既往有肝炎但已消退的患者除外；和
(i)筛选时HIV血清学检查呈阳性结果。
主要结果度量是基于临床实验室参数和不良事件的评估(根据使用不良事件通用术语标准(CTCAE)4.03版评估)进行的抗体治疗的安全性和耐受性。
次要结果度量包括：
(a)嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞的绝对外周血细胞计数从基线的变化(从给药前的第-1天开始至第309天或ET访视)；并且
(b)每天由疾病特异性患者问卷、过敏性结膜炎症状(ACS)问卷(在整个研究中从筛选到第309天或ET访视)测量的与AKC、VKC或PAC相关的基线症状的变化。
可选的次要结果度量包括：
(a)由美国国家眼科研究所视觉功能问卷-25(NEI VFQ 25)测量的基线生活质量的变化(从给药前的第-1天开始至第309天或ET访视)；
(b)由集中式图像读取中心评估的裂隙灯彩色摄影中基线眼部体征(包括点状角膜染色)的变化(从给药前的第-1天开始至第309天或ET访视)；
(c)由调查者或协助调查者评估的基线眼科检查眼部症状评分的变化(从给药前的第-1天开始至第309天或ET访视)；
(d)在可选的泪液(眼泪)样品中测量的基线炎性介质和抗Siglec-8抗体HEKA(未岩藻糖基化IgG1)浓度的变化(从给药前的第-1天开始至第309天或ET访视)；
(e)可选的结膜活检中嗜酸性粒细胞和肥大细胞的基线组织病理学检查的变化(在给药前的第-1天和第169天或ET访视时收集)；
(f)通过针对5种不同症状的ACS疾病特定问卷每日症状评分所测量的基线体征和症状的变化(在整个研究中从筛选到第309天或ET访视)；
(g)通过生活质量问卷，美国国家眼科研究所视觉功能问卷25(NEI VFQ 25)测量的基线体征和症状的变化；以及
(i)通过评估伴随的特应性病症(特应性皮炎、过敏性哮喘、过敏性鼻炎)所测量的基线体征和症状的变化。
序列
除非另有说明，否则所有多肽序列均以N末端到C末端呈现。
除非另有说明，否则所有核酸序列均以5'至3'呈现。
小鼠2E2重链可变结构域的氨基酸序列
QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTIYGAHWVRQPPGKGLEWLGVIWAGGSTNYNSALMSRLSISKDNSKSQVFLKINSLQTDDTALYYCARDGSSPYYYSMEYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO:1)
2E2 RHA重链可变结构域的氨基酸序列
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLTIYGAHWVRQAPGKGLEWVSVIWAGGSTNYNSALMSRFTISKDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGSSPYYYSMEYWGQGTTVTVSS(SEQ ID NO:2)
2E2 RHB重链可变结构域的氨基酸序列
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLTIYGAHWVRQAPGKGLEWLGVIWAGGSTNYNSALMSRLSISKDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGSSPYYYSMEYWGQGTTVTVSS(SEQ ID NO:3)
2E2 RHC重链可变结构域的氨基酸序列
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLTIYGAHWVRQAPGKGLEWVSVIWAGGSTNYNSALMSRFTISKDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGSSPYYYSMEYWGQGTTVTVSS(SEQ ID NO:4)
2E2 RHD重链可变结构域的氨基酸序列
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLTIYGAHWVRQAPGKGLEWLSVIWAGGSTNYNSALMSRFTISKDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGSSPYYYSMEYWGQGTTVTVSS(SEQ ID NO:5)
2E2 RHE重链可变结构域的氨基酸序列
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLTIYGAHWVRQAPGKGLEWVGVIWAGGSTNYNSALMSRFTISKDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGSSPYYYSMEYWGQGTTVTVSS(SEQ ID NO:6)
2E2 RHF重链可变结构域的氨基酸序列
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLTIYGAHWVRQAPGKGLEWVSVIWAGGSTNYNSALMSRLTISKDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGSSPYYYSMEYWGQGTTVTVSS(SEQ ID NO:7)
2E2 RHG重链可变结构域的氨基酸序列
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLTIYGAHWVRQAPGKGLEWVSVIWAGGSTNYNSALMSRFSISKDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGSSPYYYSMEYWGQGTTVTVSS(SEQ ID NO:8)
2E2 RHA2重链可变结构域的氨基酸序列
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISIYGAHWIRQPPGKGLEWIGVIWAGGSTNYNSALMSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDGSSPYYYSMEYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:9)
2E2 RHB2重链可变结构域的氨基酸序列
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLTIYGAHWVRQPPGKGLEWLGVIWAGGSTNYNSALMSRLSISKDNSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARDGSSPYYYSMEYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:10)
2E2 RHE S-G突变重链可变结构域的氨基酸序列
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLTIYGAHWVRQAPGKGLEWVGVIWAGGSTNYNSALMSRFTISKDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGSSPYYYGMEYWGQGTTVTVSS(SEQ ID NO:11)
2E2 RHE E-D重链可变结构域的氨基酸序列
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLTIYGAHWVRQAPGKGLEWVGVIWAGGSTNYNSALMSRFTISKDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGSSPYYYSMDYWGQGTTVTVSS(SEQ ID NO:12)
2E2 RHE Y-V重链可变结构域的氨基酸序列
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLTIYGAHWVRQAPGKGLEWVGVIWAGGSTNYNSALMSRFTISKDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGSSPYYYSMEVWGQGTTVTVSS(SEQ ID NO:13)
2E2 RHE三突变重链可变结构域的氨基酸序列
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLTIYGAHWVRQAPGKGLEWVGVIWAGGSTNYNSALMSRFTISKDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGSSPYYYGMDVWGQGTTVTVSS(SEQ ID NO:14)
小鼠2E2轻链可变结构域的氨基酸序列
QIILTQSPAIMSASPGEKVSITCSATSSVSYMHWFQQKPGTSPKLWIYSTSNLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQRSSYPFTFGSGTKLEIK(SEQ ID NO:15)
2E2 RKA轻链可变结构域的氨基酸序列
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSATSSVSYMHWFQQKPGQAPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSYPFTFGPGTKLDIK(SEQ ID NO:16)
2E2 RKB轻链可变结构域的氨基酸序列
EIILTQSPATLSLSPGERATLSCSATSSVSYMHWFQQKPGQAPRLWIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSYPFTFGPGTKLDIK(SEQ ID NO:17)
2E2 RKC轻链可变结构域的氨基酸序列
EIILTQSPATLSLSPGERATLSCSATSSVSYMHWFQQKPGQAPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSYPFTFGPGTKLDIK(SEQ ID NO:18)
2E2 RKD轻链可变结构域的氨基酸序列
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSATSSVSYMHWFQQKPGQAPRLWIYSTSNLASGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSYPFTFGPGTKLDIK(SEQ ID NO:19)
2E2 RKE轻链可变结构域的氨基酸序列
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSATSSVSYMHWFQQKPGQAPRLLIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSYPFTFGPGTKLDIK(SEQ ID NO:20)
2E2 RKF轻链可变结构域的氨基酸序列
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSATSSVSYMHWFQQKPGQAPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSYPFTFGPGTKLDIK(SEQ ID NO:21)
2E2 RKG轻链可变结构域的氨基酸序列
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSATSSVSYMHWYQQKPGQAPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSYPFTFGPGTKLDIK(SEQ ID NO:22)
2E2 RKAF-Y突变轻链可变结构域的氨基酸序列
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSATSSVSYMHWFQQKPGQAPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSYPYTFGPGTKLDIK(SEQ ID NO:23)
2E2 RKF F-Y突变轻链可变结构域的氨基酸序列
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSATSSVSYMHWFQQKPGQAPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSYPYTFGPGTKLDIK(SEQ ID NO:24)
HEKA重链和HEKF重链的氨基酸序列
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLTIYGAHWVRQAPGKGLEWVGVIWAGGSTNYNSALMSRFTISKDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGSSPYYYSMEYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:75)
HEKA轻链的氨基酸序列
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSATSSVSYMHWFQQKPGQAPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSYPFTFGPGTKLDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ IDNO:76)
HEKF轻链的氨基酸序列
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSATSSVSYMHWFQQKPGQAPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSSYPFTFGPGTKLDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ IDNO:77)
IgG1重链恒定区的氨基酸序列
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:78)
IgG4重链恒定区的氨基酸序列
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG(SEQ ID NO:79)
Igκ轻链恒定区的氨基酸序列
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:80)
鼠2C4和2E2IgG1重链的氨基酸序列
QVQLKRASGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTIYGAHWVRQPPGKGLEWLGVIWAGGSTNYNSALMSRLSISKDNSKSQVFLKINSLQTDDTALYYCARDGSSPYYYSMEYWGQGTSVTVSSAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLESDLYTLSSSVTVPSSPRPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMNTNGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPG(SEQID NO:81)
鼠2C4κ轻链的氨基酸序列
EIILTQSPAIMSASPGEKVSITCSATSSVSYMHWFQQKPGTSPKLWIYSTSNLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQRSSYPFTFGSGTKLEIKADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC(SEQ IDNO:82)
鼠2E2κ轻链的氨基酸序列
QIILTQSPAIMSASPGEKVSITCSATSSVSYMHWFQQKPGTSPKLWIYSTSNLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQRSSYPFTFGSGTKLEIKADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC(SEQ IDNO:83)
嵌合2C4和2E2IgG1重链的氨基酸序列
QVQLKRASGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTIYGAHWVRQPPGKGLEWLGVIWAGGSTNYNSALMSRLSISKDNSKSQVFLKINSLQTDDTALYYCARDGSSPYYYSMEYWGQGTSVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:84)
嵌合2C4κ轻链的氨基酸序列
EIILTQSPAIMSASPGEKVSITCSATSSVSYMHWFQQKPGTSPKLWIYSTSNLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQRSSYPFTFGSGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ IDNO:85)
嵌合2E2κ轻链的氨基酸序列
QIILTQSPAIMSASPGEKVSITCSATSSVSYMHWFQQKPGTSPKLWIYSTSNLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQRSSYPFTFGSGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ IDNO:86)
HEKA IgG4重链的氨基酸序列(IgG4包含S228P突变)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLTIYGAHWVRQAPGKGLEWVGVIWAGGSTNYNSALMSRFTISKDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGSSPYYYSMEYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG(SEQ ID NO:87)
小鼠1C3重链可变结构域的氨基酸序列(根据Chothia编号，下划线的残基包含CDR H1和H2)
EVQVVESGGDLVKSGGSLKLSCAASGFPFSSYAMSWVRQTPDKRLEWVAIISSGGSYTYYSDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTAMYYCARHETAQAAWFAYWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:106)
小鼠1H10重链可变结构域的氨基酸序列(根据Chothia编号，下划线的残基包含 CDR H1和H2)
EVQLQQSGAELVRPGASVKLSCTASGFNIKDYYMYWVKQRPEQGLEWIGRIAPEDGDTEYAPKFQGKATVTADTSSNTAYLHLSSLTSEDTAVYYCTTEGNYYGSSILDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO:107)
小鼠4F11重链可变结构域的氨基酸序列(根据Chothia编号，下划线的残基包含 CDR H1和H2)
QVQLQQSGAELVKPGASVKISCKASGYAFRSSWMNWVKQRPGKGLEWIGQIYPGDDYTNYNGKFKGKVTLTADRSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYFCARLGPYGPFADWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:108)
小鼠1C3轻链可变结构域的氨基酸序列
QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMHWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLAYGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWSSNPPTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:109)
小鼠1H10轻链可变结构域的氨基酸序列
DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDITNYLNWYQQKPDGTVKLLIYFTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:110)
小鼠4F11轻链可变结构域的氨基酸序列
QIVLTQSPAIVSASPGEKVTMTCSASSSVSYMYWYQQRPGSSPRLLIYDTSSLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRIESEDAANYYCQQWNSDPYTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:111)
序列表
<110> Allakos Inc.
BEBBINGTON, Christopher Robert
YOUNGBLOOD, Bradford Andrew
TOMASEVIC, Nenad
<120> 用于治疗过敏性眼病的方法和组合物
<130> 70171-20007.40
<140> 尚未分配
<141> 同时随同提交
<150> US 62/502,479
<151> 2017-05-05
<160> 124
<170> 用于Windows 4.0版的FastSEQ
<210> 1
<211> 120
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 1
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ile Tyr
20 25 30
Gly Ala His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Ile Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Gly Ser Ser Pro Tyr Tyr Tyr Ser Met Glu Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 2
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 2
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ile Tyr
20 25 30
Gly Ala His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met
50 55 60
Ser Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Gly Ser Ser Pro Tyr Tyr Tyr Ser Met Glu Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 3
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 3
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ile Tyr
20 25 30
Gly Ala His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Gly Ser Ser Pro Tyr Tyr Tyr Ser Met Glu Tyr Trp Gly Gln
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
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<220>
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<400> 23
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<220>
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<400> 24
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<213> 智人
<400> 47
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<213> 智人
<400> 49
Glu Ile Ile Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys
20
<210> 50
<211> 15
<212> PRT
<213> 智人
<400> 50
Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 51
<211> 15
<212> PRT
<213> 智人
<400> 51
Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 52
<211> 15
<212> PRT
<213> 智人
<400> 52
Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Trp Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 53
<211> 15
<212> PRT
<213> 智人
<400> 53
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 54
<211> 32
<212> PRT
<213> 智人
<400> 54
Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Arg Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 55
<211> 32
<212> PRT
<213> 智人
<400> 55
Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 56
<211> 32
<212> PRT
<213> 智人
<400> 56
Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 57
<211> 32
<212> PRT
<213> 智人
<400> 57
Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 58
<211> 32
<212> PRT
<213> 智人
<400> 58
Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 59
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人
<400> 59
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 60
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人
<400> 60
Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Asp Ile Lys
1 5 10
<210> 61
<211> 5
<212> PRT
<213> 智人
<400> 61
Ile Tyr Gly Ala His
1 5
<210> 62
<211> 16
<212> PRT
<213> 智人
<400> 62
Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met Ser
1 5 10 15
<210> 63
<211> 12
<212> PRT
<213> 智人
<400> 63
Asp Gly Ser Ser Pro Tyr Tyr Tyr Ser Met Glu Tyr
1 5 10
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<211> 10
<212> PRT
<213> 智人
<400> 64
Ser Ala Thr Ser Ser Val Ser Tyr Met His
1 5 10
<210> 65
<211> 7
<212> PRT
<213> 智人
<400> 65
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 66
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人
<400> 66
Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Phe Thr
1 5
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<211> 12
<212> PRT
<213> 智人
<400> 67
Asp Gly Ser Ser Pro Tyr Tyr Tyr Gly Met Glu Tyr
1 5 10
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<211> 12
<212> PRT
<213> 智人
<400> 68
Asp Gly Ser Ser Pro Tyr Tyr Tyr Ser Met Asp Tyr
1 5 10
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<211> 12
<212> PRT
<213> 智人
<400> 69
Asp Gly Ser Ser Pro Tyr Tyr Tyr Ser Met Glu Val
1 5 10
<210> 70
<211> 12
<212> PRT
<213> 智人
<400> 70
Asp Gly Ser Ser Pro Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 71
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人
<400> 71
Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 72
<211> 474
<212> PRT
<213> 智人
<400> 72
Gly Tyr Leu Leu Gln Val Gln Glu Leu Val Thr Val Gln Glu Gly Leu
1 5 10 15
Cys Val His Val Pro Cys Ser Phe Ser Tyr Pro Gln Asp Gly Trp Thr
20 25 30
Asp Ser Asp Pro Val His Gly Tyr Trp Phe Arg Ala Gly Asp Arg Pro
35 40 45
Tyr Gln Asp Ala Pro Val Ala Thr Asn Asn Pro Asp Arg Glu Val Gln
50 55 60
Ala Glu Thr Gln Gly Arg Phe Gln Leu Leu Gly Asp Ile Trp Ser Asn
65 70 75 80
Asp Cys Ser Leu Ser Ile Arg Asp Ala Arg Lys Arg Asp Lys Gly Ser
85 90 95
Tyr Phe Phe Arg Leu Glu Arg Gly Ser Met Lys Trp Ser Tyr Lys Ser
100 105 110
Gln Leu Asn Tyr Lys Thr Lys Gln Leu Ser Val Phe Val Thr Ala Leu
115 120 125
Thr His Arg Pro Asp Ile Leu Ile Leu Gly Thr Leu Glu Ser Gly His
130 135 140
Ser Arg Asn Leu Thr Cys Ser Val Pro Trp Ala Cys Lys Gln Gly Thr
145 150 155 160
Pro Pro Met Ile Ser Trp Ile Gly Ala Ser Val Ser Ser Pro Gly Pro
165 170 175
Thr Thr Ala Arg Ser Ser Val Leu Thr Leu Thr Pro Lys Pro Gln Asp
180 185 190
His Gly Thr Ser Leu Thr Cys Gln Val Thr Leu Pro Gly Thr Gly Val
195 200 205
Thr Thr Thr Ser Thr Val Arg Leu Asp Val Ser Tyr Pro Pro Trp Asn
210 215 220
Leu Thr Met Thr Val Phe Gln Gly Asp Ala Thr Ala Ser Thr Ala Leu
225 230 235 240
Gly Asn Gly Ser Ser Leu Ser Val Leu Glu Gly Gln Ser Leu Arg Leu
245 250 255
Val Cys Ala Val Asn Ser Asn Pro Pro Ala Arg Leu Ser Trp Thr Arg
260 265 270
Gly Ser Leu Thr Leu Cys Pro Ser Arg Ser Ser Asn Pro Gly Leu Leu
275 280 285
Glu Leu Pro Arg Val His Val Arg Asp Glu Gly Glu Phe Thr Cys Arg
290 295 300
Ala Gln Asn Ala Gln Gly Ser Gln His Ile Ser Leu Ser Leu Ser Leu
305 310 315 320
Gln Asn Glu Gly Thr Gly Thr Ser Arg Pro Val Ser Gln Val Thr Leu
325 330 335
Ala Ala Val Gly Gly Ala Gly Ala Thr Ala Leu Ala Phe Leu Ser Phe
340 345 350
Cys Ile Ile Phe Ile Ile Val Arg Ser Cys Arg Lys Lys Ser Ala Arg
355 360 365
Pro Ala Ala Gly Val Gly Asp Thr Gly Met Glu Asp Ala Lys Ala Ile
370 375 380
Arg Gly Ser Ala Ser Gln Gly Pro Leu Thr Glu Ser Trp Lys Asp Gly
385 390 395 400
Asn Pro Leu Lys Lys Pro Pro Pro Ala Val Ala Pro Ser Ser Gly Glu
405 410 415
Glu Gly Glu Leu His Tyr Ala Thr Leu Ser Phe His Lys Val Lys Pro
420 425 430
Gln Asp Pro Gln Gly Gln Glu Ala Thr Asp Ser Glu Tyr Ser Glu Ile
435 440 445
Lys Ile His Lys Arg Glu Thr Ala Glu Thr Gln Ala Cys Leu Arg Asn
450 455 460
His Asn Pro Ser Ser Lys Glu Val Arg Gly
465 470
<210> 73
<211> 474
<212> PRT
<213> 智人
<400> 73
Gly Tyr Leu Leu Gln Val Gln Glu Leu Val Thr Val Gln Glu Gly Leu
1 5 10 15
Cys Val His Val Pro Cys Ser Phe Ser Tyr Pro Gln Asp Gly Trp Thr
20 25 30
Asp Ser Asp Pro Val His Gly Tyr Trp Phe Arg Ala Gly Asp Arg Pro
35 40 45
Tyr Gln Asp Ala Pro Val Ala Thr Asn Asn Pro Asp Arg Glu Val Gln
50 55 60
Ala Glu Thr Gln Gly Arg Phe Gln Leu Leu Gly Asp Ile Trp Ser Asn
65 70 75 80
Asp Cys Ser Leu Ser Ile Arg Asp Ala Arg Lys Arg Asp Lys Gly Ser
85 90 95
Tyr Phe Phe Arg Leu Glu Arg Gly Ser Met Lys Trp Ser Tyr Lys Ser
100 105 110
Gln Leu Asn Tyr Lys Thr Lys Gln Leu Ser Val Phe Val Thr Ala Leu
115 120 125
Thr His Arg Pro Asp Ile Leu Ile Leu Gly Thr Leu Glu Ser Gly His
130 135 140
Pro Arg Asn Leu Thr Cys Ser Val Pro Trp Ala Cys Lys Gln Gly Thr
145 150 155 160
Pro Pro Met Ile Ser Trp Ile Gly Ala Ser Val Ser Ser Pro Gly Pro
165 170 175
Thr Thr Ala Arg Ser Ser Val Leu Thr Leu Thr Pro Lys Pro Gln Asp
180 185 190
His Gly Thr Ser Leu Thr Cys Gln Val Thr Leu Pro Gly Thr Gly Val
195 200 205
Thr Thr Thr Ser Thr Val Arg Leu Asp Val Ser Tyr Pro Pro Trp Asn
210 215 220
Leu Thr Met Thr Val Phe Gln Gly Asp Ala Thr Ala Ser Thr Ala Leu
225 230 235 240
Gly Asn Gly Ser Ser Leu Ser Val Leu Glu Gly Gln Ser Leu Arg Leu
245 250 255
Val Cys Ala Val Asn Ser Asn Pro Pro Ala Arg Leu Ser Trp Thr Arg
260 265 270
Gly Ser Leu Thr Leu Cys Pro Ser Arg Ser Ser Asn Pro Gly Leu Leu
275 280 285
Glu Leu Pro Arg Val His Val Arg Asp Glu Gly Glu Phe Thr Cys Arg
290 295 300
Ala Gln Asn Ala Gln Gly Ser Gln His Ile Ser Leu Ser Leu Ser Leu
305 310 315 320
Gln Asn Glu Gly Thr Gly Thr Ser Arg Pro Val Ser Gln Val Thr Leu
325 330 335
Ala Ala Val Gly Gly Ala Gly Ala Thr Ala Leu Ala Phe Leu Ser Phe
340 345 350
Cys Ile Ile Phe Ile Ile Val Arg Ser Cys Arg Lys Lys Ser Ala Arg
355 360 365
Pro Ala Ala Gly Val Gly Asp Thr Gly Met Glu Asp Ala Lys Ala Ile
370 375 380
Arg Gly Ser Ala Ser Gln Gly Pro Leu Thr Glu Ser Trp Lys Asp Gly
385 390 395 400
Asn Pro Leu Lys Lys Pro Pro Pro Ala Val Ala Pro Ser Ser Gly Glu
405 410 415
Glu Gly Glu Leu His Tyr Ala Thr Leu Ser Phe His Lys Val Lys Pro
420 425 430
Gln Asp Pro Gln Gly Gln Glu Ala Thr Asp Ser Glu Tyr Ser Glu Ile
435 440 445
Lys Ile His Lys Arg Glu Thr Ala Glu Thr Gln Ala Cys Leu Arg Asn
450 455 460
His Asn Pro Ser Ser Lys Glu Val Arg Gly
465 470
<210> 74
<211> 573
<212> PRT
<213> 智人
<400> 74
Gly Tyr Leu Leu Gln Val Gln Glu Leu Val Thr Val Gln Glu Gly Leu
1 5 10 15
Cys Val His Val Pro Cys Ser Phe Ser Tyr Pro Gln Asp Gly Trp Thr
20 25 30
Asp Ser Asp Pro Val His Gly Tyr Trp Phe Arg Ala Gly Asp Arg Pro
35 40 45
Tyr Gln Asp Ala Pro Val Ala Thr Asn Asn Pro Asp Arg Glu Val Gln
50 55 60
Ala Glu Thr Gln Gly Arg Phe Gln Leu Leu Gly Asp Ile Trp Ser Asn
65 70 75 80
Asp Cys Ser Leu Ser Ile Arg Asp Ala Arg Lys Arg Asp Lys Gly Ser
85 90 95
Tyr Phe Phe Arg Leu Glu Arg Gly Ser Met Lys Trp Ser Tyr Lys Ser
100 105 110
Gln Leu Asn Tyr Lys Thr Lys Gln Leu Ser Val Phe Val Thr Ala Leu
115 120 125
Thr His Arg Pro Asp Ile Leu Ile Leu Gly Thr Leu Glu Ser Gly His
130 135 140
Ser Arg Asn Leu Thr Cys Ser Val Pro Trp Ala Cys Lys Gln Gly Thr
145 150 155 160
Pro Pro Met Ile Ser Trp Ile Gly Ala Ser Val Ser Ser Pro Gly Pro
165 170 175
Thr Thr Ala Arg Ser Ser Val Leu Thr Leu Thr Pro Lys Pro Gln Asp
180 185 190
His Gly Thr Ser Leu Thr Cys Gln Val Thr Leu Pro Gly Thr Gly Val
195 200 205
Thr Thr Thr Ser Thr Val Arg Leu Asp Val Ser Tyr Pro Pro Trp Asn
210 215 220
Leu Thr Met Thr Val Phe Gln Gly Asp Ala Thr Ala Ser Thr Ala Leu
225 230 235 240
Gly Asn Gly Ser Ser Leu Ser Val Leu Glu Gly Gln Ser Leu Arg Leu
245 250 255
Val Cys Ala Val Asn Ser Asn Pro Pro Ala Arg Leu Ser Trp Thr Arg
260 265 270
Gly Ser Leu Thr Leu Cys Pro Ser Arg Ser Ser Asn Pro Gly Leu Leu
275 280 285
Glu Leu Pro Arg Val His Val Arg Asp Glu Gly Glu Phe Thr Cys Arg
290 295 300
Ala Gln Asn Ala Gln Gly Ser Gln His Ile Ser Leu Ser Leu Ser Leu
305 310 315 320
Gln Asn Glu Gly Thr Gly Thr Ser Arg Pro Val Ser Gln Val Thr Leu
325 330 335
Ala Ala Val Gly Gly Ile Glu Gly Arg Ser Asp Lys Thr His Thr Cys
340 345 350
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
355 360 365
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
370 375 380
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
385 390 395 400
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
405 410 415
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
420 425 430
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
435 440 445
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
450 455 460
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
465 470 475 480
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
485 490 495
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
500 505 510
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
515 520 525
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
530 535 540
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
545 550 555 560
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
565 570
<210> 75
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 75
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ile Tyr
20 25 30
Gly Ala His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met
50 55 60
Ser Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Gly Ser Ser Pro Tyr Tyr Tyr Ser Met Glu Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly
<210> 76
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 76
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Thr Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Phe Thr
85 90 95
Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Asp Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 77
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 77
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Thr Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Phe Thr
85 90 95
Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Asp Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 78
<211> 329
<212> PRT
<213> 人
<400> 78
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 79
<211> 326
<212> PRT
<213> 人
<400> 79
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly
325
<210> 80
<211> 107
<212> PRT
<213> 人
<400> 80
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 81
<211> 444
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 81
Gln Val Gln Leu Lys Arg Ala Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser
1 5 10 15
Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ile
20 25 30
Tyr Gly Ala His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Leu Gly Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu
50 55 60
Met Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe
65 70 75 80
Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Ser Ser Pro Tyr Tyr Tyr Ser Met Glu Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser
115 120 125
Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val
130 135 140
Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Glu Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Pro Arg Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro
195 200 205
Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly
210 215 220
Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln
260 265 270
Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu
290 295 300
Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg
305 310 315 320
Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro
340 345 350
Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr
355 360 365
Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asn Thr Asn Gly
385 390 395 400
Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu
405 410 415
Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn
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His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly
435 440
<210> 82
<211> 212
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 82
Glu Ile Ile Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Ser Ile Thr Cys Ser Ala Thr Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr
35 40 45
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Phe Thr
85 90 95
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Ala Asp Ala Ala Pro Thr
100 105 110
Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala
115 120 125
Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val
130 135 140
Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser
145 150 155 160
Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr
165 170 175
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180 185 190
Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn
195 200 205
Arg Asn Glu Cys
210
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<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 83
Gln Ile Ile Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Ser Ile Thr Cys Ser Ala Thr Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr
35 40 45
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Phe Thr
85 90 95
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Ala Asp Ala Ala Pro Thr
100 105 110
Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala
115 120 125
Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val
130 135 140
Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser
145 150 155 160
Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr
165 170 175
Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys
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195 200 205
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210
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 84
Gln Val Gln Leu Lys Arg Ala Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser
1 5 10 15
Gln Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ile
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Tyr Gly Ala His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Leu Gly Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu
50 55 60
Met Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe
65 70 75 80
Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Asp Gly Ser Ser Pro Tyr Tyr Tyr Ser Met Glu Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
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130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
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Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
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Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
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290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
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Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
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Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
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Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
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Pro Gly
450
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<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 85
Glu Ile Ile Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Ser Ile Thr Cys Ser Ala Thr Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr
35 40 45
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Phe Thr
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Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 86
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 86
Gln Ile Ile Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Ser Ile Thr Cys Ser Ala Thr Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr
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Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Phe Thr
85 90 95
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 87
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 87
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ile Tyr
20 25 30
Gly Ala His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met
50 55 60
Ser Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Gly Ser Ser Pro Tyr Tyr Tyr Ser Met Glu Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
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<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 88
Ser Tyr Ala Met Ser
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 89
Asp Tyr Tyr Met Tyr
1 5
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<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 90
Ser Ser Trp Met Asn
1 5
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<400> 91
Ile Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Ser Asp Ser Val Lys
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Gly
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<213> 小家鼠
<400> 92
Arg Ile Ala Pro Glu Asp Gly Asp Thr Glu Tyr Ala Pro Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 93
<211> 17
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<213> 小家鼠
<400> 93
Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Asp Tyr Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 94
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 94
His Glu Thr Ala Gln Ala Ala Trp Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 95
<211> 12
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 95
Glu Gly Asn Tyr Tyr Gly Ser Ser Ile Leu Asp Tyr
1 5 10
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<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 96
Leu Gly Pro Tyr Gly Pro Phe Ala Asp
1 5
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<211> 10
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<213> 小家鼠
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Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met His
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<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 98
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Thr Asn Tyr Leu Asn
1 5 10
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<211> 10
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<213> 小家鼠
<400> 99
Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Tyr
1 5 10
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<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 100
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Tyr
1 5
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<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠
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Phe Thr Ser Arg Leu His Ser
1 5
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<211> 7
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<213> 小家鼠
<400> 102
Asp Thr Ser Ser Leu Ala Ser
1 5
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<211> 9
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<213> 小家鼠
<400> 103
Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Pro Thr
1 5
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<211> 9
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<400> 104
Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Trp Thr
1 5
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<211> 9
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Gln Gln Trp Asn Ser Asp Pro Tyr Thr
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<213> 小家鼠
<400> 106
Glu Val Gln Val Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Ser Gly Gly
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Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Pro Phe Ser Ser Tyr
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<211> 121
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<213> 小家鼠
<400> 107
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
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<211> 118
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 108
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
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Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Arg Ser Ser
20 25 30
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<400> 109
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
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20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
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50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 110
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 110
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Thr Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Phe Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 111
<211> 106
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 111
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Val Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Ser Ser Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
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<213> 智人
<400> 112
Met Glu Gly Asp Arg Gln Tyr Gly Asp Gly Tyr Leu Leu Gln Val Gln
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Tyr Trp Phe Arg Ala Gly Asp Arg Pro Tyr Gln Asp Ala Pro Val Ala
50 55 60
Thr Asn Asn Pro Asp Arg Glu Val Gln Ala Glu Thr Gln Gly Arg Phe
65 70 75 80
Gln Leu Leu Gly Asp Ile Trp Ser Asn Asp Cys Ser Leu Ser Ile Arg
85 90 95
Asp Ala Arg Lys Arg Asp Lys Gly Ser Tyr Phe Phe Arg Leu Glu Arg
100 105 110
Gly Ser Met Lys Trp Ser Tyr Lys Ser Gln Leu Asn Tyr Lys Thr Lys
115 120 125
Gln Leu Ser Val Phe Val Thr Ala Leu Thr His Arg Pro
130 135 140
<210> 113
<211> 87
<212> PRT
<213> 智人
<400> 113
Asp Ile Leu Ile Leu Gly Thr Leu Glu Ser Gly His Ser Arg Asn Leu
1 5 10 15
Thr Cys Ser Val Pro Trp Ala Cys Lys Gln Gly Thr Pro Pro Met Ile
20 25 30
Ser Trp Ile Gly Ala Ser Val Ser Ser Pro Gly Pro Thr Thr Ala Arg
35 40 45
Ser Ser Val Leu Thr Leu Thr Pro Lys Pro Gln Asp His Gly Thr Ser
50 55 60
Leu Thr Cys Gln Val Thr Leu Pro Gly Thr Gly Val Thr Thr Thr Ser
65 70 75 80
Thr Val Arg Leu Asp Val Ser
85
<210> 114
<211> 122
<212> PRT
<213> 智人
<400> 114
Tyr Pro Pro Trp Asn Leu Thr Met Thr Val Phe Gln Gly Asp Ala Thr
1 5 10 15
Ala Ser Thr Ala Leu Gly Asn Gly Ser Ser Leu Ser Val Leu Glu Gly
20 25 30
Gln Ser Leu Arg Leu Val Cys Ala Val Asn Ser Asn Pro Pro Ala Arg
35 40 45
Leu Ser Trp Thr Arg Gly Ser Leu Thr Leu Cys Pro Ser Arg Ser Ser
50 55 60
Asn Pro Gly Leu Leu Glu Leu Pro Arg Val His Val Arg Asp Glu Gly
65 70 75 80
Glu Phe Thr Cys Arg Ala Gln Asn Ala Gln Gly Ser Gln His Ile Ser
85 90 95
Leu Ser Leu Ser Leu Gln Asn Glu Gly Thr Gly Thr Ser Arg Pro Val
100 105 110
Ser Gln Val Thr Leu Ala Ala Val Gly Gly
115 120
<210> 115
<211> 373
<212> PRT
<213> 智人
<400> 115
Met Glu Gly Asp Arg Gln Tyr Gly Asp Gly Tyr Leu Leu Gln Val Gln
1 5 10 15
Glu Leu Val Thr Val Gln Glu Gly Leu Cys Val His Val Pro Cys Ser
20 25 30
Phe Ser Tyr Pro Gln Asp Gly Trp Thr Asp Ser Asp Pro Val His Gly
35 40 45
Tyr Trp Phe Arg Ala Gly Asp Arg Pro Tyr Gln Asp Ala Pro Val Ala
50 55 60
Thr Asn Asn Pro Asp Arg Glu Val Gln Ala Glu Thr Gln Gly Arg Phe
65 70 75 80
Gln Leu Leu Gly Asp Ile Trp Ser Asn Asp Cys Ser Leu Ser Ile Arg
85 90 95
Asp Ala Arg Lys Arg Asp Lys Gly Ser Tyr Phe Phe Arg Leu Glu Arg
100 105 110
Gly Ser Met Lys Trp Ser Tyr Lys Ser Gln Leu Asn Tyr Lys Thr Lys
115 120 125
Gln Leu Ser Val Phe Val Thr Ala Leu Thr His Arg Pro Ile Glu Gly
130 135 140
Arg Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
145 150 155 160
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
165 170 175
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
180 185 190
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
195 200 205
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
210 215 220
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
225 230 235 240
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
245 250 255
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
260 265 270
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
275 280 285
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
290 295 300
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
305 310 315 320
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
325 330 335
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
340 345 350
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
355 360 365
Leu Ser Pro Gly Lys
370
<210> 116
<211> 460
<212> PRT
<213> 智人
<400> 116
Met Glu Gly Asp Arg Gln Tyr Gly Asp Gly Tyr Leu Leu Gln Val Gln
1 5 10 15
Glu Leu Val Thr Val Gln Glu Gly Leu Cys Val His Val Pro Cys Ser
20 25 30
Phe Ser Tyr Pro Gln Asp Gly Trp Thr Asp Ser Asp Pro Val His Gly
35 40 45
Tyr Trp Phe Arg Ala Gly Asp Arg Pro Tyr Gln Asp Ala Pro Val Ala
50 55 60
Thr Asn Asn Pro Asp Arg Glu Val Gln Ala Glu Thr Gln Gly Arg Phe
65 70 75 80
Gln Leu Leu Gly Asp Ile Trp Ser Asn Asp Cys Ser Leu Ser Ile Arg
85 90 95
Asp Ala Arg Lys Arg Asp Lys Gly Ser Tyr Phe Phe Arg Leu Glu Arg
100 105 110
Gly Ser Met Lys Trp Ser Tyr Lys Ser Gln Leu Asn Tyr Lys Thr Lys
115 120 125
Gln Leu Ser Val Phe Val Thr Ala Leu Thr His Arg Pro Asp Ile Leu
130 135 140
Ile Leu Gly Thr Leu Glu Ser Gly His Ser Arg Asn Leu Thr Cys Ser
145 150 155 160
Val Pro Trp Ala Cys Lys Gln Gly Thr Pro Pro Met Ile Ser Trp Ile
165 170 175
Gly Ala Ser Val Ser Ser Pro Gly Pro Thr Thr Ala Arg Ser Ser Val
180 185 190
Leu Thr Leu Thr Pro Lys Pro Gln Asp His Gly Thr Ser Leu Thr Cys
195 200 205
Gln Val Thr Leu Pro Gly Thr Gly Val Thr Thr Thr Ser Thr Val Arg
210 215 220
Leu Asp Val Ser Ile Glu Gly Arg Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
225 230 235 240
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
245 250 255
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
260 265 270
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
275 280 285
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
290 295 300
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
305 310 315 320
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
325 330 335
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
340 345 350
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
355 360 365
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
370 375 380
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
385 390 395 400
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
405 410 415
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
420 425 430
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
435 440 445
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455 460
<210> 117
<211> 582
<212> PRT
<213> 智人
<400> 117
Met Glu Gly Asp Arg Gln Tyr Gly Asp Gly Tyr Leu Leu Gln Val Gln
1 5 10 15
Glu Leu Val Thr Val Gln Glu Gly Leu Cys Val His Val Pro Cys Ser
20 25 30
Phe Ser Tyr Pro Gln Asp Gly Trp Thr Asp Ser Asp Pro Val His Gly
35 40 45
Tyr Trp Phe Arg Ala Gly Asp Arg Pro Tyr Gln Asp Ala Pro Val Ala
50 55 60
Thr Asn Asn Pro Asp Arg Glu Val Gln Ala Glu Thr Gln Gly Arg Phe
65 70 75 80
Gln Leu Leu Gly Asp Ile Trp Ser Asn Asp Cys Ser Leu Ser Ile Arg
85 90 95
Asp Ala Arg Lys Arg Asp Lys Gly Ser Tyr Phe Phe Arg Leu Glu Arg
100 105 110
Gly Ser Met Lys Trp Ser Tyr Lys Ser Gln Leu Asn Tyr Lys Thr Lys
115 120 125
Gln Leu Ser Val Phe Val Thr Ala Leu Thr His Arg Pro Asp Ile Leu
130 135 140
Ile Leu Gly Thr Leu Glu Ser Gly His Ser Arg Asn Leu Thr Cys Ser
145 150 155 160
Val Pro Trp Ala Cys Lys Gln Gly Thr Pro Pro Met Ile Ser Trp Ile
165 170 175
Gly Ala Ser Val Ser Ser Pro Gly Pro Thr Thr Ala Arg Ser Ser Val
180 185 190
Leu Thr Leu Thr Pro Lys Pro Gln Asp His Gly Thr Ser Leu Thr Cys
195 200 205
Gln Val Thr Leu Pro Gly Thr Gly Val Thr Thr Thr Ser Thr Val Arg
210 215 220
Leu Asp Val Ser Tyr Pro Pro Trp Asn Leu Thr Met Thr Val Phe Gln
225 230 235 240
Gly Asp Ala Thr Ala Ser Thr Ala Leu Gly Asn Gly Ser Ser Leu Ser
245 250 255
Val Leu Glu Gly Gln Ser Leu Arg Leu Val Cys Ala Val Asn Ser Asn
260 265 270
Pro Pro Ala Arg Leu Ser Trp Thr Arg Gly Ser Leu Thr Leu Cys Pro
275 280 285
Ser Arg Ser Ser Asn Pro Gly Leu Leu Glu Leu Pro Arg Val His Val
290 295 300
Arg Asp Glu Gly Glu Phe Thr Cys Arg Ala Gln Asn Ala Gln Gly Ser
305 310 315 320
Gln His Ile Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gln Asn Glu Gly Thr Gly Thr
325 330 335
Ser Arg Pro Val Ser Gln Val Thr Leu Ala Ala Val Gly Gly Ile Glu
340 345 350
Gly Arg Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
355 360 365
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
370 375 380
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
385 390 395 400
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
405 410 415
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
420 425 430
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
435 440 445
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
450 455 460
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
465 470 475 480
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
485 490 495
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
500 505 510
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
515 520 525
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
530 535 540
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
545 550 555 560
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
565 570 575
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
580
<210> 118
<211> 582
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 狒狒属物种
<400> 118
Met Glu Gly Asp Arg Lys Tyr Gly Asp Gly Tyr Leu Leu Gln Val Gln
1 5 10 15
Glu Leu Val Thr Val Gln Glu Gly Leu Cys Val His Val Pro Cys Ser
20 25 30
Phe Ser Tyr Pro Lys Asp Asp Trp Thr Tyr Ser Asp Pro Val His Gly
35 40 45
Tyr Trp Phe Arg Ala Gly Asp Arg Pro Tyr Gln Glu Ala Pro Val Ala
50 55 60
Thr Asn Asn Pro Asp Thr Glu Val Gln Ala Glu Thr Gln Gly Arg Phe
65 70 75 80
Gln Leu Leu Gly Asp Arg Trp Ser Asn Asp Cys Ser Leu Ser Ile Asn
85 90 95
Asp Ala Arg Lys Gly Asp Glu Gly Ser Tyr Phe Phe Arg Leu Glu Arg
100 105 110
Gly Arg Met Lys Trp Ser Tyr Lys Ser Gln Leu Asn Tyr Lys Ala Lys
115 120 125
Gln Leu Ser Val Phe Val Thr Ala Leu Thr Gln Arg Pro Asp Ile Leu
130 135 140
Ile Gln Gly Thr Leu Glu Ser Gly His Pro Arg Asn Leu Thr Cys Ser
145 150 155 160
Val Pro Trp Ala Cys Glu Gln Arg Met Pro Pro Met Ile Ser Trp Ile
165 170 175
Gly Thr Ser Val Ser Ser Leu Gly Pro Ile Thr Ala Arg Phe Ser Val
180 185 190
Leu Thr Leu Ile Pro Lys Pro Gln Asp His Gly Thr Ser Leu Thr Cys
195 200 205
Gln Val Thr Leu Pro Gly Thr Gly Val Thr Thr Thr Arg Thr Val Gln
210 215 220
Leu Asp Val Ser Tyr Pro Pro Trp Asn Leu Thr Val Thr Val Phe Gln
225 230 235 240
Gly Asp Asp Thr Ala Ser Thr Ala Leu Gly Asn Gly Ser Ser Leu Ser
245 250 255
Val Leu Glu Gly Gln Ser Leu Arg Leu Val Cys Ala Val Asp Ser Asn
260 265 270
Pro Pro Ala Arg Leu Ser Trp Thr Arg Gly Ser Leu Thr Leu Cys Pro
275 280 285
Ser Gln Pro Trp Asn Pro Gly Leu Leu Glu Leu Leu Arg Val His Val
290 295 300
Lys Asp Glu Gly Glu Phe Thr Cys Gln Ala Glu Asn Pro Arg Gly Ser
305 310 315 320
Gln His Ile Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gln Asn Glu Gly Thr Gly Thr
325 330 335
Ala Arg Pro Val Ser Glu Val Thr Leu Ala Ala Val Gly Gly Ile Glu
340 345 350
Gly Arg Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
355 360 365
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
370 375 380
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
385 390 395 400
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
405 410 415
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
420 425 430
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
435 440 445
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
450 455 460
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
465 470 475 480
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
485 490 495
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
500 505 510
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
515 520 525
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
530 535 540
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
545 550 555 560
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
565 570 575
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
580
<210> 119
<211> 350
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 狒狒属物种
<400> 119
Met Glu Gly Asp Arg Lys Tyr Gly Asp Gly Tyr Leu Leu Gln Val Gln
1 5 10 15
Glu Leu Val Thr Val Gln Glu Gly Leu Cys Val His Val Pro Cys Ser
20 25 30
Phe Ser Tyr Pro Lys Asp Asp Trp Thr Tyr Ser Asp Pro Val His Gly
35 40 45
Tyr Trp Phe Arg Ala Gly Asp Arg Pro Tyr Gln Glu Ala Pro Val Ala
50 55 60
Thr Asn Asn Pro Asp Thr Glu Val Gln Ala Glu Thr Gln Gly Arg Phe
65 70 75 80
Gln Leu Leu Gly Asp Arg Trp Ser Asn Asp Cys Ser Leu Ser Ile Asn
85 90 95
Asp Ala Arg Lys Gly Asp Glu Gly Ser Tyr Phe Phe Arg Leu Glu Arg
100 105 110
Gly Arg Met Lys Trp Ser Tyr Lys Ser Gln Leu Asn Tyr Lys Ala Lys
115 120 125
Gln Leu Ser Val Phe Val Thr Ala Leu Thr Gln Arg Pro Asp Ile Leu
130 135 140
Ile Gln Gly Thr Leu Glu Ser Gly His Pro Arg Asn Leu Thr Cys Ser
145 150 155 160
Val Pro Trp Ala Cys Glu Gln Arg Met Pro Pro Met Ile Ser Trp Ile
165 170 175
Gly Thr Ser Val Ser Ser Leu Gly Pro Ile Thr Ala Arg Phe Ser Val
180 185 190
Leu Thr Leu Ile Pro Lys Pro Gln Asp His Gly Thr Ser Leu Thr Cys
195 200 205
Gln Val Thr Leu Pro Gly Thr Gly Val Thr Thr Thr Arg Thr Val Gln
210 215 220
Leu Asp Val Ser Tyr Pro Pro Trp Asn Leu Thr Val Thr Val Phe Gln
225 230 235 240
Gly Asp Asp Thr Ala Ser Thr Ala Leu Gly Asn Gly Ser Ser Leu Ser
245 250 255
Val Leu Glu Gly Gln Ser Leu Arg Leu Val Cys Ala Val Asp Ser Asn
260 265 270
Pro Pro Ala Arg Leu Ser Trp Thr Arg Gly Ser Leu Thr Leu Cys Pro
275 280 285
Ser Gln Pro Trp Asn Pro Gly Leu Leu Glu Leu Leu Arg Val His Val
290 295 300
Lys Asp Glu Gly Glu Phe Thr Cys Gln Ala Glu Asn Pro Arg Gly Ser
305 310 315 320
Gln His Ile Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gln Asn Glu Gly Thr Gly Thr
325 330 335
Ala Arg Pro Val Ser Glu Val Thr Leu Ala Ala Val Gly Gly
340 345 350
<210> 120
<211> 120
<212> PRT
<213> 智人
<400> 120
Glu Val Lys Val Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ile Thr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Val Ile Gly Ser Ala Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Glu Gly Met Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Glu Glu Ile Asp Asn Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 121
<211> 97
<212> PRT
<213> 智人
<400> 121
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Val Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg
<210> 122
<211> 97
<212> PRT
<213> 智人
<400> 122
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg
<210> 123
<211> 107
<212> PRT
<213> 智人
<400> 123
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Arg Ser Asn Trp Leu Ile
85 90 95
Ala Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Asp Ile Lys
100 105
<210> 124
<211> 95
<212> PRT
<213> 智人
<400> 124
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro
85 90 95

Claims (61)

1.一种用于治疗或预防个体的过敏性眼病的方法，其包括向所述个体给予有效量的包含与人Siglec-8结合的抗体的组合物。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述个体患有过敏性结膜炎。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述个体患有季节性过敏性结膜炎。
4.根据权利要求2所述的方法，其中所述个体患有常年性过敏性结膜炎。
5.根据权利要求2所述的方法，其中所述个体患有特应性角膜结膜炎。
6.根据权利要求2所述的方法，其中所述个体患有春季角膜结膜炎。
7.根据权利要求1所述的方法，其中所述个体患有巨***性结膜炎。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述个体使用隐形眼镜。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中与未患过敏性眼病的个体相比，所述个体的至少一部分结膜中的炎症增加。
10.根据权利要求9所述的方法，其中与未患过敏性眼病的个体相比，所述个体的至少一部分结膜中肥大细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和/或淋巴细胞的数量增加。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中从所述个体获得的结膜刮除物包含嗜酸性粒细胞。
12.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中与未患过敏性眼病的个体相比，从所述个体获得的血清或眼泪样品中的IgE增加。
13.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中向所述个体给予的使用过敏原进行的表皮或皮内过敏测试导致过敏反应。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，其中与给予所述组合物之前的基线水平相比，所述个体中的一种或多种症状减少。
15.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，其中与给予所述组合物之前的基线水平相比，所述个体的以下项中一个或多个减少：结膜瘙痒、结膜发红、结膜肿胀、眼溢液、溃疡、流泪、眼睑肥大、痂皮、睑球粘连、眼周湿疹、睫毛脱落、畏光、角膜炎、巨***和白内障。
16.根据权利要求1-15中任一项所述的方法，其中所述组合物通过静脉输注给予。
17.根据权利要求1-15中任一项所述的方法，其中所述组合物通过皮下注射给予。
18.根据权利要求1-17中任一项所述的方法，其中所述抗体包含Fc区和与所述Fc区连接的N-糖苷连接的碳水化合物链，其中所述组合物中所述抗体的小于50％的N-糖苷连接的碳水化合物链含有岩藻糖残基。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述组合物中所述抗体的N-糖苷连接的碳水化合物链基本上均不含有岩藻糖残基。
20.根据权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H2，以及(iii)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；和/或其中所述轻链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-L2，以及(iii)包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-L3。
21.根据权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H2，以及(iii)包含选自SEQ ID NO:67-70的氨基酸序列的HVR-H3；和/或其中所述轻链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-L2，以及(iii)包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列的HVR-L3。
22.根据权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含选自SEQID NO:16或21的氨基酸序列。
23.根据权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含选自SEQ ID NO:11-14的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含选自SEQ ID NO:23-24的氨基酸序列。
24.根据权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含选自SEQ ID NO:2-14的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含选自SEQ ID NO:16-24的氨基酸序列。
25.根据权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含选自SEQ ID NO:2-10的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含选自SEQ ID NO:16-22的氨基酸序列。
26.根据权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述抗体包含：
(a)重链可变区，所述重链可变区包含：
(1)包含选自SEQ ID NO:26-29的氨基酸序列的HC-FR1；
(2)包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的HVR-H1；
(3)包含选自SEQ ID NO:31-36的氨基酸序列的HC-FR2；
(4)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H2；
(5)包含选自SEQ ID NO:38-43的氨基酸序列的HC-FR3；
(6)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；以及
(7)包含选自SEQ ID NO:45-46的氨基酸序列的HC-FR4，和/或
(b)轻链可变区，所述轻链可变区包含：
(1)包含选自SEQ ID NO:48-49的氨基酸序列的LC-FR1；
(2)包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的HVR-L1；
(3)包含选自SEQ ID NO:51-53的氨基酸序列的LC-FR2；
(4)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-L2；
(5)包含选自SEQ ID NO:55-58的氨基酸序列的LC-FR3；
(6)包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-L3；以及
(7)包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的LC-FR4。
27.根据权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述抗体包含：
(a)重链可变区，所述重链可变区包含：
(1)包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列的HC-FR1；
(2)包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的HVR-H1；
(3)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的HC-FR2；
(4)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H2；
(5)包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的HC-FR3；
(6)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；以及
(7)包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的HC-FR4；和/或
(b)轻链可变区，所述轻链可变区包含：
(1)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的LC-FR1；
(2)包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的HVR-L1；
(3)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的LC-FR2；
(4)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-L2；
(5)包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的LC-FR3；
(6)包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-L3；以及
(7)包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的LC-FR4。
28.根据权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述抗体包含：
(a)重链可变区，所述重链可变区包含：
(1)包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列的HC-FR1；
(2)包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的HVR-H1；
(3)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的HC-FR2；
(4)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H2；
(5)包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的HC-FR3；
(6)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；以及
(7)包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的HC-FR4；和/或
(b)轻链可变区，所述轻链可变区包含：
(1)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的LC-FR1；
(2)包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的HVR-L1；
(3)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的LC-FR2；
(4)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-L2；
(5)包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的LC-FR3；
(6)包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-L3；以及
(7)包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的LC-FR4。
29.根据权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述抗体包含：
重链可变区，所述重链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列的HVR-H2，以及(iii)包含SEQ ID NO:94的氨基酸序列的HVR-H3；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:97的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:100的氨基酸序列的HVR-L2，以及(iii)包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列的HVR-L3；
重链可变区，所述重链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:89的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:92的氨基酸序列的HVR-H2，以及(iii)包含SEQ ID NO:95的氨基酸序列的HVR-H3；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:98的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列的HVR-L2，以及(iii)包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列的HVR-L3；或
重链可变区，所述重链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:90的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQ ID NO:93的氨基酸序列的HVR-H2，以及(iii)包含SEQ ID NO:96的氨基酸序列的HVR-H3；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含(i)包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQ ID NO:102的氨基酸序列的HVR-L2，以及(iii)包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列的HVR-L3。
30.根据权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述抗体包含：
重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:106的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:109的氨基酸序列；
重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:107的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:110的氨基酸序列；或
重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:108的氨基酸序列；和/或轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:111的氨基酸序列。
31.根据权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述抗体与人Siglec-8和非人灵长类动物Siglec-8结合。
32.根据权利要求31所述的方法，其中所述非人灵长类动物是狒狒。
33.根据权利要求31所述的方法，其中所述抗体与人Siglec-8的结构域1中的表位结合，其中结构域1包含SEQ ID NO:112的氨基酸序列。
34.根据权利要求31所述的方法，其中所述抗体与人Siglec-8的结构域3中的表位结合，其中结构域3包含SEQ ID NO:114的氨基酸序列。
35.根据权利要求31所述的方法，其中所述抗体与和抗体4F11相同的表位结合。
36.根据权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述抗体与人Siglec-8的结构域2或结构域3中的表位结合。
37.根据权利要求36所述的方法，其中结构域2包含SEQ ID NO:113的氨基酸序列。
38.根据权利要求36所述的方法，其中所述抗体与和抗体1C3相同的表位结合。
39.根据权利要求36所述的方法，其中结构域3包含SEQ ID NO:114的氨基酸序列。
40.根据权利要求36所述的方法，其中所述抗体与和抗体1H10相同的表位结合。
41.根据权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述抗体与人Siglec-8的结构域1中的表位结合，并与抗体4F11竞争结合Siglec-8。
42.根据权利要求41所述的方法，其中所述抗体不与抗体2E2竞争结合Siglec-8。
43.根据权利要求42所述的方法，其中所述抗体不是抗体2E2。
44.根据权利要求41所述的方法，其中结构域1包含SEQ ID NO:112的氨基酸序列。
45.根据权利要求20-44中任一项所述的方法，其中所述抗体是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。
46.根据权利要求20-45中任一项所述的方法，其中所述抗体耗尽血液嗜酸性粒细胞和/或抑制肥大细胞活化。
47.根据权利要求20-46中任一项所述的方法，其中所述抗体包含重链Fc区，所述重链Fc区包含人IgG Fc区。
48.根据权利要求47所述的方法，其中所述人IgG Fc区包含人IgG1 Fc区。
49.根据权利要求48所述的方法，其中所述人IgG1 Fc区是未岩藻糖基化的。
50.根据权利要求47所述的方法，其中所述人IgG Fc区包含人IgG4 Fc区。
51.根据权利要求50所述的方法，其中所述人IgG4 Fc区包含氨基酸取代S228P，其中所述氨基酸残基按照Kabat中的EU索引编号。
52.根据权利要求20-44中任一项所述的方法，其中所述抗体已经被工程化以改善抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)活性。
53.根据权利要求52所述的方法，其中所述抗体在Fc区中包含改善ADCC活性的至少一个氨基酸取代。
54.根据权利要求20-46中任一项所述的方法，其中所述抗体的至少一条或两条重链是未岩藻糖基化的。
55.根据权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:75的氨基酸序列；和/或轻链，所述轻链包含选自SEQ ID NO:76或77的氨基酸序列。
56.根据权利要求1-55中任一项所述的方法，其中所述抗体是单克隆抗体。
57.根据权利要求1-56中任一项所述的方法，其中所述组合物与用于治疗或预防过敏性眼病的一种或多种另外的治疗剂组合给予。
58.根据权利要求57所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂选自皮质类固醇、抗组胺药、酮替芬、氮卓斯汀、依匹斯汀、贝司他汀、环孢菌素和非甾体抗炎剂(NSAID)。
59.根据权利要求1-58中任一项所述的方法，其中所述个体是人。
60.根据权利要求1-59中任一项所述的方法，其中所述组合物是包含所述抗体和药学上可接受的载体的药物组合物。
61.一种制品，所述制品包含：包含含有与人Siglec-8结合的抗体的组合物的药剂；以及包装插页，所述包装插页包含关于根据权利要求1-60中任一项所述在有需要的个体中给予所述药剂的说明书。
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